JP2017012001A - 微生物を植種した種菌及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

【課題】抗生物質の実生産場面において、実製造作業操作を効率化するとともに簡便化を行うことで、抗生物質の実生産性の向上を図ることを発明の課題とする。
【解決手段】前培養に用いる微生物（ストレプトマイセス属の菌、ＦＥＲＭ P−７７０５）を一旦、ある種の担体に植菌して種菌にすることにより、生産の度に行われる固形培地上での培養を省略することができ、また一定量の菌（数個）を自動的に接種、培養して種培養液を調製する簡便な方法を採用することにより、抗生物質の生産を効率的に行うことができる、植菌された種菌。及びその種菌を用いた生産及び使用方法。

【選択図】なし

Description

本発明は、微生物を植菌した種菌及びそれを使用する抗生物質の生産方法に関する。

ノシヘプタイドは含硫ポリペプチド系抗生物質であって動物の生長促進効果及び飼料効率の改善効果等を有しているため、動物用飼料添加物として市販されている。かかるノシヘプタイドの生産方法としては、ストレプトマイセス・アクツオスス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｃｔｕｏｓｕｓ）ＮＲＲＬ−２９５４、Ｕ−２２７株（ＦＥＲＭ P−７７０５）を培養することにより生産する方法が知られている（例えば、特許文献１及び２参照。）。

特公昭４０‐８８０号公報 特開昭６１‐２５４９５号公報

抗生物質の実生産場面では、先ず前培養工程として、固形培地上で抗生物質生産性菌を培養し、その一定量の菌数を小スケールの液体培地（種培養培地）に接種、培養して種培養液が調製される。次にこの種培養液を更に大きなスケールの生産用液体培地（本培養培地）に接種、培養して抗生物質を生産する。係る工程において、前培養では１〜２週間程度要する固形培地上での培養と一定量の菌数を接種して調製する種培養液の調製が重要であり、それがその後の抗生物質の生産性にも影響する。特に一定量の菌の採取は従来1白金耳を基準としたが、操作が煩雑で作業者の経験と感に頼るところも大きく、操作の簡便化が望まれていた。

本発明者等は、前記課題を解決すべく抗生物質生産性の効率化について鋭意研究を重ねた結果、前培養に用いる微生物を一旦、担体に植菌して種菌にすることにより、１．生産の度に行われる固形培地上での培養を省略し、２．一定量の菌（数個）を自動的に接種、培養して種培養液を調製する簡便な方法により生産の効率化に成功した。併せて当該種菌に加工することで、抗生物質生産性菌を長期に安定して冷凍保存できることも見出し、本発明を完成させた。

即ち、本発明は、
〔１〕ストレプトマイセス属の菌を、固体担体に植菌した種菌、
〔２〕固体担体が、米粒、小麦ふすま、又は大豆である〔１〕に記載の種菌、
〔３〕ストレプトマイセス属の菌が寄託番号、ＦＥＲＭ P−７７０５（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０１６９８）であることを特徴とする〔１〕及び〔２〕に記載の種菌、
〔４〕〔１〕乃至〔３〕のいずれかに記載の種菌の使用方法、
〔５〕〔１〕乃至〔４〕のいずれかに記載の種菌を使用するノシヘプタイドの生産方法、に関する。

本発明は、実生産をするたびに前培養工程として行われる１〜２週間程度要する固形培地での培養を省略し、かつ従来作業者の経験と感に頼ってきた種培養液調製のための菌接種を自動的に与えることができる簡便な方法により生産性の効率化を実現することができ、簡易であって、時間短縮、生産コストを低減するこれまでにないノシヘプタイドの生産方法に関する。

本発明における微生物としては、ストレプトマイセス属の菌類であって、例えば、Streptomyces actuosus、Streptomyces antibioticus、Streptomyces
glaucogriseusが挙げられ、好ましくは、Streptomyces actuosus
ＮＲＲＬ２９５４、又はStreptomyces actuosusＦＥＲＭ P−７７０５であり、更に好ましくはStreptomyces actuosus ＦＥＲＭ P−７７０５（受託番号：ＮＩＴＥ
ＢＰ−０１６９８）として、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に寄託された。）であり、これらを単独、又は２種以上組み合わせて使用することができる。

微生物を植菌する担体は、係る担体自体が、微生物生存のための栄養源となる固体状の物質であり、かつ微生物の生存に対して悪影響を与えないもの、あるいは微生物の生存には直接影響を与えないが、生存を保持し得る担体を意味し、例えば、米粒、小麦ふすま、大豆、もみ殻、米ぬか、麦芽根、おが屑、木材チップ、木材バーク、魚粉、古紙、ばかす粉砕物、デンプン、糖類、寒天等、生物に由来する可分解性の物質、可分解性の樹脂又はプラスチック等及びこれらの混合物、又は可分解性ではないが微生物の生存を保持しうる又は増殖を促進しうる物質、例えばプラスチック、樹脂等及びこれらの混合物、ならびに可分解性及び可分解性でない物質の混合物等が挙げられる。このうち好ましくは、米粒、小麦ふすま、又は大豆であり、更に好ましくは、米粒である。

本発明で使用する担体は、滅菌して使用するほうが好ましい。滅菌方法は、
洗浄後、オートクレーブで滅菌する等公知の方法に従って行えばよい。

植菌の方法としては、公知の方法で行うことができる。例えば、適当な担体に、微生物自体、微生物を培養した際の培養液を付着、添加、又は含浸させたり、担体自体で微生物を培養してもよい。さらに、担体に微生物を付着、含浸させてもよい。なお、付着、添加、含浸等の後に、任意に乾燥を行ってもよい。この際に使用する微生物は、個々に又は２種以上を併存させて、液体培養法、固相培養法等の当該分野で公知の種々の方法により、液体、固体、好気的及び嫌気的条件のいずれの条件下でも、用いる微生物の増殖に適した条件下で培養して使用することができる。

担体に植菌された本発明の種菌においては、1粒あたり、１０〜１０^１０個程度の微生物が植菌されていることが好ましい。

本発明の種菌の保存方法としては、水、流動パラフィン等で酸素の供給を遮断したり、凍結・乾燥により微生物の代謝活性を停止する方法が知られているが、冷凍庫保存が好ましい。

本発明の種菌の使用方法としては、発育培地に１〜３個の種菌を添加し一定期間培養後、得られた種培養液を生産用培地に添加し、その後培養すればよい。

以下に、本発明の実施例を示すが、本特許はこれらに限定されるものではない。

参考例１．担体（米粒）の調製法
米(５０ｇ)を水洗して一晩水浴させる。室温で乾燥後、１８ｇをフラスコに分注する。木灰(０.１５ｇ)を均一に塗し、オートクレーブ滅菌（１２０℃×２０分間）する。

実施例１．種菌の生産方法
Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ-Ｍａｌｔ
ｅｘｔｒａｃｔ（ＹＭＧ）寒天培地上で、Streptomyces actuosus ＦＥＲＭ P−７７０５（受託番号：受託番号：ＮＩＴＥ
ＢＰ−０１６９８として、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に寄託された。）を培養する（約1〜2週間）。かかる前培養菌株を1白金耳分取し、ＹＭＧ液体培地４０ｍＬを入れたフラスコに播種して２７℃で振盪培養する。３７〜４８時間後、菌体のペレットを集め、ペレットを１ｍＬ採取し、これを上記の米（フラスコ）に添加し、混合する。２７℃で７−１０日間培養し、米粒に植菌した種菌を得た。

実施例２．種菌を用いたノシヘプタイドの生産方法
前記実施例１で生産した種菌、２粒を用いて３０Ｌ発酵槽で培養しノシヘプタイドを得た。かかるノシヘプタイド産生量を第１表に示す。

実施例３．長期圃算した種菌を用いたノシヘプタイドの生産方法
長期冷凍保存したこめ種を使用し、前記実施例２の生産方法に従って、ノシヘプタイドを生産した。ノシヘプタイド産生量を第２表に示す。

製品力価とは、最終乾燥製品に含まれるノシヘプタイド重量を示すものである。

従来は生産にあたって、前培養行程で菌を固形培地上で約1〜2週間培養し、これを白金耳で採取して液体培地に接種してきた。種菌を使用することで固形培地での培養（約1〜2週間）が不要となり、しかも種菌には一定の菌量（菌数）が付着しているため、従来作業者の経験と感に頼って白金耳で菌を定量・採取してきたことをせずに、直接種菌をそのまま添加することで容易に培養を開始できるようになり、操作性が非常に簡略化された。また種菌は長期間冷凍保存することが可能であり、保存安定性に優れていることから利便性も高い。

Claims (5)

1. ストレプトマイセス属の菌を、固体担体に植菌した種菌。
2. 固体担体が、米粒、小麦ふすま、又は大豆である請求項１に記載の種菌。
3. ストレプトマイセス属の菌が寄託番号、ＦＥＲＭ P−７７０５（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ−０１６９８）であることを特徴とする請求項１及び２に記載の種菌。
4. 請求項１乃至３項のいずれか１項に記載の種菌の使用方法。
5. 請求項１乃至４項のいずれか１項に記載の種菌を使用するノシヘプタイドの生産方法、微生物を植種した種菌及びその使用方法。