JP2016520290A5 - - Google Patents

Claims (24)

1. リポーター核酸分子を非複製的形質導入粒子中にパッケージングするための細菌細胞パッケージングシステムであって、前記細菌細胞が、
   前記非複製的形質導入粒子中へのバクテリオファージ核酸分子のパッケージングを妨げる第一バクテリオファージ遺伝子のパッケージング開始部位配列の欠失を含む、第一バクテリオファージ遺伝子を含む溶原化されたバクテリオファージゲノム；及び
   前記非複製的形質導入粒子中への前記リポーター核酸分子の複製物のパッケージングを促進する第二パッケージング開始部位配列を含み、前記第二バクテリオファージ遺伝子がタンパク質をコードし、前記リポーター核酸分子の前記複製物が前記非複製的形質導入粒子中へパッケージングするためのレプリコンを形成する、第二バクテリオファージ遺伝子を含むリポーター核酸分子
   を含む、細菌細胞パッケージングシステム。
2. リポーター核酸分子を非複製的形質導入粒子中にパッケージングするための細菌細胞パッケージングシステムであって、前記細菌細胞が、
   パッケージング開始部位配列をコードするバクテリオファージ遺伝子を欠失している溶原化されたバクテリオファージゲノム、ここで、前記バクテリオファージ遺伝子の欠失はバクテリオファージ核酸分子の前記非複製的形質導入粒子中へのパッケージングを妨げる；並びに、
   第二バクテリオファージ遺伝子を含むリポーター核酸分子、ここで、前記第二バクテリオファージ遺伝子はパッケージング開始部位配列をコードし、前記リポーター核酸分子の複製物の前記非複製的形質導入粒子中へのパッケージングを促進し、前記第二バクテリオファージ遺伝子は前記遺伝子によってコードされるタンパク質を発現することが可能であり、前記リポーター核酸分子の複製物は前記非複製的形質導入粒子中へのパッケージングに適しているレプリコンを形成する、
   を含む、上記細菌細胞パッケージングシステム。
3. リポーター核酸分子を非複製的形質導入粒子中にパッケージングするための細菌細胞パッケージングシステムであって、前記細菌細胞が、
   第一バクテリオファージパッケージング開始部位配列を含む溶原化されたバクテリオファージゲノム、ここで、前記第一バクテリオファージパッケージング開始部位配列は前記非複製的形質導入粒子中へのバクテリオファージ核酸分子のパッケージングを妨げる変異を含む；及び
   第二バクテリオファージパッケージング開始部位配列を含むリポーター核酸分子、ここで、前記第二バクテリオファージパッケージング開始部位配列は前記変異を欠いており、前記リポーター核酸分子の複製物の前記非複製的形質導入粒子中へのパッケージングを促進し、前記リポーター核酸分子の前記複製物は前記非複製的形質導入粒子中へパッケージングするためのレプリコンを形成する、
   を含む、細菌細胞パッケージングシステム。
4. リポーター核酸分子を非複製的形質導入粒子中にパッケージングするための細菌細胞パッケージングシステムであって、前記細菌細胞が、
   パッケージング遺伝子を欠失しており、前記非複製的形質導入粒子を形成するタンパク質をコードする遺伝子を含む、溶原化されたバクテリオファージゲノム；並びに
   リポーター核酸分子及びパッケージング遺伝子を含むゲノムアイランド核酸分子
   を含む、細菌細胞パッケージングシステム。
5. 前記リポーター核酸分子がプロモーターに機能的に連結している、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
6. 前記リポーター核酸分子が複製開始点を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
7. 前記レプリコンが前記非複製的形質導入粒子中へのパッケージングに適しているコンカテマーを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
8. 前記第二バクテリオファージ遺伝子が配列番号９の配列を含む、請求項１又は２に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
9. 前記第一バクテリオファージ遺伝子が配列番号８の配列を含む、請求項１に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
10. 前記第一バクテリオファージ遺伝子及び前記第二バクテリオファージ遺伝子のそれぞれが、前記パッケージング開始部位配列を含む小ターミナーゼ（ｔｅｒＳ）遺伝子を含む、請求項１又は２に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
11. 前記第一バクテリオファージパッケージング開始部位配列及び前記第二バクテリオファージパッケージング開始部位配列のぞれぞれが小ターミナーゼ遺伝子由来のパッケージング開始部位配列を含むか、または、
    前記第一バクテリオファージパッケージング開始部位配列及び前記第二バクテリオファージパッケージング開始部位配列のぞれぞれが、黄色ブドウ球菌（S. aureus）バクテリオファージφ１１又はφ８０αの小ターミナーゼ（ｔｅｒＳ）遺伝子由来のｐａｃ部位配列を含む、請求項３に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
12. 前記パッケージング遺伝子が小ターミナーゼ（ｔｅｒＳ）遺伝子を含む、請求項４に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
13. 前記レプリコンが黄色ブドウ球菌（S. aureus）ｐＴ１８１プラスミド複製開始点に由来する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
14. 前記レプリコンが配列番号５の配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
15. 前記第二バクテリオファージ遺伝子の前記パッケージング開始部位配列又は前記パッケージング遺伝子がｐａｃ部位を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
16. 前記リポーター核酸分子を含むプラスミドをさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
17. 前記第二バクテリオファージ遺伝子がプロモーターに機能的に連結されている、請求項１又は２に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
18. 前記バクテリオファージが黄色ブドウ球菌（S. aureus）バクテリオファージφ８０α又はバクテリオファージφ１１を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
19. 前記細菌細胞が大腸菌（E. coli）細胞、グラム陰性細胞又はグラム陽性細胞を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
20. 前記細菌細胞が黄色ブドウ球菌（S. aureus）細胞を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
21. 前記リポーター核酸分子がレポーター遺伝子を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
22. 前記ゲノムアイランド核酸分子が、以下のａ）〜ｆ）：
    ａ）ＳａＰＩｂｏｖ２ゲノムアイランド核酸分子を含む；
    ｂ）ＳａＰＩ、ＳａＰＩ１、ＳａＰＩ２、ＳａＰＩｂｏｖ１及びＳａＰｉｂｏｖ２ゲノムアイランド核酸分子からなる群から選択される；
    ｃ）インテグラーゼ遺伝子を含み、前記インテグラーゼ遺伝子が、前記ゲノムアイランド核酸分子の、前記細菌細胞の細菌ゲノムからの切除及び前記細菌細胞の細菌ゲノムへの組込みのためのインテグラーゼタンパク質をコードする；
    ｄ）前記細菌細胞の細菌ゲノムに組み込まれる；
    ｅ）複製可能であり、前記細菌細胞内のバクテリオファージパッケージング機構によるパッケージングに適している分子レプリコンを形成する；
    ｆ）インテグラーゼ遺伝子を欠失している、
    から成る群から選択されるいずれか１つである、請求項４に記載の細菌細胞パッケージングシステム。
23. リポーター核酸分子を非複製的形質導入粒子中にパッケージングするための方法であって、
    請求項１〜２２のいずれかに記載の前記細菌細胞に、前記リポーター核酸分子とパッケージングされた非複製的形質導入粒子を生成するための前記バクテリオファージの溶解期を誘導する条件を提供し；そして
    前記リポーター核酸分子を含む前記非複製的形質導入粒子を単離すること
    を含む、上記方法。
24. 請求項２３に記載の方法から生成された前記リポーター核酸分子の複製物を含む前記非複製的形質導入粒子を含む、組成物。