RU2021135460A - Мыши с гуманизированной легкой цепью - Google Patents

Claims (57)

1. Способ создания человеческой последовательности вариабельного домена тяжелой цепи или лямбда (λ) легкой цепи, предусматривающий следующие стадии:

(а) иммунизация генетически модифицированной мыши антигеном, причем мышь:

(i) имеет геном, который содержит:

(A) вставку одного или нескольких генных сегментов V_H человека, одного или нескольких генных сегментов D_H человека и одного или нескольких генных сегментов J_H человека выше гена константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, причем один или несколько генных сегментов V_H человека, один или несколько генных сегментов D_H человека и один или несколько генных сегментов J_H человека функционально связаны с геном константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши,

(B) вставку одного или нескольких генных сегментов Vλ человека и одного или нескольких генных сегментов Jλ человека, причем один или несколько генных сегментов Vλ человека и один или несколько генных сегментов Jλ человека функционально связаны с геном константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши, и

(C) вставку нуклеотидной последовательности, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, причем белок ADAM6 экспрессируется из вставленной последовательности нуклеиновой кислоты;

(ii) производит антитела при иммунизации антигеном, причем каждое из антител содержит тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи человека, функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи мыши, и легкую цепь, содержащую вариабельный домен лямбда легкой цепи человека, функционально связанный с константным доменом легкой цепи; и

(iii) является фертильной; и

(b) определение человеческой последовательности вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи антитела, которое специфически связывает антиген и которое было произведено генетически модифицированной мышью.

2. Способ по п. 1, при котором определение человеческой последовательности вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи предусматривает определение нуклеотидной последовательности, которая кодирует человеческую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи.

3. Способ по п. 1, при котором один или несколько генных сегментов V_H человека включают V_H6-1, V_H1-2, V_H1-3, V_H2-5, V_H3-7, V_H1-8, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-16, V_H1-18, V_H3-20, V_H3-21, V_H3-23, V_H1-24, V_H2-26, V_H4-28, V_H3-30, V_H4-31, V_H3-33, V_H4-34, V_H3-35, V_H3-38, V_H4-39, V_H3-43, V_H1-45, V_H1-46, V_H3-48, V_H3-49, V_H5-51, V_H3-53, V_H1-58, V_H4-59, V_H4-61, V_H3-64, V_H3-66, V_H1-69, V_H2-70, V_H3-72, V_H3-73, V_H3-74 или их комбинацию.

4. Способ по любому из пп. 1-3, при котором ген константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши представляет собой Cκ мыши.

5. Способ по любому из пп. 1-3, при котором ген константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши представляет собой Cλ мыши.

6. Способ по п. 5, при котором Cλ мыши представляет собой Cλ2 мыши.

7. Способ по любому из пп. 1-6, при котором один или несколько генных сегментов Vλ человека содержат по меньшей мере 12 генных сегментов Vλ человека.

8. Способ по любому из пп. 1-6, при котором один или несколько генных сегментов Vλ человека содержат по меньшей мере 28 генных сегментов Vλ человека.

9. Способ по любому из пп. 1-6, при котором один или несколько генных сегментов Vλ человека содержат по меньшей мере 40 генных сегментов Vλ человека.

10. Способ по любому из пп. 1-9, при котором один или несколько генных сегментов Jλ человека содержат по меньшей мере четыре генных сегмента Jλ человека.

11. Способ по п. 10, при котором по меньшей мере четыре генных сегмента Jλ человека включают Jλ1, Jλ2, Jλ3 и Jλ7 человека.

12. Способ по любому из пп. 1-11, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, находится на той же хромосоме, что и один или несколько генных сегментов V_H человека, один или несколько генных сегментов D_H человека и один или несколько генных сегментов J_H человека.

13. Способ по п. 12, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, присутствует в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.

14. Способ по п. 13, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, является смежной с одним или несколькими генными сегментами V_H человека, одним или несколькими генными сегментами D_H человека или одним или несколькими генными сегментами J_H человека.

15. Способ по п. 14, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, расположена между двумя генными сегментами V_H человека.

16. Способ по п. 14, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, расположена между генным сегментом V_H и генным сегментом D_H.

17. Способ по любому из пп. 1-12, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, присутствует в положении, отличном от локуса тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.

18. Способ по любому из пп. 1-17, при котором мышь дополнительно содержит межгенную область Vκ-Jκ человека из локуса κ легкой цепи человека.

19. Способ по п. 18, при котором межгенная область Vκ-Jκ человека расположена между генным сегментом Vλ человека и генным сегментом Jλ человека.

20. Способ по п. 18, при котором межгенная область Vκ-Jκ человека содержит SEQ ID NO: 158.

21. Способ создания полностью человеческой тяжелой цепи или полностью человеческой лямбда (λ) легкой цепи, предусматривающий следующие стадии:

(а) иммунизация генетически модифицированной мыши антигеном, причем мышь:

(i) имеет геном, который содержит:

(A) вставку одного или нескольких генных сегментов V_H человека, одного или нескольких генных сегментов D_H человека и одного или нескольких генных сегментов J_H человека выше гена константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, причем один или несколько генных сегментов V_H человека, один или несколько генных сегментов D_H человека и один или несколько генных сегментов J_H человека функционально связаны с геном константной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши,

(B) вставку одного или нескольких генных сегментов Vλ человека и одного или нескольких генных сегментов Jλ человека, причем один или несколько генных сегментов Vλ человека и один или несколько генных сегментов Jλ человека функционально связаны с геном константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши, и

(C) вставку нуклеотидной последовательности, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, причем белок ADAM6 экспрессируется из вставленной последовательности нуклеиновой кислоты;

(ii) производит антитела при иммунизации антигеном, причем каждое из антител содержит тяжелую цепь, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи человека, функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи мыши, и легкую цепь, содержащую вариабельный домен лямбда легкой цепи человека, функционально связанный с константным доменом легкой цепи; и

(iii) является фертильной; и

(b) определение человеческой последовательности вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи антитела, которое специфически связывает антиген и которое было произведено генетически модифицированной мышью; и

(c) функциональное связывание человеческой последовательности вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи с человеческой последовательностью константного домена тяжелой цепи или легкой цепи, соответственно, с образованием полностью человеческой тяжелой цепи или полностью человеческой легкой цепи.

22. Способ по п. 21, при котором функциональное связывание человеческой последовательности вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи с человеческой последовательностью константного домена тяжелой цепи или легкой цепи, соответственно, предусматривает функциональное связывание нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи или легкой цепи, с нуклеотидной последовательностью, кодирующей человеческую последовательность константного домена тяжелой цепи или легкой цепи, соответственно.

23. Способ по п. 21, при котором один или несколько генных сегментов V_H человека включают V_H6-1, V_H1-2, V_H1-3, V_H2-5, V_H3-7, V_H1-8, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-16, V_H1-18, V_H3-20, V_H3-21, V_H3-23, V_H1-24, V_H2-26, V_H4-28, V_H3-30, V_H4-31, V_H3-33, V_H4-34, V_H3-35, V_H3-38, V_H4-39, V_H3-43, V_H1-45, V_H1-46, V_H3-48, V_H3-49, V_H5-51, V_H3-53, V_H1-58, V_H4-59, V_H4-61, V_H3-64, V_H3-66, V_H1-69, V_H2-70, V_H3-72, V_H3-73, V_H3-74 или их комбинацию.

24. Способ по любому из пп. 1-23, при котором ген константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши представляет собой Cκ мыши.

25. Способ по любому из пп. 1-23, при котором ген константной области легкой цепи иммуноглобулина мыши представляет собой Cλ мыши.

26. Способ по п. 25, при котором Cλ мыши представляет собой Cλ2 мыши.

27. Способ по любому из пп. 1-26, при котором один или несколько генных сегментов Vλ человека содержат по меньшей мере 12 генных сегментов Vλ человека.

28. Способ по любому из пп. 1-26, при котором один или несколько генных сегментов Vλ человека содержат по меньшей мере 28 генных сегментов Vλ человека.

29. Способ по любому из пп. 1-26, при котором один или несколько генных сегментов Vλ человека содержат по меньшей мере 40 генных сегментов Vλ человека.

30. Способ по любому из пп. 1-29, при котором один или несколько генных сегментов Jλ человека содержат по меньшей мере четыре генных сегмента Jλ человека.

31. Способ по п. 30, при котором по меньшей мере четыре генных сегмента Jλ человека включают Jλ1, Jλ2, Jλ3 и Jλ7 человека.

32. Способ по любому из пп. 1-31, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, находится на той же хромосоме, что и один или несколько генных сегментов V_H человека, один или несколько генных сегментов D_H человека и один или несколько генных сегментов J_H человека.

33. Способ по п. 32, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, присутствует в локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.

34. Способ по п. 33, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, расположена смежно с одним или несколькими генными сегментами V_H человека, одним или несколькими генными сегментами D_H человека или одним или несколькими генными сегментами J_H человека.

35. Способ по п. 34, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, расположена между двумя генными сегментами V_H человека.

36. Способ по п. 34, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, расположена между генным сегментом V_H и генным сегментом D_H.

37. Способ по любому из пп. 1-32, при котором вставленная нуклеотидная последовательность, которая кодирует белок ADAM6 или его функциональный фрагмент, присутствует в положении, отличном от локуса тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.

38. Способ по любому из пп. 1-37, при котором мышь дополнительно содержит межгенную область Vκ-Jκ человека из локуса κ легкой цепи человека.

39. Способ по п. 38, при котором межгенная область Vκ-Jκ человека расположена между генным сегментом Vλ человека и генным сегментом Jλ человека.

40. Способ по п. 38, при котором межгенная область Vκ-Jκ человека содержит SEQ ID NO: 158.