RU2584346C2 - Способ выделения нуклеиновых кислот - Google Patents
Способ выделения нуклеиновых кислот Download PDFInfo
- Publication number
- RU2584346C2 RU2584346C2 RU2014124569/15A RU2014124569A RU2584346C2 RU 2584346 C2 RU2584346 C2 RU 2584346C2 RU 2014124569/15 A RU2014124569/15 A RU 2014124569/15A RU 2014124569 A RU2014124569 A RU 2014124569A RU 2584346 C2 RU2584346 C2 RU 2584346C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medicine
- rna
- diagnosis
- nucleic acid
- dna
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Detergent Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к молекулярной биологии, вирусологии и медицине. Изобретение раскрывает способ выделения нуклеиновых кислот с использованием изопропанола на этапе преципитации и осаждения ДНК, отличающийся тем, что при начальной обработке биологического материала используют гидрохлорид гуанидина и детергент в натрий-ацетатном буфере, а в качестве соосадителя нуклеиновых кислот применяют 0,05% линейный полиакриламид. Выделенная данным способом нуклеиновая кислота может быть использована при постановке полимеразной цепной реакции, также в практической медицине и ветеринарии для диагностики наследственных заболеваний человека и животных, судебной медицине, генной дактилоскопии, диагностике возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных, в том числе заболеваний передающихся половым путем. Преимуществом способа является упрощение выделения НК из крови и тканей человека и животных, что весьма актуально при проведении массовых анализов различных образцов в процессе диагностики инфекционных заболеваний. Использование в изобретении линейного полиакриламида ЛПАА в качестве соосадителя позволяет повысить выход НК из образца. 1 ил., 3 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к молекулярной биологии, вирусологии и медицине, является способом выделения нуклеиновых кислот из крови, ткани и мазков человека и животных. Выделенная данным способом НК может быть использована при постановке полимеразной цепной реакции, также в практической медицине для диагностики наследственных заболеваний человека, судебной медицине, генной дактилоскопии, диагностике возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных, в том числе заболеваний передающихся половым путем.
В основе диагностики и лечения многих заболеваний человека и животных лежат идентификация возбудителя и определение этиологии заболевания. Постановка полимеразной цепной реакции необходима в следующих случаях: для уточнения диагноза, в силу наличия у многих заболеваний серонегативного периода в ИФА, выявления наследственной патологии, предрасположенности к тому или иному заболеванию. ПЦР исследование отличается высокой чувствительностью и специфичностью, возможностью автоматизации процесса. Метод ПЦР включает в себя следующие основные этапы: выделение нуклеиновых кислот - ДНК и РНК, амплификация и анализ результатов. В основе ПЦР диагностики лежит многократное увеличение определенного участка последовательности нуклеиновых кислот при помощи фермента - термостабильной ДНК-полимеразы Taq-полимеразы. В случае анализа РНК этому этапу предшествует этап синтеза кДНК на матрице РНК с помощью РНК-полимеразы. Для улучшения чувствительности и специфичности ПЦР-анализа необходимо качественное и быстрое выделение и очистка нуклеиновых кислот - НК обеспечивающая минимальные потери материала. Проблема качественного получения НК для анализа наиболее остро стоит в случае с РНК, из-за ее быстрого лизиса РНК-азами. Учитывая вышесказанное, разработка нового метода для выделения НК является актуальной и практически значимой задачей.
В настоящее время существует несколько способов получения НК. Так для получения НК используются следующие методы:
1. Для выделения ДНК
Известен способ подготовки биологического материала для ДНК-ПЦР генамплификационной диагностики путем лизиса образца, многократной экстракции водонасыщенным фенолом или смесью фенол-хлороформ и осаждение ДНК этанолом в присутствии ацетата натрия (Мазин А.В. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука, 1990, с. 13-14). Основными недостатками данной методики является использование токсичных агентов, требующих особых условий работы, хранения и утилизации, длительностью выделения 3,5-4 часа в связи с переосаждением целевого продукта, низким выходом 25-30%.
2. Для выделения РНК
Основным способом выделения РНК является фенохлоформная экстракция по Хромински (Chomezynski P., Mackey К. Single-step method of total RNA isolation by acid Guanidine-Phenol extraction // Organelles and cellular structures. 1996. V. 10. P. 221-224).
100 мкл исследуемого образца смешивается с 600 мкл лизирующего раствора 4 M гуанидин изотиоционат, 50 мM цитрат натрия, 0.5% лаурил саркозилат, 100 мM µ-меркаптоэтанол, после чего добавляется 60 мкл 2 M NaAc pH=4.0, 600 мкл водонасыщенного фенола, тщательно перемешивается пипетированием. К полученной смеси приливается 120 мкл хлороформа, и инкубируется на льду в течение 10 минут. Смесь центрифугируется 15 минут при 12000 g. Водная (верхняя) фазу отбирается в отдельные пробирки, смешивается с равным объемом хлороформа, тщательно перемешивается и инкубируется при комнатной температуре 30 минут. Раствор отцентрифугировать 15 минут при 12000 g. Осадок двукратно промывается 80% этанолом, высушивается. После растворения РНК можно использовать для постановки обратной транскрипции. Основными недостатками данной методики является использование токсичных агентов, требующих особых условий работы, хранения и утилизации, а также с длительностью протокола 3 часа в связи с переосаждением целевого продукта, а также низким выходом около 7%.
3. Выделение ДНК и РНК
Выделение ДНК/РНК методом сорбции на силике. 100 мкл исследуемого образца смешивается со 450 мкл лизирующего раствора 6 M Guanidine thiocyanate; 50 мМ NaAc pH=5.4; 5 мМ EDTA; 5% Triton Х-100, после чего в каждую пробирку добавляется по 25 мкл 0,1% силики. Сорбент последовательно отмывают раствором 4 M гуанидинтиоционата, дважды 70%-ным этанолом, затем ацетоном и после чего проводят элюцию ДНК с сорбента. Супернатант содержит очищенные РНК и ДНК. Пробы готовы к постановке реакции обратной транскрипции и ПЦР. (см. Boom R., Sol С.J. А et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acid. J. Clin. Microbiol., 1990, v. 28, N 3, p. 495-503). Основным недостатком данного метода является сложность подготовки сорбента и большое количество отмывок получаемого материала, кроме того, использование данного метода для получения нуклеиновых кислот требует использования дополнительного оборудования шейкера.
Наиболее близким к предлагаемому методу является следующий.
Осадок клеток ресуспендируется в лизирующем растворе 3 M натрий изотиоционат, 50 мМ Трис-HCl, pH 8.0, 15 мМ ЭДТА, pH 8.0, 1% N-лаурилсаркозил, 1% поливинилпирролидон, 10 мМ дитиотриэтол и 0.6 г Ballotini бус 0.1 мм. Образец гомогенизируется в течение 1-3 мин, из супернатанта прецитипитируется НК при помощи изопропанола в течение 20 мин на льду, после чего центрифугируется в течение 20 мин при 14,000 × g, супернатант удаляется и осадок промывается дважды этанолом, высушивается и ресуспендируется в буфере (см. S. Mcllroy, К. Porter, R. J. Seviour, and D. Tillet Appl / Environ Microbiol. 2008 November; 74(21):6806-6807). Данный метод предназначен для выделения НК из растворов с высокой концентрацией 10-15 мг биомассы, при использовании данного метода при выделении НК из клинических образцов характеризующихся низкой концентрацией НК, поливинилпирролидон ингибирует ферментативные реакции, в том числе обратную транскрипцию.
Задача изобретения - упрощение способа выделения НК из крови и тканей человека и животных, что весьма актуально при проведении массовых анализов различных образцов в процессе диагностики инфекционных заболеваний.
Существенным отличием заявляемого способа является использование линейного полиакриламида (ЛПААГ) в качестве соосадителя для очистки и концентрирования НК. ЛПААГ не ингибирует большинство ферментативных реакций, что позволяет использовать его для выделения НК, которые служат матрицей в реакциях полимеризации. Линейный 0,05% полиакриламид связывается с ДНК и хорошо осаждается спиртами, что повышает выход НК из образца.
Способ осуществляют следующим образом:
Вносят 300 мкл лизирующего раствора в пластиковую пробирку емкостью 1,5 мл, не касаясь ее края. Добавляют 100 мкл исследуемого образца и, плотно закрыв крышку пробирки, перемешивают на вортексе в течение 3-5 сек. Термостатируют пробу 15 мин при 65°C, осаждают конденсат центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3-5 сек. Добавляют 500 мкл реагента для преципитации НК и перемешивают пробу на вортексе в течение 3-5 сек. Центрифугируют пробирку при 14000 об/мин в течение 15 мин. Не задевая осадок, полностью удаляют надосадочную жидкость отдельным наконечником из каждой пробирки. Добавляют к осадку 500 мкл промывочного раствора №1 и 3-5 раз аккуратно переворачивают пробирку. Центрифугируют пробирку при 14000 об/мин в течение 5 мин. Не задевая осадок, полностью удаляют надосадочную жидкость отдельным наконечником из каждой пробирки. Добавляют к осадку 300 мкл промывочного раствора №2 и 3-5 раз аккуратно переворачивают пробирку. Центрифугируют пробирку при 14000 об/мин в течение 5 мин. Не задевая осадок, полностью удаляют надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки). Открывают крышку пробирки и высушивают осадок при 65°C в течение 5 мин. Добавляют к осадку 50 мкл буфера для растворения НК и прогревают пробу при 65°C в течение 10 мин. Осаждают капли центрифугированием пробирок при 1000 об/мин в течение 3-5 сек. Готовый препарат используют для постановки полимеразной цепной реакции.
Составы смесей для выделения НК следующие:
Лизирующий буфер
гуанидин тиоцианат 4 M,
NaAc pH=5.2 150 мМ,
EDTA 25 мМ,
Triton Х-100 5%,
b-MeEtOH* 0.1 M,
линейный ПААГ 0.05%
Буфер для преципитации
NaAc pH=5.2 400 мМ,
изопрапанол 90%
Промывочный раствор 1
Этанол 70%
Промывочный раствор 2
Ацетон 70%
Пример 1. Приготовление линейного политакриламида
Линейный полиакриламид ЛПААГ хорошо осаждается спиртом, что позволяет использовать его в качестве соосадителя для очистки и концентрирования ДНК. ЛПААГ не ингибирует большинство ферментативных реакций. Для осаждения следует брать 2-5 мкл 0.5% раствора (в зависимости от объема осаждаемой ДНК).
Приготовить 10% AA (без МБАА) в 40 мМ TrisHCl, 20 мМ NaAc, 1 мM EDTA, pH 7.8. Добавить 1/100 V 10% персульфата аммония и 1/1000 ТЕМЕД, 30 мин. Осадить 2.5 V EtOH. Центрифугировать как для осаждения ДНК. Осадок промыть 70% EtOH. Растворить с концентрацией 10 мкг/мкл 1%.
Пример 2. Обнаружение возбудителя боррелиоза
Клеща вносили в 300 мкл лизирующего раствора и прокалывали пластиковым носиком. Пробу термостатировали 15 мин при 65°C, конденсат осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3-5 сек, после чего добавляли 500 мкл реагента для преципитации НК и пробу перемешивали на вортексе в течение 3-5 сек. Пробирку центрифугировали при 14000 об/мин в течение 15 мин. Не задевая осадок, полностью удаляли супернатант. Осадок промывали 500 мкл раствора 1, затем после центрифугирования при 14000 об/мин в течение 5 мин, осадок промывали раствором 2. Пробу центрифугировали при 14000 об/мин в течение 5 мин. Не задевая осадок, полностью удаляли супернатант, пробирки высушивали при 65°C в течение 5 мин. К осадку добавляли 50 мкл буфера для растворения НК и прогревали пробу при 65°C в течение 10 мин. Полученный препарат использовали для постановки ПЦР реакции в режиме реального времени на амплификаторе iqCycler4 Bio-rad. В качестве референс метода использовали выделение ДНК фенол хлороформной экстракцией и медом сорбции на силике (табл.1).
Таблица 1 | ||
Выявляемость возбудителя клещевого боррелиоза, N=300 | ||
Метод выделения | Группы сравнения | Выявляемость клещевого боррелиоза |
Выделение ДНК методом сорбции на силике | вся группа | 10,7% |
не напитавшиеся клещи | 10,7% | |
напитавшиеся клещи | 10,7% | |
Выделение РНК методом переосаждения из раствора с хаотропными агентами | вся группа | 17% |
не напитавшиеся клещи | 18,7% | |
напитавшиеся клещи | 15,3% | |
Выделение ДНК методом экстракции фенол хлороформом | вся группа | 16,3% |
не напитавшиеся клещи | 17,3% | |
напитавшиеся клещи | 15,3% | |
Различия в выявляемости возбудителя клещевого боррелиоза статистически достоверны отличия метода переосаждения из раствора с ЛПААГ и метода сорбции на силике p<0.05, выделения ДНК методом экстракции фенол-хлороформом и методом сорбции на силике p<0.05. Различия в выявляемости методом переосаждения из раствора с хаотропными агентами и выделение ДНК методом экстракции фенол-хлороформом статистически не достоверны.
Пример 3
Выделение РНК для обнаружения вируса клещевого энцефалита Пробы обрабатывали так, как написано в примере 2. Было проведено сравнение эффективность выделения РНК методом сорбции на силике, и методом переосаждения из раствора с ЛПААГ, и экстракцией по Хромински для выделения РНК (Таб. 2).
Проведенный эксперимент показал статистически значимые отличия в выявляемости вируса клещевого энцефалита между методом переосаждения из раствора с ЛПААГ и методом сорбции на силике p<0.05, оценено при помощи критерия Хи-квадрат с использованием программы Statistika, а также выделения РНК по Хромински и методом сорбции на силике p<0.05.
Таблица 2 | ||
Выявляемость вируса клещевого | ||
Метод выделения | Группы сравнения | Выявляемость клещевого энцефалита |
Выделение ДНК/РНК методом сорбции на силике | вся группа | 8,0% |
не напитавшиеся клещи | 7,3% | |
напитавшиеся клещи | 8,7% | |
Выделение РНК/ДНК методом переосаждения из раствора с хаотропными агентами | вся группа | 13,0% |
не напитавшиеся клещи | 12,0% | |
напитавшиеся клещи | 14% | |
Выделение РНК по Хромински | вся группа | 14,0% |
не напитавшиеся клещи | 12,6% | |
напитавшиеся клещи | 15,3% |
Различия в выявляемости методом переосаждения из раствора с ЛПААГ и выделение РНК по Хромински статистически не значимы.
Пример 4
Была проведена серия экспериментов по выделению РНК из культуральной среды РНК-содержащего фага MS2. Выделение РНК проводилось одновременно тремя различными методами фенол-хлоформная экстракция по Хроминки, при помощи набора для выделения РНК «RNA-Ss», Россия и переосаждением РНК из раствора с ЛПААГ. Критериями сравнения являлись чувствительность и воспроизводимость результатов эксперимента. Наиболее предпочтительный метод выделения РНК определяли при помощи титрования, табл. 3.
Эффективность амплификации при выделении РНК методом фенол-хлороформной экстракции составила 1.84 (92%), при выделении комплектом реагентов с ЛПААГ - 1.88 (94%).
Таблица 3 | ||||
Средние значения пороговых циклов C(t) для различных методов выделения | ||||
Метод | Значения порогового цикла C(t) при различных концентрациях исходного материала (количество фаговых частиц/мл) | |||
5*105 | 5*104 | 5*103 | 5*102 | |
Выделение РНК методом фенол-хлороформной экстракции | 36.06±0.87 | 39.10±0.93 | 45.09±1.33 | 46.62±1.53 |
Выделение РНК с ЛПААГ | 35.27±0.82 | 39.45±0.95 | 43.39±0.89 | 46.16±1.08 |
Выделение РНК набором для выделения «RNA-Ss» | Никаких достоверных результатов получено не было |
На рисунке показаны графики зависимости накопления флуоресценции от цикла амплификации для внутреннего контрольного образца при титровании в 10 раз при использовании комплекта реагентов с ЛПААГ.
Из полученных данных видно, что с помощью сравнения значений пороговых циклов при выделении РНК различными методами можно сделать вывод, что наиболее предпочтительными методами являются выделение РНК методом фенол - хлороформной экстракции и комплектом реагентов с ЛПААГ. Однако, метод выделение РНК методом фенол-хлороформной экстракции является достаточно трудоемким и тем самым неудобным для технологического применения. При выделении РНК набором для выделения «RNA-Ss» никаких достоверных результатов получено не было.
Как видно из предложенных примеров, обработка биологических материалов и их ПЦР-анализ позволяют быстро и надежно выявлять вирусо-и бактерионосительство не только у людей, в том числе клинически здоровых серонегативных лиц, но и проводить выделение возбудителей заболеваний в организмах-переносчиках (например в клещах).
Таким образом, применение подготовки биологических материалов предложенным способом позволяет ускорить время исследования без снижения чувствительности ПЦР теста. Чувствительность и специфичность ПЦР близки к предельно возможной, а результаты получают в течение одного дня. Данная обработка позволяет использовать для ПЦР практически любой материал: целых насекомых, гистологические препараты, сухие пятна крови и тканей, количество исследуемого материала во многих случаях составляет несколько микролитров.
Claims (1)
- Способ выделения нуклеиновых кислот с использованием изопропанола на этапе преципитации и осаждения ДНК, отличающийся тем, что при начальной обработке биологического материала используют гидрохлорид гуанидина и детергент в натрий-ацетатном буфере, а в качестве соосадителя нуклеиновых кислот применяют 0,05% линейный полиакриламид.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014124569/15A RU2584346C2 (ru) | 2014-06-17 | 2014-06-17 | Способ выделения нуклеиновых кислот |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014124569/15A RU2584346C2 (ru) | 2014-06-17 | 2014-06-17 | Способ выделения нуклеиновых кислот |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014124569A RU2014124569A (ru) | 2015-12-27 |
RU2584346C2 true RU2584346C2 (ru) | 2016-05-20 |
Family
ID=55023215
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014124569/15A RU2584346C2 (ru) | 2014-06-17 | 2014-06-17 | Способ выделения нуклеиновых кислот |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2584346C2 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2751244C1 (ru) * | 2020-09-30 | 2021-07-12 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Способ экстракции нуклеиновых кислот из ногтевых пластин |
RU2781833C1 (ru) * | 2022-08-19 | 2022-10-18 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Промомед Рус" | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДВУСПИРАЛЬНОЙ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ Saccharomyces cerevisiae |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2628695C1 (ru) * | 2016-06-14 | 2017-08-21 | Общество с ограниченной ответственностью "Биологическая среда" | Способ выделения РНК и ДНК из сухих биологических образцов, хранившихся на бумажном носителе, и набор для его осуществления |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6043032A (en) * | 1993-09-22 | 2000-03-28 | Tosoh Corporation | Method of extracting nucleic acids and method of detecting specified nucleic acid sequences |
EP1660631B1 (en) * | 2003-08-01 | 2013-04-24 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for purifying short rna molecules |
-
2014
- 2014-06-17 RU RU2014124569/15A patent/RU2584346C2/ru active IP Right Revival
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6043032A (en) * | 1993-09-22 | 2000-03-28 | Tosoh Corporation | Method of extracting nucleic acids and method of detecting specified nucleic acid sequences |
EP1660631B1 (en) * | 2003-08-01 | 2013-04-24 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for purifying short rna molecules |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
HONG CHEN et al. Evaluation of Five Methods for Total DNA Extraction from Western Corn Rootworm Beetles. August 2010. Vol. 5. Is. 8. e11963. PP. 1-6. TRIzol (R) LS Reagent. Пособие. 2010. Найдено в Интернет 24.06.2015, найдено на https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/trizol_ls_reagent.pdf. * |
СЕВЕРИН С. Е. Практикум по биохимии. 1989. стр. 169. Найдено в Интернет 24.06.2015, найдено на http://lib.e-science.ru/book/50/page/169.html. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2751244C1 (ru) * | 2020-09-30 | 2021-07-12 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Способ экстракции нуклеиновых кислот из ногтевых пластин |
WO2022071833A1 (ru) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | Федеральное Бюджетное Учреждение Науки "Центральный Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии" Федеральной Службы По Надзору В Сфере Защиты Прав Потребителей И Благополучия Человека | Способ экстракции нуклеиновых кислот из ногтевых пластин |
RU2810467C1 (ru) * | 2022-08-08 | 2023-12-27 | Михаил Владимирович Фаниев | Способ малоинвазивного выделения бактериальной ДНК из биоптата тестикулярной ткани у инфертильных мужчин |
RU2781833C1 (ru) * | 2022-08-19 | 2022-10-18 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Промомед Рус" | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДВУСПИРАЛЬНОЙ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ Saccharomyces cerevisiae |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2014124569A (ru) | 2015-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7408229B2 (ja) | ポリヌクレオチド捕捉材料およびその使用方法 | |
CA2985652C (en) | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples | |
US8367817B2 (en) | Reagents for isolation of purified RNA | |
JP3943601B2 (ja) | アルカリプロテアーゼを用いる核酸の単離方法 | |
EP2753693B1 (en) | A method of preparing biological material | |
CN108410951B (zh) | 一种新的核酸提取试剂及其应用 | |
CN104769111B (zh) | 用于非洗提样品的一步法核酸扩增的方法 | |
CN109207475A (zh) | 一种快速核酸提取方法 | |
KR20080066727A (ko) | Rna의 추출방법 및 rna의 검출방법 | |
JP2008527997A (ja) | 核酸の抽出及び同定方法 | |
EP3904532A1 (en) | Nucleic acid extraction composition, reagent and kit containing the same and use thereof | |
RU2584346C2 (ru) | Способ выделения нуклеиновых кислот | |
JP2007509620A (ja) | 迅速かつ低コストな核酸の単離方法 | |
JP6713007B2 (ja) | 核酸の単離 | |
JP2010523094A (ja) | 生体分子の精製方法 | |
JP2023527475A (ja) | 核酸抽出方法及び用途 | |
Rimmer et al. | Validation of high throughput methods for tissue disruption and nucleic acid extraction for ranaviruses (family Iridoviridae) | |
JP2023138629A (ja) | 核の保存方法 | |
US6291179B1 (en) | Product and method for separation of a sample containing multiple sources of genetic material using a solid medium | |
Thatcher | Nucleic acid isolation | |
US20210214716A1 (en) | Improvements in the recovery of nucleic acids from solid supports | |
CN115992143A (zh) | 一种抗神经坏死病毒的高通量药物筛选方法 | |
JPWO2018061877A1 (ja) | 核酸を抽出する方法及びそれに用いるキット | |
US7871764B1 (en) | Universal nucleic acids sample preparation method for cells, spores and their mixture | |
Anghel et al. | African swine fever virus genome detection using Real Time Q PCR polymerase chain reaction method-comparison of two sample specimen (blood and organs) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170618 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20200525 |