KR20140075316A - 칠면초 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 또는 약학 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 칠면초 추출물을 유효 성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증성 조성물에 관한 것으로 더욱 상세하게는 본 발명의 조성물은 상피세포인 HeLa 세포에 있어서 LPS-유발 유도성 질소 산화물 합성(iNOS) mRNA 발현 및 NO 생산을 완전히 약화시킬 수 있으므로 효율적인 항염증성 화장료 또는 약학 조성물로 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

칠면초 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 또는 약학 조성물{Cosmetic or pharmaceutical composition comprising extract of Suaeda japonica}

본 발명은 칠면초 추출물을 유효 성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증성 조성물에 관한 것으로 더욱 상세하게는 본 발명의 조성물은 상피세포인 HeLa 세포에 있어서 LPS-유발 유도성 질소 산화물 합성(iNOS) mRNA 발현 및 NO 생산을 완전히 약화시킬 수 있으므로 효율적인 항염증성 화장료 또는 약학 조성물로 효과적으로 사용될 수 있다.

피부에 나타나는 염증 반응은 여러 현상으로 나타나는데, 주로 세균과 같은 외부 물질의 침입과 외부로부터 손상으로부터 생체를 보호하려는 생리적인 현상이다. 염증과 관계되는 대표적인 피부 트러블의 형태로는 아토피와 여드름 등이 있다. 특히, 아토피에 의한 상처는 세균감염이 일어나게 되어 염증이 주로 발생한다. 아토피의 문제는 2차 감염 및 초항원 독소 (사이토카인)이다. 아토피 환자의 80~90%는 상처난 피부에 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)과 연쇄상구균(Streptococcus pyogenes)의 감염이 될때 anti-staphylococcus IgE가 생성되는데 T-cell을 자극하는 초항원 독소 에 의해 유발된다. 초항원 독소는 항원제시세포를 통하여 T-cell를 선택적으로 자극하여 인터루킨-1과 TNF-alpha를 생산되어 여러 세포에 초항원독소를 분비하여 염증을 일으키게 된다. 즉, 초항원 독소는 인터루킨-4와 인터루틴-5의 분비를 촉진하여 IFN-gamma의 분비는 저해하고, IgE의 생성을 촉진시킨다. 이러한 IgE에 의하여 호염구에서 히스타민이라는 물질이 분비되어 아토피 피부염이 더욱 악화된다.

최근에는 피부 자극 및 염증의 생성을 줄일 수 있는 방법에 관한 세포신호전달 연구가 활발히 진행되고 있으며, 지금까지의 연구 결과로는 신경세포에서 분비되는 물질 P(substance P) 등의 신경 펩타이드나 자극에 의해 조직이나 혈장에서 활성화되는 브라디키닌과 같은 키닌 등에 의해 또는 COX 경로에 의해 형성된 다양한 사이토카인, 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2, 이하 ‘PGE2’로 칭함) 등이 부종 형성과 혈관 확장에 관여하여 염증과 통증의 원인으로 제시되었다. 이에 따라, 항염제로서는 물질 P를 비롯한 신경 펩타이드 길항제, 브라드키닌 길항제, COX 억제제 등이 이용되어 왔으나, 지금까지 알려진 항염제는 피부에 대한 안전성 면에서나, 제형에 포함시킬 때의 안정성 면에서 대부분 문제점을 안고 있어 그 사용이 제한적이다.

리포폴리사카라이드(LPS)는 생체 및 시험관내 연구에 있어서 적극적인 모델 염증자극제로서 널리 사용되어 왔다. 이전의 연구에 의하면, LPS는 상피세포를 자극하여 유도성 질소 산화물 합성(iNOS), NO 및 인터류킨(IL)-1, IL-6 및 종양 괴사 인자 (TNF-α) 등의 사이토카인류를 생산하는 것이 제안되었다(Gayle DA, Ling Z, Tong C, Landers T, Lipton JW, Carvey PM. Lipopolysaccharide (LPS)-induced dopamine cell loss in culture: roles of tumor necrosis factor-alpha, interleukin-1beta, and nitricoxide. Brain Res Dev Brain Res 2002;133:27-35.).

관련 선행특허로 대한민국특허공개번호 제 10-2009-0085844호는 약용식물 추출물을 포함하는 피부 염증 완화용 화장료조성물에 관한 것으로, 스트렙토컬론 주벤타스(Streptocaulon juventas) 외 12종의 약용 식물 추출물을 함유함으로써 산화 질소(NO) 매개 염증 및 레티노이드에 의한 피부자극 및 염증을 완화시키는 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공하고, 산화질소(NO) 매개 염증과 관련된 피부 질환을 예방할 수 있고, 레티노이드 자극 및 염증으로부터 피부를 보호하고, 염증성 매개분자의 발현을 조절하여 레티노이드에 의한 피부 자극을 완화할 수 있다고 기재되었다.

본 발명은 상기 필요성에 의하여 안출된 것으로서 본 발명의 목적은 피부에 대한 안전성 및 항염 효과가 우수한 피부 염증 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 피부에 대한 안전성 및 항염 효과가 우수한 항 염증 용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명은 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 화장학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 염증 완화 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 추출물은 알코올 또는 에틸아세테이트 추출물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

또 본 발명은 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 화장학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 완화 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또 본 발명은 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증용 약학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 칠면초를 에탄올로 추출한 후 상기 에탄올 추출물을 정제한 후 용매 분획중 에틸 아세테이트 분획을 얻는 단계를 포함하는 항염증용 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 칠면초 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 0.01 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 화장품의 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태를 갖는 화장품으로 제형화 될 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 칠면초 추출물을 함유하는 화장품 이외에도 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 여고, 스프레이 또는 콘실 스틱(Conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다.

또한, 포말(Foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장품으로서의 제형은 칠면초 추출물에 추가로 지방물질, 유기 용매, 용해제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(Foaming agent), 방향제,계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명 조성물의 상기 피부 염증 개선용 화장료 조성물의 제형은 피부외용연고, 유연화장수, 영양화장수, 수렴화장수, 영양크림, 립스틱, 파운데이션, 메이크업베이스, 파우더, 마사지크림, 아이크림, 에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 샴푸, 린스, 탈모제, 팩, 비누, 보디로션, 보디크림, 보디오일, 보디에센스, 에멀젼, 헤어토닉, 스프레이 및 오일젤로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 등의 제형을 포함한다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물에 있어서, 상기 약학적 조성물은 선택된 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제제화 할 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보에이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제로서는 피부 외용제가 포함된다. 본 발명의 조성물을 피부 외용제로 하는 경우, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 로션, 연고, 겔, 크림,패취 또는 분무제의 제형으로 제조할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 성인의 경우 칠면초 추출물을 1일 1회 0.01㎍/kg/day~100㎍/kg/day, 바람직하게는 0.01㎍/kg/day~10㎍/kg/day의 용량으로 투여할 수 있다. 이때, 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회에 나누어 투여할 수도 있다.

이하 본 발명을 설명한다.

본 발명자들은 칠면초 추출물에 대한 항염증 효과를 규명하고자, LPS 자극 동안 상피세포의 활성화에 대한 칠면초 추출물의 잠재적인 항염증 효과를 탐색한 결과, 이들이 유도성 질소 산화물 합성(iNOS) 및 NO 생산을 완전히 약화시킬 수 있으므로 효율적인 항염증질환의 치료제로 효과적으로 사용될 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명은 천연염생식물 칠면초(七面草, Suaeda japonica)를 이용한 피부 염증 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 건조된 칠면초를 70% 에탄올에서 침적하여 여과한 후, 감압농축하고 헥산, 에틸 아세테이트를 이용하여 얻어지는 에틸 아세테이트 분획물이 자유 라디칼 소거효과, 활성산소 소거 효과 효과를 나타내는 항산화 활성을 가지는 추출용매가 피부 염증 개선용 화장료 조성물이다. 본 발명에 의한 피부 염증 개선용 화장료 조성물은 피부에 안전하게 작용하면서 피부 트러블 완화 효과인 우수한 항염 효과를 제공한다.

이하, 본 발명에 관하여 상세하게 설명한다.

본 발명은 피부 염증 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 피부에 대해 안전성, 흡수율 등이 우수하고, 자극 및 염증에 따른 피부 트러블을 효과적으로 개선시킬 수 있다.

상기 화장료 조성물은 칠면초 추출물을 유효성분으로 포함한다. 본 발명에 의한 혼합물의 추출물은 항염 효과 및 피부 트러블 개선 효과가 우수하고, 피부에 안전하게 적용될 수 있다.

칠면초(七面草, Suaeda japonica)는 명아주과(Chenopodiaceae)에 속하는 일년생 초본식물로 Salicornia 및 Altriplex와 더불어 높은 염분 농도에서 생장할 수 있는 대표적인 내염성 식물로, 한국 서해안 조간대에 대단위로 분포하고 있다. 칠면초는 갯벌이 발달한 우리나라에 무수히 자생하는 염생생물로 간척지 농업에서 대체작물로 활용이 가능하므로 안정적인 원료의 수급이 가능하다는 잇점이 있다.

칠면초는 고염습 지역에서 생육이 가능할 뿐 아니라 천연미네랄을 다량 함유하고 있어 다른 생물들과는 다른 생물학적 이용 가능성이 높은 2차 대사산물이 풍부할 것이므로 기능성 소재로서의 활용 가능성이 있으나 이에 관한 연구는 거의 이루어지지 않고 있는 실정이다.칠면초를 활용한 생산물은 거의 없으며, 칠면초에 함유된 생리활성물질의 생체효용성과 생체내 효과를 이용한 새로운 기능성 제품은 생산되지 않고 있다.

칠면초 추출물이 항염증성 시약으로 사용될 수 있는지를 찾아내기 위하여, 본 발명자들은 상피세포 작용을 억제하는 세포 및 분자 상의 메카니즘을 연구하였다.

본 발명자들은 처음으로 칠면초 추출물이 HeLa 상피세포에 있어서 상피세포 활성 및 LPS-유발 TNF-α, iNOS 발현 및 NO 생산을 억제할 수 있음을 발견하였다. 상피세포의 활성화는 염증성 사이토카인류 및 NO를 방출하고, 다양한 자극원에 의해 활성화된 상피세포로부터의 과도한 NO 및 사이토카인 생산은 독성을 가질 수 있으며 세포 치사를 매개할 수 있음이 제시된 바 있다. 염증성 질환의 실험 모델에 있어서 가장 널리 사용되는 LPS는 전염증성 사이토카인류의 상당한 상승과 이어지는 NO 방출과 함께 상피세포의 활성화를 유도한다.

이들 이전의 연구에 일치되게, 본 발명자들의 결과는 상당히 증가된 NO 수준을 나타내었고(도 1 참조), TNF-α 등의 사이토카인을 현저히 유발하였으며 (도 5 참조), 칠면초 추출물 전처리는 HeLa 상피세포에 있어서 NO, 및 TNF-α 생산을 상당히 완화시켰다(도 1, 4 및 5 참조). 이들 결과로부터, 칠면초 추출물이 LPS-유도 상피세포 활성화에 대하여 항염증성 작용을 갖는 것이 명백하다.

본 발명에 의한 피부 염증 개선용 및 완화 등의 효과를 지닌 조성물은 피부에 대하 부작용없이 안전하게 사용될 수 있고, 피부트러블을 완화시킬 수 있는 우수한 항염 효과를 제공할 수 있다.

도 1은 칠면초 추출물의 기본분획 과정을 요약한 도면;
도 2는 LPS-활성화시킨 HeLa 상피세포에 있어서 NO 생산에 미치는 칠면초 추출물의 효과를 나타내는 그래프 도면;
도 3은 농도 의존적으로 칠면초 추출물에 대한 MTT 세포독성시험;
도 4는 ESR에 DPPH 방법에 의한 칠면초 추출물의 항산화 효과를 나타내는 그래프 도면;
도 5는 HeLa 세포에 있어서 iNOS, Cox-2 및 Prostaglandin-2의 LPS-유도 단백질 발현에 미치는 칠면초 추출물의 효과를 나타내는 그래프 도면;및
도 6은 배양된 HeLa 세포에 있어서 사이토카인 TNF-α에 미치는 칠면초 추출물의 억제 효과를 나타내는 그래프 도면을 나타낸다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

본 발명의 실시예에서 사용되는 대장균(Escherichia coli) 111:B4로 부터의 LPS는 시그마사(Sigma, St. Louis, Missouri, USA). 로부터 구입하였다. 안티-액틴, 안티-iNOS, 안티-COX-2 및 안티-플라스타글란딘 항체들은 Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, California, USA)로부터 구매하였다.

실시예 1: 칠면초 에탄올 추출물 제조

경동시장에서 구입한 건조 시킨 칠면초 100 g 을 시료 무게 10배의 70% 에탄올(ethanol)을 이용하여 상온에서 침적시키고 여과한 후, 감압 농축하여 70% 에탄올 추출물 9.38 g 을 수득하였다.

실시예 2:에틸 아세테이트 분획 제조

용매 분획중 ethyl acetate 분획을 다양한 조건의 HPLC로 분석하면서 단일 분획을 취하고자 하였다. 기본 분획 process 는 도 1과 같다. 추출후 컬럼정제하고 ethyl acetate 분획한 시료는 다시 silica column을 사용하여 좀 더 정제하였다. 모아진 분획물은 감압증류하여 용매를 제거하고 다시 분취용 HPLC 로 반복하여 분획을 모아 사용하였다(도 1 참조).

NO는 NOS 패밀리(family) 아이소자임에 의해 발생하여 L-아르기닌을 L-시트룰린 및 NO로 전환시키는 것으로 알려져 있다(참조문헌: Nathan C. Inducible nitric oxide synthase: what difference does it make? J Clin Invest 1997;100:2417-2423.). iNOS 레벨은 상피세포에서 정상적으로 낮으나, iNOS는 LPS 처리를 포함하는 다양한 자극원에 응답하여 고도로 상승되게 조절될 수 있다.

일부 초항원 독소 또는 LPS는 iNOS의 상승-조절을 유도하고, 이어지는 상피세포에서 NO 생산을 유도하는 반면, iNOS를 직접 억제할 경우 LPS-매개 상피세포의 활성화가 효율적으로 감소되었다(참조문헌: Hald A, Lotharius J. Oxidative stress and inflammation in Parkinson's disease: is there a causal link? Exp Neurol 2005;193:279-290.).

본 발명자들은 80 ug/ml 칠면초 추출물이 HeLa 세포에 있어서 LPS-유발 iNOS 단백질 발현 및 NO 생산을 완전히 약화시킬 수 있음을 밝혀내었다 (도 2, 5참조).

축적된 결과들에 의하면 iNOS 및 많은 염증성 사이토카인류가 NF-B를 포함하는 전자 인자들에의해 조절됨을 나타낸다(참조 문헌: Christman JW, Blackwell TS, Juurlink BH. Redox regulation of nuclear factor kappa B:therapeutic potential for attenuating inflammatory responses. Brain Pathol 2000;10:153-162.).

결론적으로, 이러한 연구 결과는 상피세포에 있어서 항염 효과를 가지며, 칠면초 추출물이 NO 생산 및 HeLa 상피세포에 있어서 LPS에 의해 유발되는 iNOS 단백질 발현과 TNF-α의 분비가 을 억제하였음을 나타낸다. 칠면초 추출물의 작용 기전이 완전히 밝혀지지는 않았으나, 상기 결과는 칠면초 추출물이 항염증성 화장료 조성물이 될 수 있음을 의미한다.

실험예 1: 칠면초 추출물의 급성 독성 실험

6 내지 7주령 된 비설치류 비글견을 대상으로 본 발명의 칠면초 추출물을 경구 투여하여 24시간 내의 개체 사망율을 조사하였으며, 이때 암컷은 6 내지 8㎏인 개체를, 수컷은 7 내지 9㎏인 개체를 각각 8마리 사용하였다. 그 결과, 5g/kg 까지 죽은 개체가 발생하지 않아, 본 발명의 칠면초 추출물은 kg당 5g까지도 급성독성을 관찰할 수 없을 만큼 안전하므로, 칠면초 추출물의 세포 독성은 다른 임상적으로 이용되는 천연물 추출물에 비하여 매우 낮다.

실험예 2:산화 질소 에세이

칠면초 추출물이 HeLa 상피세포에서 LPS-유도 NO 생산을 억제하는지의 여부에 대하여 알아보고자 시험을 하였다. NO의 생산은 배양 배지 중의 질산염의 축적에 의해 측정하였다. 세포 상층액을 LPS 처리 24 시간 후에 수집하여 동일 용적의 Griess 시약 (1% 술파닐아마이드, 0.1% 나프틸에틸렌디아민 디하이드로클로라이드 및 2.5% 인산)과 혼합하였다. 흡광도는 플레이트 판독기(VersaMax; Molecular Devices, USA). 를 사용하여 540 nm에서 판독하였다. 질산 나트륨을 표준으로 사용하여 질산염의 농도를 계산하여 M으로 나타내었다.

NO 생산에 대한 칠면초 추출물의 효과를 결정하기 위하여, HeLa 세포들을 칠면초 추출물을 4개의 다른 투여량(10, 20, 40, 80 ug/ml)으로 30 분 동안 처리하고, LPS (1 ug/ml)를 첨가한 후, 18 시간 후에 질산염의 농도를 배양배지 중에서 측정하였다. LPS 첼린지에 앞서 칠면초 추출물로 전처리한 배양물 중의 NO의 양은 각각 50% (20 ug/ml 칠면초 추출물) 및 95% (80 ug/ml 칠면초 추출물) 감소하였다(도 2 참조).

칠면초 추출물은 HeLa 상피세포에 있어서 농도-의존 방식으로 NO의 LPS-유도 생산을 상당히 감소시켰고, 모든 값은 3회의 독립적인 실험의 평균±SEM을 나타냈다. *p<0.05 및 **LPS 단독에 비하여 p<0.01.

본 발명의 시험 데이터는 평균±SEM으로 나타냈다. 데이터는 먼저 일방향분산분석(one-way factorial analysis of variance, ANOVA)를 사용하여 분석하였다. 이어서, Student's t-test 또는 Turkey's test를 수행하여 처리된 시료와 비교하였다. p<0.05가 유의한 것으로 판단하였다.

세포 생존능 분석 결과 세포 증식이나 세포독성이 본 연구에서 상기 농도의 LPS 또는 칠면초 추출물의 실험적 처리에 의해 영향을 받지 않고 세포가 오히려 증식되었다 (도 3 참조)

실험예 3: DPPH법을 이용한 자유라디칼 소거 효과 측정

칠면초로부터 추출한 에틸아세테이트 분획에서 DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성을 분석한 결과 항산화 활성이 다른 천연물 보다 높았음을 알 수 있었다 (도. 4). 도 4의 right panel은 DPPH 라디칼의 소거능을 ESR signal로 나타낸 것이다.

그림 4의 결과에서와 같이 칠면초로부터 에틸아세테이트로 순획 추출물은 농도의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 증가함을 나타내었으며 그 중 40 ug/ml이 가장 높은 활성을 보였다. 그 IC₅₀ 값은 8.5 ug/ml로 판명되었다.

실험예 4:칠면초 추출물의 효능 분석

웨스턴 블롯 분석

iNOS, COX-2와 Prostaglandin-2 단백질의 발현은 16 시간 LPS-자극시킨 세포에서 웨스턴 블롯 분석 에 의해 평가하였다 (도 5). 칠면초 추출물 전처리는 iNOS의 LPS-유도 상승 조절을 농도 의존적으로 상당히 억제하였다. 상대 농도계 밀도는 미처리 대조군의 값에 대한 비율로 평가하였다. 또한 도 5에 나타낸 바와 같이, INOS, Cox2 및 Prostaglandin-2의 LPS-유도 생산에 대한 칠면초 추출물의 억제 효과는 상당하였다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 칠면초 추출물 전처리는 iNOS 단백질 발현을 감소를 유도하였다. 농도계 분석에 의하면 LPS 처리전에 칠면초 추출물(10 ug/ml)으로 전처리한 배양물에 있어서 iNOS 단백질 레벨이 각각 82%(10 ug/ml 칠면초 추출물)감소하였음을 나타낸다.

효소면역분석 (ELISA)

HeLa 배양물 중의 TNF-a 의 단백질 수준은 상업적인 ELISA 키트 (R&D Systems, USA)를 제조원의 지시에 따라 측정하였다. TNF-α의 양은 배양 상층액을 사용하여 결정하였다. 450 nm에서의 흡광도는 플레이트 판독기에서 판독하고 사이토카인은 pg/ml로 나타내었다.

HeLa 세포에 있어서 칠면초 추출물 및 LPS의 처리 후에 TNF-α 단백질 생산의 조정 능력(modulation)을 조사하기 위하여 ELISA 분석을 수행하고, 그 결과를 도 6에 나타내었다. 24 시간 자극 동안 LPS 및 칠면초 추출물에 대한 HeLa 세포의 반응을 ELISA에 의해 정량화하였다. 칠면초 추출물은 LPS-자극 HeLa 세포 모두에서 IL-1 및 TNF-a 생산을 상당히 감소시켰다. 값은 4회의 독립적인 실험의 평균±SEM으로 나타냈다. *LPS 단독에 비하여 p<0.05.

한편 도 6에 나타낸 바와 같이 염증성 초항원 독소인 TNF-알파도 농도의존적으로 일관적으로 감소하였다.

이상에서 살펴 본 바와 같이, 본 발명의 칠면초 추출물을 포함하는 조성물은 HeLa 세포에 있어서 LPS-유발 유도성 질소 산화물 합성(iNOS) mRNA 발현 및 NO 생산을 완전히 약화시킬 수 있고, 또한 염증 단백질인 COX-2와 Prostaglandin-2를 약화시킬 수 있어 효율적인 항염증성 화장료 조성물로 효과적으로 사용될 수 있다.

Claims (8)

1. 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 화장학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 염증 완화 및 개선용 화장료 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 알코올 또는 에틸아세테이트 추출물인 것을 특징으로 하는 염증 완화 및 개선용 화장료 조성물.
3. 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 화장학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 완화 및 개선용 화장료 조성물.
4. 제 3항에 있어서, 상기 추출물은 알코올 또는 에틸아세테이트 추출물인 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 완화 및 개선용 화장료 조성물.
5. 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증용 약학 조성물.
6. 제 5항에 있어서, 상기 추출물은 알코올 또는 에틸아세테이트 추출물인 것을 특징으로 하는 항염증용 약학 조성물.
7. 유효 성분으로 칠면초 추출물을 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 아토피성 피부염 예방 및 치료용 약학 조성물.
8. 칠면초를 에탄올로 추출한 후 상기 에탄올 추출물을 정제한 후 용매 분획중 에틸 아세테이트 분획을 얻는 단계를 포함하는 항염증용 조성물의 제조방법.

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