JP2019521322A5 - - Google Patents
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Claims (31)
- 生物学的サンプルからのDNA及びRNAの抽出方法であって、以下:
(a)前記生物学的サンプルと、固体捕捉表面とを、前記生物学的サンプルからセルフリーDNA(cell-free DNA)(cfDNA)及び微小胞を、前記捕捉表面上又は中に保持するのに十分な条件下で接触させ、ここで、前記条件は、固体捕捉表面への微小胞及びcfDNAの結合を増強するために化学クラウディング剤(chemical crowding agent)を含み、ここで、前記化学クラウディング剤は、ポリエチレングリコール(PEG)を含み;
(b)前記cfDNA及び微小胞が捕捉表面上又は中にある間、前記捕捉表面とグアニジンチオシアネートベースの溶出緩衝液とを接触させ、それにより、サンプルからDNA及びRNAを放出し、そしてホモジネートを生成し;そして
(c)前記ホモジネートからDNA、RNA、又はDNA及びRNAの両者を抽出すること、
を含む方法。 - 前記固体捕捉表面が少なくとも1つのビーズを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記固体捕捉表面が少なくとも1つの膜を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記固体捕捉表面が磁性である、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのビーズがイオン交換(IEX)ビーズである、請求項2又は4に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのビーズがアニオン交換ビーズである、請求項5に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのビーズが第四級アミンにより官能化される、請求項2に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのビーズが第四級アンモニウムにより官能化される、請求項2に記載の方法。
- 前記ビーズが、スルフェート、スルホネート、第三級アミン、任意の他のIEXグループ、及びそれらの任意の組合せにより官能化される、請求項2に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの膜がイオン交換(IEX)膜である、請求項3に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの膜がアニオン交換膜である、請求項3に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの膜が第四級アンモニウムにより官能化される、請求項3に記載の方法。
- 前記生物学的サンプルが、血漿、血清又は尿を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記生物学的サンプルが、0.2〜20mlである、請求項1又は13に記載の方法。
- 前記生物学的サンプルが尿であり、そして前記尿サンプルが初尿(first-catch urine)収集装置を用いて収集され、前記尿が初尿である、請求項1又は13に記載の方法。
- 前記グアニジンチオシアネートベースの溶出緩衝液が、変性剤、界面活性剤、緩衝物質又はそれらの組合せを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記グアニジンチオシアネートベースの溶出緩衝液が、変性剤及び還元剤を含む、請求項16に記載の方法。
- 前記還元剤が、β−メルカプトエタノール(BME)である、請求項16又は17に記載の方法。
- 前記還元剤が、トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)である、請求項16又は17に記載の方法。
- 前記還元剤が、ジチオスレイトール(DTT)である、請求項16又は17に記載の方法。
- 工程(c)がさらに、ホモジネートからのDNA、RNA、又はDNA及びRNAの両者の抽出の前に、ホモジネートにタンパク質沈殿緩衝液を添加することを含む、請求項1に記載の方法。
- 工程(c)がさらに、酵素消化を含む、請求項1に記載の方法。
- 工程(c)がプロテイナーゼ消化を含む、請求項22に記載の方法。
- 工程(a)の前に、前記サンプルに核酸対照スパイクイン(nucleic acid control spike-in)を添加することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 工程(c)がさらに、ホモジネートに核酸対照スパイクインを添加することを含む、請求項1に記載の方法。
- 工程(c)が、プロテイナーゼ、DNアーゼ、RNアーゼ、又はそれらの組合せを用いての消化を含む、請求項22に記載の方法。
- 前記タンパク質沈殿緩衝液が、遷移金属イオン、緩衝剤、又は遷移金属イオン及び緩衝剤の両者を含む、請求項21に記載の方法。
- 前記遷移金属イオンが亜鉛である、請求項27に記載の方法。
- 前記タンパク質沈殿緩衝液が、6以下の規定されたpH範囲を有する、請求項27に記載の方法。
- 前記タンパク質沈殿緩衝液が、3.1〜4.1の規定されたpH範囲を有する、請求項29に記載の方法。
- 工程(a)がさらに、生物学的サンプルを濾過することにより生物学的サンプルを処理することを含む、請求項1に記載の方法。
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