CN104327147B - 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104327147B
CN104327147B CN201410244394.5A CN201410244394A CN104327147B CN 104327147 B CN104327147 B CN 104327147B CN 201410244394 A CN201410244394 A CN 201410244394A CN 104327147 B CN104327147 B CN 104327147B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mobile phase
crystal
group
ergosterol
compounds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201410244394.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104327147A (zh
Inventor
张耀洲
孙嘉辰
江磊
张剑
陈玉皎
张晓倩
杜思邈
顾鹏嫒
崔今松
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Is Source Of Tang (tianjin Binhai) Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Is Source Of Tang (tianjin Binhai) Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Is Source Of Tang (tianjin Binhai) Biotechnology Co Ltd filed Critical Is Source Of Tang (tianjin Binhai) Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201410244394.5A priority Critical patent/CN104327147B/zh
Priority to JP2016524666A priority patent/JP6170246B2/ja
Priority to PCT/CN2014/081517 priority patent/WO2015184668A1/zh
Publication of CN104327147A publication Critical patent/CN104327147A/zh
Priority to US15/227,936 priority patent/US9896474B2/en
Application granted granted Critical
Publication of CN104327147B publication Critical patent/CN104327147B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J15/00—Stereochemically pure steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a partially or totally inverted skeleton, e.g. retrosteroids, L-isomers
    • C07J15/005—Retrosteroids (9 beta 10 alfa)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Abstract

本发明提供了一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用，所述麦角甾醇类化合物分子式为C28H44O，分子量396.34，分子结构为：(3R,9R,10S,13S,14S,17S)‑17‑((2S,5R,E)‑5,6‑二甲基庚‑3‑烯‑2‑基)‑10,13‑二甲基‑2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17‑十二氢‑1H‑环戊二烯并[α]菲‑3‑醇)，是一种全新的化学结构。该分子来源于蛹虫草，该化合物与其晶体由蛹虫草子实体经过粉碎、提取浓缩、分离、结晶获得的，具有高效的抗肿瘤作用，是一种全新的结构，并有可能开发成抗肿瘤新药。

Description

一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种由蛹虫草分离提取的化合物及其制备方法与应用，尤其是一种全新结构的麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
癌症是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个或多个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的肿块，是目前危害人类健康最严重的疾病之一，据WHO统计，全球平均每年死于癌症的患者高达700万人，新发病800万例，此数据在逐年增加，到2020年全世界每年将新发生2000万例患者，癌症已成为人类健康头号杀手。
现阶段治疗癌症的主要手段是放疗以及化疗，虽然有较好的疗效，但是常引起骨髓抑制、免疫功能低下、脱发、情绪失控等副反应，使患者难以坚持治疗，并且放疗及化疗药物在治疗过程中出现的耐药性已成为目前临床治疗中公认的难题之一。因此，有必要寻求疗效好、毒副作用小、患者易于接受的治疗方法和药物。而中药以其药源广泛、价格低廉、应用历史悠久等优点正成为抗癌药物研究的热点。
目前，已有大量临床研究证实中药具有改善癌症患者生存质量，延长生存期，稳定癌细胞，提高患病机体免疫力的作用。此外，中药可以通过诱导癌细胞分化，促进细胞凋亡，调节免疫功能，直接杀伤癌细胞，抑制癌细胞的生成，逆转癌细胞的多药耐药，防止癌细胞的转移等多种途径，有效的防治癌症的发展。因此从天然产物中寻找有效的抗肿瘤物质是目前研究的一个大方向。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种麦角甾醇类化合物。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述麦角甾醇类化合物的制备方法。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述麦角甾醇类化合物的应用。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种麦角甾醇类化合物，分子式为C28H44O(简称为C310-6)，分子量396.34，(3R,9R,10S,13S,14S,17S)-17-((2S,5R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊二烯并[α]菲-3-醇)，英文名称为：
(3R,9R,10S,13S,14S,17S)-17-((2S,5R,E)-5,6-dimethylhept-3-en-2-yl)-10,13-dimethyl-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[α]phenanthren-3-ol)，化学结构式为(Ⅰ)所示，
优选的，上述麦角甾醇类化合物，为(II)所示，该化合物的C-3、C-9、C-10、C-24手性碳原子R构型，C-13、C-14、C-17、C-20手性碳原子S构型，
优选的，上述麦角甾醇类化合物，是由蛹虫草子实体经过粉碎、提取浓缩、分离获得的。
上述麦角甾醇类化合物的制备方法，具体步骤如下：
(1)取烘干的蛹虫草子实体为原料，进行超微粉碎得到超微粉；
(2)超微粉进行水煮提取，离心，取沉淀，重复1～5次；
(3)将步骤(2)得到的沉淀进行有机试剂浸提，有机试剂为丙酮、乙醇、甲醇的组合，收集浸提后的上清，进行离心，取上清液，浓缩、干燥，得到C310-6初取物；
(4)取步骤(3)得到C310-6初取物进行全部溶解，经制备液相DAC正相色谱柱进行分离，采用二元流动相体系进行洗脱分离，所述流动相A和流动相B采用正己烷、乙酸乙酯的组合，洗脱方式为梯度洗脱60min，检测波长为260nm，收集目的峰，干燥后得到C3-10组分；
(5)取步骤(4)得到C3-10组分用流动相(流动相A或流动相B或两者的组合)进行全部溶解，经制备液相DAC正相色谱柱进行分离，采用二元流动相体系进行洗脱分离，所述流动相A和流动相B采用正己烷、乙酸乙酯、的组合，洗脱方式为梯度洗脱180min，检测波长为260nm，收集目的峰，干燥后得到目标单体化合物(C310-6)。
优选的，上述麦角甾醇类化合物的制备方法，所述步骤(2)中水煮提取的温度为70～100℃，水煮时间为1～2h。
优选的，上述麦角甾醇类化合物的制备方法，所述步骤(3)中沉淀与有机试剂为按1:(3～8)的重量体积比(Kg：L)进行混合浸提。
一种麦角甾醇类化合物晶体，由上述麦角甾醇类化合物通过结晶方法得到的，所述晶体的单晶晶型为单斜晶系，其晶轴为a＝9.848(2)，b＝7.5529(15)，c＝35.074(7)；晶面夹角为α＝90°，β＝95.62(3)°，λ＝90°。
上述麦角甾醇类化合物晶体的制备方法，具体步骤如下：
(1)将上述麦角甾醇类化合物(C310-6)按每150mg加入3ml的良性溶剂，放置于16℃条件下自然挥发，保温静止，析晶，待溶液挥发至1/3时，捞取底部晶体，即得到单晶晶体，所述良性溶剂为正己烷、四氢呋喃、乙酸 乙酯、乙醇、甲醇中的一种或几种任意比例的组合；
(2)将所得到的单晶晶体抽滤，用-20℃的正己烷清洗，即得。
优选的，上述麦角甾醇类化合物晶体的制备方法，所述步骤(2)所得产物经清洗后直接用于X射线单晶衍射分析。
上述麦角甾醇类化合物和/或麦角甾醇类化合物晶体在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的，上述麦角甾醇类化合物和/或麦角甾醇类化合物晶体的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌、乳腺癌、子宫癌或肠癌。
一种具有抗肿瘤作用的药物组合物，包括上述麦角甾醇类化合物和/或麦角甾醇类化合物晶体以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
上述药学可接受的赋形剂可以是药物制剂领域中任何常规的赋形剂，特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态，用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等，必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。
上述具有抗肿瘤作用的药物组合物可以制备成为片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。所述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明的有益效果是：
本发明所述麦角甾醇类化合物和/或麦角甾醇类化合物晶体，是从蛹虫草子实体中成功分离纯化出的新化合物，且纯度高达99％，该化合物性质稳定，具有非常显著的抗癌活性，其制备方法步骤简便，重复性好，实用性高，适用于大规模工业化生产的需要。
附图说明
图1所示的是本发明所述C310-6组分的HPLC分析图；
图2所示的是本发明所述C310-6的电子轰击质谱(EI-MS)分析图；
图3所示的是本发明所述C310-6的红外光谱图；
图4所示的是本发明所述C310-6的核磁共振分析图，其中(a)为1D1HNMR谱(CDCl3,600MHz)的数据图谱，(b)为1D13CNMR谱(CDCl3,150MHz)的数据图谱，(c)为HMBC数据图谱，(d)为DEPT135数据图谱；
图5是本发明所述C310-6的单晶晶型的分子结构图；
图6是不同浓度的C310-6抑制人肝癌细胞Hep-g2生长的实时数据监测图；
图7是不同浓度的C310-6抑制人肺癌细胞A549生长的实时数据监测图；
图8是C310-6抗小鼠H22肿瘤实验中小鼠平均瘤重(g)示意图，图中按顺序依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、CTX组、模型组；
图9是C310-6抗小鼠H22肿瘤实验中小鼠平均肝重(g)示意图，图中按顺序依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、CTX组、模型组；
图10是C310-6抗小鼠H22肿瘤实验中小鼠净重平均变化量(g)示意图，图中按顺序依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、CTX组、模型组、空白组；
图11是C310-6抗小鼠H22肿瘤实验中治疗期间小鼠体重变化示意图；
图12是C310-6抗小鼠H22肿瘤实验中治疗期间小鼠平均饮食量示意图；
图13是C310-6抗Lewis肿瘤实验中小鼠平均瘤重(g)示意图，图中按顺序依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、CTX组、模型组；
图14是C310-6抗Lewis肿瘤实验中小鼠平均肺重(g)示意图，图中按顺序依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、CTX组、模型组；
图15是C310-6抗Lewis肿瘤实验中小鼠净重平均变化量(g)示意图，图中按顺序依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、CTX组、模型组、空白组；
图16是C310-6抗Lewis肿瘤实验中治疗期间小鼠体重变化情况示意图；
图17是C310-6抗Lewis肿瘤实验中治疗期间小鼠平均饮食量示意图。
图18是实施例8中DAC50正相色谱分离图，其中横坐标为采集时间(min)，纵坐标为信号强度(MV)，曲线为色谱曲线，直的折线为流动相配比浓度；
图19是实施例8中DAC150正相色谱分离图，其中横坐标为采集时间(min)，纵坐标为信号强度(MV)，曲线为色谱曲线，直的折线为流动相配比浓度；
图20是实施例9中DAC150正相色谱分离图，其中横坐标为采集时间(min)，纵坐标为信号强度(MV)，曲线为色谱曲线，直的折线为流动相配比浓度。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。
所用实验材料包括：蛹虫草子实体购自正源堂(天津)生物科技有限公司；人肝癌细胞Hep-g2购自美国模式培养物集存库(ATCC)；人肺癌细胞A549购自美国模式培养物集存库(ATCC)；H22肝癌瘤株(第4代)购自中国典型培养物保藏中心；lewis肺癌瘤株(第6代)购自中国典型培养物保藏中心；KM小鼠(18-22g)(动物许可证号：SCXK(京)2012-0001，合格证号：11400700020779)购自北京维通利华实验动物技术有限公司；C57BL/6小鼠(18-22g)(动物许可证号：SCXK(京)2012-0001，合格证号：11400700020779)购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
所用实验试剂包括：色谱纯制备级正己烷、乙酸乙酯、乙醇、二氯甲烷、甲醇购自天津康科德科技有限公司；F-12K培养基购自Life Technologies Corporation；MEM培养基购自Life Technologies Corporation；环磷酰胺片购自天津金世制药有限公司；吐温80由北京博润莱特科技有限公司分装。
所用实验仪器设备包括：超微粉碎机购自山东三清不锈钢设备有限公司；台式冷冻离心机购自Thermo公司；30升中药提取罐购自上海顺仪实验设备有限公司；恒温鼓风干燥箱购自上海一恒科学仪器有限公司；旋转蒸发仪购自上海亚容生化仪器厂；DAC50正相色谱柱、DAC150正相色谱柱购自江苏汉邦科技有限公司；Kromasil正相色谱柱(250mm×4.6mm，5m，100)购 自北京振翔工贸有限责任公司；iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪购自艾森生物(杭州)有限公司；日立高效液相色谱仪购自天美(中国)科学仪器有限公司；单晶X射线衍射仪购自日本株式会社理学公司。
实施例1
制备麦角甾醇类化合物(C310-6)
一、C310-6初提物的获得
1、超微粉碎：
取烘干的蛹虫草子实体为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，粉碎全过程用5℃的水作为超微破碎机内部冷却液，超微粉碎的时间为20min，得到超微粉。
2、水煮提取：
对超微粉进行水煮提取，三次连续提取，每次水煮时间为70min(其中加热至100度，需40min水沸腾后继续加热30min)。具体的：
第一次水煮：3kg超微粉加入24L超纯水，充分搅拌至料液均一，无明显块状物，开启30升中药提取罐，水煮70min，水煮结束后，用1L离心杯分装并平衡，待冷却至室温后，25℃，6000rpm离心30min，收集沉淀；
第二次水煮：第一次水煮沉淀加入12L超纯水，充分搅拌至料液均一，无明显块状物，开启30升中药提取罐，水煮70min，水煮结束后，按第一次水煮的方法进行处理，收集沉淀；
第三次水煮：第二次水煮沉淀加入9L超纯水，充分搅拌至料液均一，无明显块状物，开启30升中药提取罐，水煮70min，水煮结束后，按第一次水煮的方法进行处理，收集沉淀。沉淀转移至60℃恒温鼓风干燥箱中干燥至，然后真空干燥。
3、有机试剂提取：
取干燥后的沉淀，用粉碎机粉碎，按1:5(w/v)加入有机试剂，有机试剂为50％的丙酮-乙醇溶液，充分搅拌混匀，保鲜膜封口，浸提过夜，收集上清液，上清液经6000rpm离心30min，收集上清，上清于旋转蒸发仪中浓缩后转移至60℃恒温鼓风干燥箱中干燥，得到C310-6初提物。
二、C310-6中间物的获得
1、DAC50实验：
将C310-6初提物用流动相进行完全溶解，配制成50mg/mL的溶液，经制备液相DAC50正相色谱柱(250mm×50mm，10μm，)进行分离，检测波长260nm，采用A、B二元流动相体系进行洗脱分离，流动相A和流动相B各为正己烷和乙酸乙酯，洗脱方式100％正己烷—100％乙酸乙酯梯度洗脱60min，流速为80mL/min，进样量20mL。色谱图见图18。收集图18中第10号峰，经干燥后得到C310-6中间物组分。
2、放大到DAC150：
将C310-6初提物用流动相进行完全溶解，配制成50mg/mL的溶液，经制备液相DAC150正相色谱柱(250mm×150mm，10μm，)进行分离，检测波长260nm，采用A、B二元流动相体系进行洗脱分离，流动相A和流动相B各为正己烷和乙酸乙酯，洗脱方式为100％正己烷—100％乙酸乙酯梯度洗脱60min，流速为700mL/min，进样量180mL。色谱图见图19。收集图19中第10号峰，经干燥后得到C310-6中间物组分。
三、C310-6的获得
将C310-6中间物组分用流动相进行完全溶解，配制成33mg/mL的溶液，经制备液相DAC150正相色谱柱(250mm×150mm，10μm，)进行分离，检测波长260nm，采用A、B二元流动相体系进行洗脱分离，流动相A和流动相B采用正己烷和乙酸乙酯的组合，洗脱方式为100％正己烷—100％乙酸乙酯梯度洗脱180min，，流速为700mL/min，进样量300mL。色谱图见图20。收集图20中第6号峰，经干燥后得到组分C310-6，称重为7.2g。
此外，参照实施例1的具体操作，根据说明书技术方案部分麦角甾醇类化合物的制备方法以及公知常识进行制备，本领域技术人员同样可以获得麦角甾醇类化合物(C310-6)。
实施例2
制备麦角甾醇类化合物(C310-6)晶体
将实施例1所得麦角甾醇类化合物C310-6称取150mg加入3ml的良性溶剂，良性溶剂为50％正己烷-四氢呋喃溶液，放置于16℃条件下自然挥发，保温静止，析晶，待溶液挥发至1/3时，捞取底部晶体，即得到单晶晶体，将所得到的单晶晶体抽滤，用-20℃的正己烷清洗，清洗后直接用于X射线单晶衍射分析的甾醇类化合物(3R,9R,10S,13S,14S,17S)-17-((2S,5R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊二烯并[α]菲-3-醇)的单晶晶体。
此外，参照实施例2的具体操作，根据说明书技术方案部分麦角甾醇类化合物晶体的制备方法以及公知常识进行制备，本领域技术人员同样可以获得麦角甾醇类化合物(C310-6)晶体。
实施例3
C310-6结构的确认
1、HPLC进行纯度分析：
将C310-6组分用50％的正己烷-乙醇溶液进行全部溶解，配置成5mg/mL的溶液，经HPLC进行纯度分析。Kromasil正相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm， )，检测波长260nm，检测条件为：流动相为正己烷和乙醇，100％正己烷—100％乙醇梯度洗脱30min，流速为1mL/min，进样量：20μL，温度30℃，经高效液相检测纯度达到99％，HPLC谱图见图1。
2、质谱分析：
对C310-6进行电子轰击质谱(EI-MS)分析：Varian450-GC，瀚盟生物技术(天津)有限公司，m/z396.4[M+H]+，提示分子式为C28H44O，质谱图见图2。
3、红外光谱(IR)分析：
对C310-6进行红外光谱分析：傅里叶变换红外光谱仪，瀚盟生物技术(天津)有限公司，cm-1:3841.3，3752.92，3736.85，3435.27，3042.7，2954.66，2870.84，2796.63，2346.49，1655.01,1458.92，1382.59，1369.26,1325.71，1239.89，1192.49，1158.4，1111.32，1055.93，1038.91，983.23，968.07，946.85，935.01，873.5，834.19，802.11，615.46，603.4，红外光谱图见图3。
4、核磁共振分析：
对C310-6分别进行Bruker A.G AVIII600PLUS，瀚盟生物技术(天津)有限公司，核磁谱图如图4所示。根据1H NMR、13C NMR、HMBC谱图得出的C310-6的NMR数据如表1所示。
表1：1H NMR(600MHz，J in Hz)和13C NMR(150MHz)(CDCl3，TMS，ppm)
5、晶体结构的测定：
将C310-6清洗后干燥直接用于X射线单晶衍射仪分析，X射线单晶衍射仪由天津大学-国家工业结晶工程技术研究中心提供，现取实施例4中尺寸为0.25x0.20x0.15mm的甾醇类化合物，即 (3R,9R,10S,13S,14S,17S)-17-((2S,5R,E)-5,6-二甲基庚-3-烯-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢-1H-环戊二烯并[α]菲-3-醇)的单晶至于单晶X射线衍射仪上，用石墨单色化Mo-Kα射线(λ＝0.71073A)以ω—θ扫描方式在3.22°≤2θ≤25.50°范围内收集21387个衍射数据，其中独立衍射点9082个(R(int)＝0.1150)。收集到的数据经Lp因子和经验吸收校正。采用直接法，并经数轮差值Fourier合算，找出全部氢原子。全部氢原子坐标采用几何加氢法得到。所有非氢原子得坐标及其各项异性温度因子全用全矩阵最小二乘法进行修饰。所有结构计算工作均用SHELX-97程序完成，从而得到了C310-6的分子结构为C28H44O。具体数据如下表2-表4所述，结构图如图5所示。
表2：单晶的晶体数据和结构参数表
表3：单晶的键长数据表
O(1)-C(3) 1.428(6) C(13)-H(13A) 0.9700
O(1)-H(1A) 0.8200 C(13)-H(13B) 0.9700
O(1)-HW1A 1.29(8) C(14)-C(15) 1.512(6)
OW1-HW1B 0.86(8) C(14)-C(16) 1.523(7)
O(2)-C(31) 1.433(6) C(14)-C(19) 1.548(6)
O(2)-H(2A) 0.8200 C(15)-H(15A) 0.9600
OW2-HW2A 1.26(16) C(15)-H(15B) 0.9600
OW2-HW2B 1.18(18) C(15)-H(15C) 0.9600
C(1)-C(8) 1.340(7) C(16)-C(17) 1.523(6)
C(1)-C(6) 1.503(7) C(16)-H(16A) 0.9800
C(1)-C(2) 1.515(7) C(17)-C(18) 1.546(7)
C(2)-C(3) 1.487(7) C(17)-H(17A) 0.9700
C(2)-H(2B) 0.9700 C(17)-H(17B) 0.9700
C(2)-H(2C) 0.9700 C(18)-C(19) 1.530(7)
C(3)-C(4) 1.503(8) C(18)-H(18A) 0.9700
C(3)-H(3A) 0.9800 C(18)-H(18B) 0.9700
C(4)-C(5) 1.524(6) C(19)-C(20) 1.544(7)
C(4)-H(4A) 0.9700 C(19)-H(19A) 0.9800
C(4)-H(4B) 0.9700 C(20)-C(22) 1.485(7)
C(5)-C(6) 1.534(7) C(20)-C(21) 1.536(8)
C(5)-H(5A) 0.9700 C(20)-H(20A) 0.9800
C(5)-H(5B) 0.9700 C(21)-H(21A) 0.9600
C(6)-C(7) 1.528(7) C(21)-H(21B) 0.9600
C(6)-C(11) 1.553(6) C(21)-H(21C) 0.9600
C(7)-H(7A) 0.9600 C(22)-C(23) 1.314(7)
C(7)-H(7B) 0.9600 C(22)-H(22A) 0.9300
C(7)-H(7C) 0.9600 C(23)-C(24) 1.494(8)
C(8)-C(9) 1.447(7) C(23)-H(23A) 0.9300
C(8)-H(8A) 0.9300 C(24)-C(25) 1.514(11)
C(9)-C(10) 1.325(7) C(24)-C(26) 1.537(11)
C(9)-H(9A) 0.9300 C(24)-H(24A) 0.9800
C(10)-C(16) 1.486(7) C(25)-H(25A) 0.9600
C(10)-C(11) 1.521(6) C(25)-H(25B) 0.9600
C(11)-C(12) 1.539(7) C(25)-H(25C) 0.9600
C(11)-H(11A) 0.9800 C(26)-C(28) 1.478(10)
C(12)-C(13) 1.534(6) C(26)-C(27) 1.503(14)
C(12)-H(12A) 0.9700 C(26)-H(26A) 0.9800
C(12)-H(12B) 0.9700 C(27)-H(27A) 0.9600
C(13)-C(14) 1.520(7) C(27)-H(27B) 0.9600
C(27)-H(27C) 0.9600 C(28)-H(28B) 0.9600
C(28)-H(28A) 0.9600 C(28)-H(28C) 0.9600
表4：单晶的键角数据表
实施例4
新单体化合物C310-6的细胞活性实验
(一)人肝癌细胞Hep-g2实验：
1、将艾森生物(杭州)有限公司生产的八孔板(E-Plate L8)与iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪组合，向每孔中加入150ul的完全F-12K培养基，置于37℃，5％CO2的培养箱中，将背景数据调至40-130之间。将实施例1所述化合物C310-6用二甲基亚砜完全溶解至100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.3mg/ml、3.1mg/ml、1.6mg/ml，再用完全F-12K培养基将其稀释成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.63mg/ml、0.31mg/ml、0.16mg/ml工作液，将培养好的人肝癌细胞Hep-g2用胰酶消化，并稀释成4×104/ml的活细胞悬液，接种于八孔板中，每孔345ul，加入C310-6溶液5ul，使其终浓度为100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.3μg/ml、3.1μg/ml、1.6μg/ml，对照孔则加入5ul1‰二甲基亚砜的完全F-12K培养基，置于37℃，5％CO2的 培养基中培养48小时。
具体加药方案如表5所示。
表5：人肝癌细胞Hep-g2实验
不同浓度的C310-6抑制人肝癌细胞Hep-g2生长的实时数据(48小时)如图6所示。
2、MTT法
a.用50ml，0.01mol/L，PH＝7.45的PBS溶解250mg的MTT，终浓度5mg/ml，过滤除菌，分装后-20℃避光保存。
b.配制单细胞株悬液，接种于96孔板(用F-12K基础培养基浆细胞稀释至4×104/ml，每孔加入100ul稀释好的细胞，37℃，5％CO2，饱和温度下培养20h，每组4个平行样。
c.去除培养基，去新配制培养基，按系列浓度配制抗癌药物(C310-6)，溶解，每孔100ul，培养48h。
d.每孔加入5mg/ml的MTT20ul，孵育4h。
e.吸出孔内培养基(尽量完全)，加入DMSO液(150ul/孔)，振荡10min，是结晶物充分溶解。
f.酶标仪检测各孔OD值，λ＝490nm。
g.绘制细胞活力曲线图，求出IC50值14.152μg/ml，这表示此化合物具有非常好的抗人肝癌Hep-g2的活性。
(二)人肺癌细胞A549实验：
1、将艾森生物(杭州)有限公司生产的八孔板(E-Plate L8)与iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪组合，向每孔中加入150ul的完全MEM培养基，置于37℃，5％CO2的培养箱中，将背景数据调至40—130之间。将化合物C310-6用二甲基亚砜完全溶解至100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.3mg/ml、3.1mg/ml、1.6mg/ml，再用完全MEM培养基将其稀释成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.63mg/ml、0.31mg/ml、0.16mg/ml工作液，将培养好的人肺癌细胞A549用胰酶消化，并稀释成2×104/ml的活细胞悬液，接种于八孔板中，每孔345ul，加入C310-6溶液5ul，使其终浓度为100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.3μg/ml、3.1μg/ml、1.6μg/ml，对照孔则加入5ul1‰二甲基亚砜的完全MEM培养基，置于37℃，5％CO2的培养基中培养48小时。
具体加药方案如表6所示。
表6：人肺癌细胞A549实验加药方案
不同浓度的C310-6抑制人肺癌细胞A549生长的实时数据(48小时)如图7所示。
2、MTT法
a.用50ml，0.01mol/L，PH＝7.45的PBS溶解250mg的MTT，终浓度5mg/ml，过滤除菌，分装后-20℃避光保存。
b.配制单细胞株悬液，接种于96孔板(用MEM基础培养基浆细胞稀释至3*104/ml，每孔加入100ul稀释好的细胞，37℃，5％CO2，饱和温度下培养20h，每组4个平行样。
c.去除培养基，去新配制培养基，按系列浓度配制抗癌药物(c310-6)，溶解，每孔100ul，培养48h。
d.每孔加入5mg/ml的MTT20ul，孵育4h。
e.吸出孔内培养基(尽量完全)，加入DMSO液(150ul/孔)，振荡10min，是结晶物充分溶解。
f.酶标仪检测各孔OD值，λ＝490nm。
g.绘制细胞活力曲线图，求出IC50值15.727μg/ml，这表示此化合物具有非常好的抗人肺癌A549的活性。
实施例5
新单体化合物C310-6的动物实验
(一)C310-6抗小鼠H22肿瘤实验
该实验目的为采用H22荷瘤小鼠模型考察五类混合物抗肝癌肿瘤作用。
具体步骤如下：
1、小鼠H22肝癌荷瘤模型建立
取接种肿瘤8-13天状态良好的荷瘤脱臼处死，体表酒精消毒，在无菌(超净台)环境下剥离小鼠肿瘤至盛有生理盐水的无菌平皿，剪至小块，将小块肿瘤放入组织匀浆器，按体积比1:3左右加入生理盐水匀浆，匀浆液倒入50ml无菌离心管，备用。用1ml注射器在KM小鼠右腋下注射接种0.2ml，肿瘤细胞混悬液的制备均在无菌条件下(超净工作台中)完成。从取出肿瘤至肿瘤接种完毕在60分钟内完成。
2、药物制备方法
C310-6灌胃剂：称取一定重量的C310-6样品至研钵中，加入一定量溶剂体积2％吐温-80，充分研磨后再加入一定量体积的生理盐水，混匀后，配制浓度24mg/ml、8mg/ml、2.7mg/ml，备用。
环磷酰胺灌胃剂：去掉环磷酰胺片的薄膜衣后进行称取，称取一定重量至研钵中，加入一定量体积的生理盐水，充分研磨、混匀，配制浓度3.4mg/ml，备用。
3、分组及给药方法
将60只试验小鼠共分为6组，每组10只，雌雄各半，分为①C310-6低剂量 (27mg/kg)组、②C310-6中剂量(80mg/kg)组、③C310-6高剂量(240mg/kg)组、④环磷酰胺组、⑤模型组、⑥空白组，以上各组除模型组及空白组外在注射肿瘤混悬液后，均每日给药一次，每次每只0.3ml，连续给药10天；模型组与空白组每日灌胃等体积2％吐温80水溶液，连续10天。
4、观察指标
4.1大体状态
每日对小鼠进行体重、饮食量的称定并记录，于最后一次计算小鼠除瘤后的体重净重。
4.2瘤重及肿瘤抑制率
每日对小鼠右腋下进行观察，于最后一次给药24h后，解剖并取出肿瘤组织，称取肿瘤重量，按下述公式计算肿瘤生长抑制率。
4.3肝组织重量及癌变肝部转移率
于最后一次给药24h后，解剖并取出肝组织，称取肝组织重量，并观察肝组织是否有变化并统计有肝癌转移的小鼠数量。
5、数据统计
各组别小鼠相应数据均以表示，采用SPSS软件进行统计，各组别采用one-way ANOVA检验。
6、实验结果
由表7、图8～图12实验结果可知，C310-6在给予剂量为240mg/kg，服药天数为10天时与H22肝癌肿瘤模型小鼠比较有显著差异(P<0.05)，且在剂量为240mg/kg及80mg/kg时肝癌肿瘤有较高的抑制率(>40％)；环磷酰胺组与模型组比较有显著差异(P<0.05)，剂量为240mg/kg及80mg/kg时与环磷酰胺组比较肿瘤抑制率无明显差异。
肝重方面进行比较，C310-6在剂量为80mg/kg时小鼠肝重与环磷酰胺组比较有极显著差异(P<0.01)，在剂量为27mg/kg时，小鼠肝重与环磷酰胺组比较有显著差异(P<0.05)，环磷酰胺组与模型组比较有极显著差异(P<0.01)。
净体重变化方面进行比较，各给药组体重涨幅均较小，且环磷酰胺组小鼠净体重涨幅最小，给药剂量为240mg/kg时与模型组及空白组比较均呈现显著差异(P<0.05)；环磷酰胺组与模型组及空白组比较均呈现极显著差异(P<0.01)。
各组别小鼠均未出现癌细胞肝转移现象。
在给药治疗期间，C310-6各给药组小鼠体重均出现波动上升继而维持平稳的状态；环磷酰胺组则维持在低体重状态；模型组与空白组体重增长幅度要高于其他组别。
在给药治疗期间，C310-6各给药组小鼠平均饮食量均表现出给药前期维持平稳，后期饮食量则与给药剂量成反比；环磷酰胺组饮食量一直保持在较低水平；空白组及模型组饮食量则一直保持在较高水平。
表7：抗肝癌肿瘤试验结果()
注：与模型组比较**P<0.01，*P<0.05；与空白组比较※※P<0.01，※P<0.05；与环磷酰胺组比较○○P<0.01， ○P<0.05。
综上所述，推测C310-6在给药剂量为80mg/kg、服药剂量为10天时，其对小鼠H22肝癌肿瘤模型具有显著疗效(抑瘤率41.1％)，其效果与环磷酰胺无明显差异；且可能与环磷酰胺相同，具有防止肝脏肿大的疗效。但由于此给药剂量下，小鼠净体重变化(除瘤后体重与初始体重比较)较小，与环磷酰胺作用相似，推测可能对机体体重及饮食量有一定程度的抑制作用，其抑 制作用可能与给药量成正比关系。在给药剂量为240mg/kg时，其肿瘤抑制率(抑瘤率64.4％)甚至优于环磷酰胺(抑瘤率52.9％)。此外，本次实验模型组别平均肿瘤重量较轻(<1g)，可能对实验最终判断结果有一定程度的影响。
(二)C310-6抗Lewis肿瘤实验
该实验目的是采用lewis荷瘤小鼠模型考察C310-6抗肺癌肿瘤作用。
实验步骤如下：
1、小鼠Lewis肺癌荷瘤模型建立
取接种肿瘤8-13天状态良好的荷瘤脱臼处死，体表酒精消毒，在无菌(超净台)环境下剥离小鼠肿瘤至盛有生理盐水的无菌平皿，剪至小块，将小块肿瘤放入组织匀浆器，按体积比1:3左右加入生理盐水匀浆，匀浆液倒入50ml无菌离心管，备用。用1ml注射器在C57BL/6小鼠右腋下注射接种0.2ml，肿瘤细胞混悬液的制备均在无菌条件下(超净工作台中)完成。从取出肿瘤腹水至肿瘤接种完毕在60分钟内完成。
2、药物制备方法
C310-6灌胃剂：称定一定重量的C310-6样品至研钵中，加入一定量溶剂体积2％吐温-80，充分研磨后再加入一定量体积的生理盐水，混匀，配制浓度24mg/ml、8mg/ml、2.7mg/ml，备用。
环磷酰胺灌胃剂：去掉环磷酰胺片的薄膜衣后进行称取，称取一定重量至研钵中，加入一定量体积的生理盐水，充分研磨、混匀，配制浓度3.4mg/ml；，备用。
3、分组及给药方法
将60只实验小鼠共分为6组，每组10只，雌雄各半，分为①C310-6低剂量(27mg/kg)组、②C310-6中剂量(80mg/kg)组、③C310-6高剂量(240mg/kg)组、④环磷酰胺组、⑤模型组、⑥空白组，以上除空白组及模型组外，其余各组在注射肿瘤混悬液后，均每日给药一次，每次每只0.2ml，连续给药10天，空白组及模型组在相同给药时间及给药时长灌胃给予2％吐温-80水溶液，连续灌胃10天。
4、观察指标
4.1大体状态
每日对小鼠进行体重、饮食量的称定并记录，于最后一次计算小鼠除瘤后的体重净重。
4.2瘤重及肿瘤抑制率
每日对小鼠右腋下进行观察，于最后一次给药24h后，解剖并取出肿瘤组织，称取肿瘤重量，按下述公式计算肿瘤生长抑制率。
4.3肺组织重量及癌变肺部转移率
于最后一次给药24h后，解剖并取出肺组织，称取肺组织重量，并观察肺组织是否有变化并统计有肺癌转移的小鼠数量。
5、数据统计
各组别小鼠相应数据均以表示，采用SPSS软件进行统计，各组别采用one-wayANOVA检验。
6、实验结果
由表8、图13～图17实验结果可知，C310-6在给予剂量为240mg/kg，服药天数为10天时与Lewis肺癌肿瘤模型小鼠比较有极显著差异(P<0.01)，此剂量与环磷酰胺组比较无明显差异。
在肺转移方面，各组均出现20％-50％的肺转移现象，但无统计学意义。
在净体重变化方面，C310-6各给药组及环磷酰胺组均出现体重下降现象，且各组与模型组及空白组比较均有极显著差异(P<0.01)。
在给药治疗期间，C310-6各给药组小鼠体重均出现先下降、后波动上升继而维持平稳的状态；环磷酰胺组则为先下降后维持在低体重状态；模型组与空白则均为波动上升后维持在一定体重水平。
在给药治疗期间，C310-6各给药组小鼠平均饮食量均表现出给药中期较高，首尾期较低的表现；环磷酰胺组饮食量一直保持在较低水平；空白组饮食量一直保持在较高水平；模型组则表现为饮食量逐渐减少。
表8：抗肺癌肿瘤试验结果()
注：与模型组比较**P<0.01、*P<0.05；与空白组比较※※P<0.01、※P<0.05。
综上所述，推测C310-6在给药剂量为240mg/kg、服药剂量为10天时，其对小鼠Lewis肺癌模型具有较好的疗效，但服药机体可能会出现体重下降现象，但其引起的不良反应强度要小于环磷酰胺。
可见，本发明所述麦角甾醇类化合物和/或麦角甾醇类化合物晶体经过实验验证具有抗癌活性：在离体细胞活性水平上，采用实时无标记细胞功能分析仪和MTT法对该化合物进行活性检测，实验结果显示此化合物具有明显的抑制肺癌和肝癌细胞生长的活性；在整体动物水平上，实验结果也显示此化合物具有明显的和肺癌活性。所以该化合物可与药物赋形剂制成适合临床使用的抗癌药物。
上述参照具体实施方式对该一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种麦角甾醇类化合物的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)取烘干的蛹虫草子实体为原料，进行超微粉碎得到超微粉；
(2)超微粉进行水煮提取，所述水煮提取的温度为70～100℃，水煮时间为1～2h，离心，取沉淀，重复1～5次；
(3)将步骤(2)得到的沉淀与有机试剂按重量体积比Kg：L计1:3～8进行混合浸提，有机试剂为丙酮、乙醇、甲醇中的一种或几种的组合，收集浸提后的上清，进行离心，取上清液，浓缩、干燥，得到C310-6粗提取物；
(4)取步骤(3)得到C310-6粗提取物用流动相进行全部溶解，所述流动相为流动相A或流动相B或两者的组合，经制备液相DAC正相色谱柱进行分离，采用二元流动相体系进行洗脱分离，所述流动相A和流动相B采用正己烷、乙酸乙酯、乙醇、二氯甲烷、甲醇中的一种或几种的组合，洗脱方式梯度洗脱60min，检测波长为260nm，收集目的峰，干燥后得到C310-6中间物组分；
(5)取步骤(4)得到C310-6中间物组分用流动相进行全部溶解，所述流动相为流动相A或流动相B或两者的组合，经制备液相DAC正相色谱柱进行分离，采用二元流动相体系进行洗脱分离，所述流动相A和流动相B采用正己烷、乙酸乙酯、乙醇、二氯甲烷、甲醇中的一种或几种的组合，洗脱方式为梯度洗脱180min，检测波长为260nm，收集目的峰，干燥后得到目标单体化合物C310-6,具有(Ⅰ)所示化学结构式，
2.一种麦角甾醇类化合物晶体的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)将麦角甾醇类化合物按每150mg加入3ml的良性溶剂，放置于16℃条件下自然挥发，保温静止，析晶，待溶液挥发至1/3时，捞取底部晶体，即得到单晶晶体，所述良性溶剂为正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的一种或几种任意比例的组合，所述麦角甾醇类化合物具有(Ⅰ)所示化学结构式，
(2)将所得到的单晶晶体抽滤，用-20℃的正己烷清洗，即得，所得晶体的单晶晶型为单斜晶系，其晶轴为a＝9.848(2)，b＝7.5529(15)，c＝35.074(7)；晶面夹角为α＝90°，β＝95.62(3)°，λ＝90°。
3.权利要求1所得麦角甾醇类化合物和/或权利要求2所得麦角甾醇类化合物晶体在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的麦角甾醇类化合物和/或麦角甾醇类化合物晶体的应用，其特征在于：所述肿瘤为肝癌、肺癌、乳腺癌、子宫癌或肠癌。
5.一种具有抗肿瘤作用的药物组合物，包括权利要求1所得麦角甾醇类化合物和/或权利要求2所得麦角甾醇类化合物晶体以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
CN201410244394.5A 2014-06-04 2014-06-04 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用 Expired - Fee Related CN104327147B (zh)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410244394.5A CN104327147B (zh) 2014-06-04 2014-06-04 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用
JP2016524666A JP6170246B2 (ja) 2014-06-04 2014-07-02 エルゴステロール系化合物、並びにその製造方法及び使用
PCT/CN2014/081517 WO2015184668A1 (zh) 2014-06-04 2014-07-02 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用
US15/227,936 US9896474B2 (en) 2014-06-04 2016-08-03 (3A,9B,10A,13A,14B,17A,20S,22E)-ergosta-5,7,22-trien-3-ol and methods of preparing and using the same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410244394.5A CN104327147B (zh) 2014-06-04 2014-06-04 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104327147A CN104327147A (zh) 2015-02-04
CN104327147B true CN104327147B (zh) 2016-11-23

Family

ID=52401962

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410244394.5A Expired - Fee Related CN104327147B (zh) 2014-06-04 2014-06-04 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用

Country Status (4)

Country Link
US (1) US9896474B2 (zh)
JP (1) JP6170246B2 (zh)
CN (1) CN104327147B (zh)
WO (1) WO2015184668A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105601692B (zh) * 2015-09-01 2018-04-17 天津耀宇生物技术有限公司 黄绿蜜环菌中麦角甾醇单体化合物的提取方法及其应用
CN111329871A (zh) * 2020-03-13 2020-06-26 贵州贵安精准医学研究院股份有限公司 蛹虫草预防和治疗肝癌的产品制备方法及应用
CN111393497A (zh) * 2020-03-13 2020-07-10 贵州贵安精准医学研究院股份有限公司 一种预防和治疗肺癌的天然产品制备方法及应用
CN114431070B (zh) * 2021-12-31 2022-11-25 重庆大学 一种蛹虫草规模化生产方法与应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05508655A (ja) * 1990-06-21 1993-12-02 トラスティーズ・オブ・ボストン・ユニバーシティー ビタミンｄ前駆体からなる組成物、それらの類似体およびそれらの用途
US5789397A (en) * 1991-01-08 1998-08-04 Bone Care International, Inc. Methods for preparation and use of 1A,24(S)-dihydroxy vitamin D2
ES2140433T3 (es) * 1992-02-27 2000-03-01 Duphar Int Res Metodo de preparar esteroides 9beta, 10alfa-5,7-dienicos.
JP3228488B2 (ja) * 1993-12-24 2001-11-12 株式会社クラレ ２０−エピステロイド誘導体およびその製造方法
JPH0912594A (ja) * 1995-06-30 1997-01-14 Earth Chem Corp Ltd ステロイド骨格を有する化合物類及びそれらによるゴキブリ拘束物質の製造方法ならびにステロイド骨格を有する新規化合物
IT1319654B1 (it) * 2000-11-15 2003-10-23 Farmabios S R L Ora Farmabios Processo di isomerizzazione di 6beta-fluoro steroidi neicorrispondenti 6alfa-fluoro derivati.
JP4845393B2 (ja) * 2005-03-04 2011-12-28 ゲオール化学株式会社 トリテルペン化合物を含有する抗炎症剤
AU2006300541B8 (en) * 2005-09-30 2010-07-08 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Agent for improving insulin resistance
CN100526330C (zh) * 2005-12-09 2009-08-12 包海鹰 簇生沿丝伞石油醚提取物及制备方法以及在制备治疗肿瘤的药物用途
AU2007217366A1 (en) * 2006-02-27 2007-08-30 The Regents Of The University Of California Oxysterol compounds and the hedgehog pathway
US20080249075A1 (en) * 2007-03-22 2008-10-09 Solvay Pharmaceuticals Gmbh C11 Modified Retrosteroids as Progesterone Receptor Modulator Compounds
WO2008128783A2 (en) * 2007-04-24 2008-10-30 Dsm Ip Assets B.V. Photochemical process for the preparation of a previtamin d
JP2010229077A (ja) * 2009-03-27 2010-10-14 Hiroko Ito アポトーシス誘導剤
WO2011073419A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) New steroid inhibitors of pgp for use for inhibiting multidrug resistance
CN102070695B (zh) * 2010-12-10 2012-10-31 浙江大学 麦角甾醇衍生物的制备及应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015184668A1 (zh) 2015-12-10
CN104327147A (zh) 2015-02-04
US9896474B2 (en) 2018-02-20
JP2016523934A (ja) 2016-08-12
US20160340383A1 (en) 2016-11-24
JP6170246B2 (ja) 2017-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102229598B (zh) 一种对映-贝壳杉型二萜类化合物及其制备方法和应用
CN104327147B (zh) 一种麦角甾醇类化合物及其制备方法与应用
CN105330716A (zh) 一种新的睡茄内酯类化合物及其制备方法和医药用途
CN105920064A (zh) 以西洋参茎叶为原料提取分离出的天然活性成分及其应用
CN104341376B (zh) 五指山参中一种新倍半萜醌类化合物及其制备方法和应用
CN103845420B (zh) 一种塔黄提取物及其应用
CN103610682B (zh) 3α-羟基-30-齐墩果-12,20(29)-二烯-28-酸的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN105687179A (zh) 猫爪草提取物以组合物在制备治疗癌症的药物中的应用
CN112830936B (zh) 核黄素化合物、其制备方法及应用
CN107011357A (zh) 一种酸浆苦素b的制备方法及其在抗肺部肿瘤制药中的应用
CN104447631B (zh) 一种二萜醇酯类化合物千金子1号晶体的制备方法
CN105418717A (zh) 一种用于治疗白血病的甾体类化合物及其制备方法
CN105503800A (zh) 一种新的佛木内酯类化合物及其制备方法和医药用途
CN105669816A (zh) 一种新的甾体类化合物及其制备方法和医药用途
CN105012327A (zh) 甾体皂苷rce-4在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途
CN113582828B (zh) 一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途
CN115746079B (zh) 一种薯蓣皂苷元衍生物及其制备方法与用途
CN103694302B (zh) 2α,3β-二羟基-30-齐墩果-12,20(29)-二烯-28-酸的制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN117186166B (zh) 芳香性甾体类化合物及其制备方法和应用
CN107936001A (zh) 芹菜素‑8‑C‑β‑D‑木糖苷及其制备方法和应用
CN109942661B (zh) 甘薯谷甾醇糖苷不饱和脂肪酸、提取物及其制备方法和应用
CN104447632B (zh) 一种二萜醇酯类化合物千金子1号的制备方法
CN106588944B (zh) 一种藏药内生真菌来源的化合物及其制备方法和应用
CN104987357A (zh) 一种具有抗肿瘤活性化合物的分离制备方法
CN105601692A (zh) 黄绿蜜环菌中麦角甾醇单体化合物的提取方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20161123

Termination date: 20210604

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee