JP2017060473A - 豚サーコウイルスに対してブタを免疫化するための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
a)ゲノムが配列番号1もしくは2のどちらかの核酸分子を含む、生/弱毒化、もしくは修飾された生PCV2B、
b)ゲノムが配列番号1もしくは2のどちらかの核酸分子を含む、死滅/不活化PCV2B、
c)PCV2B DNAワクチン(例えば、ゲノムが配列番号1もしくは2のどちらかの核酸分子を含むPCV2BのORF2を発現するプラスミドベクター)、または
d)ゲノムが配列番号1もしくは2のどちらかの核酸分子を含むPCV2BのORF2を発現する、不活化ウイルスベクター(例えば、バキュロウイルス、アデノウイルス、もしくはアライグマポックスウイルスなどのポックスウイルス、または大腸菌(E.coli)などの細菌)
の1つまたは複数を含み得る。
a)免疫原性上有効な量の、本明細書において記載される、配列番号1もしくは2のどちらかの核酸分子によりコードされる2型豚サーコウイルスの少なくとも1つ、
b)a)の2型豚サーコウイルスの少なくとも1つをコードする核酸分子、
c)免疫原性上有効な量の、a)の2型豚サーコウイルスの少なくとも1つから単離される少なくとも1つのタンパク質、または
d)免疫原性上有効な量の、c)の少なくとも1つのタンパク質をコードする少なくとも1つの核酸分子
のいずれか1つまたは複数を含む免疫原性上有効な量の組成物をブタに投与するステップを含む方法を提供する。
2B型豚サーコウイルスの毒性形態に曝露されたブタの1つまたは複数のリンパ組織または非リンパ組織における顕微鏡的病変の低減、
豚サーコウイルスの感染に関連するウイルス血症の低減、
1つまたは複数の組織における2A型または2B型核酸のレベルの低減
という臨床症状の1つまたは複数が改善することを提供する。
(I)哺乳動物に由来する組織試料におけるPCV2核酸または前記核酸によりコードされるタンパク質の量を測定するステップであって、前記PCV2核酸またはタンパク質が、
a)配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかを含む核酸またはそれらに由来する核酸、
b)配列番号3または4のどちらかを含むタンパク質、
c)配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかにハイブリダイズ可能な配列を含む核酸、または高いストリンジェンシー条件下でのそれらの相補体、または前記ハイブリダイズ可能な配列によりコードされる配列を含むタンパク質、
d)配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかに対して少なくとも95%相同な核酸、またはNBLASTアルゴリズムを用いて決定されるそれらの相補体、またはそれによりコードされるタンパク質
であるステップ、
(II)PMWSに罹患しているまたはそれを発症するリスクにあることが疑われる哺乳動物由来の組織試料における前記核酸またはタンパク質の量を、正常な哺乳動物由来の組織試料内に存在する核酸もしくはタンパク質の量、または正常な組織試料についてあらかじめ決定された標準と比較するステップであって、PMWSに罹患しているまたは罹患の疑いがある豚哺乳動物由来の組織試料における前記核酸またはタンパク質の量が、正常な組織試料における量または正常な組織試料についてあらかじめ決定された標準と比較して上昇すると、その哺乳動物がPMWSに罹患しているかまたはそれを発症するリスクにあることが示されるステップと
を含む方法を提供する。
(M.J.Gait編、1984);Nucleic Acid Hybridization(B.D.HamesおよびS.J.Higgins編、(1985));Transcription And Translation(B.D.HamesおよびS.J.Higgins編、(1984));Animal Cell Culture(R.I.Freshney編、(1986));Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press、(1986));B.Perbal、A Practical Guide To Molecular Cloning(1984);F.M.Ausubelら(編)、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons,Inc.(1994)を参照されたい。
本明細書において用いられる用語は、当業者に認識され知られている意味を有するが、利便性および完全性のため、特定の用語およびそれらの意味を以下に説明する。
ブタ産業に対する潜在的な影響のため、豚サーコウイルス2型(PCV2)の病原性形態に対するワクチンの開発は、最も重要なものである。非病原性PCV1は、PCV2の感染に対して使用が制限されると考えられている。
a)弱毒化形態もしくは不活化/死滅形態のいずれかの、免疫原性上有効な量の、本明細書において記載される2型豚サーコウイルスの少なくとも1つ、
b)a)の2型豚サーコウイルスの少なくとも1つをコードする核酸分子、
c)免疫原性上有効な量の、a)の2型豚サーコウイルスの少なくとも1つから単離される少なくとも1つのタンパク質、または
d)免疫原性上有効な量の、c)の少なくとも1つのタンパク質をコードする少なくとも1つの核酸分子
の1つまたは複数を含む、ワクチンまたは免疫原性組成物の使用を提供する。
本発明は、2つの新たな病原性PCV2B豚サーコウイルスの同定および単離を提供する。豚サーコウイルスの病原性株により生じるPMWSを予防するため、またはブタにおけるこの疾患に関連する少なくとも1つの症状を改善するために、ワクチンまたは免疫原性組成物をブタに投与する必要性があることを考慮すると、これらの2つの新たな株の少なくとも1つ、またはこれらの2つの新たな株をコードする核酸の少なくとも1つ、またはこれらの株の少なくとも1つから得られるタンパク質の少なくとも1つを、この疾患に対してブタを免疫化するためにブタに送達するための、ワクチンまたは免疫原性組成物に製剤し、それによりウイルス感染および離乳後多臓器消耗症候群(PMWS)に対するブタの防御を提供することが想定される。
本明細書において記載される、全長の2B型病原性豚サーコウイルスをコードする精製および単離された核酸分子は、配列番号1および2に示される。当技術分野において周知の従来の方法を用いて、例えば、当技術分野において認められている標準的なまたは高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション技術によって、相補鎖または高い相同性を有するヌクレオチド配列を作製することができる。PCV2のDNAの免疫原性カプシド遺伝子のDNA配列を含む、精製および単離された核酸分子は、配列番号5および6の1033〜1734番残基に示される。
本明細書において記載される病原性PCV2Bウイルスを含むワクチンまたは免疫原性組成物の調製、ならびに豚サーコウイルスの病原性株およびPMWSでの感染に対してブタを防御するためにそれらを用いる方法もまた、本発明の範囲内に含まれる。PCV2Bの新たな単離体を、死滅/不活化調製物として用い得ること、またはウイルス感染およびPMWSに対するブタの免疫化に用いるために弱毒化もしくは遺伝的に修飾し得ることが想定される。したがって、本発明は、本明細書において記載される2つの新たな病原性豚サーコウイルスの少なくとも1つ、またはこれらの2つのサーコウイルスの少なくとも1つをコードする少なくとも1つの核酸分子、またはこれらの2つのサーコウイルスの少なくとも1つから得られる少なくとも1つのタンパク質を含む、免疫原性上有効な量のワクチンまたは免疫原性組成物を用いて、病原性サーコウイルスでの感染またはPMWSに対してブタを免疫化する方法を提案する。本方法は、免疫原性上有効な量の本発明に従ったワクチン、例えば免疫原性量のPCV2B DNA、クローニングされたウイルス、PCV2BのDNAを含有するプラスミドまたはウイルスベクター、ポリペプチド発現産物などを含むワクチンなどをブタに投与することにより、ウイルス感染またはPMWSに対する防御が必要なブタを防御することができる。本明細書において記載されるワクチンは、例えばPRRSV、PPV、ならびに、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasma hyopneumoniae)、ヘモフィルス・パラスイス(Haemophilus parasuis)、パスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)、ブタ連鎖球菌(Streptococcum suis)、アクチノバチルス・プルロニューモニエ(Actinobacillus pleuropneumoniae)、気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptica)、ブタコレラ菌(Salmonella choleraesuis)、ブタ丹毒菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、レプトスピラ細菌、ブタインフルエンザウイルス、豚パルボウイルス、大腸菌(Escherichia coli)、豚呼吸器コロナウイルス、ロタウイルス、オーエスキー病の原因である病原体、およびブタ伝染性胃腸炎抗原の原因である病原体から選択される他の感染性ブタ作用物質を含む、他の豚病原菌に対する、第2または第3のワクチンまたは免疫原性組成物とともに投与することができる。特定の組み合わせには、PRRSVワクチンもしくは免疫原性組成物と組み合わせたPCVワクチンもしくは免疫原性組成物、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasma hyopneumoniae)ワクチンもしくは免疫原性組成物と組み合わせたPCVワクチンもしくは免疫原性組成物、または前述のワクチンもしくは免疫原性組成物の両方と組み合わせたPSVワクチンもしくは免疫原性組成物が含まれ得る。免疫刺激物質は、他のウイルスまたは細菌の感染に対する広範な防御範囲をもたらすために、同時にブタに与えることができる。
本発明は、配列番号1および2の核酸配列によってコードされる2つの新たな2B型豚サーコウイルス(PCV2B)の単離および同定を提供する。これらのPCV2Bの新たな株は、環境的に曝露されそれ自体ワクチンおよび免疫原性組成物の調製において用いるための理想的な候補であり得るブタから単離された。ワクチンまたは免疫原性組成物を調製するために、これらの株を死滅/不活化形態で用いること、またはこれらの2つの株の弱毒化形態を調製することは、本発明の目的である。これらを、アジュバントを伴ってまたは伴わずにブタの集団に送達して、PMWSを予防するかまたはこの疾患に関連する少なくとも1つの症状を改善することもまた、本発明の目的である。
豚サーコウイルスに対してブタをワクチン接種することの機能的な結果は、細胞性もしくは液性免疫の誘発またはT細胞活性をモニタリングする適切なアッセイによって評価することができる。これらのアッセイは当業者に知られているが、例えばクロム放出アッセイを用いる細胞溶解性T細胞の活性の測定を含み得る。あるいは、T細胞増殖アッセイは、免疫反応性またはその喪失の指標として用いることができる。さらに、インビボの研究を行って、本発明の方法を用いて病原体に対してワクチン接種された哺乳動物における防御のレベルを評価することができる。典型的なインビボでのアッセイは、本明細書において記載されるキメラ豚サーコウイルスなどの抗原で動物をワクチン接種することを伴い得る。通常は注射の約1週間から2週間である、抗体またはT細胞の応答の発生を誘発するために十分な時間にわたり待機した後、動物をいずれかのウイルスなどの抗原でチャレンジし、ウイルス感染に関連する1つもしくは複数の症状の改善または動物の生存をモニタリングする。豚サーコウイルスに対する成功裏のワクチン接種レジメンにより、またはワクチン接種されていない対照と比較して、ウイルス感染に関連する1つもしくは複数の症状の顕著な低減、またはウイルス血症の低減、またはウイルス感染に関連する病変の重症度の数の低減、または生存がもたらされる。血清もまた、当業者に知られている方法により測定される、ワクチン注射に応答して生じた抗体のレベルをモニタリングするために回収することができる。
新たに同定された2B型豚サーコウイルスが、ブタにおいて両方とも病原性である2A型または2B型サーコウイルスのいずれかでの感染に対して防御するためのワクチンまたは免疫原性組成物として有効であり得る可能性があり得る。2A型および2B型株は、制限断片長多型(RFLP)分析の使用を介して区別することができる。RFLPは、ゲル上で視覚化される特異的な切断パターンをもたらす、ウイルス核酸(部分的または全体)の酵素消化を用いる。酵素切断の部位でウイルス間に差異がある場合、異なるパターンが観察され得る。このフィンガープリンティング技術は、DNAウイルスに一般に用いられている。Mengら(米国特許公開第2005/0147966号)は、非病原性の1型豚サーコウイルスと病原性の2型豚サーコウイルスとの間を区別するための、NcoI制限酵素を用いたPCR−RFLPアッセイの使用を記載している。HinfI、HinP1I、KpnI、MseI、およびRsaI酵素を用いる、2000年に記載されたORF2ベースのPCR−RFLPアッセイは、PCV2単離体(PCV2A、B、C、D、およびE)間を区別することができる(Hamel AL、Lin LL、Sachvie C、Grudeski E、Nayar GP:PCR detection and characterization of type−2 porcine circovirus.Can J Vet Res.64:44〜52、2000)。
豚サーコウイルスの2つの新たな2B型株の単離および同定
ブタにおいて新たなワクチン製剤を試験して豚サーコウイルスおよびマイコプラズマ・ハイオニューモニエ(M.hyopneumoniae)に対するその有効性を評価するために、試験を計画した。試験の過程において、対照群およびワクチン接種群におけるブタの何頭かがPMWSの症状を示すことが観察された。そして、これらのブタがチャレンジの前に環境的PCV2に曝されたことが確認された。これらのブタ由来の血液および組織試料についての分子分析により、これらのブタが、チャレンジに用いた株とは異なる2B型株を有することが明らかにされた。さらに、配列分析により、FD07と称されるPCV2B株および農場のブタから単離された別の新たなPCV2B株(FDJEと称される)が、他の分野の研究において同定された他の2B型株および他者によってこれまでに同定されているもの由来の2B型株と異なることが立証された。PCV2Bのこれらの2つの新たな株の単離および特徴付けのための材料および方法を以下に記載する。
試験動物
雑種の雄および雌の従来のブタをこの試験に用いた。24頭のワクチン接種個体および24頭の対照個体を準備した。ブタはワクチン接種の時点で3週齢であった。
試料の回収
鼻のスワブ
鼻のスワブを、PCV2の単離のために、ワクチン接種後日数(DPV)0に回収し、ワクチン接種の前に試験動物においてPCV2感染がないことを確認した。鼻のスワブの試料を、ラクトアルブミン加水分解物(LAH)およびゲンタマイシン(60μg/ml)、ペニシリン(100U/mL)およびストレプトマイシン(100μg/ml)を有する3mLのMEMを含有する個別の無菌試験管内に置き、試験するまで−50℃以下で保管した。
ブタは、ELISA試験のためにDPV0、13、28、およびDPC−1、7、14、20に、ならびにPCR試験のためにDPV0、13、28、DPC−1、3、7、10、14、17、20に、血清試料のために採血した(10mLのみ)。
全ての動物を、DPC20/21に剖検した。3つのリンパ節(気管気管支、腸骨、および鼠径)、扁桃腺、ならびに脾臓から切片を回収し、組織病理学検査およびPCV2免疫組織化学(IHC)試験のためにホルマリンで固定した。
酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)
間接的なELISAを用いて、捕捉抗原として組換えPCV2カプシドタンパク質(バキュロウイルスにおいて発現する)を用いて血清試料における抗PCV2抗体を検出した。簡潔に述べると、96ウェルポリスチレンプレートを、陽性捕捉抗原(PCV2カプシドタンパク質を発現する組換えバキュロウイルスで感染させたSf9細胞)で被覆した。対照として、それぞれのプレート上の6個のウェルを、陰性捕捉抗原(SF9昆虫細胞)で被覆した。ブロッキング試薬でプレートを処理した後、プレートを試験血清試料および対照血清試料と共にインキュベートした。試験血清のそれぞれの試料を、陽性捕捉抗原で被覆した免疫プレートのウェル内に加えた(それぞれの試験試料当たり3個のウェル)。陽性の対照血清試料を、陽性捕捉抗原で被覆した免疫プレートの6個のウェル(陽性対照)および陰性捕捉抗原で被覆した免疫プレートの6個のウェル(陰性対照)に加えた。HRP結合ヤギ抗ブタ二次抗体をプレートに加えた。最後に、TMB(ペルオキシダーゼ基質)を加え、適切で一貫性のある時間にわたりインキュベートした。発色をELISAプレートリーダーで定量化した。ELISAプレートにおけるそれぞれの試薬を、明確に定義された様式でインキュベートし、それぞれの連続的なステップの前に、過剰な試薬を除去するために洗浄した。試験試料および陽性対照のODを、試験試料および陽性対照の平均ODから陰性対照の平均ODを差し引くことにより計算した。血清の力価はS/P(試料/陽性対照)の比率として、すなわち、陽性対照試料のODで割った試験試料のODとして表した。
PCV2特異的なPCR試験を用いて、血清試料におけるPCV2ウイルスのゲノムDNAの存在を検出した。ウイルスゲノムDNAは、QIAGEN MatAttractウイルスミニキットおよびQIAGEN BioRobot M48ワークステーションを用いて血清から精製した。PCV2特異的配列を検出するために、592bpの断片を、ABI AmpliTaq Gold DNAポリメラーゼ、ならびに遺伝子特異的プライマーであるF1PCV2、すなわち5’−ATGCCCAGCAAGAA GAATGG−3’(配列番号7)、およびRPCV2、すなわち5’−TGGTTTCCAGTATGT GGTTTCC−3’(配列番号8)を用いることによって増幅した。精製したウイルスDNAを鋳型として使用し、95℃で10分間変性した。PCRの反応プログラムは、35サイクルの、94℃で30秒間の変性、59℃で1分間のアニーリング、および72℃で1分間の伸長からなるものであった。PCR産物10μLを用いて、アガロースゲル電気泳動により592bpのPCV2のDNA断片を検出した。
脾臓、扁桃腺、ならびに3つ(気管気管支、腸骨、および鼠径)リンパ節の組織試料を、剖検の間にそれぞれの動物から回収し、10%中性緩衝ホルマリンにおいて2から4日間固定し、パラフィン内に包埋した。4マイクロメートルの切片をヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、組織病理学的評価のために光学顕微鏡下で検査した。
リンパ節、扁桃腺、および脾臓の組織におけるPCV2特異的な抗原を、免疫組織化学試験によって検出した。簡潔に述べると、組織の4マイクロメートルの切片をスライドガラス上に置き、キシレンで処理してパラフィンを除去した。脱パラフィンした切片は、PBSにおいて20分間、3%のH2O2を用いて内因性ペルオキシダーゼについて消光した。蒸留水ですすいだ後、切片を室温で一晩、PBSにおいて1:1000に希釈したウサギ抗PCV2ポリクローナル血清と共にインキュベートした。PBSですすいだ後、切片を、室温で30分間、ビオチニル化したヤギ抗ウサギIgGと共にインキュベートした。その後、切片を、ストレプトアビジンペルオキシダーゼコンジュゲートと共にインキュベートし、ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリド基質で「視覚化」した。PCV2抗原の量は、盲検の様式で、PCV2抗原染色のレベルに基づいて評価した。ランク付けされたスコアは、0は染色なし、1は低い染色レベル、2は中程度の染色レベル、3は高い染色レベルとして割り当てた。組織に対するIHCは、アイオワ州立大学獣医学部における家畜診断研究所(アイオワ州、エイムズ)で実施した。
ウイルスの単離
鼻のスワブを、PCV2の単離のために、ワクチン接種後日数(DPV)0に回収し、ワクチン接種の前に試験動物においてPCV2感染がないことを確認した。それぞれの試験動物の鼻のスワブからウイルスは単離されず、このことは、ワクチン接種の時点でこれらのブタが環境的PCV2感染に曝露していないことを示している。
毒性PCV2チャレンジ材料(株40895)の滴定結果を表1に示す。3回の滴定から得られるチャレンジウイルスの平均力価は4.6Log10FAID50/mLであった。
PCV2特異的抗体のELISAの結果を表2に示す。
ワクチン接種個体および対照個体の血清におけるPCV2特異的PCRによるPCV2ウイルス血症の検出を、表3Aに要約する。このPCV2特異的PCRは、従来の細胞培養方法よりも少なくとも1000倍感度が高い。
リンパ節、脾臓、および扁桃腺の組織を、リンパの枯渇について顕微鏡で検査した。顕微鏡的病変−リンパの枯渇の全結果を表4Aに要約する(スコア0〜3を有する動物の数)。
リンパ節、脾臓、および扁桃腺の組織を、濾胞の置換を伴う組織球性から肉芽腫性の炎症について顕微鏡で検査した。顕微鏡的病変−組織球性の置換の全結果を表5に要約する。
リンパ節、脾臓、および扁桃腺におけるIHC染色によるPCV2抗原の量の検出の結果を、表6に要約する(スコア0〜3を有する動物の数)。
個別のブタにおけるチャレンジ後の臨床徴候について毎日観察した結果を表7に示す。2頭の対照ブタ(#P108およびO162)を除くいずれのブタにおいても、臨床徴候は観察されなかった。
Claims (28)
- ゲノムが配列番号1もしくは2のどちらかの核酸分子を含むか、またはゲノムが配列番号1もしくは2のどちらかに対して少なくとも95%の配列相同性を有する核酸分子を含む、単離された豚サーコウイルス。
- ゲノムが配列番号1または2のどちらかの核酸分子を含む、請求項1に記載の単離された豚サーコウイルス。
- 2B型豚サーコウイルスである、請求項1または2に記載の単離された豚サーコウイルス。
- 配列番号3または4のどちらかに対して少なくとも92%の配列同一性を有するORF2タンパク質を有する、請求項3に記載の単離された豚サーコウイルス。
- ORF2タンパク質をコードする核酸が、配列番号5または6の1033〜1734番残基を含む、請求項2に記載の単離された豚サーコウイルス。
- 病原性2B型豚サーコウイルスをコードするか、または前記サーコウイルス由来の少なくとも1つのタンパク質をコードする、単離された核酸分子であって、配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかのヌクレオチド配列を含むか、または配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかに対して少なくとも95%の配列相同性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子。
- 配列番号1、2、5、または6のいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項6に記載の単離された核酸分子。
- ORF2タンパク質をコードする核酸が、配列番号5またはの1033〜1734番残基で見られる、請求項6または7に記載の単離された核酸分子。
- 配列番号3または4に示されるアミノ酸配列を有するORF2タンパク質をコードする、請求項8に記載の単離された核酸分子。
- 請求項1〜5のいずれかに記載の単離された豚サーコウイルスおよび薬学的に許容できるアジュバントを含む免疫原性組成物。
- 単離された豚サーコウイルスが弱毒化または不活化されている、請求項10に記載の免疫原性組成物。
- 少なくとも1つの他の微生物、またはそれに対する免疫応答が望まれる前記微生物から得られる抗原をさらに含む、請求項11に記載の免疫原性組成物。
- 他の微生物が、豚繁殖呼吸障害症候群ウイルス(PRRS)、豚パルボウイルス(PPV)、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasma hyopneumoniae)、ヘモフィルス・パラスイス(Haemophilus parasuis)、パスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)、ブタ連鎖球菌(Streptococcum suis)、アクチノバチルス・プルロニューモニエ(Actinobacillus pleuropneumoniae)、気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptica)、ブタコレラ菌(Salmonella choleraesuis)、ブタ丹毒菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、レプトスピラ細菌、ブタインフルエンザウイルス、大腸菌(Escherichia coli)抗原、豚呼吸器コロナウイルス、ロタウイルス、オーエスキー病の原因である病原体、ブタ伝染性胃腸炎の原因である病原体、および豚サーコウイルスの第2の異なる株からなる群から選択される、請求項12に記載の免疫原性組成物。
- 豚サーコウイルスの第2の異なる株が2A型または2B型サーコウイルスである、請求項13に記載の免疫原性組成物。
- 請求項6〜9のいずれかに記載の少なくとも1つの単離された核酸分子および薬学的に許容できるアジュバントを含む免疫原性組成物。
- それに対する免疫応答が望まれる少なくとも1つの他の微生物由来の少なくとも1つの抗原をコードする核酸分子をさらに含む、請求項15に記載の免疫原性組成物。
- 他の微生物が、豚繁殖呼吸障害症候群ウイルス(PRRS)、豚パルボウイルス(PPV)、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasma hyopneumoniae)、ヘモフィルス・パラスイス(Haemophilus parasuis)、パスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)、ブタ連鎖球菌(Streptococcum suis)、アクチノバチルス・プルロニューモニエ(Actinobacillus pleuropneumoniae)、気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptica)、ブタコレラ菌(Salmonella choleraesuis)、ブタ丹毒菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、レプトスピラ細菌、ブタインフルエンザウイルス、大腸菌(Escherichia coli)抗原、豚呼吸器コロナウイルス、ロタウイルス、オーエスキー病の原因である病原体、ブタ伝染性胃腸炎の原因である病原体、および豚サーコウイルスの第2の異なる株からなる群から選択される、請求項16に記載の免疫原性組成物。
- 豚サーコウイルスの第2の異なる株が2A型または2B型サーコウイルスである、請求項17に記載の免疫原性組成物。
- 皮下、筋肉内、鼻腔内、経皮、肝内に、またはリンパ内経路を介して、一回用量または複数用量で投与される、請求項10または15に記載の組成物。
- ウイルス感染もしくは離乳後多臓器消耗症候群(PMWS)に対してブタを免疫化する、またはPCV2の株により生じるブタの離乳後多臓器消耗症候群(PMWS)を予防するための方法であって、
a)免疫原性上有効な量の、請求項1〜5のいずれかに記載の2型豚サーコウイルス、
b)a)の2型豚サーコウイルスをコードする核酸分子、
c)免疫原性上有効な量の、請求項1〜5のいずれかに記載の2型豚サーコウイルスから単離される少なくとも1つのタンパク質、または
d)c)の少なくとも1つのタンパク質をコードする核酸分子
のいずれか1つまたは複数を含む免疫原性上有効な量の組成物をブタに投与するステップを含む方法。 - 2型豚サーコウイルスの免疫原性組成物を投与する前に、その投与と共に、またはその投与の後に、免疫原性上有効な量の第2の異なる免疫原性組成物を投与するステップをさらに含む、請求項20に記載の方法。
- 第2の異なる免疫原性組成物が、免疫原性上有効な量の、ブタに対して病原性である少なくとも1つの他の微生物、または前記微生物から得られる少なくとも1つの抗原、または前記抗原をコードする核酸分子を含み、前記微生物が、豚繁殖呼吸障害症候群ウイルス(PRRS)、豚パルボウイルス(PPV)、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasma hyopneumoniae)、ヘモフィルス・パラスイス(Haemophilus parasuis)、パスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)、ブタ連鎖球菌(Streptococcum suis)、アクチノバチルス・プルロニューモニエ(Actinobacillus pleuropneumoniae)、気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptica)、ブタコレラ菌(Salmonella choleraesuis)、ブタ丹毒菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、レプトスピラ細菌、ブタインフルエンザウイルス、大腸菌(Escherichia coli)抗原、豚呼吸器コロナウイルス、ロタウイルス、オーエスキー病の原因である病原体、ブタ伝染性胃腸炎の原因である病原体、および豚サーコウイルスの第2の異なる株からなる群から選択される、請求項21に記載の方法。
- 豚サーコウイルスの第2の異なる株が2A型または2B型サーコウイルスである、請求項22に記載の方法。
- 2A型または2B型豚サーコウイルスタンパク質をコードする少なくとも1つの外因性核酸分子を含むベクターであって、豚サーコウイルスタンパク質がORF2タンパク質であり、前記タンパク質をコードする外因性核酸分子が配列番号5または6の1033〜1734番残基に示されるベクター。
- アライグマポックスウイルスベクターである、請求項24に記載のベクター。
- ブタに対して病原性である微生物由来の抗原をコードする1つまたは複数の外因性核酸分子をさらに含み、前記微生物が、豚繁殖呼吸障害症候群ウイルス(PRRS)、豚パルボウイルス(PPV)、マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasma hyopneumoniae)、ヘモフィルス・パラスイス(Haemophilus parasuis)、パスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)、ブタ連鎖球菌(Streptococcum suis)、アクチノバチルス・プルロニューモニエ(Actinobacillus pleuropneumoniae)、気管支敗血症菌(Bordetella bronchiseptica)、ブタコレラ菌(Salmonella choleraesuis)、ブタ丹毒菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、レプトスピラ細菌、ブタインフルエンザウイルス、大腸菌(Escherichia coli)抗原、豚呼吸器コロナウイルス、ロタウイルス、オーエスキー病の原因である病原体、ブタ伝染性胃腸炎の原因である病原体、および豚サーコウイルスの第2の異なる株からなる群から選択される、請求項24または25に記載のベクター。
- 豚哺乳動物が離乳後多臓器消耗症候群(PMWS)に罹患しているかまたはそれを発症するリスクがあるかを決定する方法であって、
(I)哺乳動物に由来する組織試料におけるPCV2核酸または前記核酸によりコードされるタンパク質の量を測定するステップであって、前記PCV2核酸またはタンパク質が、
a)配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかに対応する核酸またはそれらに由来する核酸、
b)配列番号3または4のどちらかを含むタンパク質、
c)配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかにハイブリダイズ可能な配列を含む核酸、または高いストリンジェンシー条件下でのそれらの相補体、または前記ハイブリダイズ可能な配列によりコードされる配列を含むタンパク質、
d)配列番号1、2、5、もしくは6のいずれかに対して少なくとも95%相同な核酸、またはNBLASTアルゴリズムを用いて決定されるそれらの相補体、またはそれによりコードされるタンパク質
であるステップと、
(II)PMWSに罹患しているまたはそれを発症するリスクにあることが疑われる哺乳動物由来の組織試料における前記核酸またはタンパク質の量を、正常な哺乳動物由来の組織試料内に存在する核酸もしくはタンパク質の量、または正常な組織試料についてあらかじめ決定された標準と比較するステップであって、PMWSに罹患しているまたは罹患の疑いがある豚哺乳動物由来の組織試料における前記核酸またはタンパク質の量が、正常な組織試料における量または正常な組織試料についてあらかじめ決定された標準と比較して上昇すると、その哺乳動物がPMWSに罹患しているかまたはそれを発症するリスクにあることが示されるステップと
を含む方法。 - 組織試料が、浅鼠径リンパ節、気管気管支リンパ節、顎下腺リンパ節、肺、扁桃腺、脾臓、肝臓、腎臓、全血、および血液細胞からなる群から選択される、請求項27に記載の方法。
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