JP7202314B2

JP7202314B2 - ウイルスベースの治療薬と修飾ポリ（β－アミノエステル）との複合体

Info

Publication number: JP7202314B2
Application number: JP2019564861A
Authority: JP
Inventors: ゴメス，サルバドールボロス; フォンツ，クリスティーナフィラ; ビラ，パウブルガダ; シレラ，アンナカスカンテ
Original assignee: Institut dInvestigacions Biomediques August Pi i Sunyer IDIBAPS
Current assignee: Institut dInvestigacions Biomediques August Pi i Sunyer IDIBAPS
Priority date: 2017-05-22
Filing date: 2018-05-22
Publication date: 2023-01-11
Anticipated expiration: 2038-05-22
Also published as: CA3064482A1; WO2018215488A1; CN110944673A; KR20200054137A; AU2018274622A1; EP3406265B1; MX2019013974A; ES2821796T3; BR112019024581A2; EP3406265A1; GB201708203D0; US20200147237A1; JP2020520967A

Description

本発明は、治療におけるウイルスベースの治療剤の送達のためのベクターとしての修飾ポリ(β－アミノエステル)(ＰＢＡＥ)の使用に関する。本発明はまた、修飾ポリ(β－アミノエステル)およびウイルスベースの治療剤の複合体、およびこれらの付加物を使用する特定の処置方法に関する。

インビボでウイルスベースの治療薬を送達するための安全かつ効率的なベクターの欠如は、全身性遺伝子治療の成功についての主要なハンディキャップのままである。主なハードルは、ウイルスベクターに対する抗体の高い血清有病率、およびウイルスベクターの天然の肝臓親和性および肝臓媒介クリアランスであり、これは、例えば静脈内投与などの投与後のこれらの薬剤の利用可能な循環用量を大幅に減少させる。患者における血清有病率集団を促進する方法で免疫系をバイパスすることが望ましいであろう。治療の有用性（例えば、腫瘍標的指向性）を高めるため、治療効率を向上させるため、および望ましくない副作用を低減または排除するため、ウイルス親和性を設計することも望ましいであろう。

ＷＯ－２０１４／１３６１００－Ａは、ポリヌクレオチド送達ベクターとして修飾ポリ（β－アミノエステル）（ＰＢＡＥ）を記載しているが、ウイルスベースの治療薬の送達については言及していない。
Rojas et al., Journal of Controlled Release 237 (2016) 78-88では、中和抗体（ＮＡｂ）に対するヒトアデノウイルス血清型５の保護メカニズムとしてのアルブミン結合の使用について記載している。

本発明は、前述の問題に対処し、インビボでのウイルスベースの治療薬の送達における末端修飾ＰＢＡＥの使用を提供すること、および末端修飾ポリマーとウイルスベースの治療薬との複合体、複合体の調製方法、これらのポリマーを含む薬物送達デバイス（例えば、微粒子、ナノ粒子）、および複合体の使用方法も提供することを課題とする。

末端修飾ＰＢＡＥポリマーには生分解性基がある。これらのシステムのポリエステルの性質は、その高い生分解性と低減された毒性により、魅力的な生体適合性プロファイルを提供する。これらのポリマーは、癌、単一遺伝子疾患、血管疾患、および感染症などの多くの疾患の処置におけるウイルス送達ベクターとしての応用を有する。

別のこれらのウイルス送達ベクターの応用は、細胞および生理学的コンテキスト内での遺伝子機能または調節を調査するためのツールとしてのインビトロの研究であり得る。

第１の側面において、本発明は、ウイルスベースの治療薬と式Ｉのポリマー：

ここで
Ｌ_１およびＬ_２は、以下から成るグループから独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_ｘおよび１つの結合；式中、Ｒ_ｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され；
Ｌ_３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択され；または
Ｌ_３の少なくとも１つの出現は、

であり、
ここで、Ｔ_１は

であり、Ｔ_２は、Ｈ、アルキル、または

から選択され、
ここで、Ｌ_Ｔは以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_ｘおよび結合、
式中、Ｒ_ｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され、残りのＬ_３基は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から各出現で独立して選択され；Ｌ_４は、以下からなる群から独立して選択され、

Ｌ_５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択され；
Ｒ_１およびＲ_２およびＲ_Ｔ（存在する場合）は、オリゴペプチドおよびＲ_ｙから独立して選択され、
式中、Ｒ_１およびＲ_２およびＲ_Ｔ（存在する場合）の少なくとも１つはオリゴペプチドであり、
Ｒ_ｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され、
各Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール、ヘテロアリール、およびポリアルキレングリコールからなる群から独立して選択され、前記ポリアルキレングリコールは、窒素原子に直接結合しているＲ_３は、リンカー部分を介してＲ_３が結合している窒素原子に付着または結合しており、前記リンカー部分は、アルキレン、シクロアルキレン、アルケニレン、シクロアルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレンまたはヘテロアリーレン基である；そして
ｎは５～１，０００の整数であり、
またはその薬学的に許容し得る塩との複合体を提供する。

上記の第１の側面によれば、いくつかの実施態様において、少なくとも１つのＲ_３基はポリアルキレングリコール、好ましくはポリエチレングリコールである。いくつかの実施態様において、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）は、Ｒ_３が取り付けられている窒素原子に直接結合している。いくつかの実施態様において、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）はＲ_３がリンカー部分を介して結合している窒素原子に結合している。好ましい実施態様において、リンカー部分はアルキレン、アルケニレン、またはヘテロアルキレン基であり、より好ましくはリンカー部分はアルキレン基である。いくつかの実施態様において、リンカー部分は、３～２０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、好ましくは４～１５個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、より好ましくは５～１０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さである。

本発明の第１の側面のいくつかの好ましい実施態様において、少なくとも１つのＲ_３基はポリアルキレングリコールであり、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）はＬ_４基の窒素原子に直接結合する。いくつかの実施態様において、少なくとも１つのＲ_３基は、ポリアルキレングリコールであり、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）は、リンカー部分を介してＬ_４基の窒素原子に結合している。好ましい実施態様において、リンカー部分はアルキレン、アルケニレンまたはヘテロアルキレン基であり、より好ましくはリンカー部分はアルキレン基である。いくつかの実施態様において、リンカー部分は、３～２０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、好ましくは４～１５個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、より好ましくは５～１０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さである。

第１の側面のいくつかの実施態様において、Ｌ_３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択される。

第１の側面のいくつかの実施態様において、少なくともＬ_３の１つの出現は、

であり、
ここで、Ｔ_１は

であり、Ｔ_２はＨ、アルキル、または

から選択され、ここで、Ｌ_Ｔは以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_ｘおよび結合；式中、Ｒ_ｘは水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され、残りのＬ_３基はアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から各出現で独立して選択される。

第２の側面において、本発明は、式Ｉのポリマー、ここで、
Ｌ_１およびＬ_２は、以下から成る群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_ｘおよび結合；式中、Ｒ_ｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され；
Ｌ_３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択され、または
Ｌ_３の少なくとも１つの出現は、

であり、
ここで、Ｔ_１は

であり、Ｔ_２は、Ｈ、アルキル、または

ここで、Ｌ_Ｔは以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_ｘおよび結合、ここで、Ｒ_ｘは水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され、残りのＬ_３基は、各出現にて独立してアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群からの各出現において選択され；Ｌ_４は、以下からなる群から独立して選択され、

Ｌ_５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択され；
Ｒ_１およびＲ_２およびＲ_Ｔ（存在する場合）は、オリゴペプチドおよびＲ_ｙから独立して選択され、
式中、Ｒ_１およびＲ_２およびＲ_Ｔ（存在する場合）の少なくとも１つはオリゴペプチドであり、
Ｒ_ｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され、
各Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール、ヘテロアリール、およびポリアルキレングリコールからなる群から独立して選択され、前記ポリアルキレングリコールは、Ｒ_３が結合する窒素原子に直接結合しているＲ_３が結合する窒素原子にリンカー部分を介して取り付けされまたは結合し、ここで、前記リンカー部分は、アルキレン、シクロアルキレン、アルケニレン、シクロアルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレンまたはヘテロアリーレン基であり；
式中、少なくとも１つのＲ_３基はポリアルキレングリコールであり；そして
ｎは５～１，０００の整数であり、またはその薬学的に許容し得る塩を提供する。

少なくとも１つのＲ_３基がポリアルキレングリコールである上記第２の側面によれば、ポリアルキレングリコールは好ましくはポリエチレングリコールである。第２の側面のいくつかの実施態様において、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）は、Ｒ_３が取り付けられている窒素原子に直接結合している。いくつかの実施態様において、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）は、リンカー部分を介してＲ_３が取り付けされている窒素原子に結合している。好ましい実施態様において、リンカー部分はアルキレン、アルケニレン、またはヘテロアルキレン基であり、より好ましくはリンカー部分はアルキレン基である。いくつかの実施態様において、リンカー部分は、３～２０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、好ましくは４～１５個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、より好ましくは５～１０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さである。

本発明の第２の側面のいくつかの好ましい実施態様において、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）である少なくとも１つのＲ_３基は、Ｌ_４基の窒素原子に直接結合している。いくつかの実施態様において、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）である少なくとも１つのＲ_３基は、リンカー部分を介してＬ_４基の窒素原子に結合している。好ましい実施態様において、リンカー部分はアルキレン、アルケニレンまたはヘテロアルキレン基であり、より好ましくはリンカー部分はアルキレン基である。いくつかの実施態様において、リンカー部分は、３～２０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、好ましくは４～１５個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、より好ましくは５～１０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さである。

第２の側面のいくつかの実施態様において、Ｌ_３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択される。
第２の側面のいくつかの実施態様において、Ｌ_３の少なくとも１つの出現は、

であり、
ここで、Ｔ_１は

であり、Ｔ_２は、Ｈ、アルキル、または

ここで、Ｌ_Ｔは以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_ｘおよび結合;式中、Ｒ_ｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され、残りのＬ_３基は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から各出現で独立して選択される。

したがって、本発明の複合体は、少なくとも１つのオリゴペプチドで末端修飾されたＰＢＡＥを含む。本発明のいくつかの実施態様では、本発明の複合体は、直接またはリンカーを介して少なくとも１つのポリアルキレングリコール基（好ましくはポリエチレングリコール基）で置換され、少なくとも１つのオリゴペプチドで末端修飾されたＰＢＡＥを含む。

式Ｉのポリマーは、式ＩＩのジアクリレートモノマーと式Ｌ_４Ｈ_２の置換アミンとの反応により調製され、アクリレート末端中間体、式ＩＩＩを形成することができる。

次いで、基Ｒ_１Ｌ_１およびＲ_２Ｌ_２を、末端アクリレート基との反応により付加して、式Ｉのポリマーを形成することができる。

少なくとも１つのＲ_３基がポリアルキレングリコール部分である式Ｉのポリマーは、式ＩＩのジアクリレートモノマーと式Ｌ_４Ｈ_２の置換アミンとの反応により同様に調製することができ、該アミンは任意に結合した、上記のようにリンカー部分を介してアミンの窒素に結合されたポリアルキレングリコール部分で置換される。

各Ｌ₁およびＬ_２は、末端修飾基Ｒ_１およびＲ_２のＰＢＡＥポリマーへのカップリングを促進するように選択される。各Ｌ_１およびＬ_２は、例えば、末端修飾基が末端システイン残基を含むオリゴペプチドである場合、一つの結合であってもよい。

Ｌ_Ｔは、末端修飾基Ｒ_ＴのＰＢＡＥポリマーへのカップリングを促進するように選択される。Ｌ_Ｔは、例えば、末端修飾基が末端システイン残基を含むオリゴペプチドである場合、１つの結合であってもよい。

Ｒ_ｘは、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群、例えば、水素、アルキルおよびシクロアルキルからなる群から独立して選択され得る。

繰り返し単位が（角括弧で）示される本明細書に開示される化合物において、角括弧内の各基（例えば、Ｌ_３、Ｌ_４）は、各単一繰り返し単位について提供される定義から独立して選択される。言い換えれば、特定のポリマー内の繰り返し単位は同一である必要はない。

オリゴペプチド
本発明によれば、「オリゴペプチド」は、ペプチド結合によって一緒に連結された少なくとも３つのアミノ酸のストリングを含む。非天然アミノ酸（すなわち、天然には存在しないがポリペプチド鎖に組み込むことができる化合物）および／または当技術分野で知られているアミノ酸類似体が代わりに使用し得るけれども、そのようなペプチドは、天然アミノ酸のみを含むことが好ましい。また、そのようなペプチドにおける１つまたは複数のアミノ酸は、例えば、炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、または結合、機能化、またはその他の修飾などのためのリンカーなどの化学単位の付加によって修飾され得る。本明細書で定義されるポリマー中のオリゴペプチドは、典型的には３～２０個のアミノ酸残基、より好ましくは３～１０個のアミノ酸残基、より好ましくは３～６個のアミノ酸残基を含む。あるいは、本明細書で定義されるポリマー中のオリゴペプチドは、４～２０個のアミノ酸残基、より好ましくは４～１０個のアミノ酸残基、より好ましくは４～６個のアミノ酸残基を含み得る。

式Ｉのポリマーにおいて、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、好ましくはｐＨ７で正味の正電荷を有する。そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、ｐＨ７で正に帯電した天然に存在するアミノ酸、すなわちリジン、アルギニン、およびヒスチジンを含み得る。例えば、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、ポリリジン、ポリアルギニンまたはポリヒスチジンからなる群から選択することができ、それらのそれぞれはシステインで終結されていてもよい。

好ましい実施態様において、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは式ＩＶの化合物である：

式中、ｐは２～１９、典型的には３～９または３～５の整数であり、Ｒａは、Ｈ_２ＮＣ（＝ＮＨ）－ＮＨ（ＣＨ_２）_３－、Ｈ_２Ｎ（ＣＨ_２）_４－または（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）－ＣＨ_２－からなる群から各出現において選択される。

そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドが式ＩＶの化合物である場合、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドをポリマーに結合するＬ_１および／またはＬ_２（および／または存在する場合Ｌ_Ｔ）は１つの結合であり、末端システイン残基は、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドをアクリレート末端中間体、式ＩＩＩにカップリングする手段を提供する。チオール官能基は、二重結合へのより速く、より効率的で、より容易に制御された付加を提供する。対照的に、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがカップリングのためにアミン官能基で終結している場合、カップリングステップにおいて過剰のこの化合物が必要である。

式Ｉのポリマーにおいて、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、ｐＨ７で正味の負電荷を有し得る。そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、ｐＨ７で負に帯電した天然に存在するアミノ酸、すなわちアスパラギン酸およびグルタミン酸を含み得る。例えば、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、ポリアスパラギン酸およびポリグルタミン酸からなる群から選択することができ、これらはそれぞれシステインで終結していてもよい。この実施態様において、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、式ＩＶの化合物であり得、ここで、ｐは２～１９、典型的には３～９または３～５の整数であり、Ｒ_ａはＨＯ_２Ｃ（ＣＨ_２）_２－またはＨＯ_２Ｃ－ＣＨ_２－である。この場合、末端システイン残基がアクリレート末端中間体、式ＩＶにオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドをカップリングする手段を提供するので、ポリマーにオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドを連結するＬ_１および／またはＬ_２は１つの結合である。

あるいは、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、ｐＨ７で負に帯電した天然アミノ酸とｐＨ７で正に帯電した天然アミノ酸の混合物を含み得る。

式Ｉのポリマーにおいて、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは疎水性であり得る。そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、システイン、チロシンおよびアラニンなどの疎水性の天然アミノ酸を含んでいてもよく、特に、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、トリプトファンおよびフェニルアラニンを含んでいてもよい。

式Ｉのポリマーにおいて、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは親水性であり得る。そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドは、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギンおよびグルタミンなどの親水性である天然のアミノ酸を含んでもよく、さらにｐＨ７で帯電する天然のアミノ酸を含んでいてもよい。

置換基
式Ｉのポリマーにおいて、Ｒ_１およびＲ_２の両方がオリゴペプチドであるか、Ｒ_１およびＲ_２の１つがオリゴペプチドであり、Ｒ_１およびＲ_２の１つがＲ_ｙである。
Ｒ_１およびＲ_２の一方がＲ_ｙである場合、Ｒ_ｙは、好ましくは、水素、－（ＣＨ_２）_ｍＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｍＮＨＭｅ、－（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＮＨ_２、（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＯＨおよび－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３（式中、ｍはから１～２０、例えば１～５の整数である）からなる群から選択される。好ましくは、Ｒ_ｙは、－（ＣＨ_２）_ｍＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｍＮＨＭｅおよび－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＮＨ_２からなる群から選択される。好ましくは、Ｌ_１がＮＨまたはＮＲ_Ｘであり、Ｒ_１およびＲ_２の一方がＲ_ｙである場合、Ｒ_ｙはＲ_３とは異なる。

ポリマーは非対称であってもよい。例えば、本発明のポリマーにおいて、Ｒ_１およびＲ_２の一方はオリゴペプチドであり、他方はＲ_ｙであり得る。あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はそれぞれ異なるオリゴペプチドであってもよい。Ｒ_Ｔが存在するポリマーにおいては、Ｒ_１、Ｒ_２から選択される少なくとも１つおよびＲ_Ｔの１つまたは２つの出現はオリゴペプチドであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_Ｔの１つまたは２つの出現から選択される残りの基はＲ_ｙであり得る。あるいは、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_Ｔの１つまたは２つの出現はそれぞれ異なるオリゴペプチドであってもよい。
例えば、本発明のポリマーにおいて、Ｒ_１およびＲ_２の一方はＣｙｓＡｒｇＡｒｇＡｒｇであり、他方はＨ_２Ｎ（ＣＨ_２）_３ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＮＨ_２に由来し得る。

Ｌ_３およびＬ_５は、ポリエチレングリコールリンカーを含むアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレンまたはヘテロアルケニレンから独立して選択されてもよい。前記アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレンまたはヘテロアルケニレン部分は、１～２０個の炭素原子、好ましくは１～１２個の炭素原子、より好ましくは１～６個の炭素原子のものであり得る。前記ポリエチレングリコールリンカーは、３～２５原子長、好ましくは３～１８原子長であり得る。

好ましい実施態様において、Ｌ_３およびＬ_５は、好ましくは１～１２個の炭素原子、より好ましくは１～６個の炭素原子、より好ましくは３～５個の炭素原子、および好ましい実施態様において４個の炭素原子のアルキレン部分から独立して選択される。
特に好ましい実施態様では、Ｌ_３は－ＣＨ_２－、－（ＣＨ_２）_２－、－（ＣＨ_２）_３－、－（ＣＨ_２）_４－、－（ＣＨ_２）_５－および－（ＣＨ_２）_６－から選択される。
さらなる実施態様において、Ｌ_３および／またはＬ_５の１つまたは複数の炭素原子（特に前述の好ましい実施態様で定義される）は、－Ｓ－Ｓ－で置換されてもよい。この実施態様において、Ｌ_３は好ましくは－（ＣＨ_２）_Ｚ－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ_２）_Ｚ－から選択され、各ｚの値は独立して１～４から選択され、好ましくは２～３、好ましくは２であり、好ましくは各ｚの値は同じである。主ポリマー鎖に少なくとも１つのジスルフィド結合を含めると、標的細胞内でのウイルスベースの治療薬の開梱が容易になる。

好ましくは、Ｌ_４は、－Ｎ（Ｒ_３）－からなる群から独立して選択される。
好ましくは、各Ｒ_３は、水素、－（ＣＨ_２）_ＰＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｐＮＨＭｅ、－（ＣＨ_２）_ｐＯＨ、－（ＣＨ_２）_ＰＣＨ_３、－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｑＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｑＯＨ、－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｑＣＨ_３、およびポリアルキレングリコール、ここで、ｐは１～２０（好ましくは１～５）の整数であり、ｑは１～１０の整数、例えば１～５であり、前記ポリアルキレングリコールは、Ｒ_３が結合する窒素原子に直接結合するか、またはリンカー部分を介してＲ_３が結合する窒素原子に結合し、前記リンカー部分はアルキレン、シクロアルキレン、アルケニレンである、シクロアルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレンまたはヘテロアリーレン基である。本発明のいくつかの実施態様において、少なくとも１つのＲ_３基は、ポリアルキレングリコール、好ましくはポリエチレングリコールである。いくつかの実施態様において、ポリアルキレングリコールである少なくとも１つのＲ_３基をＲ_３が結合する窒素原子に結合するリンカー部分は、アルキレン、アルケニレンまたはヘテロアルキレン基、好ましくはアルキレン基である。いくつかの実施態様において、リンカー部分は、３～２０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、好ましくは４～１５個の炭素および／またはヘテロ原子の長さ、より好ましくは５～１０個の炭素および／またはヘテロ原子の長さである。

上記の式ＩまたはＩＩＩにおいて、ｎは好ましくは１０～７００、より好ましくは２０～５００である。式Ｉまたは式ＩＩＩのポリマーの分子量は、好ましくは５００～１５０，０００ｇ／モル、より好ましくは７００～１００，０００ｇ／モル、より好ましくは２，０００～５０，０００ｇ／モル、より好ましくは５，０００～４０，０００ｇ／モルである。少なくとも１つのＲ_３基がポリアルキレングリコール（例えばポリエチレングリコール）である実施態様において、式Ｉまたは式ＩＩＩのポリマーの分子量は、好ましくは２，５００～１５０，０００ｇ／モル、より好ましくは２，７００～１００，０００ｇ／モル、より好ましくは４，０００～５０，０００ｇ／モル、より好ましくは７，０００～４０，０００ｇ／モルである。

本発明の化合物
本発明のいくつかの化合物は、特定の幾何学的形態または立体異性形態で存在し得る。本発明は、シスおよびトランス異性体、ＲおよびＳ鏡像異性体、ジアステレオマー、（Ｄ）異性体、（Ｌ）異性体、それらのラセミ混合物、およびそれらの他の混合物を含むすべてのそのような化合物を本発明の範囲内に入るものとして意図する。追加の不斉炭素原子が、アルキル基などの置換基に存在していてもよい。すべてのそのような異性体、およびそれらの混合物は、本発明に含まれることが意図されている。

種々の異性体比のいずれかを含む異性体混合物は、本発明に従って利用され得る。たとえば、２つの異性体のみを組み合わせる場合、５０：５０、６０：４０、７０：３０、８０：２０、９０：１０、９５：５、９６：４、９７：３、９８：２または９９：１を含む混合物の異性体比はすべて、本発明により意図されている。当業者は、より複雑な異性体混合物に対して類似の比率が企図されることを容易に理解するであろう。

化学基
「ハロゲン」（または「ハロ」）という用語には、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。
「アルキル」という用語には、一価の直鎖または分岐鎖の飽和非環式ヒドロカルビル基が含まれる。アルキルは、適切には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピルまたはｔ－ブチル基などのＣ_１－１０アルキル、またはＣ_１－６アルキル、またはＣ_１－４アルキルである。アルキルは置換されていてもよい。
「シクロアルキル」という用語は、一価の飽和環状ヒドロカルビル基を含む。シクロアルキルは、適切には、Ｃ_３－１０シクロアルキル、またはシクロペンチルおよびシクロヘキシルなどのＣ_３－６シクロアルキルである。シクロアルキルは置換されていてもよい。
「アルコキシ」という用語は、アルキル－Ｏ－を意味する。
用語「アルキルアミノ」は、アルキル－ＮＨ－を意味する。
「アルキルチオ」という用語は、アルキル－Ｓ（Ｏ）_ｔ－を意味し、ｔは以下で定義される。

「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有し、適切には炭素－炭素三重結合を有さない、一価の直鎖または分岐鎖の不飽和の非環式ヒドロカルビル基を含む。アルケニルは、適切にはＣ_２－１０アルケニル、またはＣ_２－６アルケニル、またはＣ_２－４アルケニルである。アルケニルは置換されていてもよい。
「シクロアルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有し、適切には炭素－炭素三重結合を持たない、一価の部分的に不飽和の環状ヒドロカルビル基を含む。シクロアルケニルは、適切には、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、またはＣ_５－１０シクロアルケニル、例えば、シクロヘキセニルまたはベンゾシクロヘキシルである。シクロアルケニルは置換されていてもよい。
「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有し、適切には炭素－炭素二重結合を有さない、一価の直鎖または分岐鎖の不飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。アルキニルは、適切にはＣ_２－１０アルキニル、またはＣ_２－６アルキニル、またはＣ_２－４アルキニルである。アルキニルは置換されていてもよい。

「アルキレン」という用語には、二価の直鎖または分岐鎖の飽和非環式ヒドロカルビル基が含まれる。アルキレンは、適切には、メチレン、エチレン、ｎ－プロピレン、ｉ－プロピレンまたはｔ－ブチレン基などのＣ_１－１０アルキレン、またはＣ_１－６アルキレン、またはＣ_１－４アルキレンである。アルキレンは置換されていてもよい。
「アルケニレン」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有し、適切には炭素－炭素三重結合を有さない、二価の直鎖または分岐不飽和非環式ヒドロカルビル基を含む。アルケニレンは、適切にはＣ_２－１０アルケニレン、またはＣ_２－６アルケニレン、またはＣ_２－４アルケニレンである。アルケニレンは置換されていてもよい。

「ヘテロアルキル」という用語には、アルキル基、例えば、Ｃ_１－６５アルキル基、Ｃ_１－１７アルキル基またはＣ_１－１０アルキル基が含まれ、最大２０個の炭素原子、または最大１０個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１個の炭素原子が、アルキル炭素原子の少なくとも１つが残っている場合、それぞれ独立してＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮで置き換えられている。ヘテロアルキル基は、Ｃ結合またはヘテロ結合されていてもよい、すなわち、炭素原子またはＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮを介して分子の残りの部分に結合されていてもよく、ｔは以下で定義される。ヘテロアルキルは置換されていてもよい。

「ヘテロシクロアルキル」という用語は、シクロアルキルの炭素原子の少なくとも１つが残っている場合、最大１０個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１個の炭素原子がそれぞれ独立してＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮで置き換えられたシクロアルキル基を含む。ヘテロシクロアルキル基の例には、オキシラニル、チアラニル、アジリジニル、オキセタニル、チアタニル、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、１，４－ジオキサニル、１，４－オキサチアニル、モルホリニル、１，４－ジチアニル、ピペラジニル、１，４－アザチアニル、オキセパニル、チエパニル、アゼパニル、１，４－ジオキセパニル、１，４－オキサチエパニル、１，４－オキサアゼパニル、１，４－ジチエパニル、１，４－チアゼパニルおよび１，４－ジアゼパニルを含む。ヘテロシクロアルキル基は、Ｃ結合またはＮ結合であり得る、すなわち、炭素原子または窒素原子を介してその分子の残りに結合し得る。ヘテロシクロアルキルは置換されていてもよい。

「ヘテロアルケニル」という用語は、例えば、Ｃ_１－６５アルケニル基、Ｃ_１－１７アルケニル基またはＣ_１－１０アルケニル基を含み、アルケニル炭素原子の少なくとも１つが残っている場合、最大２０個の炭素原子、または最大１０個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１つの炭素原子は、それぞれＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮで独立して置き換えられ得る。ヘテロアルケニル基は、Ｃ結合またはヘテロ結合されていてもよい、すなわち、炭素原子またはＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮを介して分子の残りに結合されていてもよい。ヘテロアルケニルは置換されていてもよい。

「ヘテロシクロアルケニル」という用語には、シクロアルケニルの炭素原子の少なくとも１つが残る場合、最大３個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１個の炭素原子が、それぞれ独立してＯ、Ｓ（Ｏ）ｔまたはＮで置き換えられたシクロアルケニル基を含む。ヘテロシクロアルケニル基の例には、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラニル、５，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピラニル、２Ｈ－ピラニル、１，２，３，４－テトラヒドロピリジニルおよび１，２，５，６－テトラヒドロピリジニルが含まれる。ヘテロシクロアルケニル基は、Ｃ結合またはＮ結合であってもよい、すなわち、炭素原子または窒素原子を介して分子の残りの部分に結合していてもよい。ヘテロシクロアルケニルは置換されていてもよい。

「ヘテロアルキニル」という用語には、アルキニル基、例えば、Ｃ_１－６５アルキニル基、Ｃ_１－１７アルキニル基またはＣ_１－１０アルキニル基が含まれ、アルキニル炭素原子の少なくとも１つが残っている場合、最大２０個の炭素原子、または最大１０個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１つの炭素原子が、それぞれ独立してＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮで置き換えられる。ヘテロアルキニル基は、Ｃ結合またはヘテロ結合されていてもよい、すなわち、炭素原子またはＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮを介して分子の残りに結合されていてもよい。ヘテロアルキニルは置換されていてもよい。

「ヘテロアルキレン」という用語には、アルキレン基、例えば、Ｃ_１－６５アルキレン基、Ｃ_１－１７アルキレン基またはＣ_１－１０アルキレン基が含まれ、アルキレン炭素原子の少なくとも１つが残っている場合、最大２０個の炭素原子、または最大１０個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１個の炭素原子は、それぞれ独立してＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮで置き換えられる。ヘテロアルキニレンは置換されていてもよい。

「ヘテロアルケニレン」という用語は、アルケニレン基、例えば、Ｃ_１－６５アルケニレン基、Ｃ_１－１７アルケニレン基またはＣ_１－１０アルケニレン基を含み、アルケニレン炭素原子の少なくとも１つが残っている場合、最大２０個の炭素原子、または最大１０個の炭素原子、または最大２個の炭素原子、または１個の炭素原子は、それぞれ独立してＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔ、またはＮで置き換えられる。ヘテロアルケニレンは置換されていてもよい。

「アリール」という用語には、フェニルまたはナフチル（例えば、１－ナフチルまたは２－ナフチル）などの一価の芳香族環状ヒドロカルビル基が含まれる。一般に、アリール基は単環式または多環式縮合環芳香族基であり得る。好ましいアリールはＣ_６～Ｃ_１４アリールである。アリールは置換されてもよい。
アリール基の他の例は、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ａｓ－インダセン、ｓ－インダセン、インデン、ナフタレン、オバレン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピランスレンおよびルビセンである。
「アリールアルキル」という用語は、アリール基、例えばベンジルで置換されたアルキルを意味する。
「ヘテロアリール」という用語は、１つ以上の炭素原子がそれぞれＯ、Ｓ、ＮおよびＮＲ^Ｎから独立して選択されるヘテロ原子で置き換えられたアリール基を含み、ここでＲ^Ｎは以下で定義される（および一実施態様においてＨまたはアルキル（例えばＣ_１－６アルキル）である）。ヘテロアリールは置換されていてもよい。

一般に、ヘテロアリール基は、単環式または多環式（例えば、二環式）縮合環ヘテロ芳香族基であり得る。典型的には、ヘテロアリール基は５～１４環員（好ましくは５～１０員）を含み、１、２、３または４環員はＯ、Ｓ、ＮおよびＮＲ^Ｎから独立して選択される。ヘテロアリール基は、適切には、５、６、９または１０員、例えば、５員単環、６員単環、９員縮合環二環または１０員縮合環二環である。
単環式ヘテロ芳香族基には、１、２、３または４個の環員がＯ、Ｓ、ＮまたはＮＲ^Ｎから独立して選択される５～６個の環員を含有するヘテロ芳香族基が含まれる。

５員単環式ヘテロアリール基は、－ＮＲ^Ｎ－基、－Ｏ－原子または－Ｓ－原子である１つの環員、および任意で＝Ｎ－原子（５つの環員の残りは炭素原子）である１～３個の環員（例えば１または２個の環員）を含んでもよい。
５員単環式ヘテロアリール基の例は、ピロリル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、１，２，３－トリアゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，２，５－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、１，３，５－トリアジニル、１，２，４－トリアジニル、１，２，３－トリアジニルおよびテトラゾリルである。
６員単環式ヘテロアリール基の例は、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニルおよびピラジニルである。

６員単環式ヘテロアリール基は、＝Ｎ－原子である１または２個の環員を含んでもよい（６個の環員の残りは炭素原子である）。
二環式ヘテロ芳香族基には、１、２、３、４またはそれ以上の環員がＯ、Ｓ、ＮまたはＮＲ^Ｎから独立して選択される９～１４個の環員を含有する縮合環ヘテロ芳香族基が含まれる。

９員二環式ヘテロアリール基は、－ＮＲ^Ｎ－基、－Ｏ－原子または－Ｓ－原子である１つの環員、および任意で＝Ｎ－原子（９つの環員の残りは炭素原子）である、１～３個の環員（例えば１または２個の環員）を含有してもよい。
９員縮合環二環式ヘテロアリール基の例は、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、ピロロ［２，３－ｃ］ピリジニル、ピロロ［３，２－ｃ］ピリジニル、ピロロ［３，２－ｂ］ピリジニル、イミダゾ［４，５－ｂ］ピリジニル、イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジニル、ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリジニル、ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジニル、ピラゾロ［３，４－ｃ］ピリジニル、ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジニル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、インドリニニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、イミダゾ［１，５－ａ］ピリジニル、ピラゾロ［１，２－ａ］ピリジニル、ピロロ［１，２－ｂ］ピリダジニルおよびイミダゾ［１，２－ｃ］ピリミジニルである。
１０員二環式ヘテロアリール基は、＝Ｎ－原子である１～３個の環員を含有することができる（１０個の環員の残りは炭素原子である）。
１０員縮合環二環式ヘテロアリール基の例は、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、１，６－ナフチリジニル、１，７－ナフチリジニル、１，８－ナフチリジニル、１，５－ナフチリジニル、２，６－ナフチリジニル、２，７－ナフチリジニル、ピリド［３，２－ｄ］ピリミジニル、ピリド［４，３－ｄ］ピリミジニル、ピリド［３，４－ｄ］ピリミジニル、ピリド［２，３－ｄ］ピリミジニル、ピリド［２，３－ｂ］ピラジニル、ピリド［３，４－ｂ］ピラジニル、ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジニル、ピラジノ［２，３－ｂ］ピラジニルおよびピリミド［４，５－ｄ］ピリミジニルである。

用語「ヘテロアリールアルキル」は、ヘテロアリール基で置換されたアルキルを意味する。
アシル基の例には、アルキル－Ｃ（＝Ｏ）－、シクロアルキル－Ｃ（＝Ｏ）－、アルケニル－Ｃ（＝Ｏ）－、シクロアルケニル－Ｃ（＝Ｏ）－、ヘテロアルキル－Ｃ（＝Ｏ）－、ヘテロシクロアルキル－Ｃ（＝Ｏ）－、アリール－Ｃ（＝Ｏ）－またはヘテロアリール－Ｃ（＝Ｏ）－、特にアルキル－Ｃ（＝Ｏ）－およびアリール－Ｃ（＝Ｏ）－が含まれる。
特に明記しない限り、基の組み合わせは、本明細書では１つの部分、例えば、アリールアルキルと呼ばれ、最後に言及した基は、その部分が分子の残りに取り付けられた原子を含有している。
アルキル基または他の基の炭素原子がＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔ、またはＮで置き換えられている場合、その意味は次のとおりである：

に置き換えられる。
－ＣＨ＝は－Ｎ＝に置き換えられる。
≡Ｃ－Ｈは≡Ｎに置き換えられる。または
－ＣＨ_２－は－Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）_ｔ、または－ＮＲ^Ｎ－に置き換えられる。

明確化のために、炭素原子の数が与えられている上記のヘテロ原子含有基（ヘテロアルキルなど）に関して、例えばＣ_３－６ヘテロアルキルの場合、意味するのは１以上の３－６鎖炭素原子がＯ、Ｓ（Ｏ）_ｔまたはＮで置換された、Ｃ_３－６アルキルに基づく基である。したがって、例えば、Ｃ_３－６ヘテロアルキル基は、３～６個未満の鎖炭素原子を含有するであろう。
上記の場合、Ｒ^ＮはＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、－Ｃ（Ｏ）－アルキル、－Ｃ（Ｏ）－アリール、－Ｃ（Ｏ）－ヘテロアリール、－Ｓ（Ｏ）_ｔ－アルキル、－Ｓ（Ｏ）_ｔ－アリールまたは－Ｓ（Ｏ）_ｔ－ヘテロアリールである。Ｒ^Ｎは、特に、Ｈ、アルキル（例えば、Ｃ_１－６アルキル）またはシクロアルキル（例えば、Ｃ_３－６シクロアルキル）であり得る。
上記の場合、ｔは独立して０、１または２、たとえば２である。通常、ｔは０である。

基が置換され得る少なくとも２つの位置を有する場合、その基は、アルキレンまたはヘテロアルキレン鎖の両端により置換されて、環状部分を形成し得る。
任意に置換された基（例えば、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアルケニル、ヘテロシクロアルケニル、ヘテロアルキニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルまたはヘテロアリールヘテロアルキル基など）は、置換または非置換であってもよく、または非置換であってもよい。通常、置換には、水素原子、または＝０による置換の場合は、２つの水素原子の置換基による概念上の置換が含まれる。
置換される場合、一般に１～３個の置換基、または１個または２個の置換基、または１個の置換基がある。

任意の置換基は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－Ｎ⁺（Ｃ_１－６アルキル）_２Ｏ－、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯ_２Ｃ_１－６アルキル、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯＣ_１－６アルキル、－ＳＯ_２Ｃ_１－６アルキル、－ＳＯ_３Ｃ_１－６アルキル、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣ_１－６アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_１－６アルキル、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｃ_１－６アルキル、＝Ｏ、－ＮＨ（Ｃ_１－６アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ_１－６アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）Ｃ（＝Ｓ）Ｃ_１－６アルキル、－ＳＯ_２Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）₂、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）ＳＯ_２Ｃ_１－６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）ＳＯ_２Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_１－６ヘテロアルキル、－Ｃ_３－６シクロアルキル、－Ｃ_３－６ヘテロシクロアルキル、－Ｃ_２－６アルケニル、－Ｃ_２－６ヘテロアルケニル、－Ｃ_３－６シクロアルケニル、－Ｃ_３－６ヘテロシクロアルケニル、－Ｃ_２－６アルキニル、－Ｃ_２－６ヘテロアルキニル、－Ｚ^ｕ－Ｃ_１－６アルキル、－Ｚ^ｕ－Ｃ_３－６シクロアルキル、－Ｚ^ｕ－Ｃ_２－６アルケニル、－Ｚ^ｕ－Ｃ_３－６シクロアルケニルまたは－Ｚ^ｕ－Ｃ_２－６アルキニル、ここで、
Ｚ^ｕは独立してＯ、Ｓ、ＮＨまたはＮ（Ｃ_１－６アルキル）である。

別の実施態様において、任意の置換基は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、トリハロエチル、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－Ｎ⁺（Ｃ_１－６アルキル）_２Ｏ－、－ＣＯ_２Ｈ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯＣ_１－６アルキル、－ＳＯ_２Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、－Ｃ（＝Ｏ）Ｃ_１－６アルキル、＝Ｏ、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_３－６シクロアルキル、－Ｃ_３－６ヘテロシクロアルキル、－Ｚ^ｕＣ_１－６アルキルまたは－Ｚ^ｕ－Ｃ_３－６シクロアルキル（Ｚ^ｕは上記で定義されている）である。

別の実施態様において、任意の置換基は、独立して、ハロゲン、トリハロメチル、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＣＯ_２Ｈ、－Ｃ（＝０）Ｃ_１－６アルキル、＝Ｏ、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_３－６シクロアルキル、－Ｃ_３－６ヘテロシクロアルキル、－Ｚ^ｕＣ_１－６アルキルまたは－Ｚ^ｕ－Ｃ_３－６シクロアルキル（Ｚ^ｕは上記で定義されている）。
別の実施態様において、任意の置換基は、独立して、ハロゲン、－ＮＯ_２、－ＣＮ、－ＣＯ_２Ｈ、＝Ｏ、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_３－６シクロアルキルまたは－Ｃ_３－６ヘテロシクロアルキルである。
別の実施態様において、任意の置換基は、独立して、ハロゲン、－ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－６アルキル）、－Ｎ（Ｃ_１－６アルキル）_２、－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_３－６シクロアルキルまたは－Ｃ_３－６ヘテロシクロアルキルである。

「ポリアルキレングリコール」（ＰＡＧ）という用語は、Ｈ－［Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２］_ｘ－ＯＨ（ポリエチレングリコールまたはＰＥＧ）およびＨ－［Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２］_ｘ－ＯＨ（ポリプロピレングリコール）などの一般式Ｈ－［Ｏ－Ｃ_ｙＨ_２ｙ］_ｘ－ＯＨを有する化合物をいう。本発明の化合物に見出される場合、ＰＡＧは、炭素原子と末端ヒドロキシル基の１つ、ＰＥＧの場合、置換基はＨ－［Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２］_ｘ－になる、との間の結合によって結合される。本発明の化合物において使用されるポリアルキレングリコールは、特に定義しない限り、５００～２０，０００ｇ／モル、好ましくは１，０００～１０，０００ｇ／モル、より好ましくは２，０００～５，０００ｇ／モル、より好ましくは２，０００～３，５００ｇ／モルの分子量を有し得る。

本明細書で使用される「式Ｉのポリマー」という用語は、その薬学的に許容し得る誘導体、ならびにその多形体、異性体および同位体標識された変異体を含む。
「薬学的に許容し得る誘導体」という用語は、式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む。薬学的に許容し得る誘導体は、式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物または水和物を適切にはいう。

「薬学的に許容し得る塩」という用語には、無機または有機の酸および塩基を含む薬学的に許容し得る非毒性の酸または塩基から調製される塩が含まれる。
塩基性基、例えばアミノ基を含む式Ｉのポリマーは、酸と薬学的に許容し得る塩を形成することができる。式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る酸付加塩には、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸）、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸の塩が含まれるが、これらに限定されない。式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る酸付加塩には、これらに限定されないが、有機酸の脂肪族、芳香族、カルボン酸およびスルホン酸類などの有機酸の塩が含まれてもよく、該有機酸の例には、ギ酸、酢酸、プロピオン酸または酪酸などの脂肪族モノカルボン酸；乳酸、クエン酸、酒石酸またはリンゴ酸などの脂肪族ヒドロキシ酸；マレイン酸またはコハク酸などのジカルボン酸；安息香酸、ｐ－クロロ安息香酸、フェニル酢酸、ジフェニル酢酸、またはトリフェニル酢酸などの芳香族カルボン酸；ｏ－ヒドロキシ安息香酸、ｐ－ヒドロキシ安息香酸、１－ヒドロキシナフタレン－２－カルボン酸または３－ヒドロキシナフタレン－２－カルボン酸などの芳香族ヒドロキシル酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、またはベンゼンスルホン酸などのスルホン酸が含まれる。式Ｉのポリマーの他の薬学的に許容し得る酸付加塩には、グリコール酸、グルクロン酸、フロン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、サリチル酸、マンデル酸、エンボニック（パモ）酸、パントテン酸、ステアリン酸、スルファニル酸、アルゲン酸およびガラクツロン酸が含まれるが、これらに限定されない。式Ｉのポリマーが複数の塩基性基を含む場合、複数の塩、例えば式Ｉの化合物のジ－またはトリ塩を提供するために、複数の中心をプロトン化することができる。例えば、本明細書に記載される式Ｉのポリマーのハロゲン化水素酸塩は、モノヒドロハライド、ジヒドロハライドまたはトリヒドロハライドなどであり得る。塩には、これらに限定されないが、上に開示された酸のいずれかの添加から生じるものが含まれる。式Ｉのポリマーの一実施態様において、２つの塩基性基が酸付加塩を形成する。さらなる実施態様において、２つの付加塩対イオンは同じ種であり、例えば、ジヒドロクロリド、ジヒドロスルフィドなどである。典型的には、薬学的に許容し得る塩は、ジヒドロクロリドなどの塩化水素塩である。

酸性、例えばカルボキシルを含有する基の式Ｉのポリマーは、塩基と薬学的に許容し得る塩を形成することができる。式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る塩基性塩には、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩（例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムまたはカルシウム塩）および亜鉛またはアルミニウム塩などの金属塩が含まれ得るが、これらに限定されない。式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る塩基性塩には、アンモニアまたは薬学的に許容し得る有機アミンまたはエタノールアミン（例えばジエタノールアミン）、ベンジルアミン、Ｎ－メチル－グルカミン、アミノ酸（例えば、リジン）またはピリジンなどのヘテロ環状塩基で形成される塩が含まれ得るが、これらに限定されない。
酸と塩基の半塩、例えばヘミ硫酸塩も形成される場合がある。

式Ｉのポリマーの薬学的に許容し得る塩は、当技術分野で周知の方法により調製することができる。
薬学的に許容し得る塩のレビューについては、Stahl and Wermuth著、Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)を参照されたい。

式Ｉのポリマーは、不溶媒和形態と溶媒和形態の両方で存在し得る。「溶媒和物」という用語には、ポリマーと、水またはＣ_１－６アルコール、例えばエタノールなどの１つ以上の薬学的に許容し得る溶媒分子とを含む分子複合体が含まれる。「水和物」という用語は、溶媒が水である「溶媒和物」を意味する。
ポリマーは、無定形から結晶形までの固体状態で存在し得る。そのような固体形態はすべて本発明に含まれる。

ポリマーは、シス型およびトランス型、Ｅ型およびＺ型、Ｒ型、Ｓ型およびメソ型、ケト型およびエノール型を含むがこれらに限定されない１つ以上の幾何学的、光学的、鏡像異性、ジアステレオマーおよび互変異性形態で存在し得る。そのような異性体形態はすべて本発明に含まれる。異性体形態は、異性体の混合物（例えば、ラセミまたはジアステレオマー混合物）だけでなく、異性体的に純粋な形態または濃縮された形態であってもよい。

本発明は、１つ以上の原子が同じ原子番号を有するが、自然に通常見出される原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数である原子で置き換えられた式Ｉの薬学的に許容し得る同位体標識ポリマーを含む。

本発明の化合物に含めるのに適した同位体の例には、^２Ｈおよび^３Ｈなどの水素、^１１Ｃ、^１３Ｃおよび^１４Ｃなどの炭素、^３６Ｃｌなどの塩素、^１８Ｆなどのフッ素、^１２３Ｉおよび^１２５ｌなどのヨウ素、^１３Ｎおよび^１５Ｎなどの窒素、^１５Ｏ、^１７Ｏおよび^１８Ｏなどの酸素、^３２Ｐなどのリン、および^３５Ｓなどの硫黄の同位体が含まれる。式Ｉのある同位体標識ポリマー、例えば放射性同位体を組み込んだものは、薬物および／または基質組織分布研究に有用である。放射性同位体^３Ｈおよび^１４Ｃは、組み込みが容易であり、検出手段が用意されているため、この目的に特に有用である。
^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１５Ｏ、^１３Ｎなどの陽電子放出同位体による置換は、基質受容体の占有率を調べるための陽電子放出トポグラフィー（ＰＥＴ）研究で役立つことができる。

式Iの同位体標識ポリマーは、一般に、当業者に知られている従来の技術によって、または以前に使用された非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用して、本明細書に記載のプロセスに類似したプロセスによって調製することができる。

本明細書に記載のポリマーは、任意の数の置換基または機能的部分で置換され得ることが理解されよう。「任意に」という用語が先行するかどうかにかかわらず、置換された用語、および本明細書で使用される置換基は、当業者が理解するように、すべての原子価が維持されることを条件に、１つの官能基を別の官能基に変更する能力をいう。所定の構造内の複数の位置が特定の群から選択された複数の置換基で置換される場合、その置換基は各位置で同じでも異なっていてもよい。置換基はさらに置換されていてもよい（例えば、アリール基置換基は、１つ以上の位置でフッ素でさらに置換されている別のアリール基などの別の置換基を有していてもよい）。

本明細書で使用されるチオヒドロキシルまたはチオールという用語は、式－ＳＨの基をいう。

ウイルスベースの治療薬
ウイルスベースの治療薬は、治療での使用に適した任意のウイルスベクターであり得る。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、全身性ウイルス遺伝子治療での使用に適している。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は腫瘍溶解性ウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬はワクチンである。
ウイルスベースの治療薬は、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、またはレンチウイルスベクターなどのレトロウイルスベクターであり得る。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）である。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬はアデノウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬はアデノ随伴ウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、レンチウイルスベクターなどのレトロウイルスベクターである。

いくつかの実施態様において、ウイルスは、レトロウイルスベクター以外の治療での使用に適した任意のウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスは、レンチウイルスベクター以外の治療での使用に適した任意のウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスは、腫瘍溶解性アデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１ＡまたはＡｄｕＰＡＲｍＥ１Ａ以外の治療での使用に適した任意のウイルスベクターである。
いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクターおよびセムリキ森林ウイルスベクターから選択される。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、単純ヘルペスウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬はワクシニアウイルスベクターである。
好ましくは、ウイルスベースの治療薬はアデノウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１ＡおよびＡｄｕＰＡＲｍＥ１Ａを含む腫瘍溶解性アデノウイルスベクターである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬はＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａである。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬はＡｄｕＰＡＲｍＥ１Ａである。

いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬、例えばレンチウイルスベクターが包まれている。いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬は、例えばアデノウイルスベクターなどの非エンベロープ型である。
一実施態様において、ウイルスベースの治療剤の表面は、式Ｉのポリマーへの結合に適した結合部位を含み、ここで、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドはｐＨ７で正味の正電荷を有する。一般に、ウイルスベースの治療薬の表面は負に帯電しており、式Ｉの正に帯電したポリマーと相互作用する。
別の実施態様において、ウイルスベースの治療薬の表面は、式Ｉのポリマーへの結合に適した結合部位を含み、ここで、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドはｐＨ７で正味の負電荷を有する。

本発明の複合体において、ウイルスベースの治療薬は、好ましくは、例えば、水素結合、静電相互作用または物理的カプセル化により式Ｉのポリマーに非共有的に連結し、一般的に該相互作用は静電的である。好ましくは、ウイルスベースの治療薬および式Ｉのポリマーは、双極子間相互作用、イオン双極子相互作用、イオン誘起双極子相互作用および／または水素結合から選択される１つ以上の相互作用により連結される。ウイルスベースの治療薬は、ナノ粒子内に適切にカプセル化される。

いくつかの実施態様において、ウイルスベースの治療薬の表面は負に帯電しており、本発明のポリマーは、ウイルス表面と容易に相互作用する非常に正に帯電した末端、相互作用の安定化に役立つわずかに正に帯電したポリマー骨格、およびポリマーとウイルスエンベロープの脂質成分との相互作用を可能にする疎水性側鎖を特徴づける。

本発明の複合体は、予想外に、以下の特性の１つ以上、そして好ましくは以下のすべてを提供する：
（ｉ）中和抗体に対するウイルスベースの治療薬のマスキング能力；
（ｉｉ）ウイルスベースの治療薬による適応免疫応答の活性化の低下；
（ｉｉｉ）ウイルスベースの治療薬の血液循環時間の増加；
（ｉｖ）ウイルスベースの治療薬の肝臓親和性の減少；そして
（ｖ）ウイルスベースの治療薬の腫瘍親和性の増加。
これらの特性の組合せ効果は、本発明の複合体により、既存の従来の使用レジメンよりもはるかに高い（例えば、少なくとも約１０～２０倍大きい）ウイルスベースの治療薬の投与量を可能にすることである。

第３の側面において、本発明は、本発明の前述の側面のいずれか１つで上記で定義されたように式Ｉのポリマーを含むか、またはそれからなるポリマー材料でコーティングされたウイルスベースの治療薬を含む組成物を提供する。
コーティングされたウイルスベースの治療薬
本発明は、本発明の側面のいずれかに従って、本明細書で定義される式Ｉのポリマーを含むか、またはそれからなるポリマー材料でコーティングされた、本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供する。
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも１つのポリマーが式ＩのＰＡＧ化またはＰＥＧ化ポリマーであり、および少なくとも１つのポリマーは、ＰＡＧまたはＰＥＧ部分を含まない、式Ｉの２つ以上の異なるポリマーの組み合わせでコーティングされた、本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供する。

いくつかの実施態様において、本発明は、本発明の側面のいずれかに従って、本明細書で定義される式Ｉのポリマーを含むかまたはそれからなるポリマー材料でコーティングされたアデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（以下の実施例９および１０を参照）を提供する。いくつかの実施態様において、ポリマー材料は、本明細書で定義または本明細書で上述したように、式Ｉの２つの異なるポリマーの組み合わせである。
いくつかの実施態様において、本発明は、（ｉ）Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３（以下の実施例３Ａを参照）および（ｉｉ）Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧ（下記の実施例５Ａを参照）の組み合わせでコーティングされたウイルスベースの治療薬を提供し、好ましくは、ここで、ポリマー（ｉ）および（ｉｉ）が６５：３５の比率で存在する。

いくつかの実施態様において、本発明は、（ｉ）Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３（下記の実施例３Ａを参照）および（ｉｉ）Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧ（以下の例５Ａを参照）の組み合わせでコーティングされたアデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（下記の実施例９および１０を参照）を提供し、ここで、ポリマー（ｉ）と（ｉｉ）が６５：３５の比率で存在する。このコーティングされたウイルスベースの治療薬は、ＳＡＧ－１０１という。
いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むかまたはそれからなるポリマー材料でコーティングされた本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、コーティングされたウイルスベースの治療薬はＳＡＧ－１０１以外である。

いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むかまたはそれからなるポリマー材料でコーティングされた本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、ウイルスベースの治療薬はレトロウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクター、またはセムリキ森林ウイルスベクターである。

いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むかまたはそれからなるポリマー材料でコーティングされた本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、ここで、ウイルスベースの治療薬は任意の適切なウイルスベクターであるレトロウイルスベクター以外の治療で使用し、たとえば、ウイルスベースの治療薬がアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクターまたはセムリキ森林ウイルスベクターであり、例えば、ウイルスベースの治療薬が、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである。

いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むか、またはそれからなるポリマー材料でコーティングされる本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、ウイルスベースの治療薬は、例えば、レンチウイルスベクター以外の治療の使用に適切な任意のウイルスベクターであり、ウイルスベースの治療薬が、例えば、レトロウイルスベクター（レンチウイルスベクター以外）、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクター、またはセムリキ森林ウイルスベクターであり、ウイルスベースの治療薬は、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター以外のレトロウイルスベクターである。

いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むか、またはそれからなるポリマー材料でコーティングされた本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、ウイルスベースの治療薬は、例えばアデノウイルスベクター以外の治療での使用に適切な任意のウイルスベクターであり、ウイルスベースの治療薬が、例えば、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクター、またはセムリキ森林ウイルスベクターであり、ウイルスベースの治療薬は、例えば、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはレンチウイルスベクターである。

いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むか、またはそれからなるポリマー材料でコーティングされた本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、ウイルスベースの治療薬は、アデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ以外の治療に使用に適切な任意のウイルスベクターである。
いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書で定義される式Ｉの１つ以上のポリマーを含むか、またはそれからなるポリマー材料でコーティングされた本明細書に記載のウイルスベースの治療薬を提供し、ウイルスベースの治療薬は、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクター、またはセムリキ森林ウイルスベクターである。

ナノ粒子
組成物は、式Ｉのポリマー材料でコーティングされたウイルスベースの治療薬を含有するナノ粒子および／または微粒子を含んでもよい。組成物は、式Ｉで定義される２つ以上の異なるポリマーを含んでもよい。例えば、組成物は、Ｒ_１およびＲ_２が両方ともＣｙｓＬｙｓＬｙｓＬｙｓである式Ｉのポリマーと、Ｒ_１およびＲ_２が両方ともＣｙｓＨｉｓＨｉｓＨｉｓである式Ｉのポリマーを含む。組成物は、Ｒ_１およびＲ_２が両方ともＣｙｓＡｒｇＡｒｇＡｒｇであり、ポリアルキレングリコール部分が存在しない式Ｉの第１のポリマーを、Ｒ_１およびＲ_２が両方ともＣｙｓＡｒｇＡｒｇＡｒｇであり、ポリアルキレングリコール部分が存在する式Ｉの第２のポリマー、例えば、Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧまたはＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－連結ＰＥＧと組み合わせて含んでもよい。
本発明は、ナノ粒子に関して主に以下に議論される。議論は微粒子にも等しく適用されることが理解されるであろう。

ナノ粒子は、ウイルスベースの治療薬および式Ｉのポリマーを含んでもよく、ここで、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドはｐＨ７で正味の正電荷を有する。正に帯電したオリゴペプチドは、ナノ粒子形成プロセス中に負に帯電したウイルスベースの治療薬と相互作用し、ナノ粒子内のウイルスベースの治療薬のカプセル化を促進する。

ナノ粒子は、各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の負電荷を有する式Ｉのポリマー、およびｐＨ７で正味の正電荷を有するウイルスベースの治療薬を含んでもよい。負に帯電したオリゴペプチドは、ナノ粒子形成プロセス中に正に帯電したウイルスベースの治療薬と相互作用し、ナノ粒子内のウイルスベースの治療薬のカプセル化を促進する。

ナノ粒子は、場合により、式Ｉの異なるポリマーの混合物を含んでもよい。例えば、ナノ粒子は以下を含む：
（ａ）そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有する式Ｉによるポリマー、および
（ｂ）そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の負電荷を有する式Ｉによるポリマー。
したがって、本発明は、上記のポリマー（ａ）および（ｂ）の比率を変更することにより変化させることができる正味の表面電荷をナノ粒子に提供する。（ａ）と（ｂ）の比率は、重量で１：９９、５：９５、１０：９０、２５：７５、５０：５０、７５：２５、９０：１０、９５：５、または９９：１になり得る。
そのようなナノ粒子は、ウイルスベースの治療薬のカプセル化に適しており、改善された薬理学的特性を示す。

いくつかの実施態様において、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有する式Ｉのポリマーを、そのオリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の負電荷を有する式Ｉのポリマーと組み合わせて使用してもよい。
さらに、ｐＨ７で正味の負電荷を持つオリゴペプチドで修飾されたポリマーを含めると、以下の身体的障壁との相互作用中に正味の表面電荷の変化が変化する可能性があるため、腸および肺粘膜などの複雑な身体的障壁を介したナノ粒子の送達が促進され得る。

ナノ粒子は、ウイルスベースの治療薬と組み合わせた式Ｉの２つ以上の異なるポリマーの混合物を含んでもよい。ナノ粒子は、ＰＡＧ化またはＰＥＧ化された式Ｉの第１のポリマーと、ＰＡＧ化またはＰＥＧ化されていない式Ｉの第２のポリマーとの組み合わせを含み得る。例えば、ナノ粒子は、（ｉ）ポリアルキレングリコールである少なくとも１つのＲ_３基を特徴とする本発明の先の側面で定義されたポリマーを、（ｉｉ）ポリアルキレングリコールであるＲ_３基を特徴としない第２のポリマーと組み合わせて含むことができる。２つの異なるポリマー（ｉ）と（ｉｉ）の比率は、重量または体積によって１：９９、５：９５、１０：９０、２５：７５、３５：６５、５０：５０、６５：３５、７５：２５、９０：１０、９５：５、または９９：１の場合がある。一実施態様において、ポリマー（ｉ）と（ｉｉ）の比は２５：７５～４５：５５、好ましくは３５：６５（ｖ／ｖ）である。

本発明のナノ粒子は、高い活性剤含有量および高いカプセル化効率で形成され得る。
本明細書において、活性剤のカプセル化効率とは、ウイルスベースの治療薬含有ナノ粒子の調製方法で使用される総活性剤の重量パーセントとしてのナノ粒子に組み込まれたウイルスベースの治療薬を言う。それは、通常は最大９５％までで、より一般的には７０％～９５％である。

本明細書において、ウイルスベースの治療薬の捕捉は、ウイルス剤が充填されたナノ粒子中のウイルス剤の重量パーセントを言う。ウイルスベースの治療薬の捕捉は、好ましくは少なくとも２重量％、より好ましくは少なくとも５重量％、より好ましくは少なくとも１０重量％であり、典型的には２重量％～２０重量％、より好ましくは５重量％～２０重量％、より好ましくは１０重量％～２０重量％の範囲である。

組成物がナノ粒子を含む場合、好ましくは、ナノ粒子は組成物の約１重量％～約９０重量％を構成する。より好ましくは、ナノ粒子は、組成物の約５重量％～約５０重量％、より好ましくは約１０重量％～約３０重量％を構成する。組成物は、ビヒクルをさらに含んでもよい。ビヒクルは、当技術分野で知られているように、任意の薬学的に許容し得る希釈剤または賦形剤であり得る。媒体は通常、薬理学的に不活性である。好ましくは、ビヒクルは極性液体である。特に好ましいビヒクルには、水および塩および／または緩衝液、例えば生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水を含む生理学的に許容し得る水溶液が含まれる。任意選択で、ビヒクルは生体液である。液体ビヒクルは、例えば、凍結乾燥、保存のための蒸発または遠心分離により除去して、肺または鼻投与用の粉末、注入用懸濁液用の粉末、または経口投与用の錠剤またはカプセルを提供し得る。

本明細書に記載の組成物の投与は、経口、舌下、皮下、静脈内、腫瘍内、鼻腔内、局所、経皮、腹腔内、筋肉内、肺内、膣内、直腸内、または眼内投与を含むがこれらに限定されない、そのような組成物の許容される投与様式のいずれかによることができる。いくつかの実施態様において、経口投与または非経口投与が使用される。いくつかの実施態様において、組成物は静脈内または腫瘍内に投与される。

ナノ粒子は生体適合性があり、使用環境に対して十分な耐性があり、十分な量のナノ粒子が哺乳動物の体内に入った後、所望の標的に到達して所望の生理学的効果を達成できるように実質的に無傷のままである。本明細書に記載されるポリマーは生体適合性であり、好ましくは生分解性である。
本明細書において、「生体適合性」という用語は、有害な反応を引き起こすことなく生体に挿入または注入され得る物質として説明される。例えば、適切に制御できない炎症や免疫系による急性拒絶を引き起こさない。「生体適合性」は相対的な用語であり、生体組織と非常に適合性のある物質であってもある程度の免疫応答が期待されることが認識される。物質の生体適合性を評価するための生体外試験は、物質を細胞に曝露することである。生体適合性物質は、通常、中程度の濃度（たとえば、２９μｇ／１０^４細胞）で著しい細胞死（たとえば、＞２０％）を引き起こさない。

本明細書において、「生分解性の」という用語は、生理環境下で分解して、細胞によって再利用されるか、または顕著な毒性効果なしに処分できるモノマーおよび／またはその他の非ポリマー部分を形成するポリマーを表す。分解は、例えば酵素活性または細胞機構による生物学的であっても、化学的、典型的には生理的条件下で起こる化学プロセスであってもよい。ポリマーの分解は、使用するポリマーまたはコポリマーに応じて、日、週、月、または年のオーダーの半減期で、さまざまな速度で発生し得る。これらの成分は、好ましくは生体内で炎症または他の副作用を誘発しない。ある好ましい実施態様において、生分解性化合物を分解することに依存する化学反応は触媒されない。

本明細書において、「ナノ粒子」という用語は、約１ｎｍから１０００ｎｍ未満の直径を有する固体粒子を言う。本明細書では、「微粒子」という用語は、直径が１μｍから約１００μｍの固体粒子を言う。本発明のナノ粒子の平均直径は、当技術分野で公知の方法により、好ましくは動的光散乱により決定され得る。特に、本発明は、適当にろ過水で希釈された試料と標準試験法ＩＳＯ２２４１２：２００８（キュムラント法Ａ.１.３．２）に従って、Malvern Instruments（UK）のZetasizer（商標）機器などの適切な機器を使用して、９０°の散乱角および２５℃の温度での動的光散乱によって分析される場合、約１ｎｍから１０００ｎｍ未満の直径を有する固体粒子であるナノ粒子に関する。粒子がｘｎｍの直径を持っていると言われる場合、一般にこの平均について粒子の分布があるが、粒子の直径の少なくとも数で５０％（たとえば、＞６０％、＞７０％、＞８０％、＞９０％以上）はｘ±２０％の範囲内である。本発明のナノ粒子の直径は、走査型電子顕微鏡によって測定することもできる。
好ましくは、ナノ粒子の直径は約１０から１０００ｎｍ未満、より好ましくは約５から約５００ｎｍ、より好ましくは約５０から約４００ｎｍ、より好ましくは約５０から約１５０ｎｍである。あるいは、ナノ粒子の直径は約１から約１００ｎｍである。一実施態様において、ナノ粒子は、１０％未満、好ましくは５％未満、好ましくは１％未満の凝集度を示し、好ましくは、ナノ粒子は、透過型電子顕微鏡により測定されるように、実質的に非凝集である。

本発明は、式Ｉのポリマーのマトリックス中にウイルスベースの治療薬をカプセル化してナノ粒子を形成する方法をさらに提供し、この方法は以下のステップを含む：ウイルスベースの治療薬を提供すること、ポリマーを提供すること、ウイルスベースの治療薬とポリマーを適切な条件下で接触させてナノ粒子を形成すること。特に、ウイルスベースの治療薬とポリマーは、所望の比率を得るのに適切な濃度で溶液に混合し、ゆっくりと混合し、室温で約３０分間培養して、ウイルスの負の表面電荷とポリマーの正の電荷間の静電相互作用の形成を可能にする。これで、ポリマーとウイルスの複合体を使用する準備ができた。

合成法
式Ｉのポリマーを合成する方法は、式ＩＩの化合物（Ｌ_３は上で定義したとおり）を式Ｌ_４Ｈ_２の化合物（Ｌ_４は上で定義したとおり）と反応させて、以下に示される式ＩＩのポリマーを生成するステップを含む。

式ＩＩＩの化合物は、式ＩＶの化合物とさらに反応して、式Ｖの化合物を形成する：

式中、ｐおよびＲａは各出現で独立して、上記で定義されたリストから選択される。場合によっては、ｐの各出現は同じであり、硫黄結合から始まるＲａ基のシーケンスが化合物の各末端で同じになるように、Ｒａ基が選択され、つまり、ｐおよびＲａは、ポリマーがＬ_４に関して２回対称であるように選択される。

上記ステップの代わりに、式ＩＩＩの化合物をさらに式Ｈ_２ＮＲ_ｙの化合物と反応させ、式中、Ｒ_ｙは上で定義したとおりであり、式ＩＶの化合物と生成した混合物を分離して式ＶＩ：

の化合物を得る：
式中、Ｒａは上記で定義されたリストから各出現で独立して選択され、ｐは上記で定義されたとおりである。
式ＩＩＩの化合物にオリゴペプチドを結合させるさらなる方法が、式ＩＩＩの末端アクリレート基での反応に適切な求核試薬を知っている当業者に利用可能であることが認識されるであろう。

本発明のさらなる側面によれば、医薬品で使用するための本明細書で定義される複合体または組成物が提供されている。
本発明のさらなる側面によれば、全身性ウイルス遺伝子治療で使用するための本明細書で定義される複合体または組成物が提供されている。
本発明のさらなる側面によれば、がんの処置に使用するための本明細書で定義される複合体または組成物が提供されている。いくつかの実施態様において、がんは肝臓がんである。いくつかの実施態様において、がんは膵臓がんである。

図１は、凝固アッセイの結果を示している。図２は、血小板の活性化を測定するアッセイの結果を示している。ポリマーアッセイは、図２の「ポリマー」および「ポリマー＋ＡＤＰ」の各結果の左側のバーとして示されている。ＤＭＳＯアッセイは、図２の「ポリマー」および「ポリマー＋ＡＤＰ」の各結果の右側のバーとして示されている。図３は、腫瘍溶解性アデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａの概略図を示している。図４は、アデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１ＡおよびＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａの概略図を示している。図５は、本発明によるポリマーコーティングのないウイルス（１）、および結合抗体によって攻撃された同じウイルス（２）を示す。図６は、本発明によるポリマーコーティング（３）で被覆されたウイルス（１）を示す。抗体（４）は、ポリマーコーティングが存在するため、ウイルスに結合できない。図７は、中和抗体に対するＰＢＡＥポリマーのマスキング能力を決定するアッセイの結果を示している。図８は、適応免疫応答の活性化の測定、具体的には以下で議論されるＮＤ５０の決定を測定するためのアッセイの結果を示す。図９は、血液循環動態を測定するアッセイの結果を示している。図１０は、ＲＬＵが相対光単位を指す場合、肝臓の親和性を測定するアッセイの結果を示している。図１１は、ＲＬＵが相対光単位を指す場合、腫瘍の親和性を測定するアッセイの結果を示している。図１２は、実施例１６に示した抗腫瘍活性試験のプロトコルを示している。図１３は、実施例１６で行った検討の結果を示している。図１４は、実施例１６で行った検討の結果を示している。図１５は、実施例１７で行った検討の結果を示している。図１６は、実施例１７で行った検討の結果を示している。図１７は、実施例１７で行った検討の結果を示している。図１７は、実施例１７で行った検討の結果を示している。図１８は、実施例１７で行った検討の結果を示している。図１９に、ＳＡＧ－１０１の透過型電子顕微鏡写真を示す。図２０は、実施例１９で行った検討の結果を示す。図２０は、実施例１９で行った検討の結果を示す。図２１に、実施例２０のナノ粒子の走査型電子顕微鏡写真を示す。以下の実施例により本発明をさらに説明する。実施例は、例示のみを目的とするものであり、上記の本発明を限定することを意図するものではないことが理解されよう。本発明の範囲から逸脱することなく、細部の修飾を行うことができる。

実施例１：ＰＢＡＥポリマーの合成
ポリ（β－アミノエステル）は、文献に記載されている二段階の手順に従って合成された（例えば、Montserrat, N. et al. J. Biol. Chem. 286, 12417-12428 (2011)）。最初に、第一級アミンとジアクリレート（アミン：ジアクリレートのモル比１：１．２の付加反応）により、アクリレート末端ポリマーを合成した。最後に、得られたアクリレート末端ポリマーを異なる種類のアミンおよびチオール含有部分でエンドキャッピング修飾することにより、ＰＢＡＥが得られた。合成された構造は、^１Ｈ－ＮＭＲおよびＦＴ－ＩＲ分析により確認された。ＮＭＲスペクトルは４００ＭＨｚＶａｒｉａｎ（Varian NMR Instruments, Claredon Hills, IL）で記録し、メタノール－ｄ_４を溶媒として使用した。ＩＲスペクトルは、蒸着膜における溶媒としてメタノールを使用し、ＫＢｒビームスプリッターを備えたＮｉｃｏｌｅｔＭａｇｎａ５６０（Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA）を使用して得られた。２つのＧＰＣＵｌｔｒａｓｔｙｒａｇｅｌカラム、１０^３および１０^４Ａ（５μｍ混合、300 mm x 19 mm、Waters Millipore Corporation, Milford, MA, US）およびＴＨＦを移動相として装備したＨｅｗｌｅｔｔ－Ｐａｃｋａｒｄ１０５０シリーズＨＰＬＣシステムで分子量測定を実施した。分子量は、ポリスチレン標準の保持時間と比較して計算した。

実施例２：アクリレート末端中間体（Ｃ３２）の合成
１，４－ブタンジオールジアクリレート（８．９６ｇ、４．０７ｘ１０^－２ｍｏｌ）と５－アミノ－１－ペンタノール（３．５ｇ、３．３９ｘ１０^－２ｍｏｌ）をバイアル中で混合した。混合物を９０℃で２４時間撹拌し、次いで、室温まで冷却し、わずかに黄色の粘性固体のアクリル酸エステル末端中間体を形成した（Ｃ３２と命名）。中間体のＣ３２は、後続の段階で使用する前に４℃にて保存した。

実施例２Ａ：アクリレート末端中間体（Ｃ６）の合成

丸底フラスコ内で、５－アミノ－１－ペンタノール（３．９ｇ、３８ｍｍｏｌ）、ヘキシルアミン（３．８ｇ、３８ｍｍｏｌ）および１，４－ブタンジオールジアクリレート（１８ｇ、８２ｍｍｏｌ）を混合し、反応物を窒素雰囲気下、９０℃で１８時間撹拌した。室温まで冷却した後、生成物（Ｃ６と命名）を黄色の油状物として収集した（２５ｇ、ｎ＝８、Ｍｗ＝２３００）。生成物をＮＭＲおよびＧＰＣにより分析した。
¹H-NMR(CDCI₃):6.40(dd、2H、J 17.3、1.5 Hz)、6.11(dd、2H、J 17.3、10.4 Hz)、5.82(dd、2H、J 10.4、1.5 Hz)、4.18(m、4H) 、4.08(m、32H)、3.61(m、16H)、2.76(m、32H、J 7.2 Hz)、2.41(m、48H)、1.69(m、32H)、1.56(m、8H )、1.49～1.20(m、40H)および0.87(t、12H、J 6.9 Hz)ppm。

実施例２Ｂ：ジスルフィド結合を特徴とするアクリレート末端中間体の合成
４－アミノ－１－ブタノールまたは５－アミノ－１－ペンタノールを、ヘキサン－１，６－ジイルジアクリレートとジスルファンジイルビス（エタン－２，１－ジイル）ジアクリレートの等モル混合物と重合させて、ジスルフィド結合を特徴とするアクリレート末端中間体を形成した。

実施例３：オリゴペプチドで末端修飾されたＰＢＡＥの合成
一般に、オリゴペプチド修飾ＰＢＡＥは、次のようにして得られた：アクリレート末端ポリマーＣ３２またはＣ３２ＳＳおよびアミンまたはチオール末端オリゴペプチド（例えば、ＨＳ－Ｃｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ（ＣＲ３）、Ｈ_２Ｎ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ（Ｒ３）またはＨＳ－Ｃｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ（ＣＥ３）－他のオリゴペプチドは、標準の１文字コードを使用した同様の略語で示されている）をＤＭＳＯ中１：２のモル比で混合した。混合物を室温で一晩撹拌し、ジエチルエーテル：アセトン（３：１）中で沈殿させることにより、生成ポリマーを得た。

（ａ）トリアルギニン末端修飾ＰＢＡＥを得るための次の合成手順を例として示す：中間体Ｃ３２は、上記の実施例２に表されるように調製された。ＤＭＳＯ（２ｍｌ）中の中間体Ｃ３２（０．１５ｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のオリゴペプチド（Ｃｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ（ＣＲ３；０．１１ｇ、０．１５ｍｍｏｌ））の対応する溶液と適切なモル比、それぞれ１：２で混合した。混合物を室温で一晩撹拌した後、ジエチルエーテル／アセトン中（３：１）で沈殿させた。

IR (蒸着フィルム): ν = 721, 801, 834, 951, 1029, 1133 (C-O), 1201, 1421, 1466, 1542, 1672 (C=O, ペプチドアミドより), 1731 (C=O, エステルより), 2858, 2941, 3182, 3343 (N-H, O-H) cm^-1
¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD, TMS) (ppm): δ = 4.41-4.33 (br, NH₂-C(=O)-CH-NH-C(=O)-CH-NH-C(=O)-CH-NH-C(=O)-CH-CH₂-, 4.11 (t, CH₂-CH ₂-O), 3.55 (t, CH₂-CH ₂-OH), 3.22 (br, NH₂-C(=NH)-NH-CH ₂-, OH-(CH₂)₄-CH ₂-N-), 3.04 (t, CH₂-CH ₂-N-), 2.82 (dd, -CH ₂-S-CH ₂), 2.48 (br, -N-CH₂-CH ₂-C(=O)-O), 1.90 (m, NH₂-C(=NH)-NH-(CH₂)₂-CH ₂-CH-), 1.73 (br, -O-CH₂-CH2-CH2-CH₂-O), 1.69 (m, NH₂-C(=NH)-NH-CH₂-CH ₂-CH₂-), 1.56 (br, -CH ₂-CH₂-CH ₂-CH₂-OH), 1.39 (br, -N-(CH₂)₂-CH ₂-(CH₂)₂-OH).

（ｂ）トリリジン修飾オリゴペプチド（Ｋ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＫ３）を同じプロトコルに従って調製し、以下のように特徴付けされた。
IR (蒸着フィルム): ν = 721, 799, 834, 1040, 1132, 1179 (C-O), 1201, 1397, 1459, 1541, 1675 (C=O, ペプチドアミドより), 1732 (C=O, エステルより), 2861, 2940, 3348 (N-H, O-H) cm^-1
¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD, TMS) (ppm): δ = 4.38-4.29 (br, NH₂-(CH₂)₄-CH-), 4.13 (t, CH₂-CH ₂-O-),3.73 (br,NH₂-CH-CH₂-S-), 3.55 (t, CH₂-CH ₂-OH), 2.94 (br, CH₂-CH ₂-N-, NH₂-CH ₂-(CH₂)₃-CH-), 2.81 (dd, -CH ₂-S-CH ₂), 2.57 (br, -N-CH₂-CH ₂-C(=O)-O), 1.85 (m, NH₂-(CH₂)₃-CH ₂-CH-), 1.74 (br, -O-CH₂-CH2-CH2-CH₂-O), 1.68 (m, NH₂-CH₂-CH ₂-(CH₂)₂-CH-), 1.54 (br, -CH ₂-CH₂-CH ₂-CH₂-OH), 1.37 (br, -N-(CH₂)₂-CH ₂-(CH₂)₂-OH).

（ｃ）同じプロトコルに従ってトリヒスチジン修飾オリゴペプチド（Ｈ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＨ３）を調製し、以下のように特徴付けされた。
IR（蒸着フィルム）:ν = 720, 799, 832, 1040, 1132, 1201 , 1335, 1403, 1467, 1539, 1674 (C=O, ペプチドアミドより), 1731 (C=O, エステルより, 2865, 2941 , 3336 (N-H, O-H) cm ¹
¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD, TMS) (ppm): δ = 8.0-7.0 (br -N(=CH)-NH-C(=CH)-) 4.61 -4.36 (br, -CH₂-CH-), 4.16 (t, CH₂-CH₂-O-), 3.55 (t, CH₂-CH₂-OH), 3.18 (t, CH₂-CH₂-N-, 3.06 (dd, -CH₂-CH-), 2.88 (br, OH-(CH₂)₄-CH₂-N-), 2.82 (dd, -CH₂-S-CH₂-), 2.72 (br, -N-CH₂-CH₂-C(=O)-O), 1 .75 (br, -0-CH₂-CH2-CH2-CH₂-O), 1 .65 (m, NH₂-CH₂-CH₂-(CH₂)₂-CH-), 1 .58 (br, -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-OH), 1 .40 (br, -N-(CH₂)₂-CH₂-(CH₂)₂-OH).

実施例３Ａ：オリゴペプチド（Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３）で末端修飾したＰＢＡＥの合成

ペプチドのクロルハイドレートを得るために、２０ｍＬの０．１ＭＨＣｌをペプチドＣＲＲＲ（２００ｍｇ）に加え、溶液を凍結乾燥した。
丸底フラスコで、ジメチルスルホキシド（１．１ｍＬ）にＰＢＡＥＣ６（１１３ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を溶かした溶液とジメチルスルホキシド（１ｍＬ）中のＣＲＲＲペプチド水和物（９９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）溶液を混合した。反応物を窒素下室温で２４時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテル－アセトン（７：３）上に加え、白色沈殿物を得た。懸濁液を４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、溶媒を除去した。固体をジエチルエーテル－アセトン（７：３）で２回洗浄し、真空下で乾燥させて、白色の固体（２３３ｍｇ）を得た。生成物をＮＭＲ（ＭｅＯＤ）で分析し、構造は一致していた。

実施例３Ｂ：オリゴペプチドで末端修飾された他のＰＢＡＥの合成

ＰＢＡＥＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３の合成について説明した同じ手順を、以下の合成のためにＰＢＡＥＣ６で使用した。
－ペプチドＣＨＨＨを含むＰＢＡＥＨ３Ｃ－Ｃ６－ＣＨ３。
－ペプチドＣＫＫＫを含むＰＢＡＥＫ３Ｃ－Ｃ６－ＣＫ３。
－ペプチドＣＤＤＤを含むＰＢＡＥＤ３Ｃ－Ｃ６－ＣＤ３。
－ペプチドＣＥＥＥを含むＰＢＡＥＥ３Ｃ－Ｃ６－ＣＥ３。

実施例３Ｃ：オリゴペプチドで末端修飾された他のＰＢＡＲの合成
ＰＢＡＥＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３の合成に関する上記の手順は、ＰＢＡＥで使用し得る。
以下の合成用Ｃ３２：
－ペプチドＣＲＲＲを持つＰＢＡＥＲ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＲ３。
－ペプチドＣＨＨＨを持つＰＢＡＥＨ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＨ３。
－ペプチドＣＫＫＫを持つＰＢＡＥＫ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＫ３。
－ペプチドＣＤＤＤを持つＰＢＡＥＤ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＤ３。
－ペプチドＣＥＥＥを持つＰＢＡＥＥ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＥ３。

実施例４：非対称末端修飾を有するＰＢＡＥの合成
一般に、非対称オリゴペプチド修飾ＰＢＡＥは次のようにして得られた。アクリレート末端ポリマーＣ３２（またはＣ３２ＳＳ）およびアミン末端またはチオール末端オリゴペプチド（例えば、ＣＲ３、Ｒ３、ＣＥ３）をＤＭＳＯ中でモル比１：１で混合した。混合物を室温で一晩撹拌した。等モル量の第２アミンまたはチオール末端オリゴペプチド、または第１アミンを添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。生成した非対称ＰＢＡＥポリマーは、ジエチルエーテル／アセトン（３：１）における沈殿により得られた。
非対称末端修飾Ｂ３－Ｃ３２－ＣＲ３ＰＢＡＥを得るための以下の合成手順を例として示す：ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の中間体Ｃ３２（０．１５ｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）の溶液をＤＭＳＯ（１ｍｌ）中のオリゴペプチドＣｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ（ＣＲ３；０．０５５ｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）の対応する溶液と混合し、室温で一晩攪拌した。続いて、２－メチル－１，５－ペンタンジアミン（０．０１７ｇ、０．０２ｍｌ、０．１５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ中、室温で４時間混合物に加えた。非対称末端修飾ポリマーＢ３－Ｃ３２－ＣＲ３とＢ３－Ｃ３２－Ｂ３およびＲ３Ｃ－Ｃ３２－ＣＲ３の混合物は、ジエチルエーテル／アセトン（３：１）で一晩沈殿させることにより得られた。非対称末端修飾ポリマーＢ３－Ｃ３２－ＣＲ３は、標準的な方法で混合物から分離し得る。

実施例５Ａ：ＰＥＧ修飾ＰＢＡＥの合成
ステップ１：ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨの合成
ＭｅＯ－ＰＥＧ（５ｇ、Ｍｗ＝２０００、２．５ｍｍｏｌ）および無水コハク酸（０．２７５ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液に、トリエチルアミン（０．１７４ｍＬ、１．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、１ＭＨＣｌ（１ｍｌ）で２回洗浄した。有機相をブラインで２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。固体を濾別し、溶媒を真空下で蒸発させて、白色固体（４．４７ｇ）を得た。生成物をＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で分析し、構造は一致していた。

ステップ２：Ｎ－ｂｏｃ５－アミノ－１－ペンタノールの合成
５－アミノ－１－ペンタノール（０．５２５ｇ、５．１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７７９ｍＬ、５．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６ｍＬ）溶液に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１．１ｇ、５．１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、０．５ＭＨＣｌ（１ｍｌ）で３回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させた。固体を濾別し、溶媒を真空下で蒸発させて、白色の固体（１．３ｇ）を得た。生成物をＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で分析し、構造は一致していた。

ステップ３：ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＮＨＢｏｃの合成
ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＣＯＯＨ（１ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１４ｍＬ）溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（１５１ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ‘－ジメチルアミノピリジン（９ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を加えた。５分後、ジクロロメタン（１ｍＬ）中のＮ－ｂｏｃ５－アミノ－１－ペンタノール（１００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液を混合物に加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌し、次いで固体を濾別した。溶媒を真空下で蒸発させ、残留物をジエチルエーテル（５ｍＬ）で３回洗浄した。生成物を真空下で乾燥させて、白色固体（０．９４０ｇ）を得た。化合物をＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で分析したところ、構造は予想される構造と一致していた。

ステップ４：ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＮＨ_２の合成
ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＮＨＢｏｃ（４６４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に、０℃でトリフルオロ酢酸（１．２ｍＬ）を加えた。反応混合物を０℃で１０分間撹拌した後、室温で２時間撹拌した。溶媒を真空下で減少させ、残渣をジエチルエーテル（５ｍＬ）で２回洗浄した。生成物をジクロロメタン（８ｍＬ）に溶解し、０．５ＭＮａＯＨ（１ｍｌ）で２回洗浄した。有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。固体を濾別し、溶媒を真空下で蒸発させて、白色固体を得た（３１９ｍｇ）。生成物をＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で分析し、構造は予想される構造と一致していた。

ステップ５：ＰＢＡＥＣ６－ＰＥＧの合成

５－アミノ－１－ペンタノール（４２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、ヘキシルアミン（４１ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）およびＭｅＯ－ＰＥＧ－ＮＨ_２（３１４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に混合し、溶媒を真空下で減少させた。残渣に１，４－ブタンジオールジアクリレート（１９８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を窒素下で９０℃で１８時間撹拌した。室温まで冷却した後、生成物を黄色の固体として収集した（５２７ｍｇ、ｎ＝７）。生成物をＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）で分析し、構造は一致していた。

¹H-NMR（CDCI₃）：6.40 (dd, 2H, J 17.3, 1 .5 Hz), 6.11 (dd, 2H, J 17.3, 10.4 Hz), 5.82 (dd, 2H, J 10.4, 1 .5 Hz), 4.18 (m, 4H), 4.08 (m, 28 H), 3.63 (m, -OCH2-CH2O-, PEG), 3.37 (s, CH3O-, PEG), 2.76 (m, 28H), 2.43 (m, 42H), 1 .80-1 .20 (m)および0.87 (t, 12H, J 6.9 Hz) ppm.

ステップ６：ＰＢＡＥＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧの合成

ペプチドのクロルハイドレートを得るために、０．１ＭＨＣｌ、１５ｍＬをペプチドＣＲＲＲ（１５０ｍｇ）に加え、溶液を凍結乾燥した。
丸底フラスコ中で、ＰＢＡＥＣ６－ＰＥＧ（９２ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１．２ｍＬ）溶液とペプチドＣＲＲＲクロルハイドレート（４０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１．１ｍＬ）溶液を混合した。反応物を窒素下室温で２０時間撹拌した。反応混合物をジエチルエーテル－アセトン（７：３）上に加え、白色沈殿物を得た。懸濁液を４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、溶媒を除去した。固体をジエチルエーテル－アセトン（７：３）で２回洗浄し、真空下で乾燥させて、白色固体（１３３ｍｇ）を得た。生成物をＮＭＲ（ＭｅＯＤ）で分析し、構造は一致していた。

実施例５Ｂ：リンカー部分を介してＰＥＧがＰＢＡＥに結合している、ＰＥＧ修飾ＰＢＡＥの合成
ステップ１：メトキシ化ＰＥＧ酸の合成
１．メトキシ化ＰＥＧ（５ｇ、２．５ｍｍｏｌ）を丸底フラスコに加える。
２．フラスコにジクロロメタン（５ｍＬ）を追加する。
３．無水コハク酸（０．２７５ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を溶液に加える。
４．混合物にトリエチルアミン（０．１７４ｍＬ、１．２５ｍｍｏｌ）を添加する。
５．次に、混合物を室温で４時間攪拌する。
６．混合物の反応液を１ＭＨＣｌ（１ｍｌ）で２回洗浄する。
７．溶液をブラインで２回洗浄する。
８．有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させる。
９．固体をろ過し、真空下で溶媒を蒸発させる。

ステップ２：エステル化の反応

１．メトキシＰＥＧ酸（２３０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をねじタップチューブに添加する。
２．チューブにジクロロメタン（１．５ｍＬ）を添加する。
３．ジシクロヘキシルカルボジイミド（３４ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を溶液に加える。
４．溶液を室温で２０分間撹拌する。
５．Ｃ６ＰＢＡＥ（２００ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）の溶液をジクロロメタン（１ｍＬ）に加える。
６．次に、混合物を室温で２０時間撹拌する。
７．固体をろ過し、真空下で溶媒を蒸発させる。

ステップ３：ペプチドとの反応

１．０．１ＭＨＣｌ（２０ｍＬ）をペプチドＣｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ（２００ｍｇ）に添加する。
２．－８０℃にて溶液を凍結し、ペプチドを凍結乾燥させる。
３．Ｃ６－連結ＰＥＧＰＢＡＥ（１１４ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（０．８ｍＬ）溶液を調製する。
４．Ｃｙｓ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ（５０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（０．８ｍＬ）溶液を調製する。
５．ねじタップチューブ中で２つの溶液を混合する。
６．混合溶液を室温で２０時間撹拌する。
７．混合物を７：３のジエチルエーテル／アセトン（８ｍＬ）滴下する。
８．懸濁液を４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、溶媒を除去します。
９．７：３のジエチルエーテル／アセトン（４ｍＬ）で固体を2回洗浄する。
１０．真空下で製品を乾燥させる。
１１．ジメチルスルホキシド中１００ｍｇ／ｍＬの製品の溶液を作る。

実施例６：化合物のライブラリー
さまざまなオリゴペプチド末端修飾ＰＢＡＥのライブラリーは、ジアクリレートに一級アミンを加えてから末端修飾することにより合成された。式Ｉに従って、表１に示されたオリゴペプチド末端修飾ＰＢＡＥを合成した。

実施例７：凝固アッセイ
凝固カスケードは一般に３つの経路に分けられる。３つの凝固経路に対する本願に記載のポリマーの効果は、３つの代表的なパラメーターを測定することにより評価された。具体的には、内因性経路は活性化部分トロンボプラスチン時間によって測定され、外因性経路はプロトロンビン時間によって測定され、最終的な共有経路はトロンビン時間を測定することによって評価された。凝固因子の本発明に記載のポリマーとの結合または枯渇により凝固カスケードに誘発される可能性のある変化を評価して、血塊形成を形成するのに必要な時間を測定した。

使用したポリマーには、６５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３と３５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧが含まれる。３つの異なる濃度が検討された：３５５μｇ／ｍｌ、２１３μｇ／ｍｌおよび１０６．５μｇ／ｍｌ。手短に言えば、ポリマーを少なくとも３人のドナーからのヒトプール血漿を用いてインキュベートした。血塊形成は、数秒で測定する止血アナライザーを使用した粘度ベースの検出システムによって検出された。このシステムは、サンプルの物理化学的属性による干渉を回避する。各経路の参照値は次のとおりである：部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）≦３４．１秒、プロトロンビン時間（ＰＴ）≦１３．４秒、トロンビン時間（ＴＴ）≦２１秒。延長の程度に関するガイダンスはないが、通常は、通常のコントロールに対して２倍以上の延長が生理学的に重要であると考えられている。

図１に示すように、プールされたヒト血漿（陰性対照）の凝固時間には、正常対照に対して変化はあり得なかった。技術の内部対照として、正常および病理学的（異常）対照が使用された。ポリマーストックはＤＭＳＯに溶解されたため、溶解の対照もアッセイに含まれた。ＤＭＳＯ単独では、凝固時間に変化は見られなかった。
図１に示すように、ポリマーは、試験したどの濃度でも凝固時間に有意な変化を誘発しなかった。凝固時間は、３５５μｇ／ｍＬ、２１３μｇ／ｍＬおよび１０６．５μｇ／ｍＬでのポリマーの暴露後、通常の限界内であった。ポリマーは、テストした最高濃度でプロトロンビン時間（ＰＴ）を短縮し、それは陰性対照に関して統計的に有意であった。

実施例８：血小板活性化アッセイ
血小板の活性化には内皮細胞、白血球、その他の血小板の脱顆粒と活性化が伴い、最終的に血栓の形成を引き起こす。血小板は、一次止血に関与する小さな無核円盤状細胞である。それらの内部構造と膜は、血小板の活性化において中心的な役割を果たす。血小板活性化の最も信頼できるマーカーの１つはＣＤ６２Ｐである。これは、血小板に特異的なセレクチンタンパク質であり、静止血小板の内部α顆粒性膜に発現している。この受容体は、活性化された内皮細胞の表面上の血小板のテザリングと回転を媒介する。血小板の活性化と顆粒分泌により、α顆粒性膜は外部形質膜と融合し、ＣＤ６２Ｐ抗原は活性化された血小板の表面に発現される。

血小板活性化を誘導または阻害する本出願に記載のポリマーの効果は、フローサイトメトリーによる活性化血小板の表面上のＣＤ６２Ｐの発現により測定された。使用したポリマーには、６５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３と３５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧを含有していた。３つの異なる濃度が検討された：３５５μｇ／ｍｌ、２１３μｇ／ｍｌおよび１０６．５μｇ／ｍｌ。結果は、基礎レベルに関して標準化された（陰性対照）。相対蛍光強度が陰性対照に対して２．０を超える場合、結果はポジティブ（陽性）と見なされた。

図２に示すように、ポリマーは、多血小板血漿（ＰＲＰ）のプールとインキュベートしたときに、試験したどの濃度でも血小板活性化を誘発しなかった。ポリマーストックはＤＭＳＯに溶解したため、溶解の対照もアッセイに含まれた。図２に示すように、ＤＭＳＯは血小板の活性化を誘発しなかった。

血小板活性化に対するポリマーの潜在的な阻害効果の対照として、アッセイはＡＤＰ（アデノシン二リン酸）でも実施された。ポリマーは、ＡＤＰの存在下で血小板の活性化を阻害しなかった。結果は、本出願に記載されているポリマーが、試験された条件下で血小板活性化を誘発または阻害しないことを示唆している。

実施例９：ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａウイルス
構造
ノッチ応答遺伝子は、プロモーター領域のＣＳＬ転写因子を認識するＤＮＡ結合ドメインによって特徴付けられる。二重の「配列ペア」ＣＳＬ結合部位（ＳＰＳ）の存在は、頭と頭を向き、１６ｎｔで分離されていることにより、Ｎｏｔｃｈ転写複合体の二量体化が促進され、Ｈｅｓ１（Nam Y、Sliz P、Pear WS、Aster JC、Blacklow SC. 高次ノッチ複合体の協同的アセンブリは、転写を誘発するスイッチとして機能する。Proc Natl Acad Sci USA. 2007; 104:2103-2108）などのノッチ標的遺伝子の転写活性化に導く。
ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａは、ノッチシグナル伝達活性化（ＳＰＳ）に応答する３つの配列で設計された合成プロモーターと、Ｅ１Ａ発現を制御する最小ｕＰＡＲプロモーターを含有する。さらに、成長ホルモン境界領域（ＳＩＮＥＢ２）から２１４ｂｐの短い散在核要素Ｂ２は、ｕＰＡＲプロモーターの上流に挿入され、絶縁体配列として機能し、ＩＴＲウイルスプロモーターによるＥ１Ａの如何なる可能な非特異的転写活性化をも回避し、それは腫瘍選択性を低下させる。Ｅ１Ａアデノウイルス遺伝子の発現は、３ｘＳＰＳｕＰＡＲｍプロモーターによって制御される。ＳＩＮＥＢ２絶縁体配列は、プロモーター配列の上流にクローニングされた（図３を参照）。

生産と分析
腫瘍溶解性アデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａは、最初に３ｘＳＰＳｕＰＡＲｍプロモーターをｐＳｈｕｔｔｌｅベクターにクローニングし、プロモーターの上流にＳＩＮＥＢ２絶縁体を挿入してｐＳｈＳＩＮＥ３ｘＳＰＳｕＰＡＲｍＥ１Ａを生成することにより生成される。ｐＳｈＳＩＮＥ３ｘＳＰＳｕＰＡＲｍＥ１Ａベクターのアデノウイルスゲノムとの相同組換えは、標準プロトコルに続いて行われ、ｐＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａを生成する。次に、組換えゲノムをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、Ａ５４９細胞で増幅し、標準塩化セシウムバンディング（Mato-Berciano A1、Raimondi G、Mariandi MV、Alemany R、Montoliu L、Fillat C. ノッチ感受性でｕＰＡＲ－生成された腫瘍溶解性アデノウイルスは、膵臓腫瘍の成長を効果的に抑制し、ゲムシタビンおよびｎａｂ－パクリタキセルとの相乗的な抗癌効果を引き起こす。Oncotarget. 2017; 8(14) 22700-22715)によって精製される。

アデノウイルス濃度は、２つの異なる方法で測定される。
ａ）物理的粒子濃度（ｖｐ／ｍｌ）は光学密度の読み取り（ＯＤ２６０）によって測定される。
ｂ）プラーク形成単位（ｐｆｕ／ｍｌ）は、抗ヘキソン染色ベースの方法によってＨＥＫ２９３細胞で測定される。

実施例１０：ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１ＡおよびＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａウイルス
Ｅ１Ａ遺伝子発現がｕＰＡＲプロモーターによって制御されている腫瘍溶解性ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａウイルスが生成された。コザック配列は、その複製能を高めるためにＥ１Ａ遺伝子の上流で設計された（ｍＲＮＡ分子上のこの配列は、タンパク質がそのｍＲＮＡ分子によってそこからコードされる、翻訳開始部位としてリボソームによって認識される）。エンハンサー抑制絶縁体活性を持つ筋強直性ジストロフィー遺伝子座（ＤＭ－１）からのＤＮＡ断片をｕＰＡＲプロモーターの上流に導入して、アデノウイルスゲノムのエンハンサーおよび転写ユニットから分離した（図４を参照）。
ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａには、構造は同じであるが、ｕＰＡＲプロモーターの短いバージョン、およびノッチ細胞内ドメイン（ＮＩＣＤ）に結合できる３つの応答要素を有する（図２を参照）。

実施例１１：ポリマー－ウイルス複合体の形成と特性評価
複合体を準備する前の考慮事項
ウイルスストックはｖｐ／ｍｌおよびｐｆｕ／ｍｌで滴定する必要があり、ｖｐ／ｐｆｕ間の比率は１００未満でなければならない。この品質許容基準に達していない場合、ウイルス産生を繰り返す必要がある。この手順を進める前に、物理的なＶｐ／ｍｌ力価を確認する必要がある。
使用される主な製剤は、比率が６５／３５のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３／Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧであるが、このプロトコルは他の製剤を使用する際に適合させることができる。唯一必要なのは、４ｅ６分子ＰＢＡＥ／ｖｐの比率を維持することである。

体外スケールの手順
１．－８０℃フリーザーから２μｌのウイルスアリコートを取る（アデノウイルスベクターの凍結融解プロセスは、感染効率を失うため推奨されない。このため、ウイルスを産生する場合は、使用する分画のみを解凍するために、少量のアリコートに分割することを強く推奨する）。ウイルスは氷上で非常にゆっくり解凍する必要がある。
２．両方のポリマーを解凍し、６５／３５ｖ／ｖで混合物を調製する。ポリマー混合物は－２０℃で保存できる。
３．インビトロで使用する被覆ウイルスを調製する場合、２μｌのアリコート全体が被覆される。ＰＢＳ（２μｌのウイルス＋９８μｌＰＢＳ）でウイルスストックの１／５０希釈液を調製する。もたらされた溶液にはＶＳと標識される。
４．以下の式１に従ってＶＳのすべてのウイルス粒子をコーティングするために必要なポリマーの量（μｌＰＢＡＥストック）を計算する。

５．ＰＢＳをＰＢＡＥストックの計算された体積と混合して最終的な体積が１００μｌになるようにポリマー溶液（ＰＳ）を調製する。
６．ＰＳをＶＳに追加し、少なくとも１０回ゆっくりとピペッティングしてＰＳとＶＳを混合する。
７．サンプルを室温で３０分間インキュベートして、ウイルスの負の表面電荷とポリマーの正の電荷間の静電相互作用を可能にする。
８．これで、得られた力価が１００倍希釈されたことを考慮して、サンプルを使用する準備が整った。完全な培地で希釈して、目的の作業濃度に到達できる。

生体内スケールの手順
１．ｎ^０匹の動物（４匹ごとに１匹を超える動物を伴う）と投与量（通常、尾静脈からの１００μｌボーラス注射で４ｘ１０^１０ｖｐ／動物静脈内注射）を考慮して、必要な合計ＶＰを計算する。
２．必要なウイルスストックの容量（Ｖ_{ｓｔｏｃｋ}）を計算して、０．９％の塩化ナトリウムの生理食塩水１ｍｌの最終容量に４ｅ１１ＶＰｓ／ｍｌの注射液を調製する。（注射液の濃度は、作業用量に依存する。この場合、４ｘ１０^１０ＶＰ／動物）
３．すべてのウイルス粒子をコーティングするのに必要なＰＢＡＥストック溶液の総容量を計算する。

４．０．９％生理食塩水を計算した容量のＰＢＡＥストックと混合して最終容量２００μｌにすることにより、ポリマー溶液（ＰＳ）を調製する。
５．０．９％の生理食塩水を計算された容量のウイルスストックと混合して、最終容量が２００μｌになるようにウイルス溶液（ＶＳ）を調製する。
６．ＰＳをＶＳに追加し、少なくとも１０回ゆっくりとピペッティングしてＰＳとＶＳを混合する。
７．サンプルを室温で３０分間インキュベートして、ウイルスの負の表面電荷とポリマーの正の電荷間の静電相互作用を可能にする。
８．６００μｌの０．９％生理食塩水を加え、５回ゆっくりとピペッティングにて混合する。
９．サンプルを注入する準備ができた（たとえば、サンプルは８匹の動物を処理できる）。

実施例１２～実施例１６
抗腫瘍活性の結果（実施例１６）を除くすべての非臨床データは、２つのレポーター遺伝子ＧＦＰとルシフェラーゼを発現するＡｄＴｒａｃｋｌｕｃ（ＡｄＴＬ）と呼ばれる組換え血清型５アデノウイルスで得られた。さらに、ｉｎｖｉｖｏの研究では、このウイルスは２つの異なるポリマーコーティングと組み合わされた。１００％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３コーティングに対応するＣ６ＡｄおよびＣＰＥＧＡｄは、６５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３と３５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧの組み合わせを表す。

実施例１２：中和抗体に対するマスキング能力
抗Ａｄ５中和抗体（Ｎａｂｓ）からアデノウイルスを保護するのに最適なポリマーの組み合わせを決定するために、ウイルス粒子をＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３とＨ３Ｃ－Ｃ６－ＣＨ３およびＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧポリマーの異なる組み合わせでコーティングし、次に、裸のサンプルと被覆されたサンプルをＮａｂｓと３０分間インキュベートした。裸のアデノウイルスをサンプル対照として使用した。次に、ウイルス調製物（ＭＯＩ５０）を、１．５ｘ１０^４個のＰＡＮＣ－１細胞を含有する９６ウェルプレートに加えた。２時間後、培地を交換し、細胞を４８時間インキュベートした。最後に、ＧＰＦ陽性細胞をフローサイトメトリー分析により定量化した。
テストしたポリマーの組み合わせは次のとおりである。

図７が示すように、裸のアデノウイルスを中和抗体（＋裸）の存在下でインキュベートすると、それらの形質導入能力は８０％から５５％に著しく低下する。さまざまなコーティングの組み合わせの中で、６５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３と３５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧ（グラフではＣ６ＣＲ３－３５％と命名）を含む１つのコーティングが、Ａｄ５中和抗体（長方形で強調表示された単一の結果を参照）に対して際立った保護を授与することが見出された。さらに、コーティングはウイルスの感染力を低下させるだけでなく、その効力の増加を引き起こした（大きな長方形で強調表示されている複数の結果を参照）。

実施例１３：適応免疫応答の活性化
裸の被覆されたウイルス粒子が、２回の静脈内投与後に適応免疫応答を活性化する方法も検討された。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝６）は３つのグループに分割された（裸のＡｄ、Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３Ａｄ、およびＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－３５％ＰＥＧ－Ａｄ）。１ｘ１０^１０ｖｐ／動物を０および１４日目にＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの尾静脈に注射し（ｎ＝５）、１週間後の２１日目に動物を屠殺し、心内穿刺により血液を採取した。次に、血清を抽出し、熱不活化し、裸のアデノウイルスの存在下で中和アッセイを行うために血清を使用した。
各サンプルの抗体濃度を比較するために、各抗血清の中和希釈５０（ＮＤ５０）を計算した。ウイルス形質導入の半分を中和するために必要な血清の希釈として定義されるＮＤ５０は、次のように決定された。裸のＡｄｓ（ＭＯＩ０．２５）を、裸のまたはコーティングしたＡｄｓで免疫されたマウスの血清の連続希釈液とともに９６ウェルプレートで１時間インキュベートした。次に、１ｘ１０^５個のＨＥＫ２９３細胞を各ウェルに加えた。２４時間後、ルシフェラーゼ活性を定量化し、ＮＤ５０を計算した。
図８に示すように、ＣＰＥＧＡｄを注射した動物は、裸のＡｄを注射した動物よりも３倍少ない中和血清を産生し、ＣＰＥＧコーティング戦略（６５％Ｒ３ＣーＣ６－ＣＲ３＋３５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧ）が、適応免疫応答の活性化を減少させたことを示した。Ｃ６Ａｄの場合、この違いはそれほど顕著ではなかった。

実施例１４：血液循環時間の増加
裸のウイルス粒子と被覆されたウイルス粒子の血液循環動態を比較するために、ＣＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの尾静脈に１ｘ１０^１０ｖｐ／動物を注射した（ｎ＝５）。裸のＡｄ、Ｃ６Ａｄ、ＣＰＥＧＡｄの３つのグループが設立され、注射後の２つの時点、２分と１０分で伏在静脈から血液サンプルが抽出された。次に、各血液サンプルからゲノムＤＮＡ抽出を実行し、ｑＰＣＲによってヘキソン特異的プライマーを使用してウイルスゲノム／μｌを定量した。
血液循環動態は以下のように決定された。各血液サンプルからゲノムＤＮＡを抽出し、ｑＰＣＲによりヘキソン特異的プライマーを使用してウイルスゲノムコピーを定量化した。１００％の状態（注入された用量に相当）は、ＤＮＡ抽出の前に投与された用量をマウスの全血２ｍｌで希釈することにより分析された。曲線下の面積を２分から１０分まで計算し、倍率変化を変換しました。
図９に示すように、被覆されたウイルス粒子、特にＣＰＥＧの組み合わせで被覆された粒子では、循環時間が改善されました。特に、２分から１０分までの曲線下面積は、裸のウイルスアデノウイルスと比較して３倍大きかった。

実施例１５Ａ：肝臓親和性
アデノウイルスに関連する主な問題の１つは、肝臓に対する高い親和性であり、これが重大な肝毒性の原因となっている。本発明のポリマーコーティングがこの自然な挙動を減少させることができるかどうかを判定するために、１ｘ１０^１０ｖｐの裸および被覆された（Ｃ６ＡｄおよびＣＰＥＧＡｄ）アデノウイルスをＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝５）の尾静脈に投与し、５日後、全身生物発光画像を撮影し、裸のＡｄで処理したマウスまたは２つの異なるポリマー（Ｃ６Ａｄ、ＣＰＥＧＡｄ）でコーティングしたマウスの肝臓ホモジネートからルシフェラーゼ活性を定量した。
図１０が示すように、両方のタイプの被覆されたウイルス粒子は、肝細胞の形質導入能力を大幅に低下させ、ポリマーコーティングが実際に天然のアデノウイルス親和性を変更できることを示している。

実施例１５Ｂ：腫瘍親和性
被覆されたＡｄで観察された肝臓の親和性の減少が腫瘍を有するマウスでも起こるかどうかを決定するために、以下の検討が行われた。（ヒト膵臓腺癌に由来する）１×１０^５ＰＡＮＣ－１細胞を免疫不全のＢａｌｂ／Ｃのｎｕ／ｎｕマウスに皮下投与し、腫瘍が約１５０ｍｍ^３の体積に達した場合、裸のおよび被覆された（Ｃ６ＡｄとＣＰＥＧＡｄ）のアデノウイルスを１×１０^１０ｖｐだけ尾静脈に投与した（ｎ＝６）。注射の５日後、動物を屠殺し、ルシフェラーゼ活性（レポーター遺伝子として使用）を、裸のＡｄまたは２つの異なるポリマー（Ｃ６Ａｄ、ＣＰＥＧＡｄ）のいずれかでコーティングしたＡｄで処理したマウスの腫瘍および肝臓ホモジネートから定量された。
図１１に見られるように、以前に観察された肝臓での有意な形質導入の減少とは別に、ＡｄがＣＰＥＧと名付けられたポリマーコーティングで被覆された場合、腫瘍の著しい感染症の増加が検出された。この傾向は、おそらく製剤にＰＥＧが含まれていないため、Ｃ６Ａｄでは観察されなかった。全体として、これらの結果は、裸のＡｄと比較してＣＰＥＧＡｄが投与されたとき、腫瘍－肝臓比の著しい増加に導いた。

実施例１６：増加する抗腫瘍活性
２つの異なる被覆された組換えアデノウイルス（ＡｄＴＬ）、Ｃ６ＡｄおよびＣＰＥＧＡｄで得られたデータによると、Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３の６５％＋Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧの３５％からなる後者のコーティングが、ＳＡＧ－１０１を形成するための腫瘍溶解性アデノウイルスＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａと組み合わすように選択された。
ウイルスの治療効果に対するポリマーコーティングの効果を検討するために、腫瘍を持つマウスでの有効性の検討が行われた。特に、全身投与後の被覆ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（ＳＡＧ－１０１）の効力は、裸のまたは免疫前マウスのＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａのそれと比較された。ヌードマウスに予め免疫状態を生成するために、Ｃ５７ＢＬ６マウスからの抗Ａｄ中和血清の注射によってマウスを受動的に免疫化した（ヌードマウス担持皮下ＰＡＮＣ－１腫瘍は、ＰＢＳ（ナイーブな群）または抗Ａｄ５中和マウス血清（免疫前群）のいずれかで腹腔内注射した）。翌日、ナイーブなまたは受動的に免疫化されたヌードマウス担持ＰＡＮＣ－１腫瘍は、ＰＢＳまたは４×１０^１０ＶＰの裸のまたは被覆されたＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（ＳＡＧ－１０１）で静脈内注射され（ｎ＝８）、そうして腫瘍体積をモニターした。図１２は、ＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａの治療効果に対するポリマーコーティングの効果を決定するために行われたこの実験のプロトコルをまとめたものである。各グループはｎ＝８であった。

図１３に示すように、腫瘍増殖の有意な減少は、３つの処置群（裸のおよび被覆されたＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａおよび免疫前の被覆されたＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ）で、生理食塩水対照と免疫前の裸のウイルス群と比較して観察された（結果は平均＋／－ＳＥＭとして表される（*ｐ＜０．０５; **ｐ＜０．０１; ***ｐ＜０．００１））。重要なことに、免疫前の被覆された群は、ナイーブな裸のウイルスと比較した場合、ポリマーコーティングは、既存の中和抗体からウイルスを保護したことを示す、非常によく似た効果を示した。また、ナイーブな裸被覆群はナイーブな裸群よりも有意に有効であった。試験された各グループの生存期間の中央値の結果と経時的な生存率の変化の概要を図１４に示す。

実験データは、被覆されたウイルス粒子が予想外に以下の特性を示すことを示している。
１．抗体によって中和される減少傾向；
２．デノボ適応免疫応答生成能力の低下；
３．血流動態の改善；そして
４．腫瘍の形質導入の利益に対して、肝臓親和性が減少する。

実施例１７：
被覆されたＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（ＳＡＧ－１０１）の毒性を研究するために、マウスでの毒性研究を行った。コーティングは、６５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３と３５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧの組み合わせを表すＣＰＥＧＡｄで構成されていた。静脈内投与後のＳＡＧ－１０１の用量を、免疫適格性ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける裸のＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（Ａｄ）の用量と比較した。免疫適格マウスに、ＰＢＳ、４ｘ１０^１０ｖｐの裸またはコーティングＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（すなわち「低用量」）、または７．５ｘ１０^１０ｖｐの裸またはコーティングＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（すなわち「高用量」）を静脈内注射した。

実施例１７Ａ：体重
図１５に示すように、高用量の裸ＡｄＮｕＰＡＲｍＥＩ（Ａｄ）を投与されたマウスは注射後５日目に重要な体重減少を示したが、体重の有意な変化（ｐ＞０．０５）は群間で観察されなかった。高用量のＳＡＧ－１０１を投与されたグループは体重の減少を示し、低毒性が被覆されたウイルス粒子と関連していることを示している。

実施例１７Ｂ：トランスアミナーゼレベル
血清酵素トランスアミナーゼ活性は、ウイルスＩＶ注射後７日目に決定された。具体的には、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）レベルは、心内穿刺から採取した血液から測定された。
アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ、ＡＬＴ）は一般に血清中で分析して、肝臓の損傷と肝臓のウイルス感染の可能性を評価および監視する。これらの酵素は、おそらく損傷した細胞からの漏出の結果として、多くの形態の肝疾患で上昇する。ＡＬＴは主に肝臓で見られるが、腎臓、心臓、筋肉、膵臓でも少量見られる。ＡＳＴは肝臓に存在するが、筋肉を含む他の組織にもかなりの量が存在する。
図１６に示すように、トランスアミナーゼレベルは、高用量の裸のウイルス（ＡｄＮｕ）を投与した場合に有意に（* ｐ＜０．０５）高く、肝臓の損傷を示している。この効果は、同じ用量のＳＡＧ－１０１を投与されたマウスでは観察されなかった。したがって、実験データは、被覆されたウイルス粒子がトランスアミナーゼレベルの低下をもたらすことを示している。

実施例１７Ｃ：ヘモグラムと血小板数
ヘモグラム分析と血小板数を実施した。血小板数は、１日目から７日目まで１日おきにマウスの尾静脈からの血液抽出に基づいていた。図１７Ｂに示すように、裸のＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（Ａｄ）または被覆されたＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（ＣＰＥＧＡｄ）を投与されたマウス間で、７日目にヘモグラムの有意な変化は検出されなかった。
さらに、図１７Ａに示すように、血小板減少症は観察されなかった。裸のＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（Ａｄ）または被覆されたＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１Ａ（ＳＡＧ１０１）を投与されたマウスの血小板数に有意差はなかった。

実施例１７Ｄ：サイトカインの定量化
サイトカインのレベルが測定された。注射後６時間と３日で、血液アリコートを収集し、ＬｕｍｉｎｅｘｘＭＡＰ^（Ｒ）テクノロジープラットフォームを使用してサイトカイン濃度を評価した。
図１８に示すように、裸のＡｄＮｕＰＡＲｍＥ１ＡおよびＳＡＧ－１０１の投与後、サイトカインのレベルに有意な差は観察されず、ＳＡＧ－１０１ポリマーがウイルスの毒性を増加させなかったことを示している。

実施例１８：ＴＥＭ顕微鏡写真
図１９Ａは、低倍率（スケールバー２０μｍ）でＳＡＧ－１０１を示すＴＥＭ顕微鏡写真を提供し、図１９Ｂは、高倍率（スケールバー２００ｎｍ）でＳＡＧ－１０１を示すＴＥＭ顕微鏡写真を提供する。図１９Ａおよび１９Ｂに見られるように、低倍率でサンプルを分析したときに大きな凝集体は観察されなかった。

実施例１９：表面電荷の変化
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子は、６５％のＲ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３＋３５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧポリマーでコーティングされた。適切なコーティング濃度、すなわちＡＡＶとポリマーの適切な比率を決定するために、表面電荷の変化を評価することにより、ポリマーコーティングの形成を追跡した。
ＡＡＶの表面は負に帯電している（図２０Ａおよび２０Ｂに見られるように）が、使用したポリマーは正味の正電荷を提供した。したがって、ポリマーがウイルスを効果的に覆うと、複合体の表面電荷は正になった。したがって、この表面電荷の変化は、ポリマーコーティングの形成を追跡するために評価された。表面電荷の変化を追跡するために、さまざまな比率がテストされた。図２０Ｂは、表面電荷測定のプラトーを示している。したがって、追加のポリマーの追加は非論理的であった。図２０Ａでは、表面電荷の漸進的な変化を確認するために、近接したポリマー/ウイルス比をテストした。
図２０からわかるように、１ｅ－９μｇＰＢＡＥ／ＡＡＶウイルス粒子（ＶＰ）以上の比率を使用した場合、正のＺ電位値測定で示されるように、正の表面が観察され、それは、ＡＡＶ粒子がコーティングされたことを示している。図２０Ｂからわかるように、遊離ポリマーのＺ電位値の測定値の変動は、ＡＡＶのコーティングを形成するときの値と比較して非常に高くなっている。

実施例２０：走査型電子顕微鏡
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子（「裸のＡＡＶ」）、１００％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３コーティングに対応するＣ６Ａｄで被覆されたＡＡＶ粒子、および６５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３と３５％Ｒ３Ｃ－Ｃ６－ＣＲ３－ＰＥＧの組み合わせを表すＣＰＥＧＡｄで被覆されたＡＡＢ粒子は、図２１に示すように、走査型電子顕微鏡で特徴付けされた。簡単に説明すると、各サンプル（裸のウイルスと被覆されたウイルス）２００μｌを１０^１１ｖｐ／ｍｌの最終濃度（最適な可視化を得るために必要な濃度）で調製した（他の例で説明）。サンプルをグリッドに置き、そこで１分間インキュベートした。次に、それらに４０秒間金を照射して、それらの上に薄い層を作成した。最後に、それらを電界放出型走査電子顕微鏡で分析した。

さらに、走査型電子顕微鏡を使用して、ナノ粒子の直径（ｎｍ）を測定した。

凝集体の存在により、Ｃ６－ＡＡＶナノ粒子のより広い分布が現れる。上記のデータが示すように、すべての凝集体は５００ｎｍ未満であったため、このサンプルは静脈内投与にも使用できる。

Claims

式Ｉのポリマー：

式中、各Ｌ_１およびＬ_２は、以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_Ｘおよび結合；式中、Ｒ_Ｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され；
Ｌ_３は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択され；または
Ｌ_３の少なくとも１つの出現は

であり、
ここで、Ｔ_１は

であり、Ｔ_２は、Ｈ、アルキル、または

から選択され、
式中、Ｌ_Ｔは以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_Ｘ及び結合、式中Ｒ_Ｘは、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され、残りのＬ_３基は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から各出現で独立して選択され；
Ｌ_４は、

からなる群から選択され；
Ｌ_５は、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択され；
Ｒ_１およびＲ_２およびＲ_Ｔ（存在する場合）は、オリゴペプチドおよびＲ_ｙから独立して選択される；
式中、Ｒ_１およびＲ_２およびＲ_Ｔ（存在する場合）の少なくとも１つはオリゴペプチドであり；
および、ここで、Ｒ_ｙは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から選択され；
各Ｒ_３は、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリール、ヘテロアリールおよびポリアルキレングリコールからなる群から独立して選択され、前記ポリアルキレングリコールはＲ_３が結合している窒素原子に直接結合されているか、リンカー部分を介してＲ_３が結合している窒素原子に結合し、ここで、前記リンカー部分は、アルキレン、シクロアルキレン、アルケニレン、シクロアルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレンまたはヘテロアリーレン基であり、そして
ｎは５～１，０００の整数である、
またはその薬学的に許容し得る塩と、ウイルスベースの治療薬との複合体。
Ｌ_３が、アルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択される、請求項１に記載の複合体。
Ｌ_３の少なくとも１つの出現が、

である、請求項１に記載の複合体。
ここで、Ｔ_１は

であり、Ｔ_２は、Ｈ、アルキル、または

から選択され；
式中、Ｌ_Ｔは以下からなる群から独立して選択される：

Ｏ、Ｓ、ＮＲ_Ｘおよび結合；ここで、Ｒ_Ｘは、水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アシル、アリールまたはヘテロアリールからなる群から独立して選択され、残りのＬ_３基は、各出現毎にアルキレン、アルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンからなる群から独立して選択される。
少なくとも１つのＲ_３基がポリアルキレングリコール、好ましくはポリエチレングリコールである、請求項１～３のいずれか一項に記載の複合体。
ポリアルキレングリコールである少なくとも１つのＲ _３基は、Ｌ_４基の窒素原子に直接またはリンカー部分を介して結合している、請求項４に記載の複合体。
ポリアルキレングリコールである少なくとも１つのＲ _３基は、アルキレン、アルケニレンまたはヘテロアルキレン基であるリンカー部分を介して結合している窒素原子に結合している、請求項４または５に記載の複合体。
ポリアルキレングリコールである少なくとも１つのＲ _３基は、それが結合している窒素原子に直接結合している、請求項４または請求項５に記載の複合体。
前記オリゴペプチドまたは各オリゴペプチドが３～２０個のアミノ酸残基を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の複合体。
前記オリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の複合体。
前記オリゴペプチドまたは各オリゴペプチドが、リジン、アルギニンおよびヒスチジンからなる群から選択されるアミノ酸残基を含む、請求項９に記載の複合体。
前記オリゴペプチドまたは各オリゴペプチドが式ＶＩＩ：

式中、ｐは２～１９の整数であり、ＲａはＨ_２ＮＣ（＝ＮＨ）－ＮＨ（ＣＨ_２）_３－、Ｈ_２Ｎ（ＣＨ_２）_４－または（１Ｈ－イミダゾール－４－イル）－ＣＨ_２－からなる群から各出現毎に選択される；
で表される化合物である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の複合体。
Ｒ_１およびＲ_２が両方ともオリゴペプチドである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の複合体。
Ｒ_１およびＲ_２が異なるオリゴペプチドである、請求項１２に記載の複合体。
Ｒ_１およびＲ_２の一方がオリゴペプチドであり、Ｒ_１およびＲ_２の一方がＲ_ｙである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の複合体。
ｎが１０～７００、または２０～５００である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の複合体。
Ｒ_ｙが、水素、－（ＣＨ_２）_ｍＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_ｍＮＨＭｅ、－（ＣＨ_２）_ｍＯＨ、－（ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３、（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＮＨ_２、－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＯＨまたは－（ＣＨ_２）_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｍＣＨ_３（ｍは１～２０の整数））からなる群から選択される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の複合体。
各Ｌ_３は独立して－Ｃ_１－１０アルキレン－（Ｓ－Ｓ）_ｑＣ_１－１０アルキレン（ｑは０または１）からなる群から選択される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の複合体。
各Ｒ_３は、独立して、水素、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルケニル、Ｃ_１－６アルキニル、Ｃ_１－６ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、Ｃ_１－６アルコキシ、ハロゲン、アリール、複素環、ヘテロアリール、シアノ、－Ｏ_２Ｃ－Ｃ_１－６アルキル、カルバモイル、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯ_２－Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６アルキルチオエーテル、チオール、ウレイド、およびポリアルキレングリコール、ここで、前記ポリアルキレングリコールは、Ｒ_３が結合している窒素原子に直接結合するか、リンカー部分を介してＲ_３が結合している窒素原子に結合し、ここで、前記リンカー部分は、アルキレン、シクロアルキレン、アルケニレン、シクロアルケニレン、ヘテロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレンまたはヘテロアリーレン基である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の複合体。
Ｌ_４は、－Ｎ（Ｒ_３）－から選択されるか、および／またはＬ_３は、Ｃ_１－６アルキレン基から選択される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の複合体。
少なくとも１つのＲ_３基がポリエチレングリコールである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の複合体。
請求項１～２０のいずれか一項で定義される式Ｉのポリマーを含むかまたはそれからなるポリマー材料でコーティングされたウイルスベースの治療薬を含む組成物。
前記組成物が、請求項１～２０のいずれか一項で定義される式Ｉのポリマーを含むかまたはそれからなるポリマー材料でコーティングされたウイルスベースの治療薬を含有するナノ粒子を含む、請求項２１に記載の組成物。
前記ウイルスベースの治療薬と前記ポリマーが非共有的に結合している、請求項１～２０のいずれか一項に記載の複合体、または請求項２１または２２に記載の組成物。
前記ウイルスベースの治療薬の表面が、式Ｉのポリマーへの結合に適した結合部位を含み、前記オリゴペプチドまたは各オリゴペプチドがｐＨ７で正味の正電荷を持つ、請求項１～２０または２３のいずれか一項に記載の複合体、または請求項２１～２３のいずれか一項に記載の組成物。
ウイルスベースの治療薬が、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、レオウイルスベクター、またはセムリキ森林ウイルスベクターから選択される、請求項１～２０または２３～２４のいずれか一項に記載の複合体、または請求項２１～２４のいずれか一項に記載の組成物。
前記ウイルスベースの治療薬が、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターから選択され、好ましくは、前記ウイルスベースの治療薬がアデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項２５記載の複合体または組成物。
医薬品に使用するための、請求項１～２０または２３～２６のいずれか一項に記載の複合体、または請求項２１～２６のいずれか一項に記載の組成物。
全身性ウイルス遺伝子治療、特にがん、特に肝臓がんまたは膵臓がんの処置に使用するための、請求項１～２０または２３～２６のいずれか一項に記載の複合体、または請求項２１～２６のいずれか一項に記載の組成物。
ナノ粒子を形成するために、ウイルスベースの治療薬と請求項１～２０のいずれか一項に記載の式Ｉの１つ以上のポリマーとの複合体をカプセル化する方法であって、ウイルスベースの治療薬を提供すること、式（Ｉ）のポリマーを提供すること、およびナノ粒子を形成するのに適した条件下で前記ウイルスベースの治療薬と前記ポリマーとを接触させることを含む前記方法。