JP2017505297A - 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート - Google Patents
共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017505297A JP2017505297A JP2016544450A JP2016544450A JP2017505297A JP 2017505297 A JP2017505297 A JP 2017505297A JP 2016544450 A JP2016544450 A JP 2016544450A JP 2016544450 A JP2016544450 A JP 2016544450A JP 2017505297 A JP2017505297 A JP 2017505297A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- hapten
- amino acid
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 334
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 301
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 292
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 title description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims abstract description 99
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims abstract description 89
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims abstract description 89
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims abstract description 59
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 59
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 169
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 166
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 98
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 97
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 97
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 76
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 claims description 50
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 claims description 46
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 42
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 40
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 39
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 37
- -1 or carborane Chemical compound 0.000 claims description 37
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 22
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 17
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 8
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 claims description 8
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 abstract description 16
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 277
- 238000000034 method Methods 0.000 description 125
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 91
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 88
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 86
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 83
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 80
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 79
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 76
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 59
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 59
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 59
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 54
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 51
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 49
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 49
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 48
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 46
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 45
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 43
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 43
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 39
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 35
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 35
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 34
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 34
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 33
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 31
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 29
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 29
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 29
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 29
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 28
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 28
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 27
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 27
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 26
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 26
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 25
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 25
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 25
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 25
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 25
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 25
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 24
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 24
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 24
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 24
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 22
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 22
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 22
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 21
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 21
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 20
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 20
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 20
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 19
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 19
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 18
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 18
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 18
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 16
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 16
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 16
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 13
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 13
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 13
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 13
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 101100029145 Mycobacterium tuberculosis (strain ATCC 25618 / H37Rv) PE25 gene Proteins 0.000 description 12
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 12
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 12
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 12
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 11
- BFTIPPVTTJTHLM-MNXVOIDGSA-N biocytinamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCC[C@H](N)C(N)=O)SC[C@@H]21 BFTIPPVTTJTHLM-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 11
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 11
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 11
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 10
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 10
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 10
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 10
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 10
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 10
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 9
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 9
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 9
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 8
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 8
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 230000036541 health Effects 0.000 description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 8
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 7
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 7
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 7
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 7
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 7
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 6
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 description 6
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 6
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 6
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 6
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 5
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 5
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 5
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 5
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 5
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 5
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-(5-hydroxy-2,2-dimethylchromen-6-yl)propan-1-one Chemical compound OC1=C2C=CC(C)(C)OC2=CC=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 4
- 102100025698 Cytosolic carboxypeptidase 4 Human genes 0.000 description 4
- OIGBGGFDMZZJOF-WNOAWAAYSA-N Dig-Cy5 Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3(C)[C@H](O)C[C@H]4[C@H]([C@]3(CC2)O)CC[C@H]2[C@]4(C)CC[C@@H](C2)OCC(=O)NCCNC(=O)CCCCCN2\C(C(C3=CC(=CC=C32)S(O)(=O)=O)(C)C)=C/C=C/C=C/C2N(C3=CC=C(C=C3C2(C)C)S(O)(=O)=O)CC)=CC(=O)OC1 OIGBGGFDMZZJOF-WNOAWAAYSA-N 0.000 description 4
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710082714 Exotoxin A Proteins 0.000 description 4
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 4
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 4
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 4
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 4
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 4
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 4
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960002143 fluorescein Drugs 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 4
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 4
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 4
- JKHVDAUOODACDU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O JKHVDAUOODACDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IHVODYOQUSEYJJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]amino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)C(CC1)CCC1CN1C(=O)C=CC1=O IHVODYOQUSEYJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CULQNACJHGHAER-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=C(NC(=O)CI)C=C1 CULQNACJHGHAER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-(4-isothiocyanatophenyl)propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C(C)CN(CC(O)=O)CC(N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1-methyl-7h-purine-6-thione Chemical compound S=C1N(C)C(N)=NC2=C1NC=N2 FBUTXZSKZCQABC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanehydrazide Chemical compound C1=CC(CCCC(=O)NN)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O ZMRMMAOBSFSXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000001879 Digitalis lutea Species 0.000 description 3
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 3
- 101100413173 Phytolacca americana PAP2 gene Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 3
- 108010001818 alpha-sarcin Proteins 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 3
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 3
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 3
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 108010028531 enomycin Proteins 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 3
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 3
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 3
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010076042 phenomycin Proteins 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 3
- MKNJJMHQBYVHRS-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[11-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)undecanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCCCCCN1C(=O)C=CC1=O MKNJJMHQBYVHRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ULARYIUTHAWJMU-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O ULARYIUTHAWJMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 150000003327 trichothecene derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- FMUMEWVNYMUECA-LURJTMIESA-N (2s)-2-azaniumyl-5-methylhexanoate Chemical compound CC(C)CC[C@H](N)C(O)=O FMUMEWVNYMUECA-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- QEIFSLUFHRCVQL-UHFFFAOYSA-N (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) hydrogen phosphate;(4-methylphenyl)azanium Chemical compound CC1=CC=C(N)C=C1.C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QEIFSLUFHRCVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N (6-azaniumylidene-1,6-dimethoxyhexylidene)azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=N)CCCCC(=N)OC IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XQUPVDVFXZDTLT-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]methyl]phenyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1C(C=C1)=CC=C1CC1=CC=C(N2C(C=CC2=O)=O)C=C1 XQUPVDVFXZDTLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 1-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCCC1 WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 2,2-diamino-1,4-bis(4-azidophenyl)-3-butylbutane-1,4-dione Chemical compound C=1C=C(N=[N+]=[N-])C=CC=1C(=O)C(N)(N)C(CCCC)C(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YBBNVCVOACOHIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDDWGATUBUCAFZ-UHFFFAOYSA-N 2-(4-oxo-6-piperazin-4-ium-1-ylquinazolin-3-yl)acetate Chemical compound C1=C2C(=O)N(CC(=O)O)C=NC2=CC=C1N1CCNCC1 BDDWGATUBUCAFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UHQFXIWMAQOCAN-UHFFFAOYSA-N 2-amino-1,3-dihydroindene-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CC(N)(C(O)=O)CC2=C1 UHQFXIWMAQOCAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DJQYYYCQOZMCRC-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropane-1,3-dithiol Chemical group SCC(N)CS DJQYYYCQOZMCRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000669426 Aspergillus restrictus Ribonuclease mitogillin Proteins 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 108700032819 Croton tiglium crotin II Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000004862 Gastrin releasing peptide Human genes 0.000 description 2
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108091022930 Glutamate decarboxylase Proteins 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N Hidralazin Chemical compound C1=CC=C2C(NN)=NN=CC2=C1 RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000932590 Homo sapiens Cytosolic carboxypeptidase 4 Proteins 0.000 description 2
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N Iodine-123 Chemical compound [123I] ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035792 Kininogen-1 Human genes 0.000 description 2
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- XIGSAGMEBXLVJJ-YFKPBYRVSA-N L-homocitrulline Chemical compound NC(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O XIGSAGMEBXLVJJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- 244000302512 Momordica charantia Species 0.000 description 2
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 2
- 101001033003 Mus musculus Granzyme F Proteins 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PRQROPMIIGLWRP-UHFFFAOYSA-N N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanin Chemical compound CSCCC(NC=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PRQROPMIIGLWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 2
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000007643 Phytolacca americana Species 0.000 description 2
- 235000009074 Phytolacca americana Nutrition 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 2
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 2
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNNNWFKQCKFSDK-UHFFFAOYSA-N allylglycine Chemical compound OC(=O)C(N)CC=C WNNNWFKQCKFSDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- YOFPFYYTUIARDI-UHFFFAOYSA-N alpha-aminosuberic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCCCC(O)=O YOFPFYYTUIARDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 2
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 2
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 2
- 238000013262 cAMP assay Methods 0.000 description 2
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 2
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 2
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 2
- 229930191339 dianthin Natural products 0.000 description 2
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N dolastatin Chemical compound CC(C)C(N(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N(C)C(C(C)C)C(OC)CC(=O)N1CCCC1C(OC)C(C)C(=O)NC(C=1SC=CN=1)CC1=CC=CC=C1 AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N gastrin-releasingpeptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CNC=N1 PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 229940045883 glutathione disulfide Drugs 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- OWIUPIRUAQMTTK-UHFFFAOYSA-M n-aminocarbamate Chemical compound NNC([O-])=O OWIUPIRUAQMTTK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 2
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- ZLIBICFPKPWGIZ-UHFFFAOYSA-N pyrimethanil Chemical compound CC1=CC(C)=NC(NC=2C=CC=CC=2)=N1 ZLIBICFPKPWGIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 2
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 239000002265 redox agent Substances 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N toluene 2,6-diisocyanate Chemical compound CC1=C(N=C=O)C=CC=C1N=C=O RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDUWTIUXPVCEQF-LURJTMIESA-N (2s)-2-(cyclopentylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCC1 LDUWTIUXPVCEQF-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- VVDBQHCKPZBJPG-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(furan-2-ylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CO1 VVDBQHCKPZBJPG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N (2s)-2-(pyridin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1=CC=CC=N1 CNMAQBJBWQQZFZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- HOBACDWMUXDSHY-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-(quinolin-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 HOBACDWMUXDSHY-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 1
- AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)pentanoic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O AGGWFDNPHKLBBV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PECGVEGMRUZOML-AWEZNQCLSA-N (2s)-2-amino-3,3-diphenylpropanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C([C@H](N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 PECGVEGMRUZOML-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- WBZIGVCQRXJYQD-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-3-(1,3-thiazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CSC=N1 WBZIGVCQRXJYQD-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- YYTDJPUFAVPHQA-VKHMYHEASA-N (2s)-2-amino-3-(2,3,4,5,6-pentafluorophenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F YYTDJPUFAVPHQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N (2s,4s,5r,6r)-5-acetamido-2-{[(2s,3r,4s,5s,6r)-2-{[(2r,3r,4r,5r)-5-acetamido-1,2-dihydroxy-6-oxo-4-{[(2s,3s,4r,5s,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy}hexan-3-yl]oxy}-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-4-hydroxy-6-[(1r,2r)-1,2,3-trihydrox Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N 0.000 description 1
- LTDQGCFMTVHZKP-UHFFFAOYSA-N (4-bromophenyl)-(4,6-dimethoxy-3-methyl-1-benzofuran-2-yl)methanone Chemical compound O1C2=CC(OC)=CC(OC)=C2C(C)=C1C(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 LTDQGCFMTVHZKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CNC(C(=O)O)CC2=C1 BWKMGYQJPOAASG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMTXUPIIESNLPW-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroxy-3-(pentadeca-8,11-dienyl)benzene Natural products CCCC=CCC=CCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O RMTXUPIIESNLPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGVWDRVQIYUSRA-UHFFFAOYSA-N 1-[2-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethyldisulfanyl]ethyl]pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1CCSSCCN1C(=O)C=CC1=O SGVWDRVQIYUSRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTBXEODIGPQIDZ-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4-(4-methoxyphenyl)cyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1CCC(N)(C(O)=O)CC1 MTBXEODIGPQIDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 1-aminocyclopropanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CC1 PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTTPGMNPPMMMOP-UHFFFAOYSA-N 1-azaniumyl-2,3-dihydroindene-1-carboxylate Chemical compound C1=CC=C2C(N)(C(O)=O)CCC2=C1 HTTPGMNPPMMMOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- VILCJCGEZXAXTO-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-tetramine Chemical compound NCCNCCNCCN VILCJCGEZXAXTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- KGLPWQKSKUVKMJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydrophthalazine-1,4-dione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NNC(=O)C2=C1 KGLPWQKSKUVKMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXHAHOVNFDVCCC-UHFFFAOYSA-N 2-(tert-butylazaniumyl)acetate Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)=O TXHAHOVNFDVCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical class C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIYCUMYWGOOSNU-FMZZOXHWSA-N 2-[[(2s)-1-[(2s,3s)-2-[[(2s,3r)-2-[[2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O YIYCUMYWGOOSNU-FMZZOXHWSA-N 0.000 description 1
- CZHCGMZJLLOYJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-propylpentanoic acid Chemical compound CCCC(N)(C(O)=O)CCC CZHCGMZJLLOYJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-thiophen-2-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CS1 WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JUIKUQOUMZUFQT-UHFFFAOYSA-N 2-bromoacetamide Chemical compound NC(=O)CBr JUIKUQOUMZUFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGIGUEBEKRSTEW-UHFFFAOYSA-N 2-vinylpyridine Chemical compound C=CC1=CC=CC=N1 KGIGUEBEKRSTEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATAFDSCDEDHMOK-UHFFFAOYSA-N 3,3-diaminopropanoic acid Chemical compound NC(N)CC(O)=O ATAFDSCDEDHMOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QARRXYBJLBIVAK-UEMSJJPVSA-N 3-[(8e,11e)-pentadeca-8,11-dienyl]benzene-1,2-diol;3-[(8e,11e)-pentadeca-8,11,14-trienyl]benzene-1,2-diol;3-[(8e,11e,13e)-pentadeca-8,11,13-trienyl]benzene-1,2-diol;3-[(e)-pentadec-8-enyl]benzene-1,2-diol;3-pentadecylbenzene-1,2-diol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.CCCCCC\C=C\CCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.CCC\C=C\C\C=C\CCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.C\C=C\C=C\C\C=C\CCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O.OC1=CC=CC(CCCCCCC\C=C\C\C=C\CC=C)=C1O QARRXYBJLBIVAK-UEMSJJPVSA-N 0.000 description 1
- XUQZKSCQPMNDEY-UHFFFAOYSA-N 3-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]propanoic acid Chemical compound NCCOCCOCCOCCC(O)=O XUQZKSCQPMNDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 3-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IYROWZYPEIMDDN-UHFFFAOYSA-N 3-n-pentadec-8,11,13-trienyl catechol Natural products CC=CC=CCC=CCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O IYROWZYPEIMDDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INZOTETZQBPBCE-NYLDSJSYSA-N 3-sialyl lewis Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@H](O)CO)[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 INZOTETZQBPBCE-NYLDSJSYSA-N 0.000 description 1
- OWSRLHPWDZOHCR-UHFFFAOYSA-N 4,4-diaminobutanoic acid Chemical compound NC(N)CCC(O)=O OWSRLHPWDZOHCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N Ammonia-15N Chemical compound [15NH3] QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 101100460776 Arabidopsis thaliana NPY2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025218 B-cell differentiation antigen CD72 Human genes 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 108090000363 Bacterial Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 206010051728 Bone erosion Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100039398 C-X-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100455752 Caenorhabditis elegans lys-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101710158575 Cap-specific mRNA (nucleoside-2'-O-)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 1
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 102000012336 Cholesterol Ester Transfer Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061846 Cholesterol Ester Transfer Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010023736 Chondroitinases and Chondroitin Lyases Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 108010078015 Complement C3b Proteins 0.000 description 1
- 108010077773 Complement C4a Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100037579 D-3-phosphoglycerate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000000638 D-biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011665 D-biotin Substances 0.000 description 1
- 239000012625 DNA intercalator Substances 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101800000585 Diphtheria toxin fragment A Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 1
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 1
- 101710088791 Elongation factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100038083 Endosialin Human genes 0.000 description 1
- 101710144543 Endosialin Proteins 0.000 description 1
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 1
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 102100036509 Erythropoietin receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710102442 Erythropoietin receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000759376 Escherichia phage Mu Tail sheath protein Proteins 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010015133 Galactose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000008214 Glutamate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101000934359 Homo sapiens B-cell differentiation antigen CD72 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000889128 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000868215 Homo sapiens CD40 ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 1
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 1
- 101001041117 Homo sapiens Hyaluronidase PH-20 Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000973997 Homo sapiens Nucleosome assembly protein 1-like 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000947178 Homo sapiens Platelet basic protein Proteins 0.000 description 1
- 101000582950 Homo sapiens Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000772267 Homo sapiens Thyrotropin receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000742579 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor B Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100039352 Immunoglobulin heavy constant mu Human genes 0.000 description 1
- 102100025323 Integrin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032817 Integrin alpha-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010041341 Integrin alpha1 Proteins 0.000 description 1
- 108010055795 Integrin alpha1beta1 Proteins 0.000 description 1
- 108010017642 Integrin alpha2beta1 Proteins 0.000 description 1
- 108010072255 Integrin alpha3beta1 Proteins 0.000 description 1
- 108010008212 Integrin alpha4beta1 Proteins 0.000 description 1
- 108010041014 Integrin alpha5 Proteins 0.000 description 1
- 108010042918 Integrin alpha5beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037872 Intercellular adhesion molecule 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710148794 Intercellular adhesion molecule 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100020793 Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 102100026244 Interleukin-9 receptor Human genes 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N L-allo-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 102100038609 Lactoperoxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 101710091439 Major capsid protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 229940122255 Microtubule inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100341510 Mus musculus Itgal gene Proteins 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTERQYGMUDWYAZ-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-N-thioacetyl-Lysine Natural products CC(=O)NCCCCC(N)C(O)=O DTERQYGMUDWYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 102100031688 N-acetylgalactosamine-6-sulfatase Human genes 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- PYUSHNKNPOHWEZ-YFKPBYRVSA-N N-formyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC=O PYUSHNKNPOHWEZ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038991 Neuropeptide Y receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710197945 Neuropeptide Y receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000029748 Neuropeptide Y2 receptor Human genes 0.000 description 1
- 241000238413 Octopus Species 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 239000012570 Opti-MEM I medium Substances 0.000 description 1
- 108010035766 P-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 1
- 101150062285 PGF gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 description 1
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102100036154 Platelet basic protein Human genes 0.000 description 1
- 102100030304 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102100029532 Probable fibrosin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 108700033844 Pseudomonas aeruginosa toxA Proteins 0.000 description 1
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101710138747 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000321499 Rypticus Species 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010029389 Simplexvirus glycoprotein B Proteins 0.000 description 1
- 101710087249 Small toxin Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- WDLRUFUQRNWCPK-UHFFFAOYSA-N Tetraxetan Chemical compound OC(=O)CN1CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC1 WDLRUFUQRNWCPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029337 Thyrotropin receptor Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 235000008322 Trichosanthes cucumerina Nutrition 0.000 description 1
- LJWZOKOFCBPNAG-UHFFFAOYSA-N Trichothecin Natural products CC=CC(=O)OC1CC2OC3C=C(C)C(=O)CC3(C)C1(C)C21CO1 LJWZOKOFCBPNAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 240000001866 Vernicia fordii Species 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- QWXOJIDBSHLIFI-UHFFFAOYSA-N [3-(1-chloro-3'-methoxyspiro[adamantane-4,4'-dioxetane]-3'-yl)phenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound O1OC2(C3CC4CC2CC(Cl)(C4)C3)C1(OC)C1=CC=CC(OP(O)(O)=O)=C1 QWXOJIDBSHLIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N alpha-L-Fucp-(1->2)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-D-Galp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](NC(C)=O)[C@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](CO)OC(O)[C@@H]3O)O)O[C@@H]2CO)O[C@H]2[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O2)O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MXKCYTKUIDTFLY-ZNNSSXPHSA-N 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010913 antigen-directed enzyme pro-drug therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003705 background correction Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001593 cAMP accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 1
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000011549 crystallization solution Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 238000013523 data management Methods 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 229940042396 direct acting antivirals thiosemicarbazones Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- BJAJDJDODCWPNS-UHFFFAOYSA-N dotp Chemical compound O=C1N2CCOC2=NC2=C1SC=C2 BJAJDJDODCWPNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 108010093597 fibrosin Proteins 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- YKGGGCXBWXHKIZ-UHFFFAOYSA-N fluorescein (acid form) Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C21 YKGGGCXBWXHKIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N halothane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Br BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003132 halothane Drugs 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 229960002474 hydralazine Drugs 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-N hydroperoxyl Chemical compound O[O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 229940044700 hylenex Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 102000002467 interleukin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 108040006732 interleukin-1 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014909 interleukin-1 receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040006870 interleukin-10 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006873 interleukin-11 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040003610 interleukin-12 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040003607 interleukin-13 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006849 interleukin-2 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006856 interleukin-3 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006852 interleukin-4 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006859 interleukin-5 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006858 interleukin-6 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108040006861 interleukin-7 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010681 interleukin-8 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038415 interleukin-8 receptors Proteins 0.000 description 1
- 108040006862 interleukin-9 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 229950005692 larotaxel Drugs 0.000 description 1
- SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N larotaxel dihydrate Chemical compound O.O.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@@]23[C@H]1[C@@]1(CO[C@@H]1C[C@@H]2C3)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229950010248 loretin Drugs 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 231100000782 microtubule inhibitor Toxicity 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 108010089579 neuropeptide Y2 receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-OUBTZVSYSA-N oxygen-17 atom Chemical compound [17O] QVGXLLKOCUKJST-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000007420 radioactive assay Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 229940051173 recombinant immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 102200151154 rs386834188 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000002708 spider venom Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical compound ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- MODVSQKJJIBWPZ-VLLPJHQWSA-N tesetaxel Chemical compound O([C@H]1[C@@H]2[C@]3(OC(C)=O)CO[C@@H]3CC[C@@]2(C)[C@H]2[C@@H](C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C(=CC=CN=4)F)C[C@]1(O)C3(C)C)O[C@H](O2)CN(C)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 MODVSQKJJIBWPZ-VLLPJHQWSA-N 0.000 description 1
- 229950009016 tesetaxel Drugs 0.000 description 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- SRVJKTDHMYAMHA-WUXMJOGZSA-N thioacetazone Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(\C=N\NC(N)=S)C=C1 SRVJKTDHMYAMHA-WUXMJOGZSA-N 0.000 description 1
- 150000003584 thiosemicarbazones Chemical class 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- PYHOFAHZHOBVGV-UHFFFAOYSA-N triazane Chemical compound NNN PYHOFAHZHOBVGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N trichothecene Chemical compound C12([C@@]3(CC[C@H]2OC2C=C(CCC23C)C)C)CO1 LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N 0.000 description 1
- LJWZOKOFCBPNAG-HULHSAFCSA-N trichothecin Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C)[C@@]4(C)CC(=O)C(C)=C[C@H]4O[C@@H]1C[C@H]3OC(=O)\C=C/C)O2 LJWZOKOFCBPNAG-HULHSAFCSA-N 0.000 description 1
- 238000012285 ultrasound imaging Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- DQTMTQZSOJMZSF-UHFFFAOYSA-N urushiol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC1=CC=CC(O)=C1O DQTMTQZSOJMZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N β-cyclohexyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/555—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound pre-targeting systems involving an organic compound, other than a peptide, protein or antibody, for targeting specific cells
- A61K47/557—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound pre-targeting systems involving an organic compound, other than a peptide, protein or antibody, for targeting specific cells the modifying agent being biotin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
- A61K47/6829—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxins or Pseudomonas exotoxin A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
- A61K47/6893—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells clearing therapy or enhanced clearance, i.e. using an antibody clearing agents in addition to T-A and D-M
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/02—Pentosyltransferases (2.4.2)
- C12Y204/02036—NAD(+)--diphthamide ADP-ribosyltransferase (2.4.2.36)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
現在利用することができるハプテンに基づく送達プラットフォームの制約は、ハプテンと送達媒体との間の非共有結合的連結である。非共有結合的に連結されたペイロードは送達媒体から解離しうるので、送達媒体とペイロードとの間の安定な接続が望まれる応用例では、非共有結合的送達媒体-ペイロード複合体は不適切であるだろう。
・ハプテンに特異的に結合しかつCDR2中に抗体の人為的システイン残基を有する抗体を、(人為的)ポリペプチドシステイン残基を含むハプテン化ポリペプチドと、溶液中で混和する工程、および
・溶液からコンジュゲートを回収する工程。
(図2)ハプテンと抗体の適当な位置にSH官能性を導入すると、抗体とハプテンは両者の間に共有結合を形成してコンジュゲートを生じることが可能になる。
(図3)SDS-PAGE自己蛍光バンドパターンの概略図(他にSDS-PAGEゲルの染色はない):
A:抗体とハプテン-発蛍光団コンジュゲートとの間に共有結合が形成されていない場合は、還元条件下でも非還元条件下でも、遊離ハプテン-発蛍光団コンジュゲートの分子量に、1本の自己蛍光バンドを検出することができる。
B:抗体とハプテン-発蛍光団コンジュゲートとの間に共有結合が形成されている場合、非還元条件下では、抗体とハプテン-発蛍光団コンジュゲートとを合わせた分子量に、1本の自己蛍光バンドを検出することができる。還元条件下では、抗体とハプテン-発蛍光団コンジュゲート(ハプテン化化合物)とのコンジュゲート中のジスルフィド架橋が切断され、遊離ハプテン-発蛍光団コンジュゲートの分子量に、1本の自己蛍光バンドを検出することができる。
(図4)酸化還元活性作用物質、すなわち酸化作用物質(グルタチオンジスルフィド、GSSG)および還元作用物質(ジチオエリスリトール、DTE)の存在下での、ハプテン結合性Cys突然変異型抗体とハプテン-Cys-蛍光ラベルコンジュゲート(ハプテン化化合物)とのコンジュゲート形成:抗体の複合体形成と、それに続く所定の位置における共有結合による連結を、SDS PAGE分析における蛍光シグナルで検出する。非還元SDS-PAGE分析(上側の像)および還元SDS-PAGE分析(下側の像)を実施例11で述べるように行った。共有結合で抗体に連結されたハプテンは、非還元条件下で適当な位置に、サイズが大きいタンパク質結合型シグナルとして検出することができる。これらのシグナルは還元するとタンパク質を離れ、還元条件下では小さな実体として見える。
左:蛍光像
右:クーマシーブルー染色
シリーズ1: 52bC突然変異を持つ抗ジゴキシゲニン抗体
シリーズ2:位置52bに野生型残基を持つ抗ジゴキシゲニン抗体
(A)3mM DTEおよび10mM GSSGによる共有結合的カップリング;
(B)0.3mM DTEおよび1mM GSSGによる共有結合的カップリング;
(C)0.03mM DTEおよび0.1mM GSSGによる共有結合的カップリング。
(図5)酸化作用物質(グルタチオンジスルフィド、GSSG)だけが存在し、還元作用物質が存在しないか、またはどちらも存在しない場合の、ハプテン結合性Cys突然変異型抗体とハプテン-Cys-蛍光ラベルコンジュゲートとの複合体形成:抗体の複合体形成と、それに続く所定の位置における共有結合による連結を、SDS PAGE分析における蛍光シグナルによって検出する。非還元SDS-PAGE分析(上側の像)および還元SDS-PAGE分析(下側の像)を実施例12で述べるように行った。共有結合で抗体に連結されたハプテンは、非還元条件下では適当な位置に大きなサイズのタンパク質に結合したシグナルとして検出することができる。これらのシグナルは還元するとタンパク質を離れ、還元条件下では小さな実体として見える。左:蛍光像。右:クーマシーブルー染色。シリーズ1: 52bC突然変異を持つ抗ジゴキシゲニン抗体。シリーズ2:位置52bに野生型残基を持つ抗ジゴキシゲニン抗体。(A)添加物なし;(B)1mM GSSGによる共有結合的カップリング;(C)0.1mM GSSGによる共有結合的カップリング。
(図6)ビオシチンアミド(biocytinamid)と複合体を形成しているマウス抗ビオチン抗体のX線構造。ビオシチンアミドと相互作用しているアミノ酸残基は、スティックで表示した。
(図7A)共有結合的コンジュゲートおよび非共有結合的複合体を、非複合体化抗原/ハプテンと比較した、インビボ血中PK試験の結果;ビオチン-Cy5非共有結合的複合体、および非複合体化ビオチン-Ser-Cy5(アスタリスク)の、Cy5媒介蛍光の相対的残存蛍光強度(%、黒い記号);t=0.08時間の時点における蛍光シグナルを100%に設定した;加えて、マウス血清試料中のヒトIgGの相対的残存濃度を示す(白抜きの記号);t=0.08時間におけるIgG血清中濃度(mg/ml)を100%に設定した。
(図7B)共有結合的コンジュゲートおよび非共有結合的複合体を、非複合体化抗原/ハプテンと比較した、インビボ血中PK試験の結果;共有結合(SS架橋)コンジュゲート、および非複合体化ビオチン-Ser-Cy5(アスタリスク)の、Cy5媒介蛍光の相対的残存蛍光強度(%、黒い記号);t=0.08時間の時点における蛍光シグナルを100%に設定した;加えて、マウス血清試料中のヒトIgGの相対的残存濃度を示す(白抜きの記号);t=0.08時間におけるIgG血清中濃度(mg/ml)を100%に設定した。
(図8)マウスの血清におけるジゴキシゲニン化PYYポリペプチドの量を決定するウェスタンブロット。
(図9)ハプテン化化合物と抗ハプテン抗体との、アフィニティーによって推進される複合体形成の分析。抗体の複合体形成と、それに続く所定の位置における共有結合による連結を、SDS PAGE分析における蛍光シグナルによって検出する。これは、実施例19で述べるように行った。左:非還元試料(ゲルの左側)および還元試料(ゲルの右側)による蛍光像。右:クーマシーブルー染色。1:ヒト化抗ジゴキシゲニン抗体+ビオチン-Cys-Cy5;2:ヒト化抗ジゴキシゲニン抗体VH52bC+ビオチン-Cys-Cy5;3:ヒト化抗ビオチン抗体+ビオチン-Cys-Cy5;4:ヒト化抗ビオチン抗体VH53C+ビオチン-Cys-Cy5。白い矢印は、過剰の(カップリングしていない)ビオチン-Cys-Cy5を示しており、抗ジゴキシゲニン抗体VH52bCを使用した場合には、それがかなり高い。これは、この場合のコンジュゲーション反応がアフィニティーによって推進されるものではないからである。
(図10)ハプテン媒介部位特異的共有結合的ペイロードカップリングのために位置52bに追加のシステインを持つDig結合性抗体を形成させるのに必要な、Fab領域内のシステイン位置およびジスルフィドパターン。(A)機能的Fabフラグメントを形成するために必要なVHおよびCH1ドメイン内ならびにVLおよびCLドメイン内でのシステインおよびジスルフィドパターン。(B)ハプテン媒介部位特異的共有結合的ペイロードカップリングのために位置52bに追加のシステインを持つ機能的Fabフラグメントを形成するために必要な、VHおよびCH1ドメイン内ならびにVLおよびCLドメイン内でのシステインおよびジスルフィドパターン。(CおよびD)ミスフォールディングした非機能的抗体をもたらすであろうVH52b変異体のVHドメイン内での不正ジスルフィド結合形成の潜在的可能性。(E)ミスフォールディングした非機能的抗体をもたらすであろうVH52b変異体のFv領域内での潜在的不正ドメイン間ジスルフィド結合の例。
(図11)ハプテン媒介部位特異的共有結合的ペイロードカップリングのために位置52bに追加システインを持つDig結合性ジスルフィド安定化一本鎖Fvを形成するのに必要なシステイン位置およびジスルフィドパターン。(A)機能的なscFv、dsscFvおよび52b突然変異型dsscFvを形成するために必要なVHドメイン内およびVLドメイン内のシステイン。(B)機能的なscFv、dsscFvおよび52b突然変異型dsscFvを生成するために形成させなければならないジスルフィド結合の正しいパターン。(C)ミスフォールディングした非機能的scFvをもたらすであろう不正ジスルフィド結合形成の潜在的可能性。(D)ミスフォールディングした非機能的dsscFvをもたらすであろう不正ジスルフィド結合形成の潜在的可能性。(E)ミスフォールディングした非機能的52b突然変異型dsscFvをもたらすであろう不正ジスルフィド結合形成の潜在的可能性。
(図12)共有結合でカップリングされたペイロード用の送達媒体としてのLeY-Dig二重特異性抗体誘導体の組成。
(図13)共有結合でカップリングされたペイロードの標的送達のための二重特異性抗ハプテン抗体誘導体の発現および精製。
(A)ウェスタンブロット分析のために、細胞培養上清をSDS PAGE(NuPAGE 4-12%Bis-Trisゲル(1.0mm×12ウェル)(Invitrogen;カタログ番号NP0322)に付し、次いでタンパク質をImmobilon Transferメンブレン(Immobilon-P)、すなわちポアサイズ0.45μmのPVDFに転写した。抗体誘導体は、1:1000希釈の、ヤギで生産された抗ヒトカッパ軽鎖)-アルカリホスファターゼ抗体(アフィニティ精製品)Sigma(カタログ番号A3813)、および1:1000希釈の、ヤギで生産された抗ヒトIgG(Fc特異的)-アルカリホスファターゼ抗体(Sigma,カタログ番号A9544)によって検出した。ウェスタンブロットの発色のために基質BCIP/NBT-Blue液体基質(Sigma,カタログ番号B3804)を適用した。レーン1-分子量マーカー;レーン2および3-重鎖が修飾されていない対照抗体;レーン4-H鎖が延長されているLeY-Dig(52bC)二重特異性抗体。
(B)SDS-PAGE分析(NuPAGE 4-12%Bis-Trisゲルと、それに続くクーマシーブリリアントブルーによる染色)により、タンパク質調製物の純度が実証され、それぞれの分子量計算値に対応する見掛けの分子サイズを持つIgGに関係するポリペプチド鎖が可視化される。レーン1-分子量マーカー;レーン2-還元された、H鎖が延長されているLeY-Dig(52bC)二重特異性抗体;レーン3-還元されていない、重鎖が延長されているLeY-Dig(52bC)二重特異的抗体;
(C)サイズ排除クロマトグラフィー(Superdex 200)により、プロテインA精製後のLeY-Dig(52bC)二重特異性抗体誘導体のタンパク質調製物における均一性と凝集体の欠如とが実証される。
(図14)Dig-Cy5非共有結合的複合体および共有結合的(ジスルフィド架橋)コンジュゲート、ならびに非複合体化Dig-Cy5のCy5媒介蛍光の相対的残存蛍光強度(%);t=0.08時間の時点における蛍光シグナルを100%に設定した;加えて、マウス血清試料中のヒトIgGの相対的残存量も示す;t=0.08時間におけるIgG血清中濃度(mg/ml)を100%に設定した。
(図15)非侵襲的眼イメージングによって決定した、非共有結合的複合体および共有結合的(ジスルフィド架橋)コンジュゲートのビオチン-Cy5ならびに非複合体化ビオチン-Cy5のCy5媒介蛍光のインビボ様条件下での薬物動態;黒い菱形:ビオチン-Cy5;黒い正方形:ビオチン-Cy5+抗ビオチン抗体(複合体);三角形: Cy5-ビオチン-抗ビオチン抗体コンジュゲート。
(図16a)テオフィリン-Cys-Cy5の組成、構造および分子量。
(図16b)サイズ排除クロマトグラフィーにより、精製テオフィリン結合性抗体変異体の純度および均一性が実証される;ピーク番号2は精製された生成物を表す。ピーク番号1が存在しないことは、これらの調製物が凝集体を含まないことを示している。
(図16c)非還元(左側のレーン)および還元(右側のレーン)SDS PAGEによって実証される、テオフィリン結合性抗体とテオフィリン-Cys-Cy5との間の共有結合的複合体の形成; Cy5は、テオフィリン-Cys-Cy5とCys突然変異型抗体とを含有する試料でのみ、非還元条件下でH鎖にカップリングしているようであり、還元するとこれらの共有結合的コンジュゲートは崩壊する(右側のレーン);レーン1:分子量マーカー; 2〜4 非還元-2:抗テオフィリン抗体(Cys突然変異なし)+テオフィリン-Cys-Cy5(複合体); 3:抗テオフィリン抗体-cys_55+テオフィリン-Cys-Cy5(コンジュゲート); 4:抗テオフィリン抗体-cys_54+テオフィリン-Cys-Cy5(コンジュゲート); 5〜7 還元-5:抗テオフィリン抗体(Cys突然変異なし)+テオフィリン-Cys-Cy5(複合体); 6:抗テオフィリン抗体-cys_55+テオフィリン-Cys-Cy5(コンジュゲート); 7:抗テオフィリン抗体-cys_54+テオフィリン-Cys-Cy5(コンジュゲート)。
(図17)ビオチン結合性抗体とビオチン-Cys-Cy5との共有結合的複合体の形成を、非還元SDS PAGEおよび還元SDS PAGEによって実証する;カップリング反応はマウス血清中、37℃で1時間行った。Cy5は、ビオチン-Cys-Cy5とCys突然変異型抗体とを含む試料において、非還元条件下でのみ、H鎖にカップリングしているようである。これらの共有結合的コンジュゲートは還元すると崩壊する(右側のレーン);レーン1:分子量マーカー; 2〜3 非還元-2:抗ビオチン抗体(Cys突然変異なし)+ビオチン-Cys-Cy5(複合体); 3:抗ビオチン抗体-Cys+ビオチン-Cys-Cy5(コンジュゲート); 4〜5 還元-5:抗ビオチン抗体(Cys突然変異なし)+ビオチン-Cys-Cy5(複合体); 6:抗ビオチン抗体-Cys+ビオチン-Cys-Cy5(コンジュゲート)。
(図18)非侵襲的眼イメージングによって決定した、非共有結合的複合体および共有結合的(ジスルフィド架橋)コンジュゲートのビオチン-Cy5ならびに非複合体化ビオチン-Cy5のCy5媒介蛍光のインビボ薬物動態;黒い菱形:ビオチン-Cy5;黒い丸: 抗ビオチン抗体投与の24時間後に投与したビオチン-Cy5(インビボ複合体形成);黒い正方形:抗ビオチン抗体-Cys投与の24時間後に投与したビオチン-Cys-Cy5(インビボコンジュゲート形成)。
(図19)ビオシチンアミドとの複合体を形成しているマウス抗ビオチン抗体Fabフラグメントのタンパク質構造を決定した:複合体化ハプテンは負に荷電したアミノ酸クラスターに近接して配置されている;ハプテンとして、そのカルボキシル基がペイロードカップリング用に誘導体化されているビオチンは、(COOH基を欠くため)この位置での電荷反発がないので、効率よく結合する;これに対して、遊離の(通常の)ビオチンは、そのカルボキシル基がこの負荷電クラスターに近接し、それゆえに反発を受けることになるので、抗体に効率よく結合することができない。
(図20A)ポリペプチド毒素を標的送達するための抗ハプテン二重特異性抗体の概略図;ハプテンに結合するジスルフィド安定化scFvを組換え法によって重鎖(CH3ドメインのC末端)に融合する。あるいは、FabフラグメントのC末端に融合するか、組換え結合モジュールの他の位置に融合することもできる。Metz, S., et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108(2011)8194-8199に記載されているように、二重特異性抗体をコードする配列を遺伝子合成によって生成し(Geneart, ドイツ)、発現ベクター中にサブクローニングし、生産し、精製した。19-11抗体(Metz et al.および27209 WO)のヒト化dsscFvをジゴキシゲニン結合実体として使用した; VHおよびVLをIgGのFabアームに導入した。また、Fabフォーマット配列はLeY結合性抗体B3(Metz et al参照)から得た。
(図20B)二重特異性抗体の発現および精製:二重特異性抗体調製物の純度および均一性を実証するSECプロファイルおよびSDS-PAGE;一過性発現のために、Fab-Fv融合物の軽鎖および重鎖をコードするプラスミドをHEK293細胞に同時トランスフェクトし、無血清培地中で培養し、トランスフェクションの7日後に遠心分離および0.22μm濾過によって上清を清澄化し、二重特異性抗体を、プロテインA(IgG-Fv)と、それに続く20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0で平衡化したSEC(Superdex200 HiLoad 26/60, GE Healthcare)とによって精製し、320nmをバックグラウンドとする280nmでの光学密度によってタンパク質濃度を決定し、SDS-PAGEによって精製タンパク質の均一性を確認した。
(図21A)シュードモナス外毒素(PE)の誘導体;PEおよびPE変異体のドメイン組成、および部位特異的ジゴキシゲニン化のための新規変異体PE25(NLys-PE25SQΔ)の生成; PE25は、リジン側鎖の1級アミノ基において、Dig-NHSにより、ジゴキシゲニン化される;タンパク質のN末端も、NHS媒介ジゴキシゲニンコンジュゲーションのターゲットになりうる; PE25(NLysPE25SQΔ)では、アミノ酸配列(N末端)
が、PE(pdb 1IKQ_A)のアミノ酸274〜284(ドメインIIプロセシング部位)に融合されており、その後ろにPE(pdb 1IKQ_A)のアミノ酸394〜612(ドメインIII)が続いている;加えて、位置406、432、467、490、513、548、590、592を、LR8M毒素誘導体(Hansen, J.K. et al, J. Immunotherapy 33(2010)297-304)の場合と同様に突然変異させ、位置606のリジンをグルタミンに突然変異させ、PEの最後のアミノ酸(リジン613)を欠失させた;アミノ末端配列は、S-PE25ではLys残基をSerに変えることによって、またNCK-PE25ではGly残基をCysに変えることによって、またNKC-PE25ではMet残基をCysに変えることによって改変した;これらの誘導体のコード配列を遺伝子合成(Geneart, ドイツ)または突然変異誘発法によって生成し、大腸菌(E.coli)における誘導発現用のベクターに挿入した。
(図21B)シュードモナス外毒素誘導体の発現および精製:タンパク質はペリプラズムに分泌され、それを、以前に記述された技法を応用して精製した(Debinski, W. and Pastan, I., Cancer Res. 52(1992)5379-5385; Debinski, W. and Pastan, I., Bioconjug. Chem. 5(1994)40-46);回収した細菌から浸透圧ショック法によって生成したペリプラズム調製物をQ-Sepharoseにロードすることでポリペプチド毒素を捕捉した;ポリペプチド毒素を塩勾配で溶出し、SECに供することで、凝集物とサイズの小さいタンパク質夾雑物が低レベルである単量体型ポリペプチド毒素を得た; SECを行い、毒素画分をPBS中に保存した。精製タンパク質の均一性はSECおよびSDS-PAGEによって確認した。
(図21C)PE25、S-PE25、NKC-PE25およびNCK PE25のN末端配列: N末端メチオニンはATG開始コドンによってコードされており、大腸菌では翻訳後プロセシングによって除去されうるので、括弧内に示している。ハプテンにカップリングされることによるリジン残基を強調し(太字)、そのリジンの前または後にある追加システインを下線付き太字で示す。
(図22A)抗体と毒素との複合体化および共有結合的連結:NKC-PE25を含む共有結合的複合体の還元試料および非還元試料をSDS-PAGE(NuPAGE 4-12%Bis-Trisゲル(1.0mm×10ウェル)によって分離し、クーマシーブルー染色で可視化するか、Immobilon PVDF転写メンブレン(Immobilon-P)、ポアサイズ:0.45μmへのウェスタンブロットに付した(中央と右側のパネル)。ポリクローナル抗PE抗体によるウェスタンブロット分析(抗シュードモナス外毒素A、ウサギで生産された抗体(Sigma,カタログ番号P2318)、1:1000希釈、次に、抗ウサギIgG(全分子)-アルカリホスファターゼコンジュゲート、ヤギで生産された抗体(Sigma,カタログ番号A3687)、1:1000希釈)を中央のパネルに示す。マウスモノクローナル抗ジゴキシゲニン抗体MAK<DIG>M-19-11 IgG(マウスで生産された抗体, Roche)と、それに続く抗マウスIgG(Fc領域特異的)-アルカリホスファターゼコンジュゲート、ヤギで生産された抗体(Sigma,カタログ番号A7434)、1:1000希釈)によるウェスタンブロット分析を、右側のパネルに示す。どちらのブロットも基質BCIP/NBT-Blue液体基質で発色させた。
(図22B)抗ジゴキシゲニン抗体とジゴキシゲニン化ポリペプチド毒素との複合体化および共有結合的連結:ジゴキシゲニン-スペーサー::抗ジゴキシゲニン抗体構造の構造モデル(PDB_3RA7,1)を、PE25(PDB_1K2Nおよび1IKQ、リンカーの第2部分は1ikqから採用する)と連結することにより、ジゴキシゲニン結合性Fvとの複合体を形成したジゴキシゲニン化PE25(Dig-PE25)の構成要素のモデルを作成した;アミノカプロン酸スペーサーを介してPE25の唯一のリジンに取り付けられた適当なサイズのジゴキシゲニンが、両構造をつないでいる;抗ジゴキシゲニン抗体のVH中の追加システインとNKC-PE25またはNCK PE25中のシステインとの間の共有結合的連結の考えうる立体配置を示す構造モデルも示す。
(図22C)図22の続きである。
(図23)二重特異性抗体媒介標的毒素送達:腫瘍細胞に対する毒性効果を分析するために細胞増殖(BrdU)アッセイを行った;LeYを発現するMCF-7細胞を毒素単独(上側のパネル)またはIgG-Fvフォーマットの媒体-毒素複合体(下側のパネル)に48時間曝露した。
(図24)細胞ターゲティング二重特異性抗体は、ターゲット細胞内で、ハプテン位置決めジスルフィド接続ペイロードを放出する。共焦点顕微鏡法により、MCF-7細胞への、そしてMCF-7細胞内への、ジスルフィドコンジュゲートビオチン-Cys-Cy5-ペイロードのbsAb標的送達が明らかになる。bsAbはAlexa標識huFc結合性抗体によって検出され、Bio-Cys-Cy5ペイロードはその蛍光によって検出される。bsAbとペイロードの共局在は混色によって示され(3)、孤立したbsAbは色1で現れ(1)、抗体を伴わないビオチンは色2で現れる(2)。画像(LeY発現MCF7細胞へのLeY-bsAb適用の6時間後)から、複合体からのビオチンの分離は、二次抗体による検出にとってbsAb媒体がまだ十分に無傷である時点で起こっていることがわかる。
I.定義
本明細書に関して「アクセプターヒトフレームワーク」とは、以下に定義するヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン(VL)フレームワークまたは重鎖可変ドメイン(VH)フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それと同じアミノ酸配列を含んでもよいし、アミノ酸配列変化を含んでいてもよい。いくつかの態様では、アミノ酸変化の数は、10以下、9以下、8以下、7以下、6以下、5以下、4以下、3以下、または2以下である。いくつかの態様では、VLアクセプターヒトフレームワークの配列は、VLヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはVLヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
(a)アミノ酸残基26〜32(L1)、50〜52(L2)、91〜96(L3)、26〜32(H1)、53〜55(H2)、および96〜101(H3)に存在する超可変ループ(Chothia, C. and Lesk, A.M., J. Mol. Biol. 196(1987)901-917);
(b)アミノ酸残基24〜34(L1)、50〜56(L2)、89〜97(L3)、31〜35b(H1)、50〜65(H2)、および95〜102(H3)に存在するCDR(Kabat, E.A. et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health,メリーランド州ベセスダ(1991), NIH Publication 91-3242);
(c)アミノ酸残基27c〜36(L1)、46〜55(L2)、89〜96(L3)、30〜35b(H1)、47〜58(H2)、および93〜101(H3)に存在する抗原接触部(MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262:732-745(1996));および
(d)HVRアミノ酸残基46〜56(L2)、47〜56(L2)、48〜56(L2)、49〜56(L2)、26〜35(H1)、26〜35b(H1)、49〜65(H2)、93〜102(H3)、および94〜102(H3)を含む(a)、(b)、および/または(c)の組み合わせ
を包含する。
分率X/Y×100
ここで、Xは、配列アラインメントプログラムALIGN-2が、そのプログラムによるAとBとのアラインメントにおいて、完全一致(identical match)と記録したアミノ酸残基の数であり、YはB中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合に、Bに対するAのアミノ酸配列同一性パーセント(%)が、Aに対するBのアミノ酸配列同一性パーセント(%)と一致しないことは、理解されるであろう。別段の具体的言明がある場合を除き、本明細書において使用するアミノ酸配列同一性パーセント(%)値はすべて、すぐ上の段落で説明したように、ALIGN-2コンピュータプログラムを使って得られる。
シュードモナス外毒素A鎖(PE)は、613個のアミノ酸残基からなる66kDaポリペプチドである。これは以下の3つの機能的ドメインで構成されている:真核細胞に結合するドメインI(N末端受容体結合ドメイン)、内部移行を担っていてタンパク質分解的にプロセシングされたIIになるドメインII、およびC末端にあってプロセシング後に細胞質に放出されるドメインIII。ドメインIIIはeEF2をADPリボシル化し、それがタンパク質合成の阻害とそれに続く細胞死を引き起こす。
一定の態様において、本明細書において報告する抗体そのもの、または本明細書において報告する複合体中の抗体は、≦10nM、≦1nM、≦0.1nM、≦0.01nM、または≦0.001nM(例えば約10-8M以下、例えば約10-8M〜約10-13M、例えば約10-9M〜約10-13M)の解離定数(Kd)を有する。
一定の態様では、本明細書に報告するコンジュゲート中の結合特異性は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントとしては、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、およびscFvフラグメント、ならびに後述する他のフラグメントが挙げられるが、それらに限定されるわけではない。一定の抗体フラグメントを概観するには、Hudson, P.J. et al, Nat. Med. 9(2003)129-134を参照されたい。scFvフラグメントを概観するには、例えばPlueckthun, A.「The Pharmacology of Monoclonal Antibodies」Vol. 113, RosenburgおよびMoore編, Springer-Verlag,ニューヨーク(1994)のp.269-315を参照されたい。また、WO93/16185および米国特許第5,571,894号および同第5,587,458号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加しているFabフラグメントおよびF(ab')2フラグメントについての議論は、US5,869,046を参照されたい。
一定の態様では、本明細書に報告するコンジュゲート中の抗体は、キメラ抗体である。一定のキメラ抗体が、例えばUS4,816,567およびMorrison, S.L. et al Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81(1984)6851-6855に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域(例えばマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類)由来の可変領域)とヒト定常領域とを含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスを親抗体から変化させた「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合性フラグメントが包含される。
一定の態様において、本明細書において報告するコンジュゲート中の抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において公知のさまざまな技法を使って生産することができる。ヒト抗体は、van Dijk, M.A. and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5(2001)368-374およびLonberg, N., Curr. Opin. Immunol. 20(2008)450-459に概説されている。
本明細書に報告するコンジュゲート中の抗体は、1つまたは複数の所望の活性を持つ抗体に関してコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することもできる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作成し、所望の結合特徴を有する抗体に関してそのようなライブラリーをスクリーニングするためのさまざまな方法が、当技術分野において公知である。そのような方法は、例えばHoogenboom, H.R. et al, Methods in Molecular Biology 178(2001)1-37に概説されており、また例えばMcCafferty, J. et al, Nature 348(1990)552-554; Clackson, T. et al, Nature 352(1991)624-628; Marks, J.D. et al, J. Mol. Biol. 222(1992)581-597; Marks, J.D. and Bradbury, A., Methods in Molecular Biology 248(2003)161-175; Sidhu, S.S. et al, J. Mol. Biol. 338(2004)299-310; Lee, C.V. et al, J. Mol. Biol. 340(2004)1073-1093; Fellouse, F.A., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(2004)12467-12472;およびLee, C.V. et al, J. Immunol. Methods 284(2004)119-132に、さらに記載されている。
上に概略を記した抗体および抗体フラグメントを、さまざまな方法で組み合わせることで、異なる抗体フォーマットを生成させることができる。
例えばIgG抗体フォーマットと一本鎖ドメインの融合による四価二重特異性抗体など、多種多様な組換え抗体フォーマットが開発されている(例えばColoma, M.J., et al, Nature Biotech 15(1997)159-163; WO2001/077342およびMorrison, S.L., Nature Biotech 25(2007)1233-1234を参照されたい)。
・一方の重鎖のCH3ドメインと他方の重鎖のCH3ドメインは、それぞれ、抗体CH3ドメイン間の元の界面を含む界面で接触し、
ここで、該界面は、二重特異性抗体の形成が促進されるように改変されており、その改変は、以下の特徴を有する:
a)一方の重鎖のCH3ドメインは、
二重特異性抗体内の他方の重鎖のCH3ドメインの元の界面と接触する一方の重鎖のCH3ドメインの元の界面内において、
あるアミノ酸残基が、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それによって、一方の重鎖のCH3ドメインの界面内で、他方の重鎖のCH3ドメインの界面内の空洞に収まりうる突起が生成する
ように、改変され、
かつ
b)他方の重鎖のCH3ドメインは、
二重特異性抗体内の第1のCH3ドメインの元の界面と接触する第2のCH3ドメインの元の界面内において、
あるアミノ酸残基が、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それによって、第2のCH3ドメインの界面内に、第1のCH3ドメインの界面内の突起が収まりうる空洞が生成する。
・完全長抗体の第1重鎖のCH3ドメインと完全長抗体の第2重鎖のCH3ドメインは、それぞれ、抗体CH3ドメインの元の界面中に改変を含む界面で接触し、
ここで、i)第1重鎖のCH3ドメインでは、
あるアミノ酸残基が、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それによって、一方の重鎖のCH3ドメインの界面内で、他方の重鎖のCH3ドメインの界面内の空洞に収まりうる突起が生成しており、
かつ、ii)第2重鎖のCH3ドメインでは、
あるアミノ酸残基が、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それによって、第2のCH3ドメインの界面内に、第1のCH3ドメインの界面内の突起が収まりうる空洞が生成している。
一定の態様では、本明細書に規定する抗体のアミノ酸配列変異体が考えられる。例えば、抗体の結合アフィニティーおよび/または他の生物学的性質を改良することが望ましいことがあるだろう。抗体のアミノ酸配列変異体は、その抗体をコードするヌクレオチド配列に適当な修飾を導入することによって調製するか、またはペプチド合成によって調製することができる。そのような修飾としては、例えば抗体のアミノ酸配列からの欠失、および/または抗体のアミノ酸配列への挿入、および/または抗体のアミノ酸配列内での残基の置換が挙げられる。最終コンストラクトが所望の特徴、例えば抗原結合性を有する限り、最終コンストラクトに到達するために、欠失、挿入、および置換をどのように組み合わせてもよい。
一定の態様では、1つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異導入の関心対象となる部位として、HVRおよびFRが挙げられる。アミノ酸置換を関心対象の抗体に導入し、生成物を所望の活性について、例えば保持された/改良された抗原結合性、減少した免疫原性、または改良されたADCCもしくはCDCについて、スクリーニングすることができる。
(1)疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
(2)中性親水性: Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
(3)酸性: Asp、Glu;
(4)塩基性: His、Lys、Arg;
(5)鎖の配向に影響を及ぼす残基: Gly、Pro;
(6)芳香族: Trp、Tyr、Phe。
一定の態様では、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるために、本明細書に規定する抗体または本明細書に報告するコンジュゲートに含まれる抗体が改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、1つまたは複数のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって、都合よく達成することができる。
一定の態様では、本明細書に規定する抗体のFc領域に1つまたは複数のアミノ酸修飾を導入することにより、Fc領域変異体を生成させることができる。Fc領域変異体は、1つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾(例えば置換)を含むヒトFc領域配列(例えばヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4 Fc領域)を含みうる。
一定の態様では、システイン改変抗体(cysteine engineered antibody)、例えば抗体の1つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されている「チオMAb(thioMAb)」を作製することが望ましいであろう。特定の態様では、置換残基が抗体の接近可能部位に存在する。それらの残基をシステインで置換すると、それによって抗体の接近可能部位に活性チオール基が置かれることになり、本明細書においてさらに説明するように、それを使って、抗体を他の部分、例えば薬物部分またはリンカー-薬物部分にコンジュゲートすることで、イムノコンジュゲートを作製することができる。一定の態様では、次に挙げる残基のうちの任意の1つまたは複数をシステインで置換することができる:軽鎖のV205(Kabatナンバリング)、重鎖のA118(EUナンバリング)、および重鎖Fc領域のS400(EUナンバリング)。システイン改変抗体は、例えば米国特許第7,521,541号に記載されているように生成させることができる。
一定の態様では、当技術分野において公知であり容易に入手することができる追加の非タンパク質部分を含有するように、本明細書に規定する抗体をさらに修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分として水溶性ポリマーが挙げられるが、それらに限定されるわけではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール(PEG)、エチレングリコール/プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ-1,3-ジオキソラン、ポリ-1,3,6-トリオキサン、エチレン/無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸(ホモポリマーまたはランダムコポリマー)、およびデキストランまたはポリ(n-ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド/エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール(例えばグリセロール)、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が挙げられるが、それらに限定されるわけではない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性ゆえに、製造上の利点を有しうる。ポリマーは任意の分子量であってよく、分岐型であっても非分岐型であってもよい。抗体に取り付けられるポリマーの数はさまざまであってよく、2つ以上のポリマーが取り付けられる場合、それらは同じ分子または異なる分子であることができる。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および/またはタイプは、例えば限定するわけではないが、改良しようとする抗体の特定の特性または機能、その抗体誘導体が所定の条件下で治療に使用されるかどうかなどといった、考慮事項に基づいて決定することができる。
「ペイロード」という用語は、細胞(中)に送達しかつ/または細胞に局在させることが望まれる活性を有する任意の分子またはそのような分子の組み合わせを表す。ペイロードとしては、ラベル、ポリペプチド毒素(例えばシュードモナス外毒素、リシン、アブリン、ジフテリア毒素など)、酵素、成長因子、転写因子、薬物、放射性核種、リガンド、抗体、リポソーム、ナノ粒子、ウイルス粒子、サイトカインなどが挙げられるが、それらに限定されるわけではない。
本明細書において報告するハプテン化ポリペプチドは、それ単独で分子の1つでない場合には、治療用作用物質(薬物)、ポリペプチド毒素(例えばドキソルビシンや百日咳毒素などの毒素)、発蛍光団、例えばフルオレセインやローダミンのような蛍光色素、イメージング用または放射線治療用の金属のためのキレート剤、ペプチジルまたは非ペプチジルラベルまたは検出タグ、あるいはクリアランス調整作用物質、例えばポリエチレングリコールのさまざまな異性体、第3の構成要素に結合するペプチド、または他の糖質もしくは親油性作用物質に、さらにコンジュゲートすることができる。コンジュゲーションは直接的に行うか、または介在リンカーを介して行うことができる。
ハプテン-薬物コンジュゲート(ADC、ハプテン化薬物)の薬物部分(D)は、細胞傷害性効果または細胞増殖抑制効果を有する任意の化合物、部分または基であることができる。薬物部分としては、(i)微小管阻害剤、有糸分裂阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、またはDNAインターカレーターとして機能しうる化学療法剤;(ii)酵素的に機能しうるポリペプチド毒素、および(iii)放射性同位体が挙げられる。
ハプテン化ポリペプチドは、ハプテン化ラベル部分をさらに含有することができる。ハプテンに共有結合で取り付けることができるラベル部分はどれでも使用することができる(例えばSingh et al(2002)Anal. Biochem. 304: 147-15; Harlow E. and Lane, D.(1999)Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory Press,ニューヨーク州コールドスプリングハーバー; Lundblad R. L.(1991)Chemical Reagents for Protein Modification,第2版, CRC Press,フロリダ州ボカラトンを参照されたい)。ラベルは、以下のように機能しうる:(i)検出可能なシグナルを提供する;(ii)第2ラベルと相互作用することで、第1ラベルまたは第2ラベルがもたらす検出可能なシグナルを調整する、例えばFRET(蛍光共鳴エネルギー移動)を与える;(iii)電荷、疎水性、形状、または他の物理パラメータにより、移動度、例えば電気泳動移動度、または細胞透過性に影響を与える、または(iv)例えばイオン的複合体化を調整するために、捕捉部分を与える。
(i)セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)と、基質としてのハイドロゲンペルオキシダーゼ(hydrogen peroxidase)。ここでは、ハイドロゲンペルオキシダーゼが色素前駆体(例えばオルト-フェニレンジアミン(OPD)または3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン塩酸塩(TMB))を酸化する;
(ii)アルカリホスファターゼ(AP)と、発色性基質としてのパラ-ニトロフェニルリン酸;および
(iii)(3-D-ガラクトシダーゼ((3-D-Gal)と、発色性基質(例えばp-ニトロフェニル-(3-D-ガラクトシダーゼ)または蛍光原基質4-メチルウンベリフェリル-(3-D-ガラクトシダーゼ。
本明細書に報告するコンジュゲート中の抗体は、それ単独で分子の1つでない場合には、治療用作用物質(薬物)、細胞傷害性作用物質(例えばドキソルビシンや百日咳毒素などの毒素)、発蛍光団、例えばフルオレセインやローダミンのような蛍光色素、イメージング用または放射線治療用の金属のためのキレート剤、ペプチジルまたは非ペプチジルラベルまたは検出タグ、あるいはクリアランス調整作用物質、例えばポリエチレングリコールのさまざまな異性体、第3の構成要素に結合するペプチド、または他の糖質もしくは親油性作用物質に、さらにコンジュゲートすることができる。
本発明は、本明細書において報告する抗体を含有するイムノコンジュゲート、または1つもしくは複数のポリペプチド毒素、例えば化学療法剤または化学療法薬、増殖阻害性作用物質、毒素(例えばタンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物由来の、酵素活性毒素、またはそれらのフラグメント)、または放射性同位体にコンジュゲートされた本明細書に報告するコンジュゲートも提供する。
本明細書において報告するコンジュゲート中のハプテンは、一態様において、細胞傷害性作用物質、例えばドキソルビシンまたは百日咳毒素などの毒素にコンジュゲートされる。そのようなコンジュゲートをハプテン化ポリペプチド毒素という。コンジュゲーションは、直接的に行うか、介在リンカーを介して行うことができる。
「リンカー」という用語は、ポリペプチドにハプテンをコンジュゲート(連結)するために使用することができる二官能性部分または多官能性部分を表す。ハプテン化ポリペプチドは、ポリペプチドに結合すると共にハプテンにも結合するための反応性官能基を有するリンカーを使って、好都合に調製することができる。
本明細書において報告する抗体のアミノ酸配列の変異体、または本明細書に報告するコンジュゲートに含まれる化合物のアミノ酸配列の変異体をコードするDNAは、当技術分野において公知のさまざまな方法によって調製することができる。これらの方法としては、部位指定(またはオリゴヌクレオチド媒介)突然変異導入法、PCR突然変異導入法、および以前に調製されたポリペプチドをコードするDNAのカセット突然変異導入法が挙げられるが、それらに限定されるわけではない。組換え抗体の変異体は、制限フラグメント操作によって、または合成オリゴヌクレオチドを使ったオーバーラップ伸長PCRによって、構築することもできる。突然変異原プライマーはシステインコドン置換をコードする。標準的な突然変異導入技法を使用して、そのような修飾改変抗体をコードするDNAを生成させることができる。一般的指針は、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press,ニューヨーク州コールドスプリングハーバー, 1989;およびAusubel et al Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley-Interscience,ニューヨーク州ニューヨーク, 1993に見いだすことができる。
ポリペプチドおよび抗体は、例えばUS4,816,567に記載されている組換え法および組成物を使って生産することができる。一態様では、本明細書に記載するポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のVLを含むアミノ酸配列および/またはVHを含むアミノ酸配列(例えば抗体の軽鎖および/または重鎖)またはポリペプチドのアミノ酸配列をコードしうる。さらなる態様では、そのような核酸を含む1つまたは複数のベクター(例えば発現ベクター)が提供される。
本明細書において報告するコンジュゲートを含む薬学的製剤は、望ましい純度を有するそのようなコンジュゲートを1つまたは複数の随意の薬学的に許容される担体(Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版, Osol, A.編(1980))と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量および濃度において受容者にとって一般に無毒性であり、これには、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤;酸化防止剤、例えばアスコルビン酸およびメチオニン;保存剤(例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム;塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール;アルキルパラベン、例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾール);低分子量(約10残基未満)のポリペプチド;タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えばポリ(ビニルピロリドン);アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン;単糖、二糖、および他の糖質、例えばグルコース、マンノース、またはデキストリン;キレート剤、例えばEDTA;糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール;塩形成対イオン、例えばナトリウム;金属錯体(例えばZn-タンパク質錯体);および/または非イオン界面活性剤、例えばポリエチレングリコール(PEG)などがあるが、それらに限定されるわけではない。本明細書における、例示的な薬学的に許容される担体には、さらに、間質薬物分散剤、例えば可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質(sHASEGP)、例えばヒト可溶性PH-20ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばrhuPH20(HYLENEX(登録商標)、Baxter International, Inc.)が含まれる。rhuPH20を含む一定の例示的sHASEGPおよびその使用方法は、US2005/0260186ならびにUS2006/0104968に記載されている。一局面では、sHASEGPが、1つまたは複数の追加グリコサミノグリカナーゼ、例えばコンドロイチナーゼと併用される。
本明細書に報告するコンジュゲートはいずれも治療方法に使用することができる。
本発明の別の局面では、上述の障害の処置、防止および/または診断に有用な材料が入っている製造品が提供される。製造品は、容器、および容器上のまたは容器に付随するラベルまたは添付文書を含む。適切な容器として、例えば瓶、バイアル、シリンジ、IV溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど、さまざまな素材で形成されうる。容器は、組成物を単独で、または当該状態を処置、防止および/または診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保持し、滅菌アクセスポートを有しうる(例えば容器は静脈内溶液バッグであるか、皮下注射針で突き刺すことができる栓を有するバイアルであることができる)。組成物中の少なくとも1つの活性作用物質は本明細書に報告する抗体または複合体である。ラベルまたは添付文書は、当該組成物が、選択された状態を処置するために使用されることを示す。さらにまた、本製造品は、(a)本明細書に報告する抗体または複合体を含む組成物が入っている第1容器と、(b)さらなる細胞傷害性作用物質または他の治療剤を含む組成物が入っている第2容器とを含みうる。本発明のこの態様の製造品は、さらに、特定の状態を処置するために当該組成物を使用できることを示す添付文書を含みうる。これに代えて、またはこれに加えて、本製造品はさらに、薬学的に許容される緩衝液、例えば静菌性注射用水(BWFI)、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などを含む第2(または第3)の容器を含みうる。これは、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料、例えば他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジなどを、さらに含みうる。
1.ハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体との(共有結合的)コンジュゲートであって、ジスルフィド結合が、ハプテンコンジュゲーションに使用されるポリペプチドのリジン残基の前または後のいずれかにあるシステイン残基と、該抗体のKabatに従って決定されるCDR2中のシステイン残基との間に形成されている、(共有結合的)コンジュゲート。
2.システイン残基が、ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の1〜3残基前または1〜3残基後にある、項目1記載のコンジュゲート。
3.ポリペプチドがポリペプチド毒素である、項目1〜2のいずれか一項記載のコンジュゲート。
4.前記CDR2が重鎖CDR2である、項目1〜3のいずれか一項記載のコンジュゲート。
5.ポリペプチド毒素がリジン残基でハプテンにコンジュゲートされているハプテン化ポリペプチド毒素と抗ハプテン抗体とを含む(共有結合的)コンジュゲートであって、
ハプテン化ポリペプチド毒素が、ジスルフィド結合によって抗ハプテン抗体にコンジュゲートされており、
ジスルフィド結合が、
i)ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の1残基もしくは2残基前または1残基もしくは2残基後のいずれかにあるハプテン化ポリペプチド毒素のシステイン残基
と、
ii)該抗体のKabatに従って決定される重鎖CDR2中のシステイン残基
との間に形成されている、(共有結合的)コンジュゲート。
6.ポリペプチドがそのアミノ酸配列中に厳密に1つのリジン残基を含む、項目1〜5のいずれか一項記載のコンジュゲート。
7.ハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体との(共有結合的)コンジュゲートであって、ジスルフィド結合が、ポリペプチド中のシステイン残基と、抗体のKabatに従って決定される重鎖CDR2中のシステイン残基との間に形成されており、ポリペプチドがそのアミノ酸配列中に厳密に1つのリジン残基を含む、(共有結合的)コンジュゲート。
8.システイン残基が、ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の2残基前(すなわちリジン残基に対して位置N-2)または2残基後(すなわちリジン残基に対して位置N+2)にある、項目1〜7のいずれか一項記載のコンジュゲート。
9.ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基が、前記ポリペプチドのN末端アミノ酸の10残基内にある、項目1〜8のいずれか一項記載のコンジュゲート。
10.抗ハプテン抗体がハプテン化ポリペプチドのハプテンに特異的に結合する(抗ハプテン抗体)、項目1〜9のいずれか一項記載のコンジュゲート。
11.ハプテン化ポリペプチドが、ハプテン、リンカー、およびポリペプチドを含む、項目1〜10のいずれか一項記載のコンジュゲート。
12.ポリペプチドが、カルボキシメチル基またはカプロン酸スペーサーを介してハプテンにコンジュゲートされている、項目1〜10のいずれか一項記載のコンジュゲート。
13.前記抗体のCDR2中のシステイン残基のアルファ炭素原子が、ハプテンがコンジュゲートされているポリペプチドのリジン残基の原子から約10〜11オングストローム離れている(ハプテンは、ポリペプチドに直接コンジュゲートされているか、リンカーを介してコンジュゲートされている)、項目1〜12のいずれか一項記載のコンジュゲート。
14.ポリペプチドがさらにペイロードにコンジュゲートされている、項目1〜13のいずれか一項記載のコンジュゲート。
15.ポリペプチド毒素がPE25である、項目1〜14のいずれか一項記載のコンジュゲート。
16.ポリペプチド毒素がヒト化(脱免疫化)PE25変異体である、項目1〜14のいずれか一項記載のコンジュゲート。
17.前記抗体の重鎖CDR2中のシステイン残基が、Kabatの重鎖可変ドメインナンバリングに従う位置52、または位置52a、または位置52b、または位置52c、または位置52d、または位置53にある、項目1〜16のいずれか一項記載のコンジュゲート。
18.前記抗体の重鎖CDR2中のシステイン残基が、Kabatの重鎖可変ドメインナンバリングに従う位置52a、または位置52b、または位置52c、または位置53にある、項目1〜17のいずれか一項記載のコンジュゲート。
19.前記抗体の重鎖CDR2中のシステイン残基が、Kabatの重鎖可変ドメインナンバリングに従う位置52bまたは位置53にある、項目1〜18のいずれか一項記載のコンジュゲート。
20.前記抗体が、非ハプテン抗原に対する第1結合特異性とハプテンに対する第2結合特異性とを含む二重特異性抗体である、項目1〜19のいずれか一項記載のコンジュゲート。
21.ハプテン化ポリペプチド毒素と二重特異性抗体とを含む(共有結合的)コンジュゲートであって、
二重特異性抗体が、非ハプテン抗原に対する第1結合特異性と、ハプテンに対する第2結合特異性とを含み、
ポリペプチド毒素が、リジン残基においてハプテンにコンジュゲートされており、
ハプテン化ポリペプチド毒素が、ジスルフィド結合によって抗ハプテン抗体にコンジュゲートされており、
ジスルフィド結合が、
i)ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の2残基前または2残基後にあるハプテン化ポリペプチド毒素のシステイン残基
と、
ii)該抗体のKabatに従って決定される重鎖CDR2中の位置52bまたは位置53にあるシステイン残基
との間に形成されている、(共有結合的)コンジュゲート。
22.抗体分子のハプテン化ポリペプチド分子に対する化学量論比(抗体:ハプテン化ポリペプチド)が、1:1または1:2または2:1または2:2または2:4および4:2である、項目1〜21のいずれか一項記載のコンジュゲート。
23.非ハプテン抗原が細胞表面抗原である、項目1〜22のいずれか一項記載のコンジュゲート。
24.細胞表面抗原が腫瘍関連抗原である、項目23記載のコンジュゲート。
25.二重特異性抗体が完全長抗体である、項目1〜24のいずれか一項記載のコンジュゲート。
26.二重特異性抗体の一方の重鎖がホール突然変異を含み、それぞれの他方の鎖がノブ突然変異を含む、項目25記載のコンジュゲート。
27.二重特異性抗体が、各C末端にscFvまたはscFabが直接的にまたはペプチドリンカーを介して融合されている完全長抗体である、項目1〜26のいずれか一項記載のコンジュゲート。
28.前記抗体がヒト化抗体またはヒト抗体である、項目1〜27のいずれか一項記載のコンジュゲート。
29.前記抗体の定常領域がIgGlサブクラスまたはIgG4サブクラスのものである、項目1〜28のいずれか一項記載のコンジュゲート。
30.前記抗体が、KabatのEUインデックスによるナンバリングに従う位置234および位置235にアラニン、そして位置329にグリシンを持つ、IgG1サブクラスの定常領域を有する、項目1〜29のいずれか一項記載のコンジュゲート。
31.前記抗体が、KabatのEUインデックスによるナンバリングに従う位置228にプロリン、位置235にグルタミン酸、そして位置329にグリシンを持つIgG4クラスの定常領域を有する、項目1〜29のいずれか一項記載のコンジュゲート。
32.1つの重鎖CDR2につき厳密に1つのジスルフィド結合を含む、項目1〜31のいずれか一項記載のコンジュゲート。
33.ジスルフィド結合が、酸化還元活性作用物質を添加することなく形成される、項目1〜32のいずれか一項記載のコンジュゲート。
34.ハプテンがリンカーを介してポリペプチドにコンジュゲートされている、項目1〜33のいずれか一項記載のコンジュゲート。
35.リンカーが非ペプチドリンカーである、項目34記載のコンジュゲート。
36.ハプテンが、ビオチン、またはテオフィリン、またはジゴキシゲニン、またはカルボラン、またはフルオレセイン、またはブロモデオキシウリジンである、項目1〜35のいずれか一項記載のコンジュゲート。
37.抗ジゴキシゲニン抗体が、(a)SEQ ID NO:09またはSEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(b)SEQ ID NO:10またはSEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、(c)SEQ ID NO:11またはSEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、(d)SEQ ID NO:13またはSEQ ID NO:29のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(e)SEQ ID NO:14またはSEQ ID NO:30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(f)SEQ ID NO:15またはSEQ ID NO:31のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つのCDRを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
38.抗ビオチン抗体が、(a)SEQ ID NO:41またはSEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(b)SEQ ID NO:42またはSEQ ID NO:58のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、(c)SEQ ID NO:43またはSEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、(d)SEQ ID NO:45またはSEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(e)SEQ ID NO:46またはSEQ ID NO:62のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(f)SEQ ID NO:47またはSEQ ID NO:64のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つのCDRを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
39.抗フルオレセイン抗体が、(a)SEQ ID NO:105またはSEQ ID NO:113のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(b)SEQ ID NO:106またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、(c)SEQ ID NO:107またはSEQ ID NO:115のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、(d)SEQ ID NO:109またはSEQ ID NO:117のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(e)SEQ ID NO:110またはSEQ ID NO:118のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(f)SEQ ID NO:111またはSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つのCDRを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
40.抗テオフィリン抗体が、(a)SEQ ID NO:73またはSEQ ID NO:89のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(b)SEQ ID NO:74またはSEQ ID NO:90のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、(c)SEQ ID NO:75またはSEQ ID NO:91のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、(d)SEQ ID NO:77またはSEQ ID NO:93のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(e)SEQ ID NO:78またはSEQ ID NO:94のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(f)SEQ ID NO:79またはSEQ ID NO:95のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つのCDRを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
41.抗ジゴキシゲニン抗体が、
(a)(i)SEQ ID NO:09またはSEQ ID NO:25のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:10またはSEQ ID NO:26のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および(iii)SEQ ID NO:11またはSEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVH CDR配列を含むVHドメイン、および
(b)(i)SEQ ID NO:13またはSEQ ID NO:29のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:14またはSEQ ID NO:30のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(c)SEQ ID NO:15またはSEQ ID NO:31のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVL CDR配列を含むVLドメイン
を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
42.抗ビオチン抗体が、
(a)(i)SEQ ID NO:41またはSEQ ID NO:57のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:42またはSEQ ID NO:58のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および(iii)SEQ ID NO:43またはSEQ ID NO:59のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVH CDR配列を含むVHドメイン、および
(b)(i)SEQ ID NO:45またはSEQ ID NO:61のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:46またはSEQ ID NO:6242のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(c)SEQ ID NO:47またはSEQ ID NO:63のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVL CDR配列を含むVLドメイン
を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
43.抗フルオレセイン抗体が、
(a)(i)SEQ ID NO:105またはSEQ ID NO:113のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:106またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および(iii)SEQ ID NO:107またはSEQ ID NO:115のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVH CDR配列を含むVHドメイン、および
(b)(i)SEQ ID NO:109またはSEQ ID NO:117のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:110またはSEQ ID NO:118のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(c)SEQ ID NO:111またはSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVL CDR配列を含むVLドメイン
を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
44.抗テオフィリン抗体が、
(a)(i)SEQ ID NO:73またはSEQ ID NO:89のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:74またはSEQ ID NO:90のアミノ酸配列を含む重鎖CDR2、および(iii)SEQ ID NO:75またはSEQ ID NO:91のアミノ酸配列を含む重鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVH CDR配列を含むVHドメイン、および
(b)(i)SEQ ID NO:77またはSEQ ID NO:93のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1、(ii)SEQ ID NO:78またはSEQ ID NO:94のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2、および(c)SEQ ID NO:79またはSEQ ID NO:95のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3、から選択される少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てのVL CDR配列を含むVLドメイン
を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
45.抗ジゴキシゲニン抗体、および/または抗ビオチン抗体、および/または抗テオフィリン抗体が、ヒト化抗体である、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
46.抗ジゴキシゲニン抗体が、上記の項目のいずれかに記載のCDRを含み、さらにアクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
47.抗ビオチン抗体が、上記の項目のいずれかに記載のCDRを含み、さらにアクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
48.抗テオフィリン抗体が、上記の項目のいずれかに記載のCDRを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
49.抗ジゴキシゲニン抗体が、SEQ ID NO:04またはSEQ ID NO:12またはSEQ ID NO:20またはSEQ ID NO:28のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)配列を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
50.少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%の同一性を有するVH配列は、参照配列との比較で置換(例えば保存的置換)、挿入、または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体は、ジゴキシゲニンに結合する能力を保っている、項目49記載のコンジュゲート。
51. SEQ ID NO:01またはSEQ ID NO:09またはSEQ ID NO:17またはSEQ ID NO:25において、合計1〜10個のアミノ酸が置換され、挿入され、かつ/または欠失している、項目49〜50のいずれか一項記載のコンジュゲート。
52.置換、挿入、または欠失が、CDR外の領域(すなわちFR中)に存在する、項目49〜51のいずれか一項記載のコンジュゲート。任意で、抗ジゴキシゲニン抗体は、SEQ ID NO:01またはSEQ ID NO:09またはSEQ ID NO:17またはSEQ ID NO:25のVH配列(当該配列の翻訳後修飾を含む)を含む。
53.抗ジゴキシゲニン抗体が、SEQ ID NO:08またはSEQ ID NO:16またはSEQ ID NO:24またはSEQ ID NO:32のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン(VL)を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
54.少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%の同一性を有するVL配列は、参照配列との比較で置換(例えば保存的置換)、挿入、または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ジゴキシゲニン抗体は、ジゴキシゲニンに結合する能力を保っている、項目53記載のコンジュゲート。
55. SEQ ID NO:08またはSEQ ID NO:16またはSEQ ID NO:24またはSEQ ID NO:32において、合計1〜10個のアミノ酸が置換され、挿入され、かつ/または欠失している、項目53〜54のいずれか一項記載のコンジュゲート。一定の項目において、置換、挿入、または欠失は、CDR外の領域(すなわちFR中)に存在する。
56.抗ジゴキシゲニン抗体が、SEQ ID NO:08またはSEQ ID NO:16またはSEQ ID NO:24またはSEQ ID NO:32のVL配列(当該配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目53〜55のいずれか一項記載のコンジュゲート。
57.抗ビオチン抗体が、SEQ ID NO:36またはSEQ ID NO:44またはSEQ ID NO:52またはSEQ ID NO:60のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)配列を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
58.少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%の同一性を有するVH配列は、参照配列との比較で置換(例えば保存的置換)、挿入、または欠失を含有するが、当該配列を含む抗ビオチン抗体はビオチンに結合する能力を保っている、項目57記載のコンジュゲート。
59.SEQ ID NO:36またはSEQ ID NO:44またはSEQ ID NO:52またはSEQ ID NO:60において、合計1〜10個のアミノ酸が置換され、挿入され、かつ/または欠失している、項目57〜58のいずれか一項記載のコンジュゲート。
60.置換、挿入、または欠失が、CDR外の領域(すなわちFR中)に存在する、項目57〜59のいずれか一項記載のコンジュゲート。
61.抗ビオチン抗体が、SEQ ID NO:36またはSEQ ID NO:44またはSEQ ID NO:52またはSEQ ID NO:60のVH配列(当該配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目57〜60のいずれか一項記載のコンジュゲート。
62.抗フルオレセイン抗体が、SEQ ID NO:108またはSEQ ID NO:116のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)配列を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
63.少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%の同一性を有するVH配列は、参照配列との比較で置換(例えば保存的置換)、挿入、または欠失を含有するが、当該配列を含む抗フルオレセイン抗体はフルオレセインに結合する能力を保っている、項目62記載のコンジュゲート。
64. SEQ ID NO:108またはSEQ ID NO:116において、合計1〜10個のアミノ酸が置換され、挿入され、かつ/または欠失している、項目62〜63のいずれか一項記載のコンジュゲート。
65.置換、挿入、または欠失が、CDR外の領域(すなわちFR中)に存在する、項目62〜64のいずれか一項記載のコンジュゲート。
66.抗フルオレセイン抗体が、SEQ ID NO:108またはSEQ ID NO:116のVH配列(当該配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目62〜65のいずれか一項記載のコンジュゲート。
67.抗テオフィリン抗体が、SEQ ID NO:68またはSEQ ID NO:76またはSEQ ID NO:84またはSEQ ID NO:92のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または100%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)配列を含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
68.少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%の同一性を有するVH配列は、参照配列との比較で置換(例えば保存的置換)、挿入、または欠失を含有するが、当該配列を含む抗テオフィリン抗体はテオフィリンに結合する能力を保っている、項目67記載のコンジュゲート。
69. SEQ ID NO:68またはSEQ ID NO:76またはSEQ ID NO:84またはSEQ ID NO:92において、合計1〜10個のアミノ酸が置換され、挿入され、かつ/または欠失している、項目67〜68のいずれか一項記載のコンジュゲート。
70.置換、挿入、または欠失が、CDR外の領域(すなわちFR中)に存在する、項目67〜69のいずれか一項記載のコンジュゲート。
71.抗テオフィリン抗体がSEQ ID NO:68またはSEQ ID NO:76またはSEQ ID NO:84またはSEQ ID NO:92のVH配列(当該配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目67〜70のいずれか一項記載のコンジュゲート。
72.抗ジゴキシゲニン抗体が、上述の項目のいずれかに記載のVHと上述の項目のいずれかに記載のVLとを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
73.前記抗体が、それぞれSEQ ID NO:04またはSEQ ID NO:12またはSEQ ID NO:20またはSEQ ID NO:28、およびSEQ ID NO:08またはSEQ ID NO:16またはSEQ ID NO:24またはSEQ ID NO:32のVH配列およびVL配列(これらの配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目72記載のコンジュゲート。
74.抗ビオチン抗体が、上述の項目のいずれかに記載のVHと上述の項目のいずれかに記載のVLとを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
75.前記抗体が、それぞれSEQ ID NO:36またはSEQ ID NO:44またはSEQ ID NO:52またはSEQ ID NO:60、およびSEQ ID NO:40またはSEQ ID NO:48またはSEQ ID NO:56またはSEQ ID NO:64のVH配列およびVL配列(これらの配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目74記載のコンジュゲート。
76.抗フルオレセイン抗体が、上述の項目のいずれかに記載のVHと上述の項目のいずれかに記載のVLとを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
77.前記抗体が、それぞれSEQ ID NO:108またはSEQ ID NO:116、およびSEQ ID NO:112またはSEQ ID NO:120のVH配列およびVL配列(これらの配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目76記載のコンジュゲート。
78.抗テオフィリン抗体が、上述の項目のいずれかに記載のVHと上述の項目のいずれかに記載のVLとを含むことを特徴とする、項目1〜36のいずれか一項記載のコンジュゲート。
79.前記抗体が、それぞれSEQ ID NO:68またはSEQ ID NO:76またはSEQ ID NO:84またはSEQ ID NO:92、およびSEQ ID NO:72またはSEQ ID NO:80またはSEQ ID NO:88またはSEQ ID NO:96のVH配列およびVL配列(これらの配列の翻訳後修飾を含む)を含む、項目78記載のコンジュゲート。
80.項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
81.医薬として使用するための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲート。
82.がんを処置するための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲート。
83.ウイルス性疾患を処置するための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲート。
84.医薬の製造における、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
85.ポリペプチドの安定性を増加させるための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
86.ポリペプチドのオフターゲット毒性効果を低減するかまたは排除するための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
87.ポリペプチドの活性を増加させるための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
88.ポリペプチドのインビボ半減期を増加させるための、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
89.疾患の処置における、項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートの使用。
90.有効量の項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートを個体に投与する工程を含む、疾患を有する個体を処置する方法。
91.有効量の項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートを個体に投与する工程を含む、個体の疾患を処置する方法。
92.疾患ががんである、項目91記載の方法。
93.抗体の人為的システイン残基のアルファ炭素原子が、リンカーが融合されているポリペプチドの原子から約10〜11オングストローム離れている、抗体の人為的システイン残基を含む抗体と、人為的ポリペプチドシステイン残基を含むハプテン化ポリペプチドとの組み合わせを含む項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートを生産する方法。
94.項目1〜79のいずれか一項記載のコンジュゲートを生産する方法であって、以下の工程を含む方法:
・ハプテンに特異的に結合しかつCDR2中に抗体の人為的システイン残基を有する抗体を、人為的ポリペプチドシステイン残基を含むハプテン化ポリペプチドと、溶液中で混和する工程、および
・溶液からコンジュゲートを回収する工程。
95.ハプテン化化合物をターゲット細胞に標的送達するための二重特異性抗体であって、ハプテン化ポリペプチドに特異的に結合する第1結合部位と該細胞の細胞表面マーカーに特異的に結合する第2結合特異性とを含む、二重特異性抗体。
96.ジスルフィド結合が、ハプテンコンジュゲーションに使用されるポリペプチドのリジン残基の前または後のいずれかにあるシステイン残基と、抗体のKabatに従って決定されるCDR2中のシステイン残基との間に形成される、項目95記載の二重特異性抗体。
97.システイン残基が、ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の1〜3残基前または1〜3残基後にある、項目95〜96のいずれか一項記載の二重特異性抗体。この態様において、システイン残基は、該リジン残基に対して位置N-3、N-2、N-1、N+1、N+2またはN+3のいずれかにある。
98.システイン残基が、ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の2残基前(すなわちリジン残基に対して位置N-2)または2残基後(すなわちリジン残基に対して位置N+2)にある、項目95〜97のいずれか一項記載の二重特異性抗体。
99.ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基が、前記ポリペプチドのN末端アミノ酸の10残基内にある、項目95〜98のいずれか一項記載の二重特異性抗体。
100.ポリペプチドがそのアミノ酸配列中に厳密に1つのリジン残基を含む、項目95〜99のいずれか一項記載の二重特異性抗体。
ジゴキシゲニン存在下でのマウス抗ジゴキシゲニンFv領域の結合領域およびビオチン存在下でのマウス抗ビオチンFv領域の結合領域の結晶化およびX線構造決定
ジゴキシゲニン結合性抗体のFabフラグメントの構造の決定は、WO 2011/003557およびWO 2011/003780に詳述されており、Metz, S. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108(2011)8194-8199にも公表されている(3RA7)。
1括弧内は最外殻分解能の値を示す。
2Rmerge=Σ|I-<I>|/ΣI(式中、Iは強度である)。
3Rcryst=Σ|F0-<Fc>|/ΣFo(式中、Foは構造因子振幅観測値であり、Fcは構造因子振幅計算値である)。
4Rfreeは精密化に際して省略した総データの5%に基づいて計算した。
5PROCHECK[Laskowski, R.A., et al., J. Appl. Crystallogr. 26, 283-291(1993)]で計算した。
1括弧内は最外殻分解能の値を示す。
2Rmerge=Σ|I-<I>|/ΣI(式中、Iは強度である)。
3Rcryst=Σ|F0-<Fc>|/ΣFo(式中、Foは構造因子振幅観測値であり、Fcは構造因子振幅計算値である)。
4Rfreeは精密化に際して省略した総データの5%に基づいて計算した。
5PROCHECK[Laskowski, R.A., MacArthur, M.W., Moss, D.S. & Thornton, J.M. PROCHECK: a program to check the stereochemical quality of protein structure. J. Appl. Crystallogr. 26, 283-291(1993)]で計算した。
共有結合的コンジュゲーションのための官能基が導入されている抗ハプテン抗体の定義と生成
上述した抗ハプテン抗体のヒト化VHおよびVL配列の誘導体化を行って、抗原/ハプテンを所定の位置で抗体に共有結合でカップリングすることができる化合物を生成した。
組換え抗ハプテン抗体の組成、発現および精製
マウス抗ハプテン抗体可変領域およびヒト化抗ハプテン抗体可変領域をヒト由来の定常領域と組み合わせて、単一特異性または二重特異性キメラまたはヒト化抗体を形成させた。
重鎖および軽鎖を発現させるための発現カセットを含む発現プラスミドを、哺乳動物細胞発現ベクター中で、別々に組み立てた。
・ヒトサイトメガロウイルス(hCMV)由来の前初期エンハンサーおよびプロモーター、
・Kozak配列を含む合成5'-UT、
・シグナル配列イントロンを含むマウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
・5'端にユニークBsmI制限部位が配置され、3'端にスプライスドナー部位とユニークNotI制限部位が配置された、クローン化可変軽鎖cDNA、
・イントロン2マウスIg-κエンハンサーを含むゲノムヒトκ遺伝子定常領域(Picard, D., and Schaffner, W. Nature 307(1984)80-82)、および
・ヒト免疫グロブリンκポリアデニル化(「ポリA」)シグナル配列。
・ヒトサイトメガロウイルス(hCMV)由来の前初期エンハンサーおよびプロモーター、
・Kozak配列を含む合成5'-UT、
・シグナル配列イントロンを含む修飾マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
・5'端にユニークBsmI制限部位が配置され、3'端にスプライスドナー部位とユニークNotI制限部位が配置された、クローン化単一特異性可変重鎖cDNAまたはクローン化二重特異性融合scFv-可変重鎖cDNA、および
・マウスIg-μエンハンサーを含むゲノムヒトγ1重鎖定常領域(Neuberger, M.S., EMBO J. 2(1983)1373-1378)、および
・ヒトγ1免疫グロブリンポリアデニル化(「ポリA」)シグナル配列。
・ハイグロマイシン耐性遺伝子、
・エプスタイン・バー・ウイルス(EBV)の複製起点oriP、
・大腸菌におけるこのプラスミドの複製を可能にするベクターpUC18由来の複製起点、
・大腸菌においてアンピシリン耐性を付与するβ-ラクタマーゼ遺伝子
を含有する。
クローニングは、Sambrook et al., 1999(前記)に記載の標準的クローニング技法を使って行った。分子生物学用試薬は全て(別段の表示がなければ)市販品であり、製造者の説明書に従って使用した。
配列の作成、マッピング、分析、アノテーション、および図解には、Vector NTI Advanceスイート・バージョン9.0を使用した。
懸濁状態のヒト胎児腎臓293(HEK293)細胞の一過性トランスフェクションによって抗ハプテン抗体を発現させた。そのために、対応する単一特異性抗体または二重特異性抗体の軽鎖および重鎖を、上に概説したように原核生物用および真核生物用の選択マーカーを保因する発現ベクター中に構築した。これらのプラスミドを大腸菌で増幅し、精製し、次に一過性トランスフェクションに適用した。細胞の取り扱いには、Current Protocols in Cell Biology(2000), Bonifacino, J.S., Dasso, M., Harford, J.B., Lippincott-Schwartz, J.およびYamada, K.M.編, John Wiley & Sons, Inc.に記載されているように、標準的細胞培養技法を使用した。
トランスフェクションの7日後にHEK293細胞上清を回収した。そこに含まれる組換え抗体(または抗体誘導体)を、プロテインA-Sepharose(商標)アフィニティクロマトグラフィー(GE Healthcare,スウェーデン)を使ったアフィニティクロマトグラフィーと、Superdex200サイズ排除クロマトグラフィーとにより、上清から2段階で精製した。簡単に述べると、抗体を含有する清澄化培養上清を、PBS緩衝液(10mM Na2HPO4、1mM KH2PO4、137mM NaClおよび2.7mM KCl、pH7.4)で平衡化したMabSelect SuReプロテインA(5〜50ml)カラムに適用した。結合していないタンパク質を平衡化緩衝液で洗い流した。抗体(または抗体誘導体)を50mMクエン酸緩衝液(pH3.2)で溶出させた。タンパク質含有画分を0.1mlの2M Tris緩衝液(pH9.0)で中和した。次に、溶出したタンパク質画分をプールし、Amicon Ultra遠心分離フィルタデバイス(MWCO:30K, Millipore)で濃縮し、20mMヒスチジン、140mM NaCl(pH6.0)で平衡化したSuperdex200 HiLoad 26/60ゲル濾過カラム(GE Healthcare,スウェーデン)にロードした。精製された抗体および誘導体のタンパク質濃度は、Protein Science 4(1995)2411-2423に従いアミノ酸配列に基づいて算出されたモル吸光係数を使用し、280nmにおける光学密度(OD)を、バックグラウンド補正としての320nmにおけるODと共に決定することによって決定した。単量体型の抗体画分をプールし、瞬間凍結し、-80℃で保存した。試料の一部を後続のタンパク質分析および特徴付けに供した。
ビオチン標識化合物(ハプテン化化合物)への組換えヒト化抗ビオチン抗体の結合
ヒト化手法およびその後のシステイン突然変異の導入によって完全な結合活性を保っている誘導体が得られたかどうかを決定するために、以下の実験を行った。
表面プラズモン共鳴測定は、BIAcore(登録商標)T200計器(GE Healthcare Biosciences AB、スウェーデン)で、25℃において行った。およそ4300レゾナンスユニット(RU)の捕捉系(ヒト抗体捕捉キット(Human Antibody Capture Kit)BR-1008-39(GE Healthcare Biosciences AB、スウェーデン)の10μg/ml抗ヒト捕捉(Anti-human Capture)(IgG Fc))を、GE Healthcareが供給している標準的なアミンカップリングキット(BR-1000-50)を使って、CM3チップ(GE Healthcare、BR-1005-36)にpH5.0でカップリングした。アミンカップリングのためのランニング緩衝液はHBS-N(10mM HEPES、pH7.4、150mM NaCl、GE Healthcare、BR-1006-70)とした。続く結合研究用のランニングおよび希釈緩衝液は、PBS-T(0.05%Tween 20を含む10mMリン酸緩衝食塩水)pH7.4とした。ヒト化抗ビオチン抗体の捕捉は、2nM溶液を5μl/分の流量で60秒間注入することによって行った。ビオチン化siRNAをPBS-Tで0.14〜100nM(1:3希釈系列)の濃度に希釈した。各濃度を30μ1/分の流量で180秒間注入することによって結合を測定した(解離時間600秒)。流量5μl/分の3M MgCl2溶液による30秒間の洗浄で、表面を再生した。BIAevaluationソフトウェア(GE Healthcare Biosciences AB、スウェーデン)を使ってデータを評価した。抗ヒトIgG Fc表面から得られた応答を差し引くことによってバルク屈折率の差を補正した。ブランク注入も差し引いた(=二重参照)。KDおよび速度論的パラメータの計算にはラングミュア1:1モデルを使用した。
ハプテン化化合物と抗ハプテン抗体との非共有結合的複合体の生成
一般的方法:
抗ハプテン抗体とハプテン化化合物(=ペイロードにコンジュゲートされたハプテン)との複合体の生成は、所定の複合体をもたらすべきであり、これらの複合体中の化合物(=ペイロード)はその活性を保っていることが保証されるべきである。ハプテン化化合物とそれぞれの抗ハプテン抗体との複合体を生成させるために、ハプテン化化合物を最終濃度が1mg/mlになるようにH2Oに溶解した。抗体は、20mMヒスチジン緩衝液、140mM NaCl、pH=6.0中で、1mg/ml(4.85μM)の最終濃度まで濃縮した。ハプテン化ペイロードと抗体とを、モル比が2:1(化合物対抗体)になるように、上下にピペッティングすることによって混合し、室温で15分間インキュベートした。
ヒト化およびマウス抗ジゴキシゲニン抗体または二重特異性抗ジゴキシゲニン抗体誘導体を抗体構成要素として使用した。ジゴキシゲニン化Cy5と抗ジゴキシゲニン抗体の複合体を生成させるために、Cy5-ジゴキシゲニンコンジュゲートをPBSに溶解して、最終濃度を0.5mg/mlにした。抗体は、20mMヒスチジンおよび140mM NaCl、pH6で構成される緩衝液中、1mg/ml(約5μM)の濃度で使用した。ジゴキシゲニン化Cy5と抗体とを2:1のモル比(ジゴキシゲニン化Cy5対抗体)で混合した。この手法により、所定の組成を持つ複合体の均一な調製物が得られた。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化Cy5(ビオチン-Cys-Cy5)の複合体を生成させるために、0.16mgのビオチン-Cys-Cy5を、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。1mgの抗体を、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、10.1mg/ml(約69μM)の濃度で使用した。ビオチン-Cys-Cy5と抗体とを2.5:1のモル比(ビオチン-Cys-Cy5対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを、実施例6aで述べるようにSDS-PAGEで分析した。蛍光の検出は実施例6aで述べるように行った。
リンカー内にセリン残基を含有するビオチン誘導体化Cy5(ビオチン-Ser-Cy5)の複合体を生成させるために、0.61mgのビオチン-Ser-Cy5を、10mg/mlの濃度になるように、20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0に溶解した。18.5mgのヒト化抗ビオチン抗体を、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、10mg/ml(約69μM)の濃度で使用した。ビオチン-Ser-Cy5と抗体とを2.5:1のモル比(ビオチン-Ser-Cy5対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら室温で60分間インキュベートした。次に、20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0を移動相とし、1.5ml/分の流量で、Superdex 200 16/60高負荷分取用(high load prep)カラム(GE Healthcare)を用いるサイズ排除クロマトグラフィーに、試料を付した。ピーク画分を収集し、SDS-PAGEで純度を分析した。色素対抗体比は、(1)280nm(タンパク質)および650nm(Cy5)で試料の吸光度を測定し、(2)式:標識されたタンパク質のA650/ε(Cy5)×タンパク質濃度(M)=タンパク質1モルあたりの色素のモル数(ここで、ε(Cy5)=250000M-1cm-1、複合体のA650=47.0、およびタンパク質濃度は86.67μMである)を使用することによって計算した。その結果得られた色素対抗体分子の比は2.17であった。これは、すべての抗体パラトープがビオチン-Cy5分子で飽和していることを示している。
ジゴキシゲニン化ポリペプチドと抗ジゴキシゲニン抗体との非共有結合的複合体を生成させるために、マウスハイブリドーマ由来の抗体(10mM KP04、70mM NaCl; pH7.5からの凍結乾燥物)を12mlの水に溶解し、20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0を含む溶液に対して透析することにより、11mlの緩衝液中に300mg(2×10-6mol)を得た(c=27.3mg/ml)。ジゴキシゲニン-PYY(3-36)コンジュゲート(11.57mg、4×10-6mol、2等量)を2.85mgずつ4回に分けて1時間以内に加え、室温でさらに1時間インキュベートした。複合体化反応の完了後に、複合体を、流量2.5ml/分の20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0におけるSuperdex 200 26/60 GLカラム(320ml)でのサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。溶出した複合体を各4mlの画分に収集し、プールし、0.2μmフィルタで滅菌することにより、234mgの複合体を14.3mg/mlの濃度で得た。同様にして、ヒト化抗ジゴキシゲニン抗体の複合体を生成させるために、抗体を、20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0中、10.6mg/ml(0.93ml中に9.81mg、6.5×10-8mol)の濃度に調節した。0.57mg=1.97×10-7mol=3.03等量のジゴキシゲニン化ポリペプチド(DIG-PYY)を、凍結乾燥物として、抗体溶液に加えた。ポリペプチドと抗体とを室温で1.5時間インキュベートした。過剰のポリペプチドを、流量0.5ml/分の20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0におけるSuperose 6 10/300 GLカラムでのサイズ排除クロマトグラフィーによって除去した。溶出した複合体を各0.5mlの画分に収集し、プールし、0.2μmフィルタで滅菌することにより、4.7mgの複合体を1.86mg/mlの濃度で得た。
システイニル化リンカーを含有するビオチン化PYYポリペプチドの非共有結合的複合体を生成させるために、0.19mgのAc-PYY-PEG3-Cys-β-Ala-Biotを、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。抗体は、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、10.7mg/ml(約73μM)の濃度で使用した。Ac-PYY-PEG3-Cys-β-Ala-Biotと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY-PEG3-Cys-β-Ala-Biot対抗体)で混合し、室温、350rpmで、60分間インキュベートした。その結果得られた複合体は、サイズ排除クロマトグラフィーにおいて単一ピークが存在することから、単量体型のIgG様分子(95%モノマー)であることが明らかになった。得られた複合体を、SDS-PAGEとそれに続くウェスタンブロット解析によって、さらに分析した。10μgの複合体を4×LDS試料緩衝液(Invitrogen)と混合し、95℃で5分間インキュベートした。試料を4-12%Bis-Trisポリアクリルアミドゲル(NuPAGE、Invitrogen)にのせ、それを200Vおよび120mAで35分間泳動した。ポリアクリルアミドゲル中で分離した分子をPVDFメンブレン(孔径0.2μm、Invitrogen)に25Vおよび160mAで40分間転写した。メンブレンを、1×PBST(1×PBS+0.1%Tween20)中、1%(w/v)脱脂乳により、室温で1時間ブロッキングした。メンブレンを1×PBST中で5分間ずつ3回洗浄した後、ストレプトアビジン-PODコンジュゲート(2900U/ml、Roche)(1:2000希釈で使用)と共にインキュベートした。メンブレン上のビオチンに結合したストレプトアビジン-PODの検出は、Lumi-Lightウェスタンブロッティング基質(Roche)を使って行った。
システイニル化リンカーを含有するビオチン化PYYポリペプチドの非共有結合的複合体を生成させるために、0.16mgのAc-PYY-PEG3-Cys-PEG2-Biotを、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。抗体は、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、10.7mg/ml(約73μM)の濃度で使用した。Ac-PYY-PEG3-Cys-PEG2-Biotと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY-PEG3-Cys-PEG2-Biot対抗体)で混合し、室温、350rpmで、60分間インキュベートした。その結果得られた複合体は、サイズ排除クロマトグラフィーにより、63%が単量体型IgG様分子であり、37%が二量体型可溶性凝集体であることが明らかになった。得られた複合体を、SDS-PAGEとそれに続くウェスタンブロット解析によって、さらに分析した。10μgの複合体を4×LDS試料緩衝液(Invitrogen)と混合し、95℃で5分間インキュベートした。試料を4-12%Bis-Trisポリアクリルアミドゲル(NuPAGE、Invitrogen)にのせ、それを200Vおよび120mAで35分間泳動した。ポリアクリルアミドゲル中で分離した分子をPVDFメンブレン(孔径0.2μm、Invitrogen)に25Vおよび160mAで40分間転写した。メンブレンを、1×PBST(1×PBS+0.1%Tween20)中、1%(w/v)脱脂乳により、室温で1時間ブロッキングした。メンブレンを1×PBST中で5分間ずつ3回洗浄した後、ストレプトアビジン-PODコンジュゲート(2900U/ml、Roche)(1:2000希釈で使用)と共にインキュベートした。メンブレン上のビオチンに結合したストレプトアビジン-PODの検出は、Lumi-Lightウェスタンブロッティング基質(Roche)を使って行った。
システイニル化リンカーを含有するフルオレセインコンジュゲートPYYポリペプチドの非共有結合的複合体を生成させるために、0.33mgのAc-PYY(PEG3-Cys-PEG2-5-Fluoを、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。抗体は、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9.99mg/ml(約68μM)の濃度で使用した。Ac-PYY(PEG3-Cys-PEG2-5-Fluoと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY(PEG3-Cys-PEG2-5-Fluo)対抗体)で混合し、室温、350rpmで、60分間インキュベートした。その結果得られた複合体は、サイズ排除クロマトグラフィーにより、76%単量体型IgG様分子および24%二量体型可溶性凝集体であることが明らかになった。得られた複合体を、SDS-PAGEと、それに続くポリアクリルアミドゲル内でのフルオレセイン関連蛍光の検出とによって、さらに分析した。8μgの複合体を4×LDS試料緩衝液(Invitrogen)と混合し、95℃で5分間インキュベートした。フルオレセイン関連蛍光はLumiImager F1デバイス(Roche)を使用して645nmの励起波長で記録した。
酸化還元作用物質の存在下でのハプテン化色素またはハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体VH52bC/VH53Cとの所定の共有結合的コンジュゲートの生成
ハプテン化蛍光色素と抗ハプテン抗体とのコンジュゲート-Dig-Cys-Ahx-Cy5/抗ジゴキシゲニン抗体VH52bC-を形成させるための例示的方法
抗ハプテン抗体とシステイン-リンカーを含有するハプテン化蛍光色素との共有結合的コンジュゲートの生成は、抗ハプテン抗体のCDR2中のVH52bCと、ハプテンと蛍光色素の間にあるリンカー中のシステインとの間の特異的位置でジスルフィド架橋が形成されている所定のコンジュゲートをもたらす。コンジュゲーション反応を酸化還元試薬の存在下で行った。Dig-Cys-Ahx-Cy5を20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0に溶解した。10%(v/v)酢酸を滴下することによって可溶化を容易にした。最終濃度を0.4mg/mlに調節した。20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0中の抗ジゴキシゲニン抗体VH52bCを10mg/mlの濃度にした。抗ジゴキシゲニン抗体を対照として使用し、抗ジゴキシゲニン抗体VH52bCと同じ方法で処理した。4.7nmolの各抗体を2.5モル等量のDig-Cys-Ahx-Cy5と混合した。これは、11.7nmolのこの物質を4回(各2.9nmol)に分けて15分ごとに加えることによって行った。これらの添加の間は、穏やかに振とうしながら、試料を25℃でインキュベートした。最終回分の添加後に、0.64nmolの各抗体-Dig-Cys-Ahx-Cy5複合体を、以下の酸化還元試薬が入っている緩衝液に移した:3mM DTE(ジチオエリスリトール)+10mM GSSG(酸化型グルタチオン)、0.3mM DTE+1mM GSSG、および0.03mM DTE+0.1mM GSSG。すべての試料をこれらの条件下で15分間インキュベートした。インキュベーション後に試料を半分(各0.34nmol)に分割し、SDSゲル電気泳動用に調製した。そのために、4×LDS試料緩衝液(Invitrogen)を加えた。各試料につき、10×NuPAGE試料還元剤(Invitrogen)を加えることによって、還元タイプも調製した。すべての試料を、70℃で5分間インキュベートしてから、1×MOPS緩衝液(Invitrogen)による4-12%Bis-Trisポリアクリルアミドゲル(NuPAGE, Invitrogen)での電気泳動に付した。ゲル内のCy5関連蛍光をLumiImager F1デバイス(Roche)により、645nmの励起波長で検出した。蛍光の検出後にゲルをSimplyBlue SafeStain(Invitrogen)で染色した。ゲルを図4に示す。
Dig-Cys-Cy5を、3.25mg/mlの最終濃度になるように、8.3mM HCl、10%(v/v)DMFに溶解した。20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0中の抗ジゴキシゲニン抗体VH52bC抗体を15mg/mlの濃度にした。抗ジゴキシゲニン抗体を対照として使用し、抗ジゴキシゲニン抗体VH52bCと同じ方法で処理した。13.3nmolの各抗体を、1mM GSH(還元型グルタチオン)および5mM GSSG(還元型グルタチオン)の存在下、10mg/mlの最終抗体濃度で、2モル等量のDig-Cys-Cy5と混合した。これは、26.6nmolのこの物質を、5分ごとに2回に分けて加えることによって行った。これらの添加の間は、穏やかに撹拌しながら室温で試料をインキュベートした。最終回分の添加後に、試料を室温で1時間インキュベートした。SDS-PAGEと、それに続くCy5関連蛍光シグナルの記録によって、カップリング反応の効率を評価した。SDS-PAGE用に5、10および20μgの各試料を調製した。そのために、4×LDS試料緩衝液(Invitrogen)を加えた。すべての試料を70℃で5分間インキュベートしてから、1×MOPS緩衝液(Invitrogen)による4-12%Bis-Trisポリアクリルアミドゲル(NuPAGE, Invitrogen)での電気泳動に付した。LumiImager Flデバイス(Roche)を使用し、645nmの励起波長で、ゲル内のCy5関連蛍光を検出した。蛍光の検出後に、ゲルをSimplyBlue SafeStain(Invitrogen)で染色した。
システイニル化リンカーを含有するジゴキシゲニン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、1.4mgのPEG3-PYY(PEG3-Cys-4Abu-Dig)を10mg/mlの濃度になるように100%DMFに溶解した。1mgの抗体を、5mM Tris-HCl、1mM EDTA、1mM GSH、5mM GSSG、pH8.2で構成される緩衝液中、10mg/ml(約68μM)の濃度で使用した。PEG3-PYY(PEG3-Cys-4Abu-Dig)と抗体とを2:1のモル比(PEG3-PYY(PEG3-Cys-4Abu-Dig)対抗体)で混合し、100rpmで撹拌しながら室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種のうちの43%が2つのポリペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、46%が1つのポリペプチド分子にカップリングされた抗体であり、11%がカップリンしていない抗体と同定された。
酸化還元作用物質の非存在下でのハプテン化色素およびハプテン化ポリペプチドと抗ハプテン抗体VH52bC/VH53Cとの所定の共有結合的コンジュゲートの生成
共有結合的抗ハプテン抗体/ハプテン化ポリペプチドまたはハプテン化色素ジスルフィド連結コンジュゲートを生成させるには、(i)ポリペプチドを抗体表面の上に露出させることでその活性を保つことを可能にする適切な反応性基(例えばシステイン、マレイミドなど)含有リンカーを介して、ハプテン(例えばジゴキシゲニン、フルオレセイン、ビオチンまたはテオフィリン)をポリペプチドまたは色素にカップリングすること、および(ii)ポリペプチドの生物学的活性が保たれている、ハプテン化ポリペプチドとシステイン突然変異を持つ抗ハプテン抗体(=抗体VH52bC/VH53C)との部位特異的共有結合的コンジュゲートを生成させること、および(iii)抗体鎖間ジスルフィド架橋の還元を避けるために、還元剤の非存在下で反応を行うことが必要である。
抗ハプテン抗体とハプテン化化合物とのコンジュゲートの生成は、所定の化学量論でコンジュゲートをもたらすべきであり、これらのコンジュゲート中の化合物はその活性を保っていることが保証されるべきである。ハプテン化化合物とそれぞれの抗ハプテン抗体とのコンジュゲートを生成させるために、ハプテン化化合物を最終濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。抗ハプテン抗体VH52bC/VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH=8.2中、10mg/mlの濃度にした。ハプテン化化合物と抗ハプテン抗体VH52bC/VH53Cとを、モル比が2.5:1(化合物対抗体)になるように、上下にピペッティングすることによって混合し、室温および350rpmで、60分間インキュベートした。
抗体-Dig-Cys-Ahx-Cy5複合体を酸化還元化合物不含、0.1mM GSSG(酸化型グルタチオン)含有または1mM GSSG含有の緩衝液に移した点以外は、試料をまさに実施例6aで述べたとおりに調製した。その結果得られた蛍光スキャンおよびクーマシー染色したポリアクリルアミドゲルを図5に示す。3つの条件のいずれもが、部位特異的ジスルフィド結合形成に関して同様の特異性を示し(図5、上側のゲル、レーン1A〜C)、バックグラウンド反応のレベルは低かった(図5、レーン2A〜C)。これは、還元作用物質が存在しなくてもジスルフィド結合の形成は達成できることを裏付けている。3/4抗体(-1×LC)、HC二量体(-2×LC)および1/2抗体(1×HC+1×LC)は、実施例6と比較して、残存量しか検出されないので、これは、抗体を著しく安定化し/抗体の崩壊を低減する。
13.3nmolの抗体を、酸化還元試薬の非存在下、10mg/mlの最終抗体濃度で2モル等量のDig-Cys-Cy5と混合した点以外は、試料をまさに実施例6bで述べたとおりに調製した。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化Cy5のコンジュゲートを生成させるために、0.16mgのビオチン-Cys-Cy5を、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。1mgの抗ビオチン抗体VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9.7mg/ml(約68μM)の濃度で使用した。ビオチン-Cys-Cy5と抗体とを2.5:1のモル比(Ac-ビオチン-Cys-Cy5対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを、実施例6aで述べるようにSDS-PAGEで分析した。蛍光の検出は実施例6aで述べるように行った。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化Cy5のコンジュゲートを生成させるために、0.16mgのビオチン-Cys-Cy5を、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。1mgのヒト化抗ビオチン抗体VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、7.4mg/ml(約51μM)の濃度で使用した。ビオチン-Cys-Cy5と抗体とを2.5:1のモル比(Ac-ビオチン-Cys-Cy5対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを、実施例6aで述べるようにSDS-PAGEで分析した。蛍光の検出は実施例6aで述べるように行った。
システイニル化リンカーを含有するジゴキシゲニン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、2.4mgのAc-PYY(PEG3-Cys-4Abu-Dig)を、5mg/mlの濃度になるように、20%アセテートに溶解した。10mgのヒト化抗ジゴキシゲニン抗体VH52bC(68.4nmol)を、20mMヒスチジン、140mM NaCl、pH6.0で構成される緩衝液中、19.5mg/ml(約133μM)の濃度で使用した。Ac-PYY(PEG3-Cys-4Abu-Dig)と抗体とを2:1のモル比(Ac-PYY(PEG3-Cys-4Abu-Dig)対抗体)で混合し、100rpmで撹拌しながら室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析で分析した。検出された分子種のうちの7.4%が2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、40%は1つのペプチド分子にカップリングされた抗体であり、52%はカップリングしていない抗体と同定された。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、0.19mgのAc-PYY(PEG3-Cys-βAla-Biot)を10mg/mlの濃度になるように100%DMFに溶解した。1mgのキメラ抗ビオチン抗体VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9.7mg/ml(約67μM)の濃度で使用した。Ac-PYY[PEG3-Cys-βAla-Biotと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY[PEG3-Cys-βAla-Biot]対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら、室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種のうちの87.7%は、2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、12.3%は、1つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定された。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、0.16mgのAc-PYY(PEG3-Cys-PEG2-Biot)を、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。1mgのキメラ抗ビオチン抗体VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9.9mg/ml(約68μM)の濃度で使用した。Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Biotと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Biot]対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら、室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種の100%が2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定された。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、0.06mgのAc-PYY(PEG3-Cys-βAla-Biot)を、濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。0.8mgのヒト化抗ビオチン抗体VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9mg/ml(約62μM)の濃度で使用した。Ac-PYY[PEG3-Cys-βAla-Biotと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY[PEG3-Cys-βAla-Biot]対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら、室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種のうちの62.2%が2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、33.9%は1つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、3.9%はカップリングしていない抗体と同定された。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、0.08mgのAc-PYY(PEG3-Cys-PEG2-Biot)を濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。0.8mgのヒト化抗ビオチン抗体VH53Cを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9mg/ml(約62μM)の濃度で使用した。Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Biotと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Biot]対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら、室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種のうちの71.4%は2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、26%は1つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、2.5%はカップリングしていない抗体と同定された。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、0.33mgのAc-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Fluoを、濃度が10mg/mlになるように、100%DMFに溶解した。1mgの抗フルオレセイン抗体VH52bCを、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9.3mg/ml(約63μM)の濃度で使用した。Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Fluoと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Fluo]対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら、室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種のうちの95%は2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定され、5%は1つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定された。
システイニル化リンカーを含有するビオチン誘導体化PYYポリペプチドのコンジュゲートを生成させるために、0.33mgのAc-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Fluoを、濃度が10mg/mlになるように、100%DMFに溶解した。1mgの抗フルオレセイン抗体VH28Cを、50mM Tris-HCl, 1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、9.5mg/ml(約63μM)の濃度で使用した。Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Fluoと抗体とを2.5:1のモル比(Ac-PYY[PEG3-Cys-PEG2-Fluo]対抗体)で混合し、350rpmで振とうしながら、室温で60分間インキュベートした。その結果得られたコンジュゲートを質量分析によって分析した。検出された分子種の100%が、2つのペプチド分子にカップリングされた抗体と同定された。
共有結合テオフィリン-抗テオフィリン抗体複合体の生成
ハプテン認識系としてテオフィリンとテオフィリン結合抗体とを利用する共有結合的抗体複合体の形成を評価するために、ハプテンをテオフィリンと交換した点以外は、一般にジゴキシゲニン-Cys-Cy5またはビオチン-Cys-Cy5について説明した合成技術および精製技術を応用することにより、テオフィリン-Cys-Cy5を、蛍光ペイロードとして生成させた(実施例8を参照のこと)。合成されたテオフィリン-Cys-Cy5の誘導体の組成物は、図16aに示されている。共有結合ジスルフィドの形成を実証するために、重鎖可変領域の位置54または位置55に計画的Cysを含有するテオフィリン結合抗体を生成させた(抗テオフィリン抗体-Cys)。これらの抗体の純度は、図16bに例示的にY54C変異体について示されている。これらの抗体誘導体をテオフィリン-Cys-Cy5と複合体化し、次に、実施例12で述べたように非還元条件下および還元条件下でのSDS-PAGEに付した。非還元条件下では、ジスルフィドで連結された抗テオフィリン抗体複合体化Cy5が、実施例12での記載と同様にゲル内に、そのH鎖関連蛍光によって検出された。これは図16cに記載されており、ジゴキシゲニン、フルオレセインまたはビオチンをハプテンとして使用した場合に観察されたジスルフィドと同じように、簡単な添加反応の結果として、抗体間の共有結合的複合体が形成されていたことを実証するものである。これらの複合体は、還元すると、予想どおり解離した。すなわちジスルフィドが還元された状態になった場合にのみ、ペイロードをH鎖から放出した(図16c)。
インビボ様条件下での共有結合的ハプテン-抗体複合体の生成と、インビボでの直接的ジスルフィド形成の証拠
インビボ様条件下での共有結合的ハプテン-抗体複合体の形成を評価するために、抗ビオチン抗体-Cysを、ビオチン-Cys-Cy5と共に、マウス血清中、37℃で60分、インキュベートした。次にプロテインAによって抗体をマウス血清から捕捉した。その後、捕捉された抗体を実施例12で述べたように非還元条件下および還元条件下でSDS-PAGEに付した。ジスルフィド連結抗体複合体化Cy5は、実施例12での記載と同様に、ゲル内でのそのH鎖関連蛍光によって検出された。図17は、抗体との共有結合的複合体が、37℃の血清中で、すなわちインビボ条件に似た条件下で形成することを実証している。これらの複合体は、還元すると、予想どおり解離する。すなわちペイロードは、ジスルフィドが還元された場合にのみ、H鎖から放出される(図17)。血清は多量のタンパク質、ペプチドおよび他の化合物(ジスルフィド形成反応を妨害しうるもの)を含有するので、ハプテンの位置決め後に、抗体とペイロードとの間に、血清の存在下でさえ、指向的なジスルフィド結合が形成されうるという知見は予想外である。ハプテンの位置決め後に、37℃の血清中で抗体とペイロードとの間に指向的なジスルフィド結合が形成されうるという知見は、事前ターゲティング(pre-targeting)状況、すなわち抗体とハプテン-ペイロードとの個別適用と、それに続く抗体複合体のインビボアセンブリおよびそれに続くジスルフィド形成において、このPK調整系を応用することができるという可能性を切り開くものでもある。
抗ハプテン抗体とのコンジュゲート中および複合体中のポリペプチドは機能性を保っている
本発明者らは、非共有結合的ハプテン-ポリペプチドコンジュゲートの一部であるポリペプチドおよび抗ハプテン抗体との複合体中のポリペプチドが、機能性を保っていることを、以前に示した(WO2011/003557、WO2011/003780およびWO2012/093068)。カップリングされたペプチドが、共有結合的ジスルフィドカップリング後も機能性を保っていることを実証するために、抗ジゴキシゲニン抗体と複合体化したポリペプチドの生物学的活性と、抗ジゴキシゲニン抗体VH52bCを使ったそれらのジスルフィドコンジュゲートの生物学的活性とを比較した。
ビオチン化Cy5とヒト化抗ビオチン抗体VH53Cとの共有結合的コンジュゲートと比較した、ビオチン化Cy5とヒト化抗ビオチン抗体との複合体の血清中安定性
ここに記載するペプチド修飾技術の目的は、ペプチドの治療応用可能性を改良することである。ペプチドの治療的応用にとって大きな障害は、現在は限られているインビボでの安定性および/または短い血清中半減期ならびに迅速なクリアランスである。発蛍光団の抗体コンジュゲートのPKパラメータをインビボで決定し、非共有結合的抗体-発蛍光団複合体のPKと比較した。そこで、(i)抗ビオチン抗体VH53Cをビオチン化発蛍光団 Biot-Cys-Cy5に共有結合でコンジュゲートし、(ii)抗ビオチン抗体とビオチン化発蛍光団Biot-Cy5との非共有結合的複合体を生成させ、(iii)共有結合でコンジュゲートした化合物と、非共有結合的に複合体化した化合物とを、動物に適用し、(iv)Cy5の蛍光(A650)の決定と、ヒト化抗体を特異的に検出するELISA法による対応する抗体の決定とにより、これらの動物における化合物の血清中濃度を経時的に測定した。
小さな蛍光基質の抗体複合体化がPKパラメータに及ぼす影響を分析するために、20mMヒスチジン/140mM NaCl、pH6.0中の、13nmolのCy5-ビオチン/ヒト化抗ビオチン抗体VH53C-コンジュゲート、または対応する抗体と非共有結合的に複合体化した化合物、または蛍光化合物のみを、各物質につき6匹の雌マウス(NRMI系統)に適用した。約0.1mlの血液試料を以下の時点後に収集した:第1群のマウス1、2、および3については0.08時間、4時間および48時間、第2群のマウス1、2、および3については0.08時間、24時間および72時間。室温で1時間後に、遠心分離(9300×g、3分、4℃)によって、少なくとも50μlの血清試料を得た。血清試料を-80℃で保存した。
ジゴキシゲニン化ポリペプチドの抗体複合体化および抗体コンジュゲーションがPKパラメータに及ぼす影響を分析するために、20mMヒスチジン/140mM NaCl pH6.0中、32.1nmolのポリペプチド、または対応する抗体と非共有結合的に複合体化したポリペプチドを、各物質につき2匹の雌マウス(NRMI系統)に適用した。マウスの体重はMAK-DIG-PYYについては23gおよび25g、DIG-PYYについては28gおよび26gであった。約0.1mlの血液試料を以下の時点後に収集した:マウス1については0.08時間、2時間および24時間、マウス2については0.08時間、4時間、24時間。室温で1時間後に、遠心分離(9300×g、3分、4℃)によって、少なくとも40μlの血清試料を得た。血清試料を-80℃で保存した。
共有結合で連結されたジゴキシゲニン-抗体複合体およびジゴキシゲニン結合性IgGの血清中半減期
共有結合的複合体化が、非共有結合で連結されたハプテン複合体に照らして、PK特性をさらに改良するかどうかを分析するために、抗ジゴキシゲニン抗体-ジゴキシゲニン-Cy5複合体および共有結合で連結された[抗ジゴキシゲニン抗体-Cys]-[ジゴキシゲニン-Cys-Cy5]コンジュゲートのPKパラメータをインビボで決定した。そこで、ジゴキシゲニン-Cy5をその蛍光(A650)を使って決定し、対応する抗体を、ヒト化抗体を特異的に検出するELISA法によって決定した。ハプテンとカップリングしたペプチドの低分子量「代用物」としてジゴキシゲニン-Cy5を適用した。なぜなら、その蛍光特性により、血清における容易かつ正確な検出が可能になるからである。
共有結合で連結されたハプテン-抗体複合体と、ハプテン結合部位を介して付着しているだけの複合体との、血清中半減期および曝露レベル
共有結合的複合体化が非共有結合で連結されたハプテン複合体のPK特性を改良するかどうかを分析するために、インビボでの抗ビオチン抗体とビオチン-Cy5との複合体のPK、および共有結合で連結されたコンジュゲート[抗ビオチン-抗体-Cys]-[ビオチン-Cys-Cy5]のPKを決定した。Cy5の存在は、毛細管中のCy5の蛍光を明らかにする動物の眼の光学的イメージングによって非侵襲的に決定した。注射の10分後に本発明者らがマウスの眼に検出したCy5媒介蛍光値を100%値と設定し、その後の時点で測定される蛍光値を、それとの比較で表した。これらの実験の結果を図15に示す。非複合体化ビオチン-Cy5は単独では低い血清中半減期および低い曝露レベルを有する。共有結合で連結されていない抗体複合体化化合物は、はるかに高いレベルで検出することができ、半減期も延長されていた。さらにまた、共有結合で連結されたペイロードは、非共有結合で連結された複合体と比較して、より大きなPK延長と、より高い血清中レベルとを示した。これは、ハプテン複合体化ジスルフィド連結ペイロードが非共有結合的複合体化ペイロードよりも循環中で安定であり、より高い曝露レベルに達しうることを示している。
異なるハプテンに結合する抗体とのペプチドの複合体化および共有結合的コンジュゲーション
ハプテン結合性モジュールを応用してハプテン化化合物(=ペイロード)をターゲティング媒体にカップリングすることは、ハプテン媒介送達の実現を可能にする技術的可能性の1つである。この概念は、化合物を捕捉しそれらをターゲティングモジュールにつなぐさらなるハプテンまたは他の物体に拡張することができる。例えばポリペプチドの送達または安定化のために、ジゴキシゲニンまたは他のハプテンに結合する単一または二重特異性抗体を応用して、治療用ポリペプチドを安定化し、PK最適化することができる。
ハプテン指向的結合は、ハプテン化色素またはハプテン化ポリペプチドと抗ハプテンシステイニル化抗体との効率のよい共有結合的カップリングの前提条件である
ハプテン化化合物と抗ハプテン抗体との、アフィニティーによって推進される複合体化が、効率のよいジスルフィド結合形成の前提条件であることを示すために、非ハプテン化ペプチドAc-PYY(PEG3-Cys-4Abu-NH2)(Biosynthan 1763.1、SEQ ID NO:178)をヒト化抗ジゴキシゲニン抗体VH52bCおよびヒト化抗ジゴキシゲニン抗体と共にインキュベートした。1.4mgのAc-PYY(PEG3-Cys-4Abu-NH2)を濃度が10mg/mlになるように100%DMFに溶解した。2mgの各抗体を、50mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH8.2で構成される緩衝液中、11〜13mg/ml(約75〜89μM)の濃度で使用した。Ac-PYY(PEG3-Cys-4Abu-NH2)と抗体とを2.1:1のモル比(Ac-PYY(PEG3-Cys-4Abu-NH2対抗体))で混合した。ペプチドは、撹拌子を使って溶液を500rpmで撹拌しながら、3回に分けて加えた。各添加の間に、試料を200rpmで5分インキュベートした。最終回分の添加後に、試料を室温および200rpmで1時間インキュベートした。
共有結合的ペイロードカップリングのためのシステイン突然変異を持つ適正にフォールディングされた機能的ハプテン結合抗体の形成に要求されるジスルフィドパターン
共有結合的化合物/ペイロードカップリング用のハプテン結合性モジュールは、ハプテン化化合物/ペイロードの共有結合による取り付けを可能にする余分なシステインを含有するIgGなどの「標準的」抗体で構成されうる。本明細書において報告する方法では、抗体機能性の基礎になる構造と配列を持つ折りたたまれたドメイン内に、必要な官能性(システイン)を導入する。抗体のドメイン内およびドメイン間に所定のジスルフィド結合が正しく形成されることは、正しい構造と機能性の形成および維持にとって不可欠である。図10Aには、無修飾抗体のFabなどといった機能的結合アームを形成するために要求されるジスルフィドパターンを示し、図10(B)には、VH52cB/VH53C突然変異型抗体誘導体の構造と機能性を維持するために必要なジスルフィドパターンを示す。適正なジスルフィドパターンを維持するには、VHドメインに導入された追加のシステインが占有されていない状態でなければならず、隣接するシステインと干渉したり、反応したりしてはならない。図10(C)および図10(D)は、追加システイン残基の付加によって、そのような分子の生合成中に、VHドメイン内に不正なジスルフィドが形成される可能性が生じることを示している。VH52bC/VH53Cという位置がVHドメイン内にある(そして他のシステインに非常に近接している)という事実は、不正なジスルフィドが重鎖の生合成中に形成されてしまうリスクを増大させる。別の潜在的問題は、VHドメインとVLドメインが分泌経路内で1つのFvフラグメントにアセンブルされてしまうことである。分泌経路は、酸化還元シャフリング条件と、ジスルフィド形成酵素およびジスルフィドシャフリング酵素とを伴う。したがって、VH52bC/VH53C突然変異を加えることによって不正なジスルフィドが導入される潜在的可能性は、軽鎖のジスルフィドにも「拡がり」うる(例示的に図10(E)に示す)。これは、不適正にフォールディングされた非機能的分子の取得/生成リスクを、さらに高めることになる。したがって、これらのリスクにもかかわらず、ハプテン化化合物/ペイロードに共有結合的につながる能力を有するVH52bC/VH53C突然変異を含有する均一な機能的抗体誘導体が良好な量で発現し、得られたことは、極めて驚くべきことである。
共有結合的カップリング用のシステイン突然変異を持つ抗ハプテンジスルフィド安定化一本鎖Fvフラグメントの組成および生成
共有結合的化合物/ペイロードカップリングのためのハプテン結合性モジュールは、「IgGなどの「標準的」抗体からなりうる。あるいは、それらは組換えFvもしくはFabフラグメント、またはそれらの誘導体などの修飾された実体であってもよい。一本鎖Fvフラグメントは、完全長抗体に代わる代替物として、小さなモジュールサイズが必要とされる応用例や、二重特異性または多重特異性抗体誘導体を生成させるために追加の結合モジュールが望まれる応用例ではとりわけ、よく応用されている。生成させた抗ハプテンFv誘導実体の一例は、ジゴキシゲニン化化合物/ペイロードに結合しそれを共有結合でつなぐジスルフィド安定化一本鎖Fvである。抗ジゴキシゲニン抗体のVHドメインとVLドメインをフレキシブルなGlyおよびSerリッチリンカーで互いにつなぐことによって、Dig結合特異性を持つジスルフィド安定化一本鎖Fvを生成させた。これらのVHドメインおよびVLドメインは、VHの位置44およびVLの位置100(Kabatらに従う位置)にさらにシステイン突然変異を内包していた。これらの追加システインはVHとVLの間に安定な分子間ジスルフィド結合を形成する。これは、以前に述べられているように(例えばReiter, Y., et al, Nature Biotechnology 14(1996)1239-1245)、scFvを安定化する。
共有結合でカップリングされた化合物/ペイロードの標的送達のための二重特異性抗ハプテン抗体誘導体の組成、発現および精製
共有結合的化合物/ペイロードカップリングのためのハプテン結合性抗体モジュールを含有する二重特異性抗体を生成させた。これらの抗体は、他の抗原へのターゲティングを可能にする結合モジュールをさらに含有している。そのような二重特異性抗体の応用例としては、ターゲティング抗原を保持する細胞または組織へのハプテン化化合物/ペイロードの特異的ターゲティングが挙げられる。生成させたそのような分子の一例は、腫瘍関連糖質抗原LeYを認識する結合領域を持つと同時に、ジゴキシゲニン化化合物/ペイロードに結合し、それらを共有結合でつなぐジスルフィド安定化Fvも持つ、二重特異性抗体である。そこで、ジスルフィド安定化一本鎖Fvを、フレキシブルなGlyおよびSerリッチコネクターペプチドで、LeY抗体のCH3ドメインのC末端につなぐことで、2つのLeY結合アームとさらに2つのジゴキシゲニン結合実体を持つ四価分子を得た。このジゴキシゲニン結合性実体は、以前に述べられたVH44-VL100ジスルフィド結合を内包していた(Reiter, Y., et al, Nature Biotechnology 14(1996)1239-1245)。ジゴキシゲニン結合性実体は、さらに、共有結合的カップリング用のVH52bC突然変異を含んでいた。このLeY-Dig抗体誘導体の軽鎖および修飾重鎖をコードする配列を、SEQ ID NO:191およびSEQ ID NO:192に示す。共有結合でカップリングされた化合物/ペイロード用の送達媒体としてのLeY-Dig二重特異性抗体誘導体の構成を、図12に略図で示す。
ビオシチンアミドとの複合体を形成しているマウス抗ビオチン抗体FabフラグメントのX線構造決定
ビオシチンアミドとの複合体を形成しているマウス抗ビオチン抗体Fabフラグメントのタンパク質構造を決定した。そのために、Fabフラグメントの結晶を、0.8Mコハク酸中で成長させ、次に、抗体結晶にビオシチジンアミドを装填した(結晶化溶液で10mMの作業濃度に希釈し、結晶化液滴中の結晶に適用した)。結晶を2μlの10mMビオシチジンアミド溶液で3回洗浄し、最後にビオシチジンアミドと共に21℃で16時間インキュベートし、凍結保護物質として15%グリセロールを使って採取し、液体窒素中で瞬間凍結した。処理した回折像は、2.5Åの分解能でタンパク質構造を与えた。ビオチン結合性可変領域の構造および電荷組成を図19に示す。ビオチンは、CDR領域からのアミノ酸で構成される荷電領域に挟まれた表面ポケット中に結合する。複合体化ハプテンは負に荷電したアミノ酸クラスターに近接して配置される。ハプテンとして、そのカルボキシル基がペイロードカップリング用に誘導体化されているビオチンは、(COOH基を欠くため)この位置での電荷反発がないので、効率よく結合する。これに対して、遊離の(通常の)ビオチンは、そのカルボキシル基がこの負荷電クラスターに近接し、それゆえに反発を受けることになるので、抗体に効率よく結合することができない。
抗ハプテン二重特異性抗体
二重特異性抗体は、LeYなどの腫瘍関連細胞表面抗原を認識すると同時に、例えばジゴキシゲニン(Dig)などのハプテンに結合する。図20Aに、以前に記述された完全長IgG由来フォーマットに基づいて、二重特異性抗体の組成を示す(Metz et al 前記、WO 2012/093068参照)。細胞表面抗原結合機能はIgG部分の2つのFabアームにあり、重鎖のC末端に組換え法で融合された2つの追加scFvは、ハプテン結合活性を有する。scFvモジュールは、Fvを安定化し、凝集を低減するために、追加の安定化鎖間ジスルフィド結合を保持している(VHCys44→VLCys100)。加えて、抗ハプテン抗体は、二重特異性抗ハプテン抗体とポリペプチド毒素との間で共有結合であるジスルフィド結合の形成が可能になるように、それぞれの抗体のCDR2の実際の長さに依存して、Kabatナンバリングに従う位置VH52bまたはVH53に人為的システイン残基を有する。
二重特異性抗ハプテン抗体における正しいジスルフィドおよびアクセス可能なシステインの取得
ポリペプチド毒素との共有結合的カップリング用のハプテン結合モジュールは、ハプテン化ポリペプチド毒素とのジスルフィド結合を形成させるために1つまたは複数の追加のシステイン残基を含有するIgGなどの「標準的」抗体で構成される。本明細書において報告する方法では、抗体機能性の基礎になる構造と配列を持つ折りたたまれたドメイン内に、必要な官能性(システイン)を導入する。抗体のドメイン内およびドメイン間に所定のジスルフィド結合が正しく形成されることは、正しい構造と機能性の形成および維持にとって不可欠である。図10(A)には、無修飾抗体のFabなどといった機能的結合アームを形成するために要求されるジスルフィドパターンを示し、図10(B)には、VH52cB/VH53C突然変異型抗体誘導体の構造と機能性を維持するために必要なジスルフィドパターンを示す。適正なジスルフィドパターンを維持するには、VHドメインに導入された追加のシステインが鎖内ジスルフィド結合で占有されていない状態でなければならず、隣接するシステインと干渉したり、反応したりしてはならない。図10(C)および図10(D)は、人為的システイン残基の付加によって、そのような分子の生合成中に、VHドメイン内に不正なジスルフィドが形成される可能性が生じることを示している。VH52bC/VH53Cの位置がVHドメイン内、実際にはCDR2中にある(そして他のシステインに非常に近接している)という事実は、不正なジスルフィドが重鎖の生合成中に形成されてしまうリスクを悪化させる。もう1つの潜在的問題は、VHドメインとVLドメインが分泌経路内で1つのFvフラグメントにアセンブルされてしまうことである。分泌経路は、酸化還元シャフリング条件と、ジスルフィド形成酵素およびジスルフィドシャフリング酵素とを伴う。したがって、VH52bC/VH53C突然変異の付加によって不正なジスルフィドが導入される潜在的可能性は、軽鎖のジスルフィドにも「拡がり」うる(例示的に図10(E)に示す)。これは、不適正にフォールディングされた非機能的分子の取得/生成リスクを、さらに高めることになる。したがって、これらのリスクにもかかわらず、機能的であってハプテン化ポリペプチド毒素に共有結合的につながる能力を有する、VH52bC/VH53C突然変異を含有する均一な機能的抗体誘導体が良好な量で発現し、得られたことは、極めて驚くべきことである。
ハプテン化シュードモナス外毒素誘導体
シュードモナス外毒素は、そのN末端ドメインIで真核細胞に結合し、内部移行し、ドメインII中で加水分解的にプロセシングされて、C末端ドメインIIIを細胞質中に放出する、66kDaタンパク質である。ドメインIIIはeEF2をADPリボシル化し、それがタンパク質合成の阻害とそれに続く細胞死を引き起こす。切断型変異体を、本明細書においてポリペプチド毒素として使用するものを含めて、図21に示す。分子NLysPE38では細胞結合ドメインIとドメインIBとが欠失している(Weldon, J.E. and Pastan, I., FEBS Journal 278(2011)4683-4700; Debinski, W. and Pastan, I., Cancer Res. 52(1992)5379-5385)。この分子は、単独では、細胞傷害能が非常に低い。NLysPE38はそのN末端近くにリジン残基(N-Lys)を含み、これを、NHSケミストリーで化学修飾することができる。dsscFv融合物に関して、プロセシング部位が保たれている限り、ドメインIIの大部分も、効力を失うことなく欠失させうることが、最近示された(Weldon, J.E. and Pastan, I., FEBS Journal 278(2011)4683-4700; Hansen, J.K., et al., J. Immunother. 33(2010)297-304; Pastan, I., et al., Leukemia & Lymphoma 52(2011)Supp. 2:87-90)。そのような融合タンパク質内での毒素のサイズは約25kDaである。切断型毒素はドメインIII中にまだリジン残基を含有している。以前に記載された毒素NlysPE38QQRでは、NHSなどのアミン修飾試薬によってドメインIIIが不活化されるリスクを低減するために、ドメインIIIのリジンがグルタミンまたはアルギニンで置き換えられている(Debinski, W. and Pastan, I., Cancer Res. 52(1992)5379-5385; Debinski, W. and Pastan, I., Bioconjug. Chem. 5(1994)40-46)。本明細書では、ドメインIおよびIBと共にドメインIIの大部分が欠失しており(CD22-LR8M(Pastan, I., et al., Leukemia & Lymphoma 52(2011)Supp.2:87-90)の毒素部分)、かつドメインIII中のリジンがセリンまたはグルタミンに交換されている(NlysPE40QQR類似の突然変異)、新しいポリペプチド毒素変異体NLysPE25SQΔを報告する。加えて、この変異体は、C末端リジンも欠失しており、(NlysPE38の)アミノ末端リジン伸長部を持っている。これにより、NLysPE25SQΔは、そのN末端に唯一のリジンを含有するかなり小さな毒素部分になる。このリジンの1級アミン(およびN末端の1級アミン)は、毒素の他の位置に影響を及ぼすことなくNHS試薬で修飾することができる。NLysPE25SQΔ(PE25)を大腸菌で生産し、アニオン交換クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーによってペリプラズムから精製することで、NLysPE38について以前に記述されているように、凝集体およびサイズの小さい不純物を除去した(Debinski, W. and Pastan, I., Cancer Res. 52(1992)5379-5385; Debinski, W. and Pastan, I.,Bioconjug. Chem. 5(1994)40-46)。凝集体を含まない均一な調製物を良好な収率で得ることができた(>1g/L培養、図21BにSDS-PAGE分析)。NLysPE25SQΔをジゴキシゲニン化するために、活性エステルであるジゴキシゲニン-NHSを、リジンの1級アミノ基を修飾するために適用した。タンパク質のN末端もNHS媒介ジゴキシゲニンコンジュゲーションのターゲットとして役立ちうる。以後の二重特異性抗体-ポリペプチド毒素共有結合的複合体形成が、これら2つの嵩高いパートナー間の立体障害によって妨害されることを避けるために、短いがフレキシブルなリンカーをジゴキシゲニンとNHSとの間、すなわちジゴキシゲニンとポリペプチド毒素との間に置いた。本明細書の残りの部分では、NLysPE25SQΔをPE25と名付ける。
ターゲティング媒体への毒素の共有結合的連結
PE25誘導体をジゴキシゲニン-カルボキシメチル-NHSエステルと反応させた(DE3836656, Metz et al.,前記)。次に、反応物をPD10カラムに通すことにより、小さな未反応化合物と反応生成物(NHS)とを、ジゴキシゲニン化25kDaポリペプチド毒素から分離した後、滅菌濾過した。抗体カップリングに先だって、ジゴキシゲニン化ポリペプチド毒素をDTEで還元し、次に再びPD10カラムに通すことによって、還元剤を除去した。次に、ジゴキシゲニン化ポリペプチド毒素を抗ジゴキシゲニン二重特異性抗体と共に、緩衝水溶液中、10〜30mg/ml(二重特異性抗体)の濃度で、室温で10分間インキュベートすることにより、二重特異性抗体とジゴキシゲニン化ポリペプチド毒素とを含有する複合体を生成させた。IgG-Fv融合物中の抗ジゴキシゲニン部分の二価性ゆえに、ジゴキシゲニン化ポリペプチド毒素を、2:1(ポリペプチド毒素対二重特異性抗体)のモル比で適用した。生成した複合体を(遊離毒素を全て除去するために)プロテインAクロマトグラフィーで精製した後、それ以上修飾することなく、分析およびアッセイに使用した。非還元SDS-PAGE分析および還元SDS-PAGE分析と、その後のウェスタンブロット分析による毒素部分の検出とにより(図22)、ジスルフィド連結二重特異性抗体ポリペプチド毒素複合体の形成が実証された。激しい変性条件下(SDS;煮沸)では、非還元条件において、毒素は、共有結合で連結された毒素を持つ重鎖に相当する高分子量バンドに現れる。したがって、毒素は安定であり、二重特異性抗体に共有結合で連結されている。還元条件下では、毒素は抗体から分離され、その小さな分子量に応じて移動する。このことは、ウェスタンブロット分析においてポリペプチド毒素を抗PE抗体と抗ジゴキシゲニン抗体で検出することによって実証することができた。これにより、安定二重特異性抗体とポリペプチド毒素との連結が、工学的に設計されたジスルフィドの特異的形成によることも確認される。ジゴキシゲニン結合性抗体部分と複合体化し安定にジスルフィド結合したジゴキシゲニン化-PE25、NCK-PE25およびNKC-PE25の構成要素の相対的サイズでのモデルおよび組成を図22Bおよび図22Cに示す。
共有結合的複合体媒介ポリペプチド毒素送達
ポリペプチド毒素を送達するための本明細書において報告する共有結合的コンジュゲートの機能性、特異性および効力を評価するために、MCF-7細胞を、二重特異性抗体とポリペプチド毒素との共有結合的コンジュゲートに曝露した。MCF7はその表面にLeY抗原を発現し、LeYに結合するPE由来のイムノトキシンに対して感受性である(Metz, S., et al.,前記参照)。これらの細胞の生存性および増殖を、代謝活性または細胞増殖を決定するアッセイによって評価した。これらはどちらも当業者には周知の方法である。毒素への曝露後の細胞の生存性を決定するために、細胞表面標的二重特異性抗体-ポリペプチド毒素コンジュゲートを添加した48時間後または72時間後に、Cell Titer Glo(CTG)アッセイを使って、細胞ATP含量(代謝活性を反映する)を決定した。増殖に対するポリペプチド毒素曝露の影響は、細胞表面標的二重特異性抗体-ポリペプチド毒素コンジュゲートを添加した48時間後または72時間後に、BrdU(ブロモデオキシウリジン)取り込み(すなわちDNA合成)アッセイによって測定した。全てのアッセイを96ウェルプレート中、サブコンフルエント培養で、三つ組で行った。図23に示すBrdUアッセイ結果は、MCF-7細胞をPE25誘導体を含有する細胞表面標的二重特異性抗体-ポリペプチド毒素コンジュゲートと共にインキュベートすると、増殖の著しい標的容量依存的低減が見られたことを実証している。
小胞コンパートメントにおける抗体とハプテン化ポリペプチドとの分離
本明細書において報告する共有結合的複合体は、抗ハプテン結合特異性を含む二重特異性細胞ターゲティング抗体(bsAb)によって、細胞に、そして細胞中に、送達されうる。一部のポリペプチドについては、これらの複合体が、細胞質または他の細胞内コンパートメントに進入することが必要である。それらには、例えばがん治療において適用される細胞傷害性実体などがある。細胞ターゲティングbsAbによって送達されるポリペプチドをターゲット細胞内で放出する必要がある場合もあるだろう。
Claims (12)
- ハプテン化ポリペプチド毒素と抗ハプテン抗体とを含むコンジュゲートであって、
ポリペプチド毒素がリジン残基でハプテンにコンジュゲートされており、
ハプテン化ポリペプチド毒素が抗ハプテン抗体にジスルフィド結合によってコンジュゲートされており、
ジスルフィド結合が、
i)ハプテンコンジュゲーションに使用されるリジン残基の1残基もしくは2残基前または1残基もしくは2残基後のいずれかにあるハプテン化ポリペプチド毒素のシステイン残基
と、
ii)該抗体のKabatに従って決定される重鎖CDR2中のシステイン残基
との間に形成されている、コンジュゲート。 - 前記抗体のCDR2中のシステイン残基のアルファ炭素原子が、ハプテンがコンジュゲートされているポリペプチドのリジン残基の原子(ハプテンは、ポリペプチドに直接コンジュゲートされているか、リンカーを介してコンジュゲートされている)から約10〜11オングストローム離れている、請求項1記載のコンジュゲート。
- システイン残基がリジン残基の2残基前または2残基後にある、請求項1〜2のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- リジン残基がポリペプチド毒素のN末端アミノ酸の10残基内にある、請求項1〜3のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- ポリペプチド毒素がそのアミノ酸配列内に厳密に1つのリジン残基を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- 前記抗体の重鎖CDR2中のシステイン残基が、Kabatの重鎖可変ドメインナンバリングに従う位置52bまたは位置53にある、請求項1〜5のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- 前記抗体が、非ハプテン抗原に対する第1結合特異性とハプテンに対する第2結合特異性とを含む二重特異性抗体である、請求項1〜6のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- 酸化還元活性作用物質を添加することなくジスルフィド結合が形成される、請求項1〜7のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- ハプテンが、ビオチン、またはテオフィリン、またはジゴキシゲニン、またはカルボラン、またはフルオレセイン、またはブロモデオキシウリジンである、請求項1〜8のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- 請求項1〜9のいずれか一項記載のコンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤。
- 医薬として使用するための、請求項1〜9のいずれか一項記載のコンジュゲート。
- 医薬が、がんを処置するための医薬である、請求項11記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14150085.0 | 2014-01-03 | ||
EP14150085 | 2014-01-03 | ||
PCT/EP2014/079354 WO2015101589A1 (en) | 2014-01-03 | 2014-12-29 | Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017505297A true JP2017505297A (ja) | 2017-02-16 |
JP6521464B2 JP6521464B2 (ja) | 2019-05-29 |
Family
ID=49876530
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016544450A Expired - Fee Related JP6521464B2 (ja) | 2014-01-03 | 2014-12-29 | 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10519249B2 (ja) |
EP (1) | EP3089759B1 (ja) |
JP (1) | JP6521464B2 (ja) |
KR (1) | KR102278429B1 (ja) |
CN (1) | CN105873616B (ja) |
BR (1) | BR112016014945A2 (ja) |
CA (1) | CA2930046A1 (ja) |
MX (1) | MX2016008191A (ja) |
RU (1) | RU2682754C2 (ja) |
WO (1) | WO2015101589A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2872192A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-biotin antibodies and methods of use |
CA2872184A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-theophylline antibodies and methods of use |
WO2014006124A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked antigen-antibody conjugates |
CN105873616B (zh) | 2014-01-03 | 2020-06-05 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 共价连接的多肽毒素-抗体缀合物 |
CA2933384A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles |
EP3089758B1 (en) | 2014-01-03 | 2021-01-27 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof |
EP3164419B1 (en) | 2014-06-26 | 2024-07-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-brdu antibodies and methods of use |
CN112410313A (zh) * | 2019-08-20 | 2021-02-26 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种高热稳定性尿酸酶及其应用 |
EP4380980A1 (en) | 2021-08-03 | 2024-06-12 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific antibodies and methods of use |
CN116236819B (zh) * | 2023-05-09 | 2023-08-04 | 成都佩德生物医药有限公司 | 一种批量纯化多肽毒素的方法及复合型双层层析柱 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004065569A2 (en) * | 2003-01-23 | 2004-08-05 | The Regents Of The University Of California | Multi-functional antibodies |
JP2012532162A (ja) * | 2009-07-06 | 2012-12-13 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 二重特異性抗体および治療剤または診断剤と結合体化したジゴキシゲニンの複合体 |
Family Cites Families (176)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4318980A (en) | 1978-04-10 | 1982-03-09 | Miles Laboratories, Inc. | Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label |
US4533493A (en) | 1981-08-27 | 1985-08-06 | Miles Laboratories, Inc. | Theophylline immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives |
US4524025A (en) | 1982-06-30 | 1985-06-18 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Hybridoma cell lines and monoclonal antibodies to theophylline |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5342606A (en) | 1984-10-18 | 1994-08-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions |
US5316757A (en) | 1984-10-18 | 1994-05-31 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Synthesis of polyazamacrocycles with more than one type of side-chain chelating groups |
US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
US4855226A (en) | 1985-06-07 | 1989-08-08 | Beckman Instruments, Inc. | Novel competitive assay for theophylline and reagent for use therein |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
US6881536B1 (en) | 1986-04-30 | 2005-04-19 | Bioveris Corporation | Particle based electrochemiluminescent assays |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2, Inc., Danville, Calif. | Geänderte antikörper. |
GB8706503D0 (en) | 1987-03-19 | 1987-04-23 | British Petroleum Co Plc | Aromatic hydrocarbons |
US5770701A (en) | 1987-10-30 | 1998-06-23 | American Cyanamid Company | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
US5606040A (en) | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
DE3836656A1 (de) | 1988-10-27 | 1990-05-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue digoxigenin-derivate und ihre verwendung |
WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
CA2026147C (en) | 1989-10-25 | 2006-02-07 | Ravi J. Chari | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
CA2045150A1 (en) | 1989-11-07 | 1991-05-08 | Walt W. Shuford | Oligomeric immunoglobulins |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
EP0547137A4 (en) | 1990-08-31 | 1993-12-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Homoconjugated immunoglobulins |
US5620686A (en) | 1990-09-28 | 1997-04-15 | British Technology Group Limited | Antigen-antibody conjugates |
ATE164395T1 (de) | 1990-12-03 | 1998-04-15 | Genentech Inc | Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
DE4118120A1 (de) | 1991-06-03 | 1992-12-10 | Behringwerke Ag | Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung |
US6511663B1 (en) | 1991-06-11 | 2003-01-28 | Celltech R&D Limited | Tri- and tetra-valent monospecific antigen-binding proteins |
EP1400536A1 (en) | 1991-06-14 | 2004-03-24 | Genentech Inc. | Method for making humanized antibodies |
GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
EP0861893A3 (en) | 1991-09-19 | 1999-11-10 | Genentech, Inc. | High level expression of immunoglobulin polypeptides |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
US5739294A (en) | 1991-12-10 | 1998-04-14 | The Dow Chemical Company | Bicyclopol yazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as contrast agents |
US5480990A (en) | 1991-12-10 | 1996-01-02 | The Dow Chemical Company | Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes for use as contrast agents |
US5428139A (en) | 1991-12-10 | 1995-06-27 | The Dow Chemical Company | Bicyclopolyazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as radiopharmaceuticals |
AU675929B2 (en) | 1992-02-06 | 1997-02-27 | Curis, Inc. | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
ZA932522B (en) | 1992-04-10 | 1993-12-20 | Res Dev Foundation | Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens |
WO1994011026A2 (en) | 1992-11-13 | 1994-05-26 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma |
US5635483A (en) | 1992-12-03 | 1997-06-03 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides |
US5780588A (en) | 1993-01-26 | 1998-07-14 | Arizona Board Of Regents | Elucidation and synthesis of selected pentapeptides |
US5385893A (en) | 1993-05-06 | 1995-01-31 | The Dow Chemical Company | Tricyclopolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents |
US5462725A (en) | 1993-05-06 | 1995-10-31 | The Dow Chemical Company | 2-pyridylmethylenepolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents |
WO1994029351A2 (en) | 1993-06-16 | 1994-12-22 | Celltech Limited | Antibodies |
US6476198B1 (en) | 1993-07-13 | 2002-11-05 | The Scripps Research Institute | Multispecific and multivalent antigen-binding polypeptide molecules |
WO1995009917A1 (en) | 1993-10-07 | 1995-04-13 | The Regents Of The University Of California | Genetically engineered bispecific tetravalent antibodies |
US5773001A (en) | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
EP0723551B1 (de) | 1994-07-25 | 2002-03-06 | Roche Diagnostics GmbH | Hapten-markierte peptide |
US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US5714586A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US5712374A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
KR100485240B1 (ko) | 1996-01-11 | 2006-10-24 | 테크니클론 인크. | 감소된순양전하를갖는항체 |
GB9603256D0 (en) | 1996-02-16 | 1996-04-17 | Wellcome Found | Antibodies |
US5834456A (en) | 1996-02-23 | 1998-11-10 | The Dow Chemical Company | Polyazamacrocyclofluoromonoalkylphosphonic acids, and their complexes, for use as contrast agents |
CA2288600C (en) | 1997-05-02 | 2010-06-01 | Genentech, Inc. | A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US6171586B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
PT994903E (pt) | 1997-06-24 | 2005-10-31 | Genentech Inc | Metodos e composicoes para glicoproteinas galactosiladas |
US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
EP1015480A2 (en) | 1997-08-18 | 2000-07-05 | Innogenetics N.V. | Interferon-gamma-binding molecules for treating septic shock, cachexia, immune diseases and skin disorders |
AU759779B2 (en) | 1997-10-31 | 2003-05-01 | Genentech Inc. | Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms |
US6610833B1 (en) | 1997-11-24 | 2003-08-26 | The Institute For Human Genetics And Biochemistry | Monoclonal human natural antibodies |
WO1999029888A1 (en) | 1997-12-05 | 1999-06-17 | The Scripps Research Institute | Humanization of murine antibody |
ES2532910T3 (es) | 1998-04-02 | 2015-04-01 | Genentech, Inc. | Variantes de anticuerpos y fragmentos de los mismos |
US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
DE69942021D1 (de) | 1998-04-20 | 2010-04-01 | Glycart Biotechnology Ag | Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität |
DE19819846B4 (de) | 1998-05-05 | 2016-11-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Multivalente Antikörper-Konstrukte |
US20040166115A1 (en) | 2002-11-15 | 2004-08-26 | Immunomedics, Inc. | Use of multi-specific, non-covalent complexes for targeted delivery of therapeutics |
JP2002527467A (ja) * | 1998-10-20 | 2002-08-27 | サルバトーレ・アルバーニ | 抗原特異的t細胞の単離、定量、特徴づけおよび調節方法 |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
PL209392B1 (pl) | 1999-01-15 | 2011-08-31 | Genentech Inc | Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała |
US6897044B1 (en) | 1999-01-28 | 2005-05-24 | Biogen Idec, Inc. | Production of tetravalent antibodies |
WO2000050088A2 (en) | 1999-02-22 | 2000-08-31 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Biotinylated-chemokine antibody complexes |
EP2278003B2 (en) | 1999-04-09 | 2020-08-05 | Kyowa Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
CA2385347C (en) | 1999-10-04 | 2009-12-15 | Medicago Inc. | Method for regulating transcription of foreign genes |
US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
JP4668498B2 (ja) | 1999-10-19 | 2011-04-13 | 協和発酵キリン株式会社 | ポリペプチドの製造方法 |
GB9926529D0 (en) | 1999-11-09 | 2000-01-12 | Ks Biomedix Ltd | Targeting agents |
US20030180714A1 (en) | 1999-12-15 | 2003-09-25 | Genentech, Inc. | Shotgun scanning |
NZ518764A (en) | 1999-12-29 | 2004-02-27 | Immunogen Inc | Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use |
AU4761601A (en) | 2000-04-11 | 2001-10-23 | Genentech Inc | Multivalent antibodies and uses therefor |
BR0114475A (pt) | 2000-10-06 | 2003-12-23 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Célula para a produção de composição de anticorpo |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US7064191B2 (en) | 2000-10-06 | 2006-06-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for purifying antibody |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
DE60131456T2 (de) | 2000-11-30 | 2008-07-10 | Medarex, Inc., Milpitas | Transchromosomale transgen-nagetiere zur herstellung von humanen antikörpern |
JP2005524379A (ja) | 2001-08-03 | 2005-08-18 | グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト | 抗体依存性細胞傷害性の増強を伴う抗体グリコシル化改変体 |
ES2276735T3 (es) | 2001-09-14 | 2007-07-01 | Affimed Therapeutics Ag | Anticuerpos fv multimericos de cadena sencilla en tandem. |
CN100423777C (zh) | 2001-10-25 | 2008-10-08 | 杰南技术公司 | 糖蛋白组合物 |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
US7691568B2 (en) | 2002-04-09 | 2010-04-06 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd | Antibody composition-containing medicament |
AU2003236019A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism |
EP1498490A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-11-29 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION |
WO2003085107A1 (fr) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cellules à génome modifié |
EP1500698B1 (en) | 2002-04-09 | 2011-03-30 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Cell with depression or deletion of the activity of protein participating in gdp-fucose transport |
EP1498491A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-12-13 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA |
JP4753578B2 (ja) | 2002-06-03 | 2011-08-24 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 合成抗体ファージライブラリー |
EP1551225A4 (en) * | 2002-06-10 | 2011-05-25 | Avax Technologies Inc | KRYOKONSERVATION OF HAPEN-MODIFIED TUMOR CELLS |
IN2008CN05409A (ja) * | 2002-07-18 | 2015-10-02 | Cytos Biotechnology Ag | |
US7361740B2 (en) | 2002-10-15 | 2008-04-22 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
ES2633311T3 (es) | 2002-12-16 | 2017-09-20 | Genentech, Inc. | Variantes de inmunoglobulina y usos de las mismas |
CA2510003A1 (en) | 2003-01-16 | 2004-08-05 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
US20050026263A1 (en) | 2003-07-31 | 2005-02-03 | The Regents Of The University Of California | Multi-functional antibodies |
US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
WO2004097372A2 (en) | 2003-04-28 | 2004-11-11 | The Regents Of The University Of California | Element-coded affinity tags |
AU2004252171B2 (en) | 2003-06-27 | 2011-04-21 | Biogen Ma Inc. | Modified binding molecules comprising connecting peptides |
EP1638510B1 (en) | 2003-07-01 | 2015-09-02 | Immunomedics, Inc. | Multivalent carriers of bi-specific antibodies |
AU2004279742A1 (en) | 2003-10-08 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Fused protein composition |
AU2004280065A1 (en) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase |
PL2380911T3 (pl) | 2003-11-05 | 2018-10-31 | Roche Glycart Ag | Cząsteczki wiążące antygen o zwiększonym powinowactwie wiązania z receptorem Fc oraz zwiększonej funkcji efektorowej |
ES2579836T3 (es) | 2003-11-06 | 2016-08-17 | Seattle Genetics, Inc. | Compuestos de monometilvalina capaces de conjugación con ligandos |
JPWO2005053742A1 (ja) | 2003-12-04 | 2007-06-28 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗体組成物を含有する医薬 |
BRPI0417744B8 (pt) | 2003-12-17 | 2021-05-25 | Wyeth Corp | método para produzir um conjugado imunogênico, e,conjugado imunogênico |
ZA200608130B (en) | 2004-03-31 | 2008-12-31 | Genentech Inc | Humanized anti-TGF-beta antibodies |
US7785903B2 (en) | 2004-04-09 | 2010-08-31 | Genentech, Inc. | Variable domain library and uses |
PT1737891E (pt) | 2004-04-13 | 2013-04-16 | Hoffmann La Roche | Anticorpos anti p-selectina |
EP1786918A4 (en) | 2004-07-17 | 2009-02-11 | Imclone Systems Inc | NEW BISPECIFIC ANTIBODY TETRAVALENT |
TWI380996B (zh) | 2004-09-17 | 2013-01-01 | Hoffmann La Roche | 抗ox40l抗體 |
US20100111856A1 (en) | 2004-09-23 | 2010-05-06 | Herman Gill | Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates |
CA2580141C (en) | 2004-09-23 | 2013-12-10 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
AU2006232287B2 (en) | 2005-03-31 | 2011-10-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association |
EP1874114A4 (en) | 2005-04-13 | 2011-05-11 | Garvan Inst Med Res | MODIFIED ANIMAL WITHOUT FUNCTIONAL PYY GENE, MONOCLONAL ANTIBODIES FIXING PYY ISOFORMS AND USES THEREOF |
SG2014010029A (en) | 2005-08-19 | 2014-08-28 | Abbott Lab | Dual variable domain immunoglobin and uses thereof |
US8679490B2 (en) | 2005-11-07 | 2014-03-25 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences |
US20070237764A1 (en) | 2005-12-02 | 2007-10-11 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
JP5000663B2 (ja) | 2005-12-07 | 2012-08-15 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 神経ペプチド2受容体アゴニスト |
EP1973950B1 (en) * | 2006-01-05 | 2014-09-17 | Genentech, Inc. | Anti-ephb4 antibodies and methods using the same |
GEP20135917B (en) | 2006-03-17 | 2013-09-10 | Biogen Idec Inc | Stabilized polypeptide compositions |
WO2007131242A2 (en) | 2006-05-05 | 2007-11-15 | The Regents Of The University Of California | Streptavidin-biotin-link antibody-hapten system |
CA2651567A1 (en) | 2006-05-09 | 2007-11-22 | Genentech, Inc. | Binding polypeptides with optimized scaffolds |
CA2661042C (en) | 2006-08-18 | 2012-12-11 | Armagen Technologies, Inc. | Agents for blood-brain barrier delivery |
DK2059533T3 (da) | 2006-08-30 | 2013-02-25 | Genentech Inc | Multispecifikke antistoffer |
AU2007329759B2 (en) | 2006-10-27 | 2013-05-30 | Lpath, Inc. | Compositions and methods for binding sphingosine-1-phosphate |
US20080226635A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-09-18 | Hans Koll | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
CN100592373C (zh) | 2007-05-25 | 2010-02-24 | 群康科技(深圳)有限公司 | 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法 |
BRPI0814479A2 (pt) | 2007-08-15 | 2016-07-12 | Yeda Res & Dev | "método para regular uma atividade de metaloproteinase 9 (mm9), método para identificar um agente capaz de regular especificamente a mmp-9, método de tratar a afecção clínica mediada pela mmp-9, molécula capaz de regular especificamente uma atividade da mmp-9, anticorpo humanizado e composição farmacêutica" |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
WO2009089004A1 (en) | 2008-01-07 | 2009-07-16 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
DE102008048796A1 (de) | 2008-09-24 | 2010-03-25 | Emitec Gesellschaft Für Emissionstechnologie Mbh | Abgasreinigungssystem für Dieselmotoren |
WO2010045388A2 (en) | 2008-10-14 | 2010-04-22 | Dyax Corp. | Use of mmp-9 and mmp-12 binding proteins for the treatment and prevention of systemic sclerosis |
WO2010056893A1 (en) | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Imclone Llc | Humanization and affinity-optimization of antibodies |
US7816856B2 (en) | 2009-02-25 | 2010-10-19 | Global Oled Technology Llc | Flexible oled display with chiplets |
KR101431318B1 (ko) | 2009-04-02 | 2014-08-20 | 로슈 글리카트 아게 | 전장 항체 및 단일쇄 fab 단편을 포함하는 다중특이성 항체 |
PT2417156E (pt) | 2009-04-07 | 2015-04-29 | Roche Glycart Ag | Anticorpos trivalentes, biespecíficos |
EP2419447B1 (en) | 2009-04-17 | 2017-08-23 | Immunas Pharma, Inc. | Antibodies that specifically bind to a beta oligomers and use thereof |
KR101431319B1 (ko) | 2009-05-27 | 2014-08-20 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 삼중특이성 또는 사중특이성 항체 |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
US8703132B2 (en) | 2009-06-18 | 2014-04-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific, tetravalent antigen binding proteins |
WO2011032022A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Improved pseudomonas exotoxin a with reduced immunogenicity |
CA3220104A1 (en) | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
NZ706751A (en) | 2010-11-30 | 2016-10-28 | Genentech Inc | Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor |
MX2013007559A (es) | 2011-01-03 | 2013-07-29 | Hoffmann La Roche | Composicion farmaceutica de complejo de anticuerpo anti-digoxigenina y digoxigenina que se conjuga a un peptido. |
WO2012143379A1 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Roche Glycart Ag | Method and constructs for the ph dependent passage of the blood-brain-barrier |
EA201491346A1 (ru) | 2012-01-10 | 2014-11-28 | Байоджен Айдек Ма Инк. | Усиление транспорта терапевтических молекул через гематоэнцефалический барьер |
CA2869529A1 (en) | 2012-05-24 | 2013-11-28 | Raffaella CASTOLDI | Multispecific antibodies |
WO2014006124A1 (en) * | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked antigen-antibody conjugates |
CA2872192A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-biotin antibodies and methods of use |
CA2872184A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-theophylline antibodies and methods of use |
CN105873616B (zh) | 2014-01-03 | 2020-06-05 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 共价连接的多肽毒素-抗体缀合物 |
CA2933384A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles |
EP3089758B1 (en) | 2014-01-03 | 2021-01-27 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof |
EP3164419B1 (en) | 2014-06-26 | 2024-07-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-brdu antibodies and methods of use |
-
2014
- 2014-12-29 CN CN201480072077.8A patent/CN105873616B/zh active Active
- 2014-12-29 KR KR1020167021314A patent/KR102278429B1/ko active IP Right Grant
- 2014-12-29 JP JP2016544450A patent/JP6521464B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-12-29 WO PCT/EP2014/079354 patent/WO2015101589A1/en active Application Filing
- 2014-12-29 EP EP14825155.6A patent/EP3089759B1/en not_active Not-in-force
- 2014-12-29 CA CA2930046A patent/CA2930046A1/en not_active Abandoned
- 2014-12-29 RU RU2016130108A patent/RU2682754C2/ru active
- 2014-12-29 MX MX2016008191A patent/MX2016008191A/es active IP Right Grant
- 2014-12-29 BR BR112016014945-9A patent/BR112016014945A2/pt active Search and Examination
-
2016
- 2016-07-01 US US15/200,629 patent/US10519249B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004065569A2 (en) * | 2003-01-23 | 2004-08-05 | The Regents Of The University Of California | Multi-functional antibodies |
JP2012532162A (ja) * | 2009-07-06 | 2012-12-13 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 二重特異性抗体および治療剤または診断剤と結合体化したジゴキシゲニンの複合体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2682754C2 (ru) | 2019-03-21 |
BR112016014945A2 (pt) | 2018-01-23 |
CA2930046A1 (en) | 2015-07-09 |
KR20160105880A (ko) | 2016-09-07 |
MX2016008191A (es) | 2017-11-16 |
US10519249B2 (en) | 2019-12-31 |
WO2015101589A1 (en) | 2015-07-09 |
US20170058051A1 (en) | 2017-03-02 |
JP6521464B2 (ja) | 2019-05-29 |
EP3089759A1 (en) | 2016-11-09 |
EP3089759B1 (en) | 2018-12-05 |
CN105873616A (zh) | 2016-08-17 |
CN105873616B (zh) | 2020-06-05 |
RU2016130108A (ru) | 2018-02-08 |
KR102278429B1 (ko) | 2021-07-16 |
RU2016130108A3 (ja) | 2018-08-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11273223B2 (en) | Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles | |
US12023378B2 (en) | Covalently linked antigen-antibody conjugates | |
US10407511B2 (en) | Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof | |
US10519249B2 (en) | Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171221 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20181031 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181127 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190417 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190419 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6521464 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |