JP2016208976A - 腫瘍退縮性ラブドウイルス - Google Patents
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Abstract
【解決手段】特定のアミノ酸配列の少なくとも80%同一であり、更に242位がアルギニンを有するG蛋白質、特定のアミノ酸配列の少なくとも80%同一であり、更に、アミノ酸配列の242位がトリプトファンを有するM蛋白質又は前記両方の蛋白質を含む腫瘍退縮性ラブドウイルス。インビトロ及びインビボで腫瘍細胞殺傷特性を有する腫瘍退縮性ラブドウイルスを患者に投与するる抗癌療法。投与が腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、内皮、腫瘍内、皮下、又は鼻腔内投与である。さらに第二の抗癌療法を含み、第二の腫瘍退縮性ウイルスがワクシニア、ヘルペス、麻疹、ニューキャッスル病、アデノウイルス、アルファウイルス、パルボウイルス、又はラブドウイルスである方法。
【選択図】なし
Description
I.ラブドウイルス科(ラブドウイルス)
典型的には、ラブドウイルスゲノムはおよそ11〜15kbであり、(−)センスウイルスRNA(vRNA)のおよそ50ヌクレオチド3’リーダー及びおよそ60ヌクレオチド非翻訳5’領域を含む。典型的には、ラブドウイルスvRNAは5つのタンパク質をコードする5つの遺伝子を有する。ラブドウイルスは、各遺伝子の末端に保存されたポリアデニル化シグナルを、5つの遺伝子のそれぞれの間に短い遺伝子間領域を有する。すべてのラブドウイルスは、ヌクレオカプシドタンパク質(N)、リン酸化タンパク質(P、NSとも名付けられる)、マトリックスタンパク質(M)、糖タンパク質(G)及び大タンパク質(L)をコードする少なくとも5つの遺伝子を含有する。典型的には、これらの遺伝子はマイナス鎖vRNA上で以下の通りに順序付けられている:3’−N−P−M−G−(X)−L−5’(配列番号29)。遺伝子の順序は、合成されるタンパク質の割合を指示するので、重要である。ラブドウイルスゲノムのいかなる操作も、典型的には、高いレベルで感染し複製する能力を維持するために少なくとも5つの転写ドメインを含むことになる。ラブドウイルスは、プラスセンスメッセンジャーRNA(mRNA)の転写のための内在性RNAポリメラーゼを有する。X遺伝子はすべてのラブドウイルスに存在するわけではない。X遺伝子は魚感染性造血壊死ウイルス(ジェンバンク DQ164103/gi|76262981;DQ164102/gi|76262979;DQ164101/gi|76262977;DQ164100/gi|76262975;DQ164099/gi|76262973;AB250935/gi|112821165;AB250934/gi|112821163;AB250933/gi|112821161;AB250932/gi|112821159;AB250931/gi|112821157;AB250930/gi|112821155;AB250929/gi|112821153;AB250928/gi|112821151;AB250927/gi|112821149、Gタンパク質コードヌクレオチド配列を記載している)、ウシ流行熱ウイルスにおける非構造糖タンパク質及び狂犬病ウイルスにおける偽遺伝子において見出された非構造タンパク質をコードする。追加の(X)遺伝子はラブドウイルスゲノム上の異なる位置に見出されている。感染細胞におけるMタンパク質の合成は細胞にとっては細胞壊死性であり、最終的には細胞死をもたらすことになる。
ある種の実施形態では、マラバウイルス又はラブドウイルスは、N、P、M、G及び/又はLタンパク質のうちの1つ又は複数のバリアントを含むことになる。本発明のある種の態様では、これらのウイルスタンパク質バリアントは治療ウイルス又はタンパク質性組成物に含めることが可能であり、このタンパク質性組成物は下でさらに定義される。タンパク質性組成物には、ウイルス粒子及び1つ又は複数のウイルスタンパク質成分を有する他の組成物が含まれる。これらポリペプチドバリアント(複数可)は、宿主細胞範囲、宿主細胞特異性、非標的細胞又は器官に対する毒性、複製、標的細胞に対する細胞傷害性、癌細胞の殺傷、癌細胞の停滞、感染力、製造パラメータ、ウイルス粒子のサイズ、ウイルス粒子の安定性、インビボクリアランス、免疫反応性等などの1つ又は複数の生理学的又は生物学的特徴の改変のために操作される又は選択されることが可能である。これらポリペプチドバリアントは、様々な突然変異誘発法を含む当技術分野で公知の多種多様な方法論を使用することにより操作することが可能である。ある種の態様では、N、P、M、G及び/又はLタンパク質はウイルスに対して異種性であることが可能である(たとえば、VSVはイスファハンGタンパク質又はそのバリアントを含み得る)。
組換えラブドウイルスは、(1)完全にcDNA、又は(2)ヘルパー細胞にトランスフェクトされるcDNAの組合せ、又は(3)感染性若しくは非感染性組換えラブドウイルスのどちらかを産生するのに必要な残りの成分若しくは活性をトランスで提供するミニウイルスをさらに感染させる、細胞にトランスフェクトされたcDNAを使用して、産生することが可能である。これらの方法(たとえば、ミニウイルス、ヘルパー細胞株又はcDNAトランスフェクションのみ)のうちのいずれかを使用して、必要とされる最小限成分は、(1)ラブドウイルスNタンパク質によるゲノム(又はアンチゲノム)RNAのキャプシド形成、及び(2)ゲノム又はアンチゲノム(複製中間体)RNA等価物の複製のためのシス作用性シグナルを含有するRNA分子である。
トランスフェクトされた細胞は、通常、所望の温度で少なくとも24時間、通常約37℃でインキュベートされる。非感染性ウイルス粒子では、上清が収集され、ウイルス粒子が単離される。感染性ウイルス粒子では、ウイルスを含有する上清が収穫されて新鮮な細胞に移される。新鮮な細胞はおよそ48時間インキュベートされ、その上清が収集される。
用語「単離」又はラブドウイルスを「単離する」は、ウイルス粒子を培養し、ほとんど細胞残渣が残らないように精製するプロセスを意味する。一例は、ビリオン含有上清を採取し、それを0.1〜0.2ミクロンポアサイズフィルター(たとえば、Millex−GS、Millipore)を通過させて、ウイルス及び細胞残渣を取り除くことになる。代わりに、ビリオンは、ショ糖密度勾配などの勾配を使用して精製することが可能である。次に、組換えラブドウイルス粒子はペレット化され、望まれるどのような賦形剤又は担体にも再懸濁されることが可能である。力価は、特定のタンパク質に特異的な抗体を使用する間接免疫蛍光法により決定することが可能である。
「ミニウイルス」も「ヘルパー細胞」(「ヘルパー細胞株としても知られる」)も同じものを提供し、ラブドウイルスビリオン構築のためのラブドウイルスタンパク質の供給源を提供する。ラブドウイルスミニウイルスの一例は、Stillman et al.、(1995)により報告されているように、G及びMタンパク質のみを発現するVSVミニウイルスである。ヘルパーウイルス及びミニウイルスは、ラブドウイルスタンパク質の遺伝子をコードするトランスフェクトされたDNAからは産生されないラブドウイルスタンパク質を提供する方法として使用される。
本発明は、過剰増殖細胞又は新生細胞(たとえば、癌細胞)並びに患者における過剰増殖状態又は新生状態(たとえば、癌)の研究及び治療に有利であるラブドウイルスに関する。本発明は、神経毒性が減少しているラブドウイルス、たとえば、マラバウイルスなどのラブドウイルスに関する場合があるが、これに限定されない。ある種の態様では、ウイルスは癌細胞に対する使用のために望ましい特性を有し、同時に最初に単離されたウイルス又はVSVよりも非癌細胞に対して毒性が弱い又は非毒性であるように、1つ若しくは複数のタンパク質成分(N、P、M、G及び/若しくはLタンパク質)又はVSVのゲノムとは異なる(すなわち、アミノ酸若しくはヌクレオチドレベルで少なくとも若しくは最大で10、20、40、50、60、70、80%同一である)核酸ゲノムをコードする若しくは含有する、並びに/或いは野生型ウイルス又はウイルスタンパク質と比べた場合、1つ若しくは複数の変異又は変形で構築されているラブドウイルス。下に記載される教唆は、本発明の方法及び組成物を実行するためのプロトコールの様々な例を提供する。教唆は、バイオセレクション(bioselection)又は組換えDNA又は核酸技術を使用して変異ウイルス又はバリアントウイルスを作製するための背景を提供する。
本発明のタンパク質性組成物には、ウイルス粒子及びウイルス粒子を含む組成物の他にも単離されたポリペプチドが含まれる。ある種の実施形態では、本発明は、ラブドウイルス(たとえば、マラバウイルス)、偽型又は腫瘍退縮性ラブドウイルス(癌細胞を溶解する、殺傷する若しくは癌細胞の増殖を遅延させるラブドウイルス)を作製する又は単離することに関する。ある種の実施形態では、ラブドウイルスは、ラブドウイルスタンパク質(N、P、M、G及び/若しくはL)のポリペプチドバリアント及び/又は治療ポリペプチドをコードする治療核酸を含むように操作されることになる。本発明の他の態様は、1つ又は複数の機能的ポリペプチド又はタンパク質を欠くラブドウイルスの単離を含む。他の実施形態では、本発明は、薬剤的に許容可能な製剤の一部としてのタンパク質性組成物と組み合わせた又はタンパク質性組成物内に含まれるラブドウイルス及びその使用に関する。
本出願がウイルスタンパク質又はポリペプチドの機能又は活性に言及する場合、他の方法で明確に述べられていなければ、それは生理学的条件下でのウイルスタンパク質又はポリペプチドの活性又は機能に言及することを意味する。たとえば、Gタンパク質は、特定の細胞型の結合及び感染の特異性及び効率に関与している。どの分子がこの活性を有するのかの決定は、感染力アッセイ、タンパク質結合アッセイ、プラークアッセイ等などの当業者にはよく知られているアッセイを使用して達成し得る。
本発明のポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、置換、挿入又は欠失バリアントであり得る。ウイルスポリペプチドをコードする遺伝子の変異は、野生型若しくは非変更ポリペプチド又は他の基準ポリペプチドと比べた場合、ポリペプチドの1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500又はそれよりも多い非連続若しくは連続アミノ酸(すなわち、セグメント)に影響を与え得る。ラブドウイルスによりコードされる様々なポリペプチドは、本明細書に開示されているウイルスごとにジェンバンク受託番号及び関連する公開データベースエントリーを参照することにより確認することができ、ラブドウイルス科に関連するジェンバンクエントリーはすべて参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、ウイルスタンパク質又はポリペプチドのすべて又は一部を発現することができる細胞から単離可能なポリヌクレオチドを含む。本発明のいくつかの実施形態では、本発明は、ある種の特性及び/又は特徴を有するウイルス又はウイルスポリペプチド、たとえば、偽型ポリペプチド若しくはウイルス又はラブドウイルスポリペプチド若しくはウイルスを作製するために特異的に変異した又は変更されたウイルスゲノムのすべて又は一部に関する。ポリヌクレオチドは、ウイルスのアミノ酸配列若しくは異種アミノ酸配列のすべて若しくは一部を含有するペプチド若しくはポリペプチドをコードし得る、又は、そのようなウイルスポリペプチドをコードしていないし、少なくとも1つの機能若しくは活性が付加されている、増加されている、縮小されている、減少されている若しくは欠けているウイルスポリペプチドをコードしていないように操作され得る。組換えタンパク質は発現している細胞から精製されて活性なタンパク質を生じることが可能である。ラブドウイルスメンバーのゲノムは、NCBIデータベース中のジェンバンク受託番号に又は類似のデータベースに見出すことができ、ゲノムはそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用されるように、用語「RNA、DNA又は核酸セグメント」とは、単離されていて全ゲノムDNA又は他の汚染物質のないRNA、DNA又は核酸分子のことである。したがって、ポリペプチドをコードする核酸セグメントとは、野生型、多形性又は変異体ポリペプチドコード配列を含有するが、ゲノム核酸(複数可)から単離される、又は精製されてゲノム核酸(複数可)がない核酸セグメントのことである。用語「核酸セグメント」に含まれるのは、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドよりも小さい核酸セグメント及び、たとえば、プラスミド、コスミド、ファージ、ウイルス等を含む組換えベクターである。
様々な実施形態では、ラブドウイルスポリヌクレオチドは変更される又は変異誘発され得る。変更又は変異には、挿入、欠失、点変異、反転等が含まれ得、ある種のタンパク質若しくは分子機構の調節、活性化及び/又は不活化を生じる他にも遺伝子産物の機能、位置若しくは発現を変更する、特に遺伝子産物を非機能的にし得る。ラブドウイルスのすべて又は一部をコードするポリヌクレオチドの変異誘発は、用いられた場合には、種々の標準変異原性法により実現され得る(Sambrook et al.、2001)。変異は、それによって生物の量又は構造に変化が生じるプロセスである。変異は、単一遺伝子のヌクレオチド配列の改変、遺伝子又は全ゲノムのブロックを含むことが可能である。単一遺伝子の変化は、DNA配列内の単一ヌクレオチド塩基の除去、付加若しくは置換を伴う点変異の結果であり得、又は多数のヌクレオチドの挿入若しくは欠失を伴う変化の結果であり得る。
a.挿入変異誘発
挿入変異誘発は、公知の核酸断片の挿入による遺伝子の不活化に基づいている。挿入変異誘発はある種の核酸断片の挿入を伴うので、生み出される変異は一般に、機能獲得変異ではなく機能喪失変異である。しかし、機能獲得変異を生み出す挿入の例がいくつかある。挿入変異誘発は、標準分子生物学技法を使用して実現し得る。
化学的変異誘発は、様々な程度の表現型重症度を有する全種類の変異を見つける能力などのある種の利点を提供し、実施するのが容易で安価である。大多数の化学発癌剤がDNAに変異を生成する。ベンゾ[a]ピレン、N−アセトキシ−2−アセチルアミノフルオレン及びアフラトキシンB1は細菌及び哺乳動物細胞においてGCからTAへの塩基転換を引き起こす。ベンゾ[a]ピレンは、ATからTAへのなどの塩基置換も生じることが可能である。N−ニトロソ化合物は、GCからATへの塩基転換を生じる。n−ニトロソウレアへの曝露により誘導されるチミンのO4位のアルキル化により、TAからCGへの塩基転換を生じる。
生体分子は電離放射線により分解される。入射エネルギーの吸着によりイオン及びフリーラジカルが形成され一部の共有結合が切断される。放射線損傷に対する感受性は分子間で、同じ分子の異なった結晶形間できわめて変化しやすいように思われる。感受性は全蓄積線量に、及び線量率(フリーラジカルが存在すると、それが引き起こす分子損傷はフリーラジカルの自然な拡散速度に、したがって実時間に依拠するので)にも依拠する。損傷は試料をできる限り冷やすことにより減少され抑制される。電離放射線は、一般に線量率に比例してDNA損傷を引き起こす。
ランダム変異誘発はまたエラープローンPCRを使用して導入し得る。変異誘発の速度は、鋳型の希釈を用いた複数のチューブにおいてPCRを実施することにより増加し得る。1つの特に有用な変異誘発法は、側鎖相互作用の喪失の効果を決定することができ、同時にタンパク質高次構造における大規模な混乱の危険性を最小限に抑えるように、いくつかの残基をアミノ酸アラニンで個別に置き換えるアラニン走査変異誘発である(Cunningham et al.、1989)。
構造誘導部位特異的変異誘発は、タンパク質−リガンド相互作用の精査及び操作のための強力なツールを表す(Wells、1996;Braisted et al.、1996)。技法は、選択されたDNAに1つ又は複数のヌクレオチド配列変化を導入することによる配列バリアントの調製及び試験を提供する。
ラブドウイルスゲノムに変異を発生させるために、天然の及び改変されたポリペプチドはベクターに含まれる核酸分子によりコードされ得る。用語「ベクター」は、外来性核酸配列を複製することができる細胞に導入するために外来性核酸配列を挿入することが可能な担体核酸分子を指すのに使用される。核酸配列は「外来性」であることが可能であり、これは、核酸配列がベクターが導入されようとしている細胞にとって外来性であり、又は該配列が細胞内の配列に相同であるが、宿主細胞核酸内の配列が通常では存在しない位置にあることを意味する。ベクターには、プラスミド、コスミド、ウイルス(バクテリオファージ、動物ウイルス及び植物ウイルス)並びに人工染色体(たとえば、YAC)が含まれる。当業者であれば、標準組換え技法によりベクターを構築する知識を身に付けているであろう。それらの技法はSambrook et al.(2001)及びAusubel et al.(1994)に記載されており、両方の文献は参照により本明細書に組み込まれる。
「プロモーター」は、核酸配列のうち転写開始及び転写速度が制御される領域である制御配列である。プロモーターは、RNAポリメラーゼ及び他の転写因子などの調節タンパク質及び分子に結合する遺伝エレメントを含有し得る。語句「作動可能的に位置している」、「作動可能的に共役している」、「作動可能的に連結している」、「制御下の」及び「転写制御下の」は、プロモーターが、その配列の転写開始及び/又は発現を制御する核酸配列に関して正確な機能的位置及び/又は配向にあることを意味する。プロモーターは「エンハンサー」と合わせて使用されても使用されなくてもよく、この用語は核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列のことである。
ベクターはマルチクローニング部位(MCS)を含むことが可能であり、この部位はベクターを消化するために標準組換え技術と合わせてどれでも使用することができる複数の制限酵素部位を含有する核酸領域である(Carbonelli et al,、1999、Levenson et al.、1998及びCocea、1997参照、これら文献は参照により本明細書に組み込まれる)。「制限酵素消化」とは、核酸分子の特定の位置でのみ機能する酵素を用いた核酸分子の触媒的切断のことである。これらの制限酵素の多くが市販されている。そのような酵素の使用は当業者により広く理解されている。ベクターは、MCS内で切断する制限酵素を使用して直線化される又は断片化されて、外来性配列をベクターにライゲートさせることができるようになる場合が多い。「ライゲーション」とは、互いに連続していてもしていなくてもよい2つの核酸断片間にリン酸ジエステル結合を形成するプロセスのことである。制限酵素及びライゲーション反応を含む技法は、組換え技術分野の当業者には周知である。
本発明のベクター又は構築物は、一般に少なくとも1つの終結シグナルを含むことになる。「終結シグナル」又は「ターミネーター」は、RNAポリメラーゼによるRNA転写物の特定の終結に関与するRNA配列で構成されている。したがって、ある種の実施形態では、RNA転写物の産生を終わらせる終結シグナルが企図されている。ターミネーターは、所望のメッセージレベルを達成するのにインビボで必要になることがある。
発現、特に真核生物発現では、発現には典型的に、転写物の適切なポリアデニル化をもたらすポリアデニル化シグナルが含まれることになる。ポリアデニル化シグナルの性質は、本発明の実行に成功することにきわめて重要であるとは考えられていない、及び/又はそのような配列はいずれも用いられ得る。好ましい実施形態には、便利であり及び/又は様々な標的細胞においてよく機能することが知られているSV40ポリアデニル化シグナル及び/又はウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルが含まれる。ポリアデニル化は転写物の安定性を高め得る又は細胞質輸送を促進し得る。
宿主細胞においてベクターを増殖するために、ベクターは、複製が開始される特定の核酸配列である1つ又は複数の複製起点部位(「ori」と呼ばれることが多い)を含有し得る。代わりに、宿主細胞が酵母の場合には、自己複製配列(ARS)を用いることが可能である。
本発明のある種の実施形態では、本発明の核酸構築物を含有する細胞は、発現ベクターにマーカーを含むことによりインビトロ又はインビボで同定し得る。そのようなマーカーがあれば細胞に同定可能な変化を与え、発現ベクターを含有する細胞を容易に同定することができると考えられる。一般に、選択可能マーカーは、選択を可能にする特性を与えるマーカーである。正の選択可能マーカーは、マーカーの存在がその選択を可能にするマーカーであり、負の選択可能マーカーはその存在がその選択を妨げるマーカーである。正の選択可能マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。
本明細書で使用されるように、用語「細胞」、「細胞株」及び「細胞培養物」は互換的に使用し得る。これらの用語はすべて、ありとあらゆるその後の世代であるその子孫も含む。計画的な又は偶発性の変異のせいで、すべての子孫が同一というわけではないことは理解されている。異種核酸配列を発現させるという状況では、「宿主細胞」とは、原核細胞又は真核細胞のことであり、ベクターを複製する及び/又はベクターによってコードされた異種遺伝子を発現させることができるいかなる形質転換性生物も含まれる。宿主細胞は、(外来性ポリペプチドを発現しなければベクターとしての資格はない)ベクター又はウイルスのレシピエントとして使用することが可能であり、これまで使用されてきた。宿主細胞は「トランスフェクト」される又は「形質転換」され得、これら用語は、改変されたタンパク質コード配列などの外来性核酸が宿主細胞に移入される又は導入されるプロセスのことである。形質転換された細胞には、最初の対象細胞及びその子孫が含まれる。
上で考察された組成物の少なくともすべて又は一部を含む数多くの発現系が存在する。原核生物及び/又は真核生物ベースの系は、本発明と一緒に使用するために用いて、核酸配列又はその同族ポリペプチド、タンパク質及びペプチドを産生することが可能である。多くのそのような系は、市販されており広く入手可能である。
ポックスウイルスタンパク質、ポリペプチド及び/又はペプチドの発現を指示する際のその使用に加えて、本明細書に開示される核酸配列は他にも種々の使用法がある。たとえば、本明細書に開示される核酸配列には、核酸ハイブリダイゼーションを含む実施形態のためのプローブ又はプライマーとしての有用性がある。核酸配列は、本発明の診断法又はスクリーニング法において使用し得る。ラブドウイルス又はラブドウイルスポリペプチドモジュレーターをコードする核酸の検出は本発明に包含されている。
1.ハイブリダイゼーション
増幅のための鋳型として使用される核酸は、標準的方法論に従って細胞、組織又は他の試料から単離され得る(Sambrook et al.、2001)。ある種の実施形態では、鋳型核酸を実質的には精製せずに全細胞又は組織ホモジネート又は生物学的液体試料上で分析は実施される。核酸はゲノムDNA又は分画された若しくは全細胞RNAでもよい。RNAが使用される場合、先ずRNAを相補的DNAに変換するのが望ましいことがある。
任意の増幅に続いて、増幅産物を鋳型及び/又は過剰なプライマーから分離する及び/又は単離することが望ましいこともある。一実施形態では、増幅産物は、標準法を使用してアガロース、アガロースアクリルアミド又はポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離される(Sambrook et al.、2001)。
たとえば、ゲノム核酸、cDNA及び/又はRNA試料中の変異を検出する遺伝子スクリーニングのための他の方法は、本発明の範囲内で使用し得る。点変異を検出するのに使用される方法には、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法(「DGGE」)、制限断片長多型解析(「RFLP」)、化学的又は酵素的切断法、PCR(商標)により増幅された標的領域の直接塩基配列決定法(上記参照)、一本鎖高次構造多型解析(「SSCP」)及び当技術分野で周知の他の方法が含まれる。点変異を求めてスクリーニングする1つの方法は、RNA/DNA又はRNA/RNAヘテロ二重鎖における塩基対ミスマッチのRNアーゼ切断に基づいている。本明細書で使用されるように、用語「ミスマッチ」は、二本鎖RNA/RNA、RNA/DNA又はDNA/DNA分子における1つ又は複数の不対又はミスペアドヌクレオチドの領域として定義される。したがって、この定義には、挿入/欠失変異の他にも単一又は複数の塩基点変異によるミスマッチが含まれる(たとえば、米国特許第4,946,773号参照)。本発明の実行において使用し得る欠失、挿入又は置換変異の検出のための別の方法は、米国特許第5,849,483号、米国特許第5,851,770号、米国特許第5,866,337号、米国特許第5,925,525号及び米国特許第5,928,870号に開示されており、これら特許文献のそれぞれが参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。
本発明の組成物の発現を実施する核酸送達のための適切な方法は、本明細書に記載されるように又は当業者に知られていると考えられるように、核酸(たとえば、ウイルスベクター及び非ウイルスベクターを含むDNA若しくはRNA)をオルガネラ、細胞、組織又は生物中に導入することができる実質的にどんな方法でも含むと考えられている。そのような方法には、マイクロインジェクション(Harland及びWeintraub、1985;米国特許第5,789,215号、これら文献は参照により本明細書に組み込まれる)を含む注入(米国特許第5,994,624号、米国特許第5,981,274号、米国特許第5,945,100号、米国特許第5,780,448号、米国特許第5,736,524号、米国特許第5,702,932号、米国特許第5,656,610号、米国特許第5,589,466号及び米国特許第5,580,859号、それぞれの特許文献は参照により本明細書に組み込まれる)により、エレクトロポレーション(米国特許第5,384,253号、この特許文献は参照により本明細書に組み込まれる)により、リン酸カルシウム沈殿(Graham及びVan Der Eb、1973;Chen及びOkayama、1987;Rippe et al.、1990)により、DEAEデキストラン続いてポリエチレングリコールを使用する(Gopal、1985)ことにより、直接超音波負荷(Fechheimer et al.、1987)により、リポソーム媒介トランスフェクション(Nicolau及びSene、1982;Fraley et al.、1979;Nicolau et al.、1987;Wong et al.、1980;Kaneda et al.、1989;Kato et al.,1991)により、微粒子銃(国際公開第94/09699号パンフレット及び国際公開第95/06128号パンフレット;米国特許第5,610,042号、米国特許第5,322,783号、米国特許第5,563,055号、米国特許第5,550,318号、米国特許第5,538,877号及び米国特許第5,538,880号、各文献は参照により本明細書に組み込まれる)により、炭化ケイ素繊維を用いた攪拌により(Kaeppler et al.、1990;米国特許第5,302,523号及び米国特許第5,464,765号、各文献は参照により本明細書に組み込まれる)、アグロバクテリウム媒介形質転換(米国特許第5,591,616号及び米国特許第5,563,055号、それぞれの特許文献は参照により本明細書に組み込まれる)により、又はプロトプラストのPEG媒介形質転換(Omirulleh et al.、1993;米国特許第4,684,611号及び米国特許第4,952,500号、それぞれの文献は参照により本明細書に組み込まれる)により、乾燥/抑制媒介DNA取込み(Potrykus et al.、1985)によりなどの核酸の直接送達が含まれるが、これらに限定されない。これらの技法などの技法の適用を通じて、オルガネラ(複数可)、細胞(複数可)、組織(複数可)又は生物(複数可)は、安定的に又は一過性に形質転換され得る。
ある種の実施形態では、本発明は、核酸、ペプチドなどのアミノ酸分子又は別の小分子化合物と会合している1つ又は複数の脂質を含む組成物に関する。本明細書で考察される実施形態のいずれにおいても、分子は、ラブドウイルスポリペプチド又はラブドウイルスポリペプチドモジュレーターのどちらでもよく、たとえば、ラブドウイルスポリペプチドのすべて若しくは一部をコードする核酸、又は代わりにラブドウイルスポリペプチドモジュレーターのすべて若しくは一部をコードするアミノ酸分子でもよい。脂質は、特徴的に水に不溶性であり有機溶媒を用いて抽出可能である物質である。特に本明細書に記載されている化合物以外の化合物は、脂質として当業者には理解されており、本発明の組成物及び方法に包含されている。脂質成分及び非脂質は、共有結合的にも非共有結合的にも互いに付着し得る。
本発明の実施形態では、マラバウイルス、カラジャスウイルス、ミュアスプリングウイルス及び/又はバイアグランデウイルスなどのラブドウイルスの送達による、癌などの過剰増殖性又は新生物疾患の治療法が企図されている。治療を企図されている癌の例には、肺癌、頭頚部癌、乳癌、膵癌、前立腺癌、腎癌、骨癌、精巣癌、子宮頚癌、胃腸癌、リンパ腫、新生物発生前病変、肺における新生物発生前病変、結腸癌、メラノーマ、膀胱癌及び、転移性又は全身的に分散した癌を含む、治療し得る他の任意の癌又は腫瘍が含まれる。
本発明の方法及び組成物を使用して、細胞を殺傷する、細胞増殖を抑制する、転移を抑制する、腫瘍若しくは組織サイズを減少させる及びその他の点では腫瘍細胞の悪性表現型を逆行させる、停止させる若しくは減少させるためには、一般には、過剰増殖又は新生細胞をポリペプチドをコードするウイルス又は発現構築物などの治療組成物に接触させることになる。投与経路は、当然のことながら、病変の位置及び性質とともに変化し、たとえば、内皮、経皮(transdermal)、非経口、脈管内、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、局部(regional)、経皮(percutaneous)、気管内、腹腔内、動脈内、膀胱内、腫瘍内、吸入、灌流、洗浄、直接注入、食餌性並びに経口投与及び製剤が含まれる。
本発明において癌又は腫瘍細胞へのラブドウイルスゲノムのすべて又は一部をコードする発現構築物又はウイルスの送達のための好ましい方法は、血管内注射による。しかし、本明細書に開示される医薬組成物は、代わりに、米国特許第5,543,158号、米国特許第5,641,515号及び米国特許第5,399,363号(それぞれの特許文献は特に参照によりその全体を本明細書に組み込まれる)に記載される通りに、腫瘍内に、非経口的に、静脈内に、動脈内に、皮内に、筋肉内に、経皮的に又は腹腔内にでも投与し得る。
本発明の化合物及び方法は、癌及びアテローム動脈硬化症を含む過剰増殖又は新生物疾患/状態という状況で使用してもよい。ラブドウイルスなどの本発明の組成物を用いる治療の有効性を増加するために、これらの組成物をそうした疾患及び状態の治療において効果的な他の作用薬と組み合わせることが望ましいことがある。たとえば、癌の治療は、本発明の治療化合物と抗癌剤又は手術などの他の抗癌治療を用いて実行され得る。
A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A
「抗癌」剤は、たとえば、癌細胞を殺傷する、癌細胞においてアポトーシスを誘導する、癌細胞の増殖速度を減少させる、転移の発生頻度若しくは数を減少させる、腫瘍サイズを減少させる、腫瘍増殖を抑制する、腫瘍若しくは癌細胞への血液供給を減少させる、癌細胞若しくは腫瘍に対する免疫応答を促進する、癌の進行を妨げる若しくは抑制する又は癌に罹った対象の寿命を増加することにより、対象の癌に否定的影響を与えることができる。抗癌剤には、生物剤(生物療法)、化学療法剤及び放射線療法剤が含まれる。さらに一般的には、これらの他の組成物は、細胞を殺傷する又は細胞の増殖を抑制するのに効果的な総量で提供されるであろう。このプロセスは、細胞をウイルス又はウイルス構築物及び作用薬(複数可)又は複数の因子(複数可)に同時に接触させることを含んでいてもよい。これは、細胞を両作用薬を含む単一組成物若しくは薬理学的製剤に接触させることにより、又は細胞を、1つの組成物がウイルスを含みもう一方が第二の作用薬(複数可)を含む、2つの異なる組成物若しくは製剤に同時に接触させることにより達成され得る。
癌療法には、化学的と放射線をベースとする治療の療法との種々の組合せ療法も含まれる。組合せ化学療法には、たとえば、シスプラチン(CDDP)、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、エトポシド(VP16)、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナ、5−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン及びメトトレキサート、テモゾロミド(DTICの水性形)、又は前述したものの任意の類似体若しくは誘導バリアントが含まれる。化学療法と生物学的療法の組合せは生化学療法として知られる。
DNA損傷を引き起こし広範に使用されてきた他の因子には、γ線、X線、プロトンビームとして一般に知られているもの及び/又は腫瘍細胞への放射性同位元素の直接送達が含まれる。マイクロ波及び紫外線照射などの他の種類のDNA損傷因子も企図されている。これらの因子はすべて、DNAに、DNAの前駆体に、DNAの複製及び修復に、並びに染色体の構築及び維持に広範な損傷をもたらす可能性が非常に高い。X線の放射線量範囲は、長期間(3〜4週)の1日量50〜200レントゲンから単回量の2000〜6000レントゲンまでに及ぶ。放射性同位元素の放射線量範囲は広く変動し、同位体の半減期、放射される放射線の強度と種類、及び新生細胞による取込みに依拠する。
免疫療法は、一般に、癌細胞を標的にし破壊することを免疫エフェクター細胞及び分子の使用に頼っている。免疫エフェクターは、たとえば、腫瘍細胞の表面上のあるマーカーに対して特異的な抗体であってもよい。抗体単独で療法のエフェクターとしての働きをすることがある又は抗体は他の細胞を動員して実際に細胞殺傷をもたらすことがある。抗体は、薬物又は毒素(化学療法、放射性核種、リシンA鎖、コレラ毒素、百日咳毒素等)にコンジュゲートされて、単にターゲティング剤として働いてもよい。代わりに、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的に又は間接的に相互作用する表面分子を担っているリンパ球でもよい。様々なエフェクター細胞には、細胞傷害性T細胞及びNK細胞が含まれる。治療モダリティ、すなわち、ある種のラブドウイルス又はラブドウイルスポリペプチドの直接細胞傷害活性及び抑制又は減少を組み合わせれば、癌の治療において治療効果を与えると考えられる。
癌の受動免疫療法のためのいくつかの異なるアプローチが存在する。アプローチは、以下の、抗体単独の注入、毒素又は化学療法剤と結合させた抗体の注入、放射性同位元素と結合させた抗体の注入、抗イディオタイプ抗体の注入及び最後に骨髄における腫瘍細胞の浄化に広く分類され得る。
能動免疫療法では、抗原ペプチド、ポリペプチド若しくはタンパク質又は自己若しくは同種異系腫瘍細胞組成物若しくは「ワクチン」は、一般に異なる細菌アジュバンドと一緒に投与される(Ravindranath及びMorton、1991;Morton et al.、1992;Mitchell et al.、1990;Mitchell et al.、1993)。メラノーマ免疫療法では、高いIgM応答を示す患者はIgM抗体をまったく示さない又は低いIgM抗体を示す患者よりも生存がよいことが多い(Morton et al.、1992)。IgM抗体は一過性の抗体であることが多く、法則に対する例外はガングリオシド又は抗炭化水素抗体であるように思われる。
養子免疫療法では、患者の循環するリンパ球又は腫瘍浸潤リンパ球は、インビトロで単離され、IL−2などのリンホカインにより活性化され又は腫瘍壊死の遺伝子を形質導入され、再投与される(Rosenberg et al.、1988;1989)。これを達成するために、動物又はヒト患者に、免疫学的に有効量の活性化されたリンパ球を本明細書に記載されるアジュバンド組込み抗原ペプチド組成物と組み合わせて投与することになる。活性化されたリンパ球は、以前に血液又は腫瘍試料から単離され、インビトロで活性化された(若しくは「拡張された」)患者自身の細胞であることがもっとも好ましい。この種の免疫療法は、メラノーマ及び腎癌の退縮のいくつかの症例を生み出しているが、応答者の百分率は応答しなかったものと比べるとわずかであった。
さらに別の実施形態では、第二の治療は、治療ポリヌクレオチドがラブドウイルスが投与されるよりも前に、後に又はラブドウイルスが投与されるのと同時に投与される遺伝子療法である。以下の遺伝子産物のうちの1つをコードするベクターと合わせたラブドウイルスの送達は、標的組織に対して併用制癌効果を及ぼすことになる。代わりに、ラブドウイルスは、治療ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターとして操作され得る。種々のタンパク質が本発明内に包含されており、その一部は下に記載されている。表4には、本発明と組み合わせたある種の遺伝子療法のために標的にし得る様々な遺伝子が収載されている。
細胞増殖を誘導するタンパク質は機能に応じて様々な範疇にさらに分類される。これらのタンパク質のすべての共通性は、細胞増殖を調節するその能力である。たとえば、PDGFの一種であるシス癌遺伝子は、分泌された増殖因子である。癌遺伝子は増殖因子をコードする遺伝子から生じることはめったになく、現時点では、シスが唯一知られている天然に存在する癌遺伝子増殖因子である。本発明の一実施形態では、細胞増殖の特定の誘導因子に向けられるアンチセンスmRNAを使用して、細胞増殖の誘導因子の発現を妨げることが企図されている。
腫瘍抑制癌遺伝子は、過剰な細胞増殖を抑制するように機能する。これらの遺伝子が不活化されると、その抑制活性が破壊されて、非調節増殖をもたらす。腫瘍抑制因子には、p53、p16及びC−CAMが含まれる。本発明に従って用いてもよい他の遺伝子には、Rb、APC、DCC、NF−1、NF−2、WT−1、MEN−I、MEN−II、zac1、p73、VHL、MMAC1/PTEN、DBCCR−1、FCC、rsk−3、p27、p27/p16融合物、p21/p27融合物、抗血栓性遺伝子(たとえば、COX−1、TFPI)、PGS、Dp、E2F、ras、myc、neu、raf、erb、fms、trk、ret、gsp、hst、abl、E1A、p300、血管新生に関与する遺伝子(たとえば、VEGF、FGF、トロンボスポンジン、BAI−1、GDAIF又はその受容体)及びMCCが含まれる。
アポトーシス又はプログラムされた細胞死は、正常な胚発生に不可欠なプロセスであり、成人組織において恒常性を維持し発癌を抑制する(Kerr et al.、1972)。タンパク質のBcl−2ファミリー及びICE様プロテアーゼは、他のシステムにおけるアポトーシスの重要な調節因子及びエフェクターであることが実証されている。Bcl−2タンパク質は、濾胞性リンパ腫と会合しているのが発見されたが、種々のアポトーシス刺激に応答してアポトーシスを制御し細胞生存を増強するのに顕著な役割を果たしている(Bakhshi et al.、1985;Cleary及びSklar、1985;Cleary et al.、1986;Tsujimoto et al.、1985;Tsujimoto及びCroce、1986)。進化論的に保存されたBcl−2タンパク質は、現在では、死アゴニスト又は死アンタゴニストとして分類することが可能な関連するタンパク質のファミリーのメンバーであることが認められている。
癌に罹ったヒトのおよそ60%がある種の手術を受け、この手術には、予防的、診断的又はステージ分類、治癒的並びに緩和的手術が含まれる。治癒的手術は、本発明の治療、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法及び/又は別の療法などの他の療法と合わせて使用し得る癌治療である。
他の作用薬を、治療の治療効果を改善するために本発明と組み合わせて使用し得ることが企図されている。これらの追加の作用薬には、免疫調節剤、細胞表面受容体及びGAP結合の上方調節に影響する作用薬、細胞分裂阻害剤及び分化剤、細胞接着の抑制剤、アポトーシス誘導因子に対する過剰増殖細胞の感受性を増加させる作用薬又は他の生物学的作用薬が含まれる。免疫調節剤には、腫瘍壊死因子、インターフェロンα、β及びγ、IL−2及び他のサイトカイン、F42K及び他のサイトカイン類似物、又はMIP−1、MIP−1β、MCP−1、RANTES及び他のケモカインが含まれる。細胞表面受容体又はFas/Fasリガンド、DR4若しくはDR5/TRAIL(Apo−2リガンド)などのそのリガンドを上方調節すれば、過剰増殖細胞に対する自己分泌又はパラ分泌効果を確立することにより本発明のアポトーシス誘導能力を増強すると考えられることがさらに企図されている。GAP結合の数を上昇させることにより細胞間シグナル伝達が増加すれば、隣接する過剰増殖細胞集団に対する抗過剰増殖効果を増加させると考えられる。他の実施形態では、細胞分裂阻害剤又は分化剤を、治療の抗過剰増殖効果を改善するために本発明と組み合わせて使用することが可能である。細胞接着の抑制剤は本発明の有効性を改善すると企図されている。細胞接着抑制剤の例は、接着斑キナーゼ(FAK)抑制剤及びロバスタチンである。アポトーシスに対する過剰増殖細胞の感受性を増加させる、抗体c225などの他の作用薬は治療効果を改善するために本発明と組み合わせて使用することができることもさらに企図されている。
以下の実施例は、本発明の様々な実施形態を例示する目的で与えられるものであり、いかなる形でも本発明を限定することを意図していない。当業者であれば、本発明が、目的を成し遂げ言及されている目標及び利点の他にも本明細書に固有の目的、目標及び利点を成し遂げ、得るのに十分に構成されていることを容易に認識することになる。本実施例は、本明細書に記載される方法と共に、好ましい実施形態を目下代表しており、模範であり、本発明の範囲を限定するものとして意図されてはいない。特許請求の範囲により定義される本発明の精神の範囲内に包含されるその変化及び他の使用は、当業者であれば思い付くであろう。
マラバウイルスは強力な腫瘍退縮性特性をインビトロで示す。ラブドウイルス科は広大であり、遺伝的に及び地理的に多様である。本発明者らは、出発点として哺乳動物細胞内で複製するすでに証明されている能力を有するラブドウイルスのパネルを選択した。強力な腫瘍細胞細胞溶解能力を有するウイルスを同定するインビトロスクリーニングのために7つのウイルスが選択された(表4)。細胞殺傷アッセイは、NCI60腫瘍細胞パネル及びマウス腫瘍株の分類由来の細胞株に対して、96ウェルフォーマットで実施された(図5)。いくつかの種は、ヒト腫瘍株に対して高度に溶解性であることが示され、試験された大多数の細胞株に対して、EC50スコアーはプラーク形成単位(pfu)により0.1 MOI未満であった。特に、マラバ(Travassos da Rosa et al.、1984)、カラジャス(CRJ)(Travassos da Rosa et al.、1984)及びファーミントンウイルス(FMT)(Travassos da Rosa et al.、2002)は、細胞パネルに表されるすべての癌指標由来のヒト腫瘍株を殺傷するのに非常に効果的であるように思われた。注目に値する例外は、結腸腫瘍由来の細胞株を殺傷するのが困難であるFMTウイルスについて観察された。興味深いことに、すべてのラブドウイルスが癌細胞を効率的に殺傷する能力を有するわけではない。ミュアスプリング(MS)(Kerschner et al.、1986)、バイアグランデ(BG)(Kerschner et al.、1986)、ガインガン(NGG)(Doherty et al.、1973)及びチブロガルガン(TIB)(Cybinski et al.、1980)などのウイルスが活性を示したのは腫瘍細胞のうちのごくわずかな割合であった。現在、これらのウイルスの制約を支配する機構は依然未知のままである。
細胞株。ヒトA549肺癌、ヒトHelacerevical癌、マウスCT26結腸癌(アメリカ培養細胞株保存機関)、ヒトGM38原発性線維芽細胞(National Institute of General Medical Sciences Mutant Cell Repository、Camden、NJ)及びthe Developmental Therapeutics Program、米国国立癌研究所(Bethesda、MD)から入手したNCI60細胞パネル由来の細胞株は、10%胎仔ウシ血清(Cansera、Etobicoke、Ontario、Canada)を補充されたダルベッコ改変イーグル培地(Hyclone、Logan、UT)において増殖された。
インビトロ細胞傷害性スクリーン。NCI60細胞パネル由来の細胞は96ウェルプレートに90%の集密度まで蒔かれた。これらの細胞に、指示通りに、様々なラブドウイルスを対数希釈で感染させた。感染の96時間後、単層は洗浄され、固定され、1%クリスタルバイオレット溶液で染色された。染色された単層は続いて1%SDS水溶液に溶解され均質なライセートを作製した。吸光度は595nmで読み取られ、生存細胞についてスコアー化した。
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Claims (30)
- 配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、又は
配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質、又は
配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、並びに、配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質
を含む弱毒化されたラブドウイルス。 - 遺伝子変異が、配列番号5の242におけるグルタミンに代わるアルギニン置換、又は配列番号4の123におけるロイシンに代わるトリプトファン置換である、請求項1に記載のラブドウイルス。
- 配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、又は
配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質、又は
配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、並びに、配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質
をコードする単離された腫瘍退縮性ラブドウイルスに細胞を接触させるステップを含む、過剰増殖細胞を殺傷する方法。 - 細胞が患者に含まれている、請求項3に記載の方法。
- 細胞が癌細胞である、請求項4に記載の方法。
- 癌細胞が転移性癌細胞である、請求項5に記載の方法。
- 腫瘍退縮性ラブドウイルスが患者に投与される、請求項4に記載の方法。
- 腫瘍退縮性ラブドウイルスが腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、内皮、腫瘍内、皮下、又は鼻腔内投与により投与される、請求項7に記載の方法。
- 第二の抗癌療法を施すステップをさらに含む、請求項3に記載の方法。
- 第二の抗癌療法が第二の腫瘍退縮性ウイルスである、請求項9に記載の方法。
- 第二の腫瘍退縮性ウイルスがワクシニア、ヘルペス、麻疹、ニューキャッスル病、アデノウイルス、アルファウイルス、パルボウイルス、又はラブドウイルスである、請求項10に記載の方法。
- 第二の抗癌剤が第二の腫瘍退縮性ラブドウイルスである、請求項11に記載の方法。
- 第二の腫瘍退縮性ラブドウイルスが水疱性口内炎ウイルス(VSV)、カラジャスウイルス、チャンディプラウイルス、コカールウイルス、イスファハンウイルス、ピリウイルス、水疱性口内炎アラゴウイルス、BeAn 157575ウイルス、ボテケウイルス、カルチャキウイルス、エルウイルスアメリカン、グレーロッジウイルス、ユロナウイルス、クラマスウイルス、クワッタウイルス、ラホヤウイルス、マルペススプリングウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、ペリネウイルス、ツパイウイルス、ファーミントン、バイアグランデウイルス、ミュアスプリングウイルス、リードランチウイルス、ハートパークウイルス、フランダースウイルス、カメセウイルス、モスケイロウイルス、モスリルウイルス、バルーウイルス、フクオカウイルス、カーンキャニオンウイルス、コルビッソンウイルス、ルダンテックウイルス、キューラリバウイルス、コネチカットウイルス、ニューミントウイルス、ソーグラスウイルス、チャコウイルス、セナマドレイラウイルス、ティンボウイルス、アルムピウォーウイルス、アルアクウイルス、バンゴランウイルス、ビンボウイルス、ビベンスアームウイルス、ブルークラブウイルス、チャールビルウイルス、コースタルプレインズウイルス、DakArK 7292ウイルス、エントアメーバウイルス、ガルバウイルス、ゴサスウイルス、ハンプティドゥーウイルス、ジョインジャカカウイルス、カンナマンガラムウイルス、コロンゴウイルス、コールピンヤウイルス、コトンコンウイルス、ランジャウイルス、マニトバウイルス、マルコウイルス、ナソウルウイルス、ナバロウイルス、ガインガンウイルス、オークベールウイルス、オボジャングウイルス、オイタウイルス、オウァンゴウイルス、パリークリークウイルス、リオグランデシクリッドウイルス、サンジンバウイルス、シグマウイルス、スリプルウイルス、スイートウォーターブランチウイルス、チブロガルガンウイルス、キシブレマウイルス、ヤタウイルス、ロードアイランド、アデレードリバーウイルス、ベリマーウイルス、キンバレーウイルス又はウシ流行熱ウイルスである、請求項12に記載の方法。
- 第二の癌療法が化学療法、放射線療法、又は免疫療法である、請求項9に記載の方法。
- 配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、又は配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質、又は配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質並びに配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質をコードする単離された腫瘍退縮性ラブドウイルスの有効量を投与するステップを含む、癌患者を治療するための方法。
- 腫瘍退縮性ラブドウイルスが、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、内皮、腫瘍内、皮下、又は鼻腔内投与で施される、請求項15に記載の方法。
- 第二の癌療法を施すステップをさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 第二の抗癌療法が第二の腫瘍退縮性ウイルスである、請求項17に記載の方法。
- 第二の腫瘍退縮性ウイルスが、ワクシニア、ヘルペス、麻疹、ニューキャッスル病、アデノウイルス、又はラブドウイルスである、請求項18に記載の方法。
- 第二の抗癌療法が第二の腫瘍退縮性ラブドウイルスを含む、請求項19に記載の方法。
- 第二のラブドウイルスが、水疱性口内炎ウイルス(VSV)、カラジャスウイルス、チャンディプラウイルス、コカールウイルス、イスファハンウイルス、マラバウイルス、ピリウイルス、水疱性口内炎アラゴウイルス、BeAn 157575ウイルス、ボテケウイルス、カルチャキウイルス、エルウイルスアメリカン、グレーロッジウイルス、ユロナウイルス、クラマスウイルス、クワッタウイルス、ラホヤウイルス、マルペススプリングウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、ペリネウイルス、ツパイウイルス、ファーミントン、バイアグランデウイルス、ミュアスプリングウイルス、リードランチウイルス、ハートパークウイルス、フランダースウイルス、カメセウイルス、モスケイロウイルス、モスリルウイルス、バルーウイルス、フクオカウイルス、カーンキャニオンウイルス、コルビッソンウイルス、ルダンテックウイルス、キューラリバウイルス、コネチカットウイルス、ニューミントウイルス、ソーグラスウイルス、チャコウイルス、セナマドレイラウイルス、ティンボウイルス、アルムピウォーウイルス、アルアクウイルス、バンゴランウイルス、ビンボウイルス、ビベンスアームウイルス、ブルークラブウイルス、チャールビルウイルス、コースタルプレインズウイルス、DakArK 7292ウイルス、エントアメーバウイルス、ガルバウイルス、ゴサスウイルス、ハンプティドゥーウイルス、ジョインジャカカウイルス、カンナマンガラムウイルス、コロンゴウイルス、コールピンヤウイルス、コトンコンウイルス、ランジャウイルス、マニトバウイルス、マルコウイルス、ナソウルウイルス、ナバロウイルス、ガインガンウイルス、オークベールウイルス、オボジャングウイルス、オイタウイルス、オウァンゴウイルス、パリークリークウイルス、リオグランデシクリッドウイルス、サンジンバウイルス、シグマウイルス、スリプルウイルス、スイートウォーターブランチウイルス、チブロガルガンウイルス、キシブレマウイルス、ヤタウイルス、ロードアイランド、アデレードリバーウイルス、ベリマーウイルス、キンバレーウイルス又はウシ流行熱ウイルスである、請求項20に記載の方法。
- 第二の癌療法が化学療法、放射線療法、免疫療法、又は手術である、請求項17に記載の方法。
- 配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、又は
配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質、又は
配列番号5のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号5の242位にアミノ酸置換を有するGタンパク質、並びに、配列番号4のアミノ酸配列に少なくとも80%同一であるアミノ酸配列及び配列番号4の123位にアミノ酸置換を有するMタンパク質
をコードする核酸セグメントを有する単離された腫瘍退縮性ラブドウイルスを含む組成物。 - 第二の腫瘍退縮性ウイルスをさらに含む、請求項23に記載の組成物。
- 第二の腫瘍退縮性ウイルスが、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、ニューキャッスル病ウイルス、アデノウイルス、又はラブドウイルスである、請求項24に記載の組成物。
- 第二の腫瘍退縮性ウイルスがラブドウイルスである、請求項25に記載の組成物。
- 第二のラブドウイルスが、カラジャスウイルス、チャンディプラウイルス、コカールウイルス、イスファハンウイルス、マラバウイルス、ピリウイルス、水疱性口内炎アラゴウイルス、BeAn 157575ウイルス、ボテケウイルス、カルチャキウイルス、エルウイルスアメリカン、グレーロッジウイルス、ユロナウイルス、クラマスウイルス、クワッタウイルス、ラホヤウイルス、マルペススプリングウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、ペリネウイルス、ツパイウイルス、ファーミントン、バイアグランデウイルス、ミュアスプリングウイルス、リードランチウイルス、ハートパークウイルス、フランダースウイルス、カメセウイルス、モスケイロウイルス、モスリルウイルス、バルーウイルス、フクオカウイルス、カーンキャニオンウイルス、コルビッソンウイルス、ルダンテックウイルス、キューラリバウイルス、コネチカットウイルス、ニューミントウイルス、ソーグラスウイルス、チャコウイルス、セナマドレイラウイルス、ティンボウイルス、アルムピウォーウイルス、アルアクウイルス、バンゴランウイルス、ビンボウイルス、ビベンスアームウイルス、ブルークラブウイルス、チャールビルウイルス、コースタルプレインズウイルス、DakArK 7292ウイルス、エントアメーバウイルス、ガルバウイルス、ゴサスウイルス、ハンプティドゥーウイルス、ジョインジャカカウイルス、カンナマンガラムウイルス、コロンゴウイルス、コールピンヤウイルス、コトンコンウイルス、ランジャウイルス、マニトバウイルス、マルコウイルス、ナソウルウイルス、ナバロウイルス、ガインガンウイルス、オークベールウイルス、オボジャングウイルス、オイタウイルス、オウァンゴウイルス、パリークリークウイルス、リオグランデシクリッドウイルス、サンジンバウイルス、シグマウイルス、スリプルウイルス、スイートウォーターブランチウイルス、チブロガルガンウイルス、キシブレマウイルス、ヤタウイルス、ロードアイランド、アデレードリバーウイルス、ベリマーウイルス、キンバレーウイルス又はウシ流行熱ウイルスである、請求項26に記載の組成物。
- 組成物が医薬的に許容可能な組成物である、請求項23に記載の組成物。
- 第二の抗癌剤をさらに含む、請求項28に記載の組成物。
- 第二の抗癌剤が化学療法的、放射線療法的、又は免疫療法的である、請求項29に記載の組成物。
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BELL et al. | Patent 2836117 Summary |
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