JP2018520193A

JP2018520193A - 皮膚疾患治療薬を製造するためのマンゴスチン果皮抽出物の用途

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Publication number: JP2018520193A
Application number: JP2018502248A
Authority: JP
Inventors: 張嘉銘; 蔡佩宜; 陳谷政
Original assignee: 山▲トゥン▼新薬開発股▲ふん▼有限公司
Priority date: 2015-07-24
Filing date: 2016-07-21
Publication date: 2018-07-26
Anticipated expiration: 2036-07-21
Also published as: EP3326637B1; EP3326637A1; PL3326637T3; EP3326637A4; US20180200318A1; WO2017016428A1; US10383906B2; DK3326637T3; CN106361784B; JP6836581B2; CN106361784A; DE212016000151U1; ES2880432T3

Abstract

皮膚疾患治療薬を製造するための組成物の用途であって、当該組成物は有効量のマンゴスチン果皮抽出物を含有する。【選択図】図１

Description

本発明は、皮膚疾患治療薬を製造するための組成物の用途に関する。

皮膚は人体最大の器官であり、皮膚疾患の種類もまた多岐にわたる。皮膚疾患には急性（数分間〜数時間しか持続しないもの）や慢性のものがあり、慢性の場合には、数日、数か月、数年、ひいては生涯にわたって個体に影響を及ぼすことがある。また、皮膚疾患の病状としては、真菌性、細菌性又はウィルス性のほか、非感染性のものや免疫性反応が考えられる。例えば、アレルゲンを伴う／伴わない炎症反応や、突発性疾患があり得る。そのため、症状は、痒みや赤み、腫れのような穏やかなものから、化膿や開放型の疼痛（例えば重度の潰爛）のように深刻なものまで様々である。皮膚疾患は、個体にとって生活の質そのものに影響する恐れがある。

皮膚疾患としては、瘢痕、皮膚炎、増殖性疾患又は症状、肥満細胞疾患又は症状、火傷、アレルゲン及び／又は刺激物との接触、或いは炎症性疾患又は症状が考えられる。また、皮膚疾患には、アトピー性皮膚炎、水疱性皮膚症、膠原病、乾癬、乾癬性病巣、接触皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、酒さ性ざ瘡、肥厚性瘢痕、ケロイド形成、強皮症、毛嚢炎、火傷或いは皮膚ムチン症が含まれる。

アトピー性皮膚炎はアトピー性湿疹とも称され、繰り返し発症するアレルギー性皮膚疾患の一種である。遺伝が関係することが多く、乳幼児に最も一般的な皮膚疾患の一つとして小児人口の約３〜５％を占めている。このうち６０％の患者は１歳までに発症し、３０％の患者は１〜５歳の間に発症する。アトピー性皮膚炎を持つ子供のうち約半数には、アレルギー性鼻炎、喘息、アレルギー性結膜炎等が同時に発症し、いわゆるアレルギー児童やアトピー体質と呼ばれている。

乾癬は一般的な慢性皮膚疾患であり、銀屑病とも称される。特徴としては、大小様々な丘疹や紅斑が発生し、表面が銀白色の鱗状の皮で覆われる。境目がはっきりしており、頭皮、四肢の伸側及び背中に発生しやすい。

毛嚢炎は菌が毛嚢部位に侵入することで発生する化膿性炎症である。頭部、頚部、臀部、陰部、肛門周辺又は身体のその他部位に発生することが多く、再発しやすい。

接触性皮膚炎は、皮膚粘膜が化繊衣類や化粧品、薬物といった外界の物質と接触することで発生する炎性反応である。臨床的な特性としては、接触部位に境目の明らかな損傷が発生し、軽度の場合には水腫性紅斑、やや重度の場合には丘疹、水疱、更には大きな瘡ができる。また、より深刻になると表皮が緩み、壊死することもある。

通常、皮膚疾患の治療には製剤の経口投与や外用製剤が含まれる。現在のところ、アトピー性皮膚炎に伴うアレルギー性疾患の治療にはステロイド系やヒスタミン系の薬物が広く用いられており、重篤な場合には免疫抑制剤が投与される。しかし、こうした方法では一時的な治療効果しか見込めず、例えば皮膚萎縮、皮膚色素脱失、ニキビ、骨粗鬆症、虚血性壊死（ａｖａｓｃｕｌａｒｎｅｃｒｏｓｉｓ）、動脈硬化、緑内障、腫瘍の成長促進といった望ましくない副作用も生じやすい。そこで、アトピー性皮膚炎の症状緩和と治療に用いられ、強力且つ持続的な治療効果を提供可能であるとともに、副作用が軽減する新たな治療薬の研究開発が急がれている。

マンゴスチンは乳癌の予防や筋疾患といった分野への応用が研究されており、日常生活における栄養補給剤や化粧品等としての開発も進んでいる。また、急性肝炎や肝繊維化の治療、及び肝硬変の予防といった用途にも関係している（特許文献１）。

一方、Ｍａｔｓｕｍｏｔｏらは、マンゴスチンの果皮からα−マンゴスチン（ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）、β−マンゴスチン、γ−マンゴスチン及びメチル−β−マンゴスチンを精製し、細胞周期の各段階における当該化合物の抑制作用について研究した結果、当該化合物に抗細胞増殖効果と抗腫瘍効果があることを見出した（非特許文献１）。

台湾特許公告番号第Ｉ４１１４３２号

Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００５，１３，６０６４〜６０６９

本発明は、免疫疾患、アレルギー性疾患又は炎症性疾患を治療する医薬組成物を製造するための組成物の用途を提供する。

具体的に、本発明は、自己免疫疾患又はアレルギー治療薬を製造するための組成物の用途を提供し、当該組成物は有効量のマンゴスチン果皮抽出物を含有する。当該薬物は、部分治療又は精密治療の用途に用いられる。

本発明は、更に、自己免疫疾患又はアレルギー治療薬を製造するための組成物の用途を提供し、当該組成物は有効量のマンゴスチン果皮抽出物を含有する。

好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮は溶剤を用いて抽出し、当該抽出溶剤は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、酢酸エチル及び水からなる群から選択される。

他の好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮抽出物は、マンゴスチン果皮の水抽出物及び／又はマンゴスチン果皮のアルコール抽出物である。

マンゴスチン果皮とは、マンゴスチンの果肉以外の部分をいう。果皮には、材質が比較的柔らかい内果皮と、材質が比較的硬い外果皮が含まれる。

好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮抽出物はマンゴスチン果皮の水抽出物である。他の好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮の外果皮抽出物はマンゴスチン果皮のアルコール抽出物である。

好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮は、マンゴスチン果皮の外果皮及び／又はマンゴスチン果皮の内果皮である。

他の好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮は、マンゴスチン果皮の外果皮である。

好ましい実施例において、当該組成物は更に賦形剤を含み、当該賦形剤の割合が１〜１０％であっても治療効果を備える。

好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮の水抽出物は、痒み止め及び／又は細胞増殖の促進が可能である。他の好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮のアルコール抽出物は、消炎及び／又は痛み止めが可能である。

更に好ましい実施例において、当該マンゴスチン果皮抽出物は炎症に関わるサイトカインであるＩＬ−１又はＴＮＦ−αを抑制するのではなく、免疫抑制により関連のホルモンＩＬ−７、ＩＬ−１０の増加を調整可能である。当該マンゴスチン果皮の外果皮抽出物は、主としてＩＬ−７、ＩＬ−１０の増加を抑制するとともに、ＩＬ−１５、ＭＣＰ−１の増加も抑制可能である。当該マンゴスチン果皮の内果皮抽出物は、主としてＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１５の増加を抑制するとともに、ＭＣＰ−１の増加も抑制可能である。

好ましい実施例において、当該組成物は更に油脂類を含む。

好ましい実施例において、本発明の組成物としては経口又は非経腸経胃製剤が可能であり、当該非経腸経胃製剤としては外用製剤が可能であり、当該外用製剤としては、乳液、クリーム、軟膏、ゲル、洗浄剤又は湿布が可能である。

好ましい実施例において、本発明のマンゴスチン果皮抽出物は、αマンゴスチン（α−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）及びγマンゴスチン（γ−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）を含有する。

他の好ましい実施例において、本発明のマンゴスチン果皮の水抽出物は、αマンゴスチン（α−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）及びγマンゴスチン（γ−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）を含有する。

更に好ましい実施例において、本発明のマンゴスチン果皮のアルコール抽出物は、αマンゴスチン（α−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）及びγマンゴスチン（γ−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）を含有する。

本発明の組成物は、ＩＬ−１又はＴＮＦαのような炎症に関わるサイトカインを抑制するのではなく、免疫抑制により関連のホルモンを調節することでアトピー性皮膚炎を治療又は抑制可能である。

皮膚疾患には、アトピー性皮膚炎、水疱性皮膚症、膠原病、乾癬、乾癬性病巣、接触皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、酒さ性ざ瘡、肥厚性瘢痕、ケロイド形成、強皮症、毛嚢炎、火傷或いは皮膚ムチン症が含まれるが、これらに限らない。

本稿で使用する「アレルギー性疾患」との用語は、一般的には無害な物質に対してアレルギー反応を生じる疾病、症状又は疾患をいう。これらの物質は環境中に存在することもあれば（例えば、室内の空気汚染物質や空気中のアレルゲン）、環境に由来しないこともある（例えば、皮膚又は食物アレルギーを招来するもの）。アレルゲンは、呼吸、摂取、皮膚接触或いは注射（昆虫刺傷を含む）といった様々なルートを経由して身体に侵入する。多くのアレルギー性疾患は、アレルギー抗体ＩｇＥを産生傾向にあるアトピー体質に関連する。ＩｇＥは体内のあらゆる箇所の肥満細胞を感作し得るため、アトピー体質の個体は一種類以上の器官に疾患が表れることが多い。本発明の目的のために、アレルギー性疾患には、感作アレルゲンへの再暴露により発生するアレルギー反応が含まれ、これが炎症媒介物質の放出を招来する。アレルギー性疾患には、アレルギー性鼻炎（例えば花粉症）、静脈洞炎（ｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）、副鼻腔炎（ｒｈｉｎｏｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）、慢性／再発性中耳炎、薬物反応、昆虫刺傷反応、エマルジョン反応、結膜炎、蕁麻疹、アナフィラキシー及びアナフィラキシー様反応、アトピー性皮膚炎、喘息及び食物アレルギーが含まれるが、これらに限らない。

本発明の抽出物は、炎症性疾患を持つ患者に対する予防又は治療に適用可能である。本稿で使用する「炎症性疾患」との用語は、身体組織に炎症を起こす、或いは炎症成分を有することを特徴とする疾病、疾患又は症状のことをいい、部分的な炎症反応と全身性の炎症を含む。これら炎症性疾患の実例には、皮膚移植に対する拒絶反応を含む移植拒絶反応、関節炎、リウマチ様関節炎、骨性関節炎及び骨損失の増加に関する骨格疾患を含む関節の慢性炎症性疾患、例えば回腸炎、潰瘍性結腸炎、バレット（Ｂａｒｒｅｔｔ’ｓ）症候群及びクローン病といった炎症性腸疾患、例えば喘息、急性呼吸窮迫症候群及び慢性閉塞性呼吸器疾患といった炎症性肺疾患、角膜ジストロフィ、トラコーマ、糸状虫症（ｏｎｃｈｏｃｅｒｃｉａｓｉｓ）、ぶどう膜炎、交感性眼炎（ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃｏｐｈｔｈａｌｍｉｔｉｓ）及び眼内炎を含む眼部炎症性疾患、歯肉炎及び歯周炎を含む慢性歯肉炎症性疾患、肺結核、ハンセン病、尿毒症合併症、糸球体腎炎及び腎臓病変を含む炎症性腎疾患、強皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、乾癬及び湿疹を含む皮膚の炎症性疾患、神経系の慢性脱髄疾患、多発性硬化症、エイズに関連する神経変性疾患及びアルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、感染性髄膜炎、脳脊髄炎、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、ハンチントン（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ）舞踊病、筋萎縮性側索硬化症、及びウィルス性又は自己免疫性脳炎を含む中枢神経系の炎症性疾患、自己免疫疾患、免疫複合体血管炎、全身性の狼瘡及び紅斑、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、及び、例えば心筋病変、虚血性心疾患（高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化）といった炎症性心疾患、及び、子癇前症、慢性肝不全、脳・脊髄損傷、癌を含むその他明らかな炎症成分を有する各種疾病、が含まれる。また、例えばグラム（Ｇｒａｍ）陽性又はグラム陰性ショック、出血性又はアレルギー性ショックといった全身性の炎症や、例えば炎症性サイトカインに関するショックのように、炎症性サイトカイン反応に対して癌の化学療法が誘発するショックも考えられる。このショックは、例えば癌の化学療法に用いられる化学療法薬剤により誘発され得る。また、本稿における「炎症性疾患の治療」とは、炎症性疾患に罹患している個体、これら疾病の症状がみられる個体、或いはこれら疾病に罹患している可能性のある個体に対して本発明の化合物又は組成物を投与することで、当該炎症性疾患やその症状又は病状傾向を治療、緩和、変化、左右又は予防することをいう。

「有効量」とは、個体への投与時に有効な結果が得られる薬剤の量、或いは、体内又は体外で所望の活性を有する薬剤の量をいう。炎症性疾患及び自己免疫疾患の場合、未治療の際と比較して、有効な臨床結果には、疾病又は病症に関する症状の程度或いは深刻度の緩和、及び／又は個体寿命の延長、及び／又は個体の生活の質向上が含まれる。個体に投与する精密な化合物量は、疾病又は症状のタイプ、深刻度及び個体の特性をみて決定する。個体の特性とは、例えば個体の通常時の健康状態、年齢、性別、体重及び薬物耐性である。また、炎症性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患の程度、深刻度及びタイプ、或いは所望の免疫抑制効果に基づき決定することもある。当業者であれば、これらの要素及びその他の要素から適切な分量を決定可能である。好ましい実施例において、マンゴスチン果皮抽出物の有効量は２０〜２００ｍｇ／ｋｇである。

本発明は、免疫の抑制、或いは、炎症、免疫疾患及びアレルギー性疾患の治療又は予防に対して特に有用な抽出物又は医薬組成物に関する。

本発明の医薬組成物は、各種の経口又は非経腸経胃製剤として調合可能である。経口製剤は、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル等の固形製剤や、例えば懸濁液、エマルジョン、シロップ等の液状製剤として調合可能である。非経腸経胃製剤は、例えばクリーム、軟膏、ゲル、洗浄剤、湿布等の外用製剤や、吸入剤、エアロゾル、座薬等として調合可能である。

本発明の医薬組成物は、医薬上受け入れ可能な賦形剤を含有してもよい。特に、所定の溶剤又は油脂類を更に含有してもよく、必要であれば更に分散剤を含有してもよい。

本発明の溶剤として適用可能な実例には、水、エタノール、イソプロパノール、１，３−ブタンジオール、プロパンジオール、グリセリン等が含まれるが、これらに限らない。

本発明の油脂類として適用可能な実例は、トウモロコシ油、ゴマ油、亜麻仁油、コットンシードオイル、ダイズ油、ピーナッツオイル、モノグリセリド、ジアシルグリセロール、トリアシルグリセロール、鉱物油、スクアレン（Ｓｑｕａｌｅｎｅ）、ホホバオイル（ｊｏｊｏｂａｏｉｌ）、オリーブオイル、月見草油、ボラージオイル（ＢｏｒａｇｅＯｉｌ）、グレープシードオイル、ココナッツオイル、ヒマワリ油、シアバター及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるが、これらに限らない

溶剤及び油脂類は、単独で使用してもよいし、任意に組み合わせて使用してもよい。

有益な分散剤の実例としては、レシチン、有機モノグリセリド、ソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ステアリン酸ソルビタン等が含まれ得るが、これらに限らない。これらの原料は単独で使用してもよいし、任意に組み合わせて使用してもよい。

必要に応じて、組成物は、例えば抗菌剤や防腐剤といった追加の原料を更に含有してもよい。

また、本発明の組成物における医薬活性に逆効果とならなければ、既知の活性成分を組成物と併用してもよい。例えば、セラミド（ｃｅｒａｍｉｄｅ）クリームのような一般的に周知のアトピー性皮膚炎薬や、液体成分、例えばヒドロコルチゾンのようなステロイド、ビタミンＡ誘導体、例えばパルミチン酸レチニル及び／又はトコフェロール等を組成物と併用してもよい。

外用製剤として医薬組成物を使用する場合には、基礎原料として適切な皮膚外用剤を用いるとともに、水性溶液、非水性溶剤、懸濁液、エマルジョン又は凍結乾燥製剤等を用い、既知の方法にしがたって消毒すればよい。

実際に本発明の組成物を投与又は適用する際には、例えば投与経路、年齢、性別及び患者の体重、疾病の深刻度、活性成分である薬剤の剤形といった各種要因に基づき分量を決定すればよい。

本発明の組成物は、食品又は化粧品の組成物としてもよく、少なくとも１つの食品栄養分又は美容上受け入れ可能なキャリアを適切に添加することで当該組成物を製造可能である。

食品組成物は、例えば健康食品に適用又は添加可能である。なお、本稿で使用する「健康食品」との用語は、本発明の組成物を含有し、通常の食品と比較して健康増進機能を有する食品のことをいう。健康食品は、当該組成物を通常の食品に添加するか、或いは、カプセル化、粉末化又は懸濁液化により製造可能である。

化粧品組成物は、単独又は別の化粧品成分とともに添加してもよいし、その他既知の方法に基づいて適切に使用してもよい。化粧品には、アフターシェーブローション（ａｆｔｅｒｓｈａｖｅｓ）、化粧水、クリーム、フェイシャルマスク及びメイク道具が含まれるが、これらに限らない。

化粧品組成物は、例えばゲル、クリーム、軟膏といった各種の組成物形式に調合可能である。ゲル、クリーム及び軟膏形式の組成物は、組成物の形式に応じて既知の方法を用い、既知の軟化剤、乳化剤及び増粘剤、或いは技術的に既知のその他原料を添加することで適切に製造可能である。

ゲル形式の組成物は、例えばトリメチロールプロパン、ポリエチレングリコール及びグリセリンといった軟化剤、例えばプロパンジオール、エタノール及びイソヘキサデカノールといった溶剤、及び純水を添加することで製造可能である。

クリーム形式の組成物は、例えばステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、ベヘニルアルコール（ｂｅｈｅｎｙｌａｌｃｏｈｏｌ）、アラキジルアルコール、イソオクタデカノール及びイソヘキサデカノールといった脂肪族アルコール、例えばレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール及びその誘導体、ステアリン酸グリセリル、パルミチン酸ソルビタン、ステアリン酸ソルビタン等の油脂類といった乳化剤、例えばアボカドオイル、アーモンドオイル、ババスオイル（ｂａｂａｓｓｕｏｉｌ）、ボラージオイル、ツバキ油等の自然由来の脂肪及び油脂類、例えばセラミド、コレステロール、脂肪酸、フィトスフィンゴシン、レシチン等の脂質組成物、例えばプロパンジオール等の溶剤、及び純水を添加することで製造可能である。

軟膏形式の組成物は、例えば軟化剤、乳化剤及びワックス、例えばマイクロクリスタリンワックス、パラフィン、セレシンワックス（ｃｅｒｅｓｉｎ）、蜜蝋、鯨蝋、ワセリン等を添加することで製造可能である。

また、本発明は、当該組成物を用いてアトピー性皮膚炎を治療又は緩和するための薬剤を製造する方法を提供する。本稿で使用する「治療又は緩和」とは、患者が薬剤を使用した際に、疾病の経過又は症状が停止又は遅延することをいう。

図１は、マウスの体重変化を群別に示している。図２は、マウスの耳の厚み変化を群別に示している。図３は、マウスの耳の重量変化を群別に示している。図４は、マウスの耳の写真を群別に示している。図５は、マウスの耳の組織切片を群別に示す図である。図６は、マンゴスチン果皮のアルコール抽出物についてのＨＰＬＣクロマトグラフである。

実施例１：医薬組成物の製造
マンゴスチンの果皮を取り、５０〜９５％まで果皮を乾燥させてから溶剤（水又は１０〜９５％のアルコール）で抽出し、濃縮することでマンゴスチン果皮抽出物を取得した。

マンゴスチン果皮の外果皮と内果皮を分離し、それぞれを５０〜９５％まで乾燥してから溶剤（水又は１０〜９５％のアルコール）で抽出し、濃縮することでマンゴスチン果皮の外果皮抽出物及びマンゴスチン果皮の内果皮抽出物を取得した。

マンゴスチン果皮のアルコール及び水抽出物、マンゴスチン果皮の内果皮・外果皮のアルコール及び水抽出物を、それぞれ濃度の異なるクリーム又は軟膏として製造した。

実施例２：動物実験
実験動物には８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（楽斯科生物科技（ＢｉｏＬＡＳＣＯ）社から購入）を使用した。体重は２５〜２８ｇであり、飼育室に入れる前に動物部屋の獣医師により１週間の検疫を実施した。動物は計２７匹を３匹ごとに９群に分けた。飼育部屋は温度２１±２℃、湿度３０〜７０％に設定し、照明周期は１２時間を明期、１２時間を暗期とした。なお、飼料と水は制限なく供給した。

動物実験では、２−クロロ−１，３，５−トリニトロベンゼン（２−Ｃｈｌｏｒｏ−１，３，５−ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｚｅｎｅ、ＴＮＣＢ）を用い、マウスに対しアトピー性皮膚炎モデルの形成を誘発した。誘発については、アセトンを溶剤として濃度１％のＴＮＣＢを調合し、測定物の投与１週間前にマウスの耳に塗布（１回／２日、体積４ｍｌ／ｋｇ）することで実施した。そして、その１週間後に測定物の投与（１回／１日）を開始した。投与体積は４ｍｌ／ｋｇとし、持続的にＴＮＣＢでマウスを誘発した（１回／２日）。また、軟膏測定物と経口測定物を同時に投与した群については、経口投与量を６０ｍｇ／ｋｇ、体積を１０ｍｌ／ｋｇとした。ＴＮＣＢと測定物を同一日に投与した場合、両者間で互いの影響が減少した。なお、ＴＮＣＢと測定物の投与時間は少なくとも１時間以上の間隔を開けた。実験デザインにあたり、各郡は下表のように分けた。また、０．５％、１％、２％、３％、５％のマンゴスチンクリームは、それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、１２０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇのマンゴスチン果皮抽出物を含有した。

マウスの体重変化と耳の厚みを週に２回測定した。すべての実験動物は、ＴＮＣＢ誘発前、誘発後の測定物投与前及び処分時にそれぞれ採血した。血液は４℃且つ３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離してから血清を取得し、サンプルとして保存した。

すべての動物は測定物を投与してから３週間後に処分した。その際、切り取った耳を写真撮影してから１０％のホルマリン溶液中に保存し、病理切片として観察した。病理観察にはＨＥ染色を用いた（国家動物センターに組織の病理分析を委託）。

データは平均値±標準誤差（ＳＥＭ）で表し、スチューデントのｔ検定で各処理群間の差を比較した。なお、＊印は明らかな差があることを示し、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１、＊＊＊はｐ＜０．００１を表す。

実験結果
体重：ＴＮＣＢでマウスにアトピー性皮膚炎の形成を誘発し、測定物を投与した後、１週目には恐らく不快感からマウスの体重はわずかに低下したが、それ以外は全体的にみて体重に明らかな統計上の差は認められなかった（図１）。

耳の厚み変化：マウス誘発後に各分量の測定物軟膏を投与したところ、測定物の分量が増加するほどマウスの耳の腫れ程度（厚み）に減少がみられた。また、ポジティブコントロール群の薬物（１％酢酸ヒドロコルチゾン（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅａｃｅｔａｔｅ））及び高分量の測定物（５％）を投与した群の抑制率は、モデル群と比較してそれぞれ５２．７％及び４７．３％であった（ｐ＜０．０１）（表２、図２）。

処分後の耳の重量変化：実験終了後にマウスの耳を切り取って重量を測定したところ、測定物の分量が増加するほどマウスの耳の重量が徐々に減少したことがわかった。また、ポジティブコントロール群の薬物（１％酢酸ヒドロコルチゾン）及び高分量の測定物（５％）を投与した群の抑制率は、モデル群と比較してそれぞれ８２．４％及び６９．５％であった（ｐ＜０．０１）。また、２％及び３％の測定物の抑制率についても、それぞれ２８．２％及び２８．９％であった（ｐ＜０．０５）（表２、図３）。

処分後の耳の外観：実験終了後にマウスの耳を切り取って外観を観察したところ、ポジティブコントロール群の薬物（１％酢酸ヒドロコルチゾン）及び高分量（５％）を投与した群は、耳の輪郭に瑕疵がなく、表面の皮屑及び肌理の荒れも比較的軽微であることがわかった（図４）。

組織の病理分析：国家実験動物センターによる病理切片の結果より、ＴＮＣＢで誘発した慢性活動性皮膚炎（Ｃｈｒｏｎｉｃ−ａｃｔｉｖｅＤｅｒｍａｔｉｔｉｓ）の病理変化の深刻度は、極めて軽度（１級）、軽度（２級）、中度（３級）、中程度に深刻（４級）、極めて深刻（５級）の５段階に分けられた。結果、溶剤コントロール群、０．５％群及び２％群の病理変化の平均深刻度は４．６７級、１％群及び２％＋ＰＯ６０ｍｇ／ｋｇ群の病理変化の平均深刻度は５級、３％群の平均深刻度は４．３３級、ポジティブコントロール群の薬物（１％酢酸ヒドロコルチゾン）の平均深刻度は３級、５％群の平均深刻度は２．６７級であった（表３、図５）。

マンゴスチン果皮の内果皮・外果皮抽出物の分析：国家実験動物センターによる病理切片の結果より、ＴＮＣＢで誘発した慢性活動性皮膚炎（Ｃｈｒｏｎｉｃ−ａｃｔｉｖｅＤｅｒｍａｔｉｔｉｓ）の病理変化の深刻度は、極めて軽度（１級）、軽度（２級）、中度（３級）、中程度に深刻（４級）、極めて深刻（５級）の５段階に分けられた。結果、外果皮の効果は内果皮の効果よりも良好であることがわかった（表４）。

実施例３：血清分析
マウスの処分時に血清を保管し、ＭＡＧＰＩＸ分析器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）及びＭＣＹＴＯＭＡＧ試薬アッセイキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＵＳＡ）を用いて、操作マニュアルにしたがい血清中の生化学的指標（ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦ−α）を分析した。

アトピー性皮膚炎モデルにおいて、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１５及びＭＣＰ−１は著しく増加したが、マンゴスチン果皮抽出物によってこれら指標の上昇を抑制可能であると分析された。なお、マンゴスチン果皮の外果皮抽出物による抑制は、それぞれ１１１．７％、７７．１％、１００％、２４％、１６．１％であった。また、マンゴスチン果皮の内果皮抽出物による指標の抑制は、それぞれ９７．０％、９２．８％、６５．６％、８２．７％、２７％であった。結果、マンゴスチン果皮は炎症に関わるサイトカインであるＩＬ−１又はＴＮＦαを抑制するのではなく、免疫抑制によって関連のホルモンを調節することでアトピー性皮膚炎を抑制可能であることがわかった。即ち、ステロイド薬物の作用モデルと同様に、一部の免疫システムを抑制することでアトピー性皮膚炎に作用可能であった。ＩＬ−１０指標については、マンゴスチン果皮の外果皮抽出物は果皮の内果皮抽出物よりも明らかに優れており、ＩＬ−１０指標を完全に抑制可能であった。ＩＬ−１０はＴ_Ｈ２ルートの抗体産生において重要なサイトカインである。そのため、アトピー性皮膚炎に対するマンゴスチン果皮の外果皮抽出物の作用は、マンゴスチン果皮の内果皮抽出物よりも大きいことになる。このほか、マンゴスチン果皮の作用モデルはステロイド薬物に類似してはいるが、ＩＬ−１５指標に関しては、ステロイドがその産生を抑制可能であるのに対し、マンゴスチン果皮の外果皮は顕著に作用した。このことから、マンゴスチン果皮の外果皮抽出物の作用はステロイドに比べて選択的であり、免疫システム全体に作用するわけではないことが示された。以上から明らかなように、マンゴスチン果皮の外果皮抽出物と内果皮抽出物の組成及び作用メカニズムは完全に同一ではなかった。

上記実施例の結果より、本発明の組成物はアトピー性皮膚炎に対し顕著な治療効果を有することが明らかとなった。

実施例４：マンゴスチン果皮アルコール抽出物の高速液体クロマトグラフ分析
高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を用い、マンゴスチン果皮アルコール抽出物のケミカル・フィンガープリントを分析した。マンゴスチン果皮のアルコール抽出物を３００ｍｇ±１ｍｇ取り、１００ｍＬのメスフラスコに投入して希釈液（Ｄｉｌｕｅｎｔ）で１００ｍＬに定容した後、完全に溶解するまで少なくとも６０ｍｉｎ超音波振動させた。その後、室温で静置して温度を戻し、底部の油脂状物質を均一に転倒混合してから、１００ｍＬのメスフラスコから溶液を２ｍＬ取り出して２０ｍＬのメスフラスコに移した。そして、希釈液（Ｄｉｌｕｅｎｔ）で２０ｍＬまで定容してから、０．４５μｍのＰＶＤＦ濾過膜で濾過した。

ＰＤＡ検出器及び自動サンプラを備えたＡＧＩＬＥＮＴ／１１００シリーズＨＰＬＣシステムを用い、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）分析を実施した。分析過程において、ＨＰＬＣカラム（ＣＯＳＭＯＳＩＬＭＳ−ＩＩ，５ｕｍ，４．６×２５０ｍｍ，Ｗａｔｅｒｓ）の温度は３０℃に維持した。また、１０ＬのサンプルをＨＰＬＣシステムに投入した。アセトニトリル−水−０．２％リン酸洗浄排液システム（ＡＣＮ／Ｈ_２Ｏ＝７２／２８（ｖ／ｖ），ｗ／０．２％Ｈ_３ＰＯ_４）を用い、１．０ｍｌ／ｍｉｎの流速でケミカル・フィンガープリント分析を実施した。また、測定波長をＵＶ２４０ｎｍとしてピーク値を検出した。図６は、マンゴスチン果皮アルコール抽出物のＨＰＬＣケミカル・フィンガープリント分析を示す。この結果より、マンゴスチン果皮のアルコール抽出物は以下の滞留時間のＨＰＬＣピークを有することがわかった（表６）。

Claims

アトピー性皮膚炎治療薬を製造するための組成物の用途であって、当該組成物は有効量のマンゴスチン果皮抽出物を含有する用途。
当該マンゴスチン果皮抽出物は、マンゴスチン果皮の水抽出物及び／又はマンゴスチン果皮のアルコール抽出物である請求項１に記載の用途。
当該マンゴスチン果皮は、マンゴスチン果皮の外果皮及び／又はマンゴスチン果皮の内果皮である請求項１に記載の用途。
当該マンゴスチン果皮は、マンゴスチン果皮の外果皮である請求項１に記載の用途。
当該マンゴスチン果皮抽出物は、αマンゴスチン（α−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）及びγマンゴスチン（γ−ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）を含有する請求項１に記載の用途。
組成物は更に賦形剤を含み、当該賦形剤の割合は１〜１０％である請求項１に記載の用途。
当該組成物は、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１５又はＭＣＰ−１の増加を抑制可能である請求項１に記載の用途。
当該組成物は、非経腸経胃製剤である請求項１に記載の用途。
当該非経腸経胃製剤は、外用製剤である請求項１に記載の用途。
当該有効量は、２０〜２００ｍｇ／ｋｇである請求項１に記載の用途。