JP2016511316A - 薬物送達用の修飾ポリ(ベータ−アミノエステル) - Google Patents
薬物送達用の修飾ポリ(ベータ−アミノエステル) Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016511316A JP2016511316A JP2015560842A JP2015560842A JP2016511316A JP 2016511316 A JP2016511316 A JP 2016511316A JP 2015560842 A JP2015560842 A JP 2015560842A JP 2015560842 A JP2015560842 A JP 2015560842A JP 2016511316 A JP2016511316 A JP 2016511316A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polymer
- group
- oligopeptide
- alkyl
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 0 *C(CCN(*)ISN(*)*)=O Chemical compound *C(CCN(*)ISN(*)*)=O 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
- A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5192—Processes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/91—Polymers modified by chemical after-treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
- C08G73/02—Polyamines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
- C08G73/02—Polyamines
- C08G73/028—Polyamidoamines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
- C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
- C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
L3は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ;
L4は、
L5は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ;
R1及びR2は、オリゴペプチド及びRyから独立に選ばれ;
ここで、R1及びR2の少なくとも一つはオリゴペプチドであり;
そして、Ryは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ;
各R3は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ;そして
nは5〜10,000の整数である]のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
[式中、L1及びL2は、
L3の出現の少なくとも1回は、
ここで、T1は、
ここで、LTは、
残りのL3基は、出現するたびに、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ;
L4は、
L5は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ;
R1、R2及びRTは、オリゴペプチド及びRyから独立に選ばれ;
ここで、R1、R2及びRTの少なくとも一つはオリゴペプチドであり;
そして、Ryは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ;
各R3は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ;そして
nは5〜10,000の整数である]のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩を提供する。
用語“ハロゲン”(又は“ハロ”)は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含む。
−CH=が−N=によって置換されている;
≡C−Hが≡Nによって置換されている;又は
−CH2−が、−O−、−S(O)t−又は−NRN−によって置換されている
ということである。
(a)式I又は式IIによるポリマーであって、一つの又は各オリゴペプチドがpH7で正味の正電荷を有するポリマー;及び
(b)式I又は式IIによるポリマーであって、一つの又は各オリゴペプチドがpH7で正味の負電荷を有するポリマー
を含んでいてもよい。
試薬及び溶媒は、Sigma−Aldrich社及びPanreac社より入手し、特に記載のない限り、そのまま使用した。プラスミドpmaxGFP(3486bp)はAmaxa社から入手した。細胞株は、ATCC(バージニア州マナッサス)から入手し、37℃、5%CO2雰囲気下にて、Gibco社より入手した、10%ウシ胎仔血清、100単位/mlのペニシリン、100ug/mLのストレプトマイシン、0.1mMのMEM非必須アミノ酸(NEAA)、2mMのL−グルタミンを含有する完全DMEM中に維持した。
ポリ(β−アミノエステル)は、文献(例えば、Montserrat,N.ら、J.Biol.Chem.286,12417−12428(2011))に記載されている2工程手順に従って合成した。最初に、アクリレート末端ポリマーを、第一アミンとジアクリレートの付加反応によって合成した(アミン:ジアクリレートを1:1.2のモル比で)。最後に、得られたアクリレート末端ポリマーを異なる種類のアミン−及びチオール−含有部分(amine- and thiol-bearing moieties)で末端キャッピング修飾することにより、PBAEsを得た。合成された構造は、1H−NMR及びFT−IR分析により確認した。NMRスペクトルは、400MHz Varian(Varian NMR Instruments社、イリノイ州Claredon Hills)にて記録し、メタノール−d4を溶媒として使用した。IRスペクトルは、Nicolet Magna 560(Thermo Fisher Scientific社、マサチューセッツ州ウォルサム)とKBrビームスプリッターを用い、蒸着膜中の溶媒としてメタノールを使用して得た。分子量測定は、2本のGPC Ultrastyragelカラム、103及び104Å(5μm混合、300mm×19mm、Waters Millipore Corporation社、米国マサチューセッツ州ミルフォード)を備えたHewlett−Packard 1050 Series HPLCシステム上で、THFを移動相として実施した。分子量は、ポリスチレン標準のリテンションタイムとの比較により算出した。
1,4−ブタンジオールジアクリレート(8.96g、4.07×10−2mol)と5−アミノ−1−ペンタノール(3.5g、3.39×10−2mol)をバイアル中で混合した。混合物を90℃で24時間撹拌した後、室温に冷却して、わずかに黄色の粘稠固体、アクリレート末端中間体(C32とする)を形成させた。中間体C32は、次の工程で使用されるまで4℃で保管された。
第一アミンで末端修飾されたPBAEsを、Zugates,G.T.ら,Bioconjugate Chem.18,1887−1896(2007)に規定されているようにして製造した。中間体C32(1g、0.5mmol)のTHF(2ml)中溶液を1,5−ジアミノ−2−メチル−ペンタン(0.24g、0.271ml、2mmol)のTHF(8ml)中溶液と混合した。混合物を室温で一晩撹拌し、次いでジエチルエーテル(100ml)中に沈殿させ、最後に真空下で乾燥させた。
ジアミン末端修飾ポリ(β−アミノエステル)、B3を、各所に記載の手順に従って合成した(Zugates,G.T.ら,Bioconj.Chem.18 1887-1896(2007)、Yang,F.ら,Proc.Natl Acad.Sci.USA.107 3317-3322(2010)、Sunshine,J.C.Biomacromolecules 12 3592-3600(2011))。簡潔に述べると、5−アミノ−1−ペンタノール(3.44g、33mmol)及び1,4−ブタンジオールジアクリレート(7.93g、40mmol)を、磁気撹拌下90℃で24時間重合させた。得られたアクリレート末端ポリマーC32(1g、0.4mmol)及び2−メチル−1,5−ペンタンジアミン(0.23g、0.27mL、2mmol)をテトラヒドロフラン中に溶解し、室温で一晩撹拌した。得られたジアミン末端修飾ポリマーB3をジエチルエーテル中での沈殿により単離し、真空下で乾燥させた。
IR(蒸着膜):ν = 1055, 1089, 1125, 1196 (C-O), 1257, 1463, 1733 (C=O), 2079, 2191, 2253, 2861, 2936, 3398 (N-H, O-H) cm−1
1H-NMR (400 MHz, CD3OD, TMS) (ppm): δ = 4.11 (t, CH2-CH 2-O), 3.72 (t), 3,55 (t, CH2-CH 2-OH), 2.87 (t, -NH-CH 2-CH2-C(=O)-), 2.77 (t, CH2-CH 2-N-), 2.60-2.51 (br, -NH-CH 2-(CH2)2-CH(CH3)-NH-), 2.46 (br, >N-CH 2-(CH2)4-OH, >N-CH2-CH 2-C(=O)-O), 1.87 (br), 1.73 (br), 1.60-1.41 (br, -O-CH2-CH 2-CH 2-CH2-O, -CH 2-CH2-OH, -CH 2-CH2-NH2), 1.35 (br, -N-CH2-CH 2-CH 2-(CH2)2-OH), 0.94 (d, CH 3-CH< ジアミン由来)。
一般に、オリゴペプチド修飾PBAEsは以下のようにして得た。アクリレート−末端ポリマーC32又はC32SSと、アミン−又はチオール−末端オリゴペプチドのいずれか(例えば、HS−Cys−Arg−Arg−Arg(CR3)、H2N−Arg−Arg−Arg(R3)又はHS−Cys−Glu−Glu−Glu(CE3)−他のオリゴペプチドも標準の一文字コードを用いる同様の略号により表記される)をDMSO中に1:2のモル比で混合した。混合物を室温で一晩撹拌し、得られたポリマーをジエチルエーテル:アセトン(3:1)中での沈殿により得た。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD, TMS) (ppm): δ = 4.41-4.33 (br, NH2-C(=O)-CH-NH-C(=O)-CH-NH-C(=O)-CH-NH-C(=O)-CH-CH2-, 4.11 (t, CH2-CH 2-O), 3.55 (t, CH2-CH 2-OH), 3.22 (br, NH2-C(=NH)-NH-CH 2-, OH-(CH2)4-CH 2-N-), 3.04 (t, CH2-CH 2-N-), 2.82 (dd, -CH 2-S-CH 2), 2.48 (br, -N-CH2-CH 2-C(=O)-O), 1.90 (m, NH2-C(=NH)-NH-(CH2)2-CH 2-CH-), 1.73 (br, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-O), 1.69 (m, NH2-C(=NH)-NH-CH2-CH 2-CH2-), 1.56 (br, -CH 2-CH2-CH 2-CH2-OH), 1.39 (br, -N-(CH2)2-CH 2-(CH2)2-OH)。
IR (蒸着膜): ν = 721, 799, 834, 1040, 1132, 1179 (C-O), 1201, 1397, 1459, 1541, 1675 (C=O, ペプチドのアミド由来), 1732 (C=O, エステル由来), 2861, 2940, 3348 (N-H, O-H) cm−1
1H-NMR (400 MHz, CD3OD, TMS) (ppm): δ = 4.38-4.29 (br, NH2-(CH2) 4-CH-), 4.13 (t, CH2-CH 2-O-),3.73 (br,NH2-CH-CH2-S-), 3.55 (t, CH2-CH 2-OH), 2.94 (br, CH2-CH 2-N-, NH2-CH 2-(CH2)3-CH-), 2.81 (dd, -CH 2-S-CH 2), 2.57 (br, -N-CH2-CH 2-C(=O)-O), 1.85 (m, NH2-(CH2)3-CH 2-CH-), 1.74 (br, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-O), 1.68 (m, NH2-CH2-CH 2-(CH2) 2-CH-), 1.54 (br, -CH 2-CH2-CH 2-CH2-OH), 1.37 (br, -N-(CH2)2-CH 2-(CH2)2-OH)。
IR (蒸着膜): ν = 720, 799, 832, 1040, 1132, 1201, 1335, 1403, 1467, 1539, 1674 (C=O, ペプチドのアミド由来), 1731 (C=O, エステル由来), 2865, 2941, 3336 (N-H, O-H) cm−1
1H-NMR (400 MHz, CD3OD, TMS) (ppm): δ = 8.0-7.0 (br -N(=CH)-NH-C(=CH)-) 4.61-4.36 (br, -CH2-CH-), 4.16 (t, CH2-CH 2-O-), 3.55 (t, CH2-CH 2-OH), 3.18 (t, CH2-CH 2-N-, 3.06 (dd, -CH 2-CH-), 2.88 (br, OH-(CH2)4-CH 2-N-), 2.82 (dd, -CH 2-S-CH 2-), 2.72 (br, -N-CH2-CH 2-C(=O)-O), 1.75 (br, -O-CH2-CH2-CH2-CH2-O), 1.65 (m, NH2-CH2-CH 2-(CH2)2 -CH-), 1.58 (br, -CH 2-CH2-CH 2-CH2-OH), 1.40 (br, -N-(CH2)2-CH 2-(CH2)2-OH)。
一般に、非対称オリゴペプチド修飾PBAEsは以下のようにして得た。アクリレート−末端ポリマーC32(又はC32SS)と、アミン−又はチオール−末端オリゴペプチドのいずれか(例えば、CR3、R3又はCE3)をDMSO中で1:1のモル比で混合した。混合物を室温で一晩撹拌した。等モル量の第二アミン−又はチオール−末端オリゴペプチド、又は第一アミンを加え、混合物を室温で一晩撹拌した。得られた非対称PBAEポリマーをジエチルエーテル/アセトン(3:1)中での沈殿により得た。非対称末端修飾B3−C32−CR3 PBAEsを得るための以下の合成手順は一例として示される。中間体C32(0.15g、0.075mmol)のDMSO(2mL)中溶液を対応するオリゴペプチドCys−Arg−Arg−Arg(CR3;0.055g、0.075mmol)のDMSO(1ml)中溶液と混合し、室温で一晩撹拌した。その後、2−メチル−1,5−ペンタンジアミン(0.017g、0.02ml、0.15mmol)を、DMSO中、室温で4時間の間、混合物に加えた。非対称末端修飾ポリマーB3−C32−CR3とB3−C32−B3及びR3C−C32−CR3との混合物がジエチルエーテル/アセトン(3:1)中での一晩の沈殿により得られた。混合物はそれ以上の精製をせずに使用することも、又は非対称末端修飾ポリマーB3−C32−CR3は標準法によって混合物から分離することもできる。
様々なオリゴペプチド末端修飾PBAEsのライブラリーを、第一アミンをジアクリレートに加え、次いで末端修飾することによって合成した。式Iに従って、表1に示されているオリゴペプチド末端修飾PBAEsを合成した。
全ポリマーのストック溶液をDMSO中に調製した(100mg/ml)。これらのポリマー溶液を適当な濃度に希釈して(25mM酢酸緩衝液、pH5.0)、所望比率のポリマー−DNA(w/w)を得た。次に、100μlの希釈ポリマーを100μlのプラスミドDNA(25mM酢酸緩衝液(pH5.0)中60μg/mL)に加え、数秒間激しく渦混合し、次いで37℃のオーブン中で30分間インキュベートした。得られたナノ粒子を、ナノ粒子の特徴付けのためにリン酸緩衝生理食塩水中に希釈した。ポリマー−DNA複合体を、動的光散乱を用い、サイズ及びゼータ電位について特徴付けした(Zetasizer nano zs90、Malvern Instruments社)。結果を図1に示す。
プロトンスポンジ効果とは、エンドソーム脱出を促進することが示されている現象のことで、高い緩衝能を有するポリマーによって媒介され、トランスフェクション効率の増大をもたらす(Varkouhi,A.K.ら,J.Control.Rel.151 220−228(2011).)。一般に、第三アミンを構造中に有するポリマーは、5.0〜7.5のエンドソームpH範囲で緩衝効果を示す。これによって浸透圧の増大が引き起こされ、エンドソームの崩壊がもたらされる(Behr,J.Chimia 2 34−36(1997))。プロトンスポンジ効果に従って、新規に合成されたポリ(β−アミノエステル)の緩衝能をポリマー溶液の酸滴定により決定した(図2)。
本発明のポリマーと公知ポリマーのトランスフェクション効果を、緑色蛍光タンパク質をコードしたプラスミド(pGFP)の細胞への送達効率を評価することによって比較した。
MTSアッセイ(CellTiter 96(登録商標) AQueous One Solution Cell Proliferation Assay,米国Promega Corporation社)を用いて、本願に記載されたポリマーをトランスフェクトされたcos−7細胞の生存率を評価した。細胞生存率は、トランスフェクションの48時間後、MTSアッセイを製造業者の指示通りに用いて評価した。簡潔に述べると、実施例5と同様の方法によって、細胞にpGFPをトランスフェクトした。トランスフェクションの48時間後に培地を除去し、細胞をPBSで洗浄し、MTS(20%v/v)を補充された完全培地を加えた。細胞を37℃でインキュベートし、マイクロプレートリーダーを用いて吸光度を490nmで測定した。細胞生存率は、非処理細胞と比較した相対パーセンテージで表された。結果を図5に示す。図中、R/H、K/H及びR/Kは、R3C−C32−CR3、K3C−C32−CK3又はH3C−C32−CH3 PBAEsの1:1混合物(w/w)を表す。
本発明のポリマーのsiRNA送達効率を、GFP特異的siRNAを用い、GFPレポーター安定細胞株にて評価した。
本発明のポリマーのカプセル化効率をウシインスリン(Sigma Aldrich社)を用いて評価した。簡潔に述べると、グルタミン酸末端修飾PBAEs E3C−C32−CE3(60mg/mLで16.7μL)をウシインスリンの溶液(HEPES緩衝液中0.01mg/mLで1mL、100mM及びpH7.2)に加え、次いでリシン末端修飾PBAEs K3C−C32−CK3(100mg/mLで10μL)を加え、最終のポリマー:タンパク質比を200:1とした。混合物を室温で30分間インキュベートした。得られたナノ粒子をCentricon装置(10KDaカットオフ、Merck Millipore社)を用いて遠心分離し、インスリン含有ナノ粒子を非カプセル化インスリンから分離した。カプセル化の程度は、ビシンコニンアッセイ(BCAタンパク質アッセイ試薬、ThermoScientific社)を用いて非カプセル化インスリンを測定し、インスリンのオリジナル溶液と比較することによって計算した。結果を図8に示す。図中、NP1及びNP2は独立した複製である。
Claims (24)
- 式I:
L3は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ;
L4は、
L5は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレン又はヘテロアリーレンからなる群から独立に選ばれ;
R1及びR2は、オリゴペプチド及びRyから独立に選ばれ;
ここで、R1及びR2の少なくとも一つはオリゴペプチドであり;
そして、Ryは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から選ばれ;
各R3は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール又はヘテロアリールからなる群から独立に選ばれ;そして
nは5〜10,000の整数である]のポリマー
又はその薬学的に許容可能な塩。 - 一つの又は各オリゴペプチドが、3〜20個のアミノ酸残基を含む、請求項1に記載のポリマー。
- 一つの又は各オリゴペプチドがpH7で正味の正電荷を有する、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
- 一つの又は各オリゴペプチドが、リシン、アルギニン及びヒスチジンからなる群から選ばれるアミノ酸残基を含む、請求項3に記載のポリマー。
- 一つの又は各オリゴペプチドがpH7で正味の負電荷を有する、請求項1に記載のポリマー。
- R1及びR2がともにオリゴペプチドである、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
- R1及びR2が異なるオリゴペプチドである、請求項8に記載のポリマー。
- R1及びR2の一つがオリゴペプチドで、R1及びR2の一つがRyである、請求項1〜7のいずれかに記載のポリマー。
- nが1〜20である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
- Ryが、水素、−(CH2)mNH2、−(CH2)mNHMe、−(CH2)mOH、−(CH2)mCH3、−(CH2)2(OCH2CH2)mNH2、−(CH2)2(OCH2CH2)mOH又は−(CH2)2(OCH2CH2)mCH3からなる群から選ばれ、mが1〜20の整数である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
- 各L3が、−C1−10 アルキレン−(S−S)q−C1−10アルキレン−からなる群から独立に選ばれ、qが0又は1である、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
- 各R3が、水素、C1−6アルキル、C1−6アルケニル、C1−6アルキニル、C1−6ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、C1−6アルコキシ、ハロゲン、アリール、ヘテロサイクリック、ヘテロアリール、シアノ、−O2C−C1−6アルキル、カルバモイル、−CO2H、−CO2−C1−6アルキル、C1−6アルキルチオエーテル、チオール、又はウレイドから独立に選ばれる、前記請求項のいずれかに記載のポリマー。
- 活性薬剤と、請求項1〜14のいずれか1項に記載のポリマーとを含む組成物。
- 活性薬剤がポリヌクレオチドである、請求項15に記載の組成物。
- ポリヌクレオチドがsiRNA又はmiRNAである、請求項16に記載の組成物。
- ポリヌクレオチドが、20〜30ヌクレオチドの長さである、請求項16に記載の組成物。
- 組成物が、ポリヌクレオチドとポリマーを含有するナノ粒子を含む、請求項16〜18のいずれかに記載の組成物。
- ポリマーが、請求項3に記載のポリマーと請求項6に記載のポリマーを含む、請求項15〜19のいずれかに記載の組成物。
- 薬剤を、請求項1〜14のいずれかに記載のポリマーのマトリックス中にカプセル化してナノ粒子を形成させる方法であって、該方法は、薬剤を準備し;ポリマーを準備し;そして薬剤とポリマーを適切な条件下で接触させてナノ粒子を形成させる工程を含む方法。
- 薬剤が、DNA、RNA、siRNA及びmiRNAから選ばれるポリヌクレオチド、小分子又はタンパク質である、請求項21に記載の方法。
- 接触工程が、(a)薬剤とポリマーの混合物のスプレー乾燥、(b)二重エマルション溶媒蒸発技術(double emulsion solvent evaporation techniques)又は(c)転相技術を含む、請求項21又は22に記載の方法。
- 医薬に使用するための、請求項1〜14のいずれか1項に記載のポリマー又は請求項15〜20のいずれか1項に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1304245.2 | 2013-03-08 | ||
GBGB1304245.2A GB201304245D0 (en) | 2013-03-08 | 2013-03-08 | Chemical compounds |
PCT/IB2014/059594 WO2014136100A1 (en) | 2013-03-08 | 2014-03-10 | Modified poly(beta-amino ester)s for drug delivery |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016511316A true JP2016511316A (ja) | 2016-04-14 |
JP2016511316A5 JP2016511316A5 (ja) | 2017-04-13 |
JP6473421B2 JP6473421B2 (ja) | 2019-02-20 |
Family
ID=48189627
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015560842A Active JP6473421B2 (ja) | 2013-03-08 | 2014-03-10 | 薬物送達用の修飾ポリ(ベータ−アミノエステル) |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20160038598A1 (ja) |
EP (1) | EP2964244B1 (ja) |
JP (1) | JP6473421B2 (ja) |
KR (1) | KR102191195B1 (ja) |
CN (1) | CN105324120B (ja) |
AR (1) | AR095081A1 (ja) |
AU (1) | AU2014224219B2 (ja) |
BR (1) | BR112015021709B8 (ja) |
CA (1) | CA2903663C (ja) |
DK (1) | DK2964244T3 (ja) |
ES (1) | ES2781965T3 (ja) |
GB (1) | GB201304245D0 (ja) |
MX (1) | MX364396B (ja) |
PL (1) | PL2964244T3 (ja) |
RU (1) | RU2015142677A (ja) |
TW (1) | TW201446269A (ja) |
WO (1) | WO2014136100A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020520967A (ja) * | 2017-05-22 | 2020-07-16 | サヘティス・バイオテック・エセエレ | ウイルスベースの治療薬と修飾ポリ(β−アミノエステル)との複合体 |
JP2021510548A (ja) * | 2018-01-17 | 2021-04-30 | アラティンガ・バイオ・ティーエヌピー | 遺伝子治療のためのポリマーカプセル化されたウイルスベクター |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2949834A1 (en) | 2014-05-28 | 2015-12-03 | James Macormack Wells | Methods and systems for converting precursor cells into gastric tissues through directed differentiation |
WO2016061464A1 (en) | 2014-10-17 | 2016-04-21 | Children's Hospital Center, D/B/A Cincinnati Children's Hospital Medical Center | In vivo model of human small intetine using pluripotent stem cells and methods of making and using same |
GB201501025D0 (en) * | 2015-01-21 | 2015-03-04 | Sagetis Biotech Sl | Chemical compounds |
WO2017112704A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Viking Scientific, Inc. | Hydrogel prodrug for treatment |
CN105535994B (zh) * | 2015-12-25 | 2018-01-19 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 一种治疗hpv感染的纳米粒制剂及其制备方法 |
EP3452578B1 (en) | 2016-05-05 | 2022-08-10 | Children's Hospital Medical Center | Methods for the in vitro manufacture of gastric fundus tissue and compositions related to same |
AU2017373767B2 (en) | 2016-12-05 | 2021-09-16 | Children's Hospital Medical Center | Colonic organoids and methods of making and using same |
CN106727313B (zh) * | 2017-01-06 | 2020-04-10 | 国家纳米科学中心 | 一种载药聚合物纳米胶束及其制备方法和应用 |
EP3700965A1 (en) | 2017-10-27 | 2020-09-02 | Massachusetts Institute of Technology | Poly (beta-amino esters) and uses thereof |
EP3703760A1 (en) | 2017-11-03 | 2020-09-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Gene delivery carrier |
CA3141729A1 (en) * | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Children's Hospital Medical Center | Polymer based cellular labeling, barcoding and assembly |
JP2022549290A (ja) * | 2019-09-21 | 2022-11-24 | イグザカ フランス | オリゴペプチド修飾ポリ(β-アミノエステル)のDMSOを含まない合成およびナノ粒子送達システムにおけるそれらの使用 |
EP4058585A1 (en) | 2019-11-15 | 2022-09-21 | Ixaka France | Polymer-encapsulated viral vectors for in vivo genetic therapy |
WO2021255262A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Sylentis Sau | siRNA AND COMPOSITIONS FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC TREATMENT OF VIRUS DISEASES |
US20220153901A1 (en) * | 2020-11-19 | 2022-05-19 | Encapsys,LLC | Poly Acrylate and Poly(Beta-Amino Ester) Capsules with Enhanced Degradability |
EP4015634A1 (en) | 2020-12-15 | 2022-06-22 | Sylentis, S.A.U. | Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of virus diseases |
CA3225817A1 (en) * | 2021-07-26 | 2023-02-02 | Salvador Borros Gomez | Covalently coated adeno-associated virus vector for its use in gene therapy |
EP4166594A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-19 | Institut Químic de Sarrià CETS Fundació Privada | Zwitterionic functionalized poly(beta-aminoester) polymers and uses thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007504353A (ja) * | 2003-05-28 | 2007-03-01 | マサチューセッツ インスティチュート オブ テクノロジー | 生分解性ポリ(β−アミノエステル)およびその使用 |
US20120114759A1 (en) * | 2009-05-15 | 2012-05-10 | The Johns Hopkins University | Peptide/particle delivery systems |
US20140294909A1 (en) * | 2011-10-13 | 2014-10-02 | The Johns Hopkins University | Nanocomposites of gold and polymers |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6217912B1 (en) * | 1998-07-13 | 2001-04-17 | Expression Genetics, Inc. | Polyester analogue of poly-L-lysine as a soluble, biodegradable gene delivery carrier |
ES2318531T3 (es) * | 2004-09-14 | 2009-05-01 | Nanodel Technologies Gmbh | Vehiculo de administracion que contiene nanoparticulas. |
CA2658768C (en) | 2006-07-21 | 2016-05-17 | Massachusetts Institute Of Technology | End-modified poly(beta-amino esters) and uses thereof |
GB0913442D0 (en) * | 2009-07-31 | 2009-09-16 | Univ Ramot | Cell-targeting nanoparticles comprising polynucleotide agents and uses thereof |
-
2013
- 2013-03-08 GB GBGB1304245.2A patent/GB201304245D0/en not_active Ceased
-
2014
- 2014-03-10 EP EP14713268.2A patent/EP2964244B1/en active Active
- 2014-03-10 WO PCT/IB2014/059594 patent/WO2014136100A1/en active Application Filing
- 2014-03-10 BR BR112015021709A patent/BR112015021709B8/pt active IP Right Grant
- 2014-03-10 US US14/773,671 patent/US20160038598A1/en not_active Abandoned
- 2014-03-10 MX MX2015011393A patent/MX364396B/es active IP Right Grant
- 2014-03-10 CA CA2903663A patent/CA2903663C/en active Active
- 2014-03-10 TW TW103108216A patent/TW201446269A/zh unknown
- 2014-03-10 JP JP2015560842A patent/JP6473421B2/ja active Active
- 2014-03-10 CN CN201480025579.5A patent/CN105324120B/zh active Active
- 2014-03-10 PL PL14713268T patent/PL2964244T3/pl unknown
- 2014-03-10 DK DK14713268.2T patent/DK2964244T3/da active
- 2014-03-10 RU RU2015142677A patent/RU2015142677A/ru not_active Application Discontinuation
- 2014-03-10 AU AU2014224219A patent/AU2014224219B2/en active Active
- 2014-03-10 ES ES14713268T patent/ES2781965T3/es active Active
- 2014-03-10 KR KR1020157027431A patent/KR102191195B1/ko active IP Right Grant
- 2014-03-10 AR ARP140100782A patent/AR095081A1/es active IP Right Grant
-
2018
- 2018-02-28 US US15/908,112 patent/US20180250410A1/en active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007504353A (ja) * | 2003-05-28 | 2007-03-01 | マサチューセッツ インスティチュート オブ テクノロジー | 生分解性ポリ(β−アミノエステル)およびその使用 |
US20120114759A1 (en) * | 2009-05-15 | 2012-05-10 | The Johns Hopkins University | Peptide/particle delivery systems |
US20140294909A1 (en) * | 2011-10-13 | 2014-10-02 | The Johns Hopkins University | Nanocomposites of gold and polymers |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020520967A (ja) * | 2017-05-22 | 2020-07-16 | サヘティス・バイオテック・エセエレ | ウイルスベースの治療薬と修飾ポリ(β−アミノエステル)との複合体 |
JP7202314B2 (ja) | 2017-05-22 | 2023-01-11 | サヘティス・バイオテック・エセエレ | ウイルスベースの治療薬と修飾ポリ(β-アミノエステル)との複合体 |
JP2021510548A (ja) * | 2018-01-17 | 2021-04-30 | アラティンガ・バイオ・ティーエヌピー | 遺伝子治療のためのポリマーカプセル化されたウイルスベクター |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2014224219B2 (en) | 2018-12-13 |
CN105324120A (zh) | 2016-02-10 |
PL2964244T3 (pl) | 2020-08-24 |
EP2964244B1 (en) | 2020-01-08 |
MX364396B (es) | 2019-04-25 |
BR112015021709B1 (pt) | 2022-03-03 |
DK2964244T3 (da) | 2020-04-06 |
MX2015011393A (es) | 2016-06-06 |
EP2964244A1 (en) | 2016-01-13 |
CA2903663A1 (en) | 2014-09-12 |
CA2903663C (en) | 2022-08-30 |
US20160038598A1 (en) | 2016-02-11 |
GB201304245D0 (en) | 2013-04-24 |
TW201446269A (zh) | 2014-12-16 |
KR20150135334A (ko) | 2015-12-02 |
KR102191195B1 (ko) | 2020-12-16 |
ES2781965T3 (es) | 2020-09-09 |
CN105324120B (zh) | 2021-04-02 |
AU2014224219A1 (en) | 2015-09-24 |
BR112015021709B8 (pt) | 2022-04-05 |
BR112015021709A2 (pt) | 2017-07-18 |
WO2014136100A1 (en) | 2014-09-12 |
AR095081A1 (es) | 2015-09-16 |
RU2015142677A (ru) | 2017-04-13 |
US20180250410A1 (en) | 2018-09-06 |
JP6473421B2 (ja) | 2019-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6473421B2 (ja) | 薬物送達用の修飾ポリ(ベータ−アミノエステル) | |
US20180000968A1 (en) | Poly(Beta-Amino Ester)s With Additives for Drug Delivery | |
EP3406265B1 (en) | Complexes of viral-based therapeutic agents and modified poly(beta-amino esters) | |
CN104136419A (zh) | 能够形成药物封装微球的在n末端上官能化的氨基酸衍生物 | |
ES2882255T3 (es) | Sistemas de administración basados en polímeros de ácido múcico catiónicos | |
Su et al. | Cationic dynamic covalent polymers for gene transfection | |
US8728453B2 (en) | Combinatorial polymeric compositions for drug delivery | |
Zhang et al. | Supramolecular micellar drug delivery system based on multi-arm block copolymer for highly effective encapsulation and sustained-release chemotherapy | |
TWI607762B (zh) | 用於藥物制放之帶有芳香族n-雜環的聚碳酸酯 | |
David et al. | Squalene/polyethylenimine based non-viral vectors: Synthesis and use in systems for sustained gene release | |
US20220315529A1 (en) | Nitrilotriacetic acid-containing lipidoid nanoparticles | |
Street et al. | Precision polymer nanofibers with a responsive polyelectrolyte corona designed as a modular, functionalizable nanomedicine platform | |
KR20140019214A (ko) | 폴리에틸렌글리콜-폴리락트산-폴리에틸렌이민 양이온성 공중합체, 이의 제조방법 및 상기 공중합체를 포함하는 약물 전달용 조성물 | |
KR100567397B1 (ko) | 온도 감응성과 생체 적합성을 갖는 양친성 고리형포스파젠 삼합체 및 그 제조 방법 | |
Tena-Solsona et al. | Self-assembled multivalent (SAMul) ligand systems with enhanced stability in the presence of human serum | |
EP4166594A1 (en) | Zwitterionic functionalized poly(beta-aminoester) polymers and uses thereof | |
KR101495652B1 (ko) | 코어 크로스링킹된 고분자 마이셀 화합물 및 이의 제조방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170310 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170310 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20171222 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180105 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180405 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180531 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180705 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181227 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190125 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6473421 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |