JP2016532689A5 - - Google Patents
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Claims (31)
- 相補的な標識イメージャー鎖に一時的に結合することができるドッキング鎖に連結されたタンパク質を含むタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記ドッキング鎖が、前記相補的な標識イメージャー鎖に一時的に結合する、請求項1に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記タンパク質が、抗体、抗原結合抗体断片、又はペプチドアプタマーである、請求項1に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記タンパク質が、介在リンカーを介して前記ドッキング鎖に連結される、請求項1に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記介在リンカーが、ビオチン及びストレプトアビジンを含む、請求項4に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項3に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記相補的な標識イメージャー鎖が、相補的な蛍光標識イメージャー鎖である、請求項1に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記相補的な蛍光標識イメージャー鎖が、少なくとも1つのフルオロフォアを含む、請求項7に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記相補的な標識イメージャー鎖が、約4〜約30ヌクレオチドの長さである、請求項1に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記相補的な標識イメージャー鎖が、約8〜約10ヌクレオチドの長さである、請求項9に記載のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 請求項1に記載の少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲートに結合された標的。
- 前記標的がタンパク質である、請求項11に記載の標的。
- 請求項1に記載の複数のタンパク質−核酸コンジュゲート。
- 前記複数が前記タンパク質−核酸コンジュゲートの少なくとも2つのサブセットを含み、及び各サブセットの前記タンパク質−核酸コンジュゲートが異なる標的に結合する、請求項13に記載の複数。
- 少なくとも1つの前記タンパク質−核酸コンジュゲートが、少なくとも1つの標的に結合する、請求項13に記載の複数のタンパク質−核酸コンジュゲートを含む組成物。
- 組成物であって:
ドッキング鎖に連結されたタンパク質を含む少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲートであって、標的に結合する少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲート;及び
前記少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲートに一時的に結合する少なくとも1つの相補的な標識イメージャー鎖
を含む、組成物。 - サンプル中の標的を検出する方法であって:
サンプルを(a)ドッキング鎖に連結されたタンパク質を含む少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲート及び(b)前記少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲートの前記ドッキング鎖に相補的であり、かつ前記ドッキング鎖に一時的に結合する少なくとも1つの蛍光標識イメージャー鎖に接触させるステップ;及び
前記少なくとも1つのタンパク質−核酸コンジュゲートが、前記サンプル中の前記標的に結合するか否かを決定するステップ
を含む、方法。 - サンプルを(a)ドッキング鎖に連結されたタンパク質をそれぞれ含む少なくとも2つのタンパク質−核酸コンジュゲート及び(b)前記少なくとも2つの異なるタンパク質−核酸コンジュゲートのそれぞれのドッキング鎖に相補的であり、かつ前記ドッキング鎖に一時的に結合する少なくとも2つの標識イメージャー鎖に接触させるステップ;及び
前記少なくとも2つのタンパク質−核酸コンジュゲートが、前記サンプル中の少なくとも1つの標的に結合するか否かを決定するステップ
を含む、請求項17に記載の方法。 - サンプルが連続して(b)の少なくとも2つの標識イメージャー鎖と接触される、請求項17に記載の方法。
- 分子を検出する方法であって、
少なくとも1つの標的を含むサンプルを(a)ドッキング鎖に連結された結合パートナーをそれぞれ含む少なくとも1つのBP−NAコンジュゲート及び(b)前記少なくとも1つのBP−NAコンジュゲートの前記ドッキング鎖に相補的であり、かつ前記ドッキング鎖に一時的に結合する少なくとも1つの標識イメージャー鎖に接触させるステップ;及び
前記少なくとも1つのBP−NAコンジュゲートが、前記サンプル中の少なくとも1つの標的に結合するか否かを決定するステップ
を含む、方法。 - 少なくとも1つの標的を含むサンプルを(a)ドッキング鎖に連結された結合パートナーをそれぞれ含む少なくとも2つの異なるBP−NAコンジュゲート及び(b)前記少なくとも2つのBP−NAコンジュゲートのそれぞれのドッキング鎖に相補的であり、かつ前記ドッキング鎖に一時的に結合する少なくとも2つの標識イメージャー鎖に接触させるステップ;及び
前記少なくとも2つのBP−NAコンジュゲートが、前記サンプル中の少なくとも1つの標的に結合するか否かを決定するステップ
を含む、請求項20に記載の方法。 - 試験サンプル中の標的の数を決定する方法であって:
標識イメージャー鎖に直接又は間接的に一時的に結合する標的を含むサンプルを得るステップ;
前記サンプルのタイムラプス画像を得るステップ;
前記画像に対してスポット検出及び局在化を行って前記サンプルの高解像度画像を得るステップ;
kon・cimagerを較正するステップであって、konが二次会合定数であり、かつcimagerが前記試験サンプル中の標識イメージャー鎖の濃度である、ステップ;
変数τdを決定するステップ;及び
式、試験標的の数=(kon・cimager・τd)−1に基づいて、前記サンプル中の試験標的の数を決定するステップ
を含む、方法。 - 試験サンプル中の標的の相対量を決定する方法であって:
標識イメージャー鎖に直接又は間接的に一時的に結合する標的を含むサンプルを得るステップ;
前記サンプルのタイムラプス画像を得るステップ;
前記画像に対してスポット検出及び局在化を行って前記サンプルの高解像度画像を得るステップ;
変数τdを決定するステップ;及び
τdに基づいて、前記サンプル中の2つ以上の試験標的の相対量を決定するステップ
を含む、方法。 - 約4〜30ヌクレオチドの長さの少なくとも1つの標識イメージャー鎖に相補的な少なくとも1つのサブドメインを含むドッキングドメインに連結された約20ヌクレオチドの長さの標的結合ドメインを含む一本鎖DNAプローブであって、前記標的結合ドメインが、一本鎖mRNA標的鎖の相補的なドメインに結合する、一本鎖DNAプローブ。
- 複数の画像のドリフト補正を行う方法であって、前記複数の画像のそれぞれが、時系列の画像のフレームを含み、前記時系列の画像が、複数の一時的な事象を捉え、前記方法が:
前記複数の画像で特定された複数のドリフトマーカーのそれぞれの時間トレースを決定するステップであって、各ドリフトマーカーの時間トレースが、前記時系列の画像に対する前記画像における物体の動きに一致する、ステップ;
少なくとも1つのコンピュータプロセッサを用いて、前記複数のドリフトマーカーの少なくとも1つの時間トレースに少なくとも部分的に基づいて、前記複数のドリフトマーカーの前記少なくとも1つの第1のドリフト補正を決定するステップ;
前記複数の画像から特定された複数のドリフト鋳型の複数の幾何学的にアドレス可能なマーカー部位のそれぞれの時間トレースを決定するステップであって、前記複数のドリフト鋳型における各ドリフト鋳型が、前記ドリフト鋳型における一時的な事象の前記複数の幾何学的にアドレス可能なマーカー部位間の幾何学的な関係を示す、ステップ;
前記複数のドリフト鋳型の前記複数の幾何学的にアドレス可能なマーカー部位の時間トレースに少なくとも部分的に基づいて第2のドリフト補正を決定するステップ;
前記第1のドリフト補正及び前記第2のドリフト補正に少なくとも部分的に基づいて前記複数の画像を補正するステップ;及び
前記補正された複数の画像に基づいて最終画像を出力するステップ
を含む、方法。 - 前記ドリフトマーカーの少なくとも1つが、DNAベースのナノ構造である、請求項25に記載の方法。
- 前記DNAベースのナノ構造が、ドッキング鎖を備えるDNA折り紙ナノ構造である、請求項26に記載の方法。
- 前記ドリフト鋳型の少なくとも1つが、DNAベースのナノ構造である、請求項25に記載の方法。
- 前記DNAベースのナノ構造が、ドッキング鎖を備えるDNA折り紙ナノ構造である、請求項28に記載の方法。
- 前記ドリフト鋳型の少なくとも1つが、3次元ドリフト鋳型である、請求項25に記載の方法。
- 前記3次元ドリフト鋳型が4面体である、請求項30に記載の方法。
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