JP2018083816A - Ｔｅｔｒａｇａｌｎａｃおよびペプチドを含む新規なコンジュゲートと、オリゴヌクレオチドの送達方法 - Google Patents

Abstract

【課題】送達効率、細胞取り込み及び／又はエンドソーム脱出を効果的に行うことができる新たな単一の化学的コンジュゲートの提供。【解決手段】１）オリゴヌクレオチド；２）式（Ｉ）の１個又は複数個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド；任意に、３）１個又は複数個のリンカー；４）特定の配列を有する１個又は複数個のペプチド；及び任意に、５）１個又は複数個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質及び／又はマスキング剤を含む、モジュール組成物。【選択図】なし

Description

治療を目的としたオリゴヌクレオチドの全身送達に着目した科学的取り組みが進行して
いる。オリゴヌクレオチド送達に注目した３つのアプローチとして、１）脂質ナノ粒子（
ＬＮＰ）への封入、２）ポリマーコンジュゲーションおよび３）単一の化学的コンジュゲ
ーションが挙げられる。単一の化学的コンジュゲーションは典型的には、標的化リガンド
または脂質または可溶化基またはエンドソーム溶解ペプチドもしくは細胞膜透過ペプチド
、および／または、オリゴヌクレオチドに結合したこれらの２つまたは４つすべての組み
合わせを利用する。リンカーは、コンジュゲートのほか、他の官能基に存在してもよい。
単一の化学的コンジュゲートは公知であり、オリゴヌクレオチドの結合は、オリゴヌクレ
オチドの５’末端もしくは３’末端、両末端あるいは内部で起こる。国際公開第２００５
／０４１８５９号パンフレット、国際公開第２００８／０３６８２５号パンフレットおよ
び国際公開第２００９／１２６９３３号パンフレットを参照されたい。

かなりの量の文献的証拠から、オリゴヌクレオチド送達の主な障害が細胞取り込みおよ
びエンドソーム脱出であることという仮説が裏付けられている。送達効率、細胞取り込み
および／またはエンドソーム脱出を効果的に行うことができる新たな単一の化学的コンジ
ュゲートが依然として求められている。

本明細書に開示されたｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃおよびペプチドを含む単一の化学的コン
ジュゲートは、効果的な送達効率、細胞取り込みおよび／またはエンドソーム脱出という
驚くべき特性を有する。

一実施形態では、本明細書に開示されたモジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖
オリゴヌクレオチド；２）下記式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の、同一でもあるい
は異なっていてもよい１個または複数個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド：

（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ^１Ｒ^２−または−ＮＲ^１−であり、Ｒ^１およびＲ^２
は各々独立に水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；ｎは１、２、３ま
たは４であり；かつ

による結合は結合点を示す）；任意に、３）同一でもあるいは異なっていてもよい１個ま
たは複数個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択
される１個または複数個のペプチド；および任意に、５）１個または複数個の標的化リガ
ンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。一実施形態
では、Ｒ^１およびＲ^２は各々独立に水素、メチルおよびエチルからなる群から選択される
。別の実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は各々水素である。

一実施形態では、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは下記式（ＩＩ）を有し、式中、Ｘ
、Ｒ^１、Ｒ^２およびｎは、上記で定義した通りである。別の実施形態では、ｔｅｔｒａＧ
ａｌＮＡｃリガンドは下記式（ＩＩＩ）を有し、式中、Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２およびｎは、上記
で定義した通りである。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド
；２）同一でもあるいは異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１
〜８個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−また
は−ＮＨ−であり；ｎは１、２、３または４である）；３）同一でもあるいは異なってい
てもよい１〜２４個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独
立に選択される１〜８個のペプチド；および任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可
溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。ｔｅｔｒａＧａｌＮ
Ａｃリガンドは式（ＩＩ）を有し、式中、Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２およびｎは、上記で定義した通
りである。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同
一でもあるいは異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１〜８個の
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−または−ＮＨ
−であり；ｎは１、２、３または４である）；３）同一でもあるいは異なっていてもよい
１〜２４個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択
される１〜８個のペプチド；および任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、
薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、リンカーは、リボース環の異なる２’位
、ならびに／または、オリゴヌクレオチドもしくはｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および
／または５’位末端でオリゴヌクレオチドもしくはｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
／またはペプチドは、任意にリンカーを介してオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結
合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
／またはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、オリゴヌクレオチ
ドもしくはｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／または５’位末端でオリゴヌクレオチ
ドもしくはｓｉＲＮＡに結合しており；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または
ペプチドは、任意にリンカーを介してオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結合してい
る。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の
Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＣＨ_２−であり；ｎは１、２または３である。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の
Ｘは−Ｏ−または−ＣＨ_２−であり、ｎは１または２である。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の
Ｘは−Ｏ−であり、ｎは１または２である。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の
Ｘは−ＣＨ_２−であり、ｎは１または２である。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、組成物は、同一でもあるいは異なってい
てもよい１〜６個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド、またはより具体的には１〜４個の
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドを含む。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、組成物は、１〜６個のペプチド、または
より具体的には１〜４個のペプチドを含む。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉ
ＲＮＡのガイド鎖またはパッセンジャー鎖にリボース環の異なる２’位で結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉ
ＲＮＡのガイド鎖またはパッセンジャー鎖に異なる３’位末端および／または５’位末端
で結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉ
ＲＮＡのガイド鎖およびパッセンジャー鎖の両方にリボース環の異なる２’位、ならびに
／または、異なる３’位末端および／もしくは５’位末端で結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつペプチドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡのガイド鎖または
パッセンジャー鎖にｓｉＲＮＡのリボース環の異なる２’位で結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつペプチドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡのガイド鎖または
パッセンジャー鎖に異なる３’位末端および／または５’位末端で結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつペプチドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡのガイド鎖および
パッセンジャー鎖の両方にリボース環の異なる２’位、ならびに／または、異なる３’位
末端および／もしくは５’位末端で結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
ペプチドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡの同じ鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
ペプチドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡの異なる鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
ペプチドは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖にリンカーを
介して結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、リンカーは各々独立に表１から選択され
る。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、リンカーは各々独立に表２から選択され
る。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり；かつ任意選択の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および
／またはマスキング剤は、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖
に結合している。

一実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一でもあるいは
異なっていてもよい、下記式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の１〜８個のｔｅｔｒａＧ
ａｌＮＡｃリガンド：

；３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表１から独立に選択される１〜２４個のリ
ンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択される１〜８個
のペプチド；および、任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善
剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一でもあるい
は異なっていてもよい、式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧａ
ｌＮＡｃリガンド；３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表１から独立に選択され
る１〜１２個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選
択される１〜４個のペプチド；および、任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化
剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ
リガンドおよび／またはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓ
ｉＲＮＡの異なる３’位末端および／もしくは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；
かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチドは、任意にリンカーを介し
てｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態の１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびペプ
チドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡの同じ鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
ペプチドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡの異なる鎖に結合している。

一実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一でもあるいは
異なっていてもよい、式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧａｌ
ＮＡｃリガンド；３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表２から独立に選択される
１〜１２個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表４から独立に選択
される１〜４個のペプチド；および、任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤
、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリ
ガンドおよび／またはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓｉ
ＲＮＡの異なる３’位末端および／もしくは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；か
つｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチドは、リンカーを介してｓｉＲ
ＮＡに結合している。

上記の実施形態の１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびペプ
チドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡの同じ鎖に結合している。

上記の実施形態の１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびペプ
チドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡの異なる鎖に結合している。

末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含むモジュール組成物の非限定的な例を示す。 末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含むモジュール組成物の非限定的な例を示す。 内部コンジュゲーションおよび／または末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含むモジュール組成物の非限定的な例を示す。 内部コンジュゲーションおよび／または末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含むモジュール組成物の非限定的な例を示す。 リンカー（Ｌ−Ｐおよび／またはＬ−Ｇ）を含む各々のヌクレオチド［Ｏ_ｎ］または［Ｏ_ｎ’］の一般的な構造を示す。 Ｂコンジュゲート（Ｅｘ．３）を調製するためのスキーム２を示す。 Ｂコンジュゲート（Ｅｘ．３）を調製するためのスキーム２を示す。 Ｂコンジュゲート（Ｅｘ．４）を調製するためのスキーム２を示す。 Ｂコンジュゲート（Ｅｘ．５）を調製するためのスキーム２を示す。 Ｂコンジュゲート（Ｅｘ．６）を調製するためのスキーム２を示す。 コンジュゲートＢ６−Ｐ３２（Ｅｘ．７）を調製するためのスキーム３を示す。 コンジュゲートＢ８−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．８）を調製するためのスキーム３を示す。 Ｂ９を調製するためのスキーム４を示す。 Ｂ１０−ｓｅｑ３２を調製するためのスキーム４を示す。 Ｂ１１−ｓｅｑ３２を調製するためのスキーム４を示す。 Ｂ−１３−ｓｅｑ１３−ｂ化合物を調製するためのスキーム５を示す。 Ｂ−１３−ｓｅｑ１３−ｂ化合物を調製するためのスキーム５を示す。 Ｂ−１３−ｓｅｑ１３−ｂ化合物を調製するためのスキーム５を示す。 Ｂ−１３−ｓｅｑ１３−ｂ化合物を調製するためのスキーム５を示す。 Ｂ１６−ｓｅｑ３２化合物を調製するためスキーム６を示す。 Ｂ１７−ｓｅｑ３２−ｂ化合物を調製するためのスキーム６を示す。 Ｂ１６−ｓｅｑ３２化合物を調製するためスキーム６を示す。 Ｃ１およびＣ２化合物を調製するためのスキーム７を示す。 Ｃ３化合物を調製するためのスキーム７を示す。 Ｃ４−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム７を示す。 Ｃ６−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム７を示す。 Ｃ７およびＣ８化合物を調製するためのスキーム８を示す。 Ｃ９化合物を調製するためのスキーム８を示す。 Ｃ１０化合物を調製するためのスキーム８を示す。 Ｃ１１−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム８を示す。 Ｃ１２−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム８を示す。 Ｃ１３化合物を調製するためのスキーム９を示す。 Ｃ１３化合物を調製するためのスキーム９を示す。 Ｃ１４−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム９を示す。 Ｃ１５−ｓｅｑ３２−ａ化合物を調製するためのスキーム９を示す。 Ｄ１を調製するためのスキーム１０を示す。 Ｄ３を調製するためのスキーム１０を示す。 Ｄ４を調製するためのスキーム１０を示す。 Ｄ４を調製するためのスキーム１０を示す。 Ｄ５−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム１１を示す。 Ｄ５−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム１１を示す。 Ｄ７−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム１１を示す。 Ｄ７−ｓｅｑ３２化合物を調製するためのスキーム１１を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ化合物を調製するためのスキーム１２を示す。 Ｅ８−ｓｅｑ１３７化合物を調製するためのスキーム１３を示す。 Ｅ８−ｓｅｑ１３７化合物を調製するためのスキーム１３を示す。 Ｅ１０−ｓｅｑ１３７ｅ化合物を調製するためのスキーム１３を示す。 Ｅ１０−ｓｅｑ１３７ｅ化合物を調製するためのスキーム１３を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ化合物を調製するためのスキーム１４を示す。 Ｆ６ｓｅｑ４６３−ｆ化合物を調製するためのスキーム１５を示す。 Ｆ６ｓｅｑ４６３−ｆ化合物を調製するためのスキーム１５を示す。 Ｆ６ｓｅｑ４６３−ｆ化合物を調製するためのスキーム１５を示す。 Ｆ６ｓｅｑ４６３−ｆ化合物を調製するためのスキーム１５を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１６を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１７を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１７を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１７を示す。 Ｇ化合物を調製するためのスキーム１７を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｈ１０−ｓｅｑ３２−ｈ化合物を調製するためのスキーム１９を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｉ１０−ｓｅｑ１６８１−ｆ化合物を調製するためのスキーム２０を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｊ９−ｓｅｑ２６−ｉ化合物を調製するためのスキーム２１を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｋ６ ｓｅｑ７４−ｂ化合物を調製するためのスキーム２２を示す。 Ｌ１１−ｓｅｑ４６３−ｊ化合物を調製するためのスキーム２３を示す。 Ｌ１１−ｓｅｑ４６３−ｊ化合物を調製するためのスキーム２３を示す。 Ｌ１１−ｓｅｑ４６３−ｊ化合物を調製するためのスキーム２３を示す。 Ｌ１１−ｓｅｑ４６３−ｊ化合物を調製するためのスキーム２３を示す。 Ｌ１１−ｓｅｑ４６３−ｊ化合物を調製するためのスキーム２３を示す。 Ｍ４−ｓｅｑ−ｊ化合物を調製するためのスキーム２４を示す。 Ｍ４−ｓｅｑ−ｊ化合物を調製するためのスキーム２４を示す。 Ｍ４−ｓｅｑ−ｊ化合物を調製するためのスキーム２４を示す。 Ｍ４−ｓｅｑ−ｊ化合物を調製するためのスキーム２４を示す。 Ｎ４−ｓｅｑ２８３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２５を示す。 Ｎ４−ｓｅｑ２８３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２５を示す。 Ｎ４−ｓｅｑ２８３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２５を示す。 Ｏ３−ｓｅｑ４６３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２６を示す。 Ｏ３−ｓｅｑ４６３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２６を示す。 Ｏ３−ｓｅｑ４６３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２６を示す。 Ｏ３−ｓｅｑ４６３−ｋ化合物を調製するためのスキーム２６を示す。 Ｐ２−ｓｅｑ−３２−ｋ化合物を調製するためのスキーム２７を示す。 Ｐ２−ｓｅｑ−３２−ｋ化合物を調製するためのスキーム２７を示す。 Ｐ２−ｓｅｑ−３２−ｋ化合物を調製するためのスキーム２７を示す。 Ｐ２−ｓｅｑ−３２−ｋ化合物を調製するためのスキーム２７を示す。 Ｐ２−ｓｅｑ３２−ｍ化合物を調製するためのスキーム２８を示す。 Ｐ２−ｓｅｑ３２−ｍ化合物を調製するためのスキーム２８を示す。 Ｑ３−ｓｅｑ７４−ｂ化合物の調製に使用したスキーム２９を示す。 Ｑ３−ｓｅｑ７４−ｂ化合物の調製に使用したスキーム２９を示す。 Ｑ３−ｓｅｑ７４−ｂ化合物の調製に使用したスキーム２９を示す。 Ｑ３−ｓｅｑ７４−ｂ化合物の調製に使用したスキーム２９を示す。 Ｑ３−ｓｅｑ７４−ｂ化合物の調製に使用したスキーム２９を示す。 Ｑ３−ｓｅｑ７４−ｂ化合物の調製に使用したスキーム２９を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 Ｒ４−ｓｅｑ２７−Ｉ化合物を調製するためのスキーム３０を示す。 ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートを調製するためのスキーム３２を示す。 ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲートを調製するためのスキーム３２を示す。 ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲート１９−１を調製するためのスキーム３３を示す。 ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲート１９−１を調製するためのスキーム３３を示す。 化合物２６を調製するためのスキーム３５を示す。 化合物２６を調製するためのスキーム３５を示す。 化合物２７を調製するためのスキーム３６を示す。 化合物２８を調製するためのスキーム３６を示す。 化合物２８を調製するためのスキーム３６を示す。 コンジュゲート３５を調製するためのスキーム３８を示す。 コンジュゲート３６および３７を調製するためのスキーム３８を示す。 コンジュゲート３８〜４４を調製するためのスキーム３９を示す。 コンジュゲート３８〜４４を調製するためのスキーム３９を示す。 コンジュゲート３８〜４４を調製するためのスキーム３９を示す。 スキーム４０を示し、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃをｓｉＲＮＡにコンジュゲートするための表２の様々なリンカーの例を示す。 化合物および／またはコンジュゲート４６を調製するためのスキーム４１を示す。 化合物および／またはコンジュゲート４６を調製するためのスキーム４１を示す。 化合物および／またはコンジュゲート４７を調製するためのスキーム４１を示す。 化合物および／またはコンジュゲート４７を調製するためのスキーム４１を示す。 化合物および／またはコンジュゲート４８を調製するためのスキーム４１を示す。 化合物および／またはコンジュゲート４９を調製するためのスキーム４２を示す。 化合物および／またはコンジュゲート５０を調製するためのスキーム４２を示す。 化合物および／またはコンジュゲート５１を調製するためのスキーム４２を示す。 表６に使用した表記法の説明を目的とした一般的な記載を示したスキーム４３を示す。

本明細書に開示されるのは、一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド；下記式（Ｉ）、
（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の、同一でもあるいは異なっていてもよい１個または複数個の
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド；

（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ^１Ｒ^２−または−ＮＲ^１−であり、Ｒ^１およびＲ^２
は各々独立に水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；ｎは１、２、３ま
たは４であり；かつ

による結合は結合点を示す）；および同一でもあるいは異なっていてもよい１個または複
数個のペプチドを含む単一の化学的コンジュゲートである。他の官能基、たとえば標的化
リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤が任意に存在す
る。一実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は各々独立に水素、メチルおよびエチルからなる群
から選択される。別の実施形態では、Ｒ^１およびＲ^２は各々水素である。

一実施形態では、オリゴヌクレオチドは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。別の
実施形態では、ｓｉＲＮＡは一本鎖ｓｉＲＮＡである。別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは
二本鎖ｓｉＲＮＡである。

本明細書に開示されたｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃを使用すると、モジュール組成物を特定
の細胞に誘導することによりオリゴヌレオチドまたはｓｉＲＮＡが効果的に送達される。
たとえば、標的化リガンドは、標的細胞の表面上の分子と特異的または非特異的に結合し
、リガンド−ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインターナリゼーションを促進することができ
る。

ペプチドは、エンドソーム溶解剤、細胞膜透過剤および／または膜融合剤として機能し
得る。さらに、ペプチドは、カチオン性、両性イオン、中性、アニオン性を有し得る。ｔ
ｅｔｒａＧａｌＮＡｃおよびペプチドの両方をモジュール組成物に組み込むと、オリゴヌ
レオチドまたはｓｉＲＮＡの送達効率をさらに改善することができる。

リンカーは、各ペプチドとオリゴヌクレオチドとの間に存在しても、あるいは各ｔｅｔ
ｒａＧａｌＮＡｃとオリゴヌクレオチドとの間に存在してもよい。リンカーは、リボース
環の異なる２’位、ならびに／または、オリゴヌクレオチドの３’位末端および／もしく
は５’位末端でオリゴヌクレオチドに結合している。

一実施形態では、モジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド；
２）下記式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の、同一でもあるいは異なっていてもよい
１個または複数個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ
Ｈ_２−または−ＮＨ−であり；ｎは１、２、３または４であり；かつ

による結合は結合点を示す）；任意に、３）同一でもあるいは異なっていてもよい１個ま
たは複数個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択
される１個または複数個のペプチド；および任意に、５）１個または複数個の標的化リガ
ンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド
；２）同一でもあるいは異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１
〜８個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−また
は−ＮＨ−であり；ｎは１、２、３または４である）；３）同一でもあるいは異なってい
てもよい１〜２４個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独
立に選択される１〜８個のペプチド；および任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可
溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同
一でもあるいは異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１〜８個の
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−または−ＮＨ
−であり；ｎは１、２、３または４である）；３）同一でもあるいは異なっていてもよい
１〜２４個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択
される１〜８個のペプチド；および任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、
薬物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含む。

上記の実施形態の１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／ま
たはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、オリゴヌクレオチドも
しくはｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／または５’位末端でオリゴヌクレオチドも
しくはｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
／またはペプチドは、任意にリンカーを介してオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結
合している。一実施形態では、リンカーが存在する。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
／またはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、オリゴヌクレオチ
ドもしくはｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／または５’位末端でオリゴヌクレオチ
ドもしくはｓｉＲＮＡに結合しており；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または
ペプチドは、リンカーを介してオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、リ
ンカーを介してオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結合しており、リンカーは、リボ
ース環の異なる２’位でオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、リ
ンカーを介してオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡに結合しており、リンカーは、オリ
ゴヌクレオチドの異なる３’位末端および／または５’位末端でオリゴヌクレオチドまた
はｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＣＨ_２−で
ある。別の実施形態では、Ｘは−Ｏ−または−ＣＨ_２−である。別の実施形態では、ｎは
１、２または３である。別の実施形態では、Ｘは−Ｏ−であり、ｎは１または２である。
別の実施形態では、Ｘは−ＣＨ_２−であり、ｎは１または２である。別の実施形態では、
Ｘは−Ｏ−であり、ｎは１である。なお別の実施形態では、Ｘは−ＣＨ_２−であり、ｎは
１である。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
一本鎖である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは二本鎖である
。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、組成物は１〜６個のｔｅｔｒａＧａｌＮ
Ａｃリガンドを含む。別の実施形態では、組成物は１〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリ
ガンドを含む。別の実施形態では、組成物は１〜２個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド
を含む。なお別の実施形態では、組成物は１個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドを含む
。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、組成物は１〜６個のペプチドを含む。別
の実施形態では、組成物は１〜４個のペプチドを含む。別の実施形態では、組成物は１〜
２個のペプチドを含む。なお別の実施形態では、組成物は１個のペプチドを含む。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、リボース環の異なる２’位でガイド
鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、異なる３’位末端および／または５
’位末端でガイド鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、リボース環の異なる２’位でパッセ
ンジャー鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、異なる３’位末端および／または５
’位末端でパッセンジャー鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは、リボース環の異なる２’位、ならび
に／または、異なる３’位末端および／もしくは５’位末端でガイド鎖およびパッセンジ
ャー鎖の両方に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ペプチドは、リボース環の異なる２’位でガイド鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ペプチドは、異なる３’位末端および／または５’位末端でガイド鎖に結
合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ペプチドは、リボース環の異なる２’位でパッセンジャー鎖に結合してい
る。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ペプチドは、異なる３’位末端および／または５’位末端でパッセンジャ
ー鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、異なる３’
位末端および／もしくは５’位末端でガイド鎖およびパッセンジャー鎖の両方に結合して
いる。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびペプチドは、リンカーを介して同
じ鎖または異なる鎖に結合している。一実施形態では、リンカーは各々独立選択される表
１である。別の実施形態では、リンカーは各々独立選択される表２である。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびペプチドは同じ鎖に結合している
。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびペプチドは異なる鎖に結合してい
る。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、任意選択の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
たはマスキング剤は、同じ鎖または異なる鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡは
二本鎖であり、任意選択の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
たはマスキング剤は、リンカーを介して同じ鎖または異なる鎖に結合している。一実施形
態では、リンカーは各々独立に表１から選択される。別の実施形態では、リンカーは各々
独立に表２から選択される。

一実施形態では、モジュール組成物は、１）一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一
でもあるいは異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１〜８個のｔ
ｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−または−ＮＨ−
であり；ｎは１、２、３または４である）；３）同一でもあるいは異なっていてもよい１
〜２４個のリンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択さ
れる１〜８個のペプチド；および任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、薬
物動態改善剤、脂質および／またはマスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガン
ドおよび／またはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓｉＲＮ
Ａの異なる３’位末端および／もしくは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔ
ｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチドは、任意にリンカーを介してｓｉ
ＲＮＡに結合している。一実施形態では、リンカーが存在する。別の実施形態では、Ｘは
−Ｏ−、−Ｓ−または−ＣＨ_２−であり、ｎは１、２または３である。別の実施形態では
、Ｘは−Ｏ−または−ＣＨ_２−であり、ｎは１または２である。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一でもあるい
は異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１〜６個のｔｅｔｒａＧ
ａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＣＨ_２−であり；ｎは１、２ま
たは３である）；３）同一でもあるいは異なっていてもよい１〜１８個のリンカー；４）
同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択される１〜６個のペプチド；
および任意に、５）１〜６個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および
／またはマスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチド
は、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓｉＲＮＡの異なる３’位末端およ
び／もしくは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガ
ンドおよび／またはペプチドは、任意にリンカーを介してｓｉＲＮＡに結合している。一
実施形態では、リンカーが存在する。別の実施形態では、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−Ｃ
Ｈ_２−であり、ｎは１または２である。別の実施形態では、リンカーは表１から独立に選
択される。別の実施形態では、リンカーは表２から独立に選択される。別の実施形態では
、４）のペプチドは表４から独立に選択される。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一でもあるい
は異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧ
ａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＣＨ_２−であり；かつ、ｎは１
または２である）；３）同一でもあるいは異なっていてもよい１〜１２個のリンカー；４
）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択される１〜４個のペプチド
；および任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質およ
び／またはマスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチ
ドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓｉＲＮＡの異なる３’位末端お
よび／もしくは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリ
ガンドおよび／またはペプチドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡに結合している。一実施
形態では、Ｘは−Ｏ−または−ＣＨ_２−であり、ｎは１または２である。別の実施形態で
は、リンカーは表１から独立に選択される。別の実施形態では、リンカーは表２から独立
に選択される。別の実施形態では、ペプチドは表４から独立に選択される。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）同一でもあるい
は異なっていてもよい、下記式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の１〜４個のｔｅｔｒａ
ＧａｌＮＡｃリガンド：

；３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表１から独立に選択される１〜１２個のリ
ンカー；４）同一でもあるいは異なっていてもよい、表３から独立に選択される１〜４個
のペプチド；および任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤
、脂質および／またはマスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／ま
たはペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓｉＲＮＡの異なる３
’位末端および／もしくは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔｅｔｒａＧａ
ｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡに結合してい
る。

別の実施形態では、モジュール組成物は、１）二本鎖ｓｉＲＮＡ；２）式（ＩＶ）、（
Ｖ）または（ＶＩ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド；３）同一でもあるい
は異なっていてもよい、表２から独立に選択される１〜１２個のリンカー；４）同一でも
あるいは異なっていてもよい、表４から独立に選択される１〜４個のペプチド；および任
意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／または
マスキング剤を含み；ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／またはペプチドは、リボ
ース環の異なる２’位、ならびに／または、ｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／もし
くは５’位末端でｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよ
び／またはペプチドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡに結合している。

上記の実施形態の１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／ま
たはペプチドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔｅｔｒａＧａｌＮ
Ａｃリガンドおよび／またはペプチドは同じ鎖に結合している。

上記の実施形態のもう１つのサブセットでは、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび
／またはペプチドは、リンカーを介してｓｉＲＮＡに結合しており；かつｔｅｔｒａＧａ
ｌＮＡｃリガンドおよびペプチドは異なる鎖に結合している。

カートゥーン（ｃａｒｔｏｏｎ）により本発明を説明するには、本発明は、オリゴヌク
レオチド（［Ｏ_１］［Ｏ_２］［Ｏ_３］．．．．．．［Ｏ_ｎ］）と、１個または複数個のｔ
ｅｔｒａＧａｌＮＡｃ（単数または複数）リガンド（Ｇ）と、１個または複数個のリンカ
ー（単数または複数）（Ｌ）と、１個または複数個のペプチド（単数または複数）（Ｐ）
と、１つまたは複数の任意選択の脂質（単数または複数）（Ｘ）、１個または複数個の標
的化リガンド（単数または複数）（Ｘ）および／または１つまたは複数の可溶化基（単数
または複数）（Ｘ）とを含むモジュール組成物を特徴とする。

一実施形態では、モジュール組成物は下記式を有し得る：
Ｇ−Ｌ−［Ｏ_１］［Ｏ_２］［Ｏ_３］．．．．．．［Ｏ_ｎ］−Ｌ−Ｐ。

別の実施形態では、モジュール組成物は下記式を有し得る：
Ｐ−Ｌ−［Ｏ_１］［Ｏ_２］［Ｏ_３］．．．．．．［Ｏ_ｎ］−Ｌ−Ｇ。

末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含むモジュール組成物の
非限定的な例を図１に示す。

末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含むモジュール組成物の
非限定的な例を図２に示す。

内部コンジュゲーションおよび／または末端コンジュゲーションを有する二本鎖オリゴ
ヌクレオチドを含むモジュール組成物の非限定的な例を図３Ａおよび図３Ｂに示す。

これらの例は、説明としてのみ使用する。当業者であれば、所望の要素をパッセンジャ
ー鎖およびガイド鎖に配置するのに種々の並べ替えが存在することを理解するであろう。

オリゴヌクレオチドには、何個のリンカーが、したがって何個のペプチドが結合してい
てもよい。リンカー数の範囲は１〜１６である。より好ましいリンカー数の範囲は１〜１
２、あるいはより具体的には１〜８、あるいはさらに詳細には１〜４である。

ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド数の範囲は、１〜８である。より好ましいｔｅｔｒａ
ＧａｌＮＡｃリガンド数の範囲は１〜６、あるいはより具体的には１〜４、あるいはさら
に詳細に１〜２である。

ペプチド数の範囲は、１〜８である。より好ましいペプチド数の範囲は１〜６、あるい
はより具体的には１〜４、あるいはさらに詳細には１〜２である。

２本の鎖は、それぞれｎヌクレオチドおよびｎ’ヌクレオチドを含む。ｎおよびｎ’の
数は、同一でもあるいは異なっていてもよい。その数は８〜５０の範囲の整数である。好
ましくは、その数は１２〜２８の範囲の整数である。一層好ましくは、その数は１９〜２
１の範囲の整数である。

一例を挙げると、リンカー（Ｌ−Ｐおよび／またはＬ−Ｇ）を含むヌクレオチド［Ｏ_ｎ
］または［Ｏ_ｎ’］は各々、図４に示すような一般的な構造を有する。

各ヌクレオチドでは、１）Ｅ＝酸素（Ｏ）または硫黄（Ｓ）；２）修飾されていてもあ
るいは修飾されていなくもよい塩基＝Ａ、Ｕ、ＧまたはＣ；３）Ｄはリボース環とリンカ
ーＬとの間の接合点であり、Ｄ＝酸素（Ｏ）、硫黄（Ｓ、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）_２）、
窒素（Ｎ−Ｒ、式中、Ｒ＝Ｈ、アルキル、Ｌ−ＰもしくはＬ−Ｘ）、炭素（ＣＨ−Ｒ、式
中、Ｒ＝Ｈ、アルキル、Ｌ−ＰもしくはＬ−Ｘ）、またはリン（Ｐ（Ｏ）ＲまたはＰ（Ｏ
）（ＯＲ）、式中、Ｒ＝アルキル、Ｌ−Ｐ、またはＬ−Ｘ）である。好ましくは、Ｄ＝酸
素（Ｏ）である。

２個のヌクレオチド［Ｏ_ｎ−１］および［Ｏ_ｎ］または［Ｏ_ｎ’−１］および［Ｏ_ｎ’
］は、ホスホジエステル結合またはチオ−ホスホジエステル結合により連結されている。

オリゴヌクレオチドが二本鎖オリゴヌクレオチドである場合、「Ｇ−Ｌ」、「Ｐ−Ｌ」
ならびに脂質、標的化リガンドおよび／または可溶化基は、同じ鎖上に位置してもあるい
は異なる鎖上に位置してもよい。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および「Ｐ−Ｌ」は同じ鎖上にある。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および「Ｐ−Ｌ」はパッセンジャー鎖上にある。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および「Ｐ−Ｌ」はガイド鎖上にある。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および「Ｐ−Ｌ」は異なる鎖上に位置する。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」はパッセンジャー鎖上にあるのに対し、「Ｐ−Ｌ
」はガイド鎖上にある。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および「Ｐ−Ｌ」は異なる鎖上にあるが、二本鎖
オリゴヌクレオチドの同じ末端上にある。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および「Ｐ−Ｌ」は異なる鎖上にあり、かつ二本
鎖オリゴヌクレオチドの逆末端上にある。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」はパッセンジャー鎖あるいはガイド鎖の複数の末
端に位置していてもよく、「Ｐ−Ｌ」はパッセンジャー鎖およびガイド鎖の残りの末端に
位置していてもよい。

いくつかの実施形態では、１個の「Ｇ−Ｌ」および２個以上の「Ｐ−Ｌ」がオリゴヌク
レオチドに存在する。

いくつかの実施形態では、２個以上の「Ｇ−Ｌ」および２個以上の「Ｐ−Ｌ」がオリゴ
ヌクレオチドに存在する。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが二本鎖オリゴヌクレオチドであり、か
つ複数の「Ｇ−Ｌ」および／または「Ｐ−Ｌ」が存在する場合、そうした複数の「Ｇ−Ｌ
」成分および／または「Ｐ−Ｌ」はすべて二本鎖オリゴヌクレオチドの一方の鎖に存在し
ても、あるいは両方の鎖に存在してもよい。

複数の「Ｇ−Ｌ」成分および／または「Ｐ−Ｌ」が存在する場合、それらはすべて同一
でも、あるいは異なっていてもよい。

いくつかの実施形態では、「Ｇ−Ｌ」および／または「Ｐ−Ｌ」は内部ヌクレオチド上
のみ（すなわちオリゴヌクレオチドの３’末端および５’末端を除く）にある。

別の態様では、本発明は、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡを細胞に送達する方法
を含む。本方法は、（ａ）本明細書に開示されたモジュール組成物を用意または取得する
こと；（ｂ）細胞をモジュール組成物と接触させること；および（ｃ）モジュール組成物
を細胞内に移行させることを含む。

本方法は、たとえばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡを必要とすると判定された被
検体を処置するため、インビトロ、エキソビボまたはインビボで行うことができる。前記
オリゴヌクレオチドを必要とする被検体は、遺伝子（単数または複数）、たとえば、障害
に関連する遺伝子の発現をダウンレギュレートするまたはサイレンシングさせることを必
要とする被検体、たとえば、ヒトである。

一態様では、本発明は、１個または複数個の遺伝子の発現を阻害する方法を提供する。
本方法は、１つまたは複数の細胞を本発明の有効量のオリゴヌクレオチドと接触させるこ
とを含み、有効量は、１個または複数個の遺伝子の発現を抑制する量である。この方法は
、インビトロ、エキソビボまたはインビボで行うことができる。

本発明の方法および組成物、たとえば、本明細書に記載のモジュール組成物は、当該技
術分野において公知のどのようなオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡと共に使用しても
よい。さらに、本発明の方法および組成物は、当該技術分野において公知のどのような疾
患または障害の処置、どのような被検体、たとえば任意の動物、任意の哺乳動物、たとえ
ば任意のヒトの処置に使用してもよい。さらに当業者であれば、本発明の方法および組成
物は、遺伝子（単数または複数）のダウンレギュレーションまたはサイレンシングから恩
恵を受けると考えられる任意の疾患の処置に使用することができることも認識するであろ
う。

本発明の方法および組成物、たとえば、本明細書に記載のモジュール組成物は、本明細
書に記載のどのような用量および／もしくは製剤、あるいは当該技術分野において公知の
どのような用量または製剤で使用してもよい。当業者であればさらに、本明細書に記載の
投与経路に加えて他の投与経路を使用して本発明のモジュール組成物を投与してもよいこ
とも理解するであろう。

オリゴヌクレオチド
「オリゴヌクレオチド」は、本明細書で使用する場合、二本鎖または一本鎖での非修飾
または修飾ＲＮＡまたはＤＮＡである。修飾ＲＮＡの例には、非修飾ＲＮＡよりヌクレア
ーゼ分解に対して抵抗性が高いものがある。さらなる例として、２’糖修飾、塩基修飾、
一本鎖オーバーハング、たとえば３’一本鎖オーバーハングの修飾、または、特に一本鎖
の場合、１つまたは複数のリン酸基または１つまたは複数のリン酸基のアナログを含む５
’修飾を有するものが挙げられる。オリゴヌクレオチドの例およびより詳細な説明は、本
明細書に援用する国際公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することがで
きる。

一実施形態では、オリゴヌクレオチドはアンチセンス、ｍｉＲＮＡ、ペプチド核酸（Ｐ
ＮＡ）、ポリ−モルホリノ（ＰＭＯ）またはｓｉＲＮＡである。好ましいオリゴヌクレオ
チドはｓｉＲＮＡである。別の好ましいオリゴヌレオチドはｓｉＲＮＡのパッセンジャー
鎖である。別の好ましいオリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡのガイド鎖である。

ｓｉＲＮＡ
ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）と呼ばれるプロセスによりｍＲＮＡの配列特異
的サイレンシングを誘導する。このプロセスは、哺乳動物および他の脊椎動物を含む多種
多様な生物で起こる。ｓｉＲＮＡを調製および投与するための方法、ならびに遺伝子機能
を特異的に不活性化するためのその使用は、公知である。ｓｉＲＮＡは、修飾および非修
飾ｓｉＲＮＡを含む。ｓｉＲＮＡの例およびより詳細な説明は、本明細書に援用する国際
公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することができる。

ｓｉＲＮＡを被検体に投与するのに使用することができる例示的送達経路は、多く知ら
れている。さらに、ｓｉＲＮＡは、当該技術分野において公知の任意の例示的な方法によ
り製剤化することもできる。ｓｉＲＮＡの製剤および投与の例およびより詳細な説明は、
本明細書に援用する国際公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することが
できる。

「低分子干渉核酸」、「ｓｉＮＡ」、「低分子干渉ＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「低分
子干渉核酸分子」、「オリゴヌクレオチド」、「低分子干渉オリゴヌクレオチド分子」ま
たは「化学修飾低分子干渉核酸分子」という表現は、ＲＮＡ干渉（「ＲＮＡｉ」）または
遺伝子サイレンシングを介して配列特異的に遺伝子発現またはウイルス複製を阻害または
ダウンレギュレートすることができる任意の核酸分子をいう。これらの用語は、個々の核
酸分子、複数のそうした核酸分子またはそうした核酸分子のプールの両方をいうことがで
きる。ｓｉＮＡは、アンチセンス鎖が標的核酸分子のヌクレオチド配列またはその一部と
相補的なヌクレオチド配列を含み、センス鎖が標的核酸配列に相当するヌクレオチド配列
またはその一部を含む、自己相補的なセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖核酸分
子であってもよい。ｓｉＮＡは、アンチセンス領域が別の標的核酸分子のヌクレオチド配
列またはその一部と相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は標的核酸配列または
その一部に相当するヌクレオチド配列を含む、自己相補的なセンス領域およびアンチセン
ス領域を有する二本鎖、非対称二本鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造を有する
ポリヌクレオチドであってもよい。ｓｉＮＡは、２つ以上のループ構造と自己相補的なセ
ンス領域およびアンチセンス領域を含むステムとを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドで
あってもよく、この場合、アンチセンス領域は標的核酸分子ヌクレオチド配列またはその
一部と相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は標的核酸配列またはその一部に相
当するヌクレオチド配列を含み、かつ環状ポリヌクレオチドはインビボあるいはインビト
ロでプロセシングを受けてＲＮＡｉを媒介する能力がある活性なｓｉＮＡ分子になること
ができる。ｓｉＮＡは、標的核酸分子のヌクレオチド配列またはその一部と相補的なヌク
レオチド配列を有する一本鎖ポリヌクレオチドをさらに含んでもよく（たとえば、こうし
たｓｉＮＡ分子には、標的核酸配列またはその一部に相当するヌクレオチド配列がｓｉＮ
Ａ分子内に存在する必要がない）、一本鎖ポリヌクレオチドは、末端リン酸基、たとえば
５’−リン酸（たとえば、Ｍａｒｔｉｎｅｚ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｃｅｌｌ，１１
０，５６３−５７４ ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｅｌｌ，１０，５３７−５６８を参照）、または５’，３’−二リン酸をさら
に含んでもよい。

ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）と呼ばれるプロセスによりｍＲＮＡの配列特異
的サイレンシングを誘導する。このプロセスは、哺乳動物および他の脊椎動物を含む多種
多様な生物で起こる。ｓｉＲＮＡを調製および投与するための方法、ならびに遺伝子機能
を特異的に不活性化するためのその使用は、公知である。本明細書で使用する場合、ｓｉ
ＲＮＡは、遺伝子発現を阻害またはダウンレギュレートすることができる化学修飾核酸分
子および非修飾核酸分子を含む。ｓｉＲＮＡ例およびより詳細な説明は、本明細書に援用
する国際公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することができる。

ｓｉＲＮＡを被検体に投与するのに使用することができる例示的送達経路は、多く知ら
れている。さらに、ｓｉＲＮＡは、当該技術分野において公知の任意の例示的な方法によ
り製剤化することもできる。ｓｉＲＮＡの製剤および投与の例およびより詳細な説明は、
本明細書に援用する国際公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することが
できる。

リンカー
モジュール組成物のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃとオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡと
の間、および／または、ペプチドとオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡとの間の共有結
合は、リンカーを介してもよい。このリンカーは、用途に応じて切断型でもあるいは非切
断型でもよい。ある種の実施形態では、切断型リンカーは、エンドソームから細胞質への
輸送後にオリゴヌクレオチドを放出するのに使用してもよい。目的のコンジュゲーション
またはカップリング相互作用の性質、または所望の生物学的作用により、どのリンカー基
を選ぶかが決定される。リンカー基は、より複雑な構造を得るため組み合わせても、ある
いは分岐させてもよい。好適なリンカーとして、本明細書に援用する国際公開第２００９
／１２６９３３号パンフレットに記載されているようなものが挙げられる。

一実施形態では、本発明のリンカーを表１に示す。

別の実施形態では、好ましいリンカーを表２に示す。

市販のリンカーは、前記リンカーの組み合わせを含め、ＰｉｅｒｃｅまたはＱｕａｎｔ
ａ Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎなど様々な供給業者から入手することができる。さらに、リン酸
結合を介して結合された市販のリンカーを、リンカーとして独立に使用しても、あるいは
前記リンカーと組み合わせて使用してもよい。リンカーはさらに、１〜８個のペプチドを
適合させたより複雑な分岐構造を得るため組み合わせてもよく、そうした一例を下記に図
示する：

ペプチド
二分子膜を用意に通過できない高分子薬剤および親水性薬剤分子の場合、それらの作用
部位への効果的な送達にとって、細胞内のエンドソームコンパートメント／リソソームコ
ンパートメントに取り込まれることが、最大の障害になると考えられる。理論に拘泥する
わけではないが、ペプチドを使用すると、そうしたエンドソームコンパートメント／リソ
ソームコンパートメントからのオリゴヌクレオチドの脱出、または細胞膜を通過するオリ
ゴヌクレオチドのトランスロケーション、および細胞質コンパートメントへの放出が促進
されると考えられる。ある種の実施形態では、本発明のペプチドは、ｐＨ依存性膜活性お
よび／または融合性を示し得るポリカチオン性または両親媒性またはポリアニオン性また
は両性イオン性または親油性または中性のペプチドもしくはペプチド模造物でもよい。ペ
プチド模倣物は、ペプチドを模倣するように設計された小さいタンパク質状の鎖であって
もよい。

いくつかの実施形態では、ペプチドは細胞膜透過性剤、好ましくはヘリックス細胞膜透
過性剤である。こうしたペプチドは一般に、細胞膜透過ペプチドと呼ばれる。たとえば、
「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｅ
ｄ．Ｌａｎｇｅｌ，Ｕ．；２００７，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌ
ｏｒｉｄａを参照されたい。好ましくは、この成分は両親媒性である。ヘリックス剤は、
好ましくは親油性相および疎油性相を有するα−ヘリックス剤であることが好ましい。細
胞膜透過性剤は、たとえば、細胞膜透過性ペプチド、カチオン性ペプチド、両親媒性ペプ
チド、もしくは、たとえば主にＴｙｒ、ＴｒｐおよびＰｈｅからなる疎水性ペプチド、デ
ンドリマーペプチド、規制されたペプチドあるいは架橋ペプチドであってもよい。細胞膜
透過ペプチドの例として、Ｔａｔ、ペネトラチンおよびＭＰＧが挙げられる。本発明では
、細胞膜透過ペプチドは、ペプチド、オリゴヌクレオチドおよびタンパク質などの大きな
極性分子を細胞膜を通過して運ぶことができる「送達」ペプチドであり得ると考えられる
。細胞膜透過性ペプチドは、線状でもあるいは環状でもよく、Ｄ−アミノ酸、「レトロイ
ンベルソ型」配列、非ペプチドまたは偽ペプチド結合、ペプチジル模倣体が挙げられる。
さらにペプチドおよびペプチド模倣体は、修飾されていてもよく、たとえばグリコシル化
、ｐｅｇ化、またはメチル化されていてもよい。ペプチドの例およびより詳細な説明は、
本明細書に援用する国際公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することが
できる。ペプチドの合成は、当該技術分野において周知である。

ペプチドは、システインまたは他のチオールを含む部分をＣ末端またはＮ末端に付加す
ることによりどちらかの末端または両方の末端でコンジュゲートされていてもよい。ペプ
チドは、Ｎ末端が官能化されていない場合、アセチル基によりキャップしてもよいし、あ
るいは脂質、ＰＥＧまたは標的化部分でキャップしてもよい。ペプチドのＣ末端がコンジ
ュゲートされていないあるいは官能化されていない場合、ペプチドはアミドとしてキャッ
プしても、あるいは脂質、ＰＥＧまたは標的化部分でキャップしてもよい。

本明細書に開示されたコンジュゲートに使用することができる好適なペプチドを下記表
３に列記する。

表３に示したペプチドのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体およびシステ
インコンジュゲーション点変異体も好適である。

好ましいペプチドを下記表４に列記する。

表４に示したペプチドのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体およびシステ
インコンジュゲーション点変異体も好ましい。

標的化リガンド
本発明のモジュール組成物は標的化リガンドを含んでもよい。いくつかの実施形態では
、この標的化リガンドは、モジュール組成物を特定の細胞に誘導することができる。たと
えば、標的化リガンドは、標的細胞の表面上の分子と特異的または非特異的に結合するこ
とができる。標的化部分は、標的細胞に対して特異的親和性を有する分子であってもよい
。標的化部分は、標的細胞の表面に見られるタンパク質に対する抗体、あるいは標的細胞
の表面に見られる分子に対するリガンドまたはリガンドの受容体結合部を含んでもよい。
標的化リガンドの例およびより詳細な説明は、本明細書に援用する国際公開第２００９／
１２６９３３号パンフレットで確認することができる。

標的化リガンドは、抗体、受容体のリガンド結合部、受容体に対するリガンド、アプタ
マー、Ｄ−ガラクトース、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトース（ＧａｌＮＡｃ）、多価Ｎ−
アシチル−Ｄ−ガラクトース、Ｄ−マンノース、コレステロール、脂肪酸、リポタンパク
質、フォレート、サイロトロピン、メラノトロピン、界面活性剤プロテインＡ、ムチン、
炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−ア
セチル−グルコサミン、多価マンノース、多価フルクトース、グリコシル化ポリアミノ酸
、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタマート、ポリアスパルテート、血漿
タンパク質結合を増強する親油性部分、ステロイド、胆汁酸、ビタミンＢ１２、ビオチン
、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチド模倣体、イブプロフェン、ナプロキセン、アスピリン
、フォレートならびにこれらのアナログおよび誘導体からなる群から選択される。

好ましい標的化リガンドは、Ｄ−ガラクトース、Ｎ−アセチル−Ｄ−ガラクトース（Ｇ
ａｌＮＡｃ）、ＧａｌＮＡｃ２およびＧａｌＮＡｃ３、コレステロール、フォレート、な
らびにこれらのアナログおよび誘導体からなる群から選択される。

脂質
親油性部分、たとえばコレステロールまたは脂肪酸は、核酸などの高度の親水性分子に
結合すると、血漿タンパク質結合を実質的に増強し、結果として循環半減期を長くするこ
とができる。さらに、親油基は細胞取り込みを促進することもできる。たとえば、脂質は
、特定の血漿タンパク質、たとえばリポタンパク質に結合でき、その結果、対応するリポ
タンパク質受容体（たとえば、ＬＤＬ受容体またはスカベンジャー受容体ＳＲ−Ｂ１）を
発現する特定の組織の取り込みを促進することが示されている。親油性コンジュゲートは
、標的送達アプローチと見なすこともでき、その細胞内輸送は、エンドソーム溶解剤との
組み合わせによりさらに強力に促進され得る。

血漿タンパク質結合を増強する例示的な親油性部分には、ステロール、コレステロール
、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン
脂質、スフィンゴ脂質、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、
１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデ
シルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシ
ル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレ
オイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、フェノキサジン、アスピリン、ナプロキセン、
イブプロフェン、ビタミンＥおよびビオチン等があるが、これに限定されるものではない
。脂質の例およびより詳細な説明は、本明細書に援用する国際公開第２００９／１２６９
３３号パンフレットで確認することができる。

好ましい脂質はコレステロールである。

可溶化剤
モジュール組成物は、水溶解度の向上、循環半減期の延長および／または細胞取り込み
の促進を行うことができる１個または複数個の他の部分／リガンドを含んでもよい。こう
したものとして、天然に存在する物質、たとえばタンパク質（たとえば、ヒト血清アルブ
ミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）ま
たはグロブリン）；または炭水化物（たとえば、デキストラン、プルラン、キチン、キト
サン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）を挙げることができる。これ
らの部分はまた、組換え分子または合成分子、たとえば合成ポリマーまたは合成ポリアミ
ノ酸であってもよい。例として、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリ
Ｌ−グルタミン酸、スチレン−マレイン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ
−グリコリド）コポリマー、ジビニルエーテル−無水マレイン酸コポリマー、Ｎ−（２−
ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ、たとえば、ＰＥＧ−０．５Ｋ、ＰＥＧ−２Ｋ、ＰＥＧ−５Ｋ、ＰＥＧ−１０
Ｋ、ＰＥＧ−１２Ｋ、ＰＥＧ−１５Ｋ、ＰＥＧ−２０Ｋ、ＰＥＧ−４０Ｋ）、メチル−Ｐ
ＥＧ（ｍＰＥＧ）、［ｍＰＥＧ］２、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、
ポリ（２エチルアクリル酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホス
ファジンが挙げられる。可溶化剤の例およびより詳細な説明は、本明細書に援用する国際
公開第２００９／１２６９３３号パンフレットで確認することができる。

好ましい可溶化基はＰＥＧ０．５Ｋ〜３０Ｋである。

処置の方法
一態様では、本発明は、本発明のモジュール組成物の投与から恩恵を受け得る疾患のリ
スクがあるまたはそれに罹患した被検体を処置する方法を特徴とする。本方法は、本発明
のモジュール組成物の投与を必要とする被検体に本発明のモジュール組成物を投与するこ
とにより、被検体を処置することを含む。投与されるオリゴヌクレオチドは、処置対象の
疾患によって異なる。具体的な適応症の処置方法に関するさらなる詳細については、国際
公開第２００９／１２６９３３号パンフレットを参照されたい。

処方
オリゴヌクレオチド化合物のコンジュゲートを調製するための方法は、多く存在する。
その技術は、当業者によく知られているはずである。そうした反応に関する有用な参考文
献として、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ
．Ｔ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６がある。
他の参考文献としては、国際公開第２００５／０４１８５９号パンフレット；国際公開第
２００８／０３６８２５号パンフレットおよび国際公開第２００９／１２６９３３号パン
フレットがある。

本発明について以下の例により詳細に説明するが、以下の例をさらに限定するものと解
釈してはならない。本出願に引用されるすべての参考文献、係属中の特許出願および公開
された特許の内容は、本明細書に明示的に援用する。本明細書に記載されるｓｉＲＮＡは
、広範に発現する遺伝子ＳＳＢ（シェーグレン症候群抗原Ｂ；ＮＭ＿００９２７８．４）
を標的とするように設計した。

少なくとも１個の酸素原子、少なくとも１個のリン原子および／または少なくとも１個
の窒素原子を含むいくつかの実施形態では、リンカー基は、連結結合点（ＬＡＰ）でオリ
ゴヌクレオチド鎖またはｓｉＲＮＡ鎖（単数または複数）と連結することができ、任意の
炭素含有基を含んでもよい。いくつかの実施形態では、リン原子は、オリゴヌクレオチド
鎖の接合点としての役割を果たすことができるリンカー基上の末端リン酸基またはホスホ
ロチオエート基の一部を形成する。ある種の実施形態では、窒素原子は、目的のリンカー
、エンドソーム溶解単位、細胞膜透過ペプチド、可溶化基、脂質、標的化基または別の目
的のリンカー接合点としての役割を果たすことができるリンカー基上の末端エーテル基、
エステル基、アミノ基またはアミド（ＮＨＣ（Ｏ）−）基の一部を形成する。これらの末
端リンカー基には、Ｃ_６ヘキシル部分、Ｃ_５第二級ヒドロキシ部分、Ｃ_３チオール部分ま
たはＣ_６チオール部分があるが、これに限定されるものではない。下記に記載するＲＮＡ
配列の一例として、Ｃ６ヘキシル：［（ＣＨ_２）_６ＮＨ_２］がある。

本明細書の実施例に記載したｓｉＲＮＡ配列を表５に示す。

ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよびｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュ
ゲートの調製について、下記の例および合成スキームに記載する。下記のｓｉＲＮＡの記
載は説明を目的としたものであることに留意されたい。具体的な配列情報は表５で確認す
ることができる。

セクションＡ
実施例１〜２
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド化合物Ａ９およびＡ１０の合成
以下のスキーム１を用いてＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ化合物９および１０を調製した。

スキーム１

（２Ｓ）−２，６−ビス［ビス（プロプ−２−イン−１−イル）アミノ］ヘキサン酸（化
合物Ａ１）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した２０００ｍＬ ３口丸底フラスコに、（２Ｓ
）−２，６−ジアミノヘキサン酸（５０ｇ、３４２．０３ｍｍｏｌ、１．００当量）をア
セトニトリル（１０００ｍＬ）に溶かした溶液を入れ、５０℃に加熱した。これに水酸化
カリウム（２２．６ｇ、０．４０２５ｍｏｌ、１．００当量、８５％）を加えた。得られ
た溶液を３０分間撹拌した。次いで３−ブロモプロプ−１−イン（２９．５ｍＬ、１．０
０当量）を加えた。得られた溶液を５０℃で１時間撹拌した。追加の水酸化カリウム（２
２．６ｇ、０．４０２５ｍｏｌ、１．００当量）をこの溶液に加え、５０℃で３０分間撹
拌した。これに３−ブロモプロプ−１−イン（２９．５ｍＬ、１．００当量）を加えた。
得られた溶液を１時間撹拌した。これに水酸化カリウム（２２．６ｇ、０．４０２５ｍｏ
ｌ、１．００当量）を再度加えた。得られた溶液を５０℃で３０分間撹拌し、続いてさら
に３−ブロモプロプ−１−イン（２９．５ｍＬ、１．００当量）を加えた。得られた溶液
を１時間撹拌した。これに水酸化カリウム（２２．６ｇ、０．４０２５ｍｏｌ、１．００
当量）を加えた。得られた溶液を３０分間撹拌した。これに３−ブロモプロプ−１−イン
（２９．５ｍＬ、１．００当量）を加えた。得られた溶液を３時間撹拌した。反応混合物
を水／氷浴で２５℃まで冷却した。固体を濾去した。濾液をＨＣｌ（６Ｍ）でｐＨ４に調
整した。固体を濾去した。濾液を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムに供し、ジ
クロロメタン／メタノール（１００：１〜２５：１）で溶出した。この結果、（２Ｓ）−
２，６−ビス［ビス（プロプ−２−イン−１−イル）アミノ］ヘキサン酸（化合物Ａ１）
を淡黄色の油として得た。
ＭＳ（ＥＳ，ｍ／ｚ）：２９７．２，［Ｍ−Ｈ］^{− １}ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００Ｍ
Ｈｚ，ｐｐｍ）：３．６２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，４Ｈ），３．５２−３．４９（ｍ，１
Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，４Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）
，２．３０（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，２Ｈ），１
．８８−１．７９（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．５３（ｍ，２Ｈ），１．５２−１．４３
（ｍ，２Ｈ）。

２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（化合物Ａ３）
の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した２０００ｍＬ ３口丸底フラスコに、２−（
２−ヒドロキシエトキシ）エタン−１−オール（Ａ２、４２．４ｇ、３９９．５５ｍｍｏ
ｌ、１．００当量）をジクロロメタン（１０００ｍＬ）に溶かした溶液およびトリエチル
アミン（２７．９ｇ、２７５．７２ｍｍｏｌ、０．２５当量）を入れた。上記にｐ−トル
エンスルホニルクロリド（１９．１ｇ、１００．１８ｍｍｏｌ、０．５０当量）を加えた
。２５℃で１時間撹拌後、得られた混合物を１×５００ｍＬのカリウムヒドロスルファー
ト水溶液（１Ｍ）および１×５００ｍＬの炭酸水素ナトリウム水溶液（５％）でそれぞれ
で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をシリカ
ゲルカラムに供し、ジクロロメタン／メタノール（１００：１）で溶出した。この結果、
２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（化合物Ａ３）
を無色油として得た。

２−（２−アジドエトキシ）エタン−１−オール（化合物Ａ４）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した５００ｍＬ 丸底フラスコに、２−（２−［
［（４−２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（Ａ３
、５０ｇ、１９２．０８ｍｍｏｌ、１．００当量）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２
５０ｍＬ）に溶かした溶液を入れた。これに続いてアジ化ナトリウム（１８．７９ｇ、２
８９．０３ｍｍｏｌ、１．５０当量）を２５℃で加えた。得られた溶液を油浴にて１００
℃で５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、濾過した。濾液を真空下で濃縮した。残液を
１０００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、１×５００ｍＬの水で洗浄した。有機層を無水
硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムに供し、ジクロ
ロメタン／メタノール（８０：１）で溶出した。この結果、２−（２−アジドエトキシ）
エタン−１−オール（化合物Ａ４）を無色油として得た。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：３．４２−３．４５（ｔ，Ｊ＝４．
８Ｈｚ，２Ｈ），３．６３−３．６５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７１−３．７
４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７１−３．７９（ｍ，２Ｈ）。

（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−６−（アセトキシメチル）テトラヒド
ロ−２Ｈ−ピラン−２，４，５−トリイルトリアセテート（化合物Ａ６）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した２０００ｍＬ ３口丸底フラスコに、（３Ｒ
，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アミノ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピ
ラン−２，４，５−トリオールヒドロクロリド（Ａ５、１２０ｇ、５５６．５０ｍｍｏｌ
、１．００当量）をピリジン（１２００ｍＬ）に溶かした溶液を入れた。これに続いて酢
酸無水物（３４１．６ｇ、３．３５ｍｏｌ、６．００当量）を０℃で撹拌しながら滴下し
て加えた。得られた溶液を一晩２５℃で撹拌した。次いで８０００ｍＬの水／氷を加えて
反応をクエンチした。この固体を濾過により集めた。この結果、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６
Ｒ）−３−アセトアミド−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，
４，５−トリイルトリアセテート（化合物Ａ６）を白色固体として得た。

（３ａＲ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−５−（アセトキシメチル）−２−メチル−５，
６，７，７ａ−テトラヒドロ−３ａＨ−ピラノ［３，２−ｄ］オキサゾール−６，７−ジ
イルジアセテート（化合物Ａ７）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した２０００ｍＬ 丸底フラスコに、（３Ｒ，４
Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセトアミド−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−
ピラン−２，４，５−トリイルトリアセテート（Ａ６、３０ｇ、７７．０５ｍｍｏｌ、１
．００当量）をジクロロメタン（１５００ｍＬ）に溶かした溶液を入れ、次いで鉄（ＩＩ
Ｉ）クロリド（３０ｇ、１８４．９５ｍｍｏｌ、２．４０当量）を加えた。得られた混合
物を２５℃で２時間撹拌した。次いで１０００ｍＬの水／氷を加えて反応をクエンチした
。有機層を１×１０００ｍＬの炭酸水素ナトリウム水溶液および１×１０００ｍＬの水で
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。この結果、（３ａＲ，５Ｒ
，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−５−（アセトキシメチル）−２−メチル−５，６，７，７ａ−
テトラヒドロ−３ａＨ−ピラノ［３，２−ｄ］オキサゾール−６，７−ジイルジアセテー
ト（化合物Ａ７）を黄色油として得た。
^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，３００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：２．０３（ｓ，９Ｈ），２．１２（
ｓ，３Ｈ），３．９７−４．２７（ｍ，４Ｈ），４．９０−４．９３（ｍ，Ｊ＝３．３Ｈ
ｚ，１Ｈ），５．４５−５．４７（ｔ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．９８−６．００（
ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ）。

（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−２−（アセトキシメチル）−６
−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジイ
ルジアセテート（化合物Ａ８）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した５００ｍＬ 丸底フラスコに、（３ａＲ，５
Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）−５−（アセトキシメチル）−２−メチル−５，６，７，７ａ
−テトラヒドロ−３ａＨ−ピラノ［３，２−ｄ］オキサゾール−６，７−ジイルジアセテ
ート（Ａ７、４０ｇ、１２１．４７ｍｍｏｌ、１．００当量）を１，２−ジクロロエタン
（２００ｍＬ）に溶かした溶液、２−（２−アジドエトキシ）エタン−１−オール（Ａ４
、２３．８９ｇ、１８２．１８ｍｍｏｌ、１．５０当量）を入れた。上記に数個の４Ａゼ
オライトを加えた。得られた混合物を２５℃で１時間撹拌した。次いでトリメチルシリル
トリフルオロメタンスルホネート（１０．８ｍＬ、０．５０当量）を加えた。２５℃で一
晩撹拌後、反応混合物を５００ｍＬのジクロロメタンで希釈し、１×５００ｍＬの水、１
×５００ｍＬの炭酸水素ナトリウム水溶液および１×５００ｍＬの水で洗浄した。有機層
を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムに供し、
ジクロロメタン／メタノール（１００：１）で溶出した。この結果、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ
，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−２−（アセトキシメチル）−６−［２−（２−アジ
ドエトキシ）エトキシ］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４−ジイルジアセテート（Ａ
８）を無色油として得た。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６１．１，［Ｍ＋Ｈ］^＋
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ，ｐｐｍ）５．７８（ｄ，Ｊ＝８．９０Ｈｚ，１
Ｈ），５．３６（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），５．２２（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．６
Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１９−４．１２（ｍ，２Ｈ
），４．１１−４．０５（ｍ，１Ｈ），３．９８−３．９２（ｍ，２Ｈ），３．８２−３
．７８（ｍ，１Ｈ），３．７１−３．６３（ｍ，４Ｈ），３．４９−３．３８（ｍ，２Ｈ
），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９７（
ｓ，３Ｈ）。

（Ｓ）−２，６−ビス（ビス（（１−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ
）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ
−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾ
ール−４−イル）メチル）アミノ）ヘキサン酸（化合物Ａ９、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃア
セテート）（Ａ９）（Ｅｘ．１）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した２５０ｍＬ 丸底フラスコに、（２Ｓ）−２
，６−ビス［ビス（プロプ−２−イン−１−イル）アミノ］ヘキサン酸（Ａ１、１．０ｇ
、１．０当量）、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−アセトアミド−２−（アセト
キシメチル）−６−［２−（２−アジドエトキシ）エトキシ］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラ
ン−３，４−ジイルジアセテート（Ａ８、９．２６ｇ、６．０当量）、無水ＴＨＦ５０ｍ
Ｌ、ＣｕＢｒ^．ＳＭｅ_２（０．１３８ｇ、０．２０当量）、および無水ＤＢＵ（１．５ｍ
ｌ、３．０当量）をそれぞれ順番に仕込んだ。得られた溶液を室温で１６時間撹拌し、酢
酸（０．７５ｍＬ、４．０当量）でクエンチし、ＭＰ−ＴＭＴ樹脂（Ｐａｒｔ Ｎｏ：８
０１４７２、Ｂｉｏｔａｇｅ製）（９ｇ）で処理し、室温で１６時間熟成させ、濾過し、
濾液を濃縮して泡状固体とした。次いでこの固体をＣＨ_２Ｃｌ_２（１４０ｍＬ）に溶解さ
せ、ＡｃＯＨ／ＮａＣｌ溶液（１４０ｍＬ）で洗浄した。ＡｃＯＨ／ＮａＣｌ溶液は、１
ｍＬ ＡｃＯＨおよび１００ｍＬ ２０％ＮａＣｌ溶液で調製した。下層の有機層を濃縮
し、ＳｉＯ_２カラム（２２０ｇ）で精製し、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨで溶出した。この結
果、（Ｓ）−２，６−ビス（ビス（（１−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，
６Ｒ）−３−アセトアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒ
ドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリ
アゾール−４−イル）メチル）アミノ）ヘキサン酸（化合物Ａ９）を白色固体として得た
。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１３９．５，［Ｍ＋Ｈ］^＋

（Ｓ）−２，６−ビス（ビス（（１−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ
）−３−アセトアミド−４，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ
−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾ
ール−４−イル）メチル）アミノ）ヘキサン酸（化合物Ａ１０、ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ
）（Ａ１０）（Ｅｘ．２）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した２５０ｍＬ 丸底フラスコに、（Ｓ）−２，
６−ビス（ビス（（１−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アセ
トアミド−４，５−ジアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラ
ン−２−イル）オキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イ
ル）メチル）アミノ）ヘキサン酸（Ａ９、６．９ｇ、１．０当量）、Ｎａ_２ＣＯ_３（６．
８３ｇ、２０当量）、水（５６ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３２ｍＬ）をそれぞれ順番に仕込
んだ。反応を室温で１６時間熟成させ、濃縮して残渣を得、水（５０ｍＬ）に再溶解させ
、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ Ｃ１８ ｇｏｌｄ逆相カラム（４１５ｇ）で精製し、水／Ｍｅ
ＣＮで溶出した。真空下で濃縮後、生成物を最小量の水に溶解させ、凍結乾燥して（Ｓ）
−２，６−ビス（ビス（（１−（２−（２−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３
−アセトアミド−４，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ
−ピラン−２−イル）オキシ）エトキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−
４−イル）メチル）アミノ）ヘキサン酸（化合物Ａ１０）を白色固体として得た。
ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６５７［Ｍ＋Ｎａ］^＋
１ＨＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，５００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：８．０５（ｓ，２Ｈ），７．９１（ｓ，
２Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ），４．５７（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ
），４．４５−４．４１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，４Ｈ），３．９９−３．８２（ｍ，２８
Ｈ），３．８０−３．６１（ｍ，２８Ｈ），３．１４（ｔ，Ｊ ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），
２．５２（ｂｒｏａｄ ｓ，２Ｈ），１．９９（ｓ，６Ｈ），１．９８（ｓ，６Ｈ），１
．７３（ｍ，２Ｈ），１．６０（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｍ，２Ｈ）。

セクションＢ
Ｂ２〜Ｂ５の調製
実施例３〜６
図５Ａ−１〜図５Ｄに示したスキーム２を使用して、Ｂコンジュゲート（Ｅｘ．３〜６
）を調製した。

Ｂ２（Ｅｘ．３）の合成
Ａ１０（８６ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（５７．６μＬ、０．３３０
ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５００μＬ）に溶解させ、次いでＨＡＴＵ（３０１μＬ、０．０
７９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１５分間撹拌した。出発材料パッセンジャー鎖Ｂ１（１０
１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を水（１６８μＬ）およびＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）に溶解
させた。ＨＡＴＵ溶液をＲＮＡ溶液に加え、１５分間熟成させた。反応混合物を水（５０
ｍＬ）で希釈し、３ｋ膜を通して水に対して３回遠心透析した。濃縮物を、Ｄｉｏｎｉｘ
ＰｒｏＰａｃ ＳＡＸ ２２×２５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成
物を９５％Ａ（２：３ Ｈ_２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタノール、２０ｍＭ ＴＥ
Ａ）から４０％溶媒Ｂ（２：３ Ｈ_２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタノール、２０ｍ
Ｍ ＴＥＡ、１Ｍ ＣｓＣｌ）までグラジエント溶出した。画分を水で希釈して２，２，
２−トリフルオロエタノール含量を２５％まで下げ、３ｋ膜を通して水に対して３回遠心
透析した。濃縮物を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅ
ｄ ｍａｓｓ：９２６７．５，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：９２６７．０

Ｂ３（Ｅｘ．４）の合成
Ｂ２（６０６ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を水（３２ｍＬ）に溶かした溶液に、ＴＥＡ
Ａ（１．６４ｍＬ、２Ｍ）、ＤＴＴ水溶液（０．６５ｍＬ、１Ｍ）およびＴＥＡ（０．６
５ｍＬ、４．６９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０分間熟成させた。次いで反応混
合物を水で希釈し、３ｋ膜を通して水に対して３回遠心透析した。濃縮物は、さらに単離
することなく次に使用した。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：９１７７．４，ｆｏｕｎｄ
ｍａｓｓ：９１７９．０

Ｂ４（Ｅｘ．５）の合成
Ｂ３（３５０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）を水（３ｍＬ）に溶かした溶液に、Ｎ−（２
−アミノエチル）−マレイミドトリフルオロアセテート塩（１９４ｍｇ、０．７６３ｍｍ
ｏｌ）を加えた。反応混合物を３０分間熟成させ、その後反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ
（９５：５〜５：９５％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡ水溶液；
Ｂ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡのアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅｎｙｌ ｘｂｒ
ｉｄｇｅ Ｃｏｌｕｍｎにより精製した。Ｂ４を含む画分を、３ｋ膜を通して水に対して
３回遠心透析し、濃縮物を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体として得た。

Ｂ５（Ｅｘ．６）の合成
Ｂ４（２８６ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）を炭酸水素ナトリウム水（３．０ｍＬ、２０
０ｍＭ）に溶かした溶液に、ＮＨＳ−ｄＰＥＧ１２−ＳＰＤＰ（２８０ｍｇ、０．３０７
ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（０．５ｍＬ）に溶かした溶液を加えた。反応混合物を３０
分間熟成させ、その後反応混合物をＴＥＡＡ水溶液（１．０ｍＬ、２Ｍ）で処理し、ＲＰ
−ＨＰＬＣ（９５：５〜５：９５％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ ＴＥＡ
Ａ水溶液；Ｂ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡのアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅｎｙ
ｌ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌｕｍｎにより精製した。Ｂ５を含む画分を、３Ｋ膜を通して
水に対して３回遠心透析し、濃縮物を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体として得た
。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝１０１１７

実施例７〜８
Ｂ６−ｓｅｑ３２の調製
図６Ａ〜図６Ｂに示すスキーム３を用いてコンジュゲートＢ６−Ｐ３２およびＢ８−ｓ
ｅｑ３２（Ｅｘ．７〜８）を調製した。

コンジュゲートＢ６−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．７）の合成
Ｂ５（５０ｍｇ、５ｕｍｏｌ、１当量）を、５０ｍＭ ＡｃＯＨを含む２，２，２−ト
リフルオロエタノール（５ｍＬ）に溶解させた。ペプチドＳｅｑ３２（５１ｍｇ、１３ｕ
ｍｏｌ、２．５当量）をグアニジン−ＨＣｌ（８Ｍ、５００ｕＬ）に溶解させ、５０ｍＭ
ＡｃＯＨを含む２，２，２−トリフルオロエタノール（５ｍＬ）で希釈した。ペプチド
溶液を撹拌ＲＮＡ溶液に５分にわたり滴下して加え、反応を室温で１時間放置した。反応
をホルムアミド（１０ｍＬ）で希釈し、反応混合物の１．５ｍＬのアリコートを、Ｄｉｏ
ｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＳＡＸ−１０ ２２×２５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充
填した。生成物を、２０ｍＬ／分で１０分かけて９８％溶媒Ａ（２：３ Ｈ_２Ｏ：２，２
，２−トリフルオロエタノール、４０ｍＭ ＴＥＡ）から３５％溶媒Ｂ（２：３ Ｈ_２Ｏ
：２，２，２−トリフルオロエタノール、４０ｍＭ ＴＥＡ、１Ｍ グアニジン−ＨＣｌ
）までグラジエント溶出した。画分を水で希釈して２，２，２−トリフルオロエタノール
含量を２５％まで下げ、１０ｋ膜を通して水に対して３回遠心透析した。濃縮物を凍結乾
燥して生成物をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１３９６１
．９，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１３９６２．０

コンジュゲートＢ８−ｓｅｑ３２−ｂ（Ｅｘ．８）の合成
ガイド鎖（Ｂ７、１７．７ｍｇ）を水（５ｍＬ）に溶解させ、Ｂ６−ｓｅｑ４２（３６
．２ｍｇ）を含むバイアルに加えた。溶液を十分に混合し、室温で２時間放置した。溶液
を凍結乾燥して二本鎖をアモルファス固体として得た。

追加のＢ８−ペプチドコンジュゲートの合成
Ｂ８およびペプチド配列および二本鎖の追加のコンジュゲートをＢ８−ｓｅｑ３２−ｂ
に使用したのと類似の方法で調製した。

実施例９〜１１
Ｂ９およびＢ１０−ｓｅｑ３２およびＢ１１−ｓｅｑ３２の調製
図７Ａ、図７Ｂおよび図７Ｃに示したようなスキーム４を用いてＢ９、Ｂ１０−ｓｅｑ
３２およびＢ１１−ｓｅｑ３２を調製した。

Ｂ９（Ｅｘ．９）の合成
化合物Ｂ３（１２０ｍｇ、０．０１３２ｍｍｏｌ）を含む水（５ｍＬ）を、２，２’−
ジピリジルジスルフィド（２９ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ、１０当量）をメタノール（５
ｍＬ）に溶解させた撹拌溶液に滴下して加えた。溶液を水で希釈してメタノール含量を２
０％とし、３Ｋ膜を通して水に対して３回遠心透析した。濃縮物を凍結乾燥して生成物を
白色アモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：９１６６．５，ｆｏｕ
ｎｄ ｍａｓｓ：９１６５．５

Ｂ１０−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．１０）の合成
Ｂ９（１５ｍｇ、１．６１５ｕｍｏｌ）を水（１５０ｕＬ）に溶解させ、５０ｍＭ Ａ
ｃＯＨを含むＴＦＥ（１．５ｍＬ）で希釈した。別のバイアルに、Ｐ３２（８．７９ｍｇ
、２．１５５ｕｍｏｌ）を８Ｍ グアニジンＨＣｌ（６０ｕＬ）に溶解させ、５０ｍＭ
ＡｃＯＨを含むＴＦＥ（１．５ｍＬ）で希釈し、次いでＲＮＡ溶液に加えた。反応混合物
を１５分間熟成させ、次いでホルムアミドで希釈し、ＡＥＸ（９５：５〜５５：４５ Ａ
：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝２０ｍＭ ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液；Ｂ＝１Ｍ Ｃ
ｓＣｌおよび２０ｍＭ ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液）、Ｄｉｏｎｉｘ Ｐｒｏｐａ
ｃカラムにより精製した。Ｂ１０−Ｓｅｑ３２を含む画分を、１０Ｋ膜を通して水に対し
て３回遠心透析し、濃縮物を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体として得た。

Ｂ１１−ｓｅｑ３２−ｂ（Ｅｘ．１１）の合成
Ｂ１０−ｓｅｑ３２（９．６８ｍｇ、０．７３０ｕｍｏｌ）を、Ｂ７（５．００ｍｇ、
０．７３０ｕｍｏｌ）をＰＢＳ（５００ｕＬ）に溶解させた溶液で処理し、３０分間熟成
させた。過剰のガイド鎖をＡＥＸ精製（９５：５〜５５：４５ Ａ：Ｂ直線グラジエント
（Ａ＝２０ｍＭ ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液；Ｂ＝１Ｍ ＣｓＣｌおよび２０ｍＭ
ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液）、Ｄｉｏｎｉｘ Ｐｒｏｐａｃカラムにより除去し
た。Ｂ１１−ｓｅｑ３２を含む画分を、１０Ｋ膜を通して水に対して３回遠心透析し、濃
縮物を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体として得た。

実施例１２〜１４
Ｂ１１−ペプチドコンジュゲートの追加合成。
Ｂ１１およびペプチド配列および対応する二本鎖の追加のコンジュゲートを、Ｂ１１−
ｓｅｑ３２−ｂに使用したのと類似の方法で調製した。

スキーム５を図７Ｄ、図７Ｅおよび図７Ｆに示す。

Ｂ１２（Ｅｘ．１２）：の合成
別々のバイアルに、Ｂ３（５０ｍｇ、５．４μｍｏｌ）を水（３ｍＬ、約１７ｍｇ／ｍ
Ｌ）に溶解させ、化合物１，１，１’−（エタン−１，２−ジイル）ビス（１Ｈ−ピロー
ル−２，５−ジオン）、（１６ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．２ｍＬ）に溶
解させた。Ｂ３溶液を化合物１溶液に加え、１０分間撹拌した。反応を水で１５ｍＬに希
釈し、次いで３Ｋ ＭＷＣＯ膜で水に対して４回透析した。次いで反応を濾過し（０．２
２μｍシリンジフィルター）、凍結乾燥して白色固体、Ｂ１２を得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ
ｍａｓｓ：９３９７．５３５。Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｍａｓｓ：９４００．０。

Ｂ１２−ｓｅｑ１３（Ｅｘ．１３）の合成：反応手順に関するＢ１０−ｓｅｑ３２の合
成を参照されたい。
Ｂ１２−ｓｅｑ１３。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１３５１８．２１５

Ｂ１３−ｓｅｑ１３−ｂ（Ｅｘ．１４）の合成：反応手順に関するＢ１１−ｓｅｑ３２
の合成を参照されたい。
Ｂ１３−ｓｅｑ１３−ｂ。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：２０３７０．２１５

Ｂ１３−ペプチドコンジュゲートの追加合成。
Ｂ１３およびペプチド配列の追加のコンジュゲートをＢ１３−ｓｅｑ１３に使用したの
と類似の方法で調製した。

実施例１５〜１６
Ｂ１５−ｓｅｑ３２およびＢ１６−ｓｅｑ３２−ｂの調製
図７Ｇ−１〜図７Ｇ−２に示したスキーム６を用いてＢ１６−ｓｅｑ３２およびＢ１７
−ｓｅｑ３２−ｂを調製した。

Ｂ１４の合成
Ｂ３（１００ｍｇ、１０．９μｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）およびジオキサン（２０ｍＬ
）に溶解させ、ジオキサン（３．８ｍＬ）に溶解させたビスマレイミドで処理して濁った
混合物を得た。反応を１．５時間撹拌し、その後反応をＮ−メチルマレイミド（３６．３
ｍｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）でクエンチした。反応混合物を水で希釈し、３ｋ膜を通して
水に対して１回遠心透析した。濃縮物を濾過し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５〜５：９５％
Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡ水溶液；Ｂ＝１００ｍＭ ＴＥＡ
Ａのアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅｎｙｌ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌｕｍｎ
）により精製した。生成物を含む画分を透析し、凍結乾燥してＢ１４を白色アモルファス
粉末として得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝９５３１

Ｂ１５−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．１５）の合成
Ｂ１４（５ｍｇ、０．５２４μｍｏｌ）をホルムアミド溶液（２Ｍ チオ尿素、５０ｍ
Ｍ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５）、５００μＬ）に溶解させた。別のバイアルに、ペプチ
ド配列３２（４．２８ｍｇ、１．０４８μｍｏｌ）をホルムアミド溶液（２Ｍ チオ尿素
、５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５）、５００μＬ）に溶解させ、次いでＲＮＡ溶液
に加えた。室温で１時間熟成後、反応混合物を、Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＳＡＸ−
１０ ２２×２５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、２０ｍＬ／分
で１０分かけて９８％溶媒Ａ（２：３ Ｈ２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタノール、
４０ｍＭ ＴＥＡ）から３５％溶媒Ｂ（２：３ Ｈ２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタ
ノール、４０ｍＭ ＴＥＡ、１Ｍ グアニジン−ＨＣｌ）までグラジエント溶出した。画
分を水で希釈して２，２，２−トリフルオロエタノール含量を２５％まで下げ、１０ｋ膜
を通して水に対して３回遠心透析した。濃縮物を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体
として得た。

Ｂ１６−ｓｅｑ３２−ｂ（Ｅｘ．１６）の合成
Ｂ１５−ｓｅｑ３２（２．１１ｍｇ、０．１５５μｍｏｌ）を、Ｂ７（１．０６２ｍｇ
、０．１５５μｍｏｌ）を水（２１２μＬ）に溶かした溶液で処理し、室温で２時間熟成
させた。溶液を凍結乾燥して生成物をアモルファス固体として得た。

セクションＣ
実施例１７〜２１
Ｃ１〜Ｃ３、Ｃ４−ｓｅｑ３２およびＣ６−ｓｅｑ３２の調製
図８Ａ〜図８Ｄに示したようなスキーム７を用いてＣ１〜Ｃ３、Ｃ４−ｓｅｑ３２およ
びＣ６−ｓｅｑ３２を調製した。

Ｃ１（Ｅｘ．１７）の合成
１，２−ジアミノドデカン（１００ｍｇ、０．４９９ｍｍｏｌ）をクロロホルム（３．
３ｍＬ）に溶解させ、０℃まで冷却し、次いでＮ−メトキシカルボニル−マレイミド（２
３４ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）および硫酸水素テトラブチルアンモニウム（１７０ｍｇ、
０．４９９ｍｍｏｌ）で処理した。ＤＩＰＥＡ（２０９ｕＬ、１．２０ｍｍｏｌ）をゆっ
くりと加え、反応を０℃で１０分間熟成させた。氷浴を除去し、反応を飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液（６．６ｍＬ）で処理した。室温で３．５時間熟成後、反応混合物を酢酸エ
チルで抽出した（３×１５ｍＬ）。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで
溶媒を真空除去した。粗生成物を、１００：０〜０：１００％ Ａ：Ｂ直線グラジエント
（Ａ＝ヘキサン；Ｂ＝酢酸エチル）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製し
た。生成物を含む画分をプールし、濃縮してＣ１を白色微粉末として得た。^１Ｈ ＮＭＲ
（ＣＤＣｌ_３）：１．２４−１．２８（ｍ，１２Ｈ），１．５５−１．６１（ｍ，４Ｈ）
，３．５０（ｔ，４Ｈ Ｊ＝７．４Ｈｚ），６．６８（ｓ，４Ｈ）．Ｍｅａｓｕｒｅｄ
ｍａｓｓ＝３６１。

Ｃ２（Ｅｘ．１８）の合成
ステップ１。３’Ｈａｍｉｎｏ５’Ｃ６ジスルフィドｓｉＲＮＡ（４６．９ｍｇ、６．
１６μｍｏｌ）を９：１ ＤＭＳＯ／水（７８２μｌ）に溶解させた。ＴｅｔｒａＧａｌ
ＮＡｃ（４０．０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２６．９μｌ、０．１５
４ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２００μｌ）に溶解させ、次いでＨＡＴＵ（１４．０ｍｇ、０
．０３７ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１４１μＬ）に溶かした溶液を加え、室温で１５分間撹
拌した。この溶液をＲＮＡ溶液に加え、３０分間熟成させた。反応をＤＩ水で希釈し、１
回透析してＤＭＳＯを除去し、ＡＥＸ（９５：５〜６５：３５ Ａ：Ｂ直線グラジエント
（Ａ＝２０ｍＭ ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液；Ｂ＝１Ｍ ＣｓＣｌおよび２０ｍＭ
ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液）、Ｄｉｏｎｉｘ Ｐｒｏｐａｃカラム）により精製
した。生成物を含む画分をプールし、透析して凍結乾燥した。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓ
ｓ＝９２３３。

ステップ２。この固体（３０．８ｍｇ、３．３４μｍｏｌ）にＴＣＥＰ（１９．１３ｍ
ｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）およびＤＩ水（２ｍＬ）を加えた。反応を室温で１時間撹拌し
、次いで５℃で一晩熟成させた。反応をＤＩ水で希釈し、ＤＩ水に対して２回透析してＣ
２の溶液を得て、さらに単離することなくその後の反応に使用した。

Ｃ３（Ｅｘ．１９）の合成
ＤＩ水（３７ｍＬ）に溶解させたＣ２（６０．１ｍｇ、６．６０ｕｍｏｌ、Ｂ３と類似
の方法で調製）を、ＤＭＦ（７ｍＬ）に溶解させたＣ１（２３．８ｍｇ、６６．０ｕｍｏ
ｌ）で処理して濁った溶液を得た。反応を一晩熟成させ、この時点でジオキサン（１８ｍ
Ｌ）を加えて反応混合物を可溶化した。さらに３０分間熟成後、反応をＤＩ水で希釈した
。次いでそれをＤＩ水に対して１回透析して、濾過し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５〜５：
９５％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡ水溶液；Ｂ＝１００ｍＭ
ＴＥＡＡのアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅｎｙｌ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌ
ｕｍｎ）により精製した。生成物を含む画分を透析し、凍結乾燥してＣ３を白色アモルフ
ァス粉末として得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝９４５８。

Ｃ４−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．２０）の合成
Ｃ３（１０ｍｇ、１．０５７ｕｍｏｌ）を２０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液および２Ｍ チオ尿
素で変性させたホルムアミド（１ｍＬ）に溶解させ、Ｐ３２（８．６２ｍｇ、２．１１ｕ
ｍｏｌ）に加えた。２０分後、ＬＣ−ＭＳにより、所望の生成物への十分な変換が確認さ
れた。反応を、ＡＥＸ（９５：５〜５５：４５ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝２０ｍＭ
ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液；Ｂ＝１Ｍ ＣｓＣｌおよび２０ｍＭ ＴＥＡを含む
６０％ＴＦＥ水溶液）、Ｄｉｏｎｉｘ Ｐｒｏｐａｃカラム）により精製した。生成物を
含む画分を透析してＣ４−Ｐ３２を得た。

Ｃ６−ｓｅｑ３２−（Ｅｘ．２１）の合成
ＤＩ水（３．４０ｍＬ）に溶解させたＣ４（６．７８ｍｇ、０．５０１μｍｏｌ）を、
ＤＩ水（５３０μＬ）に溶解させたガイド鎖Ｃ５（３．４４ｍｇ、０．５０１μｍｏｌ）
で処理した。分析用ＳＡＸにより、過剰のガイド鎖が若干観察されたが、二本鎖の十分な
純度が確認された。溶液を凍結乾燥してＣ６を白色アモルファス粉末として得た。Ｍｅａ
ｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝パッセンジャー鎖：１３５３９，ガイド鎖：６８６９。

Ｃ６−ペプチドコンジュゲートの追加合成。
Ｃ６およびペプチド配列の追加のコンジュゲートをＣ６−ｓｅｑ３２−ｃに使用したの
と類似の方法で調製した。

実施例２２〜２７
Ｃ７〜Ｃ１０、Ｃ１１−Ｐ３２およびＣ１２−ｓｅｑ３２−ａの調製
図９Ａ〜図９Ｅに示したようなスキーム８を用いてＣ７〜Ｃ１０、Ｃ１１−ｓｅｑ３２
およびＣ１２−ｓｅｑ３２を調製した。

Ｃ７（Ｅｘ．２２）の合成
イコサン二酸（６００ｍｇ、１．７５２ｍｍｏｌ）をトルエン（１１ｍＬ）に懸濁し、
ＤＩＥＡ（６７３μＬ、３．８５ｍｍｏｌ）およびＤＰＰＡ（７９３ｕＬ、３．６８ｍｍ
ｏｌ）で処理した。室温で３０分間撹拌後、反応を８０℃まで加熱し、次いで２時間穏や
かに還流させた。反応を冷却し、ｔＢｕＯＨ（１．６７５ｍＬ、１７．５２ｍｍｏｌ）お
よびヨウ化銅（２００ｍｇ、１．０５１ｍｍｏｌ）で処理し、再び加熱してさらに２時間
還流させた。反応を冷却し（沈殿が観察された）、ＤＣＭで希釈し、濾過し、真空中で濃
縮した。粗生成物を、１００：０〜０：５０％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝ヘキサン
；Ｂ＝酢酸エチル）を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含
む画分をプールし、濃縮してＣ７を得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝４８６。

Ｃ８（Ｅｘ．２３）の合成
Ｃ７（１０１ｍｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解させ、ＴＦＡ（
２０ｍＬ）で処理した。反応を５分間熟成させ、その後溶媒およびＴＦＡを真空除去して
Ｃ８を無色油状固体として得て、さらに精製することなく使用した。Ｍｅａｓｕｒｅｄ
ｍａｓｓ＝２８６。

Ｃ９（Ｅｘ．２４）の合成
Ｃ８（１００．０ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）をクロロホルム（２８ｍＬ）に懸濁し、
硫酸水素テトラブチルアンモニウム（７０．９ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）、Ｎ−メトキ
シカルボニルマレイミド（９８．０ｍｇ、０．６３１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（８８．
０μＬ、０．５０２ｍｍｏｌ）で処理した。飽和炭酸水素ナトリウム（２８ｍＬ）を加え
た。反応を２５時間激しく撹拌し、その後反応を３×５０ｍＬ ＤＣＭで抽出した。合わ
せた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで蒸発乾固した。粗生成物を、１００：０
〜０：５０％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝ヘキサン；Ｂ＝酢酸エチル）を用いたフラ
ッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を合わせ、蒸発させ
てＣ９を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）：１．２４−１．２６（ｍ，２８Ｈ），１．
５５−１．５９（ｍ，４Ｈ），３．５０（ｔ，４Ｈ Ｊ＝７．４Ｈｚ），６．６８（ｓ，
４Ｈ）。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ ＝４４５。

Ｃ１０（Ｅｘ．２５）の合成
Ｃ２（１２．０ｍｇ、１．３１μｍｏｌ）を１：３ 水：ジオキサン（１４．４ｍＬ）
に溶解させ、１．４ｍＬ ジオキサンに溶解させたＣ９（５．８ｍｇ、１３．１μｍｏｌ
）で処理した。一晩熟成後、反応をＮ−メチルマレイミド（４．３８ｍｇ、３９．４μｍ
ｏｌ）でクエンチし、ＤＩ水で希釈した。粗反応をＤＩ水に対して１回透析し、濾過し、
ＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５〜５：９５％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ Ｔ
ＥＡＡ水溶液；Ｂ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡのアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅ
ｎｙｌ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌｕｍｎ）により精製した。生成物を含む画分をＤＩ水に
対して透析し、凍結乾燥してＣ１０を得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ：９５４６。

Ｃ１１−ｓｅｑ３２およびＣ１２−ｓｅｑ３２−ｃ（Ｅｘ．２６およびＥｘ．２７）の合
成
コンジュゲートＣ１１−ｓｅｑ３２およびＣ１２−ｓｅｑ３２−ｃをＣ４−ｓｅｑ３２
およびＣ６−ｓｅｑ３２に使用したのと類似の方法で調製した。

Ｃ１２−ペプチドコンジュゲートの追加合成
Ｃ１２およびペプチド配列の追加のコンジュゲートをＣ１２−ｓｅｑ３２に使用したの
と類似の方法で調製した。

セクションＤ
実施例２８〜３０
Ｃ１３、Ｃ１４−ｓｅｑ３２およびＣ１５−ｓｅｑ３２の調製
図１０Ａ〜図１０Ｄに示したスキーム９を用いてＣ１３、Ｃ１４−ｓｅｑ３２およびＣ
１５−ｓｅｑ３２−ａを調製した。

Ｃ１３（Ｅｘ．２８）の合成
ＤＩ水（３．５ｍＬ）に溶解させたＣ２（１１ｍｇ、１．２２μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（
２７０μＬ）に溶解させたＣ２ビスマレイミド（２．６９ｍｇ、１２．２０ｕｍｏｌ）で
処理した。１時間後、ＬＣ−ＭＳにより、所望の生成物への十分な変換が確認された。反
応をＤＩ水に対して３回透析し、凍結乾燥してＣ１３を得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓ
ｓ：９３１７。

Ｃ１４−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．２９）の合成
Ｃ１３（１０．５３ｍｇ、１．１３μｍｏｌ）をＤＩ水（５０μＬ）に溶解させ、５０
ｍＭ ＡｃＯＨ（２．０ｍＬ）で変性させたＴＦＥで希釈し、次いで８Ｍ 塩酸グアニジ
ン（６０μＬ）に溶解させたｓｅｑ３２（９．２２ｍｇ、２．２６μｍｏｌ）に加えた。
反応を１０分間熟成させた。反応を、ＡＥＸ（９５：５〜５５：４５ Ａ：Ｂ直線グラジ
エント（Ａ＝２０ｍＭ ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液；Ｂ＝１Ｍ ＣｓＣｌおよび２
０ｍＭ ＴＥＡを含む６０％ＴＦＥ水溶液）、Ｄｉｏｎｉｘ Ｐｒｏｐａｃカラム）によ
り精製した。生成物を含む画分を透析してＣ１４−ｓｅｑ３２を得た。

Ｃ１５−ｓｅｑ３２−ｃ（Ｅｘ．３０）の合成
ＤＩ水（２．６ｍＬ）に溶解させたＣ１４−ｓｅｑ３２（９．８１ｍｇ、０．７３８μ
ｍｏｌ）を、ＤＩ水（７５１μＬ）に溶解させたガイド鎖Ｃ５（７．７６ｍｇ、０．７３
８μｍｏｌ）で処理した。溶液を凍結乾燥して所望の生成物Ｃ１５−ｓｅｑ３２−ｃを得
た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝パッセンジャー鎖：１３３９６，ガイド鎖：６８６８

Ｃ１５−ペプチドコンジュゲートの追加合成
Ｃ１５およびペプチド配列の追加のコンジュゲートをＣ１５−ｓｅｑ３２に使用したの
と類似の方法で調製した。

実施例３１〜３３
Ｄ１、Ｄ３およびＤ４の調製
図１１Ａ〜図１１Ｄに示したようなスキーム１０を用いてＤ１、Ｄ３およびＤ４を調製
した。

Ｄ１（Ｅｘ．３１）の合成
ＮＨＳエステル（１００．０ｍｇ、０．３２０ｍｍｏｌ）を０．５ｍＬ 無水ＤＣＥに
溶かした溶液に、アジドアミン（２５３．０ｍｇ、０．４８０ｍｍｏｌ）を含む０．５ｍ
Ｌ 無水ＤＣＥおよび１．５当量のトリエチルアミンに加えた。得られた溶液を室温で１
時間撹拌し、反応混合物をシリカカラムに充填し、２５分かけてＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝０／
１００〜１０／９０で溶出した。集めた画分をＬＣ−ＭＳ解析に供し、その結果により、
＞９５％純度が確認された。

Ｄ３（Ｅｘ．３２）の合成
オリゴヌクレオチドＤ２（１０ｍｇ、１．３μｍｏｌ）およびアジドリンカーＤ１（５
．６ｍｇ、７．８μｍｏｌ）を、エッペンドルフチューブ中の脱気３：１ ＤＭＡ／水（
１０００μＬ）に溶解させ、次いでこの反応混合物に、臭化銅（Ｉ）−ジメチルスルフィ
ド（０．０５ｍｇ、０．２６μｍｏｌ）を脱気ＭｅＣＮ（１００μＬ）に溶かした溶液を
加えた。４０℃で６０分後、Ｄ２が完全に消費されたことがＬＣ−ＭＳによりモニターさ
れた。反応混合物を０．４Ｍ ＥＤＴＡ（５ｍＬ）で希釈し、さらに１５分間撹拌し、次
いでＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ３Ｋ膜を使用して水に対して透析し、ＲＰ ＨＰＬＣ（５％〜
６０％Ａを含むＢ、Ａ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含むＭｅＣＮ、Ｂ：１００ｍＭ ＴＥＡ
Ａを含む水）により精製した。生成物画分を水に対して透析し、凍結乾燥してＤ３を白色
粉末として得た。

Ｄ４（Ｅｘ．３３）の合成
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ Ａ１０（５．７ｍｇ、３．５μｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．０
ｍｇ、５．２μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．８ｍｇ、１４μｍ
ｏｌ）をＤＭＳＯ（１００μＬ）に溶解させた。１０分後、活性化エステルを、ＤＭＦ（
３５０μＬ）および水（５０μＬ）中のオリゴヌクレオチドＤ３（６．４ｍｇ、０．７０
μｍｏｌ）に加えた。得られた反応混合物を１５分間撹拌し、水を加えてクエンチし、次
いでＲＰ ＨＰＬＣ（５％〜６０％Ａを含むＢ、Ａ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含むＭｅＣ
Ｎ、Ｂ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む水）により精製した。生成物画分を水に対して透析
し、凍結乾燥してＲ３をより白色の粉末として得た。

実施例３４〜３５
Ｄ５−ｓｅｑ３２およびＤ７−ｓｅｑ３２の調製
図１２Ａ−１〜図１２Ｂ−２に示したようなスキーム１１を用いてＤ５−ｓｅｑ３２お
よびＤ７−ｓｅｑ３２を調製した。

Ｄ５−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．３４）の合成
オリゴヌクレオチドＤ４（６．５ｍｇ、０．６０μｍｏｌ）を含む２００μＬ ホルム
アミド／ｐＨ＝６．８ トリス緩衝液＝３／１を、ペプチドｓｅｑ３２（９．８ｍｇ、２
．４μｍｏｌ）を含む２００μＬの同じ緩衝液で処理し、反応混合物を１時間撹拌した。
反応を、ホルムアミド２．５ｍＬを加えて希釈し、Ｓｅｐａｘ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ Ｓ
ＡＸ ＮＰ１０、２１．２×５０ｍｍカラム（８分かけて２％〜３０％Ｂを含むＡ、Ａ：
６０：４０ トリフルオロエタノール：水、４０ｍＭ トリエチルアミン、Ｂ：６０：４
０ トリフルオロエタノール：水、４０ｍＭ トリエチルアミン、１Ｍ グアニジン−Ｈ
Ｃｌ、２０ｍＬ／分）を用いた強陰イオン交換クロマトグラフィーにより精製して、Ｄ５
−ｓｅｑ３２を白色粉末として得た。

Ｄ７−ｓｅｑ３２（Ｅｘ．３５）の合成
オリゴヌクレオチドＤ５−ｓｅｑ３２（５．７ｍｇ、０．３０４μｍｏｌ）および対応
するアンチセンス鎖Ｄ６（２．０ｍｇ、０．２９μｍｏｌ）を、ＲＮａｓｅを含まない水
中で１時間混合した。反応混合物を凍結乾燥し、生成物Ｄ７−ｓｅｑ３２−ｄをインビボ
評価に供した。

追加のＤ７−ペプチドコンジュゲートの合成。
Ｄ７およびペプチド配列の追加のコンジュゲートをＤ７−ｓｅｑ３２に使用したのと類
似の方法で調製した。

セクションＥ。脂質およびペプチドコンジュゲートのハイブリッドの合成
実施例３６〜４２
スキーム１２を図１３Ａ〜図１３Ｈ−２に示す。

Ｅ２（Ｅｘ．３６）の合成
オリゴヌクレオチドＥ１（３００ｍｇ、３９μｍｏｌ）およびＰＥＧ９アジドリンカー
（５８．５ｍｇ、７８μｍｏｌ）を、ガラスバイアル中で脱気３：１ ＤＭＡ／水（１０
ｍＬ）に溶解させ、次いでこの反応混合物に、臭化銅（Ｉ）−ジメチルスルフィド（２０
．０６ｍｇ、９８μｍｏｌ）を脱気ＤＭＳＯ（６９９μＬ）に溶かした溶液を加えた。４
５℃で４０分後、Ｅ１が完全に消費されたことがＬＣ−ＭＳによりモニターされた。反応
混合物を０．４Ｍ ＥＤＴＡ（２０ｍＬ）で希釈し、さらに１５分間撹拌し、次いでＭｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ ３Ｋ膜を用いて水に対して透析し、凍結乾燥してＥ２を白色粉末として
得た。

Ｅ３（Ｅｘ．３７）の合成
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ Ａ１０（２３７ｍｇ、１４５μｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５５．
２ｍｇ、１４５μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９４ｍｇ、７２６μ
ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（７００μＬ）に溶解させた。１０分後、活性化エステルを、オリゴ
ヌクレオチドＥ２（３０６ｍｇ、３６μｍｏｌ）を含むＤＭＡ（７．５ｍＬ）および水（
２．５ｍＬ）に加えた。得られた反応混合物を１５分間撹拌し、水を加えてクエンチし、
次いでＲＰ ＨＰＬＣ（５％〜６０％Ａを含むＢ、Ａ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含むＭｅ
ＣＮ、Ｂ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む水）により精製した。生成物画分を水に対して透
析し、凍結乾燥してＥ３をより白色の粉末として得た。

Ｅ４（Ｅｘ．３８）の合成
Ｅ３（２４６ｍｇ、２４μｍｏｌ、１当量）を水（８０００μＬ）に溶かした溶液に、
ＴＣＥＰ−ＨＣｌ（７０ｍｇ、２４４μｍｏｌ、１０当量）を加えた。反応混合物をＴＣ
ＥＰ−ＨＣｌが完全に溶解するまで混合した。この溶液を室温で２時間放置した。溶液を
、３Ｋ膜を通して水に対して２回遠心透析して粗Ｅ４を得、これを次のステップに直接使
用した。

Ｅ５（Ｅｘ．３９）の合成
Ｅ４（２４４ｍｇ、２４μｍｏｌ）を水（１２ｍＬ）に溶かした溶液に、ＭｅＣＮ（０
．５ｍＬ）に溶解させたＮ−（２−アミノエチル）マレイミドトリフルオロアセテート塩
（６２．２ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ、１０当量）を加えた。この溶液を室温で１時間放
置した。ＬＣＭＳにより、完全な変換が確認された。溶液を、３Ｋ膜を通して水に対して
２回遠心透析し、凍結乾燥してＥ５を白色粉末として得た。

Ｅ６（Ｅｘ．４０）の合成
Ｅ５（４０ｍｇ、３．９５μｍｏｌ、１当量）を４：１ ＤＭＡ／水（５００μＬ）に
溶解させた。ＤＩＰＥＡ（１０．２ｍｇ、７９μｍｏｌ、２０当量）を上記の溶液に加え
た。コレステロールクロロホルメート（１８ｍｇ、４０μｍｏｌ、１０当量）をＴＨＦ（
５００μＬ）に溶解させた。２つの溶液を混ぜ合わせ、反応混合物を室温で１時間放置し
た。ＬＣＭＳにより、反応が終わったことが確認された。反応混合物を、ＲＰ ＨＰＬＣ
（５％〜９５％Ｂを含むＡ、Ａ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む水、Ｂ：１００ｍＭ ＴＥ
ＡＡを含むＭｅＣＮ）により精製した。生成物画分を水に対して透析し、凍結乾燥してＥ
６をより白色の粉末として得た。

Ｅ７（Ｅｘ．４１）の合成
Ｅ６（２４．５ｍｇ、２．３μｍｏｌ、１当量）を水（１０００μＬ）に溶かした溶液
に、ピペリジンを含むＤＭＦ（２００μＬ、２０体積％、２００当量）に加えた。反応混
合物を室温で１時間放置した。ＬＣＭＳにより、反応が終わったことが確認された。反応
混合物を濾過し（０．２ｕＭ）、水に対して透析し、凍結乾燥してＥ７をより白色の粉末
として得た。

Ｅ８（Ｅｘ．４２）の合成
Ｅ７（１６ｍｇ、１．５５μｍｏｌ、１当量）を新たに調製した炭酸水素ナトリウム水
（０．１Ｍ、４００μＬ）に溶解させた。ＳＰＤＰ（４．８５ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ
、１０当量）をアセトニトリル（４００ｕＬ）に溶解させた。２つの溶液を混ぜ合わせ、
反応混合物を室温で１時間放置した。反応混合物を、ＲＰ ＨＰＬＣ（５％〜９５％Ｂを
含むＡ、Ａ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む水、Ｂ：１００ｍＭ ＴＥＡＡを含むＭｅＣＮ
）により精製した。生成物画分を水に対して透析し、凍結乾燥してＥ８をより白色の粉末
として得た。

実施例４３〜４４
Ｅ８−Ｓｅｑ１３７およびＥ９−Ｓｅｑ１３７の調製
スキーム１３を図１４Ａ−１〜図１４Ｂ−２に示す。

Ｅ９−Ｓｅｑ１３７（Ｅｘ．４３）の合成
２Ｍ チオ尿素／２０ｍＭ ＭＥＳを含むホルムアミドｐＨ６．５ １００μＬに溶か
したオリゴヌクレオチドＥ８（３．０ｍｇ、０．２８６μｍｏｌ）を、１００μＬの同じ
緩衝液に溶かしたペプチドｓｅｑ１３７（２．３３ｍｇ、０．５７２μｍｏｌ）で処理し
、反応混合物を室温で３０分間放置した。反応を、ホルムアミド１ｍＬを加えて希釈し、
Ｐｒｏｐａｃ ＳＡＸ ２２×２５０ｍｍカラム（１５分かけて５％〜４５％Ｂを含むＡ
、Ａ：６０：４０ トリフルオロエタノール：水、２０ｍＭ トリエチルアミン、Ｂ：６
０：４０ トリフルオロエタノール：水、２０ｍＭ トリエチルアミン、１Ｍ グアニジ
ン−ＨＣｌ、２０ｍＬ／分）を用いた強陰イオン交換クロマトグラフィーにより精製して
Ｅ９−ｓｅｑ−１３７を白色粉末として得た。

Ｅ１０−Ｓｅｑ１３７−ｅ（Ｅｘ．４４）の合成
パッセンジャー鎖Ｅ９−ｓｅｑ１３７（１．３０ｍｇ、０．０７７μｍｏｌ）および対
応するガイド鎖Ｂ７（０．５６１ｍｇ、０．０７７μｍｏｌ）を、ＲＮａｓｅを含まない
水中で混合し、１分間９０℃に加熱し、次いで室温で１０分間放置した。二本鎖を凍結乾
燥し、得られた生成物を白色アモルファス粉末として単離した。

追加のＥ１０−ペプチドコンジュゲートの合成。
Ｅ１０およびペプチド配列の追加のコンジュゲートをＥ１０−Ｓｅｑ１３７−ｅに使用
したのと類似の方法で調製した。

セクションＦ。３，１３，１８トリペプチドコンジュゲートの調製
実施例４５〜４９
スキーム１４を図１５Ａ〜図１５Ｅ−２に示す。

化合物Ｆ２（Ｅｘ．４５）の合成
化合物Ａ１０（２１０ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）を乾燥Ｎ−メチル−２−ピロリジノ
ン（３ｍｌ）に溶解させた。ＨＡＴＵ（４８．９ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）および乾燥
ジイソプロピルエチルアミン（０．０４６ｍｌ、０．２５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を
、固体が完全に溶解するまで音波処理した。反応を室温で５分間放置した。別のバイアル
に、化合物Ｆ１（５００ｍｇ、０．０６４６ｍｍｏｌ）を水（２ｍｌ）およびＮ−メチル
−２−ピロリジノン（５ｍｌ）に溶解させた。Ａ１０溶液をＦ１溶液に加え、反応を室温
で５分間放置した。反応混合物を、６０℃まで加熱したＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬ−ＳＡＸ
８ｕｍ ５０×１５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、３０分かけ
て１００ｍｌ／分で１００％溶媒Ａ（４：１ Ｈ_２Ｏ：エタノール、２０ｍＭ 酢酸トリ
エチルアンモニウム ｐＨ７．０）から８０％溶媒Ｂ（４：１ Ｈ_２Ｏ：エタノール、２
０ｍＭ 酢酸トリエチルアンモニウム ｐＨ７．０、１Ｍ グアニジニウムヒドロクロリ
ド）としてグラジエント溶出した。画分を集めて、水で希釈してエタノール含量を５％ま
で下げた。この溶液を５０ｍｌ／分でＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×５
０ｍｍカラムにポンプで充填し、生成物を１００ｍｌ／分で５分間水で洗浄した。この脱
塩物を、カラムを反転させ、２：３ Ｈ_２Ｏ：アセトニトリルを５０ｍｌ／分でカラムに
流して溶出した。画分を凍結乾燥してＦ２をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔ
ｅｄ ｍａｓｓ：９３６３．６，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：９３６３．５。

化合物Ｆ３（Ｅｘ．４６）の合成
Ｆ２（５００ｍｇ、０．０５３４ｍｍｏｌ）およびアジド−ｐｅｇ９−アミン（２５３
ｍｇ、０．４８１ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール（５ｍｌ）および水
（５ｍｌ）に溶解させた。この溶液に窒素を１分間バブリングした。別のバイアルに、臭
化銅（Ｉ）ジメチルスルフィド（４３．９ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル
（２．５ｍｌ）に溶解させた。この溶液に窒素を１分間バブリングした。２つの溶液を混
ぜ合わせ、反応混合物に窒素を１分間バブリングした。バイアルを密封し、室温で１時間
放置した。反応混合物をＥＤＴＡ溶液（０．５Ｍ、ｐＨ８．０、１ｍＬ）でクエンチし、
Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×２５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに
充填した。生成物を、１００ｍｌ／分で３０分かけて１００％溶媒Ａ（Ｈ_２Ｏ、０．１Ｍ
酢酸トリエチルアンモニウム ｐＨ７．０）から４０％溶媒Ｂ（アセトニトリル）とし
てグラジエント溶出した。画分を集めて、水で希釈してアセトニトリル含量を５％まで下
げた。この溶液を５０ｍｌ／分でＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×５０ｍ
ｍカラムにポンプで充填し、生成物を１００ｍｌ／分で５分間水で洗浄した。この脱塩物
を、カラムを反転させ、２：３ Ｈ_２Ｏ：アセトニトリルを５０ｍｌ／分でカラムに流し
て溶出した。画分を凍結乾燥してＦ３をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ
ｍａｓｓ：１０９４３．５，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１０９４３．２。

化合物Ｆ４（Ｅｘ．４７）の合成
Ｆ３（４６７ｍｇ、０．０４２７ｍｍｏｌ）を炭酸水素ナトリウム溶液（０．１Ｍ、４
．５ｍＬ）に溶解させた。ＮＨＳ−ＳＰＤＰ（１２０ｍｇ、０．３８４ｍｍｏｌ）をアセ
トニトリル（１ｍＬ）に溶解させた。これらの溶液を混ぜ合わせて、反応を室温で１５分
間放置した。反応混合物を、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×２５０ｍｍ
カラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、１００ｍｌ／分で３０分かけて１００
％溶媒Ａ（Ｈ_２Ｏ、０．１Ｍ 酢酸トリエチルアンモニウム ｐＨ７．０）から４０％溶
媒Ｂ（アセトニトリル）としてグラジエント溶出した。画分を集めて、アセトニトリル含
量を水で希釈して５％まで下げた。この溶液を５０ｍｌ／分でＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄ
ｇｅ ５ｕｍ ５０×５０ｍｍカラムにポンプで充填し、生成物を１００ｍｌ／分で５分
間水で洗浄した。この脱塩物を、カラムを反転させ、２：３ Ｈ_２Ｏ：アセトニトリルを
５０ｍｌ／分でカラムに流して溶出した。画分を凍結乾燥してＦ４をアモルファス固体と
して得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１１５３５．３，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１１
５３５．１。

Ｆ５−Ｓｅｑ４６３（Ｅｘ．４８）の合成
ペプチドＳｅｑ．６１２（８．７５ｍｇ、０．００５２０ｍｍｏｌ）を、２０ｍＭ 酢
酸を含むＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解させた。別のバイアルに、Ｆ４（１０ｍｇ、０．００
０８６７ｍｍｏｌ）を、２０ｍＭ 酢酸を含むＤＭＳＯ（１ｍｌ）に溶解させた。２つの
溶液を混ぜ合わせ、室温で１時間放置した。反応をＮ−メチルマレイミド（５．７８ｍｇ
、０．０５２０ｍｍｏｌ）でクエンチし、Ａｇｉｌｅｎｔ ＰＬ−ＳＡＸ １０ｕｍ ２
５×５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、３０ｍｌ／分で２０分か
けて１００％溶媒Ａ（２：３ Ｈ_２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタノール、２０ｍＭ
トリエチルアミン）から７０％溶媒Ｂ（２：３ Ｈ_２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエ
タノール、２０ｍＭ トリエチルアミン、０．５Ｍ グアニジニウムヒドロクロリド）と
してグラジエント溶出した。画分を集めて、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ １
９×２５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、２０ｍｌ／分で３０分
かけて８５％溶媒Ａ（Ｈ_２Ｏ、０．１Ｍ 酢酸ヘキシルアンモニウム ｐＨ７．０）から
６５％溶媒Ｂ（テトラヒドロフラン）としてグラジエント溶出した。画分を集めて、真空
下でテトラヒドロフラン含量を５％未満まで下げた。溶液を、１０ｋ膜を通して水に対し
て１回、０．１Ｍ 塩化ナトリウムを含む４：１ Ｈ_２Ｏ：エタノールに対して再び１回
、および水に対してさらに２回遠心透析した。濃縮物を凍結乾燥してＦ５−Ｓｅｑ４６３
をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１６２４７．８，ｆｏｕ
ｎｄ ｍａｓｓ：１６２４７．９。

実施例４９
スキーム１５を図１６Ａ−１〜図１６Ｂ−２に示す。

Ｆ６ Ｓｅｑ４６３−ｆ（Ｅｘ．４９）の合成
Ｆ５−Ｓｅｑ４６３（７．７５ｍｇ、０．０００４７７ｍｍｏｌ）およびガイドＢ７（
３．２７ｍｇ、０．０００４７７ｍｍｏｌ）をＨ_２Ｏ（０．５ｍＬ）に溶解させた。溶液
を室温で１時間放置し、次いで凍結乾燥してＦ６ Ｓｅｑ４６３−ｆの二本鎖をアモルフ
ァス固体（１１ｍｇ、定量的）として得た。パッセンジャー鎖のＥｘｐｅｃｔｅｄ ｍａ
ｓｓ：１６２４７．８，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１６２４７．９。ガイド鎖のＥｘｐｅｃ
ｔｅｄ ｍａｓｓ：６８５２．５，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：６８５２．７。

追加のＦ１０−ペプチドコンジュゲートおよび二本鎖の合成。
Ｆ１０およびペプチド配列の追加のコンジュゲートとその二本鎖とをＦ６−Ｓｅｑ４６
３−ｆに使用したのと類似の方法で調製した。

セクションＧ。３，８，１３，１８テトラペプチドの調製
実施例５０〜５３
スキーム１６を図１７Ａ−１〜図１７Ｄ−２に示す。

Ｇ２（Ｅｘ．５０）の合成
Ａ１０（２１０ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）を乾燥Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（３
ｍｌ）に溶解させた。ＨＡＴＵ（４８．９ｍｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）および乾燥ジイソ
プロピルエチルアミン（０．０４６ｍｌ、０．２５７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、固体
が完全に溶解するまで音波処理した。反応を室温で５分間放置した。別のバイアルに、Ｇ
１（５００ｍｇ、０．０６４３ｍｍｏｌ）を水（２ｍｌ）およびＮ−メチル−２−ピロリ
ジノン（５ｍｌ）に溶解させた。Ａ１０溶液をＧ１溶液に加え、反応を室温で５分間放置
した。反応混合物を、６０℃まで加熱したＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬ−ＳＡＸ ８ｕｍ ５０
×１５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、１００ｍｌ／分で３０分
かけて１００％溶媒Ａ（４：１ Ｈ_２Ｏ：エタノール、２０ｍＭ 酢酸トリエチルアンモ
ニウム ｐＨ７．０）から８０％溶媒Ｂ（４：１ Ｈ_２Ｏ：エタノール、２０ｍＭ 酢酸
トリエチルアンモニウム ｐＨ７．０、１Ｍ グアニジニウムヒドロクロリド）としてグ
ラジエント溶出した。画分を集めて、水で希釈してエタノール含量を５％まで下げた。こ
の溶液を５０ｍｌ／分でＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×５０ｍｍカラム
にポンプで充填し、生成物を１００ｍｌ／分で５分間水で洗浄した。この脱塩物を、カラ
ムを反転させ、２：３ Ｈ_２Ｏ：アセトニトリルを５０ｍｌ／分でカラムに流して溶出し
た。画分を凍結乾燥してＧ２をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓ
ｓ：９３９９．７，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：９３９９．５。

Ｇ３（Ｅｘ．５１）の合成
Ｇ２（４８３ｍｇ、０．０５１４ｍｍｏｌ）およびアジド−ｐｅｇ９−アミン（３２４
ｍｇ、０．６１７ｍｍｏｌ）を２，２，２−トリフルオロエタノール（５ｍｌ）および水
（５ｍｌ）に溶解させた。この溶液に窒素を１分間バブリングした。別のバイアルに、臭
化銅（Ｉ）ジメチルスルフィド（５０ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２
．５ｍｌ）に溶解させた。この溶液に窒素を１分間バブリングした。２つの溶液を混ぜ合
わせ、反応混合物に窒素を１分間バブリングした。バイアルを密封し、室温で１時間放置
した。反応混合物をＥＤＴＡ溶液（０．５Ｍ、ｐＨ８．０、１ｍＬ）でクエンチし、Ｗａ
ｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×２５０ｍｍカラムを装着したＨＰＬＣに充填
した。生成物を、１００ｍｌ／分で３０分かけて１００％溶媒Ａ（Ｈ_２Ｏ、０．１Ｍ 酢
酸トリエチルアンモニウム ｐＨ７．０）から４０％溶媒Ｂ（アセトニトリル）としてグ
ラジエント溶出した。画分を集めて、アセトニトリル含量を水で希釈して５％まで下げた
。この溶液を５０ｍｌ／分でＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×５０ｍｍカ
ラムにポンプで充填し、生成物を１００ｍｌ／分で５分間水で洗浄した。この脱塩物を、
カラムを反転させ、２：３ Ｈ_２Ｏ：アセトニトリルを５０ｍｌ／分でカラムに流して溶
出した。画分を凍結乾燥してＧ３をアモルファス固体として得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍ
ａｓｓ：１１５０６．２，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１１５０６．０。

Ｇ４（Ｅｘ．５２）の合成
Ｇ３（４５５ｍｇ、０．０３９６ｍｍｏｌ）を炭酸水素ナトリウム溶液（０．１Ｍ、５
ｍＬ）に溶解させた。ＮＨＳ−ＳＰＤＰ（１６０ｍｇ、０．５１２ｍｍｏｌ）をアセトニ
トリル（１．５ｍＬ）に溶解させた。これらの溶液を混ぜ合わせて、反応を室温で１５分
間放置した。反応混合物を、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ ５０×２５０ｍｍ
カラムを装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、１００ｍｌ／分で３０分かけて１００
％溶媒Ａ（Ｈ_２Ｏ、０．１Ｍ 酢酸トリエチルアンモニウム ｐＨ７．０）から４０％溶
媒Ｂ（アセトニトリル）としてグラジエント溶出した。画分を集めて、アセトニトリル含
量を水で希釈して５％まで下げた。この溶液を５０ｍｌ／分でＷａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄ
ｇｅ ５ｕｍ ５０×５０ｍｍカラムにポンプで充填し、生成物を１００ｍｌ／分で５分
間水で洗浄した。この脱塩物を、カラムを反転させ、２：３ Ｈ_２Ｏ：アセトニトリルを
５０ｍｌ／分でカラムに流して溶出した。画分を凍結乾燥してＧ４をアモルファス固体と
して得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１２２９５．３，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１２
２９５．１。

Ｇ５−Ｓｅｑ４８９（Ｅｘ．５３）の合成
ペプチドＳｅｑ．Ｉｄ４８９（ＣＩＦＧＡＩＡＧＦＩＫＮＩＷＥＧＬＩ すべて（Ｄ）
）（１３．６ｍｇ、０．００６９４ｍｍｏｌ）を、２０ｍＭ 酢酸を含むＤＭＳＯ（１ｍ
Ｌ）に溶解させた。別のバイアルに、Ｇ４（１０ｍｇ、０．０００８６７ｍｍｏｌ）を、
２０ｍＭ 酢酸を含むＤＭＳＯ（１ｍｌ）に溶解させた。２つの溶液を混ぜ合わせ、室温
で１時間放置した。反応をＮ−メチルマレイミド（７．７１ｍｇ、０．０６９４ｍｍｏｌ
）でクエンチし、Ａｇｉｌｅｎｔ ＰＬ−ＳＡＸ １０ｕｍ ２５×５０ｍｍカラムを装
着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、３０ｍｌ／分で２０分かけて１００％溶媒Ａ（２
：３ Ｈ_２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタノール、２０ｍＭ トリエチルアミン）か
ら７０％溶媒Ｂ（２：３ Ｈ_２Ｏ：２，２，２−トリフルオロエタノール、２０ｍＭ ト
リエチルアミン、０．５Ｍ グアニジニウムヒドロクロリド）としてグラジエント溶出し
た。画分を集めて、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ ５ｕｍ １９×２５０ｍｍカラムを
装着したＨＰＬＣに充填した。生成物を、２０ｍｌ／分で３０分かけて８５％溶媒Ａ（Ｈ
_２Ｏ、０．１Ｍ 酢酸ヘキシルアンモニウム ｐＨ７．０）から６５％溶媒Ｂ（テトラヒ
ドロフラン）としてグラジエント溶出した。画分を集めて、真空下でテトラヒドロフラン
含量を５％未満まで下げた。溶液を、１０ｋ膜を通して水に対して１回、０．１Ｍ 塩化
ナトリウムを含む４：１ Ｈ_２Ｏ：エタノールに対して再び１回、および水に対してさら
に２回遠心透析した。濃縮物を凍結乾燥してＧ５−Ｓｅｑ４８９をアモルファス固体とし
て得た。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１９７０８．１，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１９７
０８．０。

実施例５４
スキーム１７を図１８Ａ−１〜図１８Ｂ−２に示す。

Ｇ６−Ｓｅｑ４８９−ｇ（Ｅｘ．５４）の合成
Ｇ５−Ｓｅｑ４８９（８．５ｍｇ、０．０００４３４ｍｍｏｌ）およびＢ７（２．９８
ｍｇ、０．０００４３４ｍｍｏｌ）をＨ_２Ｏ（０．５ｍＬ）に溶解させた。溶液を室温で
１時間放置し、次いで凍結乾燥して二本鎖Ｇ６−Ｓｅｑ４８９−ｇをアモルファス固体と
して得た。パッセンジャー鎖のＥｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１９７０８．１，ｆｏｕｎ
ｄ ｍａｓｓ：１９７０８．３。ガイド鎖のＥｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：６８５２．５
，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：６８５２．６。

追加のＧ６−ペプチドコンジュゲートおよび二本鎖の合成。
Ｇ６およびペプチド配列の追加のコンジュゲートとその二本鎖とをＧ６−Ｓｅｑ４８９
−ｇに使用したのと類似の方法で調製した。

セクションＨ。３，８，１３，１８テトラペプチドの調製
実施例５５〜５８
下記スキーム１８を用いてＨ１〜Ｈ５を調製した。

Ｈ１（Ｅｘ．５５）の合成
窒素の不活性雰囲気をパージして維持した５００ｍＬ 丸底フラスコに、ジ−ｔｅｒｔ
−ブチル１−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレート（１５
ｇ、４６．８ｍｍｏｌ、２．００当量）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に
溶かした溶液を入れた。この丸底フラスコに、２−アミノエタンチオールヒドロクロリド
（２．６６ｇ、２３．４ｍｍｏｌ、１当量）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８０ｍｌ
）に溶かした溶液をゆっくりと加えた。これに、続いてトリエチルアミン（２．３６ｇ、
２３．４ｍｍｏｌ、１当量）を加えた。室温で一晩撹拌後、白色固体が沈殿していた。乾
燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）を加えて透明に近い溶液を得た。白色固
体が再び沈殿するまでトリエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で８時間撹拌した。
溶液を濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣にジエチルエーテル（２００ｍｌ）を加え、濾
過した。白色固体を集めて、乾燥機で乾燥させた。その後、この白色固体をジエチルエー
テルに５回溶解させ（５×１０ｍｌ）、数分間撹拌し、濾過した。所望の生成物を白色固
体として得た。^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ，ｐｐｍ）：１．３６（ｓ，９Ｈ
），３．０７（ｔ，２Ｈ），３．４（ｔ，２Ｈ），８．３（ｓ，２Ｈ）。

Ｈ３（Ｅｘ．５６）の合成
リトコール酸（Ｈ２）（７ｇｍ、１８．５９ｍｍｏｌ、１当量）を乾燥ジコロルメタン
（２００ｍｌ）に溶解させ、次いで０℃まで冷却した。この後、この溶液にＮ，Ｎ−ジシ
クロヘキシルカルボジイミド（４．６ｇ、２２．３１ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた。
０℃で３０分間撹拌後、ペンタフルオロフェノール（３．７６ｇｍ、２０．４５ｍｍｏｌ
、１．１当量）を含むジクロロメタン（１３ｍｌ）を加えた。次いでアルゴン下、室温で
さらに２０時間撹拌を続けた。沈殿したＮ，Ｎ−ジシクロヘキシル尿素を濾別し、冷ジク
ロロメタンで洗浄した。次いで合わせた濾液を減圧下で蒸発させた。次いで得られた油状
残渣をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＣｌ水溶液（６０ｍｌ）および水
（８０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。乾
燥させた化合物をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３ＯＨ、１００／０〜
９７／３で溶出）を用いて精製した。ＭＳ（ｍ／ｚ）；５６６［Ｍ＋Ｎａ］^＋

Ｈ４（Ｅｘ．５７）の合成
化合物Ｈ３（４．５ｇｍ、８．２９ｍｍｏｌ、１当量）を乾燥ジクロロメタン（１５ｍ
ｌ）に溶解させ、次いで０℃まで冷却した。得られた溶液に、２−（ｔｅｒｔ−ブチルジ
スルファニル）エタンアミン（Ｈ１）（２．０５７ｇｍ、１２．４４ｍｍｏｌ、１．５当
量）およびトリエチルアミン（２．５６ｇｍ、２．５２ｍｍｏｌ、３当量）をジクロロメ
タン（７ｍｌ）に溶かした冷混合物を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。ＴＬ
Ｃにより生成物の形成が確認された。反応混合物を飽和ＮａＣｌ水溶液（２０ｍｌ×２）
および水（２０ｍｌ×２）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空
乾燥させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３Ｏ
Ｈ、１００／０〜９５／５で溶出）により精製して純粋な化合物Ｈ４を得た。ＭＳ（ｍ／
ｚ）；５２４．３５，［Ｍ＋１］^＋

Ｈ５（Ｅｘ．５８）の合成
Ｈ４（３ｇｍ、５．７３ｍｍｏｌ、１当量）を乾燥ジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶解
させ、トリエチルアミンを加えた（０．８６９ｇ、８．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）。反
応混合物を０℃まで冷却した。２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロ
ホスフィット（２．７１ｇｍ、１１．４５ｍｍｏｌ、２当量）を含む乾燥ジクロロメタン
（１０ｍｌ）を反応混合物に滴下して加えた。得られた溶液を１時間撹拌した。ＴＬＣに
より生成物の形成が確認された。反応混合物を蒸発させ、シリカゲルカラム（ヘキサン／
酢酸エチル／トリエチルアミン、１００／０／１．５〜６０／４０／１．５で溶出）で精
製しした。ＭＳ（ｍ／ｚ）；７２４．４６［Ｍ＋１］^{＋ ３１}Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，
５００ＭＨｚ，ｐｐｍ）；１４６．５

実施例５９〜６６
図１９Ａ〜図１９Ｉ−２に示したようなスキーム１９を用いてＥｘ．５９〜Ｅｘ．６６
を調製した。

Ｈ６（Ｅｘ．５９）の合成
反応手順に関するＢ２の合成を参照されたい。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：９６０９
．０７１，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：９６０５。

Ｈ７（Ｅｘ．６０）の合成
Ｈ６（１５ｍｇ、１．５６ｕｍｏｌ、１当量）を水（１４００ｕｌ）に溶かした溶液に
、ＴＣＥＰ−ＨＣｌ（２６．８ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ、６０当量）を加えた。反応混
合物をＴＣＥＰ−ＨＣｌが完全に溶解するまで混合した。溶液を室温で一晩放置した。溶
液を、３Ｋ膜を通して水に対して２回遠心透析した。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：９５
２０，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：９５１７。

Ｈ８（Ｅｘ．６１）の合成
反応手順に関するＢ９の合成を参照されたい。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：９６３０
，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：９６２７。

Ｈ９−Ｓｅｑ３２（Ｅｘ．６２）の合成
反応手順に関するＢ１０−ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａ
ｓｓ：１３５９７，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１３５９８。

Ｈ７−Ｓｅｑ３２−ｈ（Ｅｘ．６３）の合成
反応手順に関するＢ１１−ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。

Ｈ８（Ｅｘ．６４）の合成
反応手順に関するＣ１３の合成を参照されたい。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：９７４
１。

Ｈ９−Ｓｅｑ３２（Ｅｘ．６５）の合成
反応手順に関するＣ１４の合成を参照されたい。Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１３８
１９，ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１３８２０。

Ｈ１０−Ｓｅｑ３２−ｈ（Ｅｘ．６６）の合成
反応手順に関するＣ１５−Ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。

Ｈ７およびＨ１０ペプチドコンジュゲートの追加合成
Ｈ７およびＨ１０とペプチド配列との追加のコンジュゲート、ならびにその二本鎖をＨ
７−Ｓｅｑ３２−ｈおよびＨ１０−Ｓｅｑ３２−ｈに使用したのと類似の方法で調製した
。

セクションＩ。３酵素で切断可能な３，１３，１８リンカーペプチドコンジュゲートの調
製
実施例６７〜７３
スキーム２０を図２０Ａ−１〜図２０Ｅ−２に示す。

Ｉ３（Ｅｘ．６７）の合成
Ｉ１（１６０ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）およびＩ２（４８．８ｍｇ、０．２１９ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＡ（１ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−メチルモルホリン（４６μＬ、０．４１７ｍ
ｍｏｌ）で処理した。反応を室温で６時間撹拌し、次いでＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５〜２
０：８０％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝０．１％ＴＦＡ水溶液；Ｂ＝０．１％ＴＦＡ
を含むアセトニトリル）Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌｕｍｎ １９×
２５０ｍｍ）により精製した。Ｉ３を含む画分を２：１ ＤＣＭ：ＭｅＯＨで抽出し、Ｎ
ａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して生成物を得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍ
ａｓｓ＝８１４．３

Ｉ４（Ｅｘ．６８）の合成
Ｉ３（８８ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）をＤＭＡ（１ｍＬ）に溶解させ、ピペリジン（
２００μＬ、２．０２ｍｍｏｌ）で処理し、１０℃で１０分間撹拌した。ＴＦＡ（１５６
μＬ、２．０２ｍｍｏｌ）を加えて反応をクエンチした。反応混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ
（９５：５〜６０：４０％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝０．１％ＴＦＡ水溶液；Ｂ＝
０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル）Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌ
ｕｍｎ ３０×２５０ｍｍ）により精製した。Ｉ４を含む画分を凍結乾燥して生成物を得
た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝５９２．３。

Ｉ５（Ｅｘ．６９）の合成
Ｉ４（９１２ｍｇ、１．３２４ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（７．７ｍＬ）に溶解させ、Ｌ１
（１．０ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（４６３μＬ、２．６５ｍｍｏｌ）で処
理した。反応混合物を１５分間撹拌し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（１００：０〜０：１００％ Ａ
：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝０．１％ＴＦＡ水溶液；Ｂ＝０．１％ＴＦＡを含むアセトニ
トリル）Ｗａｔｅｒｓ Ｃ１８ ｘｂｒｉｄｇｅカラムにより精製した。Ｉ５を含む画分
を凍結乾燥して生成物を得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝６０９．５［Ｍ＋２］

Ｉ７（Ｅｘ．７０）の合成
Ｉ６（５００ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）およびＩ５（２３６ｍｇ、０．１９４ｍｍｏ
ｌ）をｐＨ５．５ ＭＥＳ緩衝液（５１．６ｍｌ、５００ｍＭ）およびアセトニトリル（
１２．９１ｍｌ）に溶解させた。溶液を窒素で１０分間脱気し、その後、これをＣｕＢｒ
．ＳＭｅ_２（１３３ｍｇ、０．６４６ｍｍｏｌ）で処理し、窒素でさらに５分間脱気した
。反応混合物を音波処理し、３０分間撹拌し、次いでＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５〜５：９
５％ Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡ水溶液；Ｂ＝１００ｍＭ Ｔ
ＥＡＡのアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅｎｙｌ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌｕ
ｍｎ）により精製した。生成物を含む画分を、３Ｋ膜を通して０．３２Ｍ ＥＤＴＡ ｐ
Ｈ６．５に対して２回、次いで水に対して３回透析した。次いで濃縮物を２００ｍＭ Ｔ
ＥＡＡに対して２回、次いで水に対して３回透析した。濃縮物を凍結乾燥して生成物を白
色アモルファス固体として得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝１１４００

Ｉ８（Ｅｘ．７１）の合成
Ｉ７（２８７ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を水（１００ｕＬ）に懸濁し、ＮＭＰ（２．
０ｍＬ）で希釈し、静置すると均一溶液が得られた。ＨＡＴＵ（１３ｍｇ、０．０３５ｍ
ｍｏｌ）をＮＭＰ（２００ｕＬ）に溶解させ、Ａ１０（６２ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）
に加えた。反応混合物をＮＭＰ（２００ｕＬ）で希釈し、次いでＤＩＥＡ（１３ｕＬ、０
．０７６ｍｍｏｌ）で処理した。次いでＨＡＴＵ反応混合物を一度にＲＮＡ溶液に加え、
１０分間熟成させた。反応をＤＩ水で希釈し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（９５：５〜５：９５％
Ａ：Ｂ直線グラジエント（Ａ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡ水溶液；Ｂ＝１００ｍＭ ＴＥＡＡ
のアセトニトリル溶液）Ｗａｔｅｒｓ Ｐｈｅｎｙｌ ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃｏｌｕｍｎ）
により精製した。Ｉ８を含む画分を、３Ｋ膜を通して水に対して３回透析した。濃縮物を
凍結乾燥して生成物を白色アモルファス固体として得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝
１３０２７。

Ｉ９−Ｓｅｑ１６８１（Ｅｘ．７２）の合成
Ｉ８（２０ｍｇ、１．５３７μｍｏｌ）を、５０ｍＭ ＡｃＯＨ（２ｍＬ）で変性させ
たＴＦＥに溶解させた。別のバイアルに、Ｓｅｑ ＩＤ１６８１（８．６３ｍｇ、６．１
５ｕｍｏｌ）を８Ｍ Ｇｎ．ＨＣｌ（４００ｕＬ）に懸濁し、５０ｍＭ ＡｃＯＨを含む
ＴＦＥ（２ｍＬ）で希釈すると少し濁った懸濁液が形成され、次いでＲＮＡ溶液に加えた
。１０分後、さらにＳｅｑ ＩＤ１６８１（８．６３ｍｇ、１．５４ｕｍｏｌ）を加え、
反応を３０分熟成させ、その後ＡＥＸにより、所望の生成物にほぼ完全に変換されたこと
が確認された。反応をＮ−メチルマレイミド（６．８３ｍｇ、６１．５μｍｏｌ）でクエ
ンチし、ＡＥＸ（０〜４０％ １Ｍ Ｇｎ．ＨＣｌを含む１：１ 水：ＴＦＥ（４０ｍＭ
ＴＥＡＡ ｐＨ７．５を含む）、６０℃まで加熱したＰｒｏｔｅｏｍｉｘ ＮＰ１０
カラム）により精製した。材料を、２００ｍＭ ＨＡＡ ｐＨ７．５：ＡＣＮの７０：３
０〜２５：７５のグラジエントおよびＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬＲＰ−Ｓカラムを用いて再精
製した。純粋な画分をプールし、透析し、凍結乾燥してＩ９−Ｓｅｑ１６８１（６．３７
ｍｇ、０．３０２μｍｏｌ、１９．６５％の収率）を得た。

Ｉ１０−Ｓｅｑ１６８１−ｆ（Ｅｘ．７３）の合成
Ｉ９−ｓｅｑ１６８１（３．０２ｍｇ、０．１４３μｍｏｌ）を水（９５０μｌ）に溶
解させ、Ｂ７（０．９８０ｍｇ、０．１４３μｍｏｌ）を水（１４４μｌ）に溶かした溶
液で処理した。反応混合物を１５分間熟成させ、次いで凍結乾燥して生成物を白色アモル
ファス固体として得た。Ｍｅａｓｕｒｅｄ ｍａｓｓ＝２１１０７。

Ｉ１０ペプチドコンジュゲートおよび二本鎖の追加合成。
Ｉ１０およびペプチド配列の追加のコンジュゲートとその二本鎖とをＩ１０−ｓｅｑ−
１６８１−ｆに使用したのと類似の方法で調製した。

セクションＪ。アミノ修飾Ｃ２リンカーの調製
実施例７４〜８２
スキーム２１を図２１Ａ〜図２１Ｈ−２に示す。

Ａ１０Ｂ（Ｅｘ．７４）の合成
撹拌子を備えた試験管内で、Ａ１０（１００ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（
６１１μｌ）に溶解させ、続いてヒューニッヒ塩基（１３３μｌ、０．７６４ｍｍｏｌ）
およびＨＡＴＵ（７６ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）を加えた。２０分後、４００μＬのＤ
ＭＳＯに溶解させたＮ−（２−アミノエチル）マレイミドトリフルオロアセテート塩（１
２．８５ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を加えた。２０分後、反応が終了したことを確認し
、黄色がほとんど消失するまで水（１．５ｍＬ）でクエンチした。反応を、逆相クロマト
グラフィー（Ｇｉｌｓｏｎ ２０２０、溶媒Ａ）０．１％ＴＦＡを含む水／溶媒Ｂ）０．
１％ＴＦＡを含むＡＣＮ、１５分間の０〜５０％グラジエント、４０ｍＬ／分、ＸＢｒｉ
ｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ ３０×２５０ｍｍ）により精製した。得ら
れた画分を凍結乾燥して白色固体、Ａ１０Ｂを得た。［Ｍ＋１，ｅｘｐｅｃｔｅｄ］＝１
７５７．８０７，［Ｍ＋１，ｏｂｓｅｒｖｅｄ］＝１７５９．０。

Ｊ２（Ｅｘ．７５）の合成
反応手順に関するＢ３の合成を参照されたい。Ｊ２［Ｍ＋１，ｅｘｐｅｃｔｅｄ］＝７
６０４．７５０，［Ｍ＋１，ｏｂｓｅｒｖｅｄ］＝７６００．０。

Ｊ３（Ｅｘ．７６）の合成
Ａ１０Ｂ（１０．２６ｍｇ、５．８４μｍｏｌ）を水（７００μＬ）に溶解させ、Ｊ２
（２９．６ｍｇ、３．８９μｍｏｌ）の１．８ｍＬ溶液（水１：酢酸塩緩衝液１：ホルム
アミド２）に加えた。反応を室温で２０分間振盪し、次いで終了を確認した。反応混合物
を、強陰イオン交換クロマトグラフィー（Ｇｉｌｓｏｎ ＰＬＣ ２０２０、Ｓｅｐａｘ
Ｐｒｏｔｅｏｍｉｘ ＳＡＸ ＮＰ１０ ２１．２×５０ｍｍ、緩衝液Ａ：３：２ ト
リフルオロエタノール：水、４０ｍＭ トリエチルアミン／緩衝液Ｂ：３：２ トリフル
オロエタノール：水、４０ｍＭ トリエチルアミン、１０００ｍＭ グアニジン−ＨＣｌ
、１％Ｂを３分間保持、次いで１２分かけて５％Ｂ〜４５％Ｂ）を用いて精製した。画分
を、３Ｋ膜を通して水に対して３回透析して白色固体、Ｊ３を得た。［Ｍ＋１，ｅｘｐｅ
ｃｔｅｄ］＝９３６２．５５６，［Ｍ＋１，ｏｂｓｅｒｖｅｄ］＝９３５９．０。

Ｊ４（Ｅｘ．７７）の合成
エッペンドルフバイアル中で、Ｊ３（６．３４ｍｇ、０．６７８μｍｏｌ）を水（２５
０μＬ）に溶解させた。別のエッペンドルフバイアル中で、Ｎ−スクシニミジル３−（２
−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（０．８３１ｍｇ、２．０３５μｍｏｌ
）をＤＭＳＯ（５０μＬ）に溶解させた。ＳＰＤＰ溶液をＲＮＡ溶液に加えた。４時間後
、反応を、５０μＬ ＤＭＳＯに溶解させた別のＳＰＤＰ（２．７７ｍｇ、６．７８μｍ
ｏｌ）に再び仕込んだ。２４時間後、反応を、５０μＬ ＤＭＳＯに溶解させた別のＳＰ
ＤＰ（２．７７ｍｇ、６．７８μｍｏｌ）に再び仕込んだ。７２時間後、３９０μＬのｐ
Ｈ８．１ 炭酸水素ナトリウムを加えて反応を３ｍｇ／ｍＬに希釈した。２時間後、別の
３当量のＳＰＤＰを含む５０μＬ ＤＭＳＯを加えた。反応混合物を、３Ｋ膜を通して水
に対して３回透析し、凍結乾燥して白色固体、Ｊ４を得た。［Ｍ＋１，ｅｘｐｅｃｔｅｄ
］＝９５４３．８３４，［Ｍ＋１，ｏｂｓｅｒｖｅｄ］＝９５５４．０。

Ｊ５−Ｓｅｑ２６（Ｅｘ．７８）の合成
反応手順に関するＢ１０−Ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。Ｊ５−Ｓｅｑ２６−Ｍａ
ｓｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ：１１４１３。

Ｊ６−Ｓｅｑ２６−ｉ（Ｅｘ．７９）の合成
反応手順に関するＢ１１−Ｓｅｑ３２−ｂの合成を参照されたい。Ｊ６−Ｓｅｑ２６−
ｉ−Ｍａｓｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ：１８２６５。

Ｊ７（Ｅｘ．８０）の合成
エッペンドルフバイアル中で、Ｊ３（５．８ｍｇ、０．６２１μｍｏｌ）を水（２５０
μＬ）に溶解させた。別のエッペンドルフバイアル中で、スクシニミジル−４−（Ｎ−マ
レイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）（０．７２７ｍｇ
、１．８６２μｍｏｌをＤＭＳＯ（５０μＬ）に溶解させ、１滴のＴＦＡを加えてｐＨを
ｐＨ５に調整した。ＳＭＣＣ溶液をＲＮＡ溶液に加えた。数時間後、０．１Ｎ ＮａＯＨ
を徐々に加えてｐＨをｐＨ７に調節した。１８時間後、６当量のＳＭＣＣを５０μＬ Ｄ
ＭＳＯに溶解させ、反応混合物に加えた。４時間後、別の３当量のＳＭＣＣを含む５０μ
Ｌ ＤＭＳＯを反応に加えた。数時間後、３００μＬのｐＨ８．１ 炭酸水素ナトリウム
溶液を反応に加えた。反応を、３Ｋ膜を通して水に対して３回透析し、凍結乾燥して白色
固体、Ｊ７を得た。［Ｍ＋１，ｅｘｐｅｃｔｅｄ］＝９５４３．８３４，［Ｍ＋１，ｏｂ
ｓｅｒｖｅｄ］＝９５５４．０。

Ｊ８−Ｓｅｑ２６（Ｅｘ．８１）の合成
反応手順に関するＢ１０−Ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。Ｊ８−Ｓｅｑ２６−Ｍａ
ｓｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ：１１５４５。

Ｊ９−Ｓｅｑ２６−ｉ（Ｅｘ．８２）の合成
反応手順に関するＢ１１−Ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。Ｊ９−Ｓｅｑ２６−Ｉ−
Ｍａｓｓ ｅｘｐｅｃｔｅｄ：１８３９７。

Ｊ６およびＪ９のペプチドコンジュゲートの追加合成。
Ｊ６およびＪ９とペプチド配列との追加のコンジュゲートならびにその二本鎖をＪ６−
Ｓｅｑ２６、Ｊ９−Ｓｅｑ２６およびＪ６−Ｓｅｑ２６−ｉ、Ｊ９−Ｓｅｑ２６−ｉに使
用したのと類似の方法で調製した。

セクションＫ。３’ビスペプチドリンカー
実施例８３〜８７
スキーム２２を図２２Ａ−１〜図２２Ｄ−２に示す。

Ｋ２（Ｅｘ．８３）の合成
２０ｍＬ バイアル中で、３−（トリチルチオ）プロパン酸（１５８ｍｇ、０．４５４
ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５１４ｍＬ）に溶解させ、続いてＨＡＴＵ（１８４ｍｇ、０．
４８４ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（０．１５８ｍＬ、０．９０８ｍｍｏｌ）を加
えた。反応液の色は淡黄色になった。５分後、Ｋ１（１００ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）
を固体として加えると、反応液の色は透明なオレンジ色になった。反応を室温で１５分間
撹拌し、次いで終了を確認した。

反応を、逆相クロマトグラフィー（Ｇｉｌｓｏｎ ２０２０、０．１％ＴＦＡモディフ
ァイヤーを含む５〜９５％ＡＣＮ／水、流速：２０ｍＬ／分、グラジエント時間：２２分
、カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ ＯＢＤ ５μｍ Ｃ１８ １９×２５０ｎｍ）に
より精製した。得られた画分を凍結乾燥して白色固体、Ｋ２を得た。［Ｍ＋１，ｅｘｐｅ
ｃｔｅｄ］＝８７７．０５９，［Ｍ＋１，ｏｂｓｅｒｖｅｄ］＝８７７．４

Ｋ３（Ｅｘ．８４）の合成
エッペンドルフバイアル中で、Ｋ２（１０．０７ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）をホルム
アミド（０．５ｍＬ）に溶解させた。１５ｍＬ ファルコンチューブ中で、ペプチドＳｅ
ｑ ＩＤ７４（５７．９２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）をホルムアミド（１ｍＬ）に溶解
させた。ペプチド／ホルムアミド溶液をリンカー／ホルムアミド溶液に加え、室温で２０
分間撹拌した。

反応が終了したことを確認し、反応を、逆相クロマトグラフィー（Ｇｉｌｓｏｎ ２０
２０、０．１％ＴＦＡモディファイヤーを含む５〜１００％ＡＣＮ／水、流速：２０ｍＬ
／分、グラジエント時間：３０分、カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ ＯＢＤ ５μｍ
Ｃ１８ １９×２５０ｎｍ）により精製した。得られた画分を凍結乾燥して白色固体、
Ｋ３を得た。［Ｍ＋３，ｅｘｐｅｃｔｅｄ］＝１４１６．０３，［Ｍ＋３，ｏｂｓｅｒｖ
ｅｄ］＝１４１５．０

Ｋ４（Ｅｘ．８５）の合成
４０ｍＬ バイアル中で、ＴＦＡ（１０００μＬ）、水（９６μＬ）およびトリイソプ
ロピルシラン（９６μＬ）を体積で０．８３：０．０８：０．０８に混合した溶液を組み
合わせて、２０ｍＬ バイアル中のＫ３（４７ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）に加え、これ
を室温で１０分間撹拌した。さらに５００μＬのＴＦＡを加え、反応をさらに１０分間撹
拌した。反応の終了を確認し、減圧下で濃縮し、３．５ｍＬの２Ｍ チオ尿素 ｐＨ６．
５を含むＦＭＤおよびＭＥＳで希釈し、逆相クロマトグラフィー（Ｇｉｌｓｏｎ ２０２
０、０．１％ＴＦＡモディファイヤーを含む５〜８０％ＡＣＮ／水、流速：２０ｍＬ／分
、グラジエント時間：２０分、カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ ＯＢＤ ５μｍ Ｃ
１８ １９×２５０ｎｍ）により精製した。得られた画分を凍結乾燥して白色固体、Ｋ４
を得た。［Ｍ＋３，ｅｘｐｅｃｔｅｄ］＝１３３４．３４，［Ｍ＋３，ｏｂｓｅｒｖｅｄ
］＝１３３４．４

Ｋ５−Ｓｅｑ７４（Ｅｘ．８６）の合成
反応手順に関するＢ１０−Ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。Ｋ５−Ｓｅｑ７４−Ｅｘ
ｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１３１７８．１０３。

Ｋ６−Ｓｅｑ７４−ｂ（Ｅｘ．８７）の合成
反応手順に関するＢ１０−Ｓｅｑ３２の合成を参照されたい。Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｍａ
ｓｓパッセンジャー＝１５９０７；Ｏｂｓｓｅｒｖｅｄ ｍａｓｓ ガイド＝８７４４；
二本鎖＝２４６５１。

Ｋ５ペプチドコンジュゲートおよび二本鎖の追加合成。
Ｋ５およびペプチド配列の追加のコンジュゲートならびに対応する二本鎖をＫ５−Ｓｅ
ｑ７４およびＫ６−Ｓｅｑ７４−ｂに使用したのと類似の方法で調製した。

セクションＬ。ガイド鎖２’位−１０，１５ＥＣＬペプチドコンジュゲートの調製
実施例８８〜９４
スキーム２３を下記および図２３Ａ〜図２３Ｃ−２に示す。

Ｌ３（Ｅｘ．８８）の合成
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−
（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミ
ノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２
−イル）カルバメートＬ１（５００ｍｇ、０．６５２ｍｍｏｌ）、２−（ピリジン−２−
イルジスルファニル）エタンアミンヒドロクロリド（１５３ｍｇ、０．６８５ｍｍｏｌ）
、およびＮ−メチルモルホリン（０．１４３ｍＬ、１．３０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチ
ルアセトアミド（３ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を室温で１６時間熟成させ、４０ｍ
Ｌ／分で２０分かけての、０．１％ＴＦＡを含む５〜８０％ＡＣＮ／水のグラジエントに
よりＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８ カラム（５ｕＭ、３０×２５０ｍｍ）を用
いた逆相クロマトグラフィーによって精製した。生成物を凍結乾燥してＬ３を固体として
得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：８１４（Ｍ＋１）。

Ｌ４（Ｅｘ．８９）の合成
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１−（（
（Ｓ）−１−オキソ−１−（（４−（（（（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）
エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−５−ウレイドペンタン−
２−イル）アミノ）ブタン−２−イル）カルバメートＬ３（３４３ｍｇ、０．４２１ｍｍ
ｏｌ）およびピペリジン（２００ｕＬ、２．０２ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセトア
ミド（３ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を室温で１０分間熟成させ、トリフルオロ酢酸
（１５６ｕＬ、２．０２ｍｍｏｌ）でクエンチし、４０ｍＬ／分で２０分かけての、０．
１％トリフルオロ酢酸を含む５〜４０％アセトニトリル／水のグラジエントによりＷａｔ
ｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８ カラム（５ｕＭ、３０×２５０ｍｍ）を用いた逆相ク
ロマトグラフィーによって精製した。生成物を凍結乾燥してＬ４を固体として得た。ＭＳ
（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋１）。

Ｌ６（Ｅｘ．９０）の合成
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイド
ペンタンアミド）ベンジル（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）カルバ
メートＬ４（２３８ｍｇ、０．３４６ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１．５ｍＬ）
に溶かした溶液に、ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オクタンジオアート
Ｌ５（５０９ｍｇ、１．３８２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０９６ｍＬ、０
．６９１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を１５分間熟成させ、６０ｍＬ／分で３
０分かけての１〜１０％メタノール／ジクロロメタンのグラジエントによりシリカゲルカ
ラム（８０ｇ）で精製してＬ６を固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：８４５（Ｍ＋１）

Ｌ８（Ｅｘ．９１）の合成
ＲＮＡ化合物Ｌ７（１６３ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）および２−アジドエタンアミン
ヒドロクロリド（３０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド：水
（２ｍＬ）のアルゴン脱気した３：１混合物に溶解させた。臭化銅（Ｉ）ジメチルスルフ
ィド錯体（１２ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）のアルゴン脱気した溶液を加え、混合物を４
５℃で１６時間熟成させた。混合物をＥＤＴＡ（３ｍＬ）の０．５Ｍ溶液でクエンチし、
１５分放置した。生成物を水に対して（３回）回転透析して単離し、続いて凍結乾燥して
固体を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：７０８６。

Ｌ９（Ｅｘ．９２）の合成
ＲＮＡ化合物Ｌ８（４６ｍｇ、６．４９μｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（７．
１ｍＬ、６５μｍｏｌ）を１０℃で水（２５０μＬ）およびＤＭＳＯ（２５０μＬ）に溶
解させた。この混合物に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル８−（（（Ｓ）−３−
メチル−１−オキソ−１−（（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（４−（（（（２−（ピリジ
ン−２−イルジスルファニル）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミ
ノ）−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）ブタン−２−イル）アミノ）−８−オ
キソオクタノアートＬ６（１８ｍｇ、２１μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５００μＬ）に溶解さ
せた溶液を加えた。反応混合物を１６時間熟成させ、水（１．５ｍＬ）で希釈し、２０ｍ
Ｌ／分で１５分かけての、１００ｍＭ 酢酸トリエチルアンモニウムを含む０〜５５％ア
セトニトリル／水のグラジエントによりＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（
５μＭ、１９×２５０ｍｍ）を用いたイオン対クロマトグラフィーによって精製した。生
成物を水に対して（３回）回転透析して単離し、続いて凍結乾燥して固体を得た。ＭＳ（
ｍ／ｚ）：８５４７。

Ｌ１０−Ｓｅｑ４６３（Ｅｘ．９３）の合成
ＲＮＡ化合物Ｌ９（１１ｍｇ、１．２９μｍｏｌ）を、５０ｍＭ 酢酸を含むトリフル
オロエタノール（５００μＬ）に溶解させた。この溶液に、５０ｍＭ 酢酸を含むトリフ
ルオロエタノール（１０００μＬ）に溶解させたペプチドＳｅｑ４６３（８．６６ｍｇ、
５．１５μｍｏｌ）を加えた。混合物を１０分間熟成させ、Ｎ−メチルマレイミド（１．
９ｍｇ、４４μｍｏｌ）でクエンチし、２０ｍＬ／分で１５分かけての、１００ｍＭ 酢
酸トリエチルアンモニウムを含む５〜９５％アセトニトリル／水のグラジエントによりＷ
ａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（１０μＭ、１９×２５０ｍｍ）を用いたイ
オン対クロマトグラフィーによって精製した。生成物を水に対して（３回）回転透析して
単離し、続いて凍結乾燥して固体を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１６８７。

Ｌ１１−Ｓｅｑ４６３−ｊ（Ｅｘ．９４）の合成
Ｌ１０−Ｓｅｑ４６３（２．４６ｍｇ、０．２７μｍｏｌ）をＤＩ水（３００μＬ）に
溶解させた溶液を、Ｂ２（３．１ｍｇ、０．２７μｍｏｌ）に加え、９０℃で１分間加熱
した。溶液を凍結乾燥して二本鎖を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）パッセンジャー
鎖：９２６７，ガイド鎖：１１６８６。

Ｌ１０ペプチドコンジュゲートおよびＬ１１二本鎖の追加合成。
ペプチド配列の追加のＬ１０コンジュゲートおよび対応する二本鎖Ｌ１１を上記に詳述
したのと類似の方法で調製した。

セクションＭ。ガイド鎖２’位−１０，１５ジスルフィドペプチドコンジュゲートの合成
実施例９５〜９８
スキーム２４を図２４Ａ−１〜図２４Ｂ−２に示す。

Ｍ１（Ｅｘ．９５）の合成
３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパン酸（５０６ｍｇ、２．３５ｍｍｏ
ｌ）、２−アジドエタンアミンヒドロクロリド（３１７ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ）、１−
エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（４９６ｍｇ、２．５９ｍ
ｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１９９ｍｇ、１．４６ｍｍｏ
ｌ）、およびｎ−メチルモルホリン（０．４４ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン
（２５ｍＬ）に溶解させた。混合物を１時間熟成させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２
５ｍＬ）で希釈し、有機層を分離した。その後ジクロロメタンで水相を抽出し（２×２５
ｍＬ）、合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、固体濾別し、真空中で濃縮し
た。混合物を、３０ｍＬ／分で１５分かけての、０〜５０％酢酸エチル／ジクロロメタン
のグラジエントによりシリカゲルカラム（８０ｇ）を用いて精製してＭ１の透明な油を得
た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８４。

Ｍ２（Ｅｘ．９６）の合成
ＲＮＡ化合物Ｌ７（１８０ｍｇ、２６μｍｏｌ）およびＭ１（５９ｍｇ、２０８μｍｏ
ｌ）を１００ｍＭのｐＨ５．５ ＭＥＳ緩衝液（３．６ｍＬ）およびアセトニトリル（０
．９ｍＬ）に溶解させた。この混合物をアルゴンで１５分間脱気した。この溶液に、臭化
銅（Ｉ）ジメチルスルフィド錯体（１３ｍｇ、６５μｍｏｌ）をアセトニトリル（０．４
５ｍＬ）に溶解させた脱気した溶液に加え、室温で２８時間熟成させた。混合物を、ＥＤ
ＴＡ（５ｍＬ）の１００ｍＭのｐＨ８溶液でクエンチし、１５分間放置した。混合物を、
３０ｍＬ／分で１５分かけての、１００ｍＭ 酢酸トリエチルアンモニウムを含む０〜３
０％アセトニトリル／水のグラジエントによりＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカ
ラム（５μＭ、３０×１５０ｍｍ）を用いたイオン対クロマトグラフィーによって精製し
た。生成物を水に対して（３回）回転透析して単離し、続いて凍結乾燥してＭ２の固体を
得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：７４８１。

Ｍ３−Ｓｅｑ４６３（Ｅｘ．９７）の合成
ＲＮＡ化合物Ｍ２（２７．３ｍｇ、３．６５μｍｏｌ）を、５０ｍＭ 酢酸を含むトリ
フルオロエタノール（１３００μＬ）に溶解させた。この溶液に、５０ｍＭ 酢酸を含む
トリフルオロエタノール（１３００μＬ）に溶解させたペプチドＳｅｑ４６３（１５．４
ｍｇ、９．１３μｍｏｌ）を加えた。混合物を１０分間熟成させ、Ｎ−メチルマレイミド
（１０．１ｍｇ、９１μｍｏｌ）でクエンチし、２０ｍＬ／分で１５分かけての、１００
ｍＭ 酢酸トリエチルアンモニウムを含む５〜８０％アセトニトリル／水のグラジエント
によりＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（１０μＭ、１９×２５０ｍｍ）を
用いたイオン対クロマトグラフィーによって精製した。生成物を水に対して（３回）回転
透析して単離し、続いて凍結乾燥してＭ３−Ｓｅｑ４６３の固体を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）
：１０６２４。

Ｍ４−Ｓｅｑ４６３−ｊ（Ｅｘ．９８）の合成
Ｂ２（２．１８ｍｇ、０．２４μｍｏｌ）をＤＩ水（２９０μＬ）に溶解させた溶液を
Ｍ３−Ｓｅｑ４６３（２．５ｍｇ、０．２４μｍｏｌ）に加え、９０℃で１分間加熱した
。この溶液を凍結乾燥して二本鎖Ｍ４−Ｓｅｑ４６３−ｊを白色固体として得た。ＭＳ（
ｍ／ｚ）パッセンジャー鎖：９２６７，ガイド鎖：１０６２１

Ｍ３ペプチドコンジュゲートおよびＭ４二本鎖の追加合成。
ペプチド配列の追加のＭ３コンジュゲートおよび対応する二本鎖Ｍ４を上記に詳述した
のと類似の方法で調製した。

セクションＮ。ガイド鎖２’位−１５ジスルフィドペプチドコンジュゲートの合成
実施例９９〜１００
スキーム２５を図２５Ａ〜図２５Ｂ−２に示す。

Ｎ３−Ｓｅｑ２８３（Ｅｘ．９９）の合成
ＲＮＡ化合物Ｎ２（１１ｍｇ、１．５４μｍｏｌ；ジ−ｃｌｉｃｋ基質に関するセクシ
ョンＭに詳述するように調製）を、５０ｍＭ 酢酸を含むトリフルオロエタノール（１３
００μＬ）に溶解させた。この溶液に、５０ｍＭ 酢酸を含むトリフルオロエタノール（
１３００μＬ）に溶解させたペプチドｓｅｑ２８３（３．５７ｍｇ、２．３１μｍｏｌ）
を加えた。混合物を１０分間熟成させ、２０ｍＬ／分で１５分かけての、１００ｍＭ 酢
酸トリエチルアンモニウムを含む５〜８０％アセトニトリル／水のグラジエントによりＷ
ａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（１０μＭ、１９×２５０ｍｍ）を用いたイ
オン対クロマトグラフィーによって精製した。生成物を水に対して（３回）回転透析して
単離し、続いて凍結乾燥して固体を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：８６００。

Ｎ４−Ｓｅｑ２８３−ｋ（Ｅｘ．１００）の合成
Ｂ２（５．６５ｍｇ、０．６０９μｍｏｌ）をＤＩ水（４２３μＬ）に溶解させた溶液
を、Ｎ３−Ｓｅｑ２８３（５．２４ｍｇ、０．６０９μｍｏｌ）に加え、９０℃で１分間
加熱した。溶液を凍結乾燥して二本鎖を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）パッセンジ
ャー鎖：９２６８，ガイド鎖：８６０１。

Ｎ３ペプチドコンジュゲートおよびＮ４二本鎖の追加合成。
ペプチド配列の追加のＮ３コンジュゲートおよび対応する二本鎖Ｎ４を上記に詳述した
のと類似の方法で調製した。

セクションＯ。ガイド鎖２’位−１５ＥＣＬペプチドコンジュゲートの合成
実施例１０１〜１０３
スキーム２６を図２６Ａ−１〜図２６Ｂ−２に示す。

Ｏ２（Ｅｘ．１０１）の合成
ＲＮＡ化合物Ｏ１（２０．７ｍｇ、２．９７μｍｏｌ；Ｌ８と類似方法で調製）を１０
０ｍＭ ＮａＨＣＯ_３（４００μＬ）およびＤＭＳＯ（３００μＬ）に溶解させた。この
混合物に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル８−（（（Ｓ）−３−メチル−１−オ
キソ−１−（（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（４−（（（（２−（ピリジン−２−イルジ
スルファニル）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−５−ウレ
イドペンタン−２−イル）アミノ）ブタン−２−イル）アミノ）−８−オキソオクタノア
ートＬ６（６．２８ｍｇ、７．４３μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２５０μＬ）に溶解させた溶
液を加えた。反応混合物を１．５時間熟成させ、水（１．５ｍＬ）で希釈し、２０ｍＬ／
分で１５分かけての、１００ｍＭ 酢酸トリエチルアンモニウムを含む０〜６０％アセト
ニトリル／水のグラジエントによりＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（５μ
Ｍ、１９×２５０ｍｍ）を用いたイオン対クロマトグラフィーによって精製した。生成物
を水に対して（３回）回転透析して単離し、続いて凍結乾燥して固体を得た。ＭＳ（ｍ／
ｚ）：７６９６。

Ｏ２−Ｓｅｑ４６３（Ｅｘ．１０２）の合成
ＲＮＡ化合物Ｏ２（１０ｍｇ、１．３０μｍｏｌ）を、５０ｍＭ 酢酸を含むトリフル
オロエタノール（１０００μＬ）に溶解させた。この溶液に、５０ｍＭ 酢酸を含むトリ
フルオロエタノール（５００μＬ）に溶解させたペプチドＳｅｑ４６３（３．２８ｍｇ、
１．９５μｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間熟成させ、２０ｍＬ／分で１５分かけての
、１００ｍＭ 酢酸トリエチルアンモニウムを含む５〜９０％アセトニトリル／水のグラ
ジエントによりＷａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（５μＭ、１９×２５０ｍ
ｍ）を用いたイオン対クロマトグラフィーによって精製した。生成物を水に対して（３回
）回転透析して単離し、続いて凍結乾燥して固体を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９２６８。

Ｏ３−Ｓｅｑ４６３−ｋ（Ｅｘ．１０３）の合成
Ｏ２−Ｓｅｑ４６３（３．０２ｍｇ、０．３２６μｍｏｌ）をＤＩ水（３０３μＬ）に
溶解させた溶液をＢ２（３．０２ｍｇ、０．３２６μｍｏｌ）に加え、９０℃で１分間加
熱した。溶液を凍結乾燥して二本鎖を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）パッセンジャ
ー鎖：９２６７，ガイド鎖：９２６４。

Ｏ２ペプチドコンジュゲートおよびＯ３二本鎖の追加合成。
ペプチド配列の追加のＯ２コンジュゲートおよび対応する二本鎖Ｏ３を上記に詳述した
のと類似の方法で調製した。

セクションＰ。ガイド鎖２’位−１５コレステロールおよびペプチドコンジュゲートの合
成
実施例１０４〜１０６
スキーム２７を図２７Ａ−１〜図２７Ｂ−２に示す。

Ｐ１（Ｅｘ．１０４）の合成
ＲＮＡ化合物Ｎ２（６７．２ｍｇ、９．３９μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルア
ミン（１３．１μＬ、７５μｍｏｌ）を、水（７５０μＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトア
ミド（７５０μＬ）およびテトラヒドロフラン（１２００μＬ）に溶解させた。この混合
物に、チオコレステロール（３０．２ｍｇ、７５μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３０
０μＬ）に溶解させた溶液を加えた。混合物を３０分間熟成させ、２Ｍ 酢酸トリエチル
アンモニウム（１００μＬ）で希釈し、２０ｍＬ／分で１５分かけての、１００ｍＭ 酢
酸トリエチルアンモニウムを含む５〜９５％アセトニトリル／水のグラジエントによりＷ
ａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅフェニルカラム（１０μＭ、１９×２５０ｍｍ）を用いたイ
オン対クロマトグラフィーによって精製した。生成物を水に対して（３回）回転透析して
単離し、続いて凍結乾燥して固体を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：７４５１。

Ｐ２−Ｓｅｑ３２−ｋ（Ｅｘ．１０５）の合成
Ｐ１（１．０ｍｇ、０．１３４μｍｏｌ）をＤＩ水（２００μＬ）に溶解させた溶液を
Ｂ１０−Ｓｅｑ３２（１．８６ｍｇ、０．１２９μｍｏｌ）に加え、９０℃で１分間加熱
した。溶液を凍結乾燥して二本鎖を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）パッセンジャー
鎖：１３２９５，ガイド鎖：７４５０。

Ｐ２−Ｓｅｑ３２−ｍ（Ｅｘ．１０６）の合成
実施例１０５で上記に詳述したのと同一の方法でガイド鎖Ｐ１をさらにパッセンジャー
鎖Ｆ６−Ｓｅｑ３２と二本鎖を形成させて二本鎖Ｐ２−Ｓｅｑ３２−ｍを得た：

スキーム２８を図２８−１〜図２８−２に示す。

セクションＱ。酵素的に切断された３’リンカービスペプチド
実施例１０７〜１０９
スキーム２９を図２９Ａ−１〜図２９Ｃ−２に示す。

Ｑ１（Ｅｘ．１０７）の合成
ファルコンチューブ中で、Ｌ６（１３．８２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（
１９６３μｌ）に溶解させ、氷浴で１０℃まで冷却した。別のファルコンチューブ中で、
Ｂ４（７６．２ｍｇ、８．１８μｍｏｌ）をｐＨ８．３ ＮａＨＣＯ_３ ２００ｍＭ（１
３０９μｌ）に溶解させた。ＲＮＡ溶液をＤＭＳＯ溶液に加え、５分後、反応が終了した
ことを確認した。

反応を、イオン対クロマトグラフィー（ＧＸ−２８１、ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐ
ｈｅｎｙｌ ５ｕｍ、ＯＢＤ、３０×１５０ｍｍ、３０ｍＬ／分、５〜４５％の１００ｍ
Ｍ ＴＥＡＡを含む水／１００ｍＭ ＴＥＡＡを含むＡＣＮ、２０分のグラジエント）に
より精製した。得られた画分をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ３Ｋ、１５ｍＬ チューブ（４２０
０ｒｐｍ、４℃）を用いて水に対して３回透析し、次いで凍結乾燥して白色固体を得た。
Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｍａｓｓ：１００５２．８３４。Ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：１００５１
．０。

Ｑ２−Ｓｅｑ７４（Ｅｘ．１０８）の合成
反応手順に関するＢ１０−Ｓｅｑ７４の合成を参照されたい。Ｑ２−Ｓｅｑ７４−Ｆｏ
ｕｎｄ ｍａｓｓ：１３９４０．０１２。

Ｑ３−Ｓｅｑ７４−ｂ（Ｅｘ．１０９）の合成
反応手順に関するＢ１１−Ｓｅｑ７４の合成を参照されたい。Ｑ３−Ｓｅｑ７４−ｂ−
Ｆｏｕｎｄ ｍａｓｓ：２０７９２。

セクションＲ。５’，３’ジ−リポペプチドコンジュゲート
実施例１１０〜１１２
スキーム３０を図３０Ａ〜図３０Ｅ−３に示す。

Ｒ２（Ｅｘ．１１０）の合成
Ｌ６（２３．２ｍｇ）をホルムアミド（３００μｌ）およびＤＭＳＯ（３００μｌ）に
溶解させ、次いでｐＨ８．３ ２００ｍＭ ＮａＨＣＯ_３水溶液（６００μｌ）に溶解さ
せたＲ１（５０ｍｇ）を加えた。５分後、沈殿が見られた。追加のＤＭＳＯ（３００μｌ
）を加えると、大部分の固体が再溶解した。１５分のインキュベーション後、反応を、２
０ｍＬ／分で２０分の、５〜４５％ＣＨ_３ＣＮ（１００ｍＭ ＴＥＡＡ）／水（１００ｍ
Ｍ ＴＥＡＡ）グラジエントにより、ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（
５ｕＭ、３０×１５０ｍｍ）を用いて精製し、２６０ｎｍで集めた。生成物画分を水で希
釈してＣＨ_３ＣＮ含量を２０％未満まで下げ、３Ｋ膜を通して水に対して４回遠心透析し
た。残留液を凍結し、白色固体に凍結乾燥した。

Ｒ３（Ｅｘ．１１１）の合成
Ｒ２を５００ｕｌの水に溶解させ、スキーム３８の化合物３５を別の５００ｕｌの水に
溶解させ、次いでＧＳ溶液をＰＳ溶液に加え、室温で十分にボルテックスし、次いで分析
用ＳＡＸ ＨＰＬＣを点検して二本鎖の形成が確認された。溶液を凍結乾燥して二本鎖を
アモルファス固体として得た。

Ｒ４−Ｓｅｑ２７−ｌ（Ｅｘ．１１２）の合成
ｓｉＲＮＡ Ｒ３を、５０ｍＭ 酢酸を含む２，２，２−トリフルオロエタノール（５
００ｕＬ）に溶解させた。ペプチドを、５０ｍＭ 酢酸を含む２，２，２−トリフルオロ
エタノール（５００ｕＬ）に溶解させ、次いで８Ｍ グアニジニウムヒドロクロリド水溶
液（３０ｕＬ）を加えた。このペプチド溶液にｓｉＲＮＡ溶液を加えて透明な溶液を得た
。１時間後、反応ミックスをホルムアミド（１ｍＬ）で希釈し、中性ＳＡＸ系（緩衝液Ａ
：１：１ 水：ＴＦＥ２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．５ 緩衝液Ｂ：１：１ 水：ＴＦＥ２
０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ５．５ １Ｍ ＣｓＣｌ）を用いて２回精製した。生成物画分を水
で希釈してＴＦＥ含量を５０％未満まで下げ、３Ｋ膜を通して水に対して３回透析した。
残留液を凍結し、白色固体に凍結乾燥にした。

Ｒ３ペプチドコンジュゲートおよびＲ４二本鎖の追加合成。
ペプチド配列の追加のＲ３コンジュゲートおよび対応するＲ４二本鎖を上記に詳述した
のと類似の方法で調製した。

セクションＳ。代替のＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドの調製
実施例１１３〜１１５
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド化合物１７ａ、１７ｂおよび１７ｃの合成
以下のスキーム３１を用いてＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ化合物１７ａ、１７ｂおよび１７
ｃを調製した。

スキーム３１

化合物１３の合成
５−クロロ−１−ペンタノール（３．０ｇ、２４．４７ｍｍｏｌ）化合物１１をＤＭＦ
（２０ｍＬ）に溶かした溶液にアジ化ナトリウム（１．９０９ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）化
合物１２を加えた。６０℃で一晩撹拌した後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をシ
リカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：３）により精製して生成物化合
物１３を透明な液体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ３．６２
（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６３−１．５３（ｍ，４Ｈ
），１．４５−１．４０（ｍ，２Ｈ）。

化合物１５の合成
化合物１３（０．７９６ｇ、６．１６ｍｍｏｌ）およびＤ−ガラクトサミンペンタアセ
テート（２．００ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）化合物１４を２０ｍＬ ＤＣＭに懸濁し、続い
てトリフルオロメタンスルホン酸（０．１５４ｇ、１．０２７ｍｍｏｌ）を加えた。得ら
れた混合物を一晩還流させた。ＬＣ−ＭＳにより、ＳＭの変換が終了したことを確認し、
反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、炭酸水素ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥
させた。溶媒を除去し、残渣を、３０分かけて１００／０〜９０／１０のＩＳＣＯ ＤＣ
Ｍ／ＭｅＯＨにより精製して化合物１５を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（５００Ｍ
Ｈｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１．９７（６Ｈ，ｓ），２．０２（６Ｈ，ｓ），２．０６（６Ｈ
，ｓ），２．１５（６Ｈ，ｓ），３．２８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８９Ｈｚ），３．５０（
３Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．６３，６．６６Ｈｚ），３．６８（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．９８Ｈｚ）
，３．９４−３．９２（７Ｈ，ｍ），４．１６−４．１５（５Ｈ，ｍ），４．７３（２Ｈ
，ｄ，Ｊ＝８．３４Ｈｚ），５．３１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．１６，３．４８Ｈｚ），
５．４０−５．３８（５Ｈ，ｍ）。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａｓｓ：［Ｍ＋Ｈ］^＋：Ｃ
_１９Ｈ_３１Ｎ_４Ｏ_９，４５９．２；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：４５９．４。

化合物１６の合成。
Ｌｙｓ−アルキン化合物Ａ１（１３０ｍｇ、０．４３６ｍｍｏｌ）およびＧａｌＮＡｃ
アジド６（９９９ｍｇ、２．１７８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ、脱気処理）に溶解させ
た。反応混合物に臭化銅（Ｉ）−ジメチルスルフィド錯体（１７．９１ｍｇ、０．０８７
ｍｍｏｌ）を一度に加え、ＴＨＦ溶液を４０℃で一晩撹拌した。反応の色がＣｕ^２＋を示
す青／緑に変化し、反応混合物に、新鮮なアスコルビン酸ナトリウム３７ｍｇを含む０．
２ｍＬの水を加え、一晩反応させた。反応を濃縮し、２０分かけてＲＰ ＨＰＬＣ ５〜
６０ ＭｅＣＮ（０．５％ＴＦＡ）／水（０．５％ＴＦＡ）により精製した。集めた画分
を合わせて、凍結乾燥して化合物８を白色固体として得た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａ
ｓｓ：［Ｍ＋３Ｈ］^３＋：Ｃ_９４Ｈ_１４５Ｎ_１８Ｏ_３８，１３４．０，ｍ／ｚ＝７１１．
３；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：７１１．９。

化合物１７ａ（Ｅｘ．１１３）の合成
保護されたＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ化合物８（３００ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を含
む０℃のＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１／１ ５ｍＬに、ナトリウムメトキシド（９１ｍｇ、１．
６８８ｍｍｏｌ）を加えた。反応を１時間撹拌し、２ｍＬの水を加えてクエンチした。揮
発性の溶媒を除去し、反応混合物を、水を用いてＰ４バイオゲルにより精製し、集めた画
分を合わせて、凍結乾燥して化合物９を白色固体として得た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍ
ａｓｓ：［Ｍ＋３Ｈ］^３＋：Ｃ_７０Ｈ_１２１Ｎ_１８Ｏ_２６，１６２９．９，ｍ／ｚ＝５４
３．３；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：５４３．８；［Ｍ＋２Ｈ］^２＋：Ｃ_７０Ｈ_１２０Ｎ_１８Ｏ_２
６，１６２８．９，ｍ／ｚ＝８１４．５；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：８１４．９。

化合物１７ｂおよび１７ｃ（Ｅｘ．１１４およびＥｘ．１１５）の合成
下記構造を有する化合物１７ｂおよび１７ｃの合成を、適切なアジド供給源を用いて化
合物１７ａに使用したのと類似の方法で達成した。

実施例１１６
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドのコンジュゲーションのスキーム
図３１Ａおよび図３１Ｂに示したようなスキーム３２は、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓ
ｉＲＮＡコンジュゲートの調製に使用することができる一般的なスキームを示す。

一般的なスキーム３２を用いて、コンジュゲート１０−１、１０−２、１０−３、１０
ａ−１、１７ａ−１、１７ｂ−１、１７ｃ−１を得ることができる。予め形成したｓｉＲ
ＮＡ二本鎖または一本鎖にカップリング手順を行い、続いてアニーリングを行えばよい。
あるいは、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０１１，２２，ｐｐ．１７２３−８に概説
されたプロトコルを利用してもよい。

実施例１１７
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃアセテート化合物Ａ９によるＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮ
Ａコンジュゲート（Ａ１１−ａ）の合成
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃアセテート（Ａ９、５８．７ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）をア
セトニトリル（１．５ｍｌ）に溶かした溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．２ｍｇ、０．０５５ｍ
ｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１０．４４ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室
温で３０分間撹拌し、水（１．５ｍｌ）およびアセトニトリル（１．５ｍｌ）中の溶液ｓ
ｉＲＮＡ（０．０１４ｍｍｏｌ）に２０分かけてシリンジポンプにより移し、３０分間撹
拌してから１．５ｍＬまで真空下で濃縮した。次いで炭酸ナトリウム（２１８ｍｇ、２．
０５９ｍｍｏｌ）、続いてＭｅＯＨ（０．５０ｍｌ）を加えた。得られた溶液を室温で１
６時間撹拌し、濃縮し、透析により精製し、凍結乾燥してコンジュゲートＡ１１−ａを得
た。

Ａ１１−ａに関して記載したカップリングプロトコルは、Ａ９の代わりにＡ１０を用い
て行ってもよい。

実施例１１８〜１１９
コンジュゲートＡ１１−ｂおよびＡ１１−ｃ（Ｅｘ．１１８およびＥｘ．１１９）の合成
コンジュゲートＡ１１−ｂおよびＡ１１−ｃについても、類似のプロトコルを使用した
。適切なアンチセンス鎖またはセンス鎖を用いた二本鎖の形成は、Ｂ１１に関して記載し
たプロトコルを用いて行うことができる。

実施例１２０
３’５’ビスＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲート一本鎖１８の合成
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ酸化合物１０（４１．２ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）をＤＭＳ
Ｏ（２００ｕＬ）に溶かした溶液に、ＨＡＴＵ（９．６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）およ
びＤＩＰＥＡ（１７．６ｕＬ、０．１２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間
撹拌し、ジアミノ−ｓｉＲＮＡ（１８．８ｍｇ、２．５２ｕｍｏｌ）を水（４０ｕＬ）お
よびＤＭＳＯ（３６０ｕＬ）に溶かした溶液に移し、３０分間撹拌した。混合物を水（１
．５ｍＬ）で希釈し、１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む０〜３０％ＣＨ_３ＣＮ／水のグラジエ
ントによりＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（５ｕＭ、１９×２５０ｍｍ
）を用いて精製した。画分を透析により濃縮し、凍結乾燥して化合物１８を得た。

実施例１２１
３’５’ビスＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡ二本鎖コンジュゲート１９−１（Ｅｘ
．１２１）の合成
図３２Ａおよび図３２Ｂに示したようなスキーム３３を用いてＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ
−ｓｉＲＮＡコンジュゲート１９−１を調製した。

３’５’ビスｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲート１８（１３．７ｍｇ
、１．２９ｕｍｏｌ）を水（２００ｕＬ）に溶かした溶液を、ガイドｓｉＲＮＡ（９．３
ｍｇ、１．３５ｕｍｏｌ）を水（１００ｕＬ）に溶解させた溶液に加え、９０Ｃで１分間
加熱した。得られた溶液を冷却し、凍結乾燥して二本鎖１９−１を得た。

実施例１２２
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド化合物２４（Ｅｘ．１２２）の合成
以下のスキーム３４を用いてｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド化合物２４を調製した。

スキーム３４

化合物２２の合成
Ｎ−ＢＯＣ−１，３−ジアミノプロパン（化合物２０、１１５ｍｇ、０．６６０ｍｍｏ
ｌ）を１：１ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＣＨ_３ＣＮ（１ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、３−マレ
イミドプロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（化合物２１、１８５ｍｇ、
０．６９５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）に溶解
させた溶液を加えた。混合物を１時間撹拌し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロ
マトグラフィー（０〜５％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２により精製して生成物化合物２２を得
た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａｓｓ：［Ｍ＋Ｈ］^＋：Ｃ_１５Ｈ_２４Ｎ_３Ｏ_５，３２６．
２；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：３２６．３。

化合物２３の合成
マレイミド化合物２２（５６ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍｌ）に
溶かした溶液に、４Ｍ ＨＣｌ（１ｍｌ、４．００ｍｍｏｌ）をジオキサンに溶かした溶
液を加えた。混合物を１時間撹拌し、真空中で濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で共沸し（
２×）、真空下で乾燥させて生成物化合物２３を得た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａｓｓ
：［Ｍ＋Ｈ］^＋：Ｃ_１０Ｈ_１６Ｎ_３Ｏ_３，２２６．１；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：２２６．３。

ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃマレイミド化合物２４（Ｅｘ．１２２）の合成
ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ酸化合物１０（１００ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（
５００ｕＬ）に溶かした溶液に、ＨＡＴＵ（３４．９ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）、Ｅｔ
_３Ｎ（４２．６ｕＬ、０．３０６ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−アミノプロピル）−３−（
２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミドヒド
ロクロリド（１６．０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１．５時間
撹拌し、ＴＦＡで酸性化し、０．１％ＴＦＡを含む逆相０〜５０％ＣＨ_３ＣＮ／水により
精製した。画分を凍結乾燥して化合物２４を得た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａｓｓ：［
Ｍ＋２Ｈ］^２＋：Ｃ_７６Ｈ_１２５Ｎ_２１Ｏ_３２，１８４３．８，ｍ／ｚ＝９２１．９；ｏ
ｂｓｅｒｖｅｄ：９２２．７。

実施例１２３
化合物２６の合成
図３３Ａおよび図３３Ｂに示したようなスキーム３５を用いて化合物２６を調製した。

２’−３，１７プロパルギルｓｉＲＮＡ（ＲＮＡ２５、３３ｍｇ、４．４９ｕｍｏｌ）
およびＰＥＧ９ ＳＰＤＰアジド（２６ｍｇ、３６ｕｍｏｌ、市販のＰＥＧ−アジドおよ
びピリジルジスルフィド試薬から調製）を３：１ ＤＭＡ／水（１ｍＬ）に溶かした脱気
した溶液に、臭化銅（Ｉ）−ジメチルスルフィド錯体（１．８ｍｇ、９．０ｕｍｏｌ）の
脱気した溶液を加えた。混合物を室温で７２時間撹拌し、水（２ｍＬ）で希釈し、０．４
５ｕＭ シリンジフィルターを用いて濾過し、透析により濃縮した。濃縮混合物を、１０
０ｍＭ ＴＥＡＡを含む０〜５０％ＣＨ_３ＣＮ／水のグラジエントを用いたＸＢｒｉｄｇ
ｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（５ｕＭ、１９×２５０ｍｍ）により精製した。画分
を透析により濃縮し、凍結乾燥して化合物２６を得た。

実施例１２４〜１２５
化合物２７および２８（Ｅｘ．１２４〜１２５）の合成
図３４Ａ〜図３４Ｃに示したようなスキーム３６を用いて化合物２７および２８を調製
した。

化合物２７（Ｅｘ．１２４）の合成
２’−３，１７ｃｌｉｃｋ ＰＥＧ９ ＳＰＤＰコンジュゲート２６（１３．２ｍｇ、
１．５０μｍｏｌ）を水（１ｍＬ）に溶かした溶液に、ＴＣＥＰヒドロクロリド（９．１
５ｍｇ、３２．２ｕｍｏｌ）を水（０．５ｍＬ）に溶解させた溶液を加えた。混合物を室
温で３０分間撹拌し、次いで１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む５〜４０％ＣＨ_３ＣＮ／水のグ
ラジエントによりＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（５ｕＭ、１９×２５
０ｍｍ）を用いて精製した。画分を透析により濃縮し、凍結乾燥して化合物２７を得た。

化合物２８（Ｅｘ．１２５）の合成
２’−３，１７−ｃｌｉｃｋ ＰＥＧ９ＳＨ２７（３ｍｇ、０．３５μｍｏｌ）をｐＨ
６．０酢酸塩緩衝液（１００ｕＬ）に溶かした溶液に、ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃマレイミ
ド（５．１ｍｇ、２．７７μｍｏｌ）をｐＨ６．０酢酸塩緩衝液（１００ｕＬ）に溶解さ
せた溶液を加えた。混合物を室温で３０分撹拌し、次いで１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む５
〜４０％ＣＨ_３ＣＮ／水のグラジエントを用いてＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙ
ｌカラム（５ｕＭ、１９×２５０ｍｍ）により精製した。画分を透析により濃縮し、凍結
乾燥して化合物２８を得た。

実施例１２６
２’−３，１７ビスＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡ二本鎖コンジュゲート２９の合
成
コンジュゲート１９に関連して詳述した手順を二本鎖２８に使用してコンジュゲート２
９を製造した。

実施例１２７
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃチオール化合物３１の合成
下記スキーム３７を用いて化合物３１を調製した。

スキーム３７

ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃ酸化合物１０（５４ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジ
メチルアセトアミド（５００μｌ）に溶かした溶液に、シスタミンジヒドロクロリド３０
（１４．９ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１２．７ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）
、ＨＯＡＴ（１０．２ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５７．７μｌ、０
．３３０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し、次いでＤＴＴ（５０．９
ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１００μｌ）に溶かした
溶液を加えた。混合物を室温で０．５時間撹拌し、ＴＦＡで酸性化し、０．１％ＴＦＡを
含む逆相０〜３０％ＣＨ_３ＣＮ／水により精製した。画分を凍結乾燥して化合物３１を得
た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａｓｓ：［Ｍ＋２Ｈ］^２＋：Ｃ_６８Ｈ_１１５Ｎ_１９Ｏ_２９
Ｓ，１６９５．８，ｍ／ｚ＝８４７．９；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：８４８．０。

実施例１２８〜１３０
コンジュゲート３５〜３７の合成
図３５Ａおよび図３５Ｂに示したようなスキーム３８を用いてコンジュゲート３５〜３
７を調製した。

化合物３３の合成
２’−ｃｌｉｃｋ１５ＧＳ化合物３２（１３０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）および（９
Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−アジドエチル）カルバメート（２９．１ｍｇ、
０．０９５ｍｍｏｌ）を３：１ ＤＭＡ／水（２ｍＬ）に溶かした脱気した溶液に、臭化
銅（Ｉ）−ジメチルスルフィド錯体（９．７２ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を脱気ＤＭＳ
Ｏ（０．３２ｍＬ）に溶解させた溶液を加えた。混合物を４５℃で２時間撹拌し、室温ま
で冷却し、ｐＨ８ ＥＤＴＡ（０．５Ｍ、２ｍＬ）を加えて反応をクエンチした。１５分
間撹拌し、１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む０〜４５％ＣＨ_３ＣＮ／水のグラジエントを用い
てＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（５ｕＭ、３０×１５０ｍｍ）で精製
した。画分を透析により濃縮した。水（３ｍＬ）中の合わせた材料に、ピペリジン（９３
６μＬ、１．８９１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物を４℃で１８時間保管し、水（１
０ｍＬ）で希釈し、シリンジフィルターを通して固体を濾別した。ｐＨ８ ＥＤＴＡ（０
．５ Ｍ、２ｍＬ）を加え、透析により濃縮し、凍結乾燥して化合物３３を得た。

化合物３４の合成
２’−１５ｃｌｉｃｋ Ｃ２ ＮＨ２ ＧＳ化合物３３（４３．６ｍｇ、６．２６μｍ
ｏｌ）を２００ｍＭ ＮａＨＣＯ３溶液（２０００μｌ）およびホルムアミド（１０００
ｕＬ）に溶かした溶液に、Ｎ−スクシニミジル−３−［２−ピリジルジチオ］プロピオネ
ート（１７．９ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２９８ｕＬ）に溶解させた溶液
を加えた。混合物を１０℃で１５分間撹拌し、水（１０ｍＬ）およびホルムアミド（１ｍ
Ｌ）で希釈し、透析により濃縮した。２Ｍ ＴＥＡＡ（２００ｕＬ）を加え、１００ｍＭ
ＴＥＡＡを含む５〜４０％ＣＨ_３ＣＮ／水のグラジエントを用いてＸＢｒｉｄｇｅ Ｐ
ｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（５ｕＭ、１９×２５０ｍｍ）で精製した。画分を透析によ
り濃縮し、凍結乾燥して化合物３４を得た。

２’−１５ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−ｓｉＲＮＡコンジュゲート３５（Ｅｘ．１２８）の
合成
２’−１５ｃｌｉｃｋ Ｃ２ ＮＨ２ ＮＨＳ ＳＰＤＰ ＧＳ化合物３４（１３ｍｇ
、１．８２μｍｏｌ）を１：１ ホルムアミド／水（２００μｌ）に溶かした溶液に、ｔ
ｅｔｒａＧａｌＮＡｃ ＳＨ（４．６２ｍｇ、２．７２μｍｏｌ）をホルムアミド（２０
０ｕＬ）に溶かした溶液を加えた。混合物を室温で３．５時間撹拌し、２Ｍ ＴＥＡＡ（
５０ｕＬ）を加え、１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む２〜３５％ＣＨ_３ＣＮ／水のグラジエン
トを用いてＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌカラム（５ｕＭ、１９×２５０ｍｍ
）で精製した。画分を透析により濃縮し、凍結乾燥した。得られた固体を、２〜３０％（
溶媒Ａ：４０ｍＭ Ｅｔ３Ｎを含む６０：４０ ＴＦＥ／水、溶媒Ｂ：４０ｍＭ Ｅｔ３
Ｎ、１Ｍ グアニジンＨＣｌを含む６０：４０ ＴＦＥ／水）のグラジエントを用いてＰ
ｒｏｔｅｏｍｉｘ ＳＡＸ−ＮＰ１０カラム（２２．１×５０ｍｍ）で精製した。画分を
透析により濃縮し、凍結乾燥してコンジュゲート３５を得た。

コンジュゲート３６および３７（Ｅｘ．１２９およびＥｘ．１３０）の合成
コンジュゲート１９−１に関して詳述した手順を二本鎖コンジュゲート３５および適切
なパッセンジャー鎖に使用して、それぞれコンジュゲート３６および３７を調製した。

実施例１３１〜１３９
コンジュゲート３８〜４５（Ｅｘ．１３１〜１３９）の合成
図３６Ａ〜図３６Ｂに示したようなスキーム３９を用いてコンジュゲート３８〜４４を
調製した。

スキーム４０。ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃをｓｉＲＮＡにコンジュゲートするのに使用し
た、図３７に示した表２の様々なリンカーの例。

ステップ１：パッセンジャー−ＲＮＡおよびリンカー、プロトコルを説明するためプロリ
ンを用いた例
ＦＭＯＣ−ＰＲＯ−ＯＨ（１１．１１ｍｇ、０．０３３μｍｏｌ）を１２０μＬ ＤＭ
ＳＯに溶かした溶液に、ＤＩＰＥＡ（４３．２μｌ、０．２４７μｍｏｌ）、続いてＨＡ
ＴＵ（１０．９６ｍｇ、０．０２９μｍｏｌ）を加えた。この淡黄色の混合物を室温で３
０分間撹拌した。次いでこの混合物を、オリゴヌクレオチドパッセンジャー鎖ＴＥＡＡ塩
（６０ｍｇ、８．２４μｍｏｌ）を５００μＬの（１０％Ｈ２Ｏ／ＤＭＳＯ）に溶かした
溶液に加え、混合物を引き続き室温で１時間撹拌した。反応混合物は、ＬＣ−ＭＳにより
所望の生成物を示した。反応混合物にジエチルアミン（４３．０μｌ、０．４１２μｍｏ
ｌ）を加え、混合物を１時間撹拌し、ＬＣ−ＭＳにより所望の生成物を確認した。反応混
合物を、カットオフ分子量３ｋＤａの膜を用いた遠心透析により精製した。このプロセス
を、水を用いて３回繰り返した（各回１４ｍＬ）。得られた溶液を濃縮し、凍結し、一晩
凍結乾燥して生成物を白色の綿状固体として得た。ＬＣ／ＭＳから生成物［７３８４．９
］が確認された。

ステップ２：ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−リンカー−パッセンジャーＲＮＡ
ＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ化合物１０（５３．２ｍｇ、０．０３３μｍｏｌ）を５３２μ
Ｌ ＤＭＳＯに溶かした溶液に、ＤＩＰＥＡ（４２．６μｌ、０．２４４μｍｏｌ）、続
いてＨＡＴＵ（１２．３６ｍｇ、０．０３３μｍｏｌ）を加えた。この淡黄色の混合物を
室温で３０分間撹拌した。次いで混合物を、リンカー−オリゴヌクレオチドパッセンジャ
ー鎖を５００μＬのＤＭＳＯに溶かした溶液に加え、混合物を引き続き室温で２時間撹拌
した。ＬＣ／ＭＳにより所望の生成物が示された。反応混合物を、カットオフ分子量３ｋ
Ｄａの膜を用いて遠心透析に供した。このプロセスを、水を用いて３回繰り返した（各回
１４ｍＬ）。得られた溶液を、ＸＢＲＩＤＧＥ ＰＨＥＮＹＬ、３５分間の、２００μＭ
ＴＥＡＡを含む１０〜２７％ＣＨ_３ＣＮを用いてＧｉｌｓｏｎ ＰＬＣ ２０２０によ
り精製した。回収溶液を、カットオフ分子量３ｋＤａの膜を用いて遠心透析により濃縮し
た。得られた濃縮溶液を１．０Ｎ ＮａＣｌで処理し、遠心透析した。このプロセスを、
水を用いて５回繰り返した（各回１４ｍＬ）。得られた濃縮溶液（約１．５ｍＬ）を凍結
し、一晩凍結乾燥して生成物を白色の綿状固体として得た。ＬＣ／ＭＳから生成物［９０
０２．５］が確認された。

ステップ３：二本鎖の形成
１．５ｍＬの水中のＴｅｔｒａＧａｌＮＡｃ−リンカー−ＲＮＡ（１８．５ｍｇ、２．
０５５μｍｏｌ）に、１．５ｍＬの水中のＡｐｏＢガイド鎖（１４．１２ｍｇ、２．０５
５μｍｏｌ）と二本鎖を形成させた。撹拌子を用いて混合物を９０℃で５分間加熱した。
二本鎖を冷却し、撹拌子を除去した。溶液を２日にわたり凍結乾燥して所望の二本鎖コン
ジュゲート３８を白色の綿状固体として得た。ＬＣ／ＭＳから生成物［１６０４８］が確
認された。

残りのコンジュゲートもすべて、同じ一般的な手順を用いて調製した。

実施例１４０〜１４２
化合物／コンジュゲート４６〜４８の合成
図３８Ａ〜図３８Ｅに示したようなスキーム４１を用いて化合物および／またはコンジ
ュゲート４６〜４８を調製した。

ＲＮＡ化合物４６（Ｅｘ．１４０）の合成
ＳＰＤＰ酸（２．２ｍｇ、１０．３μｍｏｌ）をＤＭＳＯ１００μＬに溶解し、Ｎ，Ｎ
−ジイソプロピルエチルアミン（１４．０μｌ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１９．
６ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を連続的に加えた。ＲＮＡ（１５ｍｇ、２．０６μｍｏｌ
）を含む２００μＬのＤＭＳＯ：水（９：１）を加え、得られた反応混合物を１時間撹拌
し、反応を、３ｍＬ 水を加えてクエンチし、５００μＬになるまで透析し、ホルムアミ
ドにより３ｍＬに希釈し、ＳＡＸ（緩衝液Ａ：６０％ＴＦＥ水溶液、２０ｍＭ ＴＥＡ、
緩衝液Ｂ：６０％ＴＦＥ水溶液、２０ｍＭ ＴＥＡ、１Ｍ ＣｓＣｌ、１５分かけての１
００／０〜３５／６５のＡ／Ｂグラジエント）により精製した。集めた画分を合わせて、
水に対して透析し、凍結乾燥して化合物４６を白色固体として得た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅ
ｄ ｍａｓｓ：［Ｍ−Ｈ］⁻：Ｃ_２３４Ｈ_３００Ｆ_８Ｎ_７２Ｏ_１５０Ｐ_２３Ｓ_３，７４８
０．１；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：７４８３．０。

コンジュゲート４７（Ｅｘ．１４１）の合成
ＲＮＡ化合物４６（２２ｍｇ、２．９μｍｏｌ）およびｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃチオー
ル化合物３１（１０．０ｍｇ、５．９μｍｏｌ）をホルムアミド：ｐＨ＝６．８トリス緩
衝液（３：１）４００μＬに溶解させ、１時間撹拌した。反応混合物をＳＡＸ（緩衝液Ａ
：６０％ＴＦＥ水溶液、２０ｍＭ ＴＥＡ、緩衝液Ｂ：６０％ＴＦＥ水溶液、２０ｍＭ
ＴＥＡ、１Ｍ ＣｓＣｌ、１５分かけての１００／０〜３５／６５のＡ／Ｂグラジエント
）により精製した。集めた画分を合わせて、水に対して透析し、凍結乾燥してコンジュエ
ート４７を白色固体として得た。Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｍａｓｓ：［Ｍ−Ｈ］⁻：Ｃ_２
９７Ｈ_４１０Ｆ_８Ｎ_９０Ｏ_１７９Ｐ_２３Ｓ_３，９０６３．９；ｏｂｓｅｒｖｅｄ：９０６
６．２。

コンジュゲート４８（Ｅｘ．１４２）の合成
コンジュゲート４７（１０．９ｍｇ、１．２０μｍｏｌ）およびガイド鎖（７．８１ｍ
ｇ、１．１４μｍｏｌ）を、ＲＮＡｓｅを含まない水１ｍＬ中で２時間混合した。反応混
合物を凍結乾燥して二本鎖コンジュゲート４８を定量的収率で得た。

実施例１４３〜１４５
化合物／コンジュゲート４９〜５１の合成
図３９Ａ〜図３９Ｃに示したようなスキーム４２を用いて化合物および／またはコンジ
ュゲート４９〜５１を調製した。

ＲＮＡ化合物４９（Ｅｘ．１４３）の合成
３３．３ｍｇのｓｉＲＮＡパッセンジャー鎖を４ｍＬ バイアルに秤量し、次いで１ｍ
Ｌ １００ｍＭ ＮａＨＣＯ３を加えて溶解させた。０．８６ｕＬのプロピオン酸無水物
を加え、室温で撹拌した。約２時間熟成後、水に対して３回回転透析した。フリットで濾
過し、溶液を凍結乾燥により乾燥させてＲＮＡ化合物４９を得た。

コンジュゲート５０（Ｅｘ．１４４）の合成
ステップ１。２．８ｍｇ アジド、２５．７ｍｇ ｓｉＲＮＡ、２５ｍｌ Ｎ２でスパ
ージしたＤＭＳＯおよび４ｍｌ 水を４０ｍＬ バイアルに仕込む。Ｎ_２でスパージする
。２．９８ｍＬのＣｕ／リガンド溶液（Ｎ_２でスパージ、２０／１００ｕｍｏｌを含む１
０ｍｌ ＤＭＳＯ）を仕込む。スパージしたＮ_２下、室温で撹拌する。

ステップ２。化合物１０および１ｍｌ ＤＭＳＯを仕込む。６ｕＬのＤＩＰＥＡを仕込
み、２分間撹拌する。６ｍｇ ＨＢＴＵを仕込み、２分間撹拌する。ステップ１で得られ
たｓｉＲＮＡ混合物を仕込む。反応が終了しなかったため、前述の試薬の仕込みの半分を
繰り返した。反応混合物を蒸発させ、透析し、ＨＰＬＣ精製した（Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｐ
ｈｅｎｙｌ、ＴＥＡＡ／ＡＣＮグラジエント）。蒸発させ、透析し、凍結乾燥してコンジ
ュゲート５０を得た。

コンジュゲート５１（Ｅｘ．１４５）の合成
ＧＳ（コンジュゲート５０）１０．６５ｍｇを１ｍｌ 水に溶解させ、ＰＳ（コンジュ
ゲート４９）１０．２０ｍｇを１．１７ｍｌ 水に溶解させる。８．７ｍｇのコンジュゲ
ート４９をコンジュゲート５０のすべてに加えて１：１ 二本鎖を形成した。９０℃に１
分間加熱し、１５分にわたり室温まで冷却する。溶液を濾過し、凍結乾燥により乾燥させ
てコンジュゲート５１を白色固体として得た。

ルシフェラーゼコンストラクトによる、リポフェクタミンを用いてトランスフェクトした
化合物のＲＮＡサイレンシング活性
ウミシイタケルシフェラーゼの３’ＵＴＲにｓｉＲＮＡの標的部位を含むルシフェラー
ゼベクターを安定的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を作製した。この細胞を９
６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ：＃３９０３）に、ＤＭＥＭ １０％血清培
地中１ウェル当たり７．５ｅ３細胞の密度で播種した。次いで細胞プレートを３７℃／５
％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。インキュベーション後、製造者のプロトコルに
従いＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ：＃３１９８５）中のトランスフェクション試薬リポ
フェクタミン２０００（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：＃１１６６８−０１９）を用いてコトラ
ンスフェクトした被検化合物でプレートを処理した。処理濃度は１０ｎＭ〜０．０３ｐＭ
の範囲であった。次いで処理プレートを３７℃／５％ＣＯ２で２４時間インキュベートし
た。インキュベーション処理後、細胞を溶解させ、Ｄｕａｌ−ＧｌｏＴＭ Ｌｕｃｉｆｅ
ｒａｓｅ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ：Ｅ２９２０）に従って処理し、ＴＥＣＡＮ ｓ
ａｆｉｒｅ２プレートリーダーで読み取った。

ＨｅｐＧ２細胞における、リポフェクタミンを用いてトランスフェクトした化合物のＲＮ
Ａサイレンシング活性
ＨｅｐＧ２細胞（ＡＴＣＣ：ＨＢ−８０６５）をコラーゲンコートプレート（ＢｉｏＣ
ｏａｔ：３５６６４９）に、ＤＭＥＭ １０％血清培地中１ウェル当たり７．５ｅ３細胞
の密度で播種した。次いで細胞プレートを３７℃／５％ＣＯ２で２４時間インキュベート
した。インキュベーション後、プレートを、ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎのプロトコルに従いＯ
ｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ：３１９８５）中のトランスフェクション試薬リポフェクタ
ミン２０００（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ：１１６６８−０１９）を用いてコトランスフェク
トした被検化合物で処理した。処理濃度は１０ｎＭ〜０．０３ｐＭの範囲であった。次い
で処理プレートを３７℃／５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。インキュベーショ
ン処理後、提供されたプロトコルに従い細胞をＰＬＡ緩衝液（ＡＢ：４４４８５４２）で
溶解させた。得られた細胞ライセートを、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｋｉ
ｔ（ＡＢ：４３６８８１３）を用いてｃＤＮＡに逆転写し、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ ７９００を用いてｑＰＣＲに供した。

ＲＮＡｉ活性のインビボ評価
ＣＤ１雌マウスに２００ｕｌ量で皮下注射により投与した。動物の行動の変化または生
理学的変化を観察した。動物を投与から７２時間後にＣＯ２窒息により屠殺し、続いて心
臓穿刺により失血させた。肝臓サンプルは中葉の３ｍｍパンチ標本とし、ＲＮＡｌａｔｅ
ｒの入ったチューブに入れて全ＲＮＡを単離した。ｍＲＮＡノックダウン解析を、標準的
な手順を用いてＴａｑｍａｎ解析により行った。

スキーム４３。図４０に示した表６に使用した表記法の説明を目的とした一般的な記載
。表６に使用した正確なｓｉＲＮＡ配列は表５で確認することができる。

選択した化合物／コンジュゲートのインビトロおよびインビボデータの概略を表６およ
び表７に示す。

当業者であれば、本発明が本目的を実行し、記載した目的および利点のほか、それに内
在する目的および利点を得るように十分に適合されていることを容易に理解するであろう
。現時点で好ましい実施形態の代表例である本明細書に記載の方法および組成物は、例示
的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者であれば
、その変更および他の使用を想到するであろうが、それらは本発明の精神に包含され、特
許請求の範囲の範囲により規定される。

Claims (35)

1. １）一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド；
   ２）下記式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の、同一でもあるいは異なっていてもよ
   い１個または複数個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド：
   

   

   （式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ^１Ｒ^２−または−ＮＲ^１−であり、Ｒ^１およびＲ^２
   は各々独立に水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群から選択され；ｎは１、２、３ま
   たは４であり；かつ
   

   

   による結合は結合点を示す）；
   任意に、３）同一でもあるいは異なっていてもよい１個または複数個のリンカー；
   任意に、４）配列番号１〜４７４から独立に選択される１個または複数個のペプチド、
   または同一でもあるいは異なっていてもよいそれらのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベ
   ルソ型変異体およびシステインコンジュゲーション点変異体；および
   任意に、５）１個または複数個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質お
   よび／またはマスキング剤
   を含む、モジュール組成物。
2. １）一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド；
   ２）同一でもあるいは異なっていてもよい、式（ＩＩ）の１〜８個のｔｅｔｒａＧａｌ
   ＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−または−ＮＨ−であり；ｎは１
   、２、３または４である）；
   ３）同一でもあるいは異なっていてもよい１〜２４個のリンカー；
   ４）同一でもあるいは異なっていてもよい、配列番号１〜４７４から独立に選択される
   １〜８個のペプチド；および
   任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
   たはマスキング剤
   を含む、請求項１に記載のモジュール組成物。
3. １）一本鎖または二本鎖ｓｉＲＮＡ；
   ２）同一でもあるいは異なっていてもよい、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の１
   〜８個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド（式中、Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ_２−また
   は−ＮＨ−であり；ｎは１、２、３または４である）；
   ３）同一でもあるいは異なっていてもよい１〜２４個のリンカー；
   ４）配列番号１〜４７４から独立に選択される１〜１２個のペプチド、または同一でも
   あるいは異なっていてもよい、それらのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体
   およびシステインコンジュゲーション点変異体；および
   任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
   たはマスキング剤
   を含む、モジュール組成物。
4. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドお
   よび／または前記ペプチドは、リボース環の異なる２’位、ならびに／または、前記ｓｉ
   ＲＮＡの異なる３’位末端および／もしくは５’位末端で前記ｓｉＲＮＡに結合しており
   ；かつ前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、任意にリン
   カーを介して前記ｓｉＲＮＡに結合している、モジュール組成物。
5. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の
   Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＣＨ_２−であり；ｎは１、２または３である、モジュール組
   成物。
6. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、同一でもあるいは異なっていてもよい１
   〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドを含む、モジュール組成物。
7. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、同一でもあるいは異なっていてもよい１
   〜８個のペプチドを含む、モジュール組成物。
8. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
   前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
   前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは前記ｓｉＲＮＡのリボース環の異なる２’位で
   前記ｓｉＲＮＡのガイド鎖またはパッセンジャー鎖に結合している
   モジュール組成物。
9. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
   前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
   前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドは異なる３’位末端および／または５’位末端で
   前記ｓｉＲＮＡのガイド鎖またはパッセンジャー鎖に結合している
   モジュール組成物。
10. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
    前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドはリボース環の異なる２’位、ならびに／または
    、異なる３’位末端および／もしくは５’位末端で前記ｓｉＲＮＡのガイド鎖およびパッ
    センジャー鎖の両方に結合している
    モジュール組成物。
11. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
    前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
    前記ペプチドは前記ｓｉＲＮＡのリボース環の異なる２’位で前記ｓｉＲＮＡのガイド
    鎖またはパッセンジャー鎖に結合している
    モジュール組成物。
12. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
    前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
    前記ペプチドは異なる３’位末端および／または５’位末端で前記ｓｉＲＮＡのガイド
    鎖またはパッセンジャー鎖に結合している
    モジュール組成物。
13. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
    前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
    前記ペプチドはリボース環の異なる２’位、ならびに／または、異なる３’位末端およ
    び／もしくは５’位末端で前記ｓｉＲＮＡのガイド鎖およびパッセンジャー鎖の両方に結
    合している
    モジュール組成物。
14. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドお
    よび前記ペプチドは前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖に結合している、モジュール組成物。
15. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドお
    よび前記ペプチドは前記ｓｉＲＮＡの異なる鎖に結合している、モジュール組成物。
16. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドお
    よび前記ペプチドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖に結合して
    いる、モジュール組成物。
17. 請求項１６に記載のモジュール組成物であって、各リンカーは独立に表１から選択され
    る、モジュール組成物。
18. 請求項１６に記載のモジュール組成物であって、各リンカーは独立に表２から選択され
    る、モジュール組成物。
19. 請求項１８に記載のモジュール組成物であって、前記リンカーは表２から独立に選択さ
    れる分岐リンカーである、モジュール組成物。
20. 請求項３に記載のモジュール組成物であって、
    前記ｓｉＲＮＡは二本鎖であり；かつ
    前記任意選択の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／またはマス
    キング剤はリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖に結合している
    モジュール組成物。
21. １）二本鎖ｓｉＲＮＡ；
    ２）下記式（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の１〜８個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガ
    ンド：
    

    

    ３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表１から独立に選択される１〜２４個のリ
    ンカー；
    ４）同一でもあるいは異なっていてもよい、配列番号１〜４７４から独立に選択される
    １〜１２個のペプチド、またはそれらのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体
    およびシステインコンジュゲーション点変異体；および、
    任意に、５）１〜８個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
    たはマスキング剤
    を含むモジュール組成物。
22. 請求項２１に記載のモジュール組成物であって、
    １）二本鎖ｓｉＲＮＡ；
    ２）式（Ｖ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド；
    ３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表１から独立に選択される１〜１２個のリ
    ンカー；
    ４）同一でもあるいは異なっていてもよい、配列番号１〜４７４から独立に選択される
    １〜８個のペプチド、またはそれらのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体お
    よびシステインコンジュゲーション点変異体；および、
    任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
    たはマスキング剤
    を含み、
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、リボース環の異
    なる２’位、ならびに／または、前記ｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／もしくは５
    ’位末端で前記ｓｉＲＮＡに結合しており；かつ
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、任意にリンカー
    を介して前記ｓｉＲＮＡに結合している
    モジュール組成物。
23. 請求項２１に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド
    および前記ペプチドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖に結合している、モジュ
    ール組成物。
24. 請求項２１に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド
    および前記ペプチドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの異なる鎖に結合している、モジ
    ュール組成物。
25. 請求項２１に記載の組成物であって、
    １）二本鎖ｓｉＲＮＡ；
    ２）式（Ｖ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド；
    ３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表２から独立に選択される１〜１２個のリ
    ンカー；
    ４）同一でもあるいは異なっていてもよい、配列番号２、３、５、７、１１、１３、１
    ９、２２、２７〜３２、５５、５６、６３、６４、６９、７１〜７４、８６、９０、９４
    、９５、１０６、１３７、１９２、２００、２０１、２２８、２２９、２６６、２８２、
    ３３３、３３７、４０７、４２３、４３６、４３７、４６１〜４６３、４６７、４６８、
    ４７０、４７３および４７４から独立に選択される配列番号から独立に選択される１〜８
    個のペプチド、またはそれらのＤ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体およびシ
    ステインコンジュゲーション点変異体；および、
    任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
    たはマスキング剤
    を含み、
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、リボース環の異
    なる２’位、ならびに／または、前記ｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／もしくは５
    ’位末端で前記ｓｉＲＮＡに結合しており；かつ
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、リンカーを介し
    て前記ｓｉＲＮＡに結合している
    モジュール組成物。
26. 請求項２５に記載のモジュール組成物であって、同一でもあるいは異なっていてもよい
    、配列番号２、３、５、７、１１、１３、１９、２２、２７〜３２、５５、５６、６３、
    ６４、６９、７１〜７４、８６、９０、９４、９５、１０６、１３７、１９２、２００、
    ２０１、２２８、２２９、２６６、２８２、３３３、３３７、４０７、４２３、４３６、
    ４３７、４６１〜４６３、４６７、４６８、４７０、４７３および４７４から独立に選択
    される前記ペプチドのＤ−アミノ酸を含む、モジュール組成物。
27. 請求項２５に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド
    および前記ペプチドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖に結合し
    ている、モジュール組成物。
28. 請求項２５に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド
    および前記ペプチドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの異なる鎖に結合している、モジ
    ュール組成物。
29. 請求項２５に記載のモジュール組成物であって、
    １）二本鎖ｓｉＲＮＡ；
    ２）式（Ｖ）の１〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド；
    ３）同一でもあるいは異なっていてもよい、表２から独立に選択される１〜１２個のリ
    ンカー；
    ４）同一でもあるいは異なっていてもよい、配列番号２、３、５、７、１１、１３、１
    ９、２２、２７〜３２、５５、５６、６３、６４、６９、７１〜７４、８６、９０、９４
    、９５、１０６、１３７、１９２、２００、２０１、２２８、２２９、２６６、２８２、
    ３３３、３３７、４０７、４２３、４３６、４３７、４６１〜４６３、４６７、４６８、
    ４７０、４７３および４７４から独立に選択される１〜８個のペプチド、またはそれらの
    Ｄ−アミノ酸変異体、レトロインベルソ型変異体およびシステインコンジュゲーション点
    変異体；および、
    任意に、５）１〜４個の標的化リガンド、可溶化剤、薬物動態改善剤、脂質および／ま
    たはマスキング剤
    を含み、
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、リボース環の異
    なる２’位、ならびに／または、前記ｓｉＲＮＡの異なる３’位末端および／もしくは５
    ’位末端で前記ｓｉＲＮＡに結合しており；かつ
    前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドおよび／または前記ペプチドは、リンカーを介し
    て前記ｓｉＲＮＡに結合している
    モジュール組成物。
30. 請求項２９に記載のモジュール組成物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンド
    および前記ペプチドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖に結合し
    ている、モジュール組成物。
31. １個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドを含む請求項２９に記載のモジュール組成物で
    あって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡに結合
    している、モジュール組成物。
32. １個のペプチドを含む請求項２９に記載のモジュール組成物であって、前記ペプチドは
    リンカーを介して前記ｓｉＲＮＡに結合している、モジュール組成物。
33. ２〜４個のｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドを含む請求項２９に記載のモジュール組成
    物であって、前記ｔｅｔｒａＧａｌＮＡｃリガンドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの
    同じ鎖または異なる鎖に結合している、モジュール組成物。
34. ２〜４個のペプチドを含む請求項２９に記載のモジュール組成物であって、前記ペプチ
    ドはリンカーを介して前記ｓｉＲＮＡの同じ鎖または異なる鎖に結合している、モジュー
    ル組成物。
35. 請求項１に記載のモジュール組成物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物
    。

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