JP2018522562A5

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Publication number: JP2018522562A5
Application number: JP2018505712A
Authority: JP
Filing date: 2016-08-04
Publication date: 2021-05-06
Anticipated expiration: 2036-08-04

Description

実施例５．翻訳後改変リスクを最小限に抑えるための抗体エンジニアリング
抗体Ｃ４ＬＢ８９のＶＬは、ＬＣＤＲ２に推定脱アミノ化部位を含んでいた（軽鎖Ｃ４ＬＬ４９中Ｎ５２〜Ｓ５３，配列番号６６）。ＶＬ中各位置（Ｎ５２Ｓ及びＳ５３Ｔ）に対する置換は別個に行った。変異した軽鎖を親重鎖Ｃ４ＬＨ１６５（配列番号５９）と同時発現させて、抗体Ｃ４ＬＢ２３５及びＣ４ＬＢ２３６をＩｇＧ２σ／κとして作製した。Ｃ４ＬＢ２３５及びＣ４ＬＢ２３６のＬＣＤＲ２及びＶＬのアミノ酸配列をそれぞれ表１３及び表１４に示す。Ｃ４ＬＢ２３５は、配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ、配列番号３７、４９、及び５２のＬＣＤＲ、配列番号５９のＶＨ、並びに配列番号７２のＶＬを含む。Ｃ４ＬＢ２３６は、配列番号１７、２３、及び３０のＨＣＤＲ、配列番号３７、５０、及び５２のＬＣＤＲ、配列番号５９のＶＨ、並びに配列番号７３のＶＬを含む。

Claims

配列番号１のヒトＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、
配列番号１７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１（ＳＹＧＩＳ）と、
配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、
配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）と、
配列番号３７の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、
配列番号４４（ＹＡＮＳＬＱＳ）、配列番号４９（ＹＡＳＳＬＱＳ）または配列番号５０（ＹＡＮＴＬＱＳ）のＬＣＤＲ２と、
配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と
を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分。
配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、
配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、
配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）と、
配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、
配列番号４４のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＳＬＱＳ）と、
配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と
を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、
配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、
配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）と、
配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、
配列番号４９のＬＣＤＲ２（ＹＡＳＳＬＱＳ）と、
配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と
を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
配列番号１７のＨＣＤＲ１（ＳＹＧＩＳ）と、
配列番号２３のＨＣＤＲ２（ＷＩＳＰＩＦＧＮＴＮＹＡＱＫＦＱＧ）と、
配列番号３０のＨＣＤＲ３（ＳＲＹＹＧＤＬＤＹ）と、
配列番号３７のＬＣＤＲ１（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）と、
配列番号５０のＬＣＤＲ２（ＹＡＮＴＬＱＳ）と、
配列番号５２のＬＣＤＲ３（ＱＱＳＤＳＩＰＷＴ）と
を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
前記抗体が、以下の特性：
ａ）前記抗体と、可溶性ヒトＣＤ１５４（ｓｈＣＤ１５４）との免疫複合体が、血小板を活性化せず、ここで、血小板活性化は、血小板上のＰ−セレクチン表面発現により測定される；
ｂ）０．０３％のポリソルベートＰ２０及び１００μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含有しているダルベッコリン酸緩衝生理食塩水にて、２５℃下でＰｒｏｔｅＯｎＸＰＲ３６システムを用いＫ_Dを測定したときに、５×１０^-9Ｍ以下の解離定数（Ｋ_D）でＣＤ１５４に結合する；
ｃ）ＣＤ１５４介在性のヒトＢ細胞の増殖を２．７×１０^-9Ｍ以下のＩＣ₅₀値で阻害する；又は
ｄ）分泌型胎盤性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）及びヒトＣＤ４０を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞において、ＮＦ−κＢ−誘導性インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）ミニマルプロモーター下、２．１×１０^-8Ｍ以下のＩＣ₅₀値で、ＳＥＡＰのＣＤ１５４介在性の発現を阻害する；
のうちの少なくとも１つを有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分。
ＣＤ１５４がホモ三量体であり、前記抗体が、前記ホモ三量体中の第１のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１８２〜２０７内で結合し、前記ホモ三量体中の第２のＣＤ１５４モノマーにＣＤ１５４のアミノ酸残基１７６〜２５３内で結合し、ここで、残基付番は配列番号１に準拠し、
ａ）前記抗体が、前記第１のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｅ１８２、Ｓ１８５、Ｑ１８６、Ａ１８７、Ｐ１８８、Ｓ２１４、Ａ２１５、及びＲ２０７に結合し、ここで残基付番は配列番号１に準拠する、及び
ｂ）前記抗体が、前記第２のＣＤ１５４モノマー中の残基Ｔ１７６、Ｆ１７７、Ｃ１７８、Ｑ２２０、Ｓ２４８、Ｈ２４９、Ｇ２５０、及びＦ３５３に結合し、ここで残基付番は配列番号１に準拠する、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
配列番号５９の重鎖可変領域（ＶＨ）又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含むその変異体、及び
配列番号６６、７２、又は７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含むか、又は、
前記抗体は、
ａ）配列番号５９のＶＨ、及び配列番号６６のＶＬ；
ｂ）配列番号５９のＶＨ、及び配列番号７２のＶＬ；又は
ｃ）配列番号５９のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬ
を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合部分。
前記抗体が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型アイソタイプであるか、又はＦｃ領域に少なくとも１つの置換を含むその変異体であり、ここで、
ａ）前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠し、前記抗体は、前記Ｆｃ領域に置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する；
ｂ）前記Ｆｃ領域における少なくとも１つの置換が、置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、又はＰ３３１Ｓであり、残基付番がＥＵインデックスに準拠し、前記抗体は、前記Ｆｃ領域に置換Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含み、残基付番がＥＵインデックスに準拠する；又は
ｃ）前記抗体が、
ｉ）それぞれ、配列番号８０及び８１、
ｉｉ）それぞれ、配列番号８２及び８１、又は
ｉｉｉ）それぞれ、配列番号８３及び８１
の、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分。
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分であって、
ａ）それぞれ配列番号１７、２３、３０、３７、４４、及び５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｂ）配列番号５９のＶＨ及び配列番号６６のＶＬ、又は
ｃ）配列番号８０の重鎖及び配列番号８１の軽鎖
を含む、単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分。
治療薬又は造影剤に結合させた請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分を含む免疫複合体。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合部分又は請求項１０に記載の免疫複合体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分をコードする、ポリヌクレオチド。
ポリヌクレオチドであって、
（ｉ）配列番号５９の抗体重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６６、７２、又は７３の抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）とをコードしている；又は
（ｉｉ）配列番号７６及び７７のポリヌクレオチド配列を含む、
ポリヌクレオチド。
請求項１２又は１３に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
請求項１４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
配列番号１のＣＤ１５４に特異的に結合する単離されたアンタゴニスト抗体又はその抗原結合部分の製造方法であって、
前記抗体が発現される条件下で請求項１５に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞より産生された前記抗体を回収することと、を含む、方法。
自己免疫疾患又は免疫介在性炎症性疾患を治療するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離抗体又はその抗原結合部分を含む組成物、又は請求項１１に記載の医薬組成物。
ａ）前記免疫介在性炎症性疾患又は前記自己免疫疾患が、関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、移植、腎移植、皮膚移植、骨髄移植、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）、多発性硬化症、甲状腺炎、１型糖尿病、又はアテローム性動脈硬化症である；
ｂ）前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、狼瘡である；
ｃ）前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、移植である；又は
ｄ）前記自己免疫疾患又は前記免疫介在性炎症性疾患が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である、請求項１７に記載の組成物又は医薬組成物。
前記ＩＢＤが、クローン病又は潰瘍性大腸炎である、請求項１８に記載の組成物又は医薬組成物。
前記関節炎が、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎、又は痛風性関節炎である、請求項１８に記載の組成物又は医薬組成物。
前記組成物又は医薬組成物が、第２の治療薬と組み合わせて使用され、ここで、前記第２の治療薬は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サリチラート、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、コルチコステロイド、細胞毒性剤、免疫抑制剤、及び／又は抗体である、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の組成物又は医薬組成物。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分に結合する抗イディオタイプ抗体。
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分を含み、前記抗体又はその抗原結合部分を検出するための試薬及び使用説明書を更に含む、キット。