JP2018511326A5

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Publication number: JP2018511326A5
Application number: JP2017551164A
Authority: JP
Filing date: 2016-03-31
Publication date: 2019-05-09
Anticipated expiration: 2036-03-31

Description

ＦＬＩＰＲＴｅｔｒａアッセイにおいて３０ｎＭ以下のＩＣ_５０値でＮａｖ１．７を阻害するプロトキシン−ＩＩ変異体の属アミノ酸配列を示す。残基の番号付けは、配列番号１の野生型プロトキシン−ＩＩに従う。属配列番号：４０３。ＱＰａｔｃｈアッセイにおけるＮａｖ１．７及びＮａｖ１．６阻害に対するＩＣ_５０値と、ＱＰａｔｃｈアッセイにおいて得られるＩＣ_５０（Ｎａｖ１．６）／ＩＣ_５０（Ｎａｖ１．７）の比によって計算した各変異体の選択性とを示す。ＳＥ：標準誤差。ＱＰａｔｃｈアッセイにおけるＮａｖ１．７及びＮａｖ１．６阻害に対するＩＣ_５０値と、ＱＰａｔｃｈアッセイにおいて得られるＩＣ_５０（Ｎａｖ１．６）／ＩＣ_５０（Ｎａｖ１．７）の比によって計算した各変異体の選択性とを示す。ＳＥ：標準誤差。ＦＬＩＰＲＴｅｔｒａアッセイにおいて３０ｎＭ以下のＩＣ_５ _０値でＮａｖ１．７を阻害し、Ｎａｖ１．６と比べて選択性が３０倍超のプロトキシン−ＩＩ変異体の配列及び属配列を示す。各変異体の選択性は、ＱＰａｔｃｈアッセイにおいて得られるＩＣ_５０（Ｎａｖ１．６）／ＩＣ_５０９ａｖ１．７）の比によって計算された。残基の番号付けは、配列番号１の野生型プロトキシン−ＩＩに従う。ＦＬＩＰＲＴｅｔｒａアッセイにおいて３０ｎＭ以下のＩＣ_５ _０値でＮａｖ１．７を阻害し、Ｎａｖ１．６と比べて選択性が３０倍超のプロトキシン−ＩＩ変異体の配列及び属配列を示す。各変異体の選択性は、ＱＰａｔｃｈアッセイにおいて得られるＩＣ_５０（Ｎａｖ１．６）／ＩＣ_５０９ａｖ１．７）の比によって計算された。残基の番号付けは、配列番号１の野生型プロトキシン−ＩＩに従う。ＦＬＩＰＲＴｅｔｒａアッセイにおいて３０ｎＭ以下のＩＣ_５ _０値でＮａｖ１．７を阻害し、Ｎａｖ１．６と比べて選択性が３０倍超のプロトキシン−ＩＩ変異体の配列及び属配列を示す。各変異体の選択性は、ＱＰａｔｃｈアッセイにおいて得られるＩＣ_５０（Ｎａｖ１．６）／ＩＣ_５０９ａｖ１．７）の比によって計算された。残基の番号付けは、配列番号１の野生型プロトキシン−ＩＩに従う。マウスにおける、ＣＦＡ誘発熱痛覚過敏に対するＮＶ１Ｄ３０３４（ＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨ）（配列番号７８）の有効性を示し、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験において、ＣＦＡ注入前（ＣＦＡ前）及びＣＦＡ注入後（０）及びペプチド投与後の１日目（１）における足逃避潜時の測定により評価した。^＊＊＊Ｐ＜０．００１対ＰＢＳ、双方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発熱痛覚過敏におけるＮＶ１Ｄ３０３４（ＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨ）（配列番号７８）の有効性を示し、ペプチド投与後の１日目の各投与におけるパーセントＭＰＥ（最大可能効果（maximum possible effect））（ＭＰＥ％）として表わす。^＊Ｐ＜０．０５対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発熱痛覚過敏に対するＮＶ１Ｄ３３６８（ＮＶ１Ｄ３３６８−ＯＨ）（配列番号１９８）の有効性を示し、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験において、ＣＦＡ注入前（ＣＦＡ前）及びＣＦＡ注入後（０）及びペプチド投与後の１日目（１）における足逃避潜時の測定により評価した。^＊＊Ｐ＜０．０１及び^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、双方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発熱痛覚過敏におけるＮＶ１Ｄ３３６８（ＮＶ１Ｄ３３６８−ＯＨ）（配列番号１９８）の有効性を示し、ペプチド投与後の１日目の各投与におけるパーセントＭＰＥ（ＭＰＥ％）として表わす。^＊Ｐ＜０．０５及び^＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発熱痛覚過敏に対するＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨ（配列番号５６）の有効性を示し、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験において、ＣＦＡ注入前（ＣＦＡ前）、ＣＦＡ注入後（０）、及びペプチド投与後の１日目（１）における足逃避潜時の測定により評価した。^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、双方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発熱痛覚過敏におけるＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨ（配列番号５６）の有効性を示し、ペプチド投与後１日目の各投与におけるパーセントＭＰＥ（ＭＰＥ％）として表わす。^＊＊＊Ｐ＜０．００１及び^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発触覚異痛症に対するＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨ（配列番号５６）の有効性を示す。後足の触覚閾値、ＣＦＡ前（ＣＦＡ前）、ＣＦＡ後（０）、及びペプチド投与後の１日目（１）。^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、双方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおける、ＣＦＡ誘発触覚異痛症に対するＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨ（配列番号５６）の有効性を示し、ペプチド投与後１日目のパーセントＭＰＥ（ＭＰＥ％）として表わす。^＊＊＊Ｐ＜０．００１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。ＣＦＡ投与前後及びペプチド投与後の様々な時点におけるＨａｒｇｒｅａｖｅｓ試験での足逃避潜時の測定により評価される、マウスＣＦＡモデルにおける、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨを介した熱痛覚過敏の逆転の時間経過を示す。^＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、双方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。斜線領域は化合物送達時間（０〜２４ｈｒ）を示す。ＣＦＡの投与前後及びペプチド投与後の様々な時点における触覚閾値の測定により評価される、マウスＣＦＡモデルにおける、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨを介した触覚異痛症の逆転の時間経過を示す^＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、双方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。斜線領域は化合物送達時間（０〜２４ｈｒ）を示す。マウスホットプレート試験において、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨにより著しい無痛覚が生じたことを示す。熱逃避潜時の評価を、５０及び５５℃においてポンプ埋め込み前及び後に行った。ポンプ埋め込みは、制御ＰＢＳグループにおける潜時に対して影響はなかった。ポンプ後１日目に、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨによって治療されたマウスは、ＰＢＳグループと比べて長時間に渡って潜時を示した。^＊Ｐ＜０．０５及び^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。マウスにおいて、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨ前処理が、動物をカラギーナン誘発熱痛覚過敏から保護したことを示す。足逃避潜時の測定を、ポンプ前、及びポンプ後１日目に足底内カラギーナン注射前に行った。潜時の再測定を、カラギーナンの２、３、及び４時間後に行った。野生型プロトキシン−ＩＩのＮＭＲ構造による、その表面表現を示す。左側に示す疎水性表面は、残基Ｗ５、Ｍ６、Ｗ７、Ｌ２３及びＷ２４を含む。右側に示す選択性表面は、残基Ｓ１１、Ｅ１２、Ｋ１４、Ｅ１７、Ｇ１８、Ｌ２９及びＷ３０を含む。残基の番号付けは、配列番号１に従う。ラットのテールフリック試験における、プロトキシン−ＩＩ変異体６３９５５９１８（配列番号４２２）の、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を示す。ペプチド投与後の指定された時間に、温度的刺激に対する尾逃避反応潜時を測定した。ラットのテールフリック試験における、プロトキシン−ＩＩ変異体６３９５５９１８（配列番号４２２）の、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を、最初の１２０分のパーセント曲線下面積（ＡＵＣ％）として表す。^＊＊＊Ｐ＜０．００１及び^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。ラットのホットプレート試験（５２．５℃）における、プロトキシン−ＩＩ変異体６３９５５９１８（配列番号４２２）の、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を示す。ホットプレートの侵害受容応答潜時を、ペプチド投与後の指定された時間に測定した。ホットプレート試験における、プロトキシン−ＩＩ変異体６３９５５９１８（配列番号４２２）の、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を、最初の１２０分のパーセント曲線下面積（ＡＵＣ％）として示す。^＊＊＊Ｐ＜０．００１及び^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。ラットのホルマリン試験における、プロトキシン−ＩＩ変異体６３９５５９１８（配列番号４２２）の有効性を示す。ホルマリンのラット後足への注入により、二相性のフリンチ行動が誘発された。フェーズＩ（ホルマリン投与の０〜１０分後）及びフェーズＩＩ（ホルマリン投与の１１〜６０分後）におけるフリンチの総数を自動化装置で測定した。Ｅ）では群サイズが小さかったため、統計処理を行わなかった。ラットのテールフリック試験における、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を示す。ペプチド投与後の指定された時間に、温度的刺激に対する尾逃避反応潜時を測定した。ラットのテールフリック試験における、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を、最初の１２０分のパーセント曲線下面積（ＡＵＣ％）として表す。^＊Ｐ＜０．０５及び^＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。ラットのホットプレート試験（５２．５℃）における、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を示す。ホットプレートの侵害受容応答潜時を、ペプチド投与後の指定された時間に測定した。ラットのホットプレート試験における、ＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を、最初の１２０分のパーセント曲線下面積（ＡＵＣ％）として示す。^＊＊Ｐ＜０．０１及び^＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１対ＰＢＳ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。ホルマリン試験におけるＮＶ１Ｄ２７７５−ＯＨの有効性を示す。ホルマリンのラット後足への注入により、二相性のフリンチ行動が誘発された。フェーズＩ（ホルマリン投与の０〜１０分後）及びフェーズＩＩ（ホルマリン投与の１１〜６０分後）におけるフリンチの総数を自動化装置で測定した。^＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、フェーズＩ、^＊Ｐ＜０．０５対ＰＢＳ、フェーズＩＩ、一方向ＡＮＯＶＡの後にＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較。ラットのテールフリック試験における、ＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を示す。ペプチド投与後の指定された時間に、温度的刺激に対する尾逃避反応潜時を測定した。ラットのテールフリック試験における、ＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を、最初の１２０分のパーセント曲線下面積（ＡＵＣ％）として示す。^＊＊＊Ｐ＜０．００５対ＰＢＳ、ｔ検定。ラットのホットプレート試験（５２．５℃）における、ＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を示す。ホットプレートの侵害受容応答潜時を、ペプチド投与後の指定された時間に測定した。ラットのホットプレート試験における、ＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨの、鞘内（ＩＴ）単回投与後の有効性を、最初の１２０分のパーセント曲線下面積（ＡＵＣ％）として示す。^＊＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、ｔ検定。ホルマリン試験におけるＮＶ１Ｄ３０３４−ＯＨの有効性を表す。ホルマリンのラット後足への注入により、ニ相性のフリンチ行動が誘発された。フェーズＩ（ホルマリン投与の０〜１０分後）及びフェーズＩＩ（ホルマリン投与の１１〜６０分後）におけるフリンチの総数を自動化装置で測定した。^＊Ｐ＜０．０５対ＰＢＳ、フェーズＩ、^＊＊Ｐ＜０．０１対ＰＢＳ、フェーズＩＩ、ｔ検定。ファミリー３のシステインノット毒素ペプチド（上から順に、それぞれ、配列番号７３８〜配列番号７４０、配列番号１、及び配列番号７４１〜配列番号７５５）のアミノ酸アラインメントを示す。

以下で列挙される番号付けされた実施形態を含む、本明細書に開示される本発明の別の実施形態は、配列ＹＣＱＫＷＭＱＴＣＤＳＥＲＫＣＣＥＧＭＶＣＲＬＷＣＫＫＫＬＷ−ＣＯＯＨ（配列番号４２４）を含む単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体であり、残基Ｙ１、Ｓ１１、Ｅ１２、Ｋ１４、Ｅ１７、Ｇ１８、Ｌ２９及び／又はＷ３０は、表１で示される他の任意のアミノ酸又は非天然アミノ酸で置換され、Ｎ末端伸張又はＣ末端伸張を任意に有する。

以下で列挙される番号付けされた実施形態を含む、本明細書に開示される本発明の別の実施形態は、配列ＹＣＱＫＷＭＱＴＣＤＳＥＲＫＣＣＥＧＭＶＣＲＬＷＣＫＫＫＬＬ−ＣＯＯＨ（配列番号４２５）を含む単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体であり、残基Ｙ１、Ｓ１１、Ｅ１２、Ｋ１４、Ｅ１７、Ｇ１８、Ｍ１９、Ｌ２９及び／又はＷ３０は、表１で示される他の任意のアミノ酸又は非天然のアミノ酸で置換され、Ｎ末端伸張又はＣ末端伸張を任意に有する。

Claims

ヒトＮａｖ１．７活性を阻害する単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体であって、Ｗ７Ｑ及びＷ３０Ｌからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、残基の番号付けは配列番号１に従う、単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体であって、約１×１０^−７Ｍ以下のＩＣ_５０値でヒトＮａｖ１．７活性を阻害し、前記ＩＣ_５０値は、ヒトＮａｖ１．７を安定発現するＨＥＫ２９３細胞中に２５×１０^−６Ｍの３−ベラトロイルベラセビンの存在下で、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を用いた膜脱分極アッセイを使用して、ビス−（１，３−ジエチルチオバルビツール酸）トリメチンオキソノールを電子受容体として、かつトリナトリウム８−オクタデシルオキシピレン−１，３，６−トリスルホネートをドナーとして使用して、前記ドナーを３９０〜４２０ｎｍで励起して、ＦＲＥＴを５１５〜５７５ｎｍで測定することによって、測定され、前記プロトキシン−ＩＩ変異体が、Ｗ７Ｑ及び／又はＷ３０Ｌ置換を有し、残基番号付けが配列番号１に従う、単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＣＸ_４Ｘ_５ＷＸ_６ＱＸ_７ＣＸ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２ＣＣＸ_１３Ｘ_１４Ｘ_１５Ｘ_１６ＣＸ_１７ＬＷＣＸ_１８ＫＫＬＸ_１９（配列番号４３２）の配列を含み、
Ｘ_１は、Ｇ、Ｐ、Ａ又は欠失であり；
Ｘ_２は、Ｐ、Ａ又は欠失であり；
Ｘ_３は、Ｓ、Ｑ、Ａ、Ｒ又はＹであり；
Ｘ_４は、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ａ、Ｓ又はＹであり；
Ｘ_５は、Ｋ、Ｓ、Ｑ又はＲであり；
Ｘ_６は、Ｍ又はＦであり；
Ｘ_７は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ又はＱであり；
Ｘ_８は、Ｄ、Ｔ又はアスパラギル−４−アミノブタンであり；
Ｘ_９は、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｉ又はＶであり；
Ｘ_１０は、Ｅ、Ｒ、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｑ、Ｙ又はグルタミル−４−アミノブタンであり；
Ｘ_１１は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ_１２は、Ｋ、Ｑ、Ｓ、Ａ又はＦであり；
Ｘ_１３は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、Ｌ、Ｎ又はグルタミル−４−アミノブタンであり；
Ｘ_１４は、Ｇ、Ｑ又はＰであり；
Ｘ_１５は、Ｍ又はＦであり；
Ｘ_１６は、Ｖ又はＳであり；
Ｘ_１７は、Ｒ、Ｔ又はＮ−ωメチル−Ｌ−アルギニンであり；並びに、
Ｘ_１８は、Ｋ又はＲであり；並びに、
Ｘ_１９は、Ｗ又はＬであり、
Ｎ末端伸張又はＣ末端伸張を任意に有する、
請求項１又は２に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
残基の番号付けが配列番号１に従うときに、前記変異体が、Ｙ１、Ｗ７、Ｓ１１、Ｅ１２、Ｋ１４、Ｅ１７、Ｇ１８、Ｒ２２、Ｌ２９及びＷ３０の１つ又は２つ以上の残基位置で置換を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
配列ＹＣＱＫＷＭＱＴＣＤＳＥＲＫＣＣＥＧＭＶＣＲＬＷＣＫＫＫＬＷ−ＣＯＯＨ（配列番号４２４）を含み、残基Ｙ１、Ｓ１１、Ｅ１２、Ｋ１４、Ｅ１７、Ｇ１８、Ｌ２９及び／又はＷ３０が、
ａ）表１で示される他の任意のアミノ酸；又は、
ｂ）非天然アミノ酸で置換される、
請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
配列ＹＣＱＫＷＭＱＴＣＤＳＥＲＫＣＣＥＧＭＶＣＲＬＷＣＫＫＫＬＬ−ＣＯＯＨ（配列番号４２５）を含み、残基Ｙ１、Ｓ１１、Ｅ１２、Ｋ１４、Ｅ１７、Ｇ１８、Ｍ１９、Ｌ２９及び／又はＷ３０が、
ａ）表１で示される他の任意のアミノ酸；又は、
ｂ）非天然アミノ酸で置換される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
配列番号４２２（ＧＰＹＣＱＫＷＭＱＴＣＤＳＥＲＫＣＣＥＧＭＶＣＲＬＷＣＫＫＫＬＬ−ＣＯＯＨ）のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性のアミノ酸配列を含み、
前記プロトキシン−ＩＩ変異体が、残基番号付けが配列番号１に従うときに、位置７におけるＱ、及び位置３０におけるＱを有する、
請求項１〜６のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＣＱＫＷＭＱＴＣＤＸ_４Ｘ_５ＲＸ_６ＣＣＸ_７Ｘ_８Ｘ_９ＶＣＲＬＷＣＫＫＫＸ_１０Ｘ_１１（配列番号７３７）を含み、
Ｘ_１は、Ｇ、Ｐ、Ａ又は欠失であり；
Ｘ_２は、Ｐ、Ａ又は欠失であり；
Ｘ_３は、Ｓ、Ｑ、Ａ、Ｒ又はＹであり；
Ｘ_４は、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｉ又はＶであり；
Ｘ_５は、Ｅ、Ｒ、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｑ、Ｙ又はグルタミル−４−アミノブタンであり；
Ｘ_６は、Ｋ、Ｑ、Ｓ、Ａ又はＦであり；
Ｘ_７は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、Ｌ、Ｎ又はグルタミル−４−アミノブタンであり；
Ｘ_８は、Ｇ、Ｑ又はＰであり；
Ｘ_９は、Ｍ又はＦであり；
Ｘ_１０は、Ｌ又はＶであり；並びに
Ｘ_１１は、Ｗ又はＬである、
請求項１〜７のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体、請求項１〜５のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
前記Ｎ末端延長部分が、配列番号３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４若しくは３８５のアミノ酸配列を含み、及び／又は前記Ｃ末端延長部分が、配列番号３７４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６若しくは３９７のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
前記Ｎ末端及び／又は前記Ｃ末端伸長が、前記プロトキシン−ＩＩ変異体にリンカーを介して結合される、請求項１〜９のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体
前記リンカーが、配列番号３８３、３９２、３９８、３９９、４００、４０１又は４０２のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
ヒトＮａｖ１．７活性を、約３ｘ１０^−８Ｍ以下のＩＣ_５０値で阻害し、前記ＩＣ_５０値は、ヒトＮａｖ１．７を安定発現するＨＥＫ２９３細胞中に２５ｘ１０^−６Ｍの３−ベラトロイルベラセビンの存在下で、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を用いた膜脱分極アッセイを使用して、ビス−（１，３−ジエチルチオバルビツール酸）トリメチンオキソノールを電子受容体として、かつトリナトリウム８−オクタデシルオキシピレン−１，３，６−トリスルホネートをドナーとして使用して、前記ドナーを３９０〜４２０ｎｍで励起して、ＦＲＥＴを５１５〜５７５ｎｍで測定することによって、測定される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
ヒトＮａｖ１．７活性を、約３×１０^−８Ｍ〜約１×１０^−９ＭのＩＣ_５０値で阻害する、請求項１２に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
実施例３に記載のプロトコルに従いＱＰａｔｃｈ分析を用いてＮａｖ１．７活性を測定したときに、前記変異体が、Ｎａｖ１．７活性を少なくとも２５％阻害する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
アミノ酸配列ＧＰＱＣＸ_１Ｘ_２ＷＸ_３ＱＸ_４ＣＸ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９ＣＣＸ_１０Ｘ_１１ＦＸ_１２ＣＸ_１３ＬＷＣＸ_１４ＫＫＬＬ（配列番号４３３）を含み、
Ｘ_１は、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ａ又はＳであり；
Ｘ_２は、Ｋ、Ｓ、Ｑ又はＲであり；
Ｘ_３は、Ｍ又はＦであり；
Ｘ_４は、Ｔ、Ｓ、Ｒ、Ｋ又はＱであり；
Ｘ_５は、Ｄ又はＴであり、
Ｘ_６は、Ｓ、Ａ又はＲであり、
Ｘ_７は、Ｅ、Ｒ、Ｎ、Ｋ、Ｔ又はＱであり、
Ｘ_８は、Ｒ又はＫであり；
Ｘ_９は、Ｋ、Ｑ、Ｓ又はＡであり；
Ｘ_１０は、Ｅ、Ｑ又はＤであり；
Ｘ_１１は、Ｇ又はＱであり；
Ｘ_１２は、Ｖ又はＳであり；
Ｘ_１３は、Ｒ又はＴであり；並びに
Ｘ_１４は、Ｋ又はＲである、
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
配列番号３０、４０、４４、５２、５６、５９、６５、７８、１０９、１１０、１１１、１１４、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６２、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８０、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８９、１９０、１９３、１９５、１９７、１９９、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２２４、２２６、２２７、２３１、２３２、２４３、２４４、２４５、２４７、２４９、２５２、２５５、２５８、２６１、２６３、２６４、２６５、２６６、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３３２、３３４、３３５、３３６、３３７、３３９、３４０、３４１、３４２、３４６、３５１、３５８、３５９、３６４、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、５７４、５７５、５７６、５７７、５７８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４、６２５、６２６、６２７、６２８、６２９、６３０、６３１、６３２、６３３、６３４、６３５、６３６、６３７、６３８、６３９、６４０、６４１、６４２、６４３、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、６９０、６９１、６９２、６９３、６９４、６９５、６９６、６９７、６９８、６９９、７００、７０１、７０２、７０３、７０４、７０５、７０６、７０７、７０８、７０９、７１０、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７１８、７１９、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３５又は７３６のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
遊離Ｃ末端カルボン酸、アミド、メチルアミド又はブチルアミド基を有する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体。
半減期延長部分に結合された、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体を含む、ポリペプチド。
前記プロトキシン−ＩＩ変異体と、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、アルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）、若しくはＦｃ、又は前記プロトキシン−ＩＩ変異体がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に化学的に結合されているポリペプチドとの融合タンパク質である、請求項１８に記載のポリペプチド。
請求項１〜１７のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
請求項２０に記載の単離されたポリヌクレオチドを含む、ベクター。
請求項２１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
前記単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体を生成する方法であって、請求項２２に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって生成された前記プロトキシン−ＩＩ変異体を回収することとを含む、前記方法。
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の単離されたプロトキシン−ＩＩ変異体又は融合タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
Ｎａｖ１．７を介した痛みを治療するためのものである、請求項２４に記載の医薬組成物。
痛みが、慢性の痛み、急性の痛み、神経障害性疼痛、癌による痛み、侵害受容性の痛み、内臓痛、背痛、術後の痛み、熱痛、幻肢痛、又は炎症状態に付随する痛み、肢端紅痛症（ＰＥ）、発作性高度疼痛症（ＰＥＰＤ）、変形性関節症、リウマチ性関節炎、腰部椎間板切除術、膵炎、線維筋痛、有痛性糖尿病性神経障害（ＰＤＮ）、疹後神経痛（ＰＨＮ）、三叉神経痛（ＴＮ）、脊髄損傷又は多発性硬化症である、請求項２５に記載の医薬組成物。
前記プロトキシン−ＩＩ変異体が、末梢に投与されるものである、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記プロトキシン−ＩＩ変異体が、関節、脊髄、手術創、傷害若しくは外傷部位、末梢神経線維、泌尿生殖器臓器、又は炎症組織に局所的に投与されるものである、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
痛みの治療を必要とする対象における痛みの治療に使用される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体又は融合タンパク質。
痛みが、慢性の痛み、急性の痛み、神経障害性疼痛、癌による痛み、侵害受容性の痛み、内臓痛、背痛、術後の痛み、熱痛、幻肢痛、又は炎症状態に付随する痛み、肢端紅痛症（ＰＥ）、発作性高度疼痛症（ＰＥＰＤ）、変形性関節症、リウマチ性関節炎、腰部椎間板切除術、膵炎、線維筋痛、有痛性糖尿病性神経障害（ＰＤＮ）、疹後神経痛（ＰＨＮ）、三叉神経痛（ＴＮ）、脊髄損傷又は多発性硬化症である、請求項２９に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
前記プロトキシン−ＩＩ変異体が、末梢に投与されるものである、請求項２９又は３０に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。
前記プロトキシン−ＩＩ変異体が、関節、脊髄、手術創、傷害若しくは外傷部位、末梢神経線維、泌尿生殖器臓器、又は炎症組織に局所的に投与されるものである、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載のプロトキシン−ＩＩ変異体。