JP2015508087A

JP2015508087A - 置換ベンゾチエニル−ピロロトリアジンおよびその使用

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Publication number: JP2015508087A
Application number: JP2014558087A
Authority: JP
Inventors: マリオ・ロベル; ヴァルター・ヒュップシュ; ハルトムート・シロク; メラニー・エルー; ディルク・ブローム; マリー−ピエール・コラン; ジルヴィア・グリューネヴァルト; クレメンス・ルスティッヒ; ウルフ・ベーマー; フェレーナ・フェーリンガー; ニールス・リントナー
Original assignee: Bayer Intellectual Property GmbH
Current assignee: Bayer Intellectual Property GmbH
Priority date: 2012-02-23
Filing date: 2013-02-20
Publication date: 2015-03-16
Anticipated expiration: 2033-02-20
Also published as: ES2581065T3; US9475815B2; CN104136439B; EP2817311A1; EP2817311B1; WO2013124316A1; HK1199023A1; US20150031676A1; CA2865021C; JP6082033B2; CA2865021A1; CN104136439A

Abstract

本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規置換５−(１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン誘導体、当該化合物の製造方法、当該化合物を含む医薬組成物、および、増殖性障害、特に癌および腫瘍疾患を処置するための当該化合物または組成物の使用に関する。

Description

本発明は、タンパク質チロシンキナーゼ阻害活性を有する新規置換５−(１−ベンゾチオフェン−２−イル)ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン誘導体、当該化合物の製造方法、当該化合物を含む医薬組成物、ならびに増殖性障害、特に癌および腫瘍疾患を処置するための当該化合物または組成物の使用に関する。

癌は、世界的に主要な死亡原因であって、２００８年では７６００万人もの死者(全死者数の約１３％)にのぼる。癌による死者は世界中で増え続け、２０３０年には１１００万人を超えると予想されている(WHO source, Fact Sheet No. 297, February 2011)。

癌が生じ得る多くの経路があり、これが癌治療を困難にしている理由の１つである。細胞の形質転換が起こり得る一つの経路は、遺伝子変化後である。ヒトゲノムプロジェクトの完成は、ヒトの癌遺伝子のゲノム不安定性および不均一性を示した。これらの遺伝子変化を同定する近年のストラテジーは、癌遺伝子の発見のプロセスを加速させた。遺伝子異常は、例えば、タンパク質の過剰発現をもたらし、それ故に、これらのタンパク質の非生理学的活性化をもたらす。幾つかの腫瘍タンパク質が生じるタンパク質のファミリーは、チロシンキナーゼ、特に受容体チロシンキナーゼ(ＲＴＫ)である。過去２０年で、多数の研究手段により、癌を引き起こす有害な細胞増殖においてＲＴＫ介在シグナル伝達の重要性が証明された。近年には、新しいクラスの抗腫瘍化剤として、チロシンキナーゼの選択的低分子阻害剤を用いて、臨床で有望な結果が達成された[Swinney and Anthony, Nature Rev. Drug Disc. 10 (7), 507-519 (2011)]。

線維芽細胞増殖因子(ＦＧＦ)およびその受容体(ＦＧＦＲ)は、胚発生および成体病態生理学の様々な面を包含する多様な生物学的プロセスに重要な役割を果たす、独自の異なるシグナル伝達系の一部を形成する[Itoh and Ornitz, J. Biochem. 149 (2), 121-130 (2011)]。時空間的方法において、ＦＧＦは、ＦＧＦＲ結合を介して、細胞の遊走、増殖、分化および生存を含む広範囲の細胞の機能を刺激する。

ＦＧＦファミリーは、細胞表面に発現する４つの高度に保存された受容体チロシンキナーゼ(ＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４)に結合する１８種の分泌型ポリペプチド増殖因子を含む。さらに、ＦＧＦＲ−５は、ＦＧＦに結合できるが、キナーゼドメインを有さず、従って、細胞内シグナル伝達を欠いている。リガンド／受容体相互作用の特異性は、選択的転写開始、選択的スプライシングおよびＣ末端切断によって多くのアイソフォームを生じる幾つかの転写および翻訳プロセスによって増強される。様々なヘパラン硫酸プロテオグリカン(例えばシンデカン)は、ＦＧＦ／ＦＧＦＲ複合体の一部であり、シグナル伝達応答を誘発するＦＧＦの能力に強く影響し得る[Polanska et al., Developmental Dynamics 238 (2), 277-293 (2009)]。ＦＧＦＲは、３つの細胞外免疫グロブリン様ドメイン、一回膜貫通ドメイン、および細胞内二量化チロシンキナーゼドメインからなる細胞表面受容体である。ＦＧＦの結合は、細胞内キナーゼを接近させ、互いにトランスリン酸化することを可能とする。７つのリン酸化部位が確認されている(例えば、ＦＧＦＲ−１においては、Ｔｙｒ４６３、Ｔｙｒ５８３、Ｔｙｒ５８５、Ｔｙｒ６５３、Ｔｙｒ６５４、Ｔｙｒ７３０およびＴｙｒ７６６)。

これらのホスホチロシン基の幾つかは、それ自体ＦＧＦＲによって直接リン酸化され得る下流のシグナル伝達分子のドッキング部位として作用し、多くのシグナル伝達経路の活性化をもたらす。従って、ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードは、細胞増殖および分化に関係し、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナル伝達カスケードは、細胞生存および細胞運命決定に関与する。一方、ＰＩ３ＫおよびＰＫＣシグナル伝達カスケードは、細胞極性制御に機能を有する。幾つかのＦＧＦシグナル伝達フィードバック阻害剤が現在同定されており、Ｓｐｒｙ(Sprouty)およびＳｅｆ(ＦＧＦと類似の発現)ファミリーのメンバーを含む。さらに、特定の条件において、ＦＧＦＲは、プレゴルジ膜からサイトゾルに放出される。受容体およびそのリガンドであるＦＧＦ−２は、インポーチンに関与するメカニズムによって核に共輸送され、遺伝子活性化ゲート開閉因子として作用する共通の必須転写共役因子であるＣＲＥＢ結合タンパク質(ＣＢＰ)複合体に携わっている。ＦＧＦ−２、ＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−２の免疫組織化学的発現と、その細胞質および核の腫瘍細胞局在化の間には、多くの相関関係が観察される。例えば、肺腺癌において、この関連性が核レベルで見出され、核での複合体の積極的な役割を強調する[Korc and Friesel, Curr. Cancer Drugs Targets 5, 639-651 (2009)]。

ＦＧＦは、発育中および成体組織の双方で広く発現され、組織発育、組織再生、血管新生、腫瘍化形質転換、細胞遊走、細胞分化および細胞生存を含む、多様な正常過程および病理学的過程に重要な役割を果たす。さらに、血管新生促進因子としてのＦＧＦはまた、血管内皮増殖因子受容体−２(ＶＥＧＦＲ−２)阻害に対する抵抗性の発生現象に関与している[Bergers and Hanahan, Nat. Rev. Cancer 8, 592-603 (2008)]。

最近のシグナル伝達ネットワークの癌ゲノムプロファイルにより、幾つかの一般的なヒトの癌の発生における異常ＦＧＦシグナル伝達の重要な役割が証明された[Wesche et al., Biochem. J. 437 (2), 199-213 (2011)]。リガンド非依存性ＦＧＦＲ構成型シグナル伝達が、多くのヒトの癌、例えば脳の癌、頭頸部癌、胃癌および卵巣癌で記載されている。ＦＧＦＲ変異型およびＦＧＦＲ遺伝子内転座が、悪性病変、例えば骨髄増殖性疾患で同定されている。興味深いことに、多くの発達障害の原因であることが見出された変異と同じ変異が腫瘍細胞でも見出されている(例えば、軟骨形成不全および致死性骨異形成でみられるＦＧＦＲ−３の二量化および構成的活性化を起こす変異は、しばしば、膀胱癌でも見出される)。二量化を促進する変異は、ＦＧＦＲからリガンド非依存性シグナル伝達を増大させるメカニズムの一つに過ぎない。ＦＧＦＲのキナーゼドメインの内部または外部に位置する他の変異は、ドメインのコンホメーションを変化させ、恒久的に活性なキナーゼを生じさせ得る。

ＦＧＦＲ−１のゲノム位置である染色体領域8p11-12の増幅は、乳癌で一般的な限局性増幅であり、乳癌の約１０％で起こり、主にエストロゲン受容体陽性癌で起こる。ＦＧＦＲ−１増幅はまた、非小細胞肺扁平上皮癌で報告されており、卵巣癌、膀胱癌および横紋筋肉腫で発生率は低いながら見られる。同様に、約１０％の胃癌で、ＦＧＦＲ−２増幅が示され、これは予後不良の散在型癌に関連する。さらに、ＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４に位置する多くの一塩基多型(ＳＮＰ)は、選択的な癌発症リスクの増大と相関することが分かっているか、または、予後不良と関連することが報告されている(例えば乳癌、大腸癌および肺腺癌におけるＦＧＦＲ−４Ｇ３８８Ｒ対立遺伝子)。癌の促進についてのこれらのＳＮＰの直接的な役割は未だ議論の的である。

要約すると、多くのインビトロおよびインビボ試験が行われ、ＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４を重要な癌標的として確認しており、包括的なレビューはこれらの発見を要約している[例えば Heinzle et al., Expert Opin. Ther. Targets 15 (7), 829-846 (2011); Wesche et al., Biochem. J. 437 (2), 199-213 (2011); Greulich and Pollock, Trends in Molecular Medicine 17 (5), 283-292 (2011); Haugsten et al., Mol. Cancer Res. 8 (１:１), 1439-1452 (2010)を参照のこと]。幾つかのストラテジーは、ヒトの腫瘍における異常なＦＧＦＲ−１からＦＧＦＲ−４シグナル伝達減少に従うものであり、とりわけ、遮断抗体および小分子阻害剤を含む。多くの選択的小分子ＦＧＦＲ阻害剤が、現在、臨床開発中であり、例えばＡＺＤ−４５４７(AstraZeneca)およびＢＪＧ−３９８(Novartis)がある。

最近の癌治療で一般的に達成されている顕著な進歩にもかかわらず、高い効力、高い選択性、低い毒性および／または良好な耐容性などの改善された性質を有する新規抗癌化合物を同定する継続的必要性が存在する。従って、本発明によって解決されるべき技術的課題は、ＦＧＦＲキナーゼに対する阻害活性を有する代替化合物を提供し、その結果、ＦＧＦＲ介在疾患、特に癌および他の増殖性障害を処置するための新規治療選択肢を提供することであると思われる。

９員または１０員二環式ヘテロアリール置換基を有する縮合ヘテロ−５,６−二環式キナーゼ阻害剤は、それぞれＷＯ２００７／０６１７３７−Ａ２およびＷＯ２００５／０９７８００−Ａ１に開示されている。これらの化合物は、ｍＴＯＲ(ラパマイシンの哺乳動物標的)および／またはＩＧＦ−１Ｒ(１型インスリン様増殖因子受容体)キナーゼに対する阻害作用のために、癌および他の疾患の処置に有用であると記述されている。さらに、キナーゼの阻害に関連するヘテロ−５,６−二環式鋳型構造は、とりわけＷＯ０１／１９８２８−Ａ２、ＷＯ２００７／０７９１６４−Ａ２およびＷＯ２０１０／０５１０４３−Ａ１に記載されている。

多くのタンパク質キナーゼに対して異なる阻害プロファイルを有する４−アミノピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン誘導体は、とりわけ、ＷＯ００／７１１２９−Ａ１、ＷＯ２００７／０５６１７０−Ａ２、ＷＯ２００７／０６１８８２−Ａ２、ＷＯ２００７／０６４９３２−Ａ２、ＷＯ２００９／１３６９６６−Ａ１、およびＷＯ２０１０／１２６９６０−Ａ１に開示されている。

ＷＯ２００５／１２１１４７−Ａ１、ＷＯ２００７／０６４８８３−Ａ２およびＷＯ２００７／０６４９３１−Ａ２において、５位に置換ジアリール尿素基を含む４−アミノピロロ−［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン誘導体が、ＦＧＦＲ−１阻害活性を有すると記載されている。しかし、他の受容体チロシンキナーゼ、特にＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＴｉｅ−２キナーゼもまた、この特定のクラスの化合物によって、著しく阻害される。このようなマルチキナーゼ活性が、処置中の副作用の可能性を高めるはずであるという仮説が立てられていたため、ＦＧＦＲキナーゼについての改善された選択性を有する新規薬剤を特定して、より耐容性が高い癌治療のための新規選択肢を提供することが、本発明の目的であった。

驚くべきことに、本発明において、特に５位に置換ベンゾチオフェン−２−イル基を有する４−アミノピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン誘導体が、ＦＧＦＲキナーゼ、とりわけＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−３キナーゼの強力かつ選択的な阻害を示すことが見出され、これにより、これらの化合物は、増殖性障害、例えば癌および腫瘍疾患の処置に特に有用となる。

従って、一つの局面において、本発明は、一般式(Ｉ)：

（Ｉ）
［式中、
Ｒ^１は、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり；
Ｒ^２は、水素またはメトキシであるが、
但しＲ^１およびＲ^２の少なくとも１つは水素以外である；
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表し、
式中、
Ｒ^３は、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、アミノカルボニル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニルおよび４〜６員ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される残基で置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）−アルキルであるか、または４〜６員ヘテロシクロアルキルであって、ここで前記４〜６員ヘテロシクロアルキル基は、所望により、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよく、
Ｒ^４は、水素または（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであり、
Ｒ^５は、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルアミノ、アミノカルボニルアミノおよび４〜６員ヘテロシクロアルキルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）−アルキルであって、前記４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよいか、または
所望によりヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノからなる群から選択される残基により置換されていてもよい（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルであるか、または
所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルであるか、または
所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、あるいは
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環または二環式の飽和４〜１０員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これはＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル、（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルカルボニル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、チエニルおよびフェニルからなる群から独立して選択される３つまでの残基により置換されていてもよく、ここで前記（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよび（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル残基の該アルキル基は、それらの一部として、所望により、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から選択される残基により置換されていてもよく、ここで前記チエニルおよびフェニル基は、所望により、フルオロ、クロロ、シアノ、メチルおよびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよいか、または
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、イミダゾール−１−イルまたは１，２，４−トリアゾール−１−イル環を形成し、これら各々は（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルおよびシアノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい４〜６員ヘテロシクロアルキルであるか、
または
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式の飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これはＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい]
の７−置換５−（１−ベンゾチオフェン−２−イル）−ピロロ−［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン誘導体に関する。

本発明の化合物はまた、その塩、溶媒和物および／または塩の溶媒和物の形態で存在できる。

本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物、ならびにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式（Ｉ）に含まれる下記の式（Ｉ−Ａ）−（Ｉ−Ｅ）の化合物、ならびにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、ならびに製造工程の生成物としておよび／または具体例として後記に記載された式(Ｉ)に含まれる化合物であって、式(Ｉ)に含まれる後記化合物が、塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でないならば、その塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。

塩は、本発明の目的において、好ましくは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩である(例えば、S. M. Berge et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19を参照のこと)。それ自体は薬学的使用に適さないが、例えば本発明の化合物の単離または精製に使用できる塩もまた含まれる。

薬学的に許容される塩は、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩を含む。

薬学的に許容される塩はまた、慣用の塩基の塩を含み、例えばおよび好ましくは、アルカリ金属塩(例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩)、アルカリ土類金属塩(例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩)、および、アンモニアまたは有機アミン、例えばおよび好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジメチルアミノエタノール、ジエチルアミノエタノール、プロカイン、ジシクロヘキシルアミン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、アルギニン、リジンおよび１,２−エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩である。

溶媒和物は、本発明の内容において、溶媒分子の化学量論的な配位によって、固体または液体状態で複合体を形成している、本発明の化合物の形態と示される。水和物は、配位が水で起こる場合の、溶媒和物の特定の形態である。本発明の内容において、水和物は、好ましい溶媒和物である。

本発明の化合物は、不斉中心の性質または制限された回転の何れかによって、異性体の形態(エナンチオマー、ジアステレオマー)で存在し得る。何れの異性体も、不斉中心が(Ｒ)配置、(Ｓ)配置または(Ｒ,Ｓ)配置である状態で存在し得る。

２個以上の不斉中心が本発明の化合物中に存在するとき、しばしば、例示された構造の幾つかのジアステレオマーおよびエナンチオマーが存在可能であること、そして、純粋なジアステレオマーおよび純粋なエナンチオマーが好ましい態様を表すことが認められるであろう。純粋な立体異性体、純粋なジアステレオマー、純粋なエナンチオマーおよびその混合物は、本発明の範囲内であることが意図される。

二重結合または環の置換基の性質による幾何異性体は、ｃｉｓ型(＝Ｚ体)またはｔｒａｎｓ型(＝Ｅ体)で存在でき、両方の異性体の形態が、本発明の範囲内に包含される。

本発明の化合物の全ての異性体は、分離されているか、純粋であるか、部分的に純粋であるか、またはラセミ混合物であるかにかかわらず、本発明の範囲内に包含される。当該異性体の精製および当該異性体混合物の分離は、当技術分野に既知の標準的な方法によって達成され得る。例えば、ジアステレオマー混合物は、クロマトグラフ法または結晶化によって個々の異性体に分離でき、ラセミ体は、キラルな相でのクロマトグラフによって、または分割によって、各エナンチオマーに分離できる。

さらに、上記の化合物の全ての可能な互変異性体の形態が、本発明に含まれる。

本発明はまた、本発明の化合物の全ての適当な同位体変異種を包含する。本発明の化合物の同位体変異種は、本発明の化合物中の少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが通常または天然に主に存在する原子質量と異なる原子質量を有する原子と交換されている化合物を意味すると理解される。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例は、水素の同位体、炭素の同位体、窒素の同位体、酸素の同位体、フッ素の同位体、塩素の同位体、臭素の同位体およびヨウ素の同位体、例えば^２Ｈ(重水素)、^３Ｈ(トリチウム)、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^８２Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２９Ｉおよび^１３１Ｉである。特定の本発明の化合物の同位体変異種、特に１個以上の放射性同位体が組み込まれたものは、例えば、作用メカニズムまたは体内の活性化合物の分布を調べるのに有益であり得る。製造および検出が比較的容易なため、特に^３Ｈまたは^１４Ｃ同位体で標識された化合物がこの目的に適している。さらに、重水素などの同位体の組み込みは、化合物の代謝安定性がより大きい結果として、例えば体内での半減期の延長、または必要とされる有効成分の投与量の減少などの特定の治療上の利点をもたらし得る。本発明の化合物のこのような修飾は、従って、幾つかの場合において、本発明の好ましい態様を構成し得る。本発明の化合物の同位体変異種は、当技術分野で既知の方法によって、例えば下記の方法および実施例に記載された方法によって、特定の反応剤および／または出発化合物の対応する同位体修飾を用いることによって製造できる。

本発明の内容において、置換基および残基は、特に断りのない限り、下記の意味を有する：
（Ｃ _１ −Ｃ _６）−アルキル、（Ｃ _１ −Ｃ _４）−アルキルおよび（Ｃ _２ −Ｃ _４）−アルキルは、本発明の内容において、１〜６個、１〜４個、または各々２〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基を表す。例として、および好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ-ブチル、ｎ-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ-ヘキシル、およびイソヘキシルが挙げられる。

(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルコキシは、本発明の内容において、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルコキシ基を表す。例として、および好ましくは、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。

モノ−(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルキルアミノは、本発明の内容において、１〜４個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル置換基を１個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ−プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ｎ−ブチルアミノおよびｔｅｒｔ−ブチルアミノが挙げられる。

ジ−(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルキルアミノは、本発明の内容において、同一であるかまたは異なっている、それぞれが１〜４個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル置換基を２個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノ、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノが挙げられる。

モノ−(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルキルアミノカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合しており、かつ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル置換基を１個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、ｎ−プロピルアミノカルボニル、イソプロピル−アミノカルボニル、ｎ−ブチルアミノカルボニルおよびｔｅｒｔ−ブチルアミノカルボニルが挙げられる。

ジ−(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルキルアミノカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合しており、かつ、同一であるかまたは異なっている、それぞれが１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル置換基を２個有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノカルボニル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−プロピルアミノ−カルボニル、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノカルボニル、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノカルボニル、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノカルボニルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノカルボニルが挙げられる。

(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルキルカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基[−Ｃ(＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合している、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基を表す。例として、および好ましくは、アセチル、プロピオニル、ｎ−ブチリル、イソブチリル、ｎ−ペンタノイルおよびピバロイルが挙げられる。

(Ｃ _１ −Ｃ _４ )−アルキルカルボニルアミノは、本発明の内容において、アルキル基中に１〜４個の炭素原子を含み、かつ、カルボニル基を介してＮ原子に結合している直鎖または分枝鎖アルキルカルボニル置換基を有するアミノ基を表す。例として、および好ましくは、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ、ｎ−ブチリルアミノ、イソブチリルアミノ、ｎ−ペンタノイルアミノおよびピバロイルアミノが挙げられる。

(Ｃ _３ −Ｃ _６ )−シクロアルキルは、本発明の内容において、３〜６個の環炭素原子を有する単環式、飽和炭素環を表す。例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。

（Ｃ _３ −Ｃ _６）−シクロアルキルカルボニルは、本発明の内容において、カルボニル基［−Ｃ（＝Ｏ)−]を介して分子の残りに結合している、３〜６個の環炭素原子を有する単環式の飽和炭素環を表す。例として、および好ましくは、シクロプロピルカルボニル、シクロブチルカルボニル、シクロペンチルカルボニルおよびシクロヘキシルカルボニルである。

４〜１０員ヘテロシクロアルキルは、本発明の内容において、１つの環窒素原子、および所望によりＮまたはＯのシリーズからの１つのさらなる環ヘテロ原子を含有し、かつ環窒素原子を介して結合できる全体で４〜１０個の環原子を有する単環式または二環式の飽和複素環を表す。全部で４〜７個の環原子を有し、かつ１つの環窒素原子、および所望によりＮまたはＯのシリーズからの１つのさらなる環ヘテロ原子を含有する４〜７員ヘテロシクロアルキルが好ましい。１つの環窒素原子、および所望によりＮまたはＯのシリーズからの１つのさらなる環ヘテロ原子を含有する単環式飽和５〜７員ヘテロシクロアルキルヘテロ環が特に好ましい。例としては、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、１，２−オキサゾリジニル、１，３−オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、１，２−オキサジナニル、モルホリニル、アゼパニル、１，４−ジアゼパニル、１，４−オキサゼパニル、アゾカニル、１，５−ジアゾカニル、１，５−オキサゾカニル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｂ］ピロリル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、オクタヒドロピロロ［３，４−ｂ］ピリジル、オクタヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル、デカヒドロキノリニル、デカヒドロイソキノリニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキシル、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル、３−アザビシクロ［３．２．０］ヘプチル、７−アザビシクロ［４．１．０］ヘプチル、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプチル、２−オキサ−５−アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル、２−アザビシクロ［２．２．２］オクチル、３−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、８−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、８−オキサ−３−アザビシクロ［３．２．１］オクチル、および３−オキサ−９−アザビシクロ［３．３．１］ノニルが挙げられる。好ましいものは、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、１，２−オキサゾリジニル、１，３−オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、１，２−オキサジナニル、モルホリニル、アゼパニル、１，４−ジアゼパニル、および１，４−オキサゼパニルである。特に好ましいものは、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、１，２−オキサゾリジニル、１，３−オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、１，２−オキサジナニル、モルホリニル、アゼパニル、１，４−ジアゼパニル、および１，４−オキサゼパニルが挙げられる。

４〜６員ヘテロシクロアルキルは、本発明の内容において、全部で４〜６個の環原子を有し、かつ、Ｎ、ＯおよびＳのシリーズから選択される同一であるかまたは異なっている１個または２個の環ヘテロ原子を含有し、かつ環炭素原子または環窒素原子（存在するならば）を介して結合できる単環式飽和ヘテロ環を表す。１個の環窒素原子を含み、所望によりさらにＮ、ＯまたはＳのシリーズから選択される１個の環ヘテロ原子を含む４〜６員ヘテロシクロアルキルが好ましい。環窒素原子を１個、かつ所望によりＮまたはＯのシリーズから選択される環ヘテロ原子をさらに１個含む５員または６員ヘテロシクロアルキルが特に好ましい。例としては、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、チオラニル、１，２−オキサゾリジニル、１，３−オキサゾリジニル、１，３−チアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１，３−ジオキサニル、１，４−ジオキサニル、１，２−オキサジナニル、モルホリニルおよびチオモルホリニルが挙げられる。好ましくは、アゼチジニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、１，２−オキサゾリジニル、１，３−オキサゾリジニル、１，３−チアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、１，２−オキサジナニル、モルホリニル、およびチオモルホリニルである。特に好ましくは、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、およびモルホリニルである。

アゼチジノ、ピロリジノおよびピペリジノは、本発明の内容において、特に、それぞれ、Ｎ結合アゼチジン−１−イル、ピロリジン-1-イルおよびピペリジン−１−イル環を言う。

オキソ置換基は、本発明の内容において、二重結合を介して炭素原子または硫黄原子に結合している酸素原子を表す。

本発明の内容において、複数回現れる基全てについて、その意味は互いに独立している。本発明の化合物中の基が置換されているならば、特に断りのない限り、基は、一置換されていても多置換されていてもよい。同一または異なる１個、２個または３個の置換基による置換が好ましい。同一または異なる１個または２個の置換基による置換が特に好ましい。

好ましい態様において、本発明は、一般式（Ｉ）
［式中、
Ｒ^１は、クロロまたはメチルであり；
Ｒ^２は、メトキシであり；
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表し；
式中、
Ｒ^３は、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびピロリジン−１−イルからなる群から選択される残基により置換された（Ｃ_２−Ｃ_４）−アルキルであるか、またはピロリジン−３−イルであり、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、アミノカルボニルおよびモノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニルからなる群から選択される残基により置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであるか、または
所望によりアミノで置換されていてもよい（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルであるか、または
所望によりヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノからなる群から選択される残基により置換された（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルであるか、または
所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソおよびアミノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換された５または６員ヘテロシクロアルキルであり、あるいは
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式の飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、これはＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル、（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルカルボニル、アミノカルボニルおよびモノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３つまでの残基により置換されていてもよく、ここで前記（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよび（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル残基の該アルキル基は、それらの一部として、所望によりヒドロキシにより置換されていてもよい、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソおよびアミノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい５または６員ヘテロシクロアルキルであるか、または
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式の飽和５〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これはＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい］
の化合物に関する。

別の実施形態において、本発明は、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｒ^１は、メチルであり、
Ｒ^２は、メトキシである）
の化合物に関する。

また別の実施形態において、本発明は、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５を表し、
式中、
Ｒ^４は、水素であり、
Ｒ^５は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルおよびオキソからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい５または６員ヘテロシクロアルキルである）
の化合物に関する。

さらにまた別の実施形態において、本発明は、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５を表し、
式中、Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式の飽和５〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これはＮまたはＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３つまでの基により置換されてもよい）
の化合物に関する。

さらにまた別の実施形態において、本発明は、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｇは、基−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表し、
式中、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルおよびオキソからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい５または６員ヘテロシクロアルキルである）
の化合物に関する。

さらにまた別の実施形態において、本発明は、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｇは、基−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表す、
式中、
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式の飽和５または７員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これは第二の環窒素原子を含有していてもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい）
の化合物に関する。

特に好ましい実施形態において、本発明は、一般式（Ｉ）
（式中、
Ｒ^１は、メチルであり、
Ｒ^２は、メトキシであり、
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表し、
式中、
Ｒ^４は、水素であり、
Ｒ^５は、アミノ、メチルアミノまたはアミノカルボニルにより置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであるか、またはアミノにより置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルであるか、または２−オキソピロリジン−３−イルまたは２−オキソピペリジン−３−イルであるか、あるいは
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはピペラジン−１−イル環を形成するが、これら各々は、メチル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよく、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、２−オキソピロリジン−３−イルまたは２−オキソピペリジン−３−イルであるか、あるいは
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはピペラジン−１−イル環を形成するが、これら各々はメチル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい）
の化合物に関する。

また、それぞれの組み合わせで特記された基、または、好ましい組み合わせの基の定義は、他の組み合わせの基の定義によって、基について示された特定の組み合わせに関係なく、望み通りに置き換えられる。２以上の上記の好ましい範囲の組み合わせが、特に好ましい。

一般式(Ｉ)の化合物は、特定の選択されたＧ基(上記定義を参照のこと)の性質によって主に決定される様々な合成経路によって製造できる。

従って、他の態様において、本発明は、一般式(Ｉ)の化合物を製造する方法であって、式（ＩＩ）：

の４−アミノピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジンを、

［Ａ］
酸の存在下で、ホルムアルデヒドおよび式（ＩＩＩ）
（ＩＩＩ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する）
のアミンと反応させて、
式（ＩＶ）

（ＩＶ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する）
の化合物を得て、次いで
式（Ｖ）

（Ｖ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する）
の化合物へと臭素化して、その後、
式（ＶＩ）

（ＶＩ）
（式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、
Ｒ^８は、水素または（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルを表すか、または両Ｒ^８残基が一体となって結合して、−（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（ＣＨ_３）_２−Ｃ（ＣＨ_３）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２−Ｃ（ＣＨ_３）_２−ＣＨ_２−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−架橋を形成する）
の化合物であるベンゾチオフェン−２−イルボロネートを、パラジウム触媒および塩基の存在下でカップリングさせて、
式（Ｉ−Ａ）

（Ｉ−Ａ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する）
の標的化合物を得ること；あるいは、

［Ｂ］
塩化ホスホリルの存在下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて処理して、
式（ＶＩＩ）

（ＶＩＩ）
のホルミル化合物を得て、次いで
式（ＶＩＩＩ）

（ＶＩＩＩ）
の化合物へと臭素化して、次にパラジウム触媒および塩基の存在下で、
式（ＶＩ）
（ＶＩ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^８は、上記の意味を有する）
のベンゾチオフェン−２−イルボレートとカップリングさせて、
式（ＩＸ）
（ＩＸ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する）
の化合物を得て、

これを、次いで
［Ｂ−１］
酸および還元剤の存在下で、
式（ＩＩＩ）

（ＩＩＩ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する）
のアミンと反応させて、
式（Ｉ−Ａ）
（Ｉ−Ａ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、上記の意味を有する）
の標的化合物を得るか、または

［Ｂ−２］
式（Ｘ）
（Ｘ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する）
のカルボン酸に酸化して、最終的に
式（ＸＩ）

（ＸＩ）
（式中、Ｒ^６およびＲ^７は、上記の意味を有する）
のアミンと、縮合剤の存在下でカップリングさせて、
式（Ｉ−Ｂ）

（Ｉ−Ｂ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^６およびＲ^７は、上記の意味を有する）
の標的化合物を得るか、または

［Ｂ−３］
式（ＸＩＩ）

（ＸＩＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する）
のアルコールに還元して、
式（ＸＩＩＩ）

（ＸＩＩＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、Ｘは、クロロ、ブロモまたはヨードである）の対応するハロメチル誘導体に変換して、最終的に、任意の塩基の存在下において、
式（ＸＩＶ）

（ＸＩＶ）
（式中、Ｒ^３は上記の意味を有する）
のアルコールを用いて処理して、
式（Ｉ−Ｃ）

（Ｉ−Ｃ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、上記の意味を有する）
の標的化合物を得ること、
所望により、その後、適切な場合には、（ｉ）このようにして得られた式（Ｉ）の化合物を、好ましくはクロマトグラフ法を用いて、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離すること、および／または、（ｉｉ）対応する溶媒および／または酸もしくは塩基で処理することによって、式（Ｉ）の化合物を、その水和物、溶媒和物、塩および／または塩の水和物もしくは溶媒和物に変換すること、
を特徴とする方法に関する。

式（Ｉ−Ｄ）

（Ｉ−Ｄ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、Ｒ^９は、所望により置換（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであり［即ち、Ｒ^９（＝Ｏ）−は、所望により置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルを表す］）を有する本発明の化合物を、

式（ＩＸ）

（ＩＸ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する）
の前記アルデヒドの中間体を、
式（ＸＶ）

（ＸＶ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する）
の対応するオキシムに変換して、次いで、
式（ＸＶＩ）

（ＸＶＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有する）
のアミノメチル化合物に還元され、その後、
式（ＸＶＩＩ）

（ＸＶＩＩ）
（式中、Ｒ^９は、上記の意味を有する）
のカルボン酸と、縮合剤の存在下でカップリングさせることにより、
製造できる。

式（Ｉ−Ｅ）

（Ｉ−Ｅ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、Ｒ^４ＡおよびＲ^５Ａは、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、所望により置換イミダゾール−１−イルまたは１，２，４−トリアゾール−１−イル環を形成する）
を有する本発明の化合物を、
式（ＸＩＩＩ）

（ＸＩＩＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、上記の意味を有し、Ｘは、クロロ、ブロモまたはヨードである）の前記ハロメチル中間体を、
式（ＸＶＩＩＩ）

（ＸＶＩＩＩ）
（式中、Ｒ^４ＡおよびＲ^５Ａは、上記の意味を有する）により一般化される適切な１Ｈ−イミダゾールまたは１Ｈ−１，２，４−トリアゾール誘導体と反応させて、製造できる。

上記過程により製造できる式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）、（Ｉ−Ｄ）および（Ｉ−Ｅ）の各々の化合物は、一般的式（Ｉ）の化合物の特定のサブセットを表す。

マンニッヒ型のアミノメチル化反応を表す処理工程［Ａ］（ＩＩ）→（ＩＶ）は、常法において、ピロロトリアジン（ＩＩ）を、ギ酸または酢酸などの酸の存在下に、ホルムアルデヒドおよびアミン（ＩＩＩ）の混合水溶液を用いて処理して行なった。好ましくは、酢酸を、触媒および溶媒として両方使用する。反応を、通常、＋２０℃〜＋８０℃の範囲の温度で実施した［参照、国際出願番号ＷＯ２００７／０６４９３１−Ａ２に記述された製造方法］。

処理工程［Ａ］（ＩＶ）→（Ｖ）および［Ｂ］（ＶＩＩ）→（ＶＩＩＩ）のための臭素化剤として、好ましくはＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（ＤＢＤＭＨ）または元素状臭素を使用する。反応を、一般的に、−７８℃〜＋２５℃の温度範囲内にて、不活性溶媒中、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で実施する。

［Ａ］（Ｖ）＋（ＶＩ）→（Ｉ−Ａ）および［Ｂ］（ＶＩＩＩ）＋（ＶＩ）→（ＩＸ）［“鈴木-宮浦カップリング”]は、一般的に、不活性溶媒中、パラジウム触媒および塩基水溶液を用いて行われる。この目的に適したパラジウム触媒は、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）、塩化ビス（アセトニトリル）パラジウム（ＩＩ）、塩化［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）、およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）を含み、所望により、他のホスフィンリガンド、例えば、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’,４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（Ｘ−Ｐｈｏｓ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（Ｓ−Ｐｈｏｓ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（Ｘａｎｔｐｈｏｓ）、または４−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンと組み合わせる。また、反応条件下で触媒として活性な種を生成するパラジウム・プレ触媒、例えば（２’−アミノ−ビフェニル−２−イル）−（クロロ）−パラジウム−ジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）−ホスフィンを使用できる[例えば、S. Kotha et al., Tetrahedron 58, 9633-9695 (2002); T. E. Barder et al., J. Am. Chem. Soc. 127 (13), 4685-4696 (2005);S. L. Buchwald et al., J. Am. Chem. Soc. 132 (40), 14073-14075 (2010) およびこれらに引用された参考文献を参照のこと]。

これらのカップリング反応に好適な塩基は、特に重炭酸アルカリ金属塩、例えば重炭酸ナトリウムまたは重炭酸カリウム、炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム、リン酸アルカリ金属塩、例えばリン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム、またはフッ化アルカリ金属塩、例えばフッ化カリウムまたはフッ化セシウムである。該反応は、反応条件下において不活性有機溶媒中で行われる。好ましくは、水混和性の有機溶媒、例えば１,２-ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、１,４−ジオキサン、アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)またはジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)が用いられるが、他の不活性溶媒、例えばジクロロメタンまたはトルエンを用いてもよい。カップリング反応は、通常、＋４０℃〜＋１２０℃の温度範囲で実施される。

処理工程［Ｂ］（ＩＩ）→（ＶＩＩ）[ビルスマイヤー・ハック反応ホルミル化]は、常法においてはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶媒中のピロロトリアジン（ＩＩ）を塩化ホスホリルで処理することにより実施される。該反応は、通常０℃〜＋８０℃の温度で実施される。

還元的アミノ化反応［Ｂ−１］（ＩＸ）＋（ＩＩＩ）→（Ｉ−Ａ）に好適な還元剤は、慣用の水素化ホウ素アルカリ金属塩、例えば水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素カリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムである。これらの変換は、一般的に、アミン成分(ＩＩＩ)および／または用いられた特定の水素化ホウ素塩の反応性に応じて、酸、好ましくは酢酸の存在下で、アルコールまたはエーテル溶媒中、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、テトラヒドロフランまたは１,４−ジオキサン中で、０℃〜＋８０℃の温度範囲内で行われる。

処理工程［Ｂ−２］（ＩＸ）→（Ｘ）における酸化反応について、次亜塩素酸塩スカベンジャー、例えば２−メチル−２−ブテンの存在下における塩化ナトリウムとの酸化は、選択的方法を表す[cf. H. W. Pinnick et al., Tetrahedron 37, 2091-2096 (1981); A. Raach and O. Reiser, J. Prakt. Chem. 342 (6), 605-608 (2000) およびそこに引用された参考文献を参照のこと]。該反応は、通常、０℃ないし周囲温度で、テトラヒドロフラン／水の混合物中で実施される。

処理工程［Ｂ−２］（Ｘ）＋（ＸＩ）→（Ｉ−Ｂ）［アミド形成］に好適な縮合剤は、例えば、カルボジイミド、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジエチル−、Ｎ，Ｎ’−ジプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル−、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはＮ−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、ホスゲン誘導体類、例えば、Ｎ，Ｎ’−カルボニル−ジイミダゾール（ＣＤＩ）またはクロロギ酸イソブチル、α−クロロエナミン、例えば、１−クロロ−２−メチル−１−ジメチルアミノ−１−プロペン、リン化合物、例えば無水プロパンホスホン酸、シアノホスホン酸ジエチル、ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）塩化ホスホリル、ベンゾチアゾール−１−イル−オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロ−リン酸塩（ＢＯＰ）またはベンゾチアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、およびウロニウム化合物、例えば、Ｏ−（ベンゾチアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボーレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ−（ベンゾチアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、２−（２−オキソ−１−（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボーレート（ＴＰＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾチアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）またはＯ−（１Ｈ−６−クロロベンゾチアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボーレート（ＴＣＴＵ）を含み、好適な場合には、さらなる補助剤、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢｔ)またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、および／または塩基、例えば炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、または、有機アミン塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ピリミジンまたは４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−ピリミジン（ＤＭＡＰ）と組み合わせる。好ましいのは、Ｏ−（７−アザベンゾチアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）またはＯ−（ベンゾチアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボーレート（ＴＢＴＵ）を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および所望により１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と組み合わせて用いることである。

処理工程［Ｂ−２］（Ｘ）＋（ＸＩ）→（Ｉ−Ｂ）のための不活性溶媒は、例えばエーテル、例えば、ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンまたは１,２-ジメトキシエタン、炭化水素、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、ヘキサンまたはシクロヘキサン、ハロゲン化炭化水素、例えば、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタン、トリクロロエチレンまたはクロロベンゼン、または他の溶媒、例えば、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ピリミジン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）またはＮ−メチル−ピロリジノン（ＮＭＰ）。また、これらの溶媒の混合物を使用することができる。好ましいものは、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはその混合物を用いて提供される。該反応は、一般的に、０℃〜＋６０℃、好ましくは＋１０℃〜＋４０℃の温度範囲で実施される。

処理工程［Ｂ−３］（ＩＸ）→（ＸＩＩ）におけるアルデヒドからアルコールへの変換は、いくつかの慣例の還元方法により達成され得る。好ましくは、アルコール溶媒、例えば、メタノールまたはエタノール中の水素化ホウ素ナトリウムを使用する。

処理工程［Ｂ−３］（ＸＩＩ）→（ＸＩＩＩ）におけるヒドロキシからハロゲンへの変換のために、当分野では既知の様々な標準方法および試薬を用いることができる。選択の試薬は、塩化チオニル［Ｘ＝Ｃｌ］、テトラブロモメタン／トリフェニルホスフィン［Ｘ＝Ｂｒ］、およびヨウ素／トリフェニル−ホスフィン［Ｘ＝Ｉ］である。７−（クロロメチル）誘導体（ＸＩＩＩ）［Ｘ＝Ｃｌ］の製造は、後処理の簡便性および化合物安定性のために好ましい。

処理工程［Ｂ−３］（ＸＩＩＩ）＋（ＸＩＶ）→（Ｉ−Ｃ）［エーテル形成］に好適な塩基は、特に、炭酸アルカリ金属塩、例えば炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム、酢酸アルカリ金属塩、例えば酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウム、または慣用の第３級アミン塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはピリジンである。好ましくは、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(ＤＩＰＥＡ)である。

該反応（ＸＩＩＩ）＋（ＸＩＶ）→（Ｉ−Ｃ）は、アルコール（ＸＩＶ）過剰を用いて、＋２０℃〜＋１５０℃の温度範囲で、不活性溶媒中、例えばジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフランまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で、または溶媒なしで実施される。有利には、これらの変換は、マイクロ波反応装置によって行われる。アルキル化触媒として４級アンモニウム臭化物、例えば、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミド、Ｎ−ベンジルトリエチルアンモニウムブロミドまたはＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルヘキサデカン−１−アンモニウムブロミドの付加もまた有益である。

反応順序（ＸＩＩ）→（ＸＩＩＩ）→（Ｉ−Ｃ）は、２つの別工程、すなわち中間体化合物（ＸＩＩＩ）の単離および精製により行われても、ワンポット法、すなわち製造反応で得られた粗製中間体（ＩＶ）を用いて行われてもよい。

アルドキシム（ＸＶ）は、アルコール／水の混合物中のヒドロキシルアミンとの縮合により、アルデヒド中間体（ＩＸ）から容易に入手できる。第一級アミン（ＸＶＩ）へのその後の還元を、メタノール性塩酸中の亜鉛粉末を用いる処理により行い、アミド形成（ＸＶＩ）＋（ＸＶＩＩ）→（Ｉ−Ｄ）は、処理工程［Ｂ−２］（Ｘ）＋（ＸＩ）→（Ｉ−Ｂ）について上記した条件と同じような条件下で行なわれる。

反応（ＸＩＩＩ）＋（ＸＶＩＩＩ）→（Ｉ−Ｅ）は、通常、不活性溶媒中、例えばジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、テトラヒドロフランまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で、＋２０℃〜＋１００℃の温度範囲で行なわれる。この変換は、補助塩基の存在下で達成されるか［ｃｆ．反応（ＸＩＩＩ）＋（ＸＩＶ）→（Ｉ−Ｃ）］、またはアゾール成分（ＸＶＩＩＩ）過剰を用いて、独立した塩基を用いずに進行し得る。

第１級または第２級アミン部分が、式(Ｉ)の標的化合物中のＧ基の一部を形成する場合、時には、上記の製造反応において、遊離アミンの代わりに反応要素としてこのアミンの保護誘導体を用いることが適切であり得る。この目的のために、慣用の一時的なアミノ保護基、例えばアシル基(例えば、アセチルまたはトリフルオロアセチル)またはカルバメート型保護基(例えばＢｏｃ基、Ｃｂｚ基またはＦｍｏｃ基)を用いてもよい。好ましくは、Ｂｏｃ(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)基が用いられる。同様に、Ｇ基の一部であるヒドロキシ官能基は、前駆体化合物および工程中間体において、例えばテトラヒドロピラニル(ＴＨＰ)エーテルとして、またはシリルエーテル誘導体、例えばトリメチルシリルまたはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテルとして、一時的にブロックされ得る。

次いで、これらの保護基は、水を用いる後処理および精製の手順の間に同時に切断され得るか、または、当技術分野で周知の標準的な方法を用いて、連続した別個の反応工程で除去される。対応する遊離アミンまたはアルコールからの当該保護された中間体の製造は、同様に、文献[例えば、T. W. Greene and P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999を参照のこと]に記載された一般的な手順に従って、容易に達成される。

保護された(すなわちアシル化した)アミン誘導体の特定のタイプは、それ自体、顕著なＦＧＦＲ阻害活性を発揮する。従って、このような化合物はまた、上で定義した一般式(Ｉ)に包含される。

本発明の化合物の製造は、下記の合成スキームによって説明され得る：
スキーム１

スキーム２

スキーム３

［Ｒ＝水素、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルまたはシアノ］。

スキーム４

式（ＩＩ）の出発化合物の４−アミノピロロ−［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジンは、先に記述した４ステップ反応順序により、容易に入手できる［スキーム５；国際特許出願ＷＯ２００７／０６４９３１−Ａ２（中間体Ａ）を参照されたい］：
スキーム５

式（ＶＩ）のベンゾチオフェン−２−イルボロネートは、好都合には、式（ＸＩＸ）の置換チオフェノール誘導体から出発して製造できる（下記のスキーム６を参照のこと）。ブロモアセタール（ＸＸ）でアルキル化し、その後ポリリン酸介在性の環化により、式（ＶＩ）のベンゾチオフェン中間体を得る。これを次いで２位でメタレーションし、トリアルキルボレートと反応させる。アルカリで後処理し、式（ＶＩａ）の遊離の（ベンゾチオフェン−２−イル）ボロン酸を得る。これは、所望により、当技術分野で既知の標準的な手順によって、式（ＶＩｂ）の環状ボロネート、例えばいわゆるＭＩＤＡボロネートに変換してもよい[例えば、D. M. Knapp et al., J. Am. Chem. Soc. 131 (20), 6961-6963 (2009)を参照のこと]。

スキーム６

[P. A. PleおよびL. J. Marnett, J. Heterocyclic Chem. 25 (4), 1271-1272 (1988); A. Ven-tu-relli et al., J. Med. Chem. 50 (23), 5644-5654 (2007)を参照されたい]。

式（ＩＩＩ）、（ＸＩ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶＩＩ）、（ＸＶＩＩＩ）、（ＸＩＸ）、（ＸＸ）および（ＸＸＩＩＩ）の化合物は、市販されているか、文献より既知であるか、または、利用可能な出発物質から文献に記載された標準的な方法を適合させることによって容易に製造できる。出発物質を製造するための詳細な手順および参考文献は、実施例の出発物質および中間体の製造についての章の実験の部で見出され得る。

本発明の化合物は、有益な薬理学的性質を有し、ヒトおよび他の哺乳動物の障害を予防および処置するのに用いられ得る。

本発明の化合物は、受容体チロシンキナーゼ、特にＦＧＦＲキナーゼ、最も顕著にはＦＧＦＲ−１およびＦＧＦＲ−３キナーゼの活性または発現の強力な阻害剤である。従って、他の態様において、本発明は、処置を必要とする患者において、ＦＧＦＲキナーゼ活性が関連するまたは介在する障害を処置する方法であって、該患者に、有効量の上で定義した式(Ｉ)の化合物を投与することを含む方法を提供する。或る態様において、ＦＧＦＲキナーゼ活性が関連する障害は、増殖性障害、特に癌および腫瘍疾患である。

本発明の内容において、用語“処置”または“処置する”は、疾患、障害、状態または容態を、その発症および／または進行および／または症候を阻害し、遅延し、軽減し、緩和し、阻止し、減少させまたはその退縮を起こすことを含む。用語“予防”または“予防する”は、疾患、障害、状態または容態を、その発症および／または進行および／または症候を、有する、罹患する、または経験するリスクを減少させることを含む。用語“予防”(prevention)は、防止(prophylaxis)を含む。障害、疾患、状態または容態の処置または予防は、部分的であっても完全であってもよい。

用語“増殖性障害”は、望ましくないまたは制御されていない細胞増殖を含む障害を含む。本発明の化合物は、細胞増殖および／または細胞分割を予防し、阻害し、遮断し、軽減し、減少させ、制御することなど、および／または、アポトーシスを生じさせることに利用できる。本方法は、ヒトを含めた哺乳動物を含む処置を必要とする対象に、該障害を処置または予防するのに有効な本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、異性体、多形、代謝物、水和物または溶媒和物を或る量で投与することを含む。

この明細書を通して、単純にするために、単数表現を複数表現より好んで用いているが、一般的に、特に断りのない限り、単数表現は複数表現を含むことを意味する。例えば、“患者において疾患を処置する方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物を患者に投与することを含む方法”は、１種より多い疾患の同時処置、および、１種より多い式（Ｉ）の化合物の投与を含むことを意味する。

本発明の化合物で処置および／または予防できる増殖性障害は、特に、癌および腫瘍疾患のグループを含むが、これらに限定されない。これらは、特に、下記の疾患を意味すると理解されるが、それらに限定されない：乳癌および乳房の腫瘍(乳管および小葉型、また非浸潤性のもの)、呼吸管の腫瘍(小細胞肺癌および非小細胞肺癌、小細胞癌および非小細胞癌、気管支癌、気管支腺腫、胸膜肺芽腫)、脳の腫瘍(例えば脳幹の腫瘍、および視床下部の腫瘍、星状細胞腫、神経膠芽腫、髄芽腫、上衣腫、神経外胚葉腫瘍および松果体腫瘍)、消化器(食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸、肛門)の腫瘍、肝臓の腫瘍(とりわけ肝細胞癌、胆管細胞癌、および、肝細胞・胆管細胞混合型腫瘍)、頭および頸部(喉頭、下咽頭、上咽頭、中咽頭、口唇および口腔)の腫瘍、皮膚癌(扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚癌および非黒色腫皮膚癌)、軟部組織の腫瘍(とりわけ軟部組織肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫)、眼の腫瘍(とりわけ眼球内黒色腫、ぶどう膜黒色腫および網膜芽細胞腫)、内分泌腺および外分泌腺(例えば甲状腺および副甲状腺、膵臓および唾液腺)の腫瘍、尿路の腫瘍(膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍)、生殖器の腫瘍(女性における子宮内膜、子宮頸、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌、および、男性における前立腺および精巣の癌)、ならびに、その遠隔転移。これらの障害はまた、固形癌および循環血液細胞としての増殖性血液疾患、例えばリンパ腫、白血病および骨髄増殖性疾患、例えば急性骨髄腫、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性および有毛細胞白血病、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系のリンパ腫を含む。

本発明の化合物の活性および選択性プロファイルのために、本発明の化合物は、胸部(乳房)、肺、胃、膀胱および卵巣の癌および腫瘍疾患の処置に特に適当であると考えられる。さらに、本発明の化合物は、全般的な腫瘍転移の予防または抑制に特に適している。

本発明の化合物および方法で処置および／または予防できる他の増殖性障害は、乾癬、ケロイドおよび他の皮膚に影響を与える過形成、水疱性類天疱瘡、多形紅斑および疱疹状皮膚炎を含む表皮下水疱形成を伴う水疱性障害、線維性障害、例えば肺線維症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄および肝硬変、メサンギウム細胞増殖性障害、糸球体症、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、悪性腎硬化症および多発性嚢胞腎疾患を含む腎臓疾患、良性前立腺過形成(ＢＰＨ)、血管新生のまたは血管増殖性障害および血栓性微小血管障害症候群を含む。

本発明の化合物はまた、眼疾患、例えば加齢黄斑変性(ＡＭＤ)、萎縮型黄斑変性、虚血性網膜静脈閉塞症、糖尿病性黄斑浮腫、糖尿病網膜症、未熟児網膜症および他の網膜症の処置および／または予防に有用である。

本発明の化合物を投与することによって処置および／または予防し得る他の状態は、婦人科疾患、例えば子宮内膜症、筋腫および卵巣嚢腫、脂肪生成、胆汁代謝、リン酸代謝、カルシウム代謝および／または骨ミネラル化に関連する代謝障害、骨格障害、例えば低身長症、軟骨形成不全およびパイフェル症候群、軟骨疾患、例えば変形性関節症および多発性関節炎、関節リウマチ、禿頭症および移植拒絶反応を含む。

上記の疾患は、ヒトにおいて、十分特徴づけられているが、他の哺乳動物においても、比較可能な病因で存在し、本発明の化合物および方法で処置できる。

従って、本発明は、さらに、障害、特に上記の障害を処置および／または予防するための本発明の化合物の使用に関する。

本発明は、さらに、障害、特に上記の障害を処置および／または予防する医薬組成物を製造するための、本発明の化合物の使用に関する。

本発明は、さらに、障害、特に上記の障害を処置および／または予防する方法における、本発明の化合物の使用に関する。

本発明は、さらに、有効量の少なくとも１種の本発明の化合物を用いることによって、障害、特に上記の障害を処置および／または予防する方法に関する。

本発明の化合物を、唯一の薬剤として投与してもよく、または、組み合わせが望ましくないおよび／または許容されない副作用を起こさない限り、１種以上のさらなる治療薬と組み合わせて投与してもよい。このような併用治療は、上で定義した式（Ｉ）の化合物および１種以上のさらなる治療薬を含む一つの医薬投与製剤の投与、ならびに、それぞれ別個の医薬投与製剤における式（Ｉ）の化合物およびさらなる治療薬の投与を含む。例えば、式（Ｉ）の化合物および１つの治療薬を、１個の（固定化された）経口投与組成物、例えば錠剤またはカプセル剤にて、一緒に患者に投与してもよく、または、それぞれの薬物を別個の投与製剤で投与してもよい。

別個の投与製剤を用いるとき、式（Ｉ）の化合物と１種以上のさらなる治療薬を、基本的に同時に（すなわち共に）投与しても、別個に時間差で（すなわち連続で）投与してもよい。

特に、本発明の化合物は、他の抗癌剤、例えばアルキル化剤、代謝拮抗薬、植物誘発抗癌剤、ホルモン治療薬、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン阻害剤、キナーゼ阻害剤、標的化薬物、抗体、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、免疫剤、生物学的応答修飾剤、抗血管新生化合物、および、他の抗増殖性細胞分裂阻害剤および／または細胞毒との固定化された組み合わせ、または別個の組み合わせで用いられ得る。この点で、下記は、本発明の化合物と組み合わせて用いられ得る第２薬物の例の非限定的な一覧である：
アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アルファラディン(alpharadin)、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アモナファイド(amonafide)、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンドロムスチン(andromustine)、アルグラビン、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、５−アザシチジン、バシリキシマブ、ベロテカン、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ボスチニブ、ブリバニブアラニンエステル、ブセレリン、ブスルファン、カバジタキセル、CAL-101、ホリナートカルシウム、レボホリナートカルシウム、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セジラニブ、セルモロイキン、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シドホビル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、コンブレタスタチン、クリサンタスパーゼ、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダーリナパーシン(darinaparsin)、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デスロレリン、塩化ジブロスピジウム(dibrospidium chloride)、ドセタキセル、ドビチニブ、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、デュタステリド、エクリズマブ、エドレコロマブ、エフロルニチン、エリプチニウムアセテート、エルトロンボパグ、エンドスタチン、エノシタビン、エピムビシン(epimbicin)、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エポチロン、エプタプラチン(eptaplatin)、エリブリン、エルロチニブ、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキサテカン、エキセメスタン、エクシスリンド、ファドロゾール、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フルダラビン、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ホレチニブ、ホルメスタン、ホテムスチン、フルベストラント、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、ギマテカン、ギメラシル、グルホスファミド、グルトキシム(glutoxim)、ゴセレリン、ヒストレリン、ヒドロキシ尿素、イバンドロン酸、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、インプロスルファン、インテダニブ(intedanib)、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、インターロイキン−２、イピリムマブ、イリノテカン、イキサベピロン、ランレオチド、ラパチニブ、ラソフォキシフェン、レナリドミド、レノグラスチム、レンチナン、レンバチニブ、レスタウルチニブ、レトロゾール、リュープロレリン、レバミゾール、リニファニブ、リンスチニブ(linsitinib)、リスリド、ロバプラチン(lobaplatin)、ロムスチン、ロニダミン、ルルトテカン、マホスファミド、マパツムマブ(mapatumumab)、マシチニブ、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メラルソプロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メトトレキサート、アミノレブリン酸メチル、メチルテストステロン、ミファムルチド、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、モルグラモスチム、モテサニブ、ナンドロロン、ネダプラチン、ネララビン、ネラチニブ、ニロチニブ、ニルタミド、ニモツズマブ(nimotuzumab)、ニムスチン、ニトラクリン、ノラトレキセド、オファツムマブ、オプレルベキン、オキサリプラチン、パクリタキセル、パリフェルミン、パミドロン酸、パニツムマブ、パゾパニブ、ペグアスパルガーゼ、ペグ−エポエチンベータ、ペグフィルグラスチム(pegfilgastrim)、ペグ−インターフェロンアルファ−２ｂ、ペリトレキソール、ペメトレキセド、ペムツモマブ(pemtumomab)、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ペリホシン、ペルツズマブ、ピシバニール、ピラムビシン(pirambicin)、ピラルビシン、プレリキサフォル、プリカマイシン、ポリグルサム(poliglusam)、リン酸ポリエストラジオール、ポナチニブ、ポルフィマーナトリウム、プララトレキサート、プレドニムスチン、プロカルバジン、プロコダゾール、PX-866、キナゴリド、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラニビズマブ、ラニムスチン、ラゾキサン、レゴラフェニブ、リセドロン酸、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビテカン、サラカチニブ、サルグラモスチム、サトラプラチン、セルメチニブ、シプロイセル−Ｔ、シロリムス、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タミバロテン、タモキシフェン、タンズチニブ、タソネルミン、テセロイキン、テガフール、テラタニブ(telatinib)、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストラクトン、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、チオグアニン、ティピファニブ、チボザニブ、トセラニブ(toceranib)、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラベクテジン、トラスツズマブ、トレオスルファン、トレチノイン、トリアピン、トリロスタン、トリメトレキサート、トリプトレリン、トロホスファミド、ウベニメクス、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、バルリチニブ(varlitinib)、バタラニブ、ベムラフェニブ、ビダラビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ボロシキシマブ、ボリノスタット、ジノスタチン、ゾレドロン酸およびゾルビシン。

一般的に、下記の目的は本発明の化合物と他の抗癌剤との組み合わせ剤で達成できる：
・活性な化合物単独での処置と比べて、腫瘍の増殖を遅らせる、腫瘍の大きさを減少させる、または、腫瘍を完全に除去する活性の改善；
・用いられる化学療法剤を、単剤治療よりも低い投与量で用いる可能性：
・個々の投与と比較して、少ない副作用で、より耐容性の治療の可能性；
・より広範囲の癌および腫瘍疾患の処置の可能性；
・治療に対して、より速い応答速度の達成；
・標準的な治療と比べて、より長い患者の生存時間。

従って、さらなる態様において、本発明は、少なくとも１種の本発明の化合物、および、障害、特に上記障害を処置および／または予防する１種以上のさらなる治療薬を含む医薬組成物に関する。
癌の処置において、本発明の化合物はまた、放射線治療および／または外科的処置と組み合わせて用いられ得る。

さらに、式(Ｉ)の化合物を、そのまま、または、研究や診断における組成物で、または、当技術分野で周知の分析参照標準として利用し得る。

本発明の化合物が医薬としてヒトおよび他の哺乳動物に投与されるとき、それらは、それ自体で、または、１種以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた、例えば０.１％〜９９.５％(より好ましくは０.５％〜９０％)の有効成分を含む医薬組成物として与えられる。

従って、他の局面において、本発明は、慣用的には１種以上の不活性な非毒性の薬学的に好適な賦形剤と共に、少なくとも１種の本発明の化合物を含む医薬組成物、および、障害、特に上記障害の処置および／または予防におけるその使用に関する。

本発明の化合物は、全身におよび／または局所に作用し得る。この目的のために、本発明の化合物は、適当な方法で、例えば経口、非経腸、肺、鼻、舌、舌下、頬側、直腸、皮膚、経皮、結膜、耳または局所経路で、あるいは、インプラントまたはステントとして投与できる。
これらの適用経路において、本発明の化合物は、適当な適用形態で投与できる。

経口投与に適当なものは、従来技術に従って機能し、本発明の化合物を迅速に送達する適用形態および／または修飾された方法で送達する適用形態であって、結晶形、非晶形および／または溶解された形態の本発明の化合物を含む適用形態であり、例えば、錠剤（コートされていないか、あるいは、例えば腸溶性コーティング、または、不溶性であるかまたは遅れて溶解し、本発明の化合物の放出を制御するコーティングを有するコートされた錠剤）、口内で素早く崩壊する錠剤、または、フィルム／ウェハ、フィルム／凍結乾燥物、カプセル剤（例えば硬または軟ゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット、散剤、エマルジョン、懸濁液、エアロゾルまたは溶液である。

非経腸適用は、吸収段階を避けて（静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内）、または、吸収を含めて（筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。有用な非経腸適用形態は、溶液、懸濁液、エマルジョン、凍結乾燥物および滅菌処理した粉末の形態の、注射液および注入製剤を含む。

他の適用経路に適当な形態は、例えば、吸入用医薬形態（例えば粉末吸入器、ネブライザー）、点鼻薬、溶液またはスプレー、舌、舌下または頬側投与用錠剤またはカプセル剤（例えばトローチ、ロゼンジ）、坐剤、耳用および眼用製剤（例えば滴剤、軟膏）、膣用カプセル剤、水性懸濁液（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、ミルク、ペースト、フォーム、細粉、経皮治療系（例えばパッチ）、インプラントおよびステントを含む。

好ましい態様において、上で定義した式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を、経口投与に適当な形態で提供する。他の好ましい態様において、上で定義した式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を、静脈内投与に適当な形態で提供する。

本発明の化合物は、それ自身既知の方法で、不活性で非毒性の薬学的に好適な賦形剤と混合することによって、列挙された適用形態に変換できる。これらの賦形剤は、とりわけ、担体（例えば微晶性セルロース、乳糖、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール）、乳化剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム）、界面活性剤（例えばポリオキシソルビタンオレート）、分散剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸）、着色料（例えば無機顔料、例えば酸化鉄）、および味覚および臭気マスキング剤を含む。

本発明の化合物の好ましい投与量は、患者に耐容性であって重篤な副作用を起こさない最大量である。例としては、本発明の化合物は、非経腸で、約０.００１mg/kg〜約１mg/kg体重、好ましくは約０.０１mg/kg〜約０.５mg/kg体重で投与され得る。経口投与では、例示的な投与量範囲は、約０.０１〜１００mg/kg体重、好ましくは約０.０１〜２０mg/kg体重、より好ましくは約０.１〜１０mg/kg体重である。上記の値の範囲の間に入る値もまた、本発明の一部であることが意図される。

にもかかわらず、特定の患者、組成物および投与方法において、患者に毒性でなく、望ましい治療応答を達成するのに有効な量の有効成分を得るように、本発明の医薬組成物中の有効成分投与の実際の投与量と時間経過は変化し得る。従って、適切な場合は、特に患者の年齢、性別、体重、食習慣および全身の健康状態、特定の化合物のバイオアベイラビリティーおよび薬力学的性質、および、投与方法および投与経路、投与を行う時間または時間間隔、選択される投与レジメ、個々の患者の有効成分に対する応答、関与する特定の疾患、疾患の程度または合併症もしくは重症度、同時処置の種類(すなわち本発明の化合物と他の共投与される治療薬の相互作用)、および他の関連の状況の関数として、上記の量から逸脱することも必要であり得る。

従って、幾つかの場合では上記の最少量より少ない量で十分に管理し得るが、他の場合では記載された上限を超えなければならない。処置は、化合物の最適な投与量より少ない投与量で開始することができる。その後、その状況下で最適な効果に至るまで、投与量を少しずつ増加させ得る。利便性のために、総１日投与量を分割して、各１回分ずつを１日の間で分けて投与してもよい。

下記の例示的態様は、本発明を説明する。本発明は、実施例に限定されない。
下記の試験および実施例におけるパーセンテージは、特に断りの無い限り、重量パーセントであり；重量部である。液体／液体溶液について記載された溶媒比、希釈比、および濃度は、それぞれ容積に基づく。

ＬＣ−ＭＳおよびＧＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
装置＝Waters UPLC Acquity と Micromass Quattro Premier；カラム＝Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50mm x 1mm；溶離液Ａ＝１Ｌの水＋０.５mlの５０％ギ酸水溶液, 溶離液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.５mlの５０％ギ酸水溶液；濃度勾配＝０.０分９０％Ａ→０.１分９０％Ａ→１.５分１０％Ａ→２.２分１０％Ａ；温度＝５０℃；流速＝０.３３ml/分；ＵＶ検出＝２１０nm.

方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
装置＝Waters Acquity SQD UPLC System；カラム＝Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 50mm x 1mm；溶離液Ａ＝１Ｌの水＋０.２５mlの９９％ギ酸, 溶離液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.２５mlの９９％ギ酸；濃度勾配＝０.０分９０％Ａ→１.２分５％Ａ→２.０分５％Ａ；オーブン＝５０℃；流速＝０.４０ml/分；ＵＶ検出＝２１０〜４００nm.

方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
装置＝Micromass Quattro Micro と HPLC Agilent 1100シリーズ；カラム＝YMC-Triart C18 3μ, 50mm x 3mm；溶離液Ａ＝１Ｌの水＋０.０１mol炭酸アンモニウム, 溶離液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル；濃度勾配＝０.０分１００％Ａ→２.７５分５％Ａ→４.５分５％Ａ；オーブン＝４０℃；流速＝１.２５ml/分；ＵＶ検出＝２１０nm.

方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
装置＝Waters Acquity SQD UPLC System；カラム＝Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ, 30mm x 2mm；溶離液Ａ＝１Ｌの水＋０.２５mlの９９％ギ酸, 溶離液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.２５mlの９９％ギ酸；濃度勾配＝０.０分９０％Ａ→１.２分５％Ａ→２.０分５％Ａ；オーブン＝５０℃；流速＝０.６０ml/分；ＵＶ検出＝２０８〜４００nm.

方法５（ＬＣ−ＭＳ）：
装置＝Micromass Quattro Premier と Waters UPLC Acquity；カラム＝Thermo Hypersil GOLD 1.9μ, 50mm x 1mm；溶離液Ａ＝１Ｌの水＋０.５mlの５０％ギ酸水溶液, 溶離液Ｂ＝１Ｌのアセトニトリル＋０.５mlの５０％ギ酸水溶液；濃度勾配＝０.０分９７％Ａ→０.５分９７％Ａ→３.２分５％Ａ→４.０分５％Ａ；温度＝５０℃；流速＝０.３ml/分；ＵＶ検出＝２１０nm.

方法６（ＬＣ−ＭＳ）：
装置ＭＳ＝Waters ZQ 2000; 装置 HPLC:Agilent 1100, 2カラム切り換え、オートサンプラーHTC PAL;カラム:YMC-ODS-AQ 3.0μm, 50 mm x 4.6 mm；溶離液Ａ：水＋０．１％ギ酸，溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸；勾配：０．０分１００％Ａ→０．２分９５％Ａ→１．８分２５％Ａ→１．９分１０％Ａ→２．０分５％Ａ→３．２分５％Ａ→３．２１分１００％Ａ→３．３５分１００％Ａ；オーブン：４０℃；流速：３．０ml/分；ＵＶ検出：２１０nm．

方法７（ＬＣ−ＭＳ）：
装置ＭＳ＝Waters SQD；装置ＨＰＬＣ＝Waters UPLC；カラム＝Zorbax SB-Aq (Agilent), 50mm x 2.1mm, 1.8μm；溶離液Ａ＝水＋０.０２５％ギ酸, 溶離液Ｂ＝アセトニトリル＋０.０２５％ギ酸；濃度勾配＝０.０分９８％Ａ→０.９分２５％Ａ→１.０分５％Ａ→１.４分５％Ａ→１.４１分９８％Ａ→１.５分９８％Ａ；オーブン＝４０℃；流速＝０.６０ml/分；ＵＶ検出＝ＤＡＤ, ２１０nm.

方法８（ＧＣ−ＭＳ）：
装置：Micromass GCT, GC6890；カラム：Restek RTX-35, 15 m x 200 μm x 0.33 μm；ヘリウムによる一定の流速：０．８８ｍＬ／分；オーブン：７０℃；注入口：２５０℃；勾配：７０℃，３０℃／分 →３１０℃（３分間維持）。

一般的な後処理および精製方法（下記の表Ｉ−Ｖを参照）：
方法Ｐ１：
沈殿した固体を濾去し、メタノール／水混合物で洗浄して、真空で乾燥させた。
方法Ｐ２：
分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.2% トリフルオロ酢酸水溶液）。
方法Ｐ３：
分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)。

方法Ｐ４：
１Ｍ塩酸を、回収したＨＰＬＣ−分画物に添加して、得られる溶液を、乾燥状態まで蒸発させた。

方法Ｐ５：
沈殿した固体を濾去して、この濾液をＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。

方法Ｐ６：
分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（×Bridge C18, 勾配、アセトニトリル/水+0.05% アンモニア水溶液)。

方法Ｐ７：
分取ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳ：装置ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ；装置ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ；カラム＝Waters X-Bridge C18, 18mm x 50mm, 5μm；溶離液Ａ：水＋０．０５％トリエチルアミン，溶離液Ｂ：アセトニトリルまたはメタノール＋０．０５％トリエチルアミン，濃度勾配溶出；流速：４０ml/分；ＵＶ検出＝ＤＡＤ, ２１０〜４００nm.

方法Ｐ８：
分取ＲＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳ：装置ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ；装置ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ；カラム：Pheno-menex Luna 5μ C18(2) 100A, AXIA Tech., 50mm x 21.2mm；溶離液Ａ＝水＋０.０５％ギ酸, 溶離液Ｂ＝アセトニトリルまたはメタノール＋０.０５％ギ酸；濃度勾配溶出；流速：４０ml/分；ＵＶ検出＝ＤＡＤ, ２１０〜４００nm.

出発物質および中間体：
中間体１Ａ
２−メトキシ−４−メチルアニリン
ＴＨＦ(１.３２Ｌ)中の５−メチル−２−ニトロアニソール(２６５ｇ, １.５８mol)および１０％Ｐｄ／Ｃ(３９.７５ｇ)の混合物を、室温で、１atmの水素下で、終夜撹拌した。珪藻土で濾過し、蒸発させ、２１６ｇの粗生成物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。
LC-MS (方法３)：R_t = 2.39分; MS (ESIpos)：m/z = 138 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 6.45-6.63 (m, 3H), 4.46 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.16 (s, 3H) ppm.

中間体２Ａ
２−メトキシ−４−メチルベンゼンチオール

方法１：
水(２５ml)中の亜硝酸ナトリウム(７ｇ, １０１.４mmol)の溶液を、濃塩酸(３０ml)および水(８５ml)中の中間体１Ａ(１３.７ｇ, １００mmol)の冷却溶液(０℃〜５℃)に滴加した。０℃で１０分間撹拌した後、酢酸ナトリウム(１５ｇ, １８２.８mmol)を加えた。得られた混合物を、水(１４０ml)中のＯ−エチルジチオ炭酸カリウム(３０ｇ, １８７.１mmol)の熱溶液(７０℃〜８０℃)に滴加し、７０℃から８０℃の間で１時間撹拌し、室温まで冷却した。混合物を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣を、エタノール(３００ml)中１.３Ｍの水酸化カリウム溶液に溶かした。ブドウ糖(８ｇ)を加え、得られた混合物を３時間還流した。次いで、エタノール溶媒を蒸発させ、残渣を水で希釈し、６Ｎ硫酸水溶液で酸性にした。亜鉛粉末(１５ｇ)を注意深く加え、得られた混合物を５０℃で３０分間加熱した。混合物を室温まで冷却し、ジクロロメタンで希釈し、濾過した。濾液をジクロロメタンで２回抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、１４.３ｇの粗生成物を得た。これをさらに精製することなく次の工程に用いた。

方法２：
２.９ＬのＴＨＦに、１.１Ｌの水中の３５５ml(６.６７mol)の濃硫酸の熱い溶液を加えた。５０℃で、２９３ｇ(１.３３mol)の塩化２−メトキシ−４−メチルベンゼンスルホニルを撹拌しながら加えた。次いで、５２１ｇ(７.９７mol)の亜鉛粉末を、少しずつ注意深く加え(発泡する)、５０℃〜５５℃の温度を維持するために、僅かな発熱反応物を水浴中で冷却した。続いて混合物を５５℃で３時間撹拌した。反応の進行を、ＴＬＣ(シリカゲル, 石油エーテル／酢酸エチル９５：５)によってモニターした。反応混合物を１３.６Ｌの水に注ぎ、６.８Ｌのジクロロメタンを加え、混合物を５分間撹拌した。残った亜鉛を傾斜して、相を分離した後、水相を６.８Ｌのジクロロメタンで１回以上抽出した。合わせた有機相を１０％塩水で洗浄し、乾燥し、４０℃で、減圧下で蒸発させ、２３７ｇの粗生成物を得た。この物質をさらに精製することなく次の工程に用いた。分析用サンプルを石油エーテル／酢酸エチル(９７：３)を溶離液として、シリカゲルのクロマトグラフィーによって得た。
LC-MS (方法１)：R_t = 1.21分; MS (ESIneg)：m/z = 153 (M-H)^-
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.17 (d, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.66 (d, 1H), 4.63 (br. s, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.26 (s, 3H) ppm.

中間体３Ａ
１−[(２,２−ジエトキシエチル)スルファニル]−２−メトキシ−４−メチルベンゼン
２３７ｇの中間体２Ａの粗製の物質、２８７ｇ(１.４６mol)のブロモアセトアルデヒド−ジエチルアセタール、および、８６２ｇ(２.６５mol)の炭酸セシウムを、２ＬのＤＭＦに懸濁した。反応温度を、最初に４０℃まで上昇させ、環境温度で終夜撹拌を続けた。反応混合物を１０Ｌの水と２.７Ｌの酢酸エチルの層間に分配した。水相をさらなる２.７Ｌの酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を１０％塩水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。得られた油性残渣を、石油エーテル／酢酸エチル(９５：５)を溶離液として、シリカゲルのクロマトグラフィーによって精製した。
収量：２３６ｇの油状物(理論値の６６％)
GC-MS (方法８)：R_t = 6.03分; MS (EIpos)：m/z = 270 (M)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.16 (d, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.73 (d, 1H), 4.55 (t, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.52-3.64 (m, 2H), 3.39-3.51 (m, 2H), 2.96 (d, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.09 (t, 6H) ppm.

中間体４Ａ
７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン

１３ｇのポリリン酸および１５０mlのクロロベンゼンの混合物に、還流しながら、５.２ｇ(１９.２mmol)の中間体３Ａの溶液を滴下し、終夜還流を続けた。冷却後、有機層を傾斜し、残渣とフラスコをＤＣＭで２回濯いだ。合わせた有機相を減圧で蒸発させた。残渣(３.７６ｇ)について、イソヘキサン／０〜１０％酢酸エチルを溶離液として、シリカゲルのクロマトグラフィーを行った。
収量：１.６９ｇの油状物(理論値の４９％)
GC-MS (方法8)：R_t = 5.20 分; MS (EIpos)：m/z = 178 (M)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.68 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.43 (s, 3H) ppm.

中間体５Ａ
(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)ボロン酸
アルゴン雰囲気下、２６.７ｇ(１５０mmol)の中間体４Ａを２７０mlのＴＨＦに溶解し、−７０℃まで冷却した。−７０℃から−６５℃の間で、６６ml(１６５mmol)のヘキサン中２.５Ｎのｎ−ブチルリチウム溶液を、２０分以内で滴下し、その結果、白色の沈殿物が形成した。−７０℃で１時間撹拌した後、４１.５ml(１８０mmol)のホウ酸トリイソプロピルを、この温度で、１０分以内で加えた(その結果、濃厚懸濁液を得た)。−７０℃で１時間撹拌を続けた後、反応混合物を室温で終夜温めた。次いで、４００mlの飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、層を分離し、水層をＴＨＦでもう一度抽出した。合わせた有機相を減圧下で蒸発させた。このようにして得られた残渣に、２００mlの水および８６mlの２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えた。溶液をＤＣＭで２回洗浄し、３５mlの３Ｍ硫酸で酸性にして、得られた懸濁液を１時間激しく撹拌した。沈殿物を吸引濾過し、４５℃で、真空で終夜乾燥した。
収量：２８.２５ｇの無色の固体（ＬＣ−ＭＳによる純度９４％, 理論値の８０％)
LC-MS (方法２)：R_t = 0.87分; MS (ESIpos)：m/z = 223 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.17 (d, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.66 (d, 1H), 4.63 (br. s, 1H), 3.80 (s, 3H), 2.26 (s, 3H) ppm.

中間体６Ａ
２−(７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル)−６−メチル−１,３,６,２−ジオキサアザボロカン−４,８−ジオン

６.３ｇ(２８.４mmol)の中間体５Ａおよび４.２ｇ(２８.４mmol)の２,２'−(メチルイミノ)ジ酢酸を、４５mlのＤＭＳＯおよび４００mlのトルエンの混合物に溶解し、ディーン・スターク・トラップを用いて、１６時間還流した。蒸発後、残渣を酢酸エチルに溶かし、水で３回および塩水で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、約２００mlの体積まで蒸発させた。白色固体が沈殿し、これを濾過し、酢酸エチルで洗浄し、真空で乾燥し、第１収集物(５.５２ｇ)の表題化合物を得た。母液を蒸発させ、シリカゲルの層で、シクロヘキサン／０〜１００％酢酸エチルを溶離液として用いてフラッシュクロマトグラフィーを行った後、第２収集物(３.３２ｇ)を得た。
収量：８.８４ｇ(ＬＣ−ＭＳによる全純度９２.５％, 理論値の８７％)
LC-MS(方法２)：R_t = 0.93分; MS (ESIpos)：m/z = 334 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.42 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.40 (d, 2H), 4.17 (d, 2H), 3.92 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.42 (s, 3H) ppm.

中間体７Ａ
２−（５−クロロ−７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−６−メチル−１，３，６，２−ジオキサアザボロカン−４，８−ジオン

表題化合物を、中間体３Ａ、４Ａ、５Ａおよび６Ａについて記載した方法に従って４−クロロ−２−メトキシベンゼンチオール[J.O. Jilek et al., Collection of Czechoslovak Chemical Communications, Vol. 43, 1978, p. 1747-1759]から製造した。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.96 分; MS (ESIpos)：m/z = 354 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.58 (d, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.42 (d, 2H), 4.19 (d, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.65 (s, 3H) ppm.

中間体８Ａ
４−アミノピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−カルバルデヒド

塩化ホスホリル（１０４ｍｌ）を、０℃で、ＤＭＦ（５００ｍｌ）中のピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−４−アミン（３０ｇ，２４．５ｍｍｏｌ；国際特許出願番号ＷＯ２００７／０６４９３１に記述したとおりの製造、中間体Ａ）溶液に、滴加した。得られる混合物を、６０℃で、２５時間攪拌して、次いで氷水混合物に注ぎ、さらに１６時間室温で攪拌した。該混合物に、３．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、ｐＨ８−１０に調整した。該沈殿固体を、濾去して、水により洗浄して、表題化合物［２８．８ｇ（理論値の７３％）］を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.32 分;MS (ESIpos)：m/z = 163 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ=10.26 (s, 1H), 8.26 (br. s, 1H), 8.21 (br. s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.02 (d, 1H) ppm.

中間体９Ａ
４−アミノ−５−ブロモピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−カルバルデヒド

ＴＨＦ(800 ml)中の中間体８Ａ(28.16 g, 174 mmol)の懸濁液を、１,３-ジブロモ-５,５-ジメチルヒダントイン(29.8 g, 104 mmol)で処理して、室温で７時間攪拌した。得られる固体を、濾去し、メタノールで洗浄して、表題化合物 [32.61 g (理論値の74%)]を得る。

LC-MS(方法5)：R_t = 1.40 分; MS (ESIpos)：m/z = 240/242 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 10.22 (s, 1H), 8.59 (br. s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.17 (br. s, 1H) ppm.

中間体１０Ａ
４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−カルバルデヒド

アルゴン下で、ＴＨＦ/水(10:1, 250 ml)中の中間体９Ａ(5.00 g, 20.7 mmol)、中間体５Ａ(8.29 g, 24.9 mmol)およびフッ化セシウム(15.7 g, 103.7 mmol)の懸濁液を、脱気して、４-(ジ-ｔｅｒｔ-ブチルホスフィノ)-Ｎ,Ｎ-ジメチルアニリン-ジクロロパラジウム(2:1; 441 mg, 0.622 mmol)を添加した。該混合物を、再度脱気して、５０℃で１６時間攪拌した。得られる固体を、濾去し、水/メタノール(１:１)により洗浄して、表題化合物[5.00 g (理論値の71%)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 1.07 分; MS (ESIpos)：m/z = 339 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 10.35 (s, 1H), 8.46 (br. s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.53 (br. s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

中間体１１Ａ
［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メタノール

エタノール(20 ml)中の中間体１０Ａ(500 mg, 1.48 mmol)の懸濁液を、水素化ホウ素ナトリウム(391 mg, 10.34 mmol)で処理した。該混合物を、室温で２０時間攪拌して、次いで水により停止させて、１Ｍ塩酸により酸性化した。２０分間攪拌の後に、該混合物を濾過して、水および酢酸エチルを添加し、該相を分離した。該水相を、塩化ナトリウムで飽和させて、３回酢酸エチルで抽出した。この合わせた有機相を、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過し、蒸発させて、表題化合物[316 mg (理論値の63%)]を得た。
LC-MS(方法2)：R_t = 0.91 分; MS (ESIpos)：m/z = 341 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.97 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.26 (t, 1H), 4.76 (d, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.44 (s, 3H) ppm.

中間体１２Ａ
７−（クロロメチル）−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミンハイドロクロライド

トルエン(150 ml)中の中間体１１Ａ(3.77 g, 11.07 mmol)溶液を、塩化チオニル(8.1 ml, 110.7 mmol) で処理した。該混合物を、室温で２０時間攪拌して、次いで蒸発させた。該残渣を、トルエンと共に共蒸発を繰り返して(３回)、該粗生成物（4.30 g）を得て、これをさらなる精製をせずに次のステップに使用した。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 8.19 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

中間体１３Ａ
７−［（Ｅ／Ｚ）−（ヒドロキシイミノ）メチル］−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン

エタノール/水の混合物(3:1, 3 ml)中の中間体１０Ａ(250 mg, 0.74 mmol)、ヒドロキシルアミンハイドロクロライド(78 mg, 1.12 mmol)および酢酸ナトリウム(182 mg, 2.22 mmol)の溶液を、室温で終夜攪拌した。ヒドロキシルアミンハイドロクロライド(50 mg, 0.72 mmol)および酢酸ナトリウム(90 mg, 1.10 mmol)のさらなる部を、添加して、攪拌をもう終夜継続した。その後、このエタノール溶媒の主要部を、減圧下でエバポレートして、水を添加して、該沈殿物を濾去した。該固体を、４５℃で真空下に乾燥させて、表題化合物[237 mg (理論値の89％)]を得た。

LC-MS(方法4)：R_t = 0.97 分; MS (ESIpos)：m/z = 354 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 11.93 (s, 0.3H), 11.49 (s, 0.7H), 8.50 (s, 0.8H), 7.91-8.17 (m, 1.4H), 7.59 (s, 0.4H), 7.39 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.06 (s, 0.8H), 6.83 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.44 (s, 3H) ppm [アイソマーのE/Z混合物].

中間体１４Ａ
７−（アミノメチル）−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン

亜鉛粉末(390 mg, 6 mmol)を、メタノール(30 ml)中の中間体１３Ａ(78 mg, 0.22 mmol)溶液に添加した。次いで、濃塩酸(0.3 ml)およびメタノール(2 ml)の混合物を、室温で攪拌下に滴加して、その後メタノール(2 ml)中の濃塩酸(0.5 ml)の一部をｐＨ０−１に達するまで滴加した。該混合物を、次に室温で１時間攪拌した。この後に、該沈殿物を、濾去し、廃棄した。濾液を、真空で少量に濃縮して、分取ＲＰ-ＨＰＬＣにより精製して(Reprosil C18, 勾配、5-95% アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)、表題化合物［２０．５ｍｇ（理論値の２３％）］を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.72 分; MS (ESIneg)：m/z = 338 (M-H)^-
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 8.26 (br. s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.11 (br. s, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.44 (s, 3H) ppm.

中間体１５Ａ
４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−カルボン酸

ＴＨＦ/水(10:1, 216.5 ml)中の中間体１０Ａ(4.1 g, 7.27 mmol)溶液を、ＴＨＦ(18.2 ml, 36.3 mmol)中の２Ｍ２−メチル−２−ブテン溶液およびリン酸二水素ナトリウム(4.01 g, 29.08 mmol)で処理した。室温で５分間攪拌の後に、塩化ナトリウム(2.63 g, 29.08 mmol)を添加して、得られる混合物を室温で終夜攪拌した。水を用いる希釈の後に、該水相を、酢酸エチルで３回抽出した。この合わせた有機相を、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で抽出し、次いで破棄した。該水相を、１Ｍ塩酸を用いてｐＨ３に調整して、酢酸エチルで数回抽出した。合わせた有機層を、硫酸鉄(ＩＩ)飽和水溶液を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、蒸発させた。分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Sunfire C18, 70% メタノール/30% 0.2% aq. TFA)による残渣の精製により、表題化合物[1.58 g (理論値の58％)]を得た。

LC-MS (方法 5)：R_t = 2.11 分; MS (ESIpos)：m/z = 355 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ=12.94 (br. s, 1H), 8.58-7.88 (m, 3H), 7.41 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.44 (s, 3H) ppm.

中間体１６Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］メチル｝ピペラジン−１−カルボキシレート

ＴＨＦ(250 ml)中のｔｅｒｔ-ブチル４−［（４−アミノ−５−ブロモピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート(8 g, 19.45 mmol; 国際特許出願WO 2007/064931に記述された製造, 中間体Ｉ/ステップ2)溶液を、アルゴン下で脱気した。水(25 ml)中の中間体6A(8.42 g, 25.29 mmol)およびフッ素化セシウム溶液(14.77 g, 97.2 mmol)を添加して、該混合物を、再度脱気した。次いで、４-(ジ-ｔｅｒｔ-ブチルホスフィノ)-Ｎ,Ｎ-ジメチルアニリン-ジクロロ-パラジウム(2:1; 0.41 g, 0.58 mmol)を添加して、該混合物をアルゴン下に５０℃で１６時間攪拌した。得られる溶液を、塩水で洗浄して、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過して、約50mlの容量まで濃縮した。ＴＢＭＥ(100 ml)を添加して、得られる沈殿物を、濾去し、ＴＢＭＥで洗浄して、真空で乾燥させて、表題化合物[8.2 g (理論値の80％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.91 分; MS (ESIpos)：m/z = 509 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.97 (s, 1H), 7.22 (m, 2H), 6.76 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.75 (br. s, 2H), 3.93-4.06 (m, 5H), 3.38-3.55 (m, 4H), 2.57-2.52 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 1.45 (s, 9H) ppm.

中間体１７Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝−ピペラジン−１−カルボキシレート

脱気した１,２-ジメトキシエタン/水(3:1, 4 ml)中のｔｅｒｔ-ブチル４−［（４−アミノ−５−ブロモピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート(500 mg, 0.97 mmol;国際特許出願WO 2007/064931に記述された製造, 中間体Ｉ／ステップ２）、（７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ボロン酸(202 mg, 0.97 mmol;米国特許番号第6,025,382号に記述された製造)、炭酸水素ナトリウム(327 mg, 3.89 mmol)および［１，１’−ビス（ジフェニル−ホスフィノ）−フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）−ジクロロメタン複合体［ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）ｘＤＣＭ］(40 mg, 0.05 mmol)の混合物を、アルゴン下に８０℃で終夜攪拌した。この後に、酢酸エチルを添加して、該混合物を、炭酸ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。該有機相を、乾燥させて、減圧下で蒸発させた。該残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して(酢酸エチル/シクロヘキサン 1:2)、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配メタノール/0.2% ギ酸水溶液)に供して、表題化合物[68 mg (理論値の14％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.89 分; MS (ESIpos)：m/z = 495 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.98 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.37 (t, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.87 (s, 2H), 3.30 (s, 4H), 2.42 (br. t, 4H), 1.38 (s, 9H) ppm.

中間体１８Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル［（３Ｓ）−１−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−７−イル］メチル｝−３−メチルピロリジン−３−イル］カルバメート

メタノール(8 ml)中の中間体10A(250 mg, 0.68 mmol)溶液を、酢酸[78 μl (1.36 mmol)]、ｔｅｒｔ-ブチル [(3S)-3-メチルピロリジン-3-イル]-カルバメート[204 mg (1.02 mmol)][Yoshida et al., Chem. Pharm. Bull. 1996, 44 (7), 1376-1386]およびシアノホウ化水素ナトリウム[214 mg (3.40 mmol)]で処理した。得られる混合物を、６０℃で２６時間攪拌した。この後に、該混合物を濾過し、該濾液を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液)により精製して、表題化合物[140 mg (理論値の36％)]を得る。
LC-MS(方法2)：R_t = 0.90 分; MS (ESIpos)：m/z = 523 (M+H)⁺.

中間体１９Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル［（３Ｓ）−１−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−７−イル］カルボニル｝−３−メチルピロリジン−３−イル］カルバメート

ＤＭＦ(1.8 ml)中の中間体１５Ａ(100 mg, 89%純度, 0.25 mmol)溶液を、ＴＢＴＵ[89 mg (0.28 mmol)]およびＤＩＰＥＡ[81 mg (129 mmol)]で処理した。室温で１５分間の攪拌の後、ｔｅｒｔ-ブチル［（３Ｓ）−３−メチルピロリジン−３−イル］カルバメート[55 mg (0.28 mmol)][Yoshida et al., Chem. Pharm. Bull. 1996, 44 (7), 1376-1386]を添加して、攪拌を室温で１６時間継続した。この後に、該反応混合物を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液)により直接精製した。分画物を含有する生成物を、炭酸水素ナトリウムを用いてｐＨ８に調整して、酢酸エチルで抽出した。該有機層を、塩水で洗浄して、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過して、蒸発させて、表題化合物[109 mg (理論値の81％)]を得る。
LC-MS(方法2)：R_t = 1.10 分; MS (ESIpos)：m/z = 537 (M+H)⁺.

中間体２０Ａ
ｔｅｒｔ−ブチル［２−（｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−７−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］カルバメート

メタノール(0.5 ml)中の中間体１４Ａ(15 mg, 36 μmol)溶液を、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)グリシン(8 mg, 44 μmol)、ＨＡＴＵ(18 mg, 47 μmol)およびＤＩＰＥＡ(13 μl, 73 μmol)で処理した。得られる混合物を、室温で終夜攪拌した。減圧下で濃縮後に、該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配 10-95% アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)により精製して、表題化合物[7.1 mg (理論値の39％)]を得る。

LC-MS (方法 5)：R_t = 2.19 分; MS (ESIpos)：m/z = 497 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 8.29 (t, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.00 (t, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.48-4.67 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.57 (d, 2H), 2.44 (s, 3H), 1.37 (s, 9H) ppm.

製造実施例：
実施例１
５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−（ピペラジン−１−イルメチル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−４−アミントリハイドロクロライド水和物

中間体１６Ａ(2 g, 3.93 mmol)を、１,４-ジオキサン(60 ml)中の４Ｍ塩化水素溶液において、室温で３日間攪拌した。該沈殿物を、濾去し、ＴＢＭＥで３回洗浄して、真空で乾燥させた。この物質(2.0 g)を、ＴＢＭＥ(80 ml)に懸濁させて、還流下で１５分間攪拌した。該固体を、再度濾去し、ＴＢＭＥで３回洗浄し、真空において４５℃で乾燥させて、表題化合物[1.95 g (理論値の92％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.69 分; MS (ESIpos)：m/z = 409 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ= 9.84 (br. s, 2H), 8.71-9.04 (m, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.75 (br. s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.43 (br. m, 8H), 2.45 (s, 3H) ppm.

Ｃ_２１Ｈ_２４Ｎ_６ＯＳｘ３ＨＣｌｘＨ_２Ｏについての元素分析：
計算値：Ｃ４７．１；Ｈ５．５；Ｎ１５．７；Ｃｌ１９．９
実測値：Ｃ４６．９；Ｈ５．４；Ｎ１５．６；Ｃｌ２０．１

実施例２
５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−（ピペラジン−１−イルメチル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−４−アミン

水（10 ml）およびエタノール（5 ml）中の実施例１(200 mg, 0.373 mmol)の溶液を、重炭酸ナトリウム(104 mg, 1.24 mmol)で処理した。３日間攪拌の後に、形成した沈殿物を、濾去して、水/エタノール(2:1)により２回洗浄し、真空下に４５℃で乾燥させて、表題化合物[63 mg (理論値の41％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.69 分; MS (ESIpos)：m/z = 409 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.97 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.80 (s, 2H), 2.66 (br. s, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.29-2.41 (m, 4H) ppm.

実施例３
５−（７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−（ピペラジン−１−イルメチル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン

１，４−ジオキサン(2 ml)中の４Ｍ塩化水素溶液において中間体１７Ａ(56 mg, 0.11 mmol)を、室温で終夜攪拌した。該混合物を、次いで乾燥するまで蒸発させて、該残渣を、酢酸エチル中で懸濁して、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いて洗浄した。該有機層を、乾燥させて、蒸発させた。該残渣を、ＤＣＭ／ＴＢＭＥから再結晶化して、表題化合物[42 mg (理論値の94％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.69 分; MS (ESIpos)：m/z = 395 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.97 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.37 (t, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.76 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.82 (s, 2H), 2.65-2.75 (m, 4H), 2.38-2.45 (m, 4H) ppm.

実施例４
５−（５−クロロ−７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−（ピペラジン−１−イルメチル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−４−アミントリハイドロクロライド

ＴＨＦ/水(10:1, 2.2 ml)中のｔｅｒｔ-ブチル４−［（４−アミノ−５−ブロモピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル）メチル］ピペラジン−１−カルボキシレート(48.5 mg, 118 μmol;国際特許出願WO 2007/064931に記述された製造, 中間体Ｉ/ステップ２)、中間体７Ａ(50 mg, 141 μmol)およびフッ素化セシウム(90 mg, 589 μmol)の溶液を、アルゴン下で脱気して、４-(ジ-ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンジクロロパラジウム(2:1; 2.5 mg, 4 μmol)を添加した。該混合物を、再度脱気して、アルゴン下に５０℃で終夜攪拌した。この後に、該有機層を分離して、アセトニトリルで希釈して、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液)により精製した。Ｂｏｃ保護した中間体化合物ｔｅｒｔ-ブチル４−｛［４−アミノ−５−（５−クロロ−７−メトキシ−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］メチル｝−ピペラジン-１-カルボキシレートを含有する分画物を合わせて、１Ｍ塩酸(1 ml)を用いて処理し、次いで乾燥するまで蒸発させて、表題化合物[39 mg (理論値の61％)]を得た。

LC-MS (方法 4)：R_t = 0.68 分; MS (ESIpos)：m/z = 429 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 9.41 (br. s, 2H), 8.15 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 4.69 (br. s, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.39 (br. s, 8H) ppm.

実施例５
７−｛［（３Ｓ）−３−アミノ−３−メチルピロリジン−１−イル］メチル｝−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミントリハイドロクロライド

１,４-ジオキサン(2.5 ml)中の中間体１８Ａ(140 mg, 0.25 mmol)溶液を、室温で３日間、１,４-ジオキサン(60 ml)中の４Ｍ塩化水素溶液で処理した。この後に、該反応混合物を、乾燥するまで蒸発させて、該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Repro-sil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液) により精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、次いで表題化合物[107 mg (理論値の82％)]を得る。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.67 分; MS (ESIpos)：m/z = 423 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄)：δ= 8.23 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.54-3.96 (m, 5H), 2.31-2.58 (m, 5H), 1.65 (s, 3H) ppm.

実施例６
（３Ｒ）−３−（｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝アミノ）ピロリジン−２−オンジハイドロクロライド

メタノール(5 ml)中の中間体１０Ａ(200 mg, 591 μmol)の懸濁液に、酢酸(68 μl, 1.18 mmol)、（Ｒ）−３−アミノピロリジン−２−オン(89 mg, 887 μmol)およびシアノホウ化水素ナトリウム(185 mg, 2.96 mmol)を添加した。該混合物を、６０℃で２０時間攪拌して、次いで分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により直接精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、次いで蒸発させて、表題化合物[228 mg (理論値の78％)]を得る。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.73 分; MS (ESIpos)：m/z = 423 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ= 9.93-10.06 (br. s, 1H), 9.70-9.83 (br. s, 1H), 8.40-8.80 (br. s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.56-7.24 (br. s, 1H), 4.79 (d, 1H), 4.60 (d, 1H), 4.00-4.10 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.17-3.34 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.09-2.22 (m, 1H) ppm.

実施例７
ｒａｃ−４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝ピペラジン−２−カルボキサミドトリハイドロクロライド

メタノール(4 ml)中の中間体１０Ａ(100 mg, 296 μmol)の懸濁液に、酢酸(34 μl, 591 μmol)、ｒａｃ−ピペラジン−２−カルボキサミド(57 mg, 443 μmol)およびシアノホウ化水素ナトリウム(93 mg, 1.48 mmol)を添加した。該混合物を、６０℃で２０時間、攪拌して、次いで濾過して、蒸発させた。該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、次いで蒸発させて、表題化合物[55 mg (理論値の32％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.75 分; MS (ESIpos)：m/z = 452 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ = 9.49 (br. s, 1H), 8.89 (br. s, 1H), 8.05-8.19 (m, 2H), 7.75 (br. s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.02 (br. s, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.12-4.36 (m, 2H), 3.88-4.09 (m, 5H), 3.30 (m, 1H), 3.17 (br. s, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

実施例８
４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝−ピペラジン−２−オンジハイドロクロライド

メタノール(4 ml)中の中間体１０Ａ(100 mg, 296 μmol)の懸濁液に、酢酸(34 μl, 591 μmol)、ピペラジン−２−オン(44 mg, 443 μmol)およびシアノホウ化水素ナトリウム(93 mg, 1.48 mmol)を添加した。該混合物を、６０℃で２０時間、攪拌して、次いで濾過して、蒸発させた。該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、次いで蒸発させて、表題化合物[41 mg (理論値の26％)]を得た。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.81 分; MS (ESIpos)：m/z = 422 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ=11.08-11.66 (m, 1H), 8.38 (br. s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.76 (br. s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.79 (br. s, 2H), 3.42 (br. s, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

実施例９
７−｛［（３Ｓ）−３−アミノピロリジン−１−イル］メチル｝−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミン

メタノール(4 ml)中の中間体１０Ａ(150 mg, 92%純度, 408 μmol)の懸濁液に、酢酸(47 μl, 816 μmol)、ｔｅｒｔ-ブチル（３Ｓ）−ピロリジン−３−イルカルバメート(114 mg, 612 μmol)およびシアノホウ化水素ナトリウム(128 mg, 2.04 mmol)を添加した。該混合物を、６０℃で２０時間攪拌して、次いで分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液)により直接精製した。蒸発の後に、表題化合物[73 mg (理論値の44％)]を得た(Ｂｏｃ保護基は蒸発中に解裂される)。
LC-MS(方法2)：R_t = 0.63 分; MS (ESIpos)：m/z = 409 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄)：δ= 8.22 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.14-4.25 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.52-3.88 (m, 4H), 2.70 (s, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.23-2.34 (m, 1H) ppm.

実施例１０
５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−（モルホリン−４−イルメチル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］−トリアジン−４−アミン

ＴＨＦ(2 ml)中の中間体１０Ａ(50 mg, 148 μmol)溶液を、モルホリン(64 mg, 0.739 mmol)、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム(156 mg, 739 μmol)および酢酸(17 μl, 296 μmol)で処理した。得られる混合物を、６０℃で１６時間攪拌して、次いでＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により直接精製した。該生成分画物を合わせて、蒸発させて、乾燥させた。該残渣を、メタノールに溶解して、アニオン交換カートリッジを介して濾過した(Stratospheres SPE, PL-HCO₃ MP樹脂)。該カートリッジを、メタノールで溶出し、濾液を蒸発させて、表題化合物[47 mg (理論値の77％)]を得た。

LC-MS (方法 4)：R_t = 0.71 分; MS (ESIpos)：m/z = 410 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.98 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.56 (t, 4H), 2.48-2.42 (m, 7H) ppm.

実施例１１
４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝−３，３−ジメチルピペラジン−２−オン

ＴＨＦ(4.3 ml)中の中間体１０Ａ(100 mg, 0.296 mmol)溶液を、３，３−ジメチル−ピペラジン−２−オン(75 mg, 0.591 mmol)、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム(197 mg, 0.885 mmol)および酢酸(33.8 μl, 0.591 mmol)で処理した。得られる混合物を、６０℃で１６時間攪拌した。次いで、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム(63 mg, 0.296 mmol)の別の一部を添加して、該混合物を、６０℃で１時間再度攪拌した。この後に、該混合物を、酢酸エチルで希釈して、塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄した。該有機相を、蒸発させて、残渣を、ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.2% aq. TFA)に続いてシリカゲル(ジクロロメタン/メタノールの勾配)でのフラッシュクロマトグラフィーに供して、精製し、表題化合物[9.8 mg (理論値の7％)]を得た。

LC-MS (方法 4)：R_t = 0.82 分; MS (ESIpos)：m/z = 451 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄)：δ= 7.88 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.92-2.84 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 1.47 (s, 6H) ppm.

実施例１２
５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−［（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル］ピロール［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミンビス（ホルミエート）

メタノール(1.5 ml)中の実施例１(70 mg, 0.131 mmol)の溶液を、パラホルムアルデヒド(19 mg, 0.653 mmol)で処理して、室温で攪拌した。３０分後に、シアノホウ化水素ナトリウム(15 mg, 0.235 mmol)に続いて酢酸(49 μl, 0.653 mmol)を添加して、得られる混合物を室温で終夜攪拌した。次いで、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム(50 mg, 0.235 mmol)を添加して、室温で攪拌を継続させた。３時間の後に、３７％ホルムアルデヒド水溶液(49 μl, 0.653 mmol)を添加して、得られる混合物を６０℃に終夜加熱した。該反応を、次いで水を用いて停止させた。該水相を、ジクロロメタンで抽出して、この合わせた有機層を、水で洗浄して、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、蒸発させた。該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配 10-95% アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)により精製して、表題化合物[39 mg (理論値の57％)]を得た。

LC-MS (方法 1)：R_t = 0.89 分; MS (ESIpos)：m/z = 423 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ＝ 8.18 (s, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.21 (s, 3H) ppm.

実施例１３
７−［（４−エチルピペラジン−１−イル）メチル］−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロール［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミンギ酸塩

メタノール(1.5 ml)中の実施例１(70 mg, 0.131 mmol)の溶液を、アセトアルデヒド(36.5 μl, 0.653 mmol)で処理して、室温で３０分間攪拌した。シアノホウ化水素ナトリウム(14.8 mg, 0.235 mmol)を、酢酸一滴と共に添加して、得られる混合物を室温で終夜攪拌した。次いで、トリアセトキシホウ化水素ナトリウム(49 mg, 0.235 mmol)を添加して、室温で攪拌を継続させた。３時間の後に、さらにトリアセトキシホウ化水素ナトリウム (69 mg, 0.327 mmol)を添加して、該反応混合物を、６０℃で終夜攪拌した。この後に、該混合物を蒸発させて、該残渣を、ＴＨＦ(1.5 ml)に溶解して、アセトアルデヒド(36.5 μl, 0.653 mmol)およびトリアセトキシホウ化水素ナトリウム(138 mg, 0.653 mmol)を用いて再度処理した。得られる混合物を、６０℃で３時間攪拌して、次いで水で希釈して、ジクロロメタンで抽出した。この合わせた有機層を、水で洗浄して、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、蒸発させた。該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、10-95% アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)により精製して、表題化合物[28 mg (理論値の44％)]を得る。

LC-MS (方法 1)：R_t = 0.93 分; MS (ESIpos)：m/z = 437 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ= 8.18 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.37 (q, 2H), 0.98 (t, 3H) ppm.

表Ｉにおける実施例１４−５６の一般的な製造方法：
メタノール中の中間体１０Ａの０．１Ｍ懸濁液を、１．５等量の好適なアミン、５等量のシアノホウ化水素ナトリウムおよび２等量の酢酸で処理した。得られる混合物を、６０℃で３〜２０時間攪拌して、次いで提示した方法に従って精製した。

実施例５３−５６の合成のために、好適なアミン成分を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を有する第一級アミノ基で保護して、これを１，４−ジオキサン（室温で２時間攪拌する）中の４Ｍ塩化水素溶液を用いる処置により精製後に解裂させた。揮発成分の蒸発および真空乾燥により最終生成物を得た。

表Ｉ

表ＩＩにおける実施例５７−９２の一般的な製造方法：
エタノール中の中間体１０Ａの０．１７Ｍ溶液を、１．５等量の好適なアミン、５等量のシアノホウ化水素ナトリウムおよび２等量の酢酸で処理した。得られる混合物を、６０℃で終夜攪拌し、次いで蒸発させた。このようにして得た該粗製生成物を、ＤＭＳＯに溶解して、提示した方法に従って精製した。

表ＩＩ

実施例９３
（４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝ピペラジン−１−イル）（シクロプロピル）メタノン

ＴＨＦ(1 ml)およびジクロロメタン(2 ml)中の実施例１(100 mg, 0.187 mmol)の溶液を、シクロプロピルカルボニルクロリド(33 μl, 0.373 mmol)および炭酸ナトリウム(158 mg, 1.49 mmol)で処理した。得られる混合物を、室温で４８時間攪拌した。次いで、該反応混合物を、濾過して、この固体をＴＨＦで洗浄した。該濾液を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Repro-sil C18, 勾配 10-95% アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)により精製して、表題化合物[9 mg (理論値の9％)]を得た。
LC-MS(方法2)：R_t = 0.83 分; MS (ESIpos)：m/z = 477 (M+H)⁺.

実施例９４
（４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝ピペラジン−１−イル）（シクロブチル）メタノン

ＴＨＦ(1 ml)およびジクロロメタン(2 ml)中の実施例１(100 mg, 187 mmol)溶液を、シクロブチルカルボニルクロリド(44 mg, 0.373 mmol)および炭酸ナトリウム(158 mg, 1.49 mmol)で処理した。得られる混合物を、室温で４８時間攪拌した。次いで、該反応混合物を、濾過して、該固体をＴＨＦで濯いだ。該濾液を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、10-95% アセトニトリル/0.1% ギ酸水溶液)により精製して、表題化合物[52 mg (理論値の57％)]を得る。
LC-MS(方法2)：R_t = 0.79 分; MS (ESIpos)：m/z = 491 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ= 8.20 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.

実施例９５
４−（４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝ピペラジン−１−イル）−４−オキソブタンアミドジハイドロクロライド

ＴＨＦ(2 ml)中の4-アミノ-4-オキソブタン酸(33 mg, 280 μmol)溶液を、ＴＢＴＵ(90 mg, 0.28 mmol)およびＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン(0.154 ml, 0.933 mmol)で処理した。該溶液を、３０分間室温で攪拌した。実施例１(100 mg, 0.187 mmol)からの化合物を、添加して、得られる混合物を室温でさらに２.５時間攪拌した。この後に、該混合物を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により直接精製した。該生成物分画物を、１Ｍ塩酸で希釈して、次いで蒸発させて、表題化合物[71 mg (理論値の64％)]を得る。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.74 分; MS (ESIpos)：m/z = 508 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ= 8.13 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.31 (br. s, 2H), 7.14 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.75 (br. s, 1H), 4.72 (br. s, 2H), 3.96 (s, 5H), 2.45 (s, 4H) ppm.

実施例９６
１−（４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝ピペラジン−１−イル）−２−ヒドロキシエタノン

ステップ１：
ＴＨＦ(1 ml)中の実施例１(200 mg, 0.373 mmol)の溶液を、アセトキシアセチルクロリド(40 μｌ, 0.373 mmol)および炭酸ナトリウム(99 mg, 0.933 mmol)で処理した。得られる混合物を、室温で１６時間攪拌した。アセトキシアセチルクロリドの別の一部(10 μl, 0.093 mmol)を添加して、攪拌を１時間継続させた。次いで、該反応を、メタノールおよび水の添加により停止した。攪拌１分間後に、該混合物を、塩化ナトリウム飽和水溶液で希釈して、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、蒸発させて、中間体化合物２−（４−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］メチル｝−ピペラジン−１−イル）−２−オキソ酢酸エチル[182 mg (90% 純度)]を得て、これをさらなる精製をせずに次のステップに使用した。

ステップ２：
ＴＨＦ(2 ml)中の上記で得られた該粗製中間体化合物の溶液(149 mg, 0.263 mmol, 90%純度)を、１Ｍ水酸化リチウム水溶液(1.46 ml, 1.46 mmol)で処理した。得られる混合物を、室温で１．５時間攪拌して、次いで１Ｍ塩酸を用いて、ｐＨ５-６に酸性化して、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄すると直ぐに、固体が沈殿した。該固体を、濾去して、ジクロロメタン/メタノール(10:1)で洗浄して、表題化合物[48 mg (理論値の34％)]を得る。

LC-MS (方法 4)：R_t = 0.67 分; MS (ESIpos)：m/z = 467 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 7.98 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 4.52 (t, 1H), 4.05 (d, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 2H), 3.46 (br. s, 2H), 3.31 (br. s, 2H), 2.48-2.41 (m, 7H) ppm.

実施例９７
［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］［（３Ｓ）−３−アミノ−３−メチルピロリジン−１−イル］メタノンジハイドロクロライド

中間体１９Ａ(214 mg, 399 μmol)を、１,４-ジオキサン(3 ml)に溶解して、１,４-ジオキサン(5 ml)中の４Ｍ塩化水素溶液中を添加した。該混合物を、室温で５時間攪拌した。蒸発後に、該残渣を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.2% ギ酸水溶液)により精製した。こうして得た生成物を、１Ｍ塩酸／１，４−ジオキサン(１:１)に溶解して、凍結乾燥して、表題化合物[160 mg (理論値の75％)]を得る。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.67 分; MS (ESIpos)：m/z = 437 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄)：δ= 8.16 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.25 (s, 0.5H), 7.22 (s, 0.5H), 6.83 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.67-3.94 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.22-2.32 (m, 2H), 1.60 (br. s, 1.5H), 1.52 (br. s, 1.5H) ppm.

実施例９８
ｒａｃ−４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−Ｎ−（２−オキソピロリジン−３−イル）ピロロ−［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−カルボキサミドハイドロクロライド

ＤＭＦ(2 ml)中の中間体１５Ａ(50 mg, 141 μmol)溶液を、ＴＢＴＵ(50 mg, 155 μmol)およびＤＩＰＥＡ(61 μl, 353 μmol)で処理して、室温で１５分攪拌した。（３Ｒ）−３−アミノピロリジン−２−オン(28 mg, 282 μmol)を添加して、得られる混合物を室温で１６時間攪拌した。この後に、該混合物を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/ 0.2% aq. TFA)により精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、蒸発させて、表題化合物[34 mg (理論値の50％)]を得る。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.85 分; MS (ESIpos)：m/z = 437 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：特にδ= 9.21-9.28 (m, 1H), 8.58 (br. s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.28-7.35 (m, 2H), 6.84 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.23-3.31 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.90-2.05 (m, 1H) ppm.

実施例９９
［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−（ピペラジン−１−イル）メタノンジハイドロクロライド

ＤＭＦ(2 ml)中の中間体１５Ａ(100 mg, 純度 89%, 251 μmol)溶液を、ＴＢＴＵ(87 mg, 276 μmol)およびＤＩＰＥＡ(109 μl, 628 μmol)で処理して、室温で１５分間攪拌した。ｔｅｒｔ-ブチルピペラジン-１-カルボキシレート(94 mg, 502 μmol)を添加して、得られる混合物を、室温で１６時間攪拌した。この後に、該混合物を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により直接精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、蒸発させて、表題化合物[90 mg (理論値の73％)]を得る。

LC-MS(方法2)：R_t = 0.67 分; MS (ESIpos)：m/z = 422 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, メタノール-d₄)：特にδ=8.18 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.60-3.84 (m, 2H), 3.35 (m, 4H) ppm.

表ＩＩＩにおける実施例１００−１０５の一般的な製造方法：
ＤＭＦ中の０．１９Ｍ中間体１５Ａ溶液を、１．１等量のＴＢＴＵおよび２．５等量のＤＩＰＥＡで処理し、室温で１５分間攪拌した。該好適なアミン（１．１−２．０等量）を添加して得られる混合物を、室温で終夜攪拌した。蒸発後に、該粗生成物を、ＤＭＳＯに溶解して、提示した方法に従って精製した。

実施例１０４および１０５の合成のために、好適なアミン成分を、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基を有する第一級アミノ基で保護し、これを１，４−ジオキサン（室温で２時間攪拌する）中の４Ｍ塩化水素溶液による処置により、精製後に解裂した。揮発成分の蒸発および真空乾燥により、最終生成物を得る。

表ＩＩＩ

実施例１０６
Ｎ−｛［４−アミノ−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］−メチル｝グリシンアミドジハイドロクロライド

中間体２０Ａ(4.8 mg, 10 μmol)を、室温で１時間、１，４−ジオキサン(0.5 ml)中の４Ｍ塩化水素溶液中で攪拌した。次いで、該混合物を、蒸発させて、該残渣をアセトンで磨砕した。得られる固体を、濾去して、真空にて乾燥させて、表題化合物[4.2 mg (理論値の93％)]を得る。

LC-MS (方法 5)：R_t = 1.66 分; MS (ESIpos)：m/z = 397 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 9.02 (br. s, 1H), 8.16 (m, 4H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.65 (br. s, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.63 (br. s, 2H), 2.44 (s, 3H) ppm.

実施例１０７
５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）−７−｛［２−（ピロリジン−１−イル）エトキシ］メチル｝ピロロ−［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミンハイドロクロライド

ジクロロメタン(3 ml)中の中間体１２Ａ(30 mg, 0.08 mmol)、2−（ピロリジン−１−イル）エタノール(193 mg, 1.67 mmol)およびＮ，Ｎ，Ｎ−トリメチルヘキサデカン−１−アンモニウム臭化物(6 mg, 0.02 mmol)の懸濁液を、室温で１時間４５分攪拌した。ＤＭＦ(2 ml)を添加して、該溶液を、減圧下に濃縮して、ジクロロメタン溶媒を蒸発させた。残留混合物を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配、アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、乾燥状態まで蒸発させて、表題化合物[5.3 mg (理論値の13％)]を得る。

LC-MS (方法 4)：R_t = 0.69 分; MS (ESIpos)：m/z = 438 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 8.13 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.90-4.06 (m, 5H), 3.34-3.47 (m, 2H), 2.44 (t, 3H), 2.01-2.22 (m, 4H) ppm.

実施例１０８
７−｛［２−（ジメチルアミノ）エトキシ］メチル｝−５−（７−メトキシ−５−メチル−１−ベンゾチオフェン−２−イル）ピロロ−［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−アミンジハイドロクロライド

ＴＨＦ(3 ml)中の中間体１２Ａ(53 mg, 147 μmol)、２−（ジメチルアミノ）エタノール(26 mg, 294 μmol)およびＤＩＰＥＡ(97 μl, 588 μmol)の懸濁液を、室温で２０時間攪拌した。メタノール(2 ml)を添加して、該溶液を、分取ＲＰ-ＨＰＬＣ(Reprosil C18, 勾配アセトニトリル/0.2% aq. TFA)により精製した。該生成物の分画物を合わせて、１Ｍ塩酸で希釈して、乾燥状態まで蒸発させて、表題化合物[30 mg (理論値の41％)]を得る。

LC-MS (方法 4)：R_t = 0.65 分; MS (ESIpos)：m/z = 412 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)：δ= 8.16 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.96 (s, 5H), 3.40-3.53 (m, 2H), 2.45 (s, 3H) ppm.

表ＩＶにおける実施例１０９−１２０の一般的な製造方法：
１，２−ジクロロエタン(0.6 ml)中の中間体１２Ａ(0.1 mmol)溶液を、１０等量の好適なアルコールで処理して、１２０℃で１時間マイクロウェーブオーブン内で照射した。蒸発後に、該粗生成物を、ＤＭＳＯに溶解して、提示した方法に従って精製した。

該アルコール成分が、ｔｅｒｔ-ブトキシカルボニル保護アミノ基を担持する場合には、反応混合物(上記を参照のこと)の蒸発後に得られたこの粗製保護中間体を、１：３のジクロロメタンおよびトリフルオロ酢酸の混合物で処理して、終夜室温で振とうした。該混合物を、次いで再度蒸発させて、該粗生成物を、ＤＭＳＯに溶解させて、提示した方法に従って精製した。

表Ｖにおける実施例１２１−１２３の一般的な製造方法：
１，２−ジクロロエタン(0.6 ml)中の中間体１２Ａ(0.1 mmol)溶液を、１０等量の好適なイミダゾール誘導体で処理して、終夜室温で振とうした。蒸発の後に、該粗生成物を、ＤＭＳＯに溶解して、提示した方法に従って精製した。
表Ｖ

Ｂ. 生物学的活性の評価
略号および頭字語：

本発明の化合物の活性の証明は、当技術分野で周知のインビトロ、エクスビボおよびインビボアッセイで達成され得る。例えば、本発明の化合物の活性を証明するために、下記のアッセイを用い得る。

Ｂ−１. ＦＧＦＲ−１高ＡＴＰキナーゼアッセイ
ＦＧＦＲ−１と共に予めインキュベートした後の、本発明の化合物の高濃度ＡＴＰでのＦＧＦＲ−１阻害活性を、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするＦＧＦＲ−１高ＡＴＰアッセイを用いて定量化した：
ＳＦ９昆虫細胞中でバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、グルタチオン・アガロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えＦＧＦＲ−１融合タンパク質[グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)(Ｎ末端)、Ｈｉｓ６タグ、トロンビン切断部位、およびアミノ酸Ｇ４００〜Ｒ８００(GenBankエントリー番号NM_015850)のヒトＦＧＦＲ−１の細胞内部分の融合]を、Proqinase (製品番号0101-0000-1)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ペプチドビオチン−Ahx−AAEEEYFFLFAKKK(アミド型のＣ末端)を用いた。これは、例えばBiosyntan (Berlin-Buch, Germany)から購入できる。

通常、試験化合物は、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭ〜０.１ｎＭの範囲の１１種の異なる濃度で(例えば２０μＭ、５.９μＭ、１.７μＭ、０.５１μＭ、０.１５μＭ、４４ｎＭ、１３ｎＭ、３.８ｎＭ、１.１ｎＭ、０.３３ｎＭおよび０.１ｎＭ)、各濃度について二組試験した。希釈系列を、アッセイ前に、ＤＭＳＯ中の１００倍濃度ストック溶液として別個に調製した；正確な濃度は、用いたピペッターに依存して変化する。アッセイのために、５０ｎｌのＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液を、それぞれ、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[８ｍＭのＭＯＰＳ(ｐＨ７.０)、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、０.０５％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、０.０７％(v/v)のTween-20、０.２ｍＭのＥＤＴＡ]中の上記ＦＧＦＲ−１融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、３μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, ３.３ｍＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝２ｍＭ)および基質(０.１６μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.１μＭ)の溶液を添加することによって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を、反応時間１５分間、２２℃でインキュベートした。ＦＧＦＲ−１融合タンパク質の濃度を、酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが直線範囲内(典型的な濃度は０.０５μg/mlの範囲であった)となるように適切に選択した。５μｌのＨＴＲＦ検出反応剤溶液[ＥＤＴＡ水溶液(５０ｍＭＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ７.５)中の５０ｍＭのＥＤＴＡ、０.１％(w/v)のＢＳＡ)中の２５ｎＭのストレプトアビジン-XL665(Cis Biointernational)および１ｎＭのPT66-Eu-キレート、すなわちユーロピウムキレート標識抗ホスホチロシン抗体(Perkin-Elmer; PT66-Tb-クリプテート(Cis Biointernational)を代わりに用いてもよい)]を添加することによって、反応を停止させた。

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化ビオチン化ペプチドと検出反応剤で錯体を形成させた。続いて、Ｅｕキレートからストレプトアビジン-XL665への共鳴エネルギー移動を測定することによって、リン酸化基質の量を測定した。これについては、３５０nmで励起後、６２０nmおよび６６５nmでの蛍光放出を、ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー[例えば Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) または Viewlux (Perkin-Elmer)]で測定した。６６５nmおよび６２０nmでの放出の比を、リン酸化された基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素がない以外他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、社内ソフトウェアを用いて、４変数フィットによって、ＩＣ_５０値を計算した。

このアッセイから得られた個々の本発明の化合物についてのＩＣ_５０値を、下記の表１Ａに挙げる。

最も近い先行技術(国際特許出願WO 2007/061737-A2およびそれに記載された実施例化合物)の代表例と考えられる選択された８−アミノ−１−(ベンゾチオフェン−２−イル)イミダゾ[１,５−ａ]ピラジン誘導体および関連化合物を、公表された手順に従って合成し、比較の目的のために、ＦＧＦＲ−１高ＡＴＰアッセイで試験した。これらの化合物について得られたＩＣ_５０値を、下記の表１Ｂに挙げる。

表１Ｂ

表１Ａおよび１Ｂに特記したＩＣ_５０値は、本発明の化合物が、選択された先行技術化合物よりも、約５〜５００倍以上強力にＦＧＦＲ−１キナーゼ活性を阻害することを証明している。

Ｂ−２. ＦＧＦＲ−３キナーゼアッセイ
ＦＧＦＲ−３と共に予めインキュベートした後の本発明の化合物のＦＧＦＲ−３阻害活性を、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするＦＧＦＲ−３アッセイを用いて定量化した：
ＳＦ９昆虫細胞中でバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えＦＧＦＲ−３融合タンパク質[グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)(Ｎ末端)、Ｈｉｓ６タグ、トロンビン切断部位、およびアミノ酸Ｒ３９７〜Ｔ８０６(NCBI/タンパク質エントリー番号NP_000133.1)のヒトＦＧＦＲ−３の細胞内部分の融合]を、Proqinas (製品番号1068-0000-1)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ペプチドビオチン-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK (アミド型のＣ末端)を用いた。これは、例えばBiosyntan (Berlin-Buch, Germany)から購入できる。

通常、試験化合物は、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭ〜０.１ｎＭの範囲の１１種の異なる濃度で(例えば２０μＭ、５.９μＭ、１.７μＭ、０.５１μＭ、０.１５μＭ、４４ｎＭ、１３ｎＭ、３.８ｎＭ、１.１ｎＭ、０.３３ｎＭおよび０.１ｎＭ)、各濃度について二組試験した。希釈系列を、アッセイ前に、ＤＭＳＯ中の１００倍濃度ストック溶液として別個に調製した；正確な濃度は、用いられたピペッターに依存して変化する。アッセイのために、５０ｎｌのＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液を、それぞれ、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[８ｍＭのＭＯＰＳ(ｐＨ７.０)、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、０.０５％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、０.０７％(v/v)のTween-20、０.２ｍＭのＥＤＴＡ]中の上記ＦＧＦＲ−３融合タンパク質の溶液を加え、該混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、３μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, １６.７μＭ；５μｌアッセイ容量中の最終濃度＝１０μＭ)および基質(０.８μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.５μＭ)の溶液を添加することによって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を、反応時間６０分間、２２℃でインキュベートした。ＦＧＦＲ−３融合タンパク質の濃度を、酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが直線範囲内(典型的な濃度は０.０３μg/mlの範囲であった)となるように適切に選択した。５μｌのＨＴＲＦ検出反応剤溶液[ＥＤＴＡ水溶液(５０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ７.５)中の５０ｍＭのＥＤＴＡ、０.１％(w/v)のＢＳＡ)中の１００ｎＭのストレプトアビジン-XL665 (Cis Biointernational)および１ｎＭのPT66-Tb-クリプテート、すなわちテルビウム−クリプテート標識抗ホスホチロシン抗体(Cis Biointernational; PT66-Eu-キレート(Perkin-Elmer)を代わりに用いてもよい)]を添加することによって、反応を停止させた。

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化ビオチン化ペプチドと検出反応剤で錯体を形成させた。続いて、Ｔｂキレートからストレプトアビジン-XL665への共鳴エネルギー移動を測定することによって、リン酸化基質の量を測定した。これについては、３５０nmで励起後、６２０nmおよび６６５nmでの蛍光放出を、ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー[例えば Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) または Viewlux (Perkin-Elmer)]で測定した。６６５nmおよび６２０nmでの放出の比を、リン酸化された基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素以外の他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、社内ソフトウェアを用いて、４変数フィットによって、ＩＣ_５０値を計算した。

このアッセイから得られた個々の本発明の化合物についてのＩＣ_５０値を、下記の表２Ａに挙げる。

表２Ａ

最も近い先行技術(国際特許出願WO 2007/061737-A2およびそれに記載された実施例化合物)の代表例と考えられる選択された８−アミノ−１−(ベンゾチオフェン−２−イル)イミダゾ[１,５−ａ]ピラジン誘導体および関連化合物を、公表された手順に従って合成し、比較の目的のために、ＦＧＦＲ−３アッセイで試験した。これらの化合物について得られたＩＣ_５０値を、下記の表２Ｂに挙げる。

表２Ａおよび２Ｂに特記されたＩＣ_５０値は、本発明の化合物が選択された先行技術化合物よりも約３０倍まで強力にＦＧＦＲ−３キナーゼ活性を阻害することを証明している。

Ｂ−３. ＦＧＦＲ−４高ＡＴＰキナーゼアッセイ
ＦＧＦＲ−４と共に予めインキュベートした後の本発明の化合物の高濃度ＡＴＰでのＦＧＦＲ−４阻害活性を、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするＦＧＦＲ−４高ＡＴＰアッセイを用いて定量化した：
ＳＦ９昆虫細胞中でバキュロウイルス発現系を用いて発現させ、グルタチオン・アガロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えＦＧＦＲ−４融合タンパク質[グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)(Ｎ末端)、Ｈｉｓ６タグ、トロンビン切断部位、およびアミノ酸R391〜T802 (GenBankエントリー番号NM_002011)のヒトＦＧＦＲ−４の細胞内部分の融合]を、Proqinase (製品番号0127-0000-3)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ビオチン化ペプチドビオチン−Ahx−AAEEEYFFLFAKKK(アミド型のＣ末端)を用いた。これは、例えばBiosyntan (Berlin-Buch, Germany)から購入できる。

通常、試験化合物は、同じマイクロタイタープレートで、２０μＭ〜０.１ｎＭの範囲の１１種の異なる濃度で(例えば２０μＭ、５.９μＭ、１.７μＭ、０.５１μＭ、０.１５μＭ、４４ｎＭ、１３ｎＭ、３.８ｎＭ、１.１ｎＭ、０.３３ｎＭおよび０.１ｎＭ)、各濃度について二組試験した。希釈系列を、アッセイ前に、ＤＭＳＯ中の１００倍濃度ストック溶液として別個に調製した；正確な濃度は、用いられたピペッターに依存して変化する。アッセイのために、５０ｎｌのＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液を、それぞれ、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[８ｍＭのＭＯＰＳ(ｐＨ７.０)、１０ｍＭの酢酸マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、０.０５％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、０.０７％(v/v)のTween-20、０.２ｍＭのＥＤＴＡ]中の上記ＦＧＦＲ−４融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、３μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, ３.３ｍＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝２ｍＭ)および基質(０.８μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.５μＭ)の溶液を添加することによって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を、反応時間６０分間、２２℃でインキュベートした。ＦＧＦＲ−４融合タンパク質の濃度を、酵素ロットの活性に応じて調節し、アッセイが直線範囲内(典型的な濃度は０.０３μg/mlの範囲であった)となるように適切に選択した。５μｌのＨＴＲＦ検出反応剤溶液[ＥＤＴＡ水溶液(５０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ７.５)中の５０ｍＭのＥＤＴＡ、０.１％(w/v)のＢＳＡ)中の１００ｎＭのストレプトアビジン-XL665 (Cis Biointernational)および１ｎＭのPT66-Tb-クリプテート、すなわちテルビウム−クリプテート標識抗ホスホチロシン抗体(Cis Biointernational; PT66-Eu-キレート(Perkin-Elmer)を代わりに用いてもよい)]を添加することによって、反応を停止させた。

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、ホスホリル化ビオチン化ペプチドと検出反応剤で錯体を形成させた。次いで、Ｔｂキレートからストレプトアビジン-XL665への共鳴エネルギー移動を測定することによって、リン酸化基質の量を測定した。これについては、３５０nmで励起後、６２０nmおよび６６５nmでの蛍光放出を、ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー[例えば Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) または Viewlux (Perkin-Elmer)]で測定した。６６５nmおよび６２０nmでの放出の比を、リン酸化された基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素以外の他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、社内ソフトウェアを用いて、４変数フィットによって、ＩＣ_５０値を計算した。

Ｂ−４. ｍＴＯＲキナーゼアッセイ(比較の目的のため)
本発明の化合物のｍＴＯＲ阻害活性は、次の段落に記載する通りにＴＲ−ＦＲＥＴをベースとするｍＴＯＲアッセイを用いて定量化した：
昆虫細胞中で発現させ、グルタチオン・セファロースアフィニティークロマトグラフィーによって精製した、タグ付組み換えｍＴＯＲ融合タンパク質[アミノ酸1360〜2549のヒトｍＴＯＲと融合したグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)]を、Invitrogen (カタログ番号4753)から購入し、酵素として用いた。キナーゼ反応の基質として、ＧＦＰおよび４Ｅ−ＢＰ１の組み換え融合タンパク質(Invitrogenから購入, カタログ番号PV4759)を用いた。

試験化合物をＤＭＳＯに溶解して、１０ｍＭのストック溶液を作る。これらの溶液を最初に１００％のＤＭＳＯによって１０倍希釈し、１００％ＤＭＳＯ中１ｍＭの溶液を得て、次に、５０％のＤＭＳＯによって１００倍希釈し、５０％ＤＭＳＯ中１０μＭの溶液を得る。

アッセイのために、０.５μｌの５０％ＤＭＳＯ中１０μＭの試験化合物の溶液を、黒色の低容量３８４ウェルマイクロタイタープレート(Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany)にピペットで入れた。２μｌの水性アッセイ緩衝液[５０ｍＭのＨＥＰＥＳ／ＮａＯＨ(ｐＨ７.５)、５ｍＭの塩化マグネシウム、１.０ｍＭのジチオスレイトール、１ｍＭのＥＧＴＡ、０.０１％(v/v)のTriton-X100、０.０１％(w/v)のウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)]中の上記ｍＴＯＲ融合タンパク質の溶液を加え、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、予め試験化合物を酵素に結合させた。次いで、２.５μｌのアッセイ緩衝液中のアデノシン三リン酸(ＡＴＰ, ８０μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝４０μＭ)および基質(０.６μＭ；５μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝０.３μＭ)の溶液の添加によって、キナーゼ反応を開始させ、得られた混合物を反応時間６０分間、２２℃でインキュベートした。ｍＴＯＲ融合タンパク質の濃度を、アッセイが直線範囲内(５μｌのアッセイ容量中の典型的な最終濃度は１.２５ng/μlであった)となるように適切に選択した。５μｌの３０ｍＭのＥＤＴＡ(１０μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝１５ｍＭ)およびＦＲＥＴ緩衝液中の２ｎＭのＴｂキレート標識抗４Ｅ−ＢＰ１[ｐＴ４６]ホスホ特異的抗体[Invitrogen カタログ番号PV4755](１０μｌのアッセイ容量中の最終濃度＝１ｎＭ)の添加によって、反応を停止させた。

得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートして、リン酸化基質とＴｂキレート標識抗体で錯体を形成させた。続いて、ＴｂキレートからＧＦＰへの共鳴エネルギー移動を測定することによって、リン酸化基質の量を測定した。これについては、３４０nmで励起後、４９５nmおよび５２０nmでの蛍光放出を、Envision 2104 multilabel reader (Perkin-Elmer)で測定した。５２０nmおよび４９５nmでの放出の比を、リン酸化された基質の量についての測定値とした。データを正規化し(阻害剤なしでの酵素反応＝０％阻害、酵素以外の他のアッセイ成分全て＝１００％阻害)、平均値(１つの濃度で反復して試験したならば)、または、ＩＣ_５０値(社内ソフトウェアを用いた４変数フィットによる)を計算した。

個々の本発明の化合物についての１μＭでの平均阻害値を、下記の表３に挙げる。
表３

(阻害効果検出されず＝１μＭで阻害効果が検出できなかった)。

表３中のデータは、本発明の化合物が、ｍＴＯＲキナーゼに対して、弱い阻害効果しか有さないことを示し、これらの化合物で観察される薬理学的活性に対して有意に寄与するとは考えられない。

Ｂ−５. 増殖因子介在細胞増殖の阻害
ヒト臍帯静脈内皮細胞(ＨＵＶＥＣ)を Cellsystems (FC-0003)から購入し、２％のウシ胎児血清(ＦＢＳ)を含むVasculife VEGF完全培地(Cellsystems, LL-1020)中で３７℃で５％ＣＯ_２で増殖させた。細胞を最大７継代で増殖アッセイに用いた。

ＨＵＶＥＣ細胞を、accutase (PAA, L11-007)を用いて回収し、９６ウェルプレート(Falcon MICROTEST 組織培養プレート９６ウェル平底, BD 353075、または、μCLEAR-PLATE, 黒色, ９６ウェル, Greiner Bio-One, No. 655090)のカラム２〜１２に、１００μｌのVasculife VEGF完全培地中２５００細胞／ウェルの細胞密度で播種し、残りの空のカラム１をブランクとした。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２で少なくとも６時間インキュベートした。次いで、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ヘパリン、アスコルビン酸塩およびＬ−グルタミン(Vasculife Life Factors Kitの構成成分, Cellsystems, LL-1020)、および０.２％のＦＢＳを含むVasculife基本培地(Cellsystems, LM-0002)中で終夜飢餓状態とした。

約１８時間後、飢餓培地を廃棄し、細胞を、１００μｌの飢餓培地中、１０ｐＭ〜３０μＭの範囲の９種の連続対数または半対数濃度の試験化合物、および、５、１０または２０ng/mlのｈＦＧＦ−２(組み換えヒトＦＧＦベーシック, R&D Systems, 233-FB)に、７２時間曝露した。ＤＭＳＯ中１０ｍＭの試験化合物ストック溶液を、ＤＭＳＯで２００×最終濃度に希釈し、全てのウェルで最終ＤＭＳＯ濃度を０.５％とした。コントロールは、飢餓培地のみの中で増殖させた細胞と、０.５％のＤＭＳＯを含むｈＦＧＦ−２含有飢餓培地中で増殖させた細胞からなる。細胞増殖を測定するために、５μｌのAlamar Blue溶液(Biosource, DAL1100)をそれぞれのウェルに加え(１：２０希釈)、細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２でさらに４時間インキュベートした後、Spectrafluor Plus Tecan plate reader (XFLUOR4 version 4.20)で蛍光を測定した(励起５３５nm, 放出５９５nm)。幾つかの実験において、ＡＴＰ測定キット(BIAFFIN GmbH, LBR-T100)を製造者の指示に従って用いた。各実験において、サンプルを三組アッセイして、標準偏差を決定した。データを分析するためにGraphPad Prism 5 softwareを用いて、ＩＣ_５０値を得た。全ての試験化合物を独立した実験で２〜１０回アッセイし、類似の結果を得た。

下記の表４に挙げるデータは、対応する平均ｐＩＣ_５０値から得られる代表的な本発明の化合物についてのＩＣ_５０値を表す。
表４

本発明の化合物の大部分は、血管内皮増殖因子(ＶＥＧＦ−Ａ_１６５アイソフォーム)を媒介増殖因子として(ＦＧＦ−２の代わりに)用いたとき、この増殖アッセイで約５〜５０倍低下した阻害活性を示し、ＶＥＧＦＲキナーゼに対するＦＧＦＲへのこれらの化合物の著しい選択性を示した。

Ｂ−６. ヒト異種移植および同系腫瘍モデル
本発明の化合物をインビボでプロファイルするために、異なる腫瘍モデルを行った。ヒト、ラットまたはマウスの腫瘍細胞をインビトロで培養し、免疫不全または免疫適格性マウス、または、免疫不全ラットの何れかに移植した。腫瘍確立後に処置を開始し、腫瘍担持動物を、種々の経路(経口、静脈内、腹腔内、または皮下)を介して物質で処置した。物質を、単剤治療または他の薬理学的物質との併用治療として試験した。腫瘍が平均サイズ１２０mm²に達するまで腫瘍担持動物の処置を行った。ノギスを用いて２方向で腫瘍を測定し、腫瘍体積を式：(長さ×幅^２)／２によって計算した。物質の有効性を実験終了時にＴ／Ｃ比[Ｔ＝処置群の最終腫瘍重量；Ｃ＝コントロール群の最終腫瘍重量]を用いて評価した。コントロール群と処置群の有効性についての統計学的有意性を、ＡＮＯＶＡ分散検定を用いて決定した。全ての動物試験をドイツの規制ガイドラインに従って行った。

本発明は特定の具体的態様に言及して開示したが、他の態様および本発明の変法も、本発明の精神および範囲を逸脱せずに、他の当業者によって考案され得る。請求の範囲は、このような態様および等価の変法を全て含むと解釈されることを意図される。

Ｃ. 医薬組成物に関する例
本発明の医薬組成物は、下記の通り説明できる。
滅菌処理された静脈内投与用溶液：
望ましい本発明の化合物の５mg/ml溶液は、滅菌処理された注射用水を用いて調製でき、必要であればｐＨを調節する。溶液は、投与のために、滅菌処理された５％のブドウ糖で１〜２mg/mlに希釈され、約６０分に亘って静脈内点滴として投与される。

静脈内投与用凍結乾燥粉末：
滅菌処理された製剤は、(i)１００〜１０００mgの凍結乾燥粉末としての望ましい本発明の化合物、(ii)３２〜３２７mg/mlのクエン酸ナトリウム、および、(iii)３００〜３０００mgのデキストラン４０で製造できる。製剤は、滅菌処理された注射用食塩水または５％のブドウ糖で、１０〜２０mg/mlの濃度に再構成され、これは、さらに食塩水または５％のブドウ糖で０.２〜０.４mg/mlに希釈され、静脈内にボラスとして投与されるか、または、１５〜６０分に亘って静脈内点滴によって投与される。

筋肉内投与用懸濁液：
下記の溶液または懸濁液を筋肉内注射用に製造できる：
５０mg/mlの望ましい水不溶性の本発明の化合物；５mg/mlのカルボキシメチルセルロースナトリウム；４mg/mLのTween 80；９mg/mLの塩化ナトリウム；９mg/mlのベンジルアルコール。

ハードシェルカプセル：
１００mgの望ましい粉末状の本発明の化合物、１５０mgの乳糖、５０mgのセルロースおよび６mgのステアリン酸マグネシウムを、標準的な２ピース硬ゼラチンカプセルにそれぞれ充填することによって、多数の単位カプセルを製造する。

軟ゼラチンカプセル：
可消化油、例えば大豆油、綿実油またはオリーブ油中の、望ましい本発明の化合物の混合物を調製し、容積型移送式ポンプによって融解ゼラチンに注入して、１００mgの有効成分を含む軟ゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄し、乾燥する。望ましい本発明の化合物を、ポリエチレングリコール、グリセリンおよびソルビトールの混合物に溶解し、水混和性医薬ミックスを調製できる。

錠剤：
投与単位が、１００mgの望ましい本発明の化合物、０.２mgのコロイド状二酸化ケイ素、５mgのステアリン酸マグネシウム、２７５mgの微晶性セルロース、１１mgの澱粉および９８.８mgの乳糖であるように、多数の錠剤を慣用の手順によって調製する。嗜好性を向上し、上品さおよび安定性を改善し、または、吸収を遅らせるために、適切な水性および非水性コーティングを適用してもよい。

眼への局所適用のための溶液または懸濁液(点眼薬):
滅菌製剤を、５mlの滅菌食塩水中で再構成された、１００mgの凍結乾燥粉末としての望ましい本発明の化合物で調製できる。保存料として、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、硝酸フェニル水銀などを、約０.００１重量％〜１重量％の範囲で用いてもよい。

Claims

式（Ｉ）

（Ｉ）
［式中、
Ｒ^１は、水素、クロロ、メチルまたはメトキシであり；
Ｒ^２は、水素またはメトキシであるが
但しＲ^１およびＲ^２の少なくとも１つは水素以外であり；
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表し、
式中、Ｒ^３は、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、アミノカルボニル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニルおよび４〜６員ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される残基で置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）−アルキルであるか、または４〜６員ヘテロシクロアルキルであって、ここで前記４〜６員ヘテロシクロアルキル基は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよく、
Ｒ^４は、水素または（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであり、
Ｒ^５は、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルアミノ、アミノカルボニルアミノおよび４〜６員ヘテロシクロアルキルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換された（Ｃ_１−Ｃ_６）−アルキルであって、前記４〜６員ヘテロシクロアルキルは、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよいか、または
所望により、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノからなる群から選択される残基により置換されていてもよい（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルであるか、または
所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルであるか、または
所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい４〜６員ヘテロシクロアルキルであり、あるいは
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環または二環式の飽和４〜１０員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これはＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、アゼチジノ、ピロリジノ、ピペリジノ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル、（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルカルボニル、ヒドロキシカルボニル、アミノカルボニル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニル、チエニルおよびフェニルからなる群から独立して選択される３つまでの残基により置換されていてもよく、ここで、前記（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルコキシ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよび（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル残基の該アルキル基は、それらの一部として、所望によりヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から選択される残基により置換されていてもよく、ここで前記チエニルおよびフェニル基は、所望により、フルオロ、クロロ、シアノ、メチルおよびトリフルオロメチルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよいか、または
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、イミダゾール−１−イルまたは１，２，４−トリアゾール−１−イル環を形成し、これら各々は（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルおよびシアノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい４〜６員ヘテロシクロアルキルであるか、
または
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、単環式の飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成するが、これはＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよく、かつ（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい]
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物および／または溶媒和物。
請求項１に記載の式（Ｉ）
[式中、
Ｒ^１は、クロロまたはメチルであり；
Ｒ^２は、メトキシであり；
Ｇは、基−ＣＨ_２−ＯＲ^３、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７を表し、
式中、Ｒ^３は、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびピロリジン−１−イルからなる群から選択される残基により置換された（Ｃ_２−Ｃ_４）−アルキルであるか、またはピロリジン−３−イルであり、
Ｒ^４は、水素またはメチルであり、
Ｒ^５は、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、アミノカルボニルおよびモノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニルからなる群から選択される残基により置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであるか、または
所望によりアミノにより置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルであるか、または
所望によりヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノからなる群から選択される残基により置換された（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルであるか、または
所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソおよびアミノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換された５または６員ヘテロシクロアルキルであり、あるいは
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、ＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有してもよい単環式の飽和４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、かつこれは（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル、（Ｃ_３−Ｃ_６）−シクロアルキルカルボニル、アミノカルボニルおよびモノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノカルボニルからなる群から独立して選択される３つまでの残基により置換されていてもよく、ここで前記（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよび（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニル残基の該アルキル基は、それらの一部として、所望によりヒドロキシにより置換されていてもよい、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、所望により（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソおよびアミノからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい５または６員ヘテロシクロアルキルであるか、または
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、ＮおよびＯから選択される第二の環ヘテロ原子を含有し得る単環式の飽和５〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、かつこれは（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノ、ジ−（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい]
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物および／または溶媒和物。
請求項１または２に記載の式（Ｉ）
［式中、
Ｒ^１は、メチルであり；
Ｒ^２は、メトキシであり；
Ｇは、−ＣＨ_２−ＮＲ^４Ｒ^５または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ^６Ｒ^７基を表し、
式中、
Ｒ^４は、水素であり、
Ｒ^５は、アミノ、メチルアミノまたはアミノカルボニルにより置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルであるか、または
アミノにより置換された（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルカルボニルであるか、または
２−オキソピロリジン−３−イルまたは２−オキソピペリジン−３−イルであるか、あるいは
Ｒ^４およびＲ^５は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはピペラジン−１−イル環を形成し、これらは、各々メチル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい、
Ｒ^６は、水素であり、
Ｒ^７は、２−オキソピロリジン−３−イルまたは２−オキソピペリジン−３−イルであるか、または
Ｒ^６およびＲ^７は、それらが結合している窒素原子と一体となって結合して、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルまたはピペラジン−１−イル環を形成し、これらは、各々メチル、オキソ、ヒドロキシ、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノおよびアミノカルボニルからなる群から独立して選択される１または２の残基により置換されていてもよい]
の化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物および／もしくは溶媒和物。
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、式（ＩＩ）
（ＩＩ）

の４−アミノピロロ［２，１−ｆ］［１，２，４］トリアジンを、

［Ａ］
酸の存在下で、ホルムアルデヒドおよび式（ＩＩＩ）

（ＩＩＩ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
のアミンと反応させて、
式（ＩＶ）

（ＩＶ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
の化合物を得て、次いで、
式（Ｖ）

（Ｖ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
の化合物へと臭素化して、次に、
式（ＶＩ）

（ＶＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有し、
Ｒ^８は、水素または（Ｃ_１−Ｃ_４）−アルキルを表すか、または両Ｒ^８残基が、一緒に結合して、−（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（ＣＨ_３）_２−Ｃ（ＣＨ_３）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２−Ｃ（ＣＨ_３）_２−ＣＨ_２−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−架橋を形成する）
の化合物のベンゾチオフェン−２−イルボロネートと、パラジウム触媒および塩基の存在下でカップリングさせて、
式（Ｉ−Ａ）
（Ｉ−Ａ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
の標的化合物を得ること、または

［Ｂ］
塩化ホスホリルの存在下で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いて処理して、
式（ＶＩＩ）

（ＶＩＩ）
のホルミル化合物を得て、次いで式（ＶＩＩＩ）

（ＶＩＩＩ）
の化合物へと臭素化して、次にパラジウム触媒および塩基の存在下で、式（ＶＩ）
（ＶＩ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^８は、上記の意味を有する）
のベンゾチオフェン−２−イルボロネートとカップリングさせて、
式（ＩＸ）
（ＩＸ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
の化合物を得て、

これを、次いで、
［Ｂ−１］
酸および還元剤の存在下で、式（ＩＩＩ）

（ＩＩＩ）
（式中、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
のアミンと反応させて、
式（Ｉ−Ａ）
（Ｉ−Ａ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４およびＲ^５は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）の標的化合物を得るか、または

［Ｂ−２］
式（Ｘ）
（Ｘ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
のカルボン酸に酸化して、最終的に式（ＸＩ）

（ＸＩ）
（式中、Ｒ^６およびＲ^７は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
のアミンと、縮合剤の存在下でカップリングさせて、
式（Ｉ−Ｂ）

（Ｉ−Ｂ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^６およびＲ^７は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）の標的化合物を得るか、または

［Ｂ−３］
式（ＸＩＩ）

（ＸＩＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
のアルコールに還元して、式（ＸＩＩＩ）

（ＸＩＩＩ）
（式中、Ｒ^１およびＲ^２は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有し、Ｘはクロロ、ブロモまたはヨードである）
の対応するハロメチル誘導体に変換して、最終的に、所望の塩基存在下において、
式（ＸＩＶ）

（ＸＩＶ）
（式中、Ｒ^３は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
のアルコールを用いて処理して、
式（Ｉ−Ｃ）

（Ｉ−Ｃ）
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、請求項１〜３の何れか１項に示した意味を有する）
の標的化合物を得ること、
所望により、その後に、適切な場合には、（ｉ）このようにして得られた式(Ｉ)の化合物を、そのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分離すること、および／または、（ｉｉ）対応する溶媒および／または酸もしくは塩基で処理することによって、式(Ｉ)の化合物を、その水和物、溶媒和物、塩および／または塩の水和物もしくは溶媒和物に変換することを特徴とする方法。
疾患を処置および／または予防するための請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物。
癌および腫瘍疾患を処置および／または予防する方法に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物。
癌および腫瘍疾患を処置および／または予防する医薬組成物を製造するための、請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物の使用。
請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物および１種以上の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
１以上の追加の治療薬をさらに含む請求項８に記載の医薬組成物。
癌および腫瘍疾患を処置および／または予防するための請求項８または９に記載の医薬組成物。
哺乳動物において、癌および腫瘍疾患を処置および／または予防する方法であって、それを必要とする哺乳動物に、請求項１〜３の何れか１項に記載の１種以上の化合物、または、請求項８〜１０の何れか１項に記載の医薬組成物を、治療有効量で投与することを含む方法。