JP2016523934A - エルゴステロール系化合物、並びにその製造方法及び使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、エルゴステロール系化合物、並びにその製造方法及び用途を提供する。前記エルゴステロール系化合物は、分子式がＣ２８Ｈ４４Ｏ、分子量が３９６．３４、分子構造が（３Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（２Ｓ，５Ｒ，Ｅ）−５，６−ジメチルヘプト−３−エン−２−イル）−１０，１３−ジメチル−２，３，４，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタジエン［α］フェナントレン−３−オール）であり、全く新規な化学構造である。この分子の出所はサナギタケであり、この化合物及びその結晶は、サナギタケ子実体を粉砕、抽出濃縮、分離、結晶化して得られたものであり、効果の高い抗腫瘍作用を有し、全く新規な構造であり、抗腫瘍新薬を開発できる可能性がある。

Description

本発明は、サナギタケから分離抽出された化合物、並びにその製造方法及び使用に関するものであり、具体的には、全く新規な構造のエルゴステロール系化合物、並びにその製造方法及び使用に関する。

癌は、個体の各種発癌要因の作用の下で、局所組織の一つ又は複数の細胞が遺伝子レベルでその成長に対する正常な制御を失い、そのクローン性異常増殖により形成される腫瘍をもたらす、現在、ヒトの健康に対する危害が最も深刻な疾患の一つである。ＷＨＯの統計によれば、癌で死亡する患者は世界平均で年間に７００万人に達し、新しい発症は８００万例である。この数値は年々増加しており、２０２０年には、世界で毎年２０００万例の患者が新しく発生し、癌は既にヒトの健康に対する最大の脅威となっている。

現段階の癌治療の主な手段は、放射線療法及び化学療法であり、比較的良好な治療効果を有するが、骨髄抑制、免疫機能低下、脱毛、情緒不安定等の副作用を引き起こし、患者に治療を継続することが難しくなることがよくある。また、放射線療法及び化学療法の医薬品は、治療中に現れる薬剤耐性が、現在の臨床治療において一般に認められている難題の一つとなっている。そのため、治療効果が良好で、副作用が小さく、患者が受け入れやすい治療方法及び医薬品を探し求める必要がある。漢方薬は、リソースが広範で、価格が低廉であり、使用の歴史が長い等の長所のため、抗癌剤の研究で注目を集めている。

現在、既に多数の臨床研究によって、漢方薬が、癌患者のクオリティ・オブ・ライフを改善し、生存期間を延長し、癌細胞を安定させ、患者の免疫力を高める作用を有することが実証されている。また、漢方薬は、癌細胞の分化を誘導することによって、細胞のアポトーシスを促進し、免疫機能を調節し、癌細胞を直接殺傷し、癌細胞の生成を抑制し、癌細胞の多剤耐性を逆転させ、癌細胞の転移を防止する等、多種の経路で、癌の進展を有効に防ぐことができる。そのため、天然物から有効な抗腫瘍性物質を探し出すことが、現在、研究の大きな方向となっている。

本発明で解決しようとする技術的課題は、エルゴステロール系化合物を提供することである。

本発明で解決しようとするもう一つの技術的課題は、前記エルゴステロール系化合物の製造方法を提供することである。

本発明で解決しようとするもう一つの技術的課題は、前記エルゴステロール系化合物の使用を提供することである。

前記技術的課題を解決するための本発明の技術手法は次のとおりである。

分子式がＣ_２８Ｈ_４４Ｏ（略称；Ｃ３１０−６）、分子量３９６．３４であり、（３Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（２Ｓ，５Ｒ，Ｅ）−５，６−ジメチルヘプト−３−エン−２−イル）−１０，１３−ジメチル−２，３，４，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタジエン［α］フェナントレン−３−オール）、英語名：（３Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（２Ｓ，５Ｒ，Ｅ）−５，６−ｄｉｍｅｔｈｙｌｈｅｐｔ−３−ｅｎ−２−ｙｌ）−１０，１３−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，３，４，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ｄｏｄｅｃａｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａ［α］ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎ−３−ｏｌ）であり、化学構造式が図Ｉに示す通りである、エルゴステロール系化合物。

好ましくは、前記エルゴステロール系化合物は、図ＩＩに示すように、前記化合物のＣ−３、Ｃ−９、Ｃ−１０、Ｃ−２４キラル炭素原子Ｒ配置、Ｃ−１３、Ｃ−１４、Ｃ−１７、Ｃ−２０キラル炭素原子Ｓ配置である。

好ましくは、前記エルゴステロール系化合物は、サナギタケ子実体を粉砕、抽出濃縮、分離して得られる。

前記エルゴステロール系化合物の製造方法の具体的な工程は次の通りである。
（１）乾燥させたサナギタケ子実体を原料とし、超微粉砕して超微粉を得る。
（２）超微粉を熱水抽出し、遠心分離して、沈殿物を取り、１〜５回繰り返す。
（３）工程（２）で得られた沈殿物を、アセトン、エタノール、メタノールの組み合わせである有機試薬で浸漬抽出し、浸漬抽出した上澄を収集し、遠心分離し、上澄液を取り、濃縮、乾燥して、Ｃ３１０−６粗抽出物を得る。
（４）工程（３）で得られたＣ３１０−６粗抽出物を全て溶解させ、分取液体ＤＡＣ順相カラムで分離し、二元移動相系を用いて溶出分離する。前記移動相Ａ及び移動相Ｂは、ｎ−ヘキサン、酢酸エチルの組み合わせを用い、溶出方法は、６０分勾配溶出であり、検出波長は２６０ｎｍとする。標的ピークを収集し、乾燥後にＣ３−１０成分を得る。
（５）工程（４）で得られたＣ３−１０成分を取り、移動相（移動相Ａ若しくは移動相Ｂ又は両者の組み合わせ）を用いて全て溶解させ、分取液体ＤＡＣ順相カラムで分離し、二元移動相系を用いて溶出分離する。前記移動相Ａ及び移動相Ｂはｎ−ヘキサン、酢酸エチルの組み合わせを用い、溶出方法は１８０分勾配溶出であり、検出波長は２６０ｎｍとする。標的ピークを収集し、乾燥後に標的化合物（Ｃ３１０−６）を得る。

好ましくは、前記エルゴステロール系化合物の製造方法において、前記工程（２）の熱水抽出の温度が７０〜１００℃であり、熱水抽出時間が１〜２時間である。

好ましくは、前記エルゴステロール系化合物の製造方法において、前記工程（３）の沈殿物と有機試薬を、１：（３〜８）の重量体積比（Ｋｇ：Ｌ）で混合し、浸漬抽出する。

前記エルゴステロール系化合物を結晶化して得られ、単結晶構造が単斜晶系であり、結晶軸がａ＝９．８４８（２）、ｂ＝７．５５２９（１５）、ｃ＝３５．０７４（７）であり、結晶面角がα＝９０°、β＝９５．６２（３）°、λ＝９０°である、エルゴステロール系化合物結晶。

前記エルゴステロール系化合物結晶の製造方法の具体的な工程は次のとおりである。
（１）前記エルゴステロール系化合物（Ｃ３１０−６）を、１５０ｍｇ毎に良性溶媒３ｍｌを加え、１６℃の条件下に置き自然揮発させ、保温静止し、晶析し、溶液が１／３まで揮発したときに、底部の結晶をすくい取り、単結晶を得る。前記良性溶媒は、ｎ−ヘキサン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、エタノール、メタノールのうちの一種又は複数種の任意の割合の組み合わせである。
（２）得られた単結晶を吸引ろ過し、−２０℃のｎ−ヘキサンで洗浄して得る。

好ましくは、前記エルゴステロール系化合物結晶の製造方法の前記工程（２）で得られた生成物を洗浄した後、Ｘ線単結晶回折分析に直接用いる。

前記エルゴステロール系化合物及び／又はエルゴステロール系化合物結晶は、抗腫瘍薬の製造に用いる。

好ましくは、前記エルゴステロール系化合物及び／又はエルゴステロール系化合物結晶の用途は、前記腫瘍が肝癌、肺癌、乳癌、子宮癌又は腸癌である。

前記エルゴステロール系化合物及び／又はエルゴステロール系化合物結晶と、１種又は複数種の薬理学的に許容される賦形剤と、を含む、抗腫瘍作用を有する医薬品組成物。

前記薬理学的に許容される賦形剤は、医薬品製剤分野における通常の賦形剤とすることができ、特定の賦形剤の選択は、特定の患者を治療する投与方式又は疾患タイプ及び状態によって決まり、特定の投与方式に用いる適切な医薬品組成物の製造方法は、完全に医薬品分野の当業者の知識範囲内にある。例えば、薬理学的に許容される賦形剤として、薬学分野の通常の希釈剤、担体、充填剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、吸収促進剤、界面活性剤、吸着担体及び潤滑剤等があり、必要に応じて、医薬品組成物に更に香味剤、防腐剤及び甘味剤等を加えてもよい。

前記抗腫瘍作用を有する医薬品組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、懸濁液、シロップ、バッカル錠、舌下錠、注射剤、軟膏剤、坐剤、吸入剤等の多種の剤形に製造することができる。前記各種剤形の医薬品は、いずれも薬学分野の通常の方法で製造することができる。

本発明の有益な効果は次の通りである。

本発明のエルゴステロール系化合物及び／又はエルゴステロール系化合物結晶は、サナギタケ子実体中からの分離精製に成功した新規化合物であり、且つ純度は９９％に達し、この化合物は、性質が安定し、非常に顕著な抗癌活性を有し、その製造方法の工程は簡単で、再現性がよく、実用性が高く、大量生産に適している。

本発明のＣ３１０−６成分のＨＰＬＣ分析図である。 本発明のＣ３１０−６の電子衝撃マススペクトル（ＥＩ−ＭＳ）分析図である。 本発明のＣ３１０−６の赤外スペクトルである。 本発明のＣ３１０−６の核磁気共鳴分析図であり、（ａ）は１Ｄ１ＨＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３、６００ＭＨｚ）のデータ、（ｂ）は１Ｄ１３ＣＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３、１５０ＭＨｚ）のデータ、（ｃ）はＨＭＢＣデータ、（ｄ）はＤＥＰＴ １３５データである。 本発明のＣ３１０−６の単結晶構造の分子構造図である。 異なる濃度のＣ３１０−６がヒト肝癌細胞Ｈｅｐ−ｇ２の成長を抑制するリアルタイムデータモニター図である。 異なる濃度のＣ３１０−６がヒト肺癌細胞Ａ５４９の成長を抑制するリアルタイムデータモニター図である。 Ｃ３１０−６抗マウスＨ２２腫瘍実験におけるマウス平均腫瘍重量（ｇ）の概略図であり、図中、順に高用量群、中用量群、低用量群、ＣＴＸ群、モデル群である。 Ｃ３１０−６抗マウスＨ２２腫瘍実験におけるマウス平均肝臓重量（ｇ）の概略図であり、図中、順に高用量群、中用量群、低用量群、ＣＴＸ群、モデル群である。 Ｃ３１０−６抗マウスＨ２２腫瘍実験におけるマウス正味体重平均変化量（ｇ）の概略図であり、図中、順に、高用量群、中用量群、低用量群、ＣＴＸ群、モデル群、ブランク群である。 Ｃ３１０−６抗マウスＨ２２腫瘍実験における治療期間のマウス体重変化概略図である。 Ｃ３１０−６抗マウスＨ２２腫瘍実験における治療期間のマウス平均飲食量概略図である。 Ｃ３１０−６抗Ｌｅｗｉｓ腫瘍実験におけるマウス平均腫瘍重量（ｇ）概略図であり、図中、順に高用量群、中用量群、低用量群、ＣＴＸ群、モデル群である。 Ｃ３１０−６抗Ｌｅｗｉｓ腫瘍実験におけるマウス平均肺重量（ｇ）概略図であり、図中、順に高用量群、中用量群、低用量群、ＣＴＸ群、モデル群である。 Ｃ３１０−６抗Ｌｅｗｉｓ腫瘍実験におけるマウス正味体重平均変化量（ｇ）概略図であり、図中、順に高用量群、中用量群、低用量群、ＣＴＸ群、モデル群、ブランク群である。 Ｃ３１０−６抗Ｌｅｗｉｓ腫瘍実験における治療期間のマウス体重変化状況概略図である。 Ｃ３１０−６抗Ｌｅｗｉｓ腫瘍実験における治療期間のマウス平均飲食量概略図である。 実施例８におけるＤＡＣ ５０順相クロマトグラフィー分離図であり、横座標は採取時間（ｍｉｎ）、縦座標は信号強度（ＭＶ）、曲線はクロマトグラフィー曲線、折れ線は移動相配合濃度である。 実施例８におけるＤＡＣ １５０順相クロマトグラフィー分離図であり、横座標は採取時間（ｍｉｎ）、縦座標は信号強度（ＭＶ）、曲線はクロマトグラフィー曲線、折れ線は移動相配合濃度である。 実施例９におけるＤＡＣ １５０順相クロマトグラフィー分離図であり、横座標は採取時間（ｍｉｎ）、縦座標は信号強度（ＭＶ）、曲線はクロマトグラフィー曲線、折れ線は移動相配合濃度である。

当業者が本発明の技術手法をよりよく理解できるようにするため、次に、図面及び具体的な実施形態を合わせて、本発明の技術手法について更に詳細に説明する。別段の説明がある場合を除き、本発明で用いる全ての科学用語及び技術用語は、当業者が通常理解するものと同じ意味を有する。

用いる実験材料は、正源堂（天津）生物科技有限公司より購入したサナギタケ子実体、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）より購入したヒト肝癌細胞Ｈｅｐ−ｇ２、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）より購入したヒト肺癌細胞Ａ５４９、中国培養細胞系統保存機関より購入したＨ２２肝癌腫瘍株（第４継代）、中国培養細胞系統保存機関より購入したｌｅｗｉｓ肺癌腫瘍株（第６継代）、北京バイタル・リバー実験動物技術有限公司より購入したＫＭマウス（１８〜２２ｇ）（動物許可証番号：ＳＣＸＫ（京）２０１２−０００１、合格証番号：１１４００７０００２０７７９）、北京バイタル・リバー実験動物技術有限公司より購入したＣ５７ＢＬ／６マウス（１８−２２ｇ）（動物許可証番号：ＳＣＸＫ（京）２０１２−０００１、合格証番号：１１４００７０００２０７７９）を含む。

用いる実験試薬は、天津コンコルド・テクノロジー有限公司より購入したクロマトグラフィー用ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、エタノール、ジクロロメタン、メタノール、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより購入したＦ−１２Ｋ培地、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより購入したＭＥＭ培地、天津金世製薬有限公司より購入したシクロホスファミド錠、北京博潤莱特科技有限公司が小分けしたツイーン８０を含む。

用いる実験機器設備は、山東三清ステンレス設備有限公司より購入した超微粉砕機、Ｔｈｅｒｍｏ社より購入したベンチトップ型冷凍遠心分離機、上海順儀実験設備有限公司より購入した３０リットル漢方薬抽出タンク、上海一恒科学機器有限公司より購入した恒温送風乾燥器、上海亜容生化機器廠より購入したロータリーエバポレーター、江蘇漢邦科技有限公司より購入したＤＡＣ ５０順相カラム、ＤＡＣ １５０順相カラム、北京振翔工貿有限責任公司より購入したＫｒｏｍａｓｉｌ順相カラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ、１００A）、ＡＣＥＡバイオサイエンス（杭州）有限公司より購入したｉＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイム・ラベルフリー細胞アナライザー、天美（中国）科学機器有限公司より購入した日立高速液体クロマトグラフ、日本株式会社理学公司より購入した単結晶Ｘ線回折装置を含む。

実施例１
エルゴステロール系化合物（Ｃ３１０−６）の製造

一．Ｃ３１０−６粗抽出物の取得
１．超微粉砕：
乾燥したサナギタケ子実体を原料とし、超微粉砕機に投入して超微粉砕を行い、粉砕の全過程で、超微破砕機内部冷却液として５℃の水を用いた。超微粉砕の時間は２０分とし、超微粉を得た。

２．熱水抽出：
超微粉に対して熱水抽出を行い、３回連続で抽出し、１回の熱水抽出時間は７０分（１００度まで加熱し、水を４０分沸騰させた後、３０分加熱を継続）とした。具体的には次のとおりである。

第１回熱水抽出：超微粉３ｋｇを超純水２４Ｌに加え、材料液が均一になり明らかな塊状物がなくなるまで充分に撹拌し、３０リットル漢方薬抽出タンクで７０分熱水抽出し、熱水抽出の終了後、１Ｌ遠沈管に小分けして平衡化し、室温まで冷却した後、２５℃、６０００ｒｐｍで３０ｍｉｎ遠心分離し、沈殿物を収集した。

第２回熱水抽出：第１回熱水抽出の沈殿物を超純水１２Ｌに加え、材料液が均一になり明らかな塊状物がなくなるまで充分に撹拌し、３０リットル漢方薬抽出タンクで７０ｍｉｎ熱水抽出し、熱水抽出の終了後、第１回熱水抽出の方法で処理し、沈殿物を収集した。

第３回熱水抽出：第２回熱水抽出の沈殿物を超純水９Ｌに加え、材料液が均一になり明らかな塊状物がなくなるまで充分に撹拌し、３０リットル漢方薬抽出タンクで７０分熱水抽出し、熱水抽出の終了後、第１回熱水抽出の方法で処理し、沈殿物を収集した。沈殿物を６０℃恒温送風乾燥器に移して乾燥させた後、真空乾燥した。

３．有機試薬抽出：
乾燥した沈殿物を、粉砕機で粉砕し、１：５（ｗ／ｖ）で有機試薬を加えた。有機試薬は、５０％のアセトン−エタノール溶液とした。充分に撹拌して均一に混ぜ、食品用ラップフィルムで口を封じ、一晩浸漬抽出し、上澄液を収集した。上澄液を６０００ｒｐｍで３０ｍｉｎ遠心分離し、上澄を収集した。上澄をロータリーエバポレーターで濃縮した後、６０℃恒温送風乾燥器に移して乾燥させ、Ｃ３１０−６粗抽出物を得た。

二．Ｃ３１０−６中間物の取得
１．ＤＡＣ ５０実験：
Ｃ３１０−６粗抽出物を移動相で完全に溶解させ、５０ｍｇ／ｍＬの溶液に調製し、液体ＤＡＣ ５０順相カラム（２５０ｍｍ×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Å）を作製して分離した。検出波長は２６０ｎｍとし、Ａ、Ｂ二元移動相系を用いて溶出分離した。移動相Ａ及び移動相Ｂは、それぞれｎ−ヘキサン及び酢酸エチルとし、溶出方法は、１００％ｎ−ヘキサン-１００％酢酸エチル６０分勾配溶出であり、流速は８０ｍＬ／ｍｉｎとし、試料注入量２０ｍＬとした。クロマトグラムは、図１８を参照。図１８における第１０号ピークを収集し、乾燥させた後、Ｃ３１０−６中間物成分を得た。

２．ＤＡＣ １５０まで拡大する：
Ｃ３１０−６粗抽出物を移動相で完全に溶解させ、５０ｍｇ／ｍＬの溶液に調製し、分取液体ＤＡＣ １５０順相カラム（２５０ｍｍ×１５０ｍｍ、１０μｍ、１００Å）で分離した。検出波長は２６０ｎｍとし、Ａ、Ｂ二元移動相系を用いて溶出分離した。移動相Ａ及び移動相Ｂは、それぞれｎ−ヘキサン及び酢酸エチルとし、溶出方法は、１００％ｎ−ヘキサン-１００％酢酸エチル６０分勾配溶出であり、流速は７００ｍＬ／ｍｉｎとし、試料注入量１８０ｍＬとした。クロマトグラムは、図１９を参照。図１９における第１０号ピークを収集し、乾燥させた後、Ｃ３１０−６中間物成分を得た。

三．Ｃ３１０−６の取得
Ｃ３１０−６中間物成分を移動相で完全に溶解させ、３３ｍｇ／ｍＬの溶液に調製し、分取液体ＤＡＣ １５０順相カラム（２５０ｍｍ×１５０ｍｍ、１０μｍ、１００Å）で分離した。検出波長は２６０ｎｍとし、Ａ、Ｂ二元移動相系を用いて溶出分離した。移動相Ａ及び移動相Ｂは、ｎ−ヘキサン及び酢酸エチルの組み合わせを用い、溶出方法は、１００％ｎ−ヘキサン-１００％酢酸エチル１８０分勾配溶出であり、流速は７００ｍＬ／ｍｉｎとし、試料注入量３００ｍＬとした。クロマトグラムは、図２０を参照。図２０における第６号ピークを収集し、乾燥させた後、成分Ｃ３１０−６を得た。７．２ｇと秤量した。

また、実施例１の具体的な操作を参照し、明細書の技術手法の部分のエルゴステロール系化合物の製造方法及び公知の常識により製造しても、当業者は同様にエルゴステロール系化合物（Ｃ３１０−６）を取得することができる。

実施例２
エルゴステロール系化合物（Ｃ３１０−６）結晶の製造

実施例１で得られたエルゴステロール系化合物Ｃ３１０−６を１５０ｍｇ秤取し、３ｍｌの良性溶媒を加えた。良性溶媒は５０％ｎ−ヘキサン−テトラヒドロフラン溶液とした。１６℃の条件下に置き自然揮発させ、保温静止し、晶析し、溶液が１／３まで揮発したときに、底部の結晶をすくい取り、単結晶を得た。得られた単結晶を吸引ろ過し、−２０℃のｎ−ヘキサンで洗浄し、洗浄後、ステロール系化合物（３Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（２Ｓ，５Ｒ，Ｅ）−５，６−ジメチルヘプト−３−エン−２−イル）−１０，１３−ジメチル−２，３，４，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタジエン［α］フェナントレン−３−オール）の単結晶をＸ線単結晶回折分析に直接用いた。

また、実施例２の具体的な操作を参照し、明細書の技術手法の部分のエルゴステロール系化合物結晶の製造方法及び公知の常識により製造しても、当業者は同様にエルゴステロール系化合物（Ｃ３１０−６）結晶を取得することができる。

実施例３
Ｃ３１０−６構造の確認

１．ＨＰＬＣによる純度分析：
Ｃ３１０−６成分を５０％のｎ−ヘキサン−エタノール溶液で全て溶解させ、５ｍｇ／ｍＬの溶液に調製し、ＨＰＬＣで純度分析を行った。Ｋｒｏｍａｓｉｌ順相カラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ、５μｍ、１００Å）、検出波長２６０ｎｍで、検出条件は、移動相がｎ−ヘキサン及びエタノールであり、１００％ｎ−ヘキサン-１００％エタノールで３０分勾配溶出し、流速は１ｍＬ／分とし、試料注入量：２０μＬ、温度３０℃で、高速液体検出純度は９９％に達した。ＨＰＬＣクロマトグラムは図１を参照。

２．マススペクトル分析：
Ｃ３１０−６に対して電子衝撃マススペクトル（ＥＩ−ＭＳ）分析を行った。Ｖａｒｉａｎ ４５０−ＧＣ、瀚盟生物技術（天津）有限公司、ｍ／ｚ；３９６．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。分子式はＣ_２８Ｈ_４４Ｏを示した。マススペクトルは図２を参照。

３．赤外スペクトル（ＩＲ）分析：
Ｃ３１０−６に対して赤外スペクトル分析を行った。フーリエ変換赤外分光光度計，瀚盟生物技術（天津）有限公司、ｃｍ^−１：３８４１．３、３７５２．９２、３７３６．８５、３４３５．２７、３０４２．７、２９５４．６６、２８７０．８４、２７９６．６３、２３４６．４９、１６５５．０１、１４５８．９２、１３８２．５９、１３６９．２６、１３２５．７１、１２３９．８９、１１９２．４９、１１５８．４、１１１１．３２、１０５５．９３、１０３８．９１、９８３．２３、９６８．０７、９４６．８５、９３５．０１、８７３．５、８３４．１９、８０２．１１、６１５．４６、６０３．４。赤外スペクトルは図３を参照。

４．核磁気共鳴分析：
Ｃ３１０−６に対して、それぞれＢｒｕｋｅｒ Ａ．Ｇ ＡＶＩＩＩ ６００ＰＬＵＳ、瀚盟生物技術（天津）有限公司を行った。核磁気共鳴スペクトルは図４に示す通りであった。^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ、ＨＭＢＣスペクトルに基づき得られたＣ３１０−６のＮＭＲデータは、表１に示す通りであった。

５．結晶構造の測定：
Ｃ３１０−６を洗浄後に乾燥してＸ線単結晶回折装置分析に直接用いた。Ｘ線単結晶回折装置は、天津大学−国家工業結晶工程技術研究センターが提供した。実施例４の寸法が０．２５×０．２０×０．１５ｍｍのステロール系化合物、すなわち、（３Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（２Ｓ，５Ｒ，Ｅ）−５，６−ジメチルヘプト−３−エン−２−イル）−１０，１３−ジメチル−２，３，４，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタジエン［α］フェナントレン−３−オール）の単結晶を単結晶Ｘ線回折装置に取り、黒鉛単色化Ｍｏ−Ｋα線（λ＝０．７１０７３ Ａ）を用いてω−θ走査方式で３．２２°≦２θ≦２５．５０°範囲内で２１３８７個の回折データを収集し、そのうち独立回折点９０８２個（Ｒ（ｉｎｔ）＝０．１１５０）であった。収集したデータを、Ｌｐ因子及び経験で吸収補正した。直接法を用いて、数回のフーリエ合成を経て、全ての水素原子を探し出した。全ての水素原子の座標は、幾何水素添加法を用いて得られた。全ての非水素原子の座標及びその各項の異性温度因子は、完全行列最小二乗法を用いて修飾した。全ての構造計算作業は、ＳＨＥＬＸ−９７プログラムを用いて行い、これによりＣ３１０−６の分子構造がＣ_２８Ｈ_４４Ｏであることが得られた。具体的なデータは、以下の表２〜表４に記載の通りであり、構造図は図５に示す通りである。

実施例４
新規化合物Ｃ３１０−６の細胞活性実験

（一）ヒト肝癌細胞Ｈｅｐ−ｇ２実験：
１．ＡＣＥＡバイオサイエンス（杭州）有限公司製の８ウェル型プレート（Ｅ−Ｐｌａｔｅ Ｌ８）をｉＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイムラベルフリー細胞アナライザーと組み合わせ、各ウェルに１５０ｕｌの完全Ｆ−１２Ｋ培地を加え、３７℃、５％ＣＯ_２の培養器に置き、背景データを４０〜１３０の間に調整した。実施例１の化合物Ｃ３１０−６をジメチルスルホキシドで１００ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、１２．５ｍｇ／ｍｌ、６．３ｍｇ／ｍｌ、３．１ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌに完全に溶解し、更に完全Ｆ−１２Ｋ培地で１０ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、１．２５ｍｇ／ｍｌ、０．６３ｍｇ／ｍｌ、０．３１ｍｇ／ｍｌ、０．１６ｍｇ／ｍｌ作業液に希釈し、培養したヒト肝癌細胞Ｈｅｐ−ｇ２をパンクレアチンで消化し、４×１０^４／ｍｌの活細胞懸濁液に希釈し、８ウェル型プレートに接種し、各ウェル３４５ｕｌとし、Ｃ３１０−６溶液５ｕｌを加え、最終濃度を１００μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、６．３μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌにし、対照ウェルに５ｕｌの１‰ジメチルスルホキシドの完全Ｆ−１２Ｋ培地を加え、３７℃、５％ＣＯ_２の培地に置いて４８時間培養した。

具体的な薬の添加方法は表５に示すとおりである。

異なる濃度のＣ３１０−６でヒト肝癌細胞Ｈｅｐ−ｇ２の成長を抑制するリアルタイムデータ（４８時間）は図６に示す通りである。

２．ＭＴＴ法
ａ．５０ｍｌ、０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ＰＨ＝７．４５のＰＢＳでＭＴＴ２５０ｍｇを溶解し、最終濃度５ｍｇ／ｍｌとし、ろ過除菌し、小分けした後−２０℃で遮光保存した。
ｂ．単細胞株懸濁液を調製し、９６ウェル型プレートに接種し、Ｆ−１２Ｋ基礎培地で細胞を４×１０^４／ｍｌまで希釈し、各ウェルに希釈した細胞を１００ｕｌ加え、３７℃、５％ＣＯ_２で、飽和温度で２０時間培養し、各群４個の複製試料とした。
ｃ．培地を除去し、新しく調製した培地を除去し、一連の濃度で抗癌剤（Ｃ３１０−６）を調製し、溶解し、各ウェル１００ｕｌとし、４８時間培養した。
ｄ．各ウェルに５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ ２０ｕｌを加え、４時間培養した。
ｅ．ウェル内の培地を吸い出し（できる限り完全に）、ＤＭＳＯ溶液（１５０ｕｌ／ウェル）を加え、１０分間振とうし、結晶物を十分に溶解した。
ｆ．マイクロプレートリーダーで各ウェルのＯＤ値を検出し、λ＝４９０ｎｍであった。
ｇ．細胞増殖曲線図を作成し、ＩＣ_５０値１４．１５２μｇ／ｍｌが求められた。このことは、この化合物が非常に良好な抗ヒト肝癌Ｈｅｐ−ｇ２の活性を有することを示している。

（二）ヒト肺癌細胞Ａ５４９実験：
１．ＡＣＥＡバイオサイエンス（杭州）有限公司製の８ウェル型プレート（Ｅ−Ｐｌａｔｅ Ｌ８）をｉＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅリアルタイムラベルフリー細胞アナライザーと組み合わせ、各ウェルに１５０ｕｌの完全ＭＥＭ培地を加え、３７℃、５％ＣＯ_２の培養器に置き、背景データを４０〜１３０の間に調整した。実施例１の化合物Ｃ３１０−６をジメチルスルホキシドで１００ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、１２．５ｍｇ／ｍｌ、６．３ｍｇ／ｍｌ、３．１ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌに完全に溶解し、さらに完全ＭＥＭ培地で１０ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ、１．２５ｍｇ／ｍｌ、０．６３ｍｇ／ｍｌ、０．３１ｍｇ／ｍｌ、０．１６ｍｇ／ｍｌ作業液に希釈し、培養したヒト肺癌細胞Ａ５４９をパンクレアチンで消化し、２×１０^４／ｍｌの活細胞懸濁液に希釈し、８ウェル型プレートに接種し、各ウェル３４５ｕｌとし、Ｃ３１０−６溶液５ｕｌを加え、最終濃度を１００μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、１２．５μｇ／ｍｌ、６．３μｇ／ｍｌ、３．１μｇ／ｍｌ、１．６μｇ／ｍｌにし、対照ウェルに５ｕｌの１‰ジメチルスルホキシドの完全ＭＥＭ培地を加え、３７℃、５％ＣＯ_２の培地に置いて４８時間培養した。

具体的な薬の添加方法は表６に示すとおりである。

異なる濃度のＣ３１０−６でヒト肺癌細胞Ａ５４９の成長を抑制するリアルタイムデータ（４８時間）は図７に示すとおりである。

２．ＭＴＴ法
ａ．５０ｍｌ、０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ＝７．４５のＰＢＳでＭＴＴ２５０ｍｇを溶解し、最終濃度５ｍｇ／ｍｌとし、ろ過除菌し、小分けした後−２０℃で遮光保存した。
ｂ．単細胞株懸濁液を調製し、９６ウェル型プレートに接種し、ＭＥＭ基礎培地で細胞を３×１０^４／ｍｌまで希釈し、各ウェルに希釈した細胞を１００ｕｌ加え、３７℃、５％ＣＯ_２で、飽和温度で２０時間培養し、各群４個の複製試料とした。
ｃ．培地を除去し、新しく調製した培地を除去し、一連の濃度で抗癌剤（Ｃ３１０−６）を調製し、溶解し、各ウェル１００ｕｌとし、４８時間培養した。
ｄ．各ウェルに５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ ２０ｕｌを加え、４時間培養した。
ｅ．ウェル内の培地を吸い出し（できる限り完全に）、ＤＭＳＯ溶液（１５０ｕｌ／ウェル）を加え、１０分間振とうし、結晶物を十分に溶解した。
ｆ．マイクロプレートリーダーで各ウェルのＯＤ値を検出し、λ＝４９０ｎｍであった。
ｇ．細胞増殖曲線図を作成し、ＩＣ_５０値１５．７２７μｇ／ｍｌが求められた。このことは、この化合物が非常に良好な抗ヒト肺癌Ａ５４９の活性を有することを示している。

実施例５
新規化合物Ｃ３１０−６の動物実験

（一）Ｃ３１０−６抗マウスＨ_２２腫瘍実験
この実験の目的は、Ｈ_２２癌マウスモデルを用いて５種類の混合物の抗肝癌腫瘍作用について考察することである。

具体的な手順は次のとおりである。

１．マウスＨ_２２肝癌モデルの確立
腫瘍を接種して８〜１３日の状態が良好な担癌マウスを頸椎脱臼により安楽死させ、体表をアルコールで消毒し、無菌（クリーンベンチ）環境でマウス腫瘍を剥離し、生理食塩水を入れた滅菌シャーレに入れ、小さな塊に切り、小さな塊の腫瘍をホモジナイザーに入れ、体積比１：３前後で生理食塩水を加えてすりつぶし、ホモジネートを５０ｍｌ滅菌遠沈管に入れ、使用に備えた。１ｍｌ注射器でＫＭマウス右腋下に０．２ｍｌ注射接種し、腫瘍細胞懸濁液の製造は、いずれも無菌条件で（クリーンベンチで）行った。腫瘍の取り出しから腫瘍の接種完了までは６０分以内に行った。

２．医薬品製造方法
Ｃ３１０−６胃ゾンデ経口投与剤：一定重量のＣ３１０−６試料を乳鉢に秤取し、一定量の溶媒体積２％ツイーン−８０を加え、充分に研磨した後、一定量体積の生理食塩水を加え、均等に混ぜた後、濃度２４ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、２．７ｍｇ／ｍｌに調製し、使用に備えた。

シクロホスファミド胃ゾンデ経口投与剤：シクロホスファミド錠の糖衣を除去した後、秤取し、一定重量を乳鉢に秤取し、一定量体積の生理食塩水を加え、充分に研磨し、均等に混ぜ、濃度３．４ｍｇ／ｍｌに調製し、使用に備えた。

３．割付け及び投与方法
６０匹の試験マウスを計６群に分け、各群１０匹、雌雄半分ずつとし、（１）Ｃ３１０−６低用量（２７ｍｇ／ｋｇ）群、（２）Ｃ３１０−６中用量（８０ｍｇ／ｋｇ）群、（３）Ｃ３１０−６高用量（２４０ｍｇ／ｋｇ）群、（４）シクロホスファミド群、（５）モデル群、（６）ブランク群に分け、以上各群は、モデル群及びブランク群を除き、腫瘍懸濁液を注射した後、いずれも１日１回投与し、１回１匹０．３ｍｌとし、１０日間連続で投与した。モデル群及びブランク群は、毎日等体積の２％ツイーン８０水溶液を、１０日連続胃ゾンデで経口投与した。

４．観察指標
４．１ 大体の状態
毎日、マウスの体重、飲食量を量って記録し、最後の１回は、腫瘍を除去した後のマウスの正味体重を計算した。

４．２ 腫瘍重量及び腫瘍抑制率
毎日マウス右腋下を観察し、最後の１回の投与の２４時間後に、解剖して腫瘍組織を取り出し、腫瘍重量を秤取し、下記の公式で腫瘍成長抑制率を計算した。
［式１］

４．３ 肝組織重量及び癌の肝転移率
最後の１回の投与の２４時間後に、解剖して肝組織を取り出し、肝組織重量を秤り、肝組織の変化の有無を観察し、肝癌転移があるマウスの数について統計をとった。

５．データ統計
各群のマウスの対応するデータは、いずれも
［式２］

で表し、ＳＰＳＳソフトウェアを用いて統計を行い、各群でｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡ検定を採用した。

６．実験結果
表７、図８〜図１２の実験結果から、Ｃ３１０−６は、投与量が２４０ｍｇ／ｋｇ、服用日数が１０日であるときに、Ｈ_２２肝癌腫瘍モデルマウスと比較して有意差が認められ（Ｐ＜０．０５）、且つ用量が２４０ｍｇ／ｋｇ及び８０ｍｇ／ｋｇのときに、肝癌腫瘍に対して比較的高い抑制率（＞４０％）を有し、シクロホスファミド群は、モデル群と比較して有意差が認められ（Ｐ＜０．０５）、用量が２４０ｍｇ／ｋｇ及び８０ｍｇ／ｋｇのときに、シクロホスファミド群と比較して、腫瘍抑制率に有意差が認められないことがわかる。

肝臓重量の面で比較すると、Ｃ３１０−６は、用量が８０ｍｇ／ｋｇのときに、マウス肝臓重量をシクロホスファミド群と比較して、極めて有意な差が認められ（Ｐ＜０．０１）、用量が２７ｍｇ／ｋｇのときに、マウス肝臓重量をシクロホスファミド群と比較して、有意差が認められ（Ｐ＜０．０５）、シクロホスファミド群をモデル群と比較して極めて有意な差が認められた（Ｐ＜０．０１）。

正味体重の変化の面で比較すると、各投与群の体重の上昇幅はいずれも比較的小さく、且つシクロホスファミド群のマウスの正味体重の上昇幅が最も小さく、投与量が２４０ｍｇ／ｋｇのときに、モデル群及びブランク群と比較して、いずれも有意差が認められた（Ｐ＜０．０５）。シクロホスファミド群与モデル群及びブランク群と比較して、いずれも極めて有意な差が認められた（Ｐ＜０．０１）。

各群のマウスには、いずれも癌細胞肝転移現象が認められなかった。

投与治療期間において、Ｃ３１０−６の各投与群のマウスの体重に、いずれも著しい上昇が認められ、その後、安定した状態が維持された。シクロホスファミド群は低体重状態が維持された。モデル群及びブランク群は、体重の上昇幅が他の群よりも大きかった。

投与治療期間において、Ｃ３１０−６の各投与群のマウスの平均飲食量は、いずれも投与前期は安定が維持され、後期の飲食量は投与量に反比例した。シクロホスファミド群の飲食量は、比較的低レベルが一貫して保たれた。ブランク群及びモデル群の飲食量は、比較的高レベルが一貫して保たれた。

総合すると、Ｃ３１０−６は、投与量が８０ｍｇ／ｋｇ、服用量が１０日間のときに、マウスＨ_２２肝癌腫瘍モデルに対して有意な有効性を有し（腫瘍抑制率４１．１％）、その効果にシクロホスファミドとの有意差が認められず、且つシクロホスファミドと同じく、肝腫大を防止する効果を有する可能性があることが推測される。しかしながら、この投与量では、マウスの正味体重変化（腫瘍を除去した後の体重と初期体重との比較）は比較的小さく、シクロホスファミドの作用と相似し、個体の体重及び飲食量に対してある程度の抑制作用がある可能性があり、その抑制作用は、投与量と正比例の関係を有する可能性があることが推測される。投与量が２４０ｍｇ／ｋｇのときに、その腫瘍抑制率（６４．４％）は、ひいてはシクロホスファミド（腫瘍抑制率５２．９％）よりも優れていた。また、今回の実験モデル群の平均腫瘍重量は比較的軽く（＜１ｇ）、実験の最終的な判断結果に対してある程度の影響を及ぼした可能性がある。

（二）Ｃ３１０−６抗Ｌｅｗｉｓ腫瘍実験
この実験の目的は、ｌｅｗｉｓ癌マウスモデルを用いてＣ３１０−６の抗肺癌腫瘍作用について考察することである。

実験手順は次のとおりである。

１、マウスＬｅｗｉｓ肺癌担癌モデルの確立
腫瘍を接種して８〜１３日の状態が良好な担癌マウスを頸椎脱臼により安楽死させ、体表をアルコールで消毒し、無菌（クリーンベンチ）環境でマウス腫瘍を剥離し、生理食塩水を入れた滅菌シャーレに入れ、小さな塊に切り、小さな塊の腫瘍をホモジナイザーに入れ、体積比１：３前後で生理食塩水を加えてすりつぶし、ホモジネートを５０ｍｌ滅菌遠沈管に入れ、使用に備えた。１ｍｌ注射器でＣ５７ＢＬ／６マウス右腋下に０．２ｍｌ注射接種し、腫瘍細胞懸濁液の製造は、いずれも無菌条件で（クリーンベンチで）行った。腫瘍腹水の取り出しから腫瘍の接種完了までは６０分以内に行った。

２．医薬品製造方法
Ｃ３１０−６胃ゾンデ経口投与剤：一定重量のＣ３１０−６試料を乳鉢に秤取し、一定量の溶媒体積２％ツイーン−８０を加え、充分に研磨した後、一定量体積の生理食塩水を加え、均等に混ぜ、濃度２４ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、２．７ｍｇ／ｍｌに調製し、使用に備えた。

シクロホスファミド胃ゾンデ経口投与剤：シクロホスファミド錠の糖衣を除去した後、秤取し、一定重量を乳鉢に秤取し、一定量体積の生理食塩水を加え、充分に研磨し、均等に混ぜ、濃度３．４ｍｇ／ｍｌに調製し、使用に備えた。

３．割付け及び投与方法
６０匹の実験マウスを計６群に分け、各群１０匹，雌雄半分ずつとし、（１）Ｃ３１０−６低用量（２７ｍｇ／ｋｇ）群、（２）Ｃ３１０−６中用量（８０ｍｇ／ｋｇ）群、（３）Ｃ３１０−６高用量（２４０ｍｇ／ｋｇ）群、（４）シクロホスファミド群、（５）モデル群、（６）ブランク群に分け、以上は、ブランク群及びモデル群を除き、その他の各群は、腫瘍懸濁液を注射した後、いずれも１日１回投与し、１回１匹０．２ｍｌとし、１０日間連続で投与した。ブランク群及びモデル群は、同じ投与時刻及び投与時間で胃ゾンデにより２％ツイーン−８０水溶液を投与し、１０日間連続で投与した。

４．観察指標
４．１ 大体の状態
毎日、マウスの体重、飲食量を量って記録し、最後の１回は、腫瘍を除去した後のマウスの正味体重を計算した。

４．２ 腫瘍重量及び腫瘍抑制率
毎日マウス右腋下を観察し、最後の１回の投与の２４ｈ後に、解剖して腫瘍組織を取り出し、腫瘍重量を秤取し、下記の公式で腫瘍成長抑制率を計算した。
［式３］

４．３ 肺組織重量及び癌の肺転移率
最後の１回の投与の２４時間後に、解剖して肺組織を取り出し、肺組織重量を秤り、肺組織の変化の有無を観察し、肺癌転移があるマウスの数について統計をとった。

５．データ統計
各群のマウスの対応するデータは、いずれも表で示し、ＳＰＳＳソフトウェアを用いて統計を行い、各群でｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡ検定を採用した。

６．実験結果
表８、図１３〜図１７の実験結果から、Ｃ３１０−６は、投与量が２４０ｍｇ／ｋｇ、服用日数が１０日であるときに、Ｌｅｗｉｓ肺癌腫瘍モデルマウスと比較して極めて有意な差が認められ（Ｐ＜０．０１）、この用量は、シクロホスファミド群と比較して、有意差が認められなかったことがわかる。

肺転移の面では、各群でいずれも２０％−５０％の肺転移現象が認められたが、統計学的有意差は認められなかった。

正味体重の変化の面では、Ｃ３１０−６の各投与群及びシクロホスファミド群で、いずれも体重低下現象が認められ、且つ各群は、モデル群及びブランク群と比較して、いずれも極めて有意な差が認められた（Ｐ＜０．０１）。

投与治療期間において、Ｃ３１０−６の各投与群のマウスの体重に、いずれも先に低下が認められた後、著しく上昇し、その後、安定した状態が維持された。シクロホスファミド群は、先に低下した後、低体重状態が維持された。モデル群及びブランク群は、著しい上昇の後、一定の体重レベルが維持された。

投与治療期間に、Ｃ３１０−６の各投与群のマウスの平均飲食量は、いずれも投与中期が比較的高く、初期と末期が比較的低かった。シクロホスファミド群の飲食量は、比較的低いレベルが一貫して保たれた。ブランク群の飲食量は、比較的高いレベルが一貫して保たれた。モデル群では、飲食量が徐々に減少した。

総合すると、Ｃ３１０−６は、投与量が２４０ｍｇ／ｋｇ、服用量が１０日間のときに、マウスＬｅｗｉｓ肺癌モデルに対して比較的良好な有効性を有する。服用個体に体重低下現象が現れることがあるが、引き起こされる有害反応の強度はシクロホスファミドよりも小さいことが推測される。

本発明のエルゴステロール系化合物及び／又はエルゴステロール系化合物結晶は、実験による検証の結果、抗癌活性を有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞活性レベルで、リアルタイム・ラベルフリー細胞アナライザー及びＭＴＴ法を用いてこの化合物に対して活性検出を行い、実験の結果、この化合物は、肺癌及び肝癌細胞の成長を著しく抑制する活性を有することが示され、動物全体レベルでも、実験の結果、この化合物は著しい抗肺癌活性を示すことがわかる。そのため、この化合物は、医薬品賦形剤と、臨床使用に適した抗癌剤を製造することができる。

前記具体的な実施形態は、このエルゴステロール系化合物、並びにその製造方法及び使用について詳細に記述したものであり、説明的なものであり、限定的なものではなく、その限定範囲に基づき若干の実施例を列挙することができるため、本発明の全体的な主旨を逸脱しない変更及び修正は、本発明の保護範囲内に属すものとする。

Claims (11)

1. 分子式がＣ_２８Ｈ_４４Ｏ、分子量が３９６．３４であり、（３Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−（（２Ｓ，５Ｒ，Ｅ）−５，６−ジメチルヘプト−３−エン−２−イル）−１０，１３−ジメチル−２，３，４，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタジエン［α］フェナントレン−３−オール）であり、化学構造式が図Ｉに示すとおりであるエルゴステロール系化合物。
   
2. 図ＩＩに示すとおり、Ｃ−３、Ｃ−９、Ｃ−１０、Ｃ−２４キラル炭素原子Ｒ配置、Ｃ−１３、Ｃ−１４、Ｃ−１７、Ｃ−２０キラル炭素原子Ｓ配置である、請求項１記載のエルゴステロール系化合物。
   
3. サナギタケ子実体を粉砕、抽出濃縮、分離して得られる、請求項１に記載のエルゴステロール系化合物。
4. 具体的な工程が次の通りである、請求項１に記載のエルゴステロール系化合物の製造方法。
   （１）乾燥させたサナギタケ子実体を原料とし、超微粉砕して超微粉を得る；
   （２）超微粉を熱水抽出し、遠心分離して、沈殿物を取り、１〜５回繰り返す；
   （３）ステップ（２）で得られた沈殿物を、アセトン、エタノール、メタノールのうちの１種または複数種の組み合わせである有機試薬で浸漬抽出し、浸漬抽出した上澄を収集し、遠心分離し、上澄液を取り、濃縮、乾燥して、Ｃ３１０−６粗抽出物を得る；
   （４）工程（３）で得られたＣ３１０−６粗抽出物を、移動相Ａもしくは移動相Ｂまたは両者の組み合わせである移動相で全て溶解させ、分取液体ＤＡＣ順相カラムで分離し、二元移動相系を用いて溶出分離する。前記移動相Ａおよび移動相Ｂはｎ−ヘキサン、酢酸エチル、エタノール、ジクロロメタン、メタノールのうちの１種または複数種の組み合わせであり、溶出方法は６０分勾配溶出であり、検出波長は２６０ｎｍとする。標的ピークを収集し、乾燥後にＣ３１０−６中間物成分を得る；
   （５）工程（４）で得られたＣ３１０−６中間物成分を、移動相Ａもしくは移動相Ｂまたは両者の組み合わせである移動相ですべて溶解させ、分取液体ＤＡＣ順相カラムで分離し、二元移動相系を用いて溶出分離する。前記移動相Ａおよび移動相Ｂはｎ−ヘキサン、酢酸エチル、エタノール、ジクロロメタン、メタノールのうちの１種または複数種の組み合わせであり、溶出方法は１８０分勾配溶出であり、検出波長は２６０ｎｍとする。標的ピークを収集し、乾燥後に標的化合物Ｃ３１０−６を得る。
5. 前記工程（２）における熱水抽出の温度が７０〜１００℃、熱水抽出時間が１〜２時間である、請求項３記載のエルゴステロール系化合物の製造方法。
6. 前記工程（３）における沈殿物と有機試薬を、１：（３〜８）の重量体積比（Ｋｇ：Ｌ）で混合し、浸漬抽出する、請求項３記載のエルゴステロール系化合物の製造方法。
7. 請求項１または２に記載のエルゴステロール系化合物を結晶化して得られ、単結晶構造が単斜晶系であり、結晶軸がａ＝９．８４８（２）、ｂ＝７．５５２９（１５）、ｃ＝３５．０７４（７）であり、結晶面角がα＝９０°、β＝９５．６２（３）°、λ＝９０°である、エルゴステロール系化合物結晶。
8. 具体的な工程が次の通りである、請求項６記載のエルゴステロール系化合物結晶の製造方法。
   （１）エルゴステロール系化合物を、１５０ｍｇ毎に良性溶媒３ｍｌを加え、１６℃の条件下に置き自然揮発させ、保温静止し、晶析し、溶液が１／３まで揮発したときに、底部の結晶をすくい取り、単結晶を得、前記良性溶媒は、ｎ−ヘキサン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、エタノール、メタノールのうちの一種または複数種の任意の割合の組み合わせであること；
   （２）得られた単結晶を吸引ろ過し、−２０℃のｎ−ヘキサンで洗浄して得ること。
9. 請求項１または２に記載のエルゴステロール系化合物および／または請求項６に記載のエルゴステロール系化合物結晶の、抗腫瘍薬の製造における使用。
10. 前記腫瘍が、肝癌、肺癌、乳癌、子宮癌または腸癌である、請求項８記載のエルゴステロール系化合物および／またはエルゴステロール系化合物結晶の使用。
11. 請求項１または２に記載のエルゴステロール系化合物および／または請求項６記載のエルゴステロール系化合物結晶と、１種または複数種の薬理学的に許容される賦形剤と、を含む、抗腫瘍作用を有する医薬品組成物。