JP2018509926A5

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Info

Publication number: JP2018509926A5
Application number: JP2017551100A
Authority: JP
Filing date: 2016-04-01
Publication date: 2019-04-25
Anticipated expiration: 2036-04-01

Description

別の実施形態においては、Ｃフローシステムは、すべての転位遺伝因子を除去し、遺伝的安定性を向上し、代謝能を改善し、かつ組換えタンパク質、核酸または小分子などの所望の生成物を生成できるように、遺伝子操作がなされた縮小ゲノム細菌株を接種する。縮小ゲノム細菌は、こうした組換えタンパク質、核酸、または小分子の生成を促進するために、１つ以上のプラスミドまたは他のエピソームもしくはゲノム構造体を含んでもよい。縮小ゲノム細菌株は、米国特許第９，０８５，７６５号、第８，１７８，３３９号、第８，０４３，８４２号及び第６，９８９，２６５号、ならびに国際公開第ＷＯ／２０１３／０５９５９５号に記述されているものなど、遺伝的安定性を向上させるために改良形態を有してもよく、また国際公開第ＷＯ／２０１５／０７３７２０号に記述されているものなど、代謝能を改善するための改良形態を有してよく、それぞれのその全体が参照によって本明細書に援用される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
連続フロー発酵において使用するための器具であって、（１）非誘導状態において縮小ゲノム細胞の第１の集団を培養するためのシード容器であって、流入口及び流出口を有する、シード容器と、（２）誘導状態において縮小ゲノム細胞を培養するための少なくとも１つの生成容器であって、各生成容器が、前記シード容器の前記流出口に接続されている第１の流入口、誘導剤を添加するための第２の流入口、及び流出口を有する、生成容器と、（３）前記シード容器及び生成容器を連結されたケモスタットとして操作し、これにより、前記シード容器の流出が、前記生成容器への流入として用いられる手段と、を備える、器具。
（項目２）
１つ以上の容器においてＥテープレベル監視装置が取り付けられる、項目１に記載の器具。
（項目３）
前記器具を通る流量を調整するために、複数のポンプ及び複数のはかりを備える、マルチ重量測定式供給システム（ｍｕｌｔｉｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃｆｅｅｄｓｙｓｔｅｍ）が取り付けられる、項目１に記載の器具。
（項目４）
前記器具を通る流量を調整するために、複数のポンプ及び１つのはかりを備える、マルチ重量測定式供給システムが取り付けられる、項目１に記載の器具。
（項目５）
複数のソレノイドを有する、１つ以上のポンプ及び１つのはかりを備える、マルチ重量測定式供給システムが取り付けられる、項目１に記載の器具。
（項目６）
散気要素を取り囲み、それと接触する気体不透過性膜と、前記散気要素の長手方向軸線に沿って前記接触面を調節するための手段と、を備える散気システムが取り付けられる、項目１に記載の器具。
（項目７）
生体産物を生成するための連続発酵プロセスであって、少なくとも２つの連続した発酵槽において、生体産物をコードする誘導性発現ベクターを含む縮小ゲノム細菌細胞の集団を培養することを含み、前記それぞれの発酵槽は、独立した連続フローケモスタットとして構成され、前記発酵槽は、培地を備えた第１の発酵槽であって、前記細胞が非誘導条件下で培養される、第１の発酵槽と、前記生体産物を生成するための第２の連続した連続発酵槽であって、誘導剤を含む培地を備え、かつ、前記第２の発酵槽に接種するのに十分な量の、前記第１の発酵槽由来の前記培地を更に備えた、第２の連続した連続発酵槽と、を備え、前記細胞は、前記生体産物を生成するのに好適な条件下で培養され、かつ、前記生体産物は、前記第２の発酵槽から回収される、プロセス。
（項目８）
それぞれの発酵槽は、リン酸塩の送達を他の媒体成分から分離させる二重供給法を用いてグルコース最少塩培地が供給される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記縮小ゲノム細菌細胞は、ＭＤＳ６９ｍｅｔａ ΔｒｅｃＡ細胞である、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記発酵槽は、重量測定的に供給される、項目７または項目９に記載の方法。
（項目１１）
重量測定的供給は、前記発酵槽を通る流量を調節するための、複数のポンプ及び複数のはかりを備える、マルチ重量測定式システムによって達成される、項目９に記載の方法。

Claims

生体産物を生成するための連続発酵プロセスであって、少なくとも２つの連続した発酵槽において、生体産物をコードする誘導性発現ベクターを含む縮小ゲノムＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌細胞の集団を培養することを含み、前記それぞれの発酵槽は、独立した連続フローケモスタットとして構成され、前記発酵槽は、培地を備えた第１の発酵槽であって、前記細胞が非誘導条件下で培養される、第１の発酵槽と、前記生体産物を生成するための第２の連続した連続発酵槽であって、誘導剤を含む培地を備え、かつ、前記第２の発酵槽に接種するのに十分な量の、前記第１の発酵槽由来の前記培地を更に備えた、第２の連続した連続発酵槽と、を備え、前記細胞は、前記生体産物を生成するのに好適な条件下で少なくとも２週間の期間培養され、かつ、前記生体産物は、前記第２の発酵槽から回収される、プロセス。
それぞれの発酵槽は、リン酸塩の送達を他の媒体成分から分離させる二重供給法を用いてグルコース最少塩培地が供給される、請求項１に記載の方法。
前記縮小ゲノム細菌細胞は、ＭＤＳ６９ｍｅｔａ ΔｒｅｃＡ細胞である、請求項１に記載の方法。
前記発酵槽は、重量測定的に供給される、請求項１または請求項３に記載の方法。
重量測定的供給は、前記発酵槽を通る流量を調節するための、複数のポンプ及び複数のはかりを備える、マルチ重量測定式システムによって達成される、請求項３に記載の方法。
前記生体産物は、タンパク質である、請求項１に記載の方法。
前記タンパク質は、Ｃｒｍ１９７、ｒＥＰＡまたはゲルソリンである、請求項６に記載の方法。
連続フロー発酵において使用するための器具であって、（１）非誘導状態において縮小ゲノム細胞の第１の集団を培養するためのシード容器であって、流入口及び流出口を有する、シード容器と、（２）誘導状態において縮小ゲノム細胞を培養するための少なくとも１つの生成容器であって、各生成容器が、前記シード容器の前記流出口に接続されている第１の流入口、誘導剤を添加するための第２の流入口、及び流出口を有する、生成容器と、（３）前記シード容器及び生成容器を連結されたケモスタットとして操作し、これにより、前記シード容器の流出が、前記生成容器への流入として用いられる手段と、を備える、器具。
１つ以上の容器においてＥテープレベル監視装置が取り付けられる、請求項８に記載の器具。
前記器具を通る流量を調整するために、複数のポンプ及び複数のはかりを備える、マルチ重量測定式供給システム（ｍｕｌｔｉｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃｆｅｅｄｓｙｓｔｅｍ）が取り付けられる、請求項８に記載の器具。
前記器具を通る流量を調整するために、複数のポンプ及び１つのはかりを備える、マルチ重量測定式供給システムが取り付けられる、請求項８に記載の器具。
複数のソレノイドを有する、１つ以上のポンプ及び１つのはかりを備える、マルチ重量測定式供給システムが取り付けられる、請求項８に記載の器具。
散気要素を取り囲み、それと接触する気体不透過性膜と、前記散気要素の長手方向軸線に沿って前記接触面を調節するための手段と、を備える散気システムが取り付けられる、請求項８に記載の器具。
前記連続発酵槽のそれぞれにおけるＥ．ｃｏｌｉ培養物は、少なくとも約２００の６００ｎｍでの光学密度（ＯＤ６００）で安定化されている、請求項１に記載の方法。
前記縮小ゲノムＥ．ｃｏｌｉは、転位遺伝因子を欠くように遺伝子操作されている、請求項１に記載の方法。