JP2019076109A5 - - Google Patents

Claims (26)

1. ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を生成するための方法であって、
   （ａ）遺伝子改変マウスを目的の抗原で免疫するステップであって、該遺伝子改変マウスが、その生殖系列ゲノム内に、以下：
   （ｉ）該マウスの内因性カッパ軽鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結された、ちょうど２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントであって、
   該２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントが、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントである、
   ２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメント；ならびに
   （ｉｉ）該マウスの内因性重鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結された、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＶ _Ｈ 遺伝子セグメント、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＤ _Ｈ 遺伝子セグメント、および、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪ _Ｈ 遺伝子セグメント
   を含み、
   該遺伝子改変マウスの該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖遺伝子セグメントが、再構成して、抗体のヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードすることができ、
   該遺伝子改変マウスは、再構成して免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を形成することができる内因性免疫グロブリンＶκまたはＪκ遺伝子セグメントを含まない、
   ステップと；
   （ｂ）該抗原に特異的に結合する、かつ、該遺伝子改変マウスによって作製された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと
   を含む、方法。
2. 前記ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップが、該ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を決定することを含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１遺伝子セグメント、ヒトＪκ２遺伝子セグメント、ヒトＪκ３遺伝子セグメント、ヒトＪκ４遺伝子セグメント、およびヒトＪκ５遺伝子セグメントである、請求項１に記載の方法。
4. 前記遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノム内の前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントがヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントであり、該遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノム内の前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントがヒト生殖系列Ｖκ３−２０遺伝子セグメントである、請求項１に記載の方法。
5. 前記遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムが、以下の順序で、前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメント、前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ１遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ２遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ３遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ４遺伝子セグメント、および前記ヒトＪκ５遺伝子セグメントを含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記遺伝子改変マウスが、非機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項１に記載の方法。
7. 前記遺伝子改変マウスが、機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項１に記載の方法。
8. 完全ヒト免疫グロブリン重鎖または完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を作製する方法であって、
   （ａ）遺伝子改変マウスを目的の抗原で免疫するステップであって、該遺伝子改変マウスが、その生殖系列ゲノム内に、以下：
   （ｉ）該マウスの内因性カッパ軽鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結された、ちょうど２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントであって、
   該２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントが、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントである、
   ２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメント；ならびに
   （ｉｉ）該マウスの内因性重鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結された、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＶ _Ｈ 遺伝子セグメント、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＤ _Ｈ 遺伝子セグメント、および、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪ _Ｈ 遺伝子セグメント
   を含み、
   該遺伝子改変マウスの該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖遺伝子セグメントが、再構成して、抗体のヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードすることができ、
   該遺伝子改変マウスは、再構成して免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を形成することができる内因性免疫グロブリンＶκまたはＪκ遺伝子セグメントを含まない、
   ステップと；
   （ｂ）該抗原に特異的に結合する、かつ、該遺伝子改変マウスによって作製された抗体のヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと；
   （ｃ）該ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を、それぞれ、ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖定常ドメイン配列に作動可能に連結させて、完全ヒト免疫グロブリン重鎖または完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を形成させるステップと
   を含む、方法。
9. 前記ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップが、該ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を決定することを含む、請求項８に記載の方法。
10. 前記ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を、それぞれ、前記ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖定常ドメイン配列に作動可能に連結させるステップが、該ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を、該ヒト免疫グロブリン重鎖または軽鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結させることを含む、請求項８に記載の方法。
11. 前記５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１遺伝子セグメント、ヒトＪκ２遺伝子セグメント、ヒトＪκ３遺伝子セグメント、ヒトＪκ４遺伝子セグメント、およびヒトＪκ５遺伝子セグメントである、請求項８に記載の方法。
12. 前記遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノム内の前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントがヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントであり、該遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノム内の前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントがヒト生殖系列Ｖκ３−２０遺伝子セグメントである、請求項８に記載の方法。
13. 前記遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムが、以下の順序で、前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメント、前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ１遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ２遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ３遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ４遺伝子セグメント、および前記ヒトＪκ５遺伝子セグメントを含む、請求項８に記載の方法。
14. 前記遺伝子改変マウスが、非機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項８に記載の方法。
15. 前記遺伝子改変マウスが、機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項８に記載の方法。
16. 抗体を作製するための方法であって、
    単一細胞において、
    （ａ）第１の免疫グロブリン重鎖をコードする第１の核酸配列であって、該第１の核酸配列は、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結された第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含み、該第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、第１のマウスのＢ細胞から同定され、そして、該第１のマウスは、第１のエピトープを含む目的の第１の抗原で免疫されており、該第１のマウスは、その生殖系列ゲノム内に、以下：
    （ｉ）該マウスの内因性カッパ軽鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結された、ちょうど２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントであって、
    該２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントが、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントである、
    ２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメント；ならびに
    （ｉｉ）該マウスの内因性重鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結された、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＶ _Ｈ 遺伝子セグメント、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＤ _Ｈ 遺伝子セグメント、および、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪ _Ｈ 遺伝子セグメント
    を含み、
    該第１のマウスの該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖遺伝子セグメントが、再構成して、抗体のヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードすることができ、
    該第１のマウスは、再構成して免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を形成することができる内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントを含まず、
    該第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、該第１のエピトープを認識する第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする、
    第１の免疫グロブリン重鎖をコードする第１の核酸配列と；
    （ｂ）免疫グロブリン軽鎖をコードする第２の核酸配列であって、該第２の核酸配列は、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に融合された、ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域配列を含み、該ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域配列は、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメント、ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントまたはその体細胞超変異したバージョンを含む、免疫グロブリン軽鎖をコードする第２の核酸配列と
    を発現させるステップと；
    完全ヒト抗体を発現させるのに十分な条件下で該細胞を維持するステップと；
    該抗体を単離するステップと
    を含む、方法。
17. 前記第１のマウスの前記５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１遺伝子セグメント、ヒトＪκ２遺伝子セグメント、ヒトＪκ３遺伝子セグメント、ヒトＪκ４遺伝子セグメント、およびヒトＪκ５遺伝子セグメントである、請求項１６に記載の方法。
18. 前記第１のマウスの生殖系列ゲノムが、以下の順序で、前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメント、前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ１遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ２遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ３遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ４遺伝子セグメント、および前記ヒトＪκ５遺伝子セグメントを含む、請求項１６に記載の方法。
19. 前記第１のマウスが、機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項１６に記載の方法。
20. 前記第１のマウスが、非機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項１６に記載の方法。
21. 請求項１６に記載の方法であって、前記細胞が、第２の免疫グロブリン重鎖をコードする第３の核酸配列を含み、該第３の核酸配列が、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結された第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含み、該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が、第２のマウスのＢ細胞から同定され、該第２のマウスは、第２のエピトープを含む目的の第２の抗原で免疫されており、該第２のマウスは、その生殖系列ゲノム内に、以下：
    （ｉ）該マウスの内因性カッパ軽鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結された、ちょうど２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントであって、
    該２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントが、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントおよびヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントである、
    ２つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメント、および、５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメント；ならびに
    （ｉｉ）該マウスの内因性重鎖遺伝子座においてマウス免疫グロブリン重鎖定常領域配列に作動可能に連結された、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＶ _Ｈ 遺伝子セグメント、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＤ _Ｈ 遺伝子セグメント、および、１つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンＪ _Ｈ 遺伝子セグメント
    を含み、
    該第２のマウスの該再構成されていないヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖遺伝子セグメントが、再構成して、抗体のヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードすることができ、
    該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、該第２のエピトープを認識する第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードし、
    該第１のエピトープと該第２のエピトープが、同一でなく、
    該第１および該第２のヒト免疫グロブリン重鎖が、該第２の核酸配列によってコードされる該ヒト免疫グロブリン軽鎖と対合する、
    方法。
22. 前記第２のマウスの前記５つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントが、ヒトＪκ１遺伝子セグメント、ヒトＪκ２遺伝子セグメント、ヒトＪκ３遺伝子セグメント、ヒトＪκ４遺伝子セグメント、およびヒトＪκ５遺伝子セグメントである、請求項２１に記載の方法。
23. 前記第２のマウスの生殖系列ゲノムが、以下の順序で、前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメント、前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ１遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ２遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ３遺伝子セグメント、前記ヒトＪκ４遺伝子セグメント、および前記ヒトＪκ５遺伝子セグメントを含む、請求項２１に記載の方法。
24. 前記目的の第１の抗原と前記目的の第２の抗原が、同じ目的の抗原であり、前記第１のエピトープと前記第２のエピトープが、該同じ抗原上の異なるエピトープである、請求項２１に記載の方法。
25. 前記第１のマウスと前記第２のマウスが同じマウスである、請求項２１に記載の方法。
26. 前記第１および／または第２のマウスの生殖系列ゲノム内の前記ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントがヒト生殖系列Ｖκ１−３９遺伝子セグメントであり、該第１および／または第２のマウスの生殖系列ゲノム内の前記ヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントがヒト生殖系列Ｖκ３−２０遺伝子セグメントである、請求項２１に記載の方法。