CN105693518B - 从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，它包括以下步骤：取三棱超微粉碎后加入乙酸乙酯进行提取，离心后沉淀加入95％乙醇提取，离心取上清，浓缩干燥；加入80％甲醇‑水溶液超声溶解至15～50mg/ml，在C₁₈反相硅胶色谱柱进行液相色谱分离，采用A纯水、B甲醇的二元流动相，洗脱方式为20％甲醇‑水洗脱5min、40％甲醇‑水洗脱7min、80％甲醇‑水洗脱13min、100％甲醇洗脱5min，根据紫外吸收光谱收集21‑22min洗脱液，经浓缩后真空冷冻干燥，得到纯度达99％以上的邻苯二甲酸二丁酯。该方法分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时。

Description

从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法及其应用

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法，以及该邻苯二甲酸二丁酯在制备抗肝癌、抗肺癌药物中的应用。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯是一种通常通过有机合成方法获得的小分子化合物，为无色透明或略带黄色的油状液体，其分子式为C₁₆H₂₂O₄，分子量为278.35，由一个类似与四元环的结构构成其骨架，结构式如下所示：

现今对于邻苯二甲酸二丁酯的应用主要包括以下几个方面：

一、用作气相色谱固定液、溶剂；

二、用作增塑剂，主要用作硝化纤维、醋酸纤维、聚氯乙烯等的增塑剂，还可用于制造油漆、粘接剂、人造革、印刷油墨、安全玻璃、赛璐珞、染料、杀虫剂、香料溶剂、织物润滑剂等；

三、作为纤维素酯、合成及天然橡胶、聚苯乙烯的增塑剂等，用于ICP-AES、AAS、AFS、ICP-MS、离子色谱等。

由于该物质被大众定格为有害的化工产品，且限定于通过合成的方法得到，对于该分子本身就是天然存在的小分子化合物研究甚少，并且局于以上所述的应用中，因此很多学者研究了它的毒理作用，如生殖毒性研究、神经毒性研究、急性毒性研究等，而对该小分子的药效研究比较少。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，以中药三棱为原材料，提供一种从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法，该方法采用高效液相色谱进行分离纯化，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时，得到的邻苯二甲酸二丁酯单体化合物纯度可以达到99％以上。

本发明所采用的技术方案为：

一种从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)超低温粉碎：取干燥的三棱为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，同时粉碎全过程用2～10℃的水作为超微破碎机内部冷却液，超微粉碎时间为5～20min，得到超微粉；

(2)溶剂提取：

(a)乙酸乙酯提取：在超微粉中加入乙酸乙酯，乙酸乙酯的加入体积(L)为超微粉质量(Kg)的8～10倍，70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀，然后重复1～3次，最终得到沉淀，为粗品A；

(b)乙醇提取：将粗品A干燥后，按料液比(g/mL)为1︰(6～10)加入95％乙醇，充分混匀后70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀，然后重复1～3次，将得到的上清合并，于旋转蒸发仪中浓缩后转移至60℃恒温鼓风干燥箱中干燥，得到粗品B；

(3)色谱分离：取粗品B用80％甲醇-水溶液(甲醇与水按体积比8︰2配比而成，下同理)20～80℃超声溶解至浓度为15～50mg/ml，过膜后通过高压制备液相色谱进行分离，采用的色谱柱为C₁₈反相硅胶色谱柱，采用A流动相为纯水、B流动相为甲醇的二元流动相体系，进样量为1～5mL/针，流动相流速为12～20mL/min，洗脱方式为：20％甲醇-水溶液洗脱5min、40％甲醇-水溶液洗脱7min、80％甲醇-水溶液洗脱13min、100％甲醇洗脱5min，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集21-22min洗脱液(11号峰)作为目的组分，经多功能膜分离系统浓缩后真空冷冻干燥，得到本发明目的化合物邻苯二甲酸二丁酯。

作为优选，所述步骤(1)中超微粉碎时间为12min。

作为优选，所述步骤(2)中乙酸乙酯提取和乙醇提取的提取温度为72℃。

作为优选，所述步骤(2)中粗品A与95％乙醇的料液比为1︰8。

作为优选，所述步骤(3)中粗品B溶解于80％甲醇-水溶液的浓度为25mg/ml。

作为优选，所述步骤(3)中色谱柱的直径为150mm，柱长为250mm，C18中硅球粒径为10μm

本发明进一步提供上述提取得到的邻苯二甲酸二丁酯单体化合物在制备抗肝癌药物中的应用。该邻苯二甲酸二丁酯单体化合物作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。

本发明还进一步提供上述提取得到的邻苯二甲酸二丁酯单体化合物在制备抗肺癌药物中的应用。该邻苯二甲酸二丁酯单体化合物作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。

按照本领域普通技术人员的理解，邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的给药剂量应根据治疗对象的年龄、体重、疾病严重程度等因素而定，一般可以是0.36-1.27mg/天。

由于本发明原料三棱为黑三棱科植物黑三棱的干燥块茎，其化学成分复杂，所以本发明选用二维高效液相色谱进行有效组分的提取。

首先：由于目的化合物邻苯二甲酸二丁酯属于极性较小的小分子物质，所以本发明先选用极性相对较小的乙酸乙酯作为粗溶剂，根据相似相溶原理，该溶剂可以尽可能多的溶解掉与目的邻苯二甲酸二丁酯极性相近的一些小分子杂质，该步骤为下面一次色谱分离就得到99％纯度的邻苯二甲酸二丁酯奠定了坚实的基础；

其次，利用邻苯二甲酸二丁酯易溶于乙醇的特点，进行乙醇提取，使得目的物邻苯二甲酸二丁酯尽可能多地溶解；

再次，在色谱分离的条件选择上：多次试验结果显示，C₁₈反相硅胶色谱柱对所提物质分离效果较好，而通过考察不同流动相组成和不同洗脱方式、流速及进样量后，结果显示采用本发明“20％甲醇-水溶液洗脱5min、40％甲醇-水溶液洗脱7min、80％甲醇-水溶液洗脱13min、100％甲醇洗脱5min”的洗脱方式其分离效果最佳，且进样量在1-5mL/针范围内、流动相在12-20mL/min范围内时重复性良好，得到馏分中目的化合物邻苯二甲酸二丁酯纯度高达99％，且目的峰清晰、峰容量相对较大、无拖尾等现象，与其他峰之间分离非常好，无交叉或重叠等现象，可直接用于后续制药等应用。

本发明利用液相色谱制备的方法成功从中药三棱中提取分离得到纯度达到99％的天然小分子化合物邻苯二甲酸二丁酯，该方法工艺简单，时间周期短，试剂耗费量小，制备量大，稳定可控，重复性好，实用性高，适用于大规模工业化生产的需要。

现在药理研究表明，三棱具有多种药理作用并被广泛应用于心脑血管疾病、妇科如子宫肌瘤各类疾病的治疗。因此从中分离出具有确切结构并且易于进行化学合成的集抗癌活性为一体的化合物必将为抗癌新药的研发奠定基础。本发明得到的三棱提取物邻苯二甲酸二丁酯性质稳定，通过细胞在线实时监测的方法观测其在体外的抗肿瘤作用，发现该化合物对肝癌Hep-g2细胞和肺癌A549细胞具有抑制作用；通过建立小鼠模型，发现该化合物对肺癌A549细胞系的选择性比较好。实验充分表明，该化合物在体内、体外实验抗肿瘤作用明显，具有抗癌药物开发潜力，为抗癌天然药物的开发提供了有力的依据。

附图说明

图1所示的是本发明从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法的高压液相色谱分离图；

图2所示的是本发明从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法得到的目的组分的HPLC验纯图；

图3所示的是本发明从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法得到的目的组分的H¹NMR核磁图；

图4所示的是本发明从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法得到的目的组分的C¹³NMR核磁图；

图5所示的是本发明从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法得到的目的组分的MS质谱图；

图6所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物对肺癌A549细胞的抑制作用；

图7所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物对肝癌Hep-G2细胞的抑制作用；

图8所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠平均瘤重；

图9所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠平均肺重；

图10所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠平均净体重变化；

图11所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠平均胸腺指数；

图12所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠平均脾指数；

图13所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠治疗期间平均体重；

图14所示的是本发明邻苯二甲酸二丁酯单体化合物抗肺癌实验小鼠治疗期间平均饮食量。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。

1、原料、材料：

三棱采摘自保定安国并经过鉴定；A549细胞、Hep-G2细胞由中国医学科学院血液病医院提供。

2、试剂：

95％乙醇够自天津市北方天医化学试剂厂；分析级甲醇购自天津康科德科技有限公司；色谱级乙酸乙酯购自Honeywell公司；DMSO购自Sigma公司；F-12K培养基购自LifeTechnologies Corporation；MEM培养基购自Life Technologies Corporation。

3、仪器设备：

分析纯水由密立博纯水仪生产；超微粉碎机购自山东三清不锈钢设备有限公司；台式冷冻离心机购自Thermo公司；恒温鼓风干燥箱购自上海一恒科学仪器有限公司；旋转蒸发仪上海亚容生化仪器厂；C₁₈反相硅胶色谱柱购自博纳艾吉尔有限公司；制备型高效液相色谱仪购自江苏汉邦科技有限公司；细胞实时监测仪购自艾森生物(杭州)有限公司；细胞培养箱购自立德泰勀(上海)科学仪器有限公司。

实施例1：

本实施例从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯单体化合物的方法，包括以下步骤：

⑴取干燥的三棱为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，同时粉碎全过程用4℃的水作为超微破碎机内部冷却液，超微粉碎时间为12min，得到超微粉。

⑵取上述三棱超微粉3Kg，经过三次乙酸乙酯提取，第一次提取：3kg超微粉加入24L乙酸乙酯，提取70min，提取结束，25℃，6000rpm离心30min，收集残渣。第二次提取：第一次残渣加提取入12L乙酸乙酯，提取70min，提取结束，25℃，6000rpm离心30min，收集残渣。第三次提取：第二次提取残渣加入9L乙酸乙酯，提取70min，提取结束，25℃，6000rpm离心30min，收集残渣，为粗品A。

将粗品A干燥后，按料液比(g/ml)为1︰8加入95％乙醇，充分混匀后72℃加热70min进行提取，离心取沉淀，然后重复3次，将得到的上清合并，于旋转蒸发仪中浓缩后转移至60℃恒温鼓风干燥箱中干燥，得到粗品B。

⑶将干燥至恒重的粗品B用流动相(80％甲醇-水溶液)配制成25mg/mL的溶液，溶解后过0.45μm的有机滤膜，得到三棱小分子提取物的样品溶液。

所述样品溶液进行高压制备液相色谱分离，采用的色谱柱为C₁₈反相硅胶色谱柱，硅球粒径为10μm，色谱柱直径为150mm，柱长为250mm。采用A流动相为纯水、B流动相为甲醇的二元流动相体系进行固相萃取，进样量为3mL/针，流动相流速为16mL/min，洗脱方式为：20％甲醇-水溶液洗脱5min、40％甲醇-水溶液洗脱7min、80％甲醇-水溶液洗脱13min、100％甲醇洗脱5min，检测波长为210nm。液相色谱图如图1所示，收集21-22min洗脱液(11号峰)作为目的组分，经多功能膜分离系统浓缩后真空冷冻干燥，得到本发明目的组分。

将以上得到的目的组分(11号峰)，进行HPLC高效液相分析，如图2所示，显示其纯度达到99％以上，为单一化合物。

将目的组分(11号峰)进行NMR碳谱氢谱及MS分析，核磁谱图如图3-5所示，判定该化合物为邻苯二甲酸二丁酯。

取本实施例得到的邻苯二甲酸二丁酯化合物进行以下实施例2～4肿瘤抑制试验。

实施例2：抑制人肺癌A549细胞生长的试验

细胞培养：

在5％C0₂，37℃，饱和湿度下，用F-12K(10％FBS+1％PS)培养基培养人肺癌A549细胞，选取对数期生长的细胞作为实验细胞。细胞计数后用培养基稀释为一定浓度的细胞悬液。

细胞生长情况监测：

将细胞实时监测仪放入5％C0₂，37℃饱和湿度培养箱中。取8孔板，每孔加入150μLF-12K培养基，放入细胞实时监测仪中走基线，走完基线后取出八孔板，每孔加入稀释好的A549细胞悬液345μL，至每孔细胞数约2×10⁴个，静置3min，在倒置显微镜下观察细胞是否均匀。每孔加入5μL稀释好的药物至终浓度为50μg/mL，含1％DMSO的培养基作为空白对照组，放入细胞实时监测仪中检测，检测完毕时拍照记录。

空白对照孔：不加药物，加1％DMSO；

实验孔：加药物(即发明目的产物邻苯二甲酸二丁酯)。

试验结果如图6所示。

结果表明：邻苯二甲酸二丁酯在50μg/mL时对A549细胞生长抑制较强。

实施例3：抑制人肝癌Hep-G2细胞生长的试验

细胞培养：

在5％C0₂，37℃，饱和湿度下，用MEM(10％FBS、1％PS)培养基培养人肺癌Hep-G2细胞，选取生长状态良好的细胞作为实验细胞。细胞计数后用培养基稀释为一定浓度的细胞悬液。

细胞生长情况监测：

将细胞实时监测仪放入5％C0₂，37℃饱和湿度培养箱中。取8孔板，每孔加入150μLMEM培养基，放入细胞实时监测仪中走基线，走完基线后取出八孔板，每孔加入稀释好的Hep-G2细胞悬液345μL，至每孔细胞数约4×10⁴个，静置3min，在倒置显微镜下观察细胞是否均匀。每孔加入5μL稀释好的药物至终浓度为所需药物浓度50μg/mL，含1％DMSO的培养基作为空白对照组，放入细胞实时监测仪中检测，检测完毕时拍照记录。

空白对照孔：不加药物，加入1％DMSO；

实验孔：加药物(即发明目的产物邻苯二甲酸二丁酯)。

实验结果如图7所示。

结果表明：邻苯二甲酸二丁酯在50μg/mL时能较好的抑制Hep-G2细胞生长。

实施例4：

1、药品及试剂

lewis肺癌瘤株(第2代)、三棱提取物样品(本发明目的产物邻苯二甲酸二丁酯)、环磷酰胺片(天津金世制药有限公司，20130101)、吐温80(北京博润莱特科技有限公司分装)。

2、试验动物

C57BL/6小鼠(18～25g)(动物许可证号：SCXK(京)2012-0001，合格证号：11400700020779)

3、器材及仪器

注射器、无菌平皿、离心管、手术器械、超净工作台、组织匀浆器。

4、实验步骤

4.1小鼠Lewis肺癌荷瘤模型建立

取接种肿瘤8-13天状态良好的荷瘤脱臼处死，体表酒精消毒，在无菌(超净台)环境下剥离小鼠肿瘤至盛有生理盐水的无菌平皿，剪至小块，将小块肿瘤放入组织匀浆器，按体积比1:3左右加入生理盐水匀浆，匀浆液倒入50ml无菌离心管，备用。用1ml注射器在C57小鼠右腋下注射接种0.2ml，肿瘤细胞混悬液的制备均在无菌条件下(超净工作台中)完成。从取出肿瘤腹水至肿瘤接种完毕在60分钟内完成。

4.2药物制备方法

三棱提取物灌胃剂：称定一定重量的三棱提取物样品至离心管中，加入所需溶剂体积2％吐温-80，涡旋混合后再加入所需体积的生理盐水，混匀后，备用。

环磷酰胺灌胃剂：去掉环磷酰胺片的薄膜衣后进行称取，称取一定重量至研钵中，加入所需体积的生理盐水，充分研磨、混匀后备用。

4.3分组及给药方法

将60只实验小鼠共分为6组，每组10只，雌雄各半，分为①低剂量(6.4mg/kg)组、②中剂量(19.2mg/kg)组、③高剂量(57.6mg/kg)组、④环磷酰胺组、⑤模型组、⑥空白组，以上除空白组及模型组外，其余各组在注射肿瘤混悬液后，均每日给药一次，每次每只0.2ml，连续给药10天，空白组及模型组在相同给药时间及给药时长灌胃给予2％吐温-80水溶液，连续灌胃10天。

4.4观察指标

(1)大体状态

每日对小鼠进行体重、饮食量的称定并记录，于最后一次计算小鼠除瘤后的体重净重。

(2)瘤重及肿瘤抑制率

每日对小鼠右腋下进行观察，于最后一次给药24h后，解剖并取出肿瘤组织，称取肿瘤重量，按下述公式计算肿瘤生长抑制率。

(3)肺组织重量

于最后一次给药24h后，解剖并取出肺组织，称取肺组织重量。

(4)胸腺重量及胸腺指数

于最后一次给药24h后，解剖小鼠并取出胸腺组织，称量胸腺重量，按下述公式计算胸腺比。

(5)脾脏重量及脾指数

于最后一次给药24h后，解剖小鼠并取出脾脏，称量脾脏重量，按下述公式计算脾指数。

4.5数据统计

各组别小鼠相应数据均以表示，采用SPSS软件进行统计，各组别采用one-wayANOVA检验。

实验结果

由表1、图8～图14实验结果可知，三棱提取物在给予剂量为19.2mg/kg，服药天数为10天时与Lewis肺癌肿瘤模型小鼠比较有显著差异(P<0.05)，此剂量与环磷酰胺组比较无明显差异。

表1三棱提取物抗肺癌肿瘤试验结果

注：与模型组比较**p<0.01、*p<0.05；与空白组比较^※※p<0.01、^※p<0.05。

荷瘤质量方面，三棱提取物单个给药组别与模型组比较均有显著差异(P<0.05)，环磷酰胺组与模型组比较有极显著差异(P<0.01)。

在净体重变化方面，除空白组外其余各组均出现体重下降现象，且中剂量与空白组比较有显著差异(P<0.05)，环磷酰胺组与空白组比较均有极显著差异(P<0.01)。

在肺脏重量方面，三棱提取物各剂量给药组别较其他三个组别略重，各组别之间比较无明显差别。

在胸腺指数方面，各组别均较空白组别指数小，三棱提取物较环磷酰胺组更低，高剂量及低剂量组与空白组比较有显著差异(P<0.05)，其余各组与空白组比较有极显著差异(P<0.01)。

在脾指数方面，各组别均明显高于空白组，且与空白组比较均有极显著差异(P<0.01)，其中环磷酰胺组的脾指数最低。

在给药治疗期间，低剂量组小鼠体重出现明显的下降外，其余各给药组小鼠体重均维持在稳定水平。

在给药治疗期间，除空白组小鼠饮食量无明显波动外，其余各组小鼠均在7天后饮食量略有下降，且中剂量组出现了较大的波动。

综上所述，推测三棱提取物邻苯二甲酸二丁酯在给药剂量为19.2mg/kg、服药剂量为10天时，其对小鼠Lewis肺癌模型具有较好的疗效，肿瘤抑制率为33.03％与环磷酰胺(38.28％)比较相近。通过结果我们发现邻苯二甲酸二丁酯高剂量与低剂量各项结果均较相似，中剂量的指标与环磷酰胺指标相近，具有较好的疗效，推测可能邻苯二甲酸二丁酯对Lewis肺癌小鼠的治疗剂量存在治疗窗。通过小鼠胸腺指数及脾指数的比较，我们发现和空白组比较小鼠表现出胸腺指数下降、脾指数上升的现象，且模型组同样存在该现象，初步推测Lewis模型本身对小鼠免疫系统具有一定程度的影响。通过此两项指数结果可知其抗肺癌的作用于环磷酰胺相近，主要破坏机体的细胞免疫功能，从而抑制肿瘤细胞的过快增长。

实验证明，邻苯二甲酸二丁酯虽然已被证实其是一种具有毒性小分子化合物，由于在小鼠给药期间并没有明显的致死现象，说明这种毒性是可控的，在一定的剂量范围内具有一定的毒性，但是同时具有抗肿瘤作用，其潜在的抗肿瘤活性还未被挖掘。本发明提供了该小分子的一项新的应用，为新药的研发提供理论依据。

本发明实施例涉及到的材料、试剂和实验设备，如无特别说明，均为符合中药提取和肿瘤实验的市售产品。

以上所述，仅为本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的核心技术的前提下，还可以做出改进和润饰，这些改进和润饰也应属于本发明的专利保护范围。与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

Claims (6)

1.一种从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）超低温粉碎：取干燥的三棱为原料，放入超微粉碎机中进行超微粉碎，同时粉碎全过程用2～10℃的水作为超微粉碎机内部冷却液，超微粉碎时间为5～20min，得到超微粉；

（2）溶剂提取：

（a）乙酸乙酯提取：在超微粉中加入乙酸乙酯，乙酸乙酯的加入量为超微粉质量的8～10倍，70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀，然后重复1～3次，最终得到沉淀，为粗品A；

（b）乙醇提取：将粗品A干燥后，按料液比g/ml为1︰（6～10）加入95%乙醇，充分混匀后70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀，然后重复1～3次，将得到的上清合并，浓缩后干燥，得到粗品B；

（3）色谱分离：取粗品B用80%甲醇-水溶液20～80℃超声溶解至浓度为15～50mg/ml，过膜后通过高压制备液相色谱进行分离，采用的色谱柱为C₁₈反相硅胶色谱柱，采用A流动相为纯水、B流动相为甲醇的二元流动相体系，进样量为1～5mL/针，流动相流速为12～20mL/min，洗脱方式为：20%甲醇-水溶液洗脱5 min、40%甲醇-水溶液洗脱7 min、80%甲醇-水溶液洗脱13 min、100%甲醇洗脱5 min，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集21-22min洗脱液作为目的组分，经浓缩后真空冷冻干燥，得到本发明目的化合物邻苯二甲酸二丁酯。

2.根据权利要求1所述的从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于：所述步骤（1）中超微粉碎时间为12min。

3.根据权利要求1所述的从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于：所述步骤（2）中乙酸乙酯提取和乙醇提取的提取温度为72℃。

4.根据权利要求1所述的从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于：所述步骤（2）中粗品A与95%乙醇的料液比g/ml为1︰8。

5.根据权利要求1所述的从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于：所述步骤（3）中粗品B溶解于80%甲醇-水溶液的浓度为25mg/ml。

6.根据权利要求1所述的从三棱中提取邻苯二甲酸二丁酯的方法，其特征在于：所述步骤（3）中色谱柱的直径为150 mm、柱长为250 mm，C₁₈中硅球粒径为10 μm。