CN113582828B - 一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途，属于化学药物领域。该天然化合物是式I所示的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其水合物、或其溶剂合物。本发明还提供了这些天然化合物在制备治疗肝癌的药物中的用途。本发明从卷柏中提取的化合物对人肝癌细胞具有抑制作用，其中化合物1对肝癌细胞的抑制效果最优，显著优于阳性药索拉菲尼。本发明化合物具有有潜在的抗肝癌的用途，可以用于制备抗肝癌的药物，具有优良的应用前景。

Description

一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于化学药物领域，具体涉及一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途。
背景技术
原发性肝癌目前是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在全球肝癌病例中排名第五，死亡率第二。其中，原发性晚期肝细胞癌的病例大约占原发性晚期肝癌的75-85％。虽然随着我国现代医疗和技术的不断发展对于肝细胞癌的诊断和治疗技术有了很大的发展和改善，但因其早期起病比较隐匿，其发病率和死亡率均呈现出逐年上升的发展趋势。
化学靶标治疗药物的晚期治疗是常用的晚期原发性肝癌晚期治疗的方法和其手段之一。索拉菲尼是一种目前广泛用于肝癌靶向药物的诊断和晚期治疗的化学靶向药物，也是目前广泛用于治疗临床晚期原发性肝癌的一种较为标准的靶向诊断和治疗的药物方法。但是，使用过程中，索拉菲尼的毒副作用也比较大，如可能会出现腹泻、皮疹、脱发等症状，还可能会引起充血性心力衰竭以及高血压等。发现新的具有低毒副作用的抗肝癌药物是医药领域急需解决的重要课题。
卷柏属植物，隶属蕨类植物门卷柏科(Selaginella)，单科单属，现记载有700余种。卷柏属植物具有多种生物酶合成机制和显著的植物分子结构多样性。现代植物学发现卷柏中有许多具有生物活性的化学成分，包括黄酮类、苯丙素类、炔酚类、甾体类、蒽醌类等，因此卷柏具有良好的药用价值。卷柏的传统药用功效主要为破血散瘀、活血通经，广泛应用于腹痛、便血、尿血、糖尿病、肺炎、乳腺炎、风湿病等。现代药理表明卷柏具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老、免疫调节、降血糖等作用。同时，随着卷柏基因组的测序的发展，卷柏属植物的研究意义越来越大。
如果能从卷柏精准提取到具有良好功效的化合物，对天然小分子药物的发展将具有促进作用。但是，卷柏中含有的化合物繁多，如并非所有化合物都具有上述药理作用，因此，从卷柏中提取到具有相关生物活性的化合物，对天然小分子药物发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗肝癌的天然化合物及其制备方法和用途。
本发明提供了式I所示的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其水合物、或其溶剂合物：
Figure BDA0002980668190000021
其中，
R1～R6分别独立选自氢、羟基、-C(O)R7、被0～5个R8取代的3～6元不饱和环烷基、
Figure BDA0002980668190000022
R7选自被0～5个R8取代的3～6元不饱和环烷基、
Figure BDA0002980668190000023
R9、R10、R9’、R10’、R9”分别独立选自被0～5个R8取代的3～6元不饱和环烷基；
R11～R14分别独立选自氢、羟基、被0～5个R8取代的3～6元不饱和环烷基、
Figure BDA0002980668190000024
或者相邻两个碳原子上的取代基连接形成
Figure BDA0002980668190000025
R15选自氢、-C(O)R7’、被0～3个R8取代的C1～C8烷基；
R21～R25分别独立选自氢、C1～C8烷氧基；
R31～R34分别独立选自氢、羟基；
R41～R45、R51～R55分别独立选自氢、羟基、C1～C8烷氧基；
R7’选自氢、C1～C8烷基；
R8选自C1～C8烷基、羟基；
当R11～R14中有一个选自
Figure BDA0002980668190000031
时，R15不选自氢、或者被羟基取代的甲基。
进一步地，
R1～R6分别独立选自氢、羟基、-C(O)R7、被0～1个R8取代的苯基、
Figure BDA0002980668190000032
Figure BDA0002980668190000033
R7选自被0～1个R8取代的苯基、
Figure BDA0002980668190000034
R9、R10、R9’、R10’、R9”分别独立选自被0～1个R8取代的苯基；
R11～R14分别独立选自氢、羟基、被0～1个R8取代的苯基、
Figure BDA0002980668190000035
或者相邻两个碳原子上的取代基连接形成
Figure BDA0002980668190000036
R15选自氢、-C(O)R7’、被0～1个R8取代的C1～C3烷基；
R21～R25分别独立选自氢、C1～C3烷氧基；
R31～R34分别独立选自氢、羟基；
R41～R45、R51～R55分别独立选自氢、羟基、C1～C3烷氧基；
R7’选自氢；
R8选自羟基。
进一步地，所述化合物如式II所示：
Figure BDA0002980668190000041
其中，R15选自甲基或-CHO。
进一步地，所述化合物为如下化合物之一：
Figure BDA0002980668190000042
本发明还提供了前述的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其水合物、或其溶剂合物在制备治疗癌症的药物中的用途；
优选地，所述癌症为肝癌。
本发明还提供了一种药物组合物，它是由前述的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其水合物、或其溶剂合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
本发明还提供了式III所示的化合物、或其盐、或其立体异构体、或其水合物、或其溶剂合物在制备治疗癌症的药物中的用途：
Figure BDA0002980668190000051
其中，R91～R100分别独立选自氢、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、羟基、氨基、硝基；
优选地，R91～R100分别独立选自氢、羟基；
更优选地，所述化合物的结构如下：
Figure BDA0002980668190000052
进一步地，所述癌症为肝癌。
本发明还提供了一种从卷柏中提取化合物的方法，它包括如下步骤：
(1)卷柏经70％乙醇加热回流提取后，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；
(2)正丁醇部位上大孔吸附树脂柱，然后依次用30％、50％、70％和95％乙醇水溶液梯度冲柱对正丁醇部位进行分离，取50％乙醇水溶液与硅胶混合均匀后上硅胶柱，使用二氯甲烷和甲醇混合溶液为流动相梯度洗脱，分离得到100个流分Fr.B1-B100，每个流分250ml；选用流分Fr.B12-B15合并后经ODS反向柱层析甲醇水溶液梯度洗脱得到亚流分151个Sub-Fr.1-151，每个流分30ml；亚流分Sub-Fr.80经制备高效液相色谱分离得到化合物1；
(3)乙酸乙酯部位经硅胶柱，使用二氯甲烷和甲醇混合溶液为流动相梯度洗脱，按10个洗脱梯度得10个流分A-J；二氯甲烷和甲醇体积比为96:4的流分B经Sephadex LH-20柱，以无水甲醇等度洗脱，得到40个亚流分Fr.B1-B40，每个流分100ml，分别合并Fr.B5-B10和Fr.B11-B14；
(4)流分Fr.B5-B10经制备高效液相色谱分离得到化合物2、3、6；
(5)流分Fr.B11-B14经制备高效液相色谱分离得到化合物4、5、7；
(6)将步骤(3)得到的二氯甲烷和甲醇体积比为94:6的流分C用Sephadex LH-20柱层析，50％甲醇水溶液等度洗脱，共得到40个流分Fr.C1-C40，每个流分50ml；选用流分Fr.C34经ODS反向柱层析得到亚流分73个Sub-Fr.1-73，每个流分30ml；
(7)将步骤(6)得到的亚流分Sub-Fr.32-37经制备高效液相色谱分离获得化合物8；亚流分Sub-Fr.48-50经制备高效液相色谱分离得到化合物9；亚流分Sub-Fr.45-46经制备高效液相色谱分离得到化合物10；亚流分Sub-Fr.65-66经制备高效液相分离得到化合物11；亚流分Sub-Fr.59经制备高效液相色谱分离得到化合物12；
所述化合物1～12的结构式如下：
Figure BDA0002980668190000061
进一步地，
步骤(1)中，所述回流提取两次；
和/或，步骤(2)中，所述硅胶为200-300目的硅胶；
和/或，步骤(2)中，所述二氯甲烷和甲醇混合溶液梯度洗脱时二氯甲烷和甲醇的体积比为98:2，96:4，94:6，92:8，90:10，8:2，7:3，6:4，1:1，0:100；
和/或，步骤(2)中，所述经ODS反向柱层析甲醇水溶液梯度洗脱时甲醇水溶液的浓度为30％，40％，50％，60％；
和/或，步骤(3)中，所述二氯甲烷和甲醇混合溶液梯度洗脱时二氯甲烷和甲醇的体积比为98:2，96:4，94:6，92:8，90:10，8:2，7:3，6:4，1:1，0:100。
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
本发明中所述化合物的结构均是指能够稳定存在的结构。
本发明中碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀(Ca～Cb)烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，C1～C8烷基是指包含1～8个碳原子的直链或支链烷基；C1～C8烷氧基是指包含1～8个碳原子的烷氧基。
本发明中，3～6元不饱和环烷基是指由3～6个碳原子组成的单环环烷基，其中该环烷基中含有一个或多个双键，如苯基。
本发明从卷柏中提取的化合物对人肝癌细胞具有抑制作用，其中化合物1对肝癌细胞的抑制效果最优，显著优于阳性药索拉菲尼。本发明化合物具有有潜在的抗肝癌的用途，可以用于制备抗肝癌的药物，具有优良的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
1、化合物提取的主要原料、试剂以及仪器设备
实验所用卷柏采自中国湖南省邵阳市，由李劲平教授(中南大学湘雅药学院)鉴定。标本(JB-005)存放于湖南师范大学医学院天然药物化学实验室。试验所用的主要试剂及仪器设备如表1和表2所示。
表1.试验用的试剂及来源
Figure BDA0002980668190000081
表2.试验用的仪器设备及型号
Figure BDA0002980668190000082
2、药理作用研究的主要原料、试剂以及仪器设备
细胞系包括人肝癌SMMC-7721细胞和人肝癌Hep-G2细胞，均来源于中国科学院细胞资源中心。试验所用的主要试剂及仪器设备如表3和表4所示。
表3.药理实验所用试剂
Figure BDA0002980668190000083
Figure BDA0002980668190000091
表4.药理实验所用仪器设备
Figure BDA0002980668190000092
实施例1、化合物1-12的制备
卷柏全草(30kg)经70％乙醇水溶液加热回流提取2次，每次提取2h，合并提取液，减压回收溶剂，得浓缩后提取液5L。提取液分散于水中，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚部位(60g)，乙酸乙酯部位(330g)和正丁醇部位(280g)。
卷柏正丁醇部位用湿法上大孔吸附树脂柱，依次选用30％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液、70％乙醇水溶液、95％乙醇水溶液梯度冲柱对卷柏正丁醇部位进行分离。选用50％乙醇水溶液部分称重后用200-300目的硅胶均匀混合后上硅胶柱，按照梯度洗脱方式以二氯甲烷：甲醇(体积比分别为98:2，96:4，94:6，92:8，90:10，8:2，7:3，6:4，1:1，0:100)为流动相，共得到100个流分(Fr.B1-B100)，每个流分250ml；选用50％乙醇水溶液部分的流分12-15(Fr.B12-B15)合并后经ODS反向柱层析甲醇水溶液梯度洗脱(甲醇水溶液梯度洗脱的浓度分别为30％，40％，50％，60％)得到亚流分151个(Sub-Fr.1-151)，每个流分30ml，亚流分80(Sub-Fr.80，浓度为50％的洗脱部分)直接经制备高效液相色谱分离得到化合物1。
乙酸乙酯部位经硅胶柱，以二氯甲烷：甲醇(98:2，96:4，94:6，92:8，90:10，8:2，7:3，6:4，1:1，0:100)梯度洗脱，共10个洗脱比例，得到10个流分(A-J)，流分B(二氯甲烷：甲醇体积比为96：4)经Sephadex LH-20柱，以无水甲醇等度洗脱，得到40个流分(Fr.B1-B40)，每个流分100ml，经HPLC-DAD分析后，合并Fr.B5-B10，Fr.B11-B14。流分Fr.B5-B10经制备高效液相色谱分离得到化合物2，3，6。流分Fr.B11-B14经制备高效液相色谱分离得到化合物4，5，7。
将流分C(二氯甲烷：甲醇体积比为94：6)流分经过减压回收溶剂之后用SephadexLH-20柱层析，50％甲醇水溶液等度洗脱，得到卷柏乙酸乙酯部位94:6的流分共40个(Fr.C1-C40)，每个流分50ml，选用94:6的流分34(Fr.C34)经ODS反相柱层析得到亚流分共73个(Sub-Fr.1-73)，每个流分30ml；亚流分32-37(Sub-Fr.32-37)制备高效液相色谱分离得到化合物8；亚流分48-50(Sub-Fr.48-50)经制备高效液相分离得到化合物9；亚流分45-46(Sub-Fr.45-46)经制备高效液相色谱分离得到化合物10；亚流分65-66(Sub-Fr.65-66)经制备高效液相分离得到化合物11；亚流分59(Sub-Fr.59)经制备高效液相色谱分离得到化合物12。
化合物1-12的结构式和表征数据如下：
化合物1：
Figure BDA0002980668190000101
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HR-ESI-MS m/z:239.0712[M+H]+(calcd forC15H11O3,239.0708)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):6.87(d,J＝8.6Hz),6.92(d,J＝8.6Hz),7.56(d,J＝8.6Hz),8.09(d,J＝8.6Hz)。13C NMR(100MHz,DMSO-d6):85.8,94.4,110.0,115.1,115.6,128.8,134.9,131.8,160.4,163.7,177.1.
化合物2：
Figure BDA0002980668190000102
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HPLC-UV(ACN-H2O)λmax nm:280,435；HR-ESI-MS:m/z501.1703[M+H]+(calcd for C33H25O5,501.1702)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):6.56(s),6.62(d,J＝8.0Hz),6.63(d,J＝8.4Hz),6.70(d,J＝8.4Hz),6.68(d,J＝8.4Hz),6.94(d,J＝8.4Hz),6.94(dd,J＝8.0Hz),6.97(d,J＝8.4Hz),7.07(d,J＝8.0Hz),7.14(d,J＝8.0Hz),7.50(d,J＝8.4Hz).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):164.1,115.8,133.5,130.6,200.9,137.6,129.7,129.1,128.5,141.0,140.5,131.3,116.1,157.8,133.0,123.2,145.8,132.9,116.0,158.0,132.4,130.1,115.8,158.4,136.1.
化合物3：
Figure BDA0002980668190000111
红色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HPLC-UV(ACN-H2O)λmax nm:256,295,471；HR-ESI-MSm/z:359.0920[M-H]-(calcd for C22H15O5,359.0919)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):6.70(d,J＝8.4Hz),6.77(d,J＝8.4Hz),6.86(d,J＝8.0Hz),7.02(s),7.30(d,J＝8.0Hz),7.36(d,J＝8.4Hz),7.66(d,J＝8.4Hz).13CNMR(100MHz,DMSO-d6):112.7,116.1,116.6,119.0,124.1,126.0,129.7,130.2,131.6,133.3,134.4,135.0,161.6,161.8,164.2,164.7,193.8,195.1.
化合物4：
Figure BDA0002980668190000112
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HPLC-UV(ACN-H2O)λmax nm:284,310；HR-ESI-MS m/z:499.1535[M+H]+(calcd for C33H23O5,499.1545)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6):6.63(d,J＝8.0Hz),6.75(d,J＝8.5Hz),6.75(s),6.82(s),6.83(d,J＝8.0Hz),6.96(d,J＝8.0Hz),7.53(d,J＝8.5Hz),7.65(d,J＝8.5Hz),7.65(d,J＝8.5Hz),7.69(d,J＝8.0Hz).13C NMR(125MHz,DMSO-d6):64.1,98.2,110.3,112.7,114.8,115.3,116.2,120.8,126.4,126.9,129.6,131.5,134.8,134.9,142.9,154.0,155.1,156.4,156.6,157.4,159.0.
化合物5：
Figure BDA0002980668190000113
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HPLC-UV(ACN-H2O)λmax nm:287,299,317；HR-ESI-MSm/z:497.1746[M+H]+(calcd for C34H25O4,497.1753)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):3.68(s),6.59(d,J＝8.8Hz),6.65(d,J＝2.2Hz),6.72(d,J＝8.6Hz),6.77(d,J＝8.0,2.2Hz),6.77(d,J＝8.8Hz),6.88(d,J＝8.6Hz),6.98(d,J＝8.8Hz),7.09(d,J＝8.8Hz),7.21(d,J＝7.6Hz),7.34(t,J＝7.6Hz),7.76(d,J＝7.6Hz),7.69(d,J＝8.0Hz).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):54.4,64.6,87.1,96.4,112.4,112.9,113.4,114.8,115.3,116.1,119.5,120.9,121.6,128.2,130.0,130.2,132.7,132.9,135.1,141.2,151.4,156.8,155.8,158.2,158.6.
化合物6：
Figure BDA0002980668190000121
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HPLC-UV(ACN-H2O)λmax nm:274,318,360；HR-ESI-MSm/z:525.1695[M+H]+(calcd for C35H25O5,525.1702)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):6.34(dd,J＝8.0,2.5Hz),6.43(dd,J＝8.0,2.0Hz),6.62(d,J＝8.2Hz),6.82(d,J＝8.5Hz),6.85(d,J＝8.5Hz),6.87(d,J＝8.2Hz),7.32(dd,J＝8.0,2.5Hz),7.50(dd,J＝8.0,2.0Hz),7.50(d,J＝8.0Hz),7.99(d,J＝8.0Hz).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):82.8,101.8,114.1,115.5,127.6,128.5,128.7,128.9,129.8,130.1,130.4,130.5,131.5,133.0,138.5,139.8,141.2,141.7,147.8,156.9,158.1,160.9,186.0.
化合物7：
Figure BDA0002980668190000122
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。HPLC-UV(ACN-H2O)λmax nm:230,274,316；HR-ESI-MSm/z:455.1117[M+H]+(calcd for C27H19O7,455.1131)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6):5.70(t,J＝5.5Hz),6.53(d,J＝7.5Hz),6.66(d,J＝8.5Hz),6.78(d,J＝7.5Hz),6.86(d,J＝8.5Hz)7.35(d,J＝8.0Hz),7.67(d,J＝8.0Hz)；13C NMR(125MHz,DMSO-d6):61.7,84.2,99.0,112.6,115.1,116.1,121.5,127.7,130.0,130.1,131.0,,133.2,140.5,142.5,156.7,158.4,160.7.
化合物8：
Figure BDA0002980668190000123
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):6.44(d,J＝8.6Hz),6.56(d,J＝8.4Hz),6.77(d,J＝8.4Hz),6.80(d,J＝8.6Hz),6.86(d,J＝8.6Hz),7.49(d,J＝8.0,Hz),7.62(d,J＝8.6Hz),7.74(d,J＝8.0Hz).13C NMR(125MHz,DMSO-d6):55.8,63.4,84.5,100.8,114.1,114.5,115.7,116.3,123.5,128.3,128.5,128.7,128.8,130.8,131.0,131.7,134.0,134.5,142.0,142.8,143.2,157.8,159.4,162.8,164.4,189.1.
化合物9：
Figure BDA0002980668190000131
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):3.32(s),3.32(s),5.84(s),6.54(d,J＝8.6Hz),6.54(d,J＝8.6Hz),6.62(d,J＝8.4Hz),6.64(d,J＝8.4Hz),6.66(d,J＝8.4Hz),6.86(d,J＝8.4Hz),7.18(d,J＝8.6Hz),7.18(d,J＝8.6Hz),7.35(d,J＝8.0Hz),7.71(d,J＝8.0Hz).13C NMR(125MHz,DMSO-d6):55.1,84.5,100.6,104.1,114.3,114.4,115.9,116.5,122.5,123.6,123.6,128.4,130.8,130.8,131.0,131.7,132.9,134.0,142.2,142.8,144.9,158.0,159.6,165.3.
化合物10：
Figure BDA0002980668190000132
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):3.78(s),6.48(d,J＝8.6Hz),6.55(d,J＝8.4Hz),6.56(d,J＝8.4Hz),6.77(d,J＝8.4Hz),6.80(d,J＝8.6Hz),6.86(d,J＝8.6Hz),6.87(d,J＝8.4Hz),7.33(d,J＝8.0Hz),7.55(t,J＝8.0Hz),7.60(d,J＝8.6Hz),7.64(d,J＝8.0Hz).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):54.5,85.8,93.8,114.1,114.5,115.7,116.3,123.5,127,127.1,129.2,129.4,130.8,131.0,131.7,134.0,134.5,141.3,143.2,143.4,156.6,157.9,161.5,169.5,187.7.
化合物11：
Figure BDA0002980668190000133
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):2.62(s),3.78(s),6.47(dd,J＝9.8,2.2Hz),6.55(d,J＝8.7Hz),6.64(d,J＝8.8Hz),6.76(d,J＝8.4Hz),6.77(d,J＝8.7Hz),6.86(d,J＝8.4Hz),6.99(d,J＝8.8Hz),7.23(d,J＝8.0Hz),7.60(d,J＝8.0Hz),7.60(dd,J＝9.8,2.2Hz).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):113.1,113.4,114.3,114.7,115.0,124.2,126.9,127.1,129.2,129.6,129.6,130.1,131.2,132.5,133.2,138.5,140.6,140.8,141.3,156.4,157.9,161.5,187.4,19.7,54.5,84.6,98.6.
化合物12：
Figure BDA0002980668190000141
黄色粉末，易溶于甲醇，DMSO。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):6.54(d,J＝8.0Hz),6.54(d,J＝8.0Hz),6.56(d,J＝8.4Hz),6.79(d,J＝8.3Hz),6.98(d,J＝8.4Hz),7.00(d,J＝8.3Hz),7.16(d,J＝8.0Hz),7.35(d,J＝8.0Hz),7.55(d,J＝8.0Hz),7.63(m).
以下通过具体试验例证明本发明的有益效果。
试验例1、本发明化合物抗肝癌的效果
一、试验方法
1、SMMC-7721细胞和Hep-G2细胞的培养
取SMMC-7721细胞、Hep-G2细胞的冻存细胞，用0.5ml双抗和5ml胎牛血清和4500mg/L的DMEM配制完全培养基，用配置好的完全培养基培养复苏细胞，并置于细胞培养箱中(5％CO2，37℃)培养，用倒置显微镜观察细胞生长的状态，用胰蛋白酶37℃消化处理，细胞脱壁后加完全培养基终止消化，培养瓶内的液体用用移液枪吹打成均匀细胞悬液，将细胞按比例分入装有完全培养基的的培养瓶中置于培养箱中继续培养。
2、CCK8试验
精密称取一定量待检测活性的化合物，用DMSO溶解配制成所确定的终药物浓度，将混匀的细胞悬液接种到96孔板后，把96孔板置于培养箱中培养(37℃，5％CO2)，24小时后向实验孔中加入含不同浓度药物处理细胞，每个浓度作为实验孔设置3个复孔。根据细胞生长情况24小时或者48小时后吸弃原培养液，PBS洗一遍后弃去上清液，在避光条件下向在实验孔和空白孔均中加入CCK8试剂10μl，将96孔板置培养箱1-4小时后使用酶标仪于450nm测定其OD值。
3、统计学分析
Spss for Macbook 24.0软件记录实验数据，所得的实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS概率计算化合物抗肝癌活性筛选的半数抑制浓度IC50值，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
4、试验结果
各化合物对人肝癌SMMC-7721细胞和人肝癌Hep-G2细胞的抑制活性如表5所示。
表5.化合物对人肝癌SMMC-7721细胞和人肝癌Hep-G2细胞的抑制活性
Figure BDA0002980668190000151
经CCK8检测发现：化合物10对人肝癌细胞无抑制作用，化合物1～9、11～12以及阳性对照药索拉菲对人肝癌细胞均有抑制作用。其中，化合物3、11和12对肝癌细胞抑制作用较弱，仅对部分肝癌细胞有抑制作用；化合物1对肝癌细胞的抑制作用最强，其抑制效果优于阳性对照药索拉菲尼。本发明化合物具有有潜在的抗肝癌的用途，可以用于制备抗肝癌的药物。
综上，本发明从卷柏中提取的化合物对人肝癌细胞具有抑制作用，其中化合物1对肝癌细胞的抑制效果最优，显著优于阳性药索拉菲尼。本发明化合物具有有潜在的抗肝癌的用途，可以用于制备抗肝癌的药物，具有优良的应用前景。

Claims (6)

1.一种化合物、或其盐、或其立体异构体，其特征在于：所述化合物为如下化合物之一：
Figure FDA0003724522270000011
2.权利要求1所述的化合物、或其盐、或其立体异构体在制备治疗癌症的药物中的用途；
所述癌症为肝癌。
3.一种药物组合物，其特征在于：它是由权利要求1所述的化合物、或其盐、或其立体异构体为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
4.一种化合物、或其盐、或其立体异构体在制备治疗癌症的药物中的用途：
所述化合物的结构如下：
Figure FDA0003724522270000012
所述癌症为肝癌。
5.一种从卷柏中提取化合物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)卷柏经70％乙醇加热回流提取后，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；
(2)正丁醇部位上大孔吸附树脂柱，然后依次用30％、50％、70％和95％乙醇水溶液梯度冲柱对正丁醇部位进行分离，取50％乙醇水溶液与硅胶混合均匀后上硅胶柱，使用二氯甲烷和甲醇混合溶液为流动相梯度洗脱，分离得到100个流分Fr.B1-B100，每个流分250ml；选用流分Fr.B12-B15合并后经ODS反向柱层析甲醇水溶液梯度洗脱得到亚流分151个Sub-Fr.1-151，每个流分30ml；亚流分Sub-Fr.80经制备高效液相色谱分离得到化合物1；
(3)乙酸乙酯部位经硅胶柱，使用二氯甲烷和甲醇混合溶液为流动相梯度洗脱，按10个洗脱梯度得10个流分A-J；二氯甲烷和甲醇体积比为96:4的流分B经Sephadex LH-20柱，以无水甲醇等度洗脱，得到40个亚流分Fr.B1-B40，每个流分100ml，分别合并Fr.B5-B10和Fr.B11-B14；
(4)流分Fr.B5-B10经制备高效液相色谱分离得到化合物2、3、6；
(5)流分Fr.B11-B14经制备高效液相色谱分离得到化合物4、5、7；
(6)将步骤(3)得到的二氯甲烷和甲醇体积比为94:6的流分C用Sephadex LH-20柱层析，50％甲醇水溶液等度洗脱，共得到40个流分Fr.C1-C40，每个流分50ml；选用流分Fr.C34经ODS反向柱层析得到亚流分73个Sub-Fr.1-73，每个流分30ml；
(7)将步骤(6)得到的亚流分Sub-Fr.32-37经制备高效液相色谱分离获得化合物8；亚流分Sub-Fr.48-50经制备高效液相色谱分离得到化合物9；亚流分Sub-Fr.45-46经制备高效液相色谱分离得到化合物10；亚流分Sub-Fr.65-66经制备高效液相分离得到化合物11；亚流分Sub-Fr.59经制备高效液相色谱分离得到化合物12；
所述化合物1～12的结构式如下：
Figure FDA0003724522270000031
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：
步骤(1)中，所述回流提取两次；
和/或，步骤(2)中，所述硅胶为200-300目的硅胶；
和/或，步骤(2)中，所述二氯甲烷和甲醇混合溶液梯度洗脱时二氯甲烷和甲醇的体积比为98:2，96:4，94:6，92:8，90:10，8:2，7:3，6:4，1:1，0:100；
和/或，步骤(2)中，所述经ODS反向柱层析甲醇水溶液梯度洗脱时甲醇水溶液的浓度为30％，40％，50％，60％；
和/或，步骤(3)中，所述二氯甲烷和甲醇混合溶液梯度洗脱时二氯甲烷和甲醇的体积比为98:2，96:4，94:6，92:8，90:10，8:2，7:3，6:4，1:1，0:100。
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