JP2017507998A - アザインドール酢酸誘導体及びプロスタグランジンｄ２受容体調節剤としてのそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、式（Ｉ）のアザインドール酢酸誘導体（式中、Ｒ１及びＲ２は明細書中に記載した通りである。）、並びに様々なプロスタグランジン介在疾患及び障害の治療におけるプロスタグランジン受容体調節剤、特にプロスタグランジンＤ２受容体調節剤としてのそれらの使用、これらの化合物を含有する医薬組成物、並びにそれらの製造方法に関する。【化１】【選択図】 なし

Description

本発明は、式（Ｉ）のアザインドール酢酸誘導体、及び様々なプロスタグランジン介在疾患及び障害の治療におけるプロスタグランジン受容体調節剤、特にプロスタグランジンＤ_２受容体（「ＤＰ受容体」）調節剤としてのそれらの使用、これらの化合物を含有する医薬組成物、並びにそれらの製造方法に関する。特に、そのような誘導体は、喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチ等の慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患の治療のために、単独で又は医薬組成物中で使用してもよい。

アレルギー状態において、アレルゲン暴露に対する応答として肥満細胞が活性化され、該細胞はヒスタミン、トロンボキサンＡ２（ＴｘＡ２）、システイニルロイコトリエン（ＣｙｓＬＴｓ）及びプロスタグランジンＤ_２（ＰＧＤ_２）のようなメディエータを放出する。これらのメディエータは、それらの対応する受容体と相互作用して、血管透過性の増大、浮腫、掻痒、鼻閉及び肺うっ血、気管支収縮、並びに粘液分泌等の生理的作用を引き起こす。増大した血管透過性により、例えば好酸性及び好塩基性白血球が組織内に過剰に浸潤し、アレルギー応答が増幅される。

現在のアレルギー性疾患の治療には、そのような相互作用を遮断し、又はさもなければ妨害する薬剤、例えば抗ヒスタミン剤（ヒスタミンＨ１受容体拮抗薬）、ロイコトリエン受容体拮抗薬、ベータ−アドレナリン受容体作動薬及びコルチコステロイドが含まれる。一般に、抗ヒスタミン剤及びロイコトリエン拮抗薬を用いた治療は、効果が限られ、またコルチコステロイドの長期間の使用には、しばしば望ましくない副作用が伴う。

ＰＧＤ_２は、２種のＧタンパク質共役受容体、ＰＧＤ_２受容体ＤＰ１及び最近同定されたＣＲＴＨ２（Ｔｈ２細胞上に発現する化学誘引物質受容体−類似分子）受容体（「ＤＰ２受容体」とも称される。）に作用することが知られている作動薬である。

上昇したＰＧＤ_２レベルは、例えばアレルギー性鼻炎、アレルギー性喘息、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎等のアレルギー性疾患に認められるような炎症作用を引き起こすと考えられる。従って、ＰＧＤ_２のその受容体との相互作用を遮断することは、そのような疾患を治療するための有用な治療的方策であると考えられる。

ＧＢ２３８８５４０には、喘息、アレルギー性鼻炎又はアレルギー性結膜炎等のアレルギー性疾患の予防及び治療のためのラマトロバン（（３Ｒ）−３−（４−フルオロベンゼン−スルホンアミド）−１，２，３，４−テトラヒドロカルバゾール−９−プロピオン酸
）、すなわち、ＣＲＴＨ２に対する追加の拮抗活性を伴うＴｘＡ２受容体（「ＴＰ受容体」とも称される。）拮抗薬の使用が開示されている。Ｔ．Ｉｓｈｉｚｕｋａら、ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｒｕｇ Ｒｅｖ．２００４、２２（２）、７１−９０には、ラマトロバンの遅延相の炎症に対する効果が記載されている。さらに、ラマトロバンの経口バイオアベイラビリティ、及びそのインビトロでのプロスタグランジンＤ_２誘導好酸球遊走を阻害する作用が報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、３０５（１）、ｐ．３４７−３５２（２００３））。

ＣＲＴＨ２拮抗活性を有するアザインドール酢酸誘導体が、ＷＯ２０１０／０５４１１３、ＷＯ２０１０／０５４１１４及びＢ．Ａ．Ｓｔｅａｒｎｓら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９、１９、４６４７−４６５１に開示されている。

ＷＯ２０１１／１１７７９８及びＷＯ２０１２／１４０６１２は、ＣＲＴＨ２拮抗活性を有する（３−ヘテロアリールアミノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）−酢酸及び（７−ヘテロアリールアミノ−６，７，８，９−テトラヒドロピリド［１，２−ａ］インドール−１０−イル）酢酸誘導体をそれぞれ開示している。

驚くべきことに、５−クロロ−ピリミジン−２−イルアミノ基で置換された特定のアザインドール酢酸誘導体が、初代培養ラット肝細胞におけるインビトロ細胞毒性試験において顕著に改善された特性を有することがここに見出された。従って、本発明の化合物は、改善されたインビボ毒性プロファイルを有することが期待される。

本発明の記述：
１） 本発明は、式（Ｉ）のアザインドール酢酸誘導体及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

式中、
Ｒ^１は、水素、（Ｃ_１−４）アルキル、（Ｃ_１−２）フルオロアルキル、（Ｃ_１−４）アルコキシ又はハロゲンを表し；Ｒ^２は、水素又はメチルを表す。

ここに記載される定義は、態様１）〜１９）のいずれか１つに定義されるような式（Ｉ）の化合物に対して一律に適用されるものであり、特段の定義によってより広い又はより狭い定義が与えられない限り本明細書及び請求項を通じて準用される。当然ながら、ある用語の定義又は好ましい定義が、ここに定義されるいずれか又は他のすべての用語のいずれか又は好ましい定義におけるそれぞれの用語を、独立して（及びそれらと共に）定義し置き換えるものであってよい。

態様１）〜１９）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物は、１又は２以上の不斉炭素原子などの、１又は２以上のキラル又は不斉中心を含んでいてもよい。従って、式（Ｉ）の化合物は、立体異性体の混合物として、又は立体異性体が富化されている状態、好ましくは純粋な立体異性体として存在してもよい。立体異性体の混合物は当業者に知られた方法で分離してもよい。

「富化（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）」という用語は、例えば、エナンチオマーに関連して使用される場合、本発明に関しては特に、それぞれのエナンチオマーが、それぞれ他のエナンチオマーに対する比（適宜、純度に準用）で、少なくとも７０：３０、特に少なくとも９０：１０（適宜、７０％／９０％の純度に準用）で存在することを意味するものと解される。好ましくは、この用語は、本質的に純粋な各エナンチオマーを意味する。「本質的に」という用語は、例えば「本質的に純粋な」等の用語中で使用される場合、本発明に関しては特に、それぞれの立体異性体／組成物／化合物等の少なくとも９０、特に少なくとも９５、そしてとりわけ少なくとも９９重量パーセントが、それぞれ、純粋な立体異性体／組成物／化合物等であることを意味するものと解される。

「アルキル」という用語は、単独の場合も、又は組み合わされて使用されている場合も、１〜４個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐鎖アルキル基を意味する。「（Ｃ_ｘ−Ｃ_ｙ）アルキル」（ｘ及びｙは、それぞれ整数である。）という用語は、ｘ〜ｙ個の炭素原子を含む、前記部分で定義したアルキル基を意味する。例えば、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル基は１〜４個の炭素原子を含む。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル及びｔｅｒｔ−ブチルが挙げられ；好ましくはメチルである。

「アルコキシ」という用語は、単独で使用される場合も、組み合わせて使用される場合も、アルキル基が前記部分で定義した通りである、アルキル−Ｏ−基を意味する。「（Ｃ_ｘ−Ｃ_ｙ）アルコキシ」（ｘ及びｙは、それぞれ整数である。）という用語は、ｘ〜ｙ個の炭素原子を含む、前記部分で定義したアルコキシ基を意味する。例えば、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ基はは１〜４個の炭素原子を含む。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシであり；好ましくはメトキシである。

「（Ｃ_ｘ−Ｃ_ｙ）フルオロアルキル」（ｘ及びｙは、それぞれ整数である。）という用語は、１又は２以上の（場合によってはすべての）水素原子がフッ素で置換された、ｘ〜ｙ個の炭素原子を含む、前記部分で定義した通りのアルキル基を意味する。例えば、（Ｃ_１−２）フルオロアルキル基は、１又は２個の炭素原子を含み、１から５個の水素原子がフッ素で置換されている。当該基の代表的な例は、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２−ジフルオロエチル及び２，２，２−トリフルオロエチルであり；好ましくはトリフルオロメチルである。

ハロゲンという用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味し；好ましくはフルオロである。

２） 本発明のさらなる態様は、
Ｒ^１が、水素、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ又はフルオロを表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

３） 本発明のさらなる態様は、
Ｒ^１が、水素、（Ｃ_１−４）アルキル又は（Ｃ_１−４）アルコキシを表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

４） 本発明のさらなる態様は、
Ｒ^１が、水素、メチル又はメトキシを表す；
態様１）に従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

５） 本発明のさらなる態様は、
Ｒ^２がメチルを表す；
態様１）〜４）のいずれか１つに従う化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

６） 本発明のさらなる態様は、
Ｒ^２が水素を表す；
態様１）〜４）のいずれか１つに従う化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

７） 本発明のさらなる態様は、
キラル中心の絶対配置が式（Ｉ_Ｓｔ１）で表される通りである

態様１）〜６）のいずれか１つに従う化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。

８） 本発明のさらなる態様は、
キラル中心の絶対配置が式（Ｉ_Ｓｔ２）で表される通りである

態様１）〜６）のいずれか１つに従う化合物及びそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）に関する。

９） 本発明のさらなる態様は、
Ｒ^１がフルオロを表す；
態様１）又は５）〜８）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物及びそのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）に関する。

１０） 態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物の例は、下記の化合物から成る群より選択される：
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−（トリフルオロメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
又はそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）。

上記のいずれの化合物についても、具体的に帰属されていないキラル中心は、絶対（Ｒ）−配置にあっても、又は絶対（Ｓ）−配置にあってもよく；例えば、２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸として記載される化合物は、（Ｒ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸、又はそれらの混合物であってよい。

１１） 態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物の好ましい例は、下記の化合物から成る群より選択される：
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−（トリフルオロメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
又はそのような化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）。

１２） 好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１３） 好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１４） 別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸））；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１５） 別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１６） 別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１７） 別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−（トリフルオロメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−（トリフルオロメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１８） 別の好ましい態様において、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物は；
２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８
，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（特に、（Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸）；又は当該化合物の塩（特に薬学的に許容される塩）である。

１９） 従って、本発明は、態様１）に定義する式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物であって、それぞれの従属関係に従って態様２）〜１８）のいずれか１つの特徴によってさらに限定される化合物；それらの薬学的に許容される塩；並びに、下記からなる群より選択される疾患の治療における、医薬としてのそのような化合物の使用に関する；喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチを含む慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患。式（Ｉ）の化合物に関して特に下記の態様が可能であり、意図されており、そして個々の形態としてここに具体的に開示される：
１、２＋１、３＋１、４＋１、５＋１、５＋２＋１、５＋３＋１、５＋４＋１、６＋１、６＋２＋１、６＋３＋１、６＋４＋１、７＋１、７＋２＋１、７＋３＋１、７＋４＋１、７＋５＋１、７＋５＋２＋１、７＋５＋３＋１、７＋５＋４＋１、７＋６＋１、７＋６＋２＋１、７＋６＋３＋１、７＋６＋４＋１、８＋１、８＋２＋１、８＋３＋１、８＋４＋１、８＋５＋１、８＋５＋２＋１、８＋５＋３＋１、８＋５＋４＋１、８＋６＋１、８＋６＋２＋１、８＋６＋３＋１、８＋６＋４＋１、９＋１、９＋５＋１、９＋６＋１、９＋７＋１、９＋７＋５＋１、９＋７＋６＋１、９＋８＋１、９＋８＋５＋１、９＋８＋６＋１、１０＋１、１１＋１、１２＋１、１３＋１、１４＋１、１５＋１、１６＋１、１７＋１及び１８＋１；
上記の表中、数字は上記の番号に応じた態様を意味し、「＋」は他の態様への従属関係を表す。種々の態様は読点により個々に分けられている。換言すると、例えば「５＋２＋１」は、態様５）であって、態様２）に従属し、態様１）に従属することを意味し、すなわち、態様「５＋２＋１」は、態様２）及び５）の特徴によりさらに限定された態様１）の化合物に相当する。

化合物、塩、医薬組成物、疾病等について複数形が使用される場合は、単数の化合物、塩、医薬組成物、疾病等をも意味することが意図されている。

態様１）〜１９）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物に対するいかなる言及も、適宜かつ文脈に応じて、そのような化合物の塩（そして特に、薬学的に許容される塩）にも言及しているものと解される。

「薬学的に許容される塩」という用語は、対象化合物の所望の生物活性を保持し、かつ最小の望ましくない毒性作用を示す塩を意味する。そのよう塩としては、対象化合物中の塩基性基及び／又は酸性基の存在に応じた、無機又は有機の酸及び／又は塩基付加塩が挙げられる。参考としては、例えば、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ．」
、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８；及び「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ
ａｎｄ Ｃｏ−ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｊｏｈａｎ Ｗｏｕｔｅｒｓ ａｎｄ Ｌｕｃ Ｑｕｅｒｅ（Ｅｄｓ．）、ＲＳＣ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０１２を参照されたい。

本発明はまた、同位体標識された、特に^２Ｈ（デューテリウム）標識された式（Ｉ）の化合物をも含み、当該同位体標識された化合物は、１又は２以上の原子が、同じ原子番号を有するが、自然において通常見出される原子量と異なる原子量を有する原子によってそれぞれ置き換えられていることを除いては、式（Ｉ）の化合物と同一である。同位体標識された、特に^２Ｈ（デューテリウム）標識された式（Ｉ）の化合物、及びその塩は、本発明の範囲に含まれる。水素をより重い同位体^２Ｈ（デューテリウム）に置換することにより代謝安定性が増大するため、例えば、ｉｎ−ｖｉｖｏでの半減期が長くなり、あるいは、必要用量を減らすことができ、又は、チトクロームＰ４５０酵素の阻害が軽減され得るため、例えば、安全性プロファイルが改善される。本発明の１つの態様においては、式（Ｉ）の化合物は同位体標識されていないか、又は、それらは１若しくは２以上のデューテリウム原子によってのみ標識されている。副態様においては、式（Ｉ）の化合物は全く同位体標識されていない。同位体標識された式（Ｉ）の化合物は、適切な試薬又は出発物質の適宜な同位体種を用いることを除いては、下記の方法と同様に製造してもよい。

数値範囲を記述するために「間」という単語が使用される場合は常に、示された範囲の末端の点は明示的にその範囲に含まれると解される。これは、例えば、温度範囲が４０℃から８０℃の間であると記述される場合、末端の点である４０℃と８０℃はその範囲に含まれることを意味し、あるいは、可変数が１から４の間の整数であると定義される場合、可変数は整数の１、２、３又は４であることを意味する。

温度に関して使用されていない場合には、数値「Ｘ」の前に置かれる「約」（あるいは「付近」）という用語は、本出願において、Ｘ−１０％ＸからＸ＋１０％Ｘの間、好ましくはＸ−５％ＸからＸ＋５％Ｘの間を表す。温度の場合には、温度「Ｙ」の前に置かれる「約」（あるいは「付近」）という用語は、この出願において、Ｙ−１０℃からＹ＋１０℃の間、好ましくはＹ−５℃からＹ＋５℃の間を表す。さらに、本明細書で使用される「室温」という用語は、約２５℃の温度を表す。 態様１）〜１９）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物及びこれらの薬学的に許容される塩は、医薬として、例えば、（特に経口等の）経腸又は（局所的適用又は吸入を含む）非経口投与のための医薬組成物の形態で使用することができる。

医薬組成物の製造は、いずれの当業者にもよく知られた様式で（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）、Ｐａｒｔ５、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ」［Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓにより出版］参照。）、既述の式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩を、任意にその他の治療的に有益な物質と組み合わせて、適切な無毒の不活性な治療上許容される固体又は液体の担体材料及び必要に応じて、通常の薬学的アジュバントと共に、製剤投与形態とすることにより遂行することができる。

本発明はまた、薬学的に活性な量の態様１）〜１９）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物を対象に投与することを含む、本明細書に記載した疾患又は障害の予防又は治療方法にも関する。

本発明の好ましい態様において、投与量は、１ｍｇから１０００ｍｇ／日の間、特に５ｍｇから５００ｍｇ／日の間、とりわけ２５ｍｇから４００ｍｇ／日の間、さらに５０ｍ
ｇから２００ｍｇ／日の間に含まれる。

いかなる疑義をも避けるために、化合物がある疾患の予防又は治療について有用であると記載されている場合には、そのような化合物は、同様に当該疾患の予防又は治療のための医薬の製造における使用にも適している。

本発明の別の側面は、薬学的に活性な量の、態様１）〜１９）のいずれか１つに定義する式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、当該患者における下記の疾患又は障害の予防又は治療方法に関する。

態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチを含む慢性及び急性両方のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患。

別の態様において、態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして鼻ポリープ、スティル病（全身型若年性特発性関節炎）及び嚢胞性線維症からなる群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している。

好ましい態様において、態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹及び湿疹。

別の好ましい態様において、態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患。

なお別の好ましい態様において、態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記
の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患。

最も好ましい態様において、態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬の製造のために使用してもよく、そして下記の群から選択される疾患の予防及び／又は治療に適している：喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、鼻ポリープ、食物アレルギー（特に、ＩｇＥ−介在食物アレルギー）、じん麻疹（特に、慢性じん麻疹）、好酸球性食道炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球増加症候群、好酸球性肺炎（特に、慢性好酸球性肺炎）、ドレス症候群、スティル病、ＣＯＰＤ及び嚢胞性線維症（特に、喘息、好酸球性喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＩｇＥ−介在食物アレルギー、慢性じん麻疹、好酸球性食道炎及びチャーグ・ストラウス症候群）。

本発明はまた、上記の疾患の治療及び／又は予防のための医薬組成物の製造のための態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の使用に関する。

本発明はまた、態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩並びに医薬組成物及び製剤に関する。 本発明に従う医薬組成物は、活性成分としての態様１）〜１９）のいずれか１つに従う式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つ（又は、その薬学的に許容される塩）と、任意に、担体及び／又は希釈剤及び／又はアジュバントとを含む。

本明細書における、式（Ｉ）、（Ｉ_ＳＴ１）又は（Ｉ_ＳＴ２）の化合物に対するいかなる言及も、適宜かつ文脈に応じて、そのような化合物の塩（特に、薬学的に許容される塩）にも言及しているものと解される。式（Ｉ）の化合物に対して示した好適性は、当然のことながら、式（Ｉ_ＳＴ１）の化合物及び（Ｉ_ＳＴ２）の化合物並びに式（Ｉ）、（Ｉ_ＳＴ１）又は（Ｉ_ＳＴ２）の化合物の塩及び薬学的に許容される塩にも適宜準用される。同様のことが、本発明に従う、医薬としてのこれらの化合物に、これらの化合物を活性成分として含む医薬組成物に、又は疾患の治療のための医薬の製造のためのこれらの化合物の使用に適用される。

前述したように、式（Ｉ）の化合物は、ＣＲＴＨ２受容体のＰＧＤ_２活性化をアンタゴニストとして調節する。そのような化合物の生物学的作用は、様々なインビトロ、エクスビボ及びインビボでのアッセイにて試験してもよい。式（Ｉ）の化合物のＣＲＴＨ２受容体に結合する能力は、文献（各々、Ａｒｉｍｕｒａ Ａ．ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２００１、２９８（２）、４１１−４１９；及びＳａｗｙｅｒ Ｎ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００２、１３７、１１６３−１１７２）に記載されているものと同様の方法、及び以下の実験部分に記載されているアッセイにより測定してもよい。

本発明のさらなる側面は、式（Ｉ）の化合物の製造方法である。本発明の式（Ｉ）に従う化合物は、下記のスキーム中に概略した反応シークェンスに従って製造することができ、ここでＲ^１及びＲ^２は、式（Ｉ）に対して定義した通りである。使用される他の略語は、実験の部において定義する。

概して、すべての化学的変換は、文献に記載され、又は下記の手順に記載したような、よく知られた標準的方法論に従って行うことができる。得られた化合物は、それ自体知られた方法により、その薬学的に許容される塩に変換してもよい。

式（Ｉ）の化合物は各アザインドール誘導体（４）から製造してもよく、アザインドー
ル誘導体（４）自体は、ピリジン中、Ｐｄ（Ｐｈ_３Ｐ）_４等の触媒の存在下、４−（５−クロロ−ピリミジン−２−イル）アミノ−シクロヘキサノン誘導体（３）とともに各３−アミノ−２−ブロモ−ピリジン又は３−アミノ−２−クロロ−ピリジン誘導体（１）をＭＷ照射するか、又は、硫酸等の酸の存在下、各Ｂｏｃ保護ヒドラジン誘導体（６）を４−（５−クロロ−ピリミジン−２−イル）アミノ−シクロヘキサノン誘導体（３）と反応させることにより製造してもよい。Ｂｏｃ保護ヒドラジン誘導体（６）は、ブチルリチウム等の塩基の存在下、ＴＨＦ等の非プロトン性溶媒中、各ブロモ−ピリジン誘導体（５）をジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アザ−ジカルボキシレートと反応させることにより製造してもよい。

４−（５−クロロ−ピリミジン−２−イル）アミノ−シクロヘキサノン誘導体（３）は、ＤＣＭ等の非プロトン性溶媒中、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３等の還元剤の存在下、所望のアミンＲ^２−ＮＨ_２を用いて、市販の１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−オン（２）を還元的アミノ化し、次いで、ＤＩＥＡ等の塩基の存在下、ＤＭＦ等の非プロトン性溶媒中、２，５−ジクロロピリミジン（Ｒ^３−Ｃｌ）と反応させ、メタノール中、ＨＣｌ等の酸性条件下、アセタール脱保護することにより製造してもよい。ＮａＨ等の塩基の存在下、ＤＭＦ等の非プロトン性溶媒中、ブロモ酢酸エチルでアザインドール誘導体（４）をアルキル化し、次いで、ＮａＯＨ等の塩基でけん化することにより、式（Ｉ）の化合物を与える。

あるいは、Ｒ^２が水素を表す式（Ｉ）の化合物は、各アザインドール誘導体（９）から製造してもよく、アザインドール誘導体（９）自体は、ピリジン中、Ｐｄ（Ｐｈ_３Ｐ）_４等の触媒の存在下、市販のｔｅｒｔ−ブチル（４−オキソシクロヘキシル）カーバメート（８）とともに各３−アミノ−２−ブロモ−ピリジン（７）をＭＷ照射することにより合成してもよい。

ＮａＨ等の塩基の存在下、ＤＭＦ等の非プロトン性溶媒中、ブロモ酢酸エチルでアザインドール誘導体（９）をアルキル化し、次いで、ジオキサン中、ＨＣｌ等の酸でＢｏｃ脱保護することにより、所望のアザインドール酢酸エチルエステル（１０）を与える。Ｋ_２ＣＯ_３等の塩基の存在下、ＤＭＡ等の非プロトン性溶媒中、アミン（１０）を２，５−ジクロロピリミジン（Ｒ^３−Ｃｌ）と反応させ、次いで、ＮａＯＨ等の塩基でけん化することにより、式（Ｉ）の化合物を与える。

Ｒ^２が水素を表す式（Ｉ）の化合物は、各アザインドール誘導体（１３）から製造してもよく、アザインドール誘導体（１３）自体は、硫酸等の酸の存在下、各市販のピリジンヒドラジン塩酸塩誘導体（１１）を市販のベンジル（４−オキソシクロヘキシル）カーバメート（１２）と反応させることにより合成してもよい。ＮａＨ等の塩基の存在下、ＤＭＦ等の非プロトン性溶媒中、ブロモ酢酸エチルでアザインドール誘導体（１３）をアルキル化し、次いで、酢酸中、ＨＢｒ等の酸でＣｂｚ脱保護することにより、所望のアザインドール酢酸エチルエステル（１４）を与える。Ｋ_２ＣＯ_３等の塩基の存在下、ＤＭＡ等の非プロトン性溶媒中、アミン（１４）を２，５−ジクロロピリミジン（Ｒ^３−Ｃｌ）と反応させ、次いで、ＮａＯＨ等の塩基でけん化することにより、式（Ｉ）の化合物を与える。

式（Ｉ）の化合物又は構造４、９及び１３の中間体がエナンチオマーの混合物の形態で得られる場合には常に、エナンチオマーは、当業者に知られた方法、例えばジアステレオマー塩の形成及び分離、又はＲｅｇｉｓ Ｗｈｅｌｋ−Ｏ１（Ｒ，Ｒ）（１０μｍ）カラム、Ｄａｉｃｅｌ ＣｈｉｒａｌＣｅｌ ＯＤ−Ｈ（５−１０μｍ）カラム、又はＤａｉｃｅｌ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＩＡ（１０μｍ）若しくはＡＤ−Ｈ（５μｍ）カラム等のキラル固定相のＨＰＬＣを用いて分離することができる。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、０．８から１５０ｍＬ／分の流速における、溶出液Ａ（ＥｔＯＨ。ＴＥＡ及び／又はＤＥＡ等のアミンの存在下又は非存在下で）及び溶出液Ｂ（ヘキサン）の無勾配混合物である。

実験の項
（本明細書で使用する）略語
Ａｃ アセチル
ａｑ． 水溶液
ＡＰＣ アロフィコシアニン
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
Ｃｂｚ ベンジルオキシカルボニル
ｄ 二重項
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＥＡ ジエチルアミン
ＤＩＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＡ ジメチルアセタミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ｄｐｍ 分当たりの壊変数
ＥＡ 酢酸エチル
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ｅｑ． 当量
Ｅｔ エチル
ＦＣ フラッシュクロマトグラフィー
ｈ 時間
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＡ ヒト血清アルブミン
Ｌ リットル
ＬＣ−ＭＳ 液体クロマトグラフィー−質量分析
ｍ 多重項
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭｅＯＨ メタノール
ｍｉｎ 分
Ｍｅ メチル
ＭＳ 質量分析
ＭＷ マイクロ波
Ｎ 溶液の規定度
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
ＰＥＩ ポリエチレンイミン
ＰＧＤ_２ プロスタグランジンＤ_２
Ｐｈ フェニル
ＲＴ 室温
ｓ 秒
ｓａｔ． 飽和
ｔＢｕ ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ｔ_Ｒ 保持時間
トリス トリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液。

化学
一般的事項
全ての溶媒及び試薬は、特に断らない限り、商業的供給元から得られたままで使用される。

温度は、摂氏温度（℃）で示す。特に断らない限り、反応は、室温（ＲＴ）で行われる。

混合物において、溶媒若しくは溶出液又は液体形態の試薬混合物の割合の関係は、特に断らない限り、体積関係で示す（ｖ／ｖ）。

以下の実施例で使用される分析ＨＰＬＣ条件：
ＨＰＬＣ／ＭＳ分析は、Ｄｉｏｎｅｘ Ｐ５８０バイナリポンプ、Ｄｉｏｎｅｘ ＰＤＡ−１００ Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ及びＦｉｎｎｉｇａｎ
ＡＱＡ質量分析計を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００システム上で行う。

ＬＣ保持時間は、下記の溶出条件を用いて得られる：
− Ｚｏｒｂａｘ（登録商標） ＳＢ−ＡＱカラム（４．６×５０ｍｍ、３．５μｍ、Ａ
ｇｉｌｅｎｔ）上の分析ＨＰＬＣ；水／０．０４％ＴＦＡ（Ａ）及びＭｅＣＮ（Ｂ）の５％から９５％Ｂの１．５ｍｉｎに渡る直線勾配；流速４．５ｍＬ／ｍｉｎ、２１０ｎｍで検出。

分取用ＨＰＬＣ／ＭＳ精製（酸性条件）は、Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラー及びフラクションコレクター、Ｄｉｏｎｅｘ ＵＶＤ３４０Ｕ ＤＡＤ検出器、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ ＰＬ−ＥＬＳ １０００ ＥＬＳ検出器及びＴｈｅｒｍｏ ＭＳＱ Ｐｌｕｓ ＭＳ検出器を備えたＧｉｌｓｏｎ ３３３／３３４バイナリ高圧勾配ポンプシステム上で、Ｗａｔｅｒｓ Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３カラム（１０μｍ、３０×７５ｍｍ、）を用いて、水／０．５％ギ酸（Ｂ）及びＭｅＣＮ（Ａ）の５ｍｉｎに渡る８０／２０から５／９５（Ｂ）／（Ａ）への直線勾配で行う；流速７５ｍｌ／ｍｉｎ。

分取用ＨＰＬＣ／ＭＳ精製（塩基性条件）は、Ｇｉｌｓｏｎ２１５オートサンプラー及びフラクションコレクター、Ｄｉｏｎｅｘ ＵＶＤ３４０Ｕ ＤＡＤ検出器、ｐｏｌｙｍｅｒｌａｂｓ ＰＬ−ＥＬＳ １０００ ＥＬＳ検出器及びＴｈｅｒｍｏ ＭＳＱ Ｐｌｕｓ ＭＳ検出器を備えたＧｉｌｓｏｎ ３３３／３３４バイナリ高圧勾配ポンプシステム上で、Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（１０μｍ、３０×７５ｍｍ、）を用いて、水／０．５％の２５％ＮＨ_４ＯＨ（Ｂ）及びＭｅＣＮ（Ａ）の５ｍｉｎに渡る８０／２０から５／９５（Ｂ）／（Ａ）への直線勾配で行う；流速７５ｍｌ／ｍｉｎ。

キラル固定相上の分析用ＨＰＬＣは、Ｄａｉｃｅｌ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ−Ｈ（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ）カラム又はＣｈｉｒａｌｐａｋ ＡＹ−Ｈ（４．６Ｘ２５０ｍｍ、５μｍ）カラム上で行う。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、２１０ｎｍで検出を行う、０．８ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、３０％ヘプタン＋０．０５％ＤＥＡ及び７０％ＥｔＯＨ＋０．０５％ＤＥＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−１）又は２１０ｎｍで検出を行う、１．０ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、４０％ヘプタン及び６０％ＥｔＯＨ＋０．１％ＴＦＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−２）又は２１０ｎｍで検出を行う、０．８ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ヘプタン＋０．０５％ＤＥＡ及び５０％ＥｔＯＨ＋０．０５％ＤＥＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−３）又は２１０ｎｍで検出を行う、０．８ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、２０％ヘプタン及び８０％ＥｔＯＨ＋０．１％ＴＦＡの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−４）である。

キラル固定相上の分取用ＨＰＬＣは、Ｄａｉｃｅｌ ＣｈｉｒａｌＰａｋ ＡＤ−Ｈ（２０×２５０ｍｍ、５μｍ）カラム上で行う。キラルＨＰＬＣの典型的な条件は、２１０ｎｍで検出を行う、１６ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ＥｔＯＨ及び５０％ヘキサンの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−５）又は２１０ｎｍで検出を行う、３４ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ＥｔＯＨ＋０．０５％ＤＥＡ及び５０％ヘプタンの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−６）又は２１０ｎｍで検出を行う、１６ｍＬ／ｍｉｎ．の流速における、５０％ＥｔＯＨ＋０．１％ＤＥＡ及び５０％ヘプタンの無勾配混合物（キラルＨＰＬＣ−７）である。

Ａ．１ ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体の合成
Ａ．１．１． ４−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）シクロヘキサノンの合成

市販の１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−オン（１ｅｑ）をＤＣＭ（２０ｍｌ／１０ｍｍｏｌ）中に溶解したものに、順次、０℃にて、メチルアミン（ＥｔＯＨ中８Ｍ、１ｅｑ）及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）_３（１．５ｅｑ）を添加した。反応混合物をＲＴに温め、２ｈ撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液中に注ぎ、有機層を塩水（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、真空蒸発して、Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−アミンを得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。

Ｎ−メチル−１，４−ジオキサスピロ［４，５］デカン−８−アミン（１ｅｑ）をＤＭＦ（１０．５ｍｌ／６ｍｍｏｌ）中に溶解したものに、ＤＩＥＡ（２ｅｑ）及び２，５−ジクロロピリミジン（１．０５ｅｑ）を添加した。反応混合物を９０℃にて一晩撹拌した。ＲＴに冷却した後、酢酸イソプロピルを添加した。混合物を水及び１０％クエン酸水溶液で洗浄した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、真空濃縮した。粗生成物をＦＣ（ヘプタン中０〜１５％ＥＡ）で精製して、所望の中間体化合物を固体として得た。

この中間体（１ｅｑ）を２Ｎ ＨＣｌ（２．７ｍｌ／５ｍｍｏｌ）とＭｅＯＨ（２．７ｍｌ／５ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解したものを、室温にて一晩撹拌した。水層をＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、真空濃縮した。粗製の残渣をＦＣ（ヘプタン中０〜１７％ＥＡ）で精製して、表題の化合物を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ＝０．７８ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２４０．２。

Ａ．１．２． Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン誘導体の合成（方法Ａ）

一般的手順
各３−アミノ−２−ブロモ−ピリジン誘導体（１ｅｑ）、４−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）シクロヘキサノン（１．２ｅｑ）、（Ｐｈ_３Ｐ）_４Ｐｄ
（０．０５ｅｑ）及びピリジン（８．１７ｅｑ）の溶液を、バイアル中で混合した。バイアルを１６０℃にて１ｈ、ＭＷで照射した。（Ｐｈ_３Ｐ）_４Ｐｄ（０．０２５ｅｑ）を再び添加し、反応混合物を１６０℃にて３０ｍｉｎ、再びＭＷで照射した。ＲＴに冷却した後、反応混合物を水と混合し、ＤＣＭで２回抽出した。有機抽出物を合わせたものを乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過し、真空濃縮した。

残渣をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、所望の生成物を得た。

下記のＮ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン誘導体を、上記の一般的手順に従って合成した。

Ａ．１．３． Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン誘導体の合成（方法Ｂ）
Ａ．１．３．１ ジ−ｔｅｒｔ−ブチル １−（ピリジン−３−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレートの合成

一般的手順：
ブチルリチウムの１．６Ｍヘキサン溶液（１．１ｅｑ）を、各３−ブロモ−ピリジン誘導体（１ｅｑ）をジエチルエーテル（１４．５ｅｑ）中に溶解したものに、Ｎ２雰囲気下、−４０℃にて滴下した。反応混合物を−４０℃にて２０ｍｉｎ撹拌し、次いで、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アゾジカルボキシレート（１．１ｅｑ）をＴＨＦ（１８．５ｅｑ）中に溶解したものを滴下した。反応混合物を−４０℃にて３０ｍｉｎ撹拌し、３０ｍｉｎに渡ってＲＴに温めた。水、次いでＤＣＭを添加した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。残渣をＦＣ（ＥＡ／ｎ−ヘプタン：２／８）で精製して、所望の生成物を得た。

下記のジ−ｔｅｒｔ−ブチル １−（ピリジン−３−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレート誘導体を、上記の一般的手順に従って合成した。

Ａ．１．３．２ Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン誘導体の合成

一般的手順：
各ジ−ｔｅｒｔ−ブチル １−（ピリジン−３−イル）ヒドラジン−１，２−ジカルボキシレート誘導体（１ｅｑ）、４−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）シクロヘキサノン（１ｅｑ）を４％Ｈ_２ＳＯ_４水溶液（１０ｍＬ／０．０４ｍｏｌ）中に溶解したものを、１００℃にて２ｈ３０撹拌した。ＲＴに冷却した後、反応混合物をｓａｔ．ＮａＨＣＯ_３と混合し、ＥＡで抽出した。有機抽出物を合わせたものを乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過し、真空濃縮した。残渣をｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、所望の生成物を得た。

下記のＮ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン誘導体を、上記の一般的手順に従って合成した。

Ａ．１．４． ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体の合成

一般的手順：
適宜なＮ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン誘導体（１ｅｑ）を乾燥ＤＭＦ（０．２ｍＬ／０．０８ｍｍｏｌ）中に溶解した冷（０℃）溶液に、ＮａＨ（１．１ｅｑ、鉱油中の６０％分散液）を添加した。反応混合物を０℃にて１０ｍｉｎ撹拌し、ブロモ酢酸エチル（１．１ｅｑ）を添加し、反応混合物をＲＴに温め、一晩撹拌した。水（０．０７ｍＬ）及び３０％ ａｑ．ＮａＯＨ（０．０７ｍｌ）を反応混合物に添加した。反応混合物を５０℃にて２ｈ撹拌し、次いで、３７％ ａｑ．ＨＣｌ（０．０７ｍＬ）を添加した。生成物を速やかにｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、最終化合物を得た。

実施例の製造
下記の２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体を、上記の一般的手順に従って合成した。

Ａ．２ ２−（８−（５−クロロピリミジン−２−イルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体の合成
Ａ．２．１ ｔｅｒｔ−ブチル（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメートの合成

３−アミノ−２−ブロモピリジン（１．０ｇ、５．７８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、ｔｅｒｔ−ブチル（４−オキソシクロヘキシル）カーバメート（１．４８ｇ、６．９４ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）、（Ｐｈ_３Ｐ）_４Ｐｄ（３３４ｍｇ、０．２８９ｍｍｏｌ、０．０５ｅｑ）及びピリジン（３．８ｍｌ、４７．２ｍｍｏｌ、８．１７ｅｑ）の溶液をバイアル中で混合した。バイアルを、１６０℃にて２ｈ３０、ＭＷで加熱した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液と混合し、ＥＡで抽出した。有機層を水、塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過し、真空濃縮した。残渣をジエチルエーテルで粉砕し、ろ過により集め、表題の生成物をベージュ色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ＝０．５９ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２８８．２７。

Ａ．２．２ エチル ２−（８−アミノ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（塩酸塩）の合成

ｔｅｒｔ−ブチル（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメート（４０３ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を乾燥ＤＭＦ（３．８ｍＬ）中に溶解した冷（０℃）溶液に、ＮａＨ（３７ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ、鉱油中の６０％分散液）を添加した。反応混合物を０℃にて１０ｍｉｎ撹拌し、ブロモ酢酸エチル（０．１６ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を添加し、反応混合物をＲＴに温め、一晩撹拌した。水を添加し、反応混合物をＥＡで２回抽出した。有機抽出物を合わせたものを水、塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過し、真空濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（酸性条件）で精製して、所望の生成物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ＝０．６７ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３７３．９６。

エチル ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２３ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）に、ＨＣｌのジオキサン溶液（４Ｍ、０．２１ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ、１４ｅｑ）を添加し、反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌した。次いで、反応混合物を真空濃縮して、表題の生成物を得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ＝０．３７ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２７３．９１。

Ａ．２．３ ２−（８−（５−クロロピリミジン−２−イルアミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体の合成

一般的手順：
エチル ２−（８−アミノ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（塩酸塩）（０．０６ｍｍｏｌ）、２，５−ジクロロピリミジン（０．０６ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（０．２５ｍｍｏｌ）をＤＭＡ（０．４ｍＬ）中に混合したものを、８０℃にて１２ｈ撹拌した。ＲＴに冷却した後、水（０．０６ｍＬ）及び３０％ ａｑ ＮａＯＨ（０．０６ｍＬ）を反応混合物に添加した。反応混合物を５０℃にて２ｈ撹拌し、次いで、３７％ ａｑ ＨＣｌ（０．０６ｍＬ）を添加した。生成物を速やかにｐｒｅｐ．ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、最終化合物を白色の固体として得た。

実施例の製造
下記の２−（８−（５−クロロピリミジン−２−イルアミノ）−６，７，８，９−テトラ
ヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸誘導体を、上記の一般的手順に従って合成した。

Ａ．３ （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の合成
Ａ．３．１ ｔｅｒｔ−ブチル メチル（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメートの合成

バイアル中で、３−アミノ−２−ブロモピリジン（２．０ｇ、１１．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、４−（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルアミノ）シクロヘキサノン（３．１５ｇ、１３．９ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）及び（Ｐｈ_３Ｐ）_４Ｐｄ（６６８ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、０．０５ｅｑ）をピリジン（７．６ｍｌ）中に溶解した。バイアルをＭＷ照射により１６０℃にて６０ｍｉｎ加熱した。反応混合物を水（９．５ｍＬ）中に注ぎ、得られた固形物をろ過により集め、乾燥し、ジエチルエーテル中で粉砕し、再びろ過により集めて、表題の化合物を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ＝０．６３ｍｉｎ；［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３０２．１５。

Ａ．３．２ （Ｓ）−エチル ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート及び（Ｒ）−エチル ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成

ｔｅｒｔ−ブチル メチル（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメート（１．３７ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（１２．５ｍＬ）中の冷（０℃）溶液に、ＮａＨ（１２０ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ、鉱油中の６０％分散液）を添加した。反応混合物を０℃にて１０ｍｉｎ撹拌し、ブロモ酢酸エチル（０．５２ｍＬ、４．５６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＲＴに温め、一晩撹拌した。水を添加し、得られた沈殿物をろ過により集め、水で洗浄した。粗製の固形物を、ＦＣ（ＤＣＭ中の８％ＭｅＯＨ）、次いでジエチルエーテルによる粉砕により精製して、所望の生成物をラセミ体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．７ｍｉｎ／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３８８．５０。

得られた生成物の２つのエナンチオマーを分取用キラルＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−５）により分離した：
（Ｒ）−エチル ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（４８７ｍｇ、２８％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔ_Ｒ：６．０３ｍｉｎ；
（Ｓ）−エチル ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（４９１ｍｇ、２８％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔ_Ｒ：７．３６ｍｉｎ。

Ａ．３．３． （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（実施例６）の合成

（Ｓ）−エチル ２−（８−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（１００ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）に、ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．８９５ｍＬ）を添加した。反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌し、濃縮して、所望の生成物を塩酸塩として得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．３８ｍｉｎ／［Ｍ＋Ｈ］^＋：２８８．２５。

この中間体（９３ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をＤＭＡ（１．８ｍＬ）中に溶解したものに、２，５−ジクロロピリミジン（３８．５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（１４３ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を８０℃にて２０ｈ撹拌した。ＲＴに冷却した後、水（０．２６ｍＬ）及び３０％ ａｑ ＮａＯＨ（０．２６ｍＬ）を添加し、反応混合物を５０℃にて２ｈ撹拌した。次いで、３７％ ａｑ ＨＣｌ（０．２６ｍＬ）を添加し、得られた沈殿物をろ過し、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（塩基性条件）で精製して、表題の化合物を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．６１ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３７２．１８。ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−２）：ｔ_Ｒ：７．８７ｍｉｎ。

Ａ．４ （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の合成
Ａ．４．１ （Ｓ）−エチル ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート及び（Ｒ）−エチル ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成

ＮａＨ ９５％（５６．１ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を、Ｎ−（５−クロロピリミジン−２−イル）−２−フルオロ−Ｎ−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−アミン（６１４ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＤＭＦ（６．３６ｍＬ）中に溶解した冷溶液（０℃）に注意深く添加した。反応混合物を２０ｍｉｎ撹拌した。ブロモ酢酸エチル（０．２３３ｍＬ、２．０４ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）をゆっくりと添加し、反応混合物をＲＴにて温め、２ｈ撹拌した。反応混合物をＥＡ中に溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和溶液で洗浄した。有機抽出物をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。残渣をＦＣ（ｎ−ヘプタンからｎ−ヘプタン／ＥＡ：７／３へ）で精製して、所望の生成物をラセミ体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．９６ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：４１８．０１。

得られた生成物の２つのエナンチオマーを分取用キラルＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−６）により分離した：
（Ｓ）−エチル ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２７１ｍｇ、３５％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−３）：ｔ_Ｒ：６．２２ｍｉｎ；
（Ｒ）−エチル ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２７３ｍｇ、３５％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−３）：ｔ_Ｒ：７．６６ｍｉｎ。

Ａ．４．２ （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）ア
ミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（実施例７）の合成

（Ｓ）−エチル ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（２７１ｍｇ、０．６４９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解したものに、ＮａＯＨ １Ｎ（１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ、１５．４２ｅｑ）をＲＴにて添加した。反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌した。反応混合物を真空濃縮して、ＴＨＦのみを除いた。次いで、それを濃ＨＣｌでｐＨ〜５−６に酸性化し、ＲＴにて撹拌した。懸濁液をＥｔＯＡｃ（４ｘ）で抽出した。有機層を合わせたものをＭｇＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮して、表題の化合物をベージュ色の固体（２５５ｍｇ、１００％）として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．８２ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３９０．１２。ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−２）：ｔ_Ｒ：４．９６ｍｉｎ。

Ａ．５ （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸の合成
Ａ．５．１ ベンジル （２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメートの合成

２−フルオロ−５−ヒドラジニルピリジン塩酸塩（２００ｍｇ、１ｅｑ）、ベンジル（４−オキソシクロヘキシル）カーバメート（２９６ｍｇ、１ｅｑ）を４％Ｈ_２ＳＯ_４水溶液（３．３ｍＬ）中に溶解したものを、８０℃にて１６ｈ撹拌した。ＲＴに冷却した後、反応混合物をｓａｔ．ＮａＨＣＯ_３と混合し、ＥＡで抽出した。有機抽出物を合わせたものを乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過し、真空濃縮して、所望の生成物（３０５ｍｇ、７７％）を得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．８２ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３４０．１３。

Ａ．５．２ （Ｓ）−エチル−２−（８−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート及び（Ｒ）−エチル−２−（８−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３
，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテートの合成

ＮａＨ ９５％（２０．８ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）を、ベンジル （２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−８−イル）カーバメート（２９５ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＤＭＦ（６．３６ｍＬ）中に溶解した冷溶液（０℃）に注意深く添加した。反応混合物を１０ｍｉｎ撹拌した。ブロモ酢酸エチル（０．０８６ｍＬ、１．１ｅｑ）をゆっくりと添加し、反応混合物をＲＴにて温め、４ｈ３０撹拌した。ＮａＨ ９５％（３．５ｍｇ、０．２ｅｑ）、次いでブロモ酢酸エチル（０．０１６ｍＬ、０．２ｅｑ）をさらに添加した。反応液をＲＴにて１６ｈ撹拌した。次いで、反応混合物をＥＡ中に溶解し、ＮａＨＣＯ_３の飽和溶液で洗浄した。有機抽出物をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。残渣をＦＣ（ｎ−ヘプタンからｎ−ヘプタン／ＥＡ：１／１へ）で精製して、所望の生成物をラセミ体（１５０ｍｇ、５０％）として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．９ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：４２６．１５。

得られた生成物の２つのエナンチオマーを分取用キラルＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−７）により分離した：
（Ｒ）−エチル−２−（８−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（６７ｍｇ、２３％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−３）：ｔ_Ｒ：５．９６ｍｉｎ；
（Ｓ）−エチル−２−（８−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（８６ｍｇ、２９％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−３）：ｔ_Ｒ：７．２７ｍｉｎ。

Ａ．５．３ （Ｓ）−エチル−２−（８−アミノ−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（臭化水素酸塩）の合成

（Ｓ）−エチル−２−（８−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（４２ｍｇ、１ｅｑ）を酢酸（１ｍＬ）中に溶解したものに、ＨＢｒの３３％酢酸溶液（０．２２ｍＬ）を添加した。反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌し、真空濃縮して、表題の生成物を得（９４ｍｇ、１００％）、それをさらに精製することなく次の工
程で使用した。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．５５ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：２９２．１２。

Ａ．５．４ （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸（実施例８）の合成

（Ｓ）−エチル−２−（８−アミノ−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）アセテート（臭化水素酸塩）（４８ｍｇ、１ｅｑ）をＤＭＡ（１ｍＬ）中に溶解したものに、順次、２，５−ジクロロピリミジン（１５．６ｍｇ、１．４ｅｑ）及び無水Ｋ_２ＣＯ_３（４１．５ｍｇ、４ｅｑ）を添加した。反応混合物を８０℃にて１６ｈ撹拌した。ＲＴに冷却した後、反応液を水中に注ぎ、ＥＡで抽出した。有機抽出物を合わせたものをＭｇＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。残渣をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（酸性条件）で精製して、中間体エチルエステル（９ｍｇ、３０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．８８ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：４０４．０５。

エチルエステル中間体（９ｍｇ、１ｅｑ）をＴＨＦ（０．５ｍＬ）中に溶解したものに、１Ｎ ＮａＯＨ（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物をＲＴにて１ｈ撹拌し、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ１−２まで酸性化し、ＥＡで抽出した。有機抽出物を合わせたものをＭｇＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空濃縮して、表題の化合物をベージュ色の固体（６ｍｇ、２４％）として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．７５ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３７６．１８。ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−４）：ｔ_Ｒ：６．６ｍｉｎ。

Ａ．６ （Ｓ）−２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−９（２Ｈ）−イル）酢酸（参照実施例１）の合成
Ａ．６．１ （Ｓ）−メチル ２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセテート及び（Ｒ）−メチル ２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセテートの合成

（ＷＯ２０１１／１１７７９８の実施例５３として記載された）２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−９（２Ｈ）−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解したものに、濃縮Ｈ_２ＳＯ_４（０．２ｅｑ）を添加した。反応混合物を還流下２ｈ撹拌した。反応混合物を真空濃縮して、残渣を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液と混合し、ＥＡで抽出した。有機抽出物を合わせたものを塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥し、真空蒸発して、所望の生成物をラセミ体として得た（８６ｍｇ、８３％）。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：１．０１ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３８５．１０。

得られた生成物の２つのエナンチオマーを分取用キラルＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−５）により分離した：
（Ｓ）−メチル ２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセテート（２２ｍｇ、２１％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔ_Ｒ：７．２１ｍｉｎ；及び
（Ｒ）−メチル ２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセテート（２１ｍｇ、２０％）：ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−１）：ｔ_Ｒ：９．０６ｍｉｎ。

Ａ．６．２ （Ｓ）−２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−カルバゾール−９（２Ｈ）−イル）酢酸（参照実施例１）の合成

（Ｓ）−メチル ２−（３−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−９Ｈ−カルバゾール−９−イル）アセテート（２２ｍｇ）をＴＨＦ（１ｍＬ）中に溶解したものに、５Ｎ ＮａＯＨ（１０ｅｑ）を添加した。反応混合物をＲＴにて２ｈ撹拌し、濃縮ＨＣｌで酸性化し、ＲＴにて撹拌した。得られた沈殿物をろ過し、乾燥して、表題の化合物を白色の固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：ｔ_Ｒ：０．９３ｍｉｎ．／［Ｍ＋Ｈ］^＋：３７１．１３。ＨＰＬＣ（キラルＨＰＬＣ−２）：ｔ_Ｒ：４．５９ｍｉｎ。

生物学的アッセイ：
ｈＣＲＴＨ２受容体膜の調製及び放射性リガンド置換アッセイ：
まず、組み換えＨＥＫ２９３−ｈＣＲＴＨ_２細胞を、ラバー・ポリスマンを用いて、培養プレートから、５ｍｌバッファーＡ／プレート（バッファーＡ：５ｍＭ トリス、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２−６Ｈ_２Ｏ ｐＨ＝７．４）中に剥がした。次いで細胞を遠心分離管内に移し、４００ｇにて５分間遠心した。細胞のペレットを同じバッファー中に再懸濁し、そして遠心分離管を−８０℃で凍結した。細胞を融かし、そしてＰｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いたホモジナイゼーション（３０秒）により、膜画分を生成した。次いで、その膜画分を３０００ｇで２０分間遠心し、そしてバッファーＣ中に再懸濁した（バッファーＣ：７５ｍＭ トリス、２５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２５０ｍＭ サッカロース、ｐＨ７．４）。膜画分を小分けして−２０℃にて保存した。

結合試験を、最終試験容積２５０μｌで行った。まず、前もって結合バッファー（結合バッファー：５０ｍＭ トリス−塩基、１００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ＢＳＡ（プロテアーゼフリー）、０．０１％ＮａＮ_３、１０ｍＭ ＭｎＣｌ_２、ｐＨ７．０）で希釈した２５μｌの試験化合物を、各ウェル内に入れた。７５μｌの結合バッファーを添加した後、５０μｌの放射性リガンド^３Ｈ−ＰＧＤ_２（ＡＮＡＷＡ製ＡＲＴ０６６２、２．５ｎＭにて（２２０．０００ｄｐｍ／ウェル））を各ウェルに添加した。結合試験は、１００μｌのＣＲＴＨ_２膜画分の添加により開始し、最終濃度を２０μｇ／ウェルとした。非特異的結合については、反応混合物にＰＧＤ_２を、最終濃度が１０ｍＭとなるように添加した。この試験混合物を室温にて９０分間インキュベートし、次いで、予め０．５％のポリエチレンイミン（ＰＥＩ）に３時間浸したＧＦ／Ｃフィルター９６−ウェルプレートでろ過した。フィルター−ウェルを氷冷結合バッファーで３回洗浄した。次いで４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−４０（Ｐａｃｋａｒｄ）を各ウェルに添加し、そして残った放射活性をＴｏｐｃｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ）で定量した。

例示化合物の拮抗活性を表４に示す。

表４：

放射性リガンド置換試験−ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）：
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）存在下での放射性リガンド置換試験を上記の通りに行ったが、下記の変更を行った。結合バッファー−ＨＳＡ：結合バッファー＋ヒト血清Ａ１８８７からのＳｉｇｍａ Ａｌｂｕｍｉｎ０．５％（０．１％ＢＳＡの代わりに）。前もっ
て結合バッファー−ＨＳＡで希釈した２５μｌの試験化合物を、各ウェル内に入れた。７５μｌの結合バッファー−ＨＳＡを添加した後、５０μｌの^３Ｈ−ＰＧＤ_２（ＡＮＡＷＡ製ＡＲＴ０６６２、２．５ｎＭにて（２２０．０００ｄｐｍ／ウェル））を、各ウェルに添加した。それ以外のプロトコルは上記したものと同一であった。

例示化合物の拮抗活性を表５に示す。

表５：

ヒト血漿を用いた好酸球形態変化試験
インフォームド・コンセントを得た後、スイス連邦、バーゼル倫理委員会により承認されたプロトコルに従って、静脈穿刺により血液サンプルを採取した。（好酸球、好塩基球及び好中球を含む）多形核白血球をＰｏｌｙｍｏｒｐｈｐｒｅｐ（登録商標）法（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ）を用いて分離した。要約すると、抗凝固剤処理した全血をＰｏｌｙｍｏｒｐｈｐｒｅｐ勾配（密度、１．１１３ｇ／ｍｌ）上に積層し、そして５００ｇで３０ｍｉｎ遠心した。多形核細胞画分をハーヴェストし、そして低張生理食塩水溶解により赤血球を枯渇させた。

多形核細胞を、５×１０^６細胞／ｍｌにて、試験バッファー（０．１％のＢＳＡ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ及び１０ｍＭのブドウ糖を添加した、Ｃａ^２＋／Ｍｇ^２＋を含む１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に再懸濁し、そして抗−ＣＤ４９ｄ−ＡＰＣ（ＡＰＣ＝アロフィコシアニン）で、ＲＴにて１時間染色した。試験化合物を、種々の濃度で１０ｍｉｎ、（トロンビン阻害剤で抗凝固剤処理した）ヒト血漿中でプレインキュベートした。次いでヒト血
漿を多形核細胞に添加して、４×１０^６細胞／ｍｌの多形核細胞と合わせて最終試験体積の５０％とした。３７℃にて１０分間インキュベートした後、ＰＧＤ_２を最終濃度１００ｎＭとなるように添加することにより、多形核細胞を３７℃にて５ｍｉｎ活性化した。０．５ｍｌのパラホルムアルデヒド（１％）を添加することにより、活性化を停止した。

パラホルムアルデヒドで固定化した後すぐに、サンプルをＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、そして標的細胞を、それらの前方散乱（ＦＳＣ）及び側方散乱（ＳＳＣ）特性により同定した。好酸球は、抗−ＣＤ４９ｄ−ＡＰＣシグナル及びそれらの特徴的な側方散乱（ＳＳＣ）プロファイルにより同定した。好酸球活性化の指標である形態変化反応を、増大した前方散乱を持つ細胞の百分率として定量した。

例示化合物の拮抗活性を表６に示す。

表６：

細胞内カルシウム動員試験（ＦＬＩＰＲ）：
発現ベクターｐｃＤＮＡ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の単一挿入由来のサイトメガロウイルスプロモーターの制御下で、ｈＣＲＴＨ２受容体を安定的に発現している細胞（ＨＥＫ−２９３）を、標準的な哺乳動物細胞培養条件下（３７℃、５％ＣＯ_２の加湿雰囲気中）、１０％ウシ胎仔血清（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を添加したＤＭＥＭ（低ブドウ糖、Ｇｉｂｃｏ）培地中で、コンフルエンシーまで増殖させる。解離
バッファー（ＰＢＳ中０．０２％ＥＤＴＡ、Ｇｉｂｃｏ）を用いて細胞を培養皿から１分間剥がし、試験バッファー（当量のＨａｎｋ’ｓ ＢＳＳ（ＨＢＳＳ、Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ）及びＤＭＥＭ（低ブドウ糖、フェノールレッドなし、Ｇｉｂｃｏ））中、２００ｇでｒｔにて５分間の遠心分離により収集する。１μＭ Ｆｌｕｏ−４及び０．０４％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７（両方ともＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ）並びに２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ）の存在下、試験バッファー中で４５分間インキュベーション（３７℃及び５％ＣＯ_２）した後、細胞を試験バッファーで洗浄し、試験バッファー中に再懸濁し、次いで３８４−ウェルＦＬＩＰＲアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）上に、各ウェルに６６μｌ、５０，０００細胞を播種し、遠心分離により沈降させる。

試験化合物のストック溶液をＤＭＳＯ中で濃度１０ｍＭとし、阻害用量応答曲線に必要な濃度に、試験バッファーで段階希釈する。プロスタグランジンＤ_２（Ｂｉｏｍｏｌ、ＰｌｙｍｏｕｔｈＭｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）を作動薬として用いる。

ＦＬＩＰＲ Ｔｅｔｒａ装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を製造業者の標準的な取扱説明書に従って操作し、ＤＭＳＯ中に１０ｍＭで溶解し、実験に先立ち試験バッファー中で希釈して所望の最終濃度とした４μｌの試験化合物を加える。次いで０．８％ウシ血清アルブミン（脂肪酸含有量＜０．０２％、Ｓｉｇｍａ）を添加した試験バッファー中の８０ｎＭプロスタグランジンＤ_２（Ｂｉｏｍｏｌ、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）１０μｌを加えて、各々、最終濃度１０ｎＭ及び０．１％とする。試験化合物の添加前及び添加後における蛍光の変化をλ_ｅｘ＝４８８ｎｍ及びλ_ｅｍ＝５４０ｎｍにてモニターする。プロスタグランジンＤ_２添加後の基準レベルを超える発光ピーク値を、ベースライン減算後にエクスポートする。ベースライン値（プロスタグランジンＤ_２添加せず）の減算後、値を高レベルコントロール（化合物添加せず。）に正規化する。プログラムＸＬｌｆｉｔ３．０（ＩＤＢＳ）を使用して、データを方程式（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））の単サイト用量応答曲線へ適合させ、ＩＣ_５０値を計算する。

初代培養ラット肝細胞におけるインビトロ細胞毒性
１． 方法
１．１ ラット肝細胞の単離及び培養
成体雄性ウィスター系ラットをペントバルビタールナトリウムを用いて麻酔し、標準的手順に従って、すなわちコラゲナーゼ溶液を用いた肝臓のｉｎ ｓｉｔｕ 潅流により、肝細胞を単離した。トリパンブルーｄｙｅ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ法で確かめた、精製肝細胞のバイアビリティー（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）は８５％を超えていた。単離した肝細胞を、フェノールレッドを含まず、トランスフェリン（１００μｇ／ｍｌ）、トリヨードサイロニン（ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ）（１０μｇ／ｍｌ）、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎ ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（１３．３６μｇ／ｍｌ）、グルカゴン（５μｇ／ｍｌ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、イノシン（１０μｇ／ｍｌ）、インスリン（１０μｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）及びペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）及び１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加した標準Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅ（ＷＭＥ ｓｕｐｐ．）に再懸濁した。細胞を、コラーゲン被覆２４−ウェルプレートに２ｘ１０^５細胞／ウェルの初期密度で播いた。培養プレートに接着させるために４ｈ置いてから、培地を吸引し、ＦＢＳを含まず、試験化合物を含む新しいＷＭＥ ｓｕｐｐ．で置き換え、９５％Ｏ_２及び５％ＣＯ_２雰囲気中で３７℃にて２４ｈインキュベートした。各実験、すなわち肝細胞の各バッチを用いた実験について、試験化合物による処理を４重に行った。各培養プレート上には４重の対照群（ベヒクルのみによる処理）も設けた。

１．２ 試験化合物へのインビトロ暴露
処理を開始する数時間前に、試験化合物の保存溶液をＤＭＳＯ中に調製した。最終濃度が０、３、１０、３０、１００及び３００μＭになるようにこれらの保存溶液を適宜に希釈して、処理の直前に培養培地に添加した。ベヒクルであるＤＭＳＯの最終濃度は１％（ｖ／ｖ）であった。

１．３ 細胞培養のバイアビリティー
１．３．１ 単層形態学（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）のモニター
肝細胞単層の形態を、試験化合物への暴露の２４時間後に光学顕微鏡でモニターした。処理と関連する効果を下記の尺度に従って記述する：
０ 対照培養と比較した場合、処理による形態学的変化が観察されない；
１−３ 処理による何らかの形態学的変化、例えば、細胞内顆粒形成、空胞化（ｖａｃｕｏｌｉｚａｔｉｏｎ）又は細胞死。変化の重篤度に応じて、これらの変化を弱（１）、中（２）又は強（３）とする。

Ｋ 処理により、１００％の細胞が死滅し及び／又は単層の完全な剥離が起こり、透明な無細胞のディッシュが生じる。

１．３．２ 乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の放出
肝細胞培養を２４ｈ処理した後、培養培地のアリコートを注意深く集め、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製ＬＤＨ細胞毒性検出キット（ｃａｔ Ｎｏ．６３０１１７、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて、分光測色法（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ）により、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性の分析に使用した。各実験について、さらなる培養を、処理開始時の細胞内全ＬＤＨ活性の測定のために使用した。この目的のために、処理を開始する前に、実験ごとに４ウェルの細胞培養を冷生理食塩水で洗浄し、新しい培地中で超音波処理し、ホモジネートの全ＬＤＨ活性を分析した。培養培地中の酵素活性を測定し、処理開始時に培養肝細胞中に存在する全活性の百分率として表した。

２． データ分析
２４ｈの処理後に細胞形態及びＬＤＨ放出（ＬＤＨ ｌｅａｋａｇｅ）に基づいて、各化合物について最小細胞毒性濃度（ＬＣＣ）及び無効果濃度（ＮｏＥＣ）を示す。ＬＣＣは、試験化合物が培養ラット肝細胞に対して透明効果（ｃｌｅａｒ ｅｆｆｅｃｔ）（形態学的尺度≧２又はＬＤＨ放出の２倍以上の増加）を引き起こす最小濃度と定義される。＞３００μＭのＬＣＣ値は、３００μＭの最大試験濃度の両末端点において効果がないことを示す。最大試験濃度において弱い細胞毒性（形態学的尺度１又はＬＤＨ放出の２倍未満の増加）のみを示す化合物には「３００ｓ」と記した。ＮｏＥＣは、化合物が培養ラット肝細胞に対して効果（形態学及びＬＤＨ放出）を示さない最大試験濃度と定義される。

３． 結果

インビボ肝毒性：
式（Ｉ）の化合物の肝毒性は、３種の異なる化合物用量を用いて、ラット及び非げっ歯類種において４週までの経口処理により分析することができる。毒性の回復性（Ｒｅｖｅｒｓｉｂｉｌｉｔｙ）の可能性は、その後の無処理期間（回復期間）において調べることができる。用量レベルは、それぞれの種における容量範囲設定試験に基づいて選択することができる。高用量は、最大耐量付近における臓器毒性を調べることを目的とする。中域及び低用量は、ヒトにおいて治療上見込まれる暴露に基づいて選択される。各用量レベルにおいて化合物の暴露が測定される。

処理及び回復の終了時に、血中の（例えば、肝酵素、タンパク質、トリグリセリド又は
コレステロール等の）肝臓バイオマーカーを測定する。加えて、ヘマトキシリン・エオシン染色肝臓スライスを顕微鏡で観察し、臓器の起こり得る損傷を直接評価する。肝臓に対するさらなる知見を得るためには、肝臓スライスの特殊な染色が必要になるかもしれない。

Claims (13)

1. 式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩：
   

   

   式中、
   Ｒ^１は、水素、（Ｃ_１−４）アルキル、（Ｃ_１−２）フルオロアルキル、（Ｃ_１−４）アルコキシ又はハロゲンを表し；
   Ｒ^２は、水素又はメチルを表す。
2. Ｒ^１が、水素、メチル、トリフルオロメチル、メトキシ又はフルオロを表す；
   請求項１に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
3. Ｒ^１が、水素、（Ｃ_１−４）アルキル又は（Ｃ_１−４）アルコキシを表す；
   請求項１に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
4. Ｒ^１が、水素、メチル又はメトキシを表す；
   請求項１に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
5. Ｒ^１がフルオロを表す；
   請求項１に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
6. Ｒ^２がメチルを表す；
   請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物又はそのような化合物の塩。
7. キラル中心の絶対配置が式（Ｉ_Ｓｔ１）で表される通りである
   

   

   請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物又はそのような化合物の塩。
8. 以下からなる群より選択される請求項１に記載の化合物：
   ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒ
   ドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
   ２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−（トリフルオロメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   又はそのような化合物の塩。
9. 以下からなる群より選択される請求項１に記載の化合物：
   （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−フルオロ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−メトキシ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；及び
   （Ｓ）−２−（８−（（５−クロロピリミジン−２−イル）（メチル）アミノ）−２−（トリフルオロメチル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］インドール−５−イル）酢酸；
   又はそのような化合物の塩。
10. 請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
11. 医薬として使用するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
12. 喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチを含む慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症
    候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患からなる群より選択される疾患の予防及び／又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
13. 喘息、アレルギー性喘息、好酸球性喘息、重症喘息、鼻炎、アレルギー性鼻炎、血管性浮腫、昆虫毒アレルギー、薬剤アレルギー、アレルギー性副鼻腔炎、アレルギー性腎炎、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息、食物アレルギー、全身性肥満細胞症、アナフィラキシーショック、じん麻疹、湿疹、潰瘍性大腸炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患及び関節リウマチを含む慢性及び急性のアレルギー性／免疫性疾患／障害；チャーグ・ストラウス症候群等の小血管性血管炎、ヴェグナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎（及び後者の臓器特異的亜群）、好酸球性肺炎等の好酸球増加症候群、好酸球性食道炎、逆流性食道炎、好酸球性心内膜炎（レフラー心内膜炎）、好酸球増多筋痛症候群、好酸球性筋膜炎、好酸球性膿疱性毛包炎（大藤病）、好酸球性潰瘍、好酸球増多随伴性血管類リンパ組織増殖症（ＡＬＨＥ）、好酸球性蜂巣炎（ウェルズ症候群）、慢性好酸球性白血病及びドレス症候群（好酸球増加と全身症状を伴う薬疹）を含む好酸球関連疾患；並びに好塩基球性白血病及び好塩基球性白血球増加症を含む好塩基球関連疾患からなる群より選択される疾患の予防及び／又は治療において使用するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。