JP2015057400A - グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 - Google Patents
グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015057400A JP2015057400A JP2014213807A JP2014213807A JP2015057400A JP 2015057400 A JP2015057400 A JP 2015057400A JP 2014213807 A JP2014213807 A JP 2014213807A JP 2014213807 A JP2014213807 A JP 2014213807A JP 2015057400 A JP2015057400 A JP 2015057400A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gln
- glu
- peptide
- phe
- ala
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 239000012636 effector Substances 0.000 title claims abstract description 63
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 title claims abstract description 45
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 title claims description 66
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 title description 9
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 title description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 120
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 98
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 73
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 29
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 25
- 108010081484 glutaminyl-peptide cyclotransferase Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000003642 glutaminyl-peptide cyclotransferase Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 208000017227 ADan amyloidosis Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 201000000194 ITM2B-related cerebral amyloid angiopathy 2 Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 208000023697 ABri amyloidosis Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 201000000162 ITM2B-related cerebral amyloid angiopathy 1 Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 12
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010054184 Small intestine carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000008629 Zollinger-Ellison syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 201000000052 gastrinoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 156
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 66
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 58
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 40
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 39
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 32
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 claims description 22
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 claims description 21
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 claims description 16
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 8
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 claims description 6
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 142
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 abstract description 3
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 abstract description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 127
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 105
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 105
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 105
- 101000585315 Homo sapiens Glutaminyl-peptide cyclotransferase Proteins 0.000 description 84
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 69
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 68
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 68
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 63
- 241000219173 Carica Species 0.000 description 61
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 59
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 38
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 33
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 32
- -1 N-substituted 2-cyanopyrroles Chemical class 0.000 description 31
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 25
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 24
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 24
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 22
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 22
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 22
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 21
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 21
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 19
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 18
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 18
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 18
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 18
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 17
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 17
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 17
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 17
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 16
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 16
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 15
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 15
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 15
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 14
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 description 14
- WJJMNDUMQPNECX-UHFFFAOYSA-N dipicolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(C(O)=O)=N1 WJJMNDUMQPNECX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 14
- 102400001103 Neurotensin Human genes 0.000 description 13
- 101800001814 Neurotensin Proteins 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 13
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 13
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 12
- OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine Chemical compound C1CSCN1 OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 12
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 12
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 12
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 12
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 12
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 11
- PCJGZPGTCUMMOT-ISULXFBGSA-N neurotensin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 PCJGZPGTCUMMOT-ISULXFBGSA-N 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 10
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 10
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 9
- 108010055204 Chemokine CCL8 Proteins 0.000 description 9
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 9
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 9
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 9
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 8
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 8
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 7
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 7
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 7
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 7
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 7
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 7
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- VEPDWBJBPXVCEN-NSHDSACASA-N (2s)-2-amino-n-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)pentanediamide Chemical compound C1=C(NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C VEPDWBJBPXVCEN-NSHDSACASA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 6
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 229940079865 intestinal antiinfectives imidazole derivative Drugs 0.000 description 6
- 238000003402 intramolecular cyclocondensation reaction Methods 0.000 description 6
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- CBDKQYKMCICBOF-UHFFFAOYSA-N thiazoline Chemical compound C1CN=CS1 CBDKQYKMCICBOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 5
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 5
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 5
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 5
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 5
- 240000006432 Carica papaya Species 0.000 description 5
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N Gln-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101001129465 Homo sapiens Pyroglutamyl-peptidase 1 Proteins 0.000 description 5
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 102100031108 Pyroglutamyl-peptidase 1 Human genes 0.000 description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 230000009858 acid secretion Effects 0.000 description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 5
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 5
- GOPWHXPXSPIIQZ-FQEVSTJZSA-N (4s)-4-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)OC(C)(C)C)C3=CC=CC=C3C2=C1 GOPWHXPXSPIIQZ-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 4
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DENMGZODXQRYAR-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)ethanethiol Chemical compound CN(C)CCS DENMGZODXQRYAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 229940124213 Dipeptidyl peptidase 4 (DPP IV) inhibitor Drugs 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 101000908391 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 4 Proteins 0.000 description 4
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 206010062519 Poor quality sleep Diseases 0.000 description 4
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 4
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 4
- 239000003603 dipeptidyl peptidase IV inhibitor Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 4
- 210000004188 enterochromaffin-like cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000008556 epithelial cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 230000023404 leukocyte cell-cell adhesion Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 4
- NPWMTBZSRRLQNJ-VKHMYHEASA-N (3s)-3-aminopiperidine-2,6-dione Chemical class N[C@H]1CCC(=O)NC1=O NPWMTBZSRRLQNJ-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003840 Autonomic nervous system imbalance Diseases 0.000 description 3
- 101000950981 Bacillus subtilis (strain 168) Catabolic NAD-specific glutamate dehydrogenase RocG Proteins 0.000 description 3
- 208000012639 Balance disease Diseases 0.000 description 3
- 101800000285 Big gastrin Proteins 0.000 description 3
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100020751 Dipeptidyl peptidase 2 Human genes 0.000 description 3
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 3
- 208000030814 Eating disease Diseases 0.000 description 3
- 208000019454 Feeding and Eating disease Diseases 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 3
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 102000016901 Glutamate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N L-allo-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 3
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 3
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 3
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 description 3
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 description 3
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 3
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 3
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 description 3
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 3
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 235000014632 disordered eating Nutrition 0.000 description 3
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 3
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 3
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 3
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 3
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 3
- 150000003951 lactams Chemical group 0.000 description 3
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 3
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 3
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BMJRTKDVFXYEFS-XIFFEERXSA-N (2s)-2,6-bis(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(=O)O)CCCCNC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 BMJRTKDVFXYEFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 2
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 description 2
- YPTNAIDIXCOZAJ-LHEWISCISA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[[(4-methylphenyl)-diphenylmethyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 YPTNAIDIXCOZAJ-LHEWISCISA-N 0.000 description 2
- QFKUSGBKEGSBMQ-XJPBFQKESA-N (2s)-2-amino-n-[(2s)-3-methyl-1-oxo-1-[(2s)-2-(pyridine-2-carbonyl)pyrrolidin-1-yl]butan-2-yl]propanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)C1=CC=CC=N1 QFKUSGBKEGSBMQ-XJPBFQKESA-N 0.000 description 2
- YZJSUQQZGCHHNQ-BYPYZUCNSA-N (2s)-6-amino-2-azaniumyl-6-oxohexanoate Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCCC(N)=O YZJSUQQZGCHHNQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- VCODUTUPBPSXRA-LBRAPMIBSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[(2s)-2-acetylpyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-2-aminopropanamide;hydrobromide Chemical compound Br.C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(C)=O VCODUTUPBPSXRA-LBRAPMIBSA-N 0.000 description 2
- XOYSDPUJMJWCBH-VKHMYHEASA-N (3s)-3,5-diamino-5-oxopentanoic acid Chemical group NC(=O)C[C@H](N)CC(O)=O XOYSDPUJMJWCBH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- JFMNKDRNEZZRBW-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxamide Chemical class C1=CC=C2CNC(C(=O)N)CC2=C1 JFMNKDRNEZZRBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YPTJKHVBDCRKNF-UHFFFAOYSA-N 2',6'-Dihydroxyacetophenone Chemical compound CC(=O)C1=C(O)C=CC=C1O YPTJKHVBDCRKNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 239000005725 8-Hydroxyquinoline Substances 0.000 description 2
- 102400000345 Angiotensin-2 Human genes 0.000 description 2
- 101800000733 Angiotensin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029846 Glutaminyl-peptide cyclotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000967820 Homo sapiens Inactive dipeptidyl peptidase 10 Proteins 0.000 description 2
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N Ile(5)-angiotensin II Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=[NH2+])NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC([O-])=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 CZGUSIXMZVURDU-JZXHSEFVSA-N 0.000 description 2
- 102100040449 Inactive dipeptidyl peptidase 10 Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 241000787936 Phaeosphaeria papayae Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 2
- XYONNSVDNIRXKZ-UHFFFAOYSA-N S-methyl methanethiosulfonate Chemical compound CSS(C)(=O)=O XYONNSVDNIRXKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 2
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 2
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical class NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006933 amyloid-beta aggregation Effects 0.000 description 2
- FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N amyloid-beta polypeptide 40 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N 0.000 description 2
- 229950006323 angiotensin ii Drugs 0.000 description 2
- 230000000561 anti-psychotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 238000005844 autocatalytic reaction Methods 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003164 beta-aspartyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 2
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound ClCCl.OC(=O)C(F)(F)F KJOZJSGOIJQCGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone phosphate Chemical compound OCC(=O)COP(O)(O)=O GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxomagnesium;hydrate Chemical compound O.[Mg]=O.[Mg]=O.[Mg]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O FPAFDBFIGPHWGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000212 dipeptidyl peptidase II Proteins 0.000 description 2
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 2
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 2
- 208000025688 early-onset autosomal dominant Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 208000015756 familial Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 2
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001597 immobilized metal affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960003540 oxyquinoline Drugs 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004963 pathophysiological condition Effects 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 108010040003 polyglutamine Proteins 0.000 description 2
- 229920000155 polyglutamine Polymers 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- RZIMNEGTIDYAGZ-HNSJZBNRSA-N pro-gastrin Chemical compound N([C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 RZIMNEGTIDYAGZ-HNSJZBNRSA-N 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MCJGNVYPOGVAJF-UHFFFAOYSA-N quinolin-8-ol Chemical compound C1=CN=C2C(O)=CC=CC2=C1 MCJGNVYPOGVAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- AHBLWCWWXZJIIR-UHFFFAOYSA-N (1-cyclohexyl-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(C)(C)C([NH3+])C(=O)C1CCCCC1 AHBLWCWWXZJIIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIFZBOXCSQOOQR-UHFFFAOYSA-N (1-cyclopentyl-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(C)(C)C([NH3+])C(=O)C1CCCC1 OIFZBOXCSQOOQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGHKPFDSWWVQRM-UHFFFAOYSA-N (1-cyclopentyl-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(C)C([NH3+])C(=O)C1CCCC1 NGHKPFDSWWVQRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOMLWUOJCBLHPI-UHFFFAOYSA-N (1-cyclopentyl-3-methyl-1-oxopentan-2-yl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCC(C)C([NH3+])C(=O)C1CCCC1 QOMLWUOJCBLHPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N (2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-1-[(2R)-2-amino-5-carbamimidamidopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-N-[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 QDZOEBFLNHCSSF-PFFBOGFISA-N 0.000 description 1
- NEHKZPHIKKEMAZ-ZFVKSOIMSA-N (2s)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[(2s,3s)-2-[[2-[[(2s,3s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]acetyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-methylb Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NEHKZPHIKKEMAZ-ZFVKSOIMSA-N 0.000 description 1
- IVBVTDXOGUNDHC-LURJTMIESA-N (2s)-2-amino-1-pyrrolidin-1-ylpropan-1-one Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCCC1 IVBVTDXOGUNDHC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- UMMQVDUMUMBTAV-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 UMMQVDUMUMBTAV-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GEIXJNSDCIKYHU-IXDGSTSKSA-N (2s)-2-amino-n-[(2s)-1-[(2s)-2-[2-[(2,6-dichlorophenyl)methylsulfanyl]acetyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]propanamide Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)CSCC1=C(Cl)C=CC=C1Cl GEIXJNSDCIKYHU-IXDGSTSKSA-N 0.000 description 1
- WMXVRMCSOQSWAK-YPFLJBJZSA-N (2s)-n-[(2s)-1-[(2s)-2-acetylpyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-1-[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]pyrrolidine-2-carboxamide;hydrobromide Chemical compound Br.CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@H](C(C)=O)CCC1 WMXVRMCSOQSWAK-YPFLJBJZSA-N 0.000 description 1
- ARNUPLMOASAEAN-ASLNEKEESA-N (2s,3s)-2-amino-3-methyl-1-(1,3-thiazolidin-2-yl)pentan-1-one Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)C1NCCS1 ARNUPLMOASAEAN-ASLNEKEESA-N 0.000 description 1
- RICKQPKTSOSCOF-HKUYNNGSSA-N (3s)-2-[(2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1C2=CC=CC=C2C[C@@H](C(O)=O)N1C(=O)[C@@H](N)CC1=CNC2=CC=CC=C12 RICKQPKTSOSCOF-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 1
- FAAZAHIRCXGFFM-ZETCQYMHSA-N (4s)-4-amino-5-oxo-5-pyrrolidin-1-ylpentanamide Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCCC1 FAAZAHIRCXGFFM-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- AXJZCJSXNZZMDU-UHFFFAOYSA-N (5-methyl-1h-imidazol-4-yl)methanol Chemical compound CC=1N=CNC=1CO AXJZCJSXNZZMDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- NAOLWIGVYRIGTP-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-trihydroxyanthracene-9,10-dione Chemical compound C1=CC(O)=C2C(=O)C3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1 NAOLWIGVYRIGTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAADPEJYEZPFOT-UHFFFAOYSA-N 1-(1h-imidazol-2-yl)propan-1-amine Chemical compound CCC(N)C1=NC=CN1 IAADPEJYEZPFOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KKKDZZRICRFGSD-UHFFFAOYSA-N 1-benzylimidazole Chemical compound C1=CN=CN1CC1=CC=CC=C1 KKKDZZRICRFGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylimidazole Chemical compound C=CN1C=CN=C1 OSSNTDFYBPYIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLXGQMVCYPUOLM-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxyethanesulfonic acid Chemical compound CC(O)S(O)(=O)=O WLXGQMVCYPUOLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SEULWJSKCVACTH-UHFFFAOYSA-N 1-phenylimidazole Chemical compound C1=NC=CN1C1=CC=CC=C1 SEULWJSKCVACTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUWIVCMEYBVEHT-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexylamino)-1-cyclopentylethanone;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1CCCC1C(=O)C[NH2+]C1CCCCC1 OUWIVCMEYBVEHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNWJWKOQHLENDB-UHFFFAOYSA-N 2-(sulfanylamino)ethanethiol Chemical compound SCCNS YNWJWKOQHLENDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDOGNMDURIJYQC-UHFFFAOYSA-N 2-amino-6-methyl-1h-pteridin-4-one Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=NC(C)=CN=C21 UDOGNMDURIJYQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWYUFVNJZUSCSM-UHFFFAOYSA-N 2-aminobenzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC(N)=NC2=C1 JWYUFVNJZUSCSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDZYRENCLPUXAX-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1h-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC(C)=NC2=C1 LDZYRENCLPUXAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 2-naphthylamine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N)=CC=C21 JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- WRFYIYOXJWKONR-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-2-methoxyaniline Chemical compound COC1=CC(Br)=CC=C1N WRFYIYOXJWKONR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VFFZWMWTUSXDCB-ZDUSSCGKSA-N 6-[2-[[2-[(2s)-2-cyanopyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]ethylamino]pyridine-3-carbonitrile Chemical compound N1([C@@H](CCC1)C#N)C(=O)CNCCNC1=CC=C(C#N)C=N1 VFFZWMWTUSXDCB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 101150006240 AOX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000009346 Adenosine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108050000203 Adenosine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000001049 Amyloid Human genes 0.000 description 1
- 108010094108 Amyloid Proteins 0.000 description 1
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 108010006591 Apoenzymes Proteins 0.000 description 1
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N Arg-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 102100027936 Attractin Human genes 0.000 description 1
- 101710134735 Attractin Proteins 0.000 description 1
- 230000006974 Aβ toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010068597 Bulbospinal muscular atrophy congenital Diseases 0.000 description 1
- 239000012617 Butyl Sepharose™ 4 Fast Flow Substances 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 description 1
- QFEQDUGQWOEMQG-UHFFFAOYSA-N CNC(C(CC1)NC1=O)=O Chemical compound CNC(C(CC1)NC1=O)=O QFEQDUGQWOEMQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILCFIPONGKBREU-UHFFFAOYSA-N CNC(C(CCC(N)=O)N)=O Chemical compound CNC(C(CCC(N)=O)N)=O ILCFIPONGKBREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008025 Cerebellar ataxia Diseases 0.000 description 1
- 108010078239 Chemokine CX3CL1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108010089448 Cholecystokinin B Receptor Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 208000031124 Dementia Alzheimer type Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108090001081 Dipeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004860 Dipeptidases Human genes 0.000 description 1
- 102100036966 Dipeptidyl aminopeptidase-like protein 6 Human genes 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013818 Fractalkine Human genes 0.000 description 1
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- NJMYZEJORPYOTO-BQBZGAKWSA-N Gln-Pro Chemical group NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O NJMYZEJORPYOTO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108090000369 Glutamate Carboxypeptidase II Proteins 0.000 description 1
- 102000003958 Glutamate Carboxypeptidase II Human genes 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710183768 Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 101000928314 Homo sapiens Aldehyde oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000946794 Homo sapiens C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000804935 Homo sapiens Dipeptidyl aminopeptidase-like protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- YZJSUQQZGCHHNQ-UHFFFAOYSA-N Homoglutamine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(N)=O YZJSUQQZGCHHNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- MLSUZXHSNRBDCI-CYDGBPFRSA-N Ile-Pro-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N MLSUZXHSNRBDCI-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 208000027747 Kennedy disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- LCGISIDBXHGCDW-VKHMYHEASA-N L-glutamine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O LCGISIDBXHGCDW-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 208000008238 Muscle Spasticity Diseases 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDGQXGPQOGUGIX-VIFPVBQESA-N O-BENZYL-l-SERINE Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COCC1=CC=CC=C1 IDGQXGPQOGUGIX-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N O-phosphoserine Chemical compound OC(=O)C(N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 1
- FZBGMXYQPACKNC-HJWJTTGWSA-N Phe-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FZBGMXYQPACKNC-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 108010047386 Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 1
- 102000006877 Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006437 Proprotein Convertases Human genes 0.000 description 1
- 108010044159 Proprotein Convertases Proteins 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 description 1
- GZGFSPWOMUKKCV-NAKRPEOUSA-N Ser-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO GZGFSPWOMUKKCV-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 description 1
- 101000733590 Streptomyces griseus subsp. griseus (strain JCM 4626 / NBRC 13350) Aminopeptidase S Proteins 0.000 description 1
- 101800003906 Substance P Proteins 0.000 description 1
- 102400000096 Substance P Human genes 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTMGKRABARCZAX-OSUNSFLBSA-N Thr-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O VTMGKRABARCZAX-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- VCGOTJGGBXEBFO-FDARSICLSA-N Trp-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VCGOTJGGBXEBFO-FDARSICLSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSPOLEBZTMESFY-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QSPOLEBZTMESFY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 208000006269 X-Linked Bulbo-Spinal Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVUPDWZYVPBWKO-NKGQWRHHSA-N [2-[(2s)-1-[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-methylbutanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-oxoethyl] benzoate;hydrobromide Chemical compound Br.NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)COC(=O)C1=CC=CC=C1 WVUPDWZYVPBWKO-NKGQWRHHSA-N 0.000 description 1
- GEAXDQGWIUNDBZ-NPLJWMOXSA-N [2-[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-oxoethyl] acetate;hydrobromide Chemical compound Br.C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)COC(C)=O GEAXDQGWIUNDBZ-NPLJWMOXSA-N 0.000 description 1
- WJESOXUZZQVMIS-JSWFFFCJSA-N [2-[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-oxoethyl] benzoate;hydrobromide Chemical compound Br.C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)COC(=O)C1=CC=CC=C1 WJESOXUZZQVMIS-JSWFFFCJSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000030120 acrosome reaction Effects 0.000 description 1
- 210000001056 activated astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001642 activated microglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- XXXHSQBVHSJQKS-UHFFFAOYSA-N amino benzoate Chemical compound NOC(=O)C1=CC=CC=C1 XXXHSQBVHSJQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229940058303 antinematodal benzimidazole derivative Drugs 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003693 atypical antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127236 atypical antipsychotics Drugs 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001556 benzimidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N beta-hydroxyethanesulfonic acid Natural products OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 1
- 230000011496 cAMP-mediated signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000004712 cancer cell adhesion Effects 0.000 description 1
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000005392 carboxamide group Chemical group NC(=O)* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000007748 combinatorial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011437 continuous method Methods 0.000 description 1
- 210000003618 cortical neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- CSURFXBOHQPUPW-UHFFFAOYSA-N cyclopentyl(1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-2-ium-3-yl)methanone;chloride Chemical compound [Cl-].C1C2=CC=CC=C2C[NH2+]C1C(=O)C1CCCC1 CSURFXBOHQPUPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical compound [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000687 effect on sperms Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002367 endolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 230000009483 enzymatic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 102000029724 enzyme binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091009282 enzyme binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- OKGNKPYIPKMGLR-ZPCKCTIPSA-N gastrins Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CN=CN1 OKGNKPYIPKMGLR-ZPCKCTIPSA-N 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000004914 glial activation Effects 0.000 description 1
- 230000009688 glial response Effects 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 102000046689 human FOLH1 Human genes 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical group [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- JEGIFBGJZPYMJS-UHFFFAOYSA-N imidazol-1-yl(phenyl)methanone Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)C1=CC=CC=C1 JEGIFBGJZPYMJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N levobunolol Chemical compound O=C1CCCC2=C1C=CC=C2OC[C@@H](O)CNC(C)(C)C IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000002583 male contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229940115256 melanoma vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical group 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N naphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen(.) Chemical compound [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001711 oxyntic cell Anatomy 0.000 description 1
- KLAKIAVEMQMVBT-UHFFFAOYSA-N p-hydroxy-phenacyl alcohol Natural products OCC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 KLAKIAVEMQMVBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N pamoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC=3C4=CC=CC=C4C=C(C=3O)C(=O)O)=C(O)C(C(O)=O)=CC2=C1 WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 108010002689 progonadoliberin I Proteins 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010066823 proline dipeptidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010054321 proneurotensin Proteins 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000002407 reforming Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000698 schizophrenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007507 senile plaque formation Effects 0.000 description 1
- 208000022288 senile plaque formation Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- VDZXAOBGHPKGCS-UHFFFAOYSA-M sodium;1,4-dioxane;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].C1COCCO1 VDZXAOBGHPKGCS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 208000018198 spasticity Diseases 0.000 description 1
- 238000000363 spectroscopic quantification Methods 0.000 description 1
- 238000012306 spectroscopic technique Methods 0.000 description 1
- 230000008010 sperm capacitation Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000009495 sugar coating Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000003774 sulfhydryl reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910001428 transition metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- OVNQNQOVBVQZCE-UHFFFAOYSA-N tyrvalin Chemical compound N1C(=O)C(C(C)C)=NC=C1CC1=CC=C(O)C=C1 OVNQNQOVBVQZCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- SYOKIDBDQMKNDQ-XWTIBIIYSA-N vildagliptin Chemical compound C1C(O)(C2)CC(C3)CC1CC32NCC(=O)N1CCC[C@H]1C#N SYOKIDBDQMKNDQ-XWTIBIIYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/415—1,2-Diazoles
- A61K31/416—1,2-Diazoles condensed with carbocyclic ring systems, e.g. indazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4178—1,3-Diazoles not condensed 1,3-diazoles and containing further heterocyclic rings, e.g. pilocarpine, nitrofurantoin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/06—Tripeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/07—Tetrapeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】哺乳動物グルタミニルシクラーゼ(QC、EC2.3.2.5)の新規生理学的基質、新しいQCエフェクタ、及び前記エフェクターの使用、並びにQC-活性の調節により治療され得る疾患、例えば、哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク型認知症からなる群から選択される疾患の治療用の前記エフェクターを含む医薬組成物の提供。【解決手段】Glu1-ADan,Glu1-ABri,及びGln1-ガストリン(17、及び34)から選択される少なくとも1つのQC-基質のN-末端で、グルタミン酸、又はグルタミン残基のピログルタミン酸残基への転換を調節するのための、薬剤製造用のグルタミニルシクラーゼ(QC)のエフェクターの使用。【選択図】なし
Description
(発明の分野)
本発明は、アンモニアの遊離下における、N末端グルタミン残基のピログルタミン酸(
5-オキソ-プロリン、pGlu*)への分子内環化反応、及び水の遊離下における、N末端グル
タミン酸残基のピログルタミン酸への分子内環化反応を触媒する、グルタミニルシクラー
ゼ(QC、EC 2.3.2.5)に関するものである。
本発明は、哺乳動物QCを金属酵素として同定し、哺乳動物における新規の生理学的基
質、QCの新規エフェクター、及びQC活性の調節によって治療可能な病態の治療のため
の、QCのエフェクターの使用、及びQCのエフェクターを含む医薬組成物を提供する。
さらに、金属相互作用が、QCインヒビターの開発に有用なアプローチであることが示さ
れる。
好ましい実施態様において、本発明は、QC、及びDP IV活性の調節によって治療可能
な病態の治療、又は緩和のために、DP IV、又はDP IV様酵素のインヒビターを組合せるQ
C活性のエフェクターの使用を提供する。
また、QC活性のエフェクターの同定、及び選定のためのスクリーニング方法を提供す
る。
本発明は、アンモニアの遊離下における、N末端グルタミン残基のピログルタミン酸(
5-オキソ-プロリン、pGlu*)への分子内環化反応、及び水の遊離下における、N末端グル
タミン酸残基のピログルタミン酸への分子内環化反応を触媒する、グルタミニルシクラー
ゼ(QC、EC 2.3.2.5)に関するものである。
本発明は、哺乳動物QCを金属酵素として同定し、哺乳動物における新規の生理学的基
質、QCの新規エフェクター、及びQC活性の調節によって治療可能な病態の治療のため
の、QCのエフェクターの使用、及びQCのエフェクターを含む医薬組成物を提供する。
さらに、金属相互作用が、QCインヒビターの開発に有用なアプローチであることが示さ
れる。
好ましい実施態様において、本発明は、QC、及びDP IV活性の調節によって治療可能
な病態の治療、又は緩和のために、DP IV、又はDP IV様酵素のインヒビターを組合せるQ
C活性のエフェクターの使用を提供する。
また、QC活性のエフェクターの同定、及び選定のためのスクリーニング方法を提供す
る。
(背景)
グルタミニルシクラーゼ(QC、EC 2.3.2.5)は、アンモニアの遊離を伴う、N末端グ
ルタミン残基のピログルタミン酸(pGlu*)への分子内環化反応を触媒する。QCは、196
3年にMesserが熱帯植物パパイヤ(Carica papaya)のラテックスからはじめて精製された
(Messer, Mの論文、1963 Nature 4874, 1299)。24年後、類似の酵素活性が、動物脳
下垂体において発見された(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-85
36;Fischer, W. H. 及びSpiess, J.の論文1987 Proc Natl Acad Sci U S A 84, 3628-36
32)。該哺乳動物QCにおいて、QCによる pGluへのGln の転換は、TRH 及びGnRHの前
駆体に見ることができる(Busby, W. H. J.らの論文1987 J Biol Chem 262, 8532-8536;
Fischer, W. H. 及びSpiess, J.の論文、1987 Proc Natl Acad Sci U S A 84, 3628-3632
)。その上、QCの初期局在実験によって、ウシ脳下垂体における触媒の推定的産物との
同一場所での局在が明らかになり、さらに、ペプチドホルモン合成における示唆された機
能が裏付けられた(Bockers, T. M.らの論文、1995 J Neuroendocrinol 7, 445-453)。
これに対し、植物QCの生理学的機能は、明らかでない。C.パパイヤ由来の該酵素の場合
、病原微生物に対する植物防御における役割が示唆された(El Moussaoui, A.らの論文、
2001 Cell Mol Life Sci 58, 556-570)。近年、配列比較によって、他の植物からの推定
上QCが同定された(Dahl, S. W.らの論文、2000 Protein Expr Purif 20, 27-36)。こ
れらの酵素の生理学的機能は、依然として明らかとなっていない。
グルタミニルシクラーゼ(QC、EC 2.3.2.5)は、アンモニアの遊離を伴う、N末端グ
ルタミン残基のピログルタミン酸(pGlu*)への分子内環化反応を触媒する。QCは、196
3年にMesserが熱帯植物パパイヤ(Carica papaya)のラテックスからはじめて精製された
(Messer, Mの論文、1963 Nature 4874, 1299)。24年後、類似の酵素活性が、動物脳
下垂体において発見された(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-85
36;Fischer, W. H. 及びSpiess, J.の論文1987 Proc Natl Acad Sci U S A 84, 3628-36
32)。該哺乳動物QCにおいて、QCによる pGluへのGln の転換は、TRH 及びGnRHの前
駆体に見ることができる(Busby, W. H. J.らの論文1987 J Biol Chem 262, 8532-8536;
Fischer, W. H. 及びSpiess, J.の論文、1987 Proc Natl Acad Sci U S A 84, 3628-3632
)。その上、QCの初期局在実験によって、ウシ脳下垂体における触媒の推定的産物との
同一場所での局在が明らかになり、さらに、ペプチドホルモン合成における示唆された機
能が裏付けられた(Bockers, T. M.らの論文、1995 J Neuroendocrinol 7, 445-453)。
これに対し、植物QCの生理学的機能は、明らかでない。C.パパイヤ由来の該酵素の場合
、病原微生物に対する植物防御における役割が示唆された(El Moussaoui, A.らの論文、
2001 Cell Mol Life Sci 58, 556-570)。近年、配列比較によって、他の植物からの推定
上QCが同定された(Dahl, S. W.らの論文、2000 Protein Expr Purif 20, 27-36)。こ
れらの酵素の生理学的機能は、依然として明らかとなっていない。
植物、及び動物由来の公知のQCは、基質N末端のL-グルタミンに高い特異性を示し、
その速度論的挙動は、ミカエリス−メンテン式に従うことが見い出された(Pohl, T.らの
論文、1991 Proc Natl Acad Sci U S A 88, 10059-10063;Consalvo, A. P.らの論文、19
88 Anal Biochem 175, 131-138;Gololobov, M. Y.らの論文、1996 Biol Chem Hoppe Sey
ler 377, 395-398)。しかしながら、C.パパイヤ由来QC、及び保存性の高い哺乳動物由
来のQCの一次構造の比較では、配列の相同性がないことが明らかになった(Dahl, S. W
.らの論文、2000 Protein Expr Purif 20, 27-36)。該植物QCが、新しい酵素ファミリ
ーに属していると思われるのに対し(Dahl, S. W.らの論文、2000 Protein Expr Purif 2
0, 27-36)、哺乳動物QCは細菌アミノペプチダーゼと顕著な配列相同性をもつことが見
い出され(Bateman, R. C.らの論文、2001 Biochemistry 40, 11246-11250)、植物、及
び動物由来のQCは異なる進化上の起源をもつという結論が導かれた。
その速度論的挙動は、ミカエリス−メンテン式に従うことが見い出された(Pohl, T.らの
論文、1991 Proc Natl Acad Sci U S A 88, 10059-10063;Consalvo, A. P.らの論文、19
88 Anal Biochem 175, 131-138;Gololobov, M. Y.らの論文、1996 Biol Chem Hoppe Sey
ler 377, 395-398)。しかしながら、C.パパイヤ由来QC、及び保存性の高い哺乳動物由
来のQCの一次構造の比較では、配列の相同性がないことが明らかになった(Dahl, S. W
.らの論文、2000 Protein Expr Purif 20, 27-36)。該植物QCが、新しい酵素ファミリ
ーに属していると思われるのに対し(Dahl, S. W.らの論文、2000 Protein Expr Purif 2
0, 27-36)、哺乳動物QCは細菌アミノペプチダーゼと顕著な配列相同性をもつことが見
い出され(Bateman, R. C.らの論文、2001 Biochemistry 40, 11246-11250)、植物、及
び動物由来のQCは異なる進化上の起源をもつという結論が導かれた。
欧州特許出願公開第02 011 349.4号には、昆虫グルタミニルシクラーゼをコードしてい
るポリヌクレオチド、それによってコードされるポリペプチドが開示されている。さらに
、この出願は、該発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供する
。昆虫QCを含む精製ポリペプチド、及び宿主細胞は、グルタミニルシクラーゼ活性を低
下させる薬剤のスクリーニング方法において有用である。そのような薬剤は、殺虫剤と同
様に有用であると記載されている。
るポリヌクレオチド、それによってコードされるポリペプチドが開示されている。さらに
、この出願は、該発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を提供する
。昆虫QCを含む精製ポリペプチド、及び宿主細胞は、グルタミニルシクラーゼ活性を低
下させる薬剤のスクリーニング方法において有用である。そのような薬剤は、殺虫剤と同
様に有用であると記載されている。
アルツハイマー病(AD)は、神経細胞変性、活性化アストロサイト、及び活性化マイク
ログリアが密接に関連する細胞外アミロイド斑の異常蓄積が特徴である(Terry, R. D.、
及びKatzman, R.の論文、1983 Ann Neurol 14, 497-506;Glenner, G. G.、及びWong, C.
W.の論文、1984 Biochem Biophys Res Comm 120, 885-890;Intagaki, S.らの論文、198
9 J Neuroimmunol 24, 173-182;Funato, H.らの論文、1998 Am J Pathol 152, 983-992
;Selkoe, D. J.の論文、2001 Physiol Rev 81, 741-766)。アミロイド-β(Aβ)ペプ
チドは老人斑の主要構成成分であり、ADの発病、及び進行、遺伝学的研究が支持する仮説
に直接関与していると考えられている(Glenner, G. G.、及びWong, C. W.の論文、1984
Biochem Biophys Res Comm 120, 885-890;Borchelt, D. R.らの論文、1996 Neuron 17,
1005-1013;Lemere, C. A.らの論文、1996 Nat Med 2, 1146-1150;Mann, D. M.、及びIw
atsubo, T.の論文、1996 Neurodegeneration 5, 115-120;Citron, M.らの論文、1997 Na
t Med 3, 67-72;Selkoe, D. J.の論文、2001 Physiol Rev 81, 741-766)。Aβは、β-
アミロイド前駆体タンパク質(APP)のタンパク質から(Kang, J.らの論文、1987 Nature
325, 733-736;Selkoe, D. J. 1998 Trends Cell Biol 8, 447-453)、AβのN末端でベ
ータセクレターゼ、及びC末端でのガンマセクレターゼにより配列切断されるタンパク質
分解プロセスによって生成される(Haass, C.、及びSelkoe, D. J.の論文 1993 Cell 75,
1039-1042;Simons, M.らの論文、1996 J Neurosci 16 899-908)。該N末端がL-Aspで
始まる主要なAβペプチド(Aβ1-42/40)に加えて、N末端切断型の多異種混合が老人斑
に生じる。そのような短縮型ペプチドは、フルレングス型に比べてインビトロでより神経
毒性が高く、より急速に凝集することが報告された(Pike, C. J.らの論文、1995 J Biol
Chem 270 23895-23898)。N末端切断型ペプチドは、家族性アルツハイマー病(FAD)患
者において過剰生成されること(Saido, T. C.らの論文、1995 Neuron 14, 457-466;Rus
so, C.らの論文、2000 Nature 405, 531-532)、ダウン症の脳で早期に出現し、加齢とと
もに増加することが知られている(Russo, C.らの論文、1997 FEBS Lett 409, 411-416,
Russo, C.らの論文、2001 Neurobiol Dis 8, 173-180;Tekirian, T. L.らの論文、1998
J Neuropathol Exp Neurol 57, 76-94)。最後に、それらの量は該疾患の進行性重症度を
反映する(Russo, C.らの論文、1997 FEBS Lett 409, 411-416)。さらに、付加的翻訳後
プロセスは、1及び7位のアスパラギン酸の異性化、又はラセミ化によって、及び残基3
及び11位のグルタミン酸の環化によって、N末端を改質し得る。3位にピログルタミン
酸を含む異性体[pGlu3]Aβ(3-40/42)は、老人斑内のN末端切断種の顕著な型で、−全A
β量の約50%−を占め(Mori, H.らの論文、1992 J Biol Chem 267, 17082-17086;Sai
do, T. C.らの論文、1995 Neuron 14, 457-466;Russo, C.らの論文、1997 FEBS Lett 40
9, 411-416;Tekirian, T. L.らの論文、1998 J Neuropathol Exp Neurol 57, 76-94;Ge
ddes, J. W.らの論文、1999 Neurobiol Aging 20, 75-79;Harigaya, Y.らの論文、2000
Biochem Biophys Res Commun 276, 422-427)、かつ、それはアミロイド傷害以前にも存
在する(Lalowski, M.らの論文、1996 J Biol Chem 271, 33623-33631)。[pGlu3]Aβ(3-
40/42)ペプチドの蓄積は、凝集を増進しほとんどのアミノペプチダーゼに対する耐性を付
与する、構造上の改質によるものと思われる(Saido, T. C.らの論文、1995 Neuron 14,
457-466 ;Tekirian, T. L.らの論文、1999 J Neurochem 73, 1584-1589)。この証拠は
、アルツハイマー病の発症機序における[pGlu3]Aβ(3-40/42)ペプチドのきわめて重要な
役割の手掛かりを提供する。しかしながら、それらの神経毒性、及び凝集特性は比較的ほ
とんど知られていない(He, W.、及びBarrow, C. J.の論文、1999 Biochemistry 38, 108
71-10877;Tekirian, T. L.らの論文、1999 J Neurochem 73, 1584-1589)。さらに、活
性化グリアは厳密に老人斑に関連しており、アミロイド沈着の蓄積に積極的に寄与しうる
が、該イソ型のグリア細胞への作用、及び該ペプチドへのグリア反応は全く知られていな
い。近年の研究では、Aβ(1-42)、Aβ(1-40)、[pGlu3]Aβ(3-42)、及び[pGlu3]Aβ(3-40)
ペプチドの毒性、凝集特性、及び異化を神経細胞培養、及びグリア細胞培養で調べ、かつ
ピログルタミン酸改質がAβ-ペプチドの毒性を高め、さらに培養アストロサイトによる該
ペプチドの分解を阻害することが示された。Shirotaniら(2002)は、インビトロでシンド
ビスウィルスにより感染した初代皮質神経細胞における[pGlu3]Aβ-ペプチドの産生を調
べた。彼らは、アミノ酸置換、及びアミノ酸欠失により、[pGlu3]Aβの潜在前駆体をコー
ドするアミロイド前駆体タンパク質相補的DNAを作成した。本来の前駆体のグルタミン酸
の代わりにN末端グルタミン残基ではじまる1種の人工前駆体では、グルタミニルシクラ
ーゼによるピログルタミン酸への自然転換、又は酵素的転換が示唆された。[pGlu3]Aβの
本来の前駆体における3位のN末端グルタミン酸の環化機構は、インビボでは確定されな
かった(Shirotani, K.らの論文、(2002)Neurosci Lett 327, 25-28)。
ログリアが密接に関連する細胞外アミロイド斑の異常蓄積が特徴である(Terry, R. D.、
及びKatzman, R.の論文、1983 Ann Neurol 14, 497-506;Glenner, G. G.、及びWong, C.
W.の論文、1984 Biochem Biophys Res Comm 120, 885-890;Intagaki, S.らの論文、198
9 J Neuroimmunol 24, 173-182;Funato, H.らの論文、1998 Am J Pathol 152, 983-992
;Selkoe, D. J.の論文、2001 Physiol Rev 81, 741-766)。アミロイド-β(Aβ)ペプ
チドは老人斑の主要構成成分であり、ADの発病、及び進行、遺伝学的研究が支持する仮説
に直接関与していると考えられている(Glenner, G. G.、及びWong, C. W.の論文、1984
Biochem Biophys Res Comm 120, 885-890;Borchelt, D. R.らの論文、1996 Neuron 17,
1005-1013;Lemere, C. A.らの論文、1996 Nat Med 2, 1146-1150;Mann, D. M.、及びIw
atsubo, T.の論文、1996 Neurodegeneration 5, 115-120;Citron, M.らの論文、1997 Na
t Med 3, 67-72;Selkoe, D. J.の論文、2001 Physiol Rev 81, 741-766)。Aβは、β-
アミロイド前駆体タンパク質(APP)のタンパク質から(Kang, J.らの論文、1987 Nature
325, 733-736;Selkoe, D. J. 1998 Trends Cell Biol 8, 447-453)、AβのN末端でベ
ータセクレターゼ、及びC末端でのガンマセクレターゼにより配列切断されるタンパク質
分解プロセスによって生成される(Haass, C.、及びSelkoe, D. J.の論文 1993 Cell 75,
1039-1042;Simons, M.らの論文、1996 J Neurosci 16 899-908)。該N末端がL-Aspで
始まる主要なAβペプチド(Aβ1-42/40)に加えて、N末端切断型の多異種混合が老人斑
に生じる。そのような短縮型ペプチドは、フルレングス型に比べてインビトロでより神経
毒性が高く、より急速に凝集することが報告された(Pike, C. J.らの論文、1995 J Biol
Chem 270 23895-23898)。N末端切断型ペプチドは、家族性アルツハイマー病(FAD)患
者において過剰生成されること(Saido, T. C.らの論文、1995 Neuron 14, 457-466;Rus
so, C.らの論文、2000 Nature 405, 531-532)、ダウン症の脳で早期に出現し、加齢とと
もに増加することが知られている(Russo, C.らの論文、1997 FEBS Lett 409, 411-416,
Russo, C.らの論文、2001 Neurobiol Dis 8, 173-180;Tekirian, T. L.らの論文、1998
J Neuropathol Exp Neurol 57, 76-94)。最後に、それらの量は該疾患の進行性重症度を
反映する(Russo, C.らの論文、1997 FEBS Lett 409, 411-416)。さらに、付加的翻訳後
プロセスは、1及び7位のアスパラギン酸の異性化、又はラセミ化によって、及び残基3
及び11位のグルタミン酸の環化によって、N末端を改質し得る。3位にピログルタミン
酸を含む異性体[pGlu3]Aβ(3-40/42)は、老人斑内のN末端切断種の顕著な型で、−全A
β量の約50%−を占め(Mori, H.らの論文、1992 J Biol Chem 267, 17082-17086;Sai
do, T. C.らの論文、1995 Neuron 14, 457-466;Russo, C.らの論文、1997 FEBS Lett 40
9, 411-416;Tekirian, T. L.らの論文、1998 J Neuropathol Exp Neurol 57, 76-94;Ge
ddes, J. W.らの論文、1999 Neurobiol Aging 20, 75-79;Harigaya, Y.らの論文、2000
Biochem Biophys Res Commun 276, 422-427)、かつ、それはアミロイド傷害以前にも存
在する(Lalowski, M.らの論文、1996 J Biol Chem 271, 33623-33631)。[pGlu3]Aβ(3-
40/42)ペプチドの蓄積は、凝集を増進しほとんどのアミノペプチダーゼに対する耐性を付
与する、構造上の改質によるものと思われる(Saido, T. C.らの論文、1995 Neuron 14,
457-466 ;Tekirian, T. L.らの論文、1999 J Neurochem 73, 1584-1589)。この証拠は
、アルツハイマー病の発症機序における[pGlu3]Aβ(3-40/42)ペプチドのきわめて重要な
役割の手掛かりを提供する。しかしながら、それらの神経毒性、及び凝集特性は比較的ほ
とんど知られていない(He, W.、及びBarrow, C. J.の論文、1999 Biochemistry 38, 108
71-10877;Tekirian, T. L.らの論文、1999 J Neurochem 73, 1584-1589)。さらに、活
性化グリアは厳密に老人斑に関連しており、アミロイド沈着の蓄積に積極的に寄与しうる
が、該イソ型のグリア細胞への作用、及び該ペプチドへのグリア反応は全く知られていな
い。近年の研究では、Aβ(1-42)、Aβ(1-40)、[pGlu3]Aβ(3-42)、及び[pGlu3]Aβ(3-40)
ペプチドの毒性、凝集特性、及び異化を神経細胞培養、及びグリア細胞培養で調べ、かつ
ピログルタミン酸改質がAβ-ペプチドの毒性を高め、さらに培養アストロサイトによる該
ペプチドの分解を阻害することが示された。Shirotaniら(2002)は、インビトロでシンド
ビスウィルスにより感染した初代皮質神経細胞における[pGlu3]Aβ-ペプチドの産生を調
べた。彼らは、アミノ酸置換、及びアミノ酸欠失により、[pGlu3]Aβの潜在前駆体をコー
ドするアミロイド前駆体タンパク質相補的DNAを作成した。本来の前駆体のグルタミン酸
の代わりにN末端グルタミン残基ではじまる1種の人工前駆体では、グルタミニルシクラ
ーゼによるピログルタミン酸への自然転換、又は酵素的転換が示唆された。[pGlu3]Aβの
本来の前駆体における3位のN末端グルタミン酸の環化機構は、インビボでは確定されな
かった(Shirotani, K.らの論文、(2002)Neurosci Lett 327, 25-28)。
家族性英国型認知症(Familial British Dementia) (FBD)、及び家族性デンマーク型認
知症(Familial Danish Dementia)(FDD)は、認知機能障害、痙縮、及び小脳性運動失調に
より特徴付けられる、早期発症常染色体優性疾患である(Ghiso, J. らの論文 2000, Ann
N Y Acad Sci 903, 129-137; Vidal, R. らの論文 1999, Nature 399, 776-781; Vidal,
R. らの論文 2004, J Neuropathol Exp Neurol 63, 787-800)。アルツハイマー病に類似
して、広範囲の実質、及び血管アミロイド沈着が、海馬神経変性、補体、及びグリアの活
性化に付随して、患者に形成される(Rostagno, A. らの論文 2002, J Biol Chem 277, 49
782-49790)。該疾患は、野生型BRIに比べてアミノ酸が11個長いオープンリーディングフ
レームに導く該BRI遺伝子(SwissProt Q9Y287)の異なる変異により生じる。FBDの場合、該
ORFの変化は、BRI (BRI-L)の終止コドンの変異により生じ、一方、FDDにおいて、10-ヌク
レオチド重複-挿入が、より大きいBRI (BRI-D)へと導く(Ghiso J. らの論文 2001 Amyloi
d 8, 277-284; Rostagno, A. らの論文 2002 J Biol Chem 277, 49782-49790)。染色体13
にコードされているクラス2膜貫通型タンパク質であるBRIは、該C-末端領域のフリン(fu
rin)、及び他のプロホルモン転換酵素により処理され、23アミノ酸長さのペプチドを放出
することが示されている(Kim, S. H. らの論文 2000 Ann N Y Acad Sci 920, 93-99; Kim
, S. H. らの論文 2002 J Biol Chem 277, 1872-1877)。該変異体BRIタンパク質BRI-D、
及びBRI-Lの開裂により、ペプチド(ABri、及びADan, 両方とも34アミノ酸)を生成する。
これらは、凝集する傾向があり、非繊維沈着、並びにアミロイド原繊維を生じる(El Agna
f, O. M. らの論文 2004 Protein Pept Lett 11, 207-212; El Agnaf, O. M. らの論文 2
001 Biochemistry 40, 3449-3457; El Agnaf, O. M. らの論文 2001 J Mol Biol 310, 15
7-168; Srinivasan らの論文 2003 J Mol Biol 333, 1003-1023)。該ADan、及びABriペプ
チドは、これらのN-末端22アミノ酸が同一であるが、異なるC-末端領域を含む。該C-末端
部は、原繊維形成、及び神経毒性に必須であることが示されている(El Agnaf, O. M. ら
の論文 2004 Protein Pept Lett 11, 207-212)。
知症(Familial Danish Dementia)(FDD)は、認知機能障害、痙縮、及び小脳性運動失調に
より特徴付けられる、早期発症常染色体優性疾患である(Ghiso, J. らの論文 2000, Ann
N Y Acad Sci 903, 129-137; Vidal, R. らの論文 1999, Nature 399, 776-781; Vidal,
R. らの論文 2004, J Neuropathol Exp Neurol 63, 787-800)。アルツハイマー病に類似
して、広範囲の実質、及び血管アミロイド沈着が、海馬神経変性、補体、及びグリアの活
性化に付随して、患者に形成される(Rostagno, A. らの論文 2002, J Biol Chem 277, 49
782-49790)。該疾患は、野生型BRIに比べてアミノ酸が11個長いオープンリーディングフ
レームに導く該BRI遺伝子(SwissProt Q9Y287)の異なる変異により生じる。FBDの場合、該
ORFの変化は、BRI (BRI-L)の終止コドンの変異により生じ、一方、FDDにおいて、10-ヌク
レオチド重複-挿入が、より大きいBRI (BRI-D)へと導く(Ghiso J. らの論文 2001 Amyloi
d 8, 277-284; Rostagno, A. らの論文 2002 J Biol Chem 277, 49782-49790)。染色体13
にコードされているクラス2膜貫通型タンパク質であるBRIは、該C-末端領域のフリン(fu
rin)、及び他のプロホルモン転換酵素により処理され、23アミノ酸長さのペプチドを放出
することが示されている(Kim, S. H. らの論文 2000 Ann N Y Acad Sci 920, 93-99; Kim
, S. H. らの論文 2002 J Biol Chem 277, 1872-1877)。該変異体BRIタンパク質BRI-D、
及びBRI-Lの開裂により、ペプチド(ABri、及びADan, 両方とも34アミノ酸)を生成する。
これらは、凝集する傾向があり、非繊維沈着、並びにアミロイド原繊維を生じる(El Agna
f, O. M. らの論文 2004 Protein Pept Lett 11, 207-212; El Agnaf, O. M. らの論文 2
001 Biochemistry 40, 3449-3457; El Agnaf, O. M. らの論文 2001 J Mol Biol 310, 15
7-168; Srinivasan らの論文 2003 J Mol Biol 333, 1003-1023)。該ADan、及びABriペプ
チドは、これらのN-末端22アミノ酸が同一であるが、異なるC-末端領域を含む。該C-末端
部は、原繊維形成、及び神経毒性に必須であることが示されている(El Agnaf, O. M. ら
の論文 2004 Protein Pept Lett 11, 207-212)。
該ABri、及びADanペプチドの該N-末端は、ピログルタミル形成によりブロックされてい
ることが示されている。アルツハイマー病において、Aβの該N-末端でのピログルタミル
形成に従って、pGluが、グルタミン酸から形成される(Ghiso J. らの文献 2001 Amyloid
8; Saido らの文献 1995 Neuron 14, 457-466)。次々にピログルタミル形成が、多くのア
ミノペプチダーゼによる分解の方に、該ペプチドを安定化し、従って、該疾患の進行を誘
発する。凝集形成は、細胞外に進み、該細胞の分泌経路においても進行することが示され
ている(Kim らの論文 2002 J Biol Chem 277, 1872-1877)。従って、グルタミニル、及び
グルタミン酸シクラーゼの阻害による、神経毒性ABri、及びADanペプチドのN-末端でのpG
lu形成抑制は、FBD、及びFDDを治療する新しいアプローチを表す。
ることが示されている。アルツハイマー病において、Aβの該N-末端でのピログルタミル
形成に従って、pGluが、グルタミン酸から形成される(Ghiso J. らの文献 2001 Amyloid
8; Saido らの文献 1995 Neuron 14, 457-466)。次々にピログルタミル形成が、多くのア
ミノペプチダーゼによる分解の方に、該ペプチドを安定化し、従って、該疾患の進行を誘
発する。凝集形成は、細胞外に進み、該細胞の分泌経路においても進行することが示され
ている(Kim らの論文 2002 J Biol Chem 277, 1872-1877)。従って、グルタミニル、及び
グルタミン酸シクラーゼの阻害による、神経毒性ABri、及びADanペプチドのN-末端でのpG
lu形成抑制は、FBD、及びFDDを治療する新しいアプローチを表す。
ジペプチジルペプチダーゼIV(DP IV)は、腎臓、肝臓、及び腸を含む多様な人体組織
で見出される、プロリンの後(より少ない程度にアラニンの後、セリンの後、又はグリシ
ンの後)を開裂するセリンプロテアーゼであり、かつペプチド鎖からN末端のジペプチド
を開裂する。最近、DP IVが神経ペプチド代謝、T細胞活性化、癌細胞の内皮への接着、
及びHIVのリンパ球様細胞への侵入に重要な役割を果たすことが示された。それについて
は、国際公開第02/34242号、国際公開第02/34243号、国際公開第03/002595号、及び国
際公開第03/002596号を参照されたい。
で見出される、プロリンの後(より少ない程度にアラニンの後、セリンの後、又はグリシ
ンの後)を開裂するセリンプロテアーゼであり、かつペプチド鎖からN末端のジペプチド
を開裂する。最近、DP IVが神経ペプチド代謝、T細胞活性化、癌細胞の内皮への接着、
及びHIVのリンパ球様細胞への侵入に重要な役割を果たすことが示された。それについて
は、国際公開第02/34242号、国際公開第02/34243号、国際公開第03/002595号、及び国
際公開第03/002596号を参照されたい。
国際公開第99/61431号に記載された該DP IVインヒビターは、アミノ酸残基、及びチア
ゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリン、L-
アロ-イソロイシルチアゾリン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシ
ルチアゾリン、L-アロ-イソロイシルピロリジン、及びその塩を含む。
ゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリン、L-
アロ-イソロイシルチアゾリン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシ
ルチアゾリン、L-アロ-イソロイシルピロリジン、及びその塩を含む。
さらなる低分子量ジペプチジルペプチダーゼIVインヒビターの例には、テトラヒドロイ
ソキノリン-3-カルボキサミド誘導体、N-置換2-シアノピロール、及び-ピロリジン、N-(
N'-置換グリシル)-2-シアノピロリジン、N-(置換グリシル)-チアゾリジン、N-(置換
グリシル)-4-シアノチアゾリジン、アミノ-アシル-ボロノ-プロピル-インヒビター、シ
クロプロピル-融合ピロリジン、及び複素環化合物のような薬剤がある。ジペプチジルペ
プチダーゼIVインヒビターは、下記の文献に記載されている:米国特許第6,380,398号、
米国特許第6,011,155号、米国特許第6,107,317号、米国特許第6,110,949号、米国特許第6
,124,305号、米国特許第6,172,081号、国際公開第 95/15309号、国際公開第99/61431号
、国際公開第99/67278号、国際公開第99/67279号、ドイツ特許第198 34 591号公報、国
際公開第97/40832号、ドイツ特許第196 16 486 C 2号公報、国際公開第98/19998号、国
際公開第00/07617号、国際公開第99/38501号、国際公開第99/46272号、国際公開第99
/38501号、国際公開第01/68603号、国際公開第01/40180号、国際公開第01/8133号、
国際公開第01/81304号、国際公開第01/55105、国際公開第02/02560号、及び国際公開
第02/14271号、国際公開第02/04610号、国際公開第02/051836号、国際公開第02/0684
20号、国際公開第02/076450号、国際公開第02/083128号、国際公開第02/38541号、国
際公開第03/000180号、国際公開第03/000181号、国際公開第03/000250号、国際公開第
03/002530号、国際公開第03/002531号、国際公開第03/002553号、国際公開第03/0025
93号、国際公開第03/004496号、国際公開第03/024942号、及び国際公開第03/024965号
である。これらの文献に教示されている内容は、その全体、特にインヒビター、その定義
、使用、及び産生に関して、引用により本明細書に取り込まれるものとする。
ソキノリン-3-カルボキサミド誘導体、N-置換2-シアノピロール、及び-ピロリジン、N-(
N'-置換グリシル)-2-シアノピロリジン、N-(置換グリシル)-チアゾリジン、N-(置換
グリシル)-4-シアノチアゾリジン、アミノ-アシル-ボロノ-プロピル-インヒビター、シ
クロプロピル-融合ピロリジン、及び複素環化合物のような薬剤がある。ジペプチジルペ
プチダーゼIVインヒビターは、下記の文献に記載されている:米国特許第6,380,398号、
米国特許第6,011,155号、米国特許第6,107,317号、米国特許第6,110,949号、米国特許第6
,124,305号、米国特許第6,172,081号、国際公開第 95/15309号、国際公開第99/61431号
、国際公開第99/67278号、国際公開第99/67279号、ドイツ特許第198 34 591号公報、国
際公開第97/40832号、ドイツ特許第196 16 486 C 2号公報、国際公開第98/19998号、国
際公開第00/07617号、国際公開第99/38501号、国際公開第99/46272号、国際公開第99
/38501号、国際公開第01/68603号、国際公開第01/40180号、国際公開第01/8133号、
国際公開第01/81304号、国際公開第01/55105、国際公開第02/02560号、及び国際公開
第02/14271号、国際公開第02/04610号、国際公開第02/051836号、国際公開第02/0684
20号、国際公開第02/076450号、国際公開第02/083128号、国際公開第02/38541号、国
際公開第03/000180号、国際公開第03/000181号、国際公開第03/000250号、国際公開第
03/002530号、国際公開第03/002531号、国際公開第03/002553号、国際公開第03/0025
93号、国際公開第03/004496号、国際公開第03/024942号、及び国際公開第03/024965号
である。これらの文献に教示されている内容は、その全体、特にインヒビター、その定義
、使用、及び産生に関して、引用により本明細書に取り込まれるものとする。
本発明は、Glu1-ABri, Glu1-ADan, Gln3- Aβ(3-40/42), 及びGln1-ガストリン(17、及
び34)からなる群から選択された哺乳動物QCの新規生理学的基質、並びにQC活性の調
節によって治療可能な病態、好ましくは、哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感染
を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群(Zollig
er-Ellison Syndrome)、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク型認知症からなる群
から選択される病態の治療のための、QCエフェクターの使用、及びQCエフェクターを
含む医薬組成物を提供する。
び34)からなる群から選択された哺乳動物QCの新規生理学的基質、並びにQC活性の調
節によって治療可能な病態、好ましくは、哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感染
を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群(Zollig
er-Ellison Syndrome)、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク型認知症からなる群
から選択される病態の治療のための、QCエフェクターの使用、及びQCエフェクターを
含む医薬組成物を提供する。
阻害研究により、ヒトQCは、金属依存性トランスフェラーゼであることが示された。
QCのアポ酵素は、亜鉛イオンにより最も効果的に活性化され得て、かつ、亜鉛依存性ア
ミノペプチダーゼの金属結合モチーフは、ヒトQCにも存在する。金属と結合する活性部
位と相互作用する化合物は、QCの有力なインヒビターである。
QCのアポ酵素は、亜鉛イオンにより最も効果的に活性化され得て、かつ、亜鉛依存性ア
ミノペプチダーゼの金属結合モチーフは、ヒトQCにも存在する。金属と結合する活性部
位と相互作用する化合物は、QCの有力なインヒビターである。
予想外に、組み換えヒトQCは、脳抽出物由来QCの活性と同様に、N末端グルタミニ
ル、並びにグルタミン酸環化反応の両方を触媒することが示された。最も特筆すべきこと
は、シクラーゼ触媒のGlu1-転換がpH 6.0付近で活発なのに対し、pGlu-誘導体へのGln1-
転換は至適pH 8.0付近で起こるという発明である。それ故、pGlu-Aβに関連するペプチド
の産生は、組み換えヒトQC、及びブタ脳下垂体抽出物由来QCの活性阻害によって抑制
できるので、該酵素QCは、本発明に従って、アルツハイマー病治療に用いる薬剤開発の
標的である。
本発明は、任意に従来の担体、及び/又は賦形剤と共に少なくとも1種のQCのエフェ
クターを含むか;又は任意に従来の担体、及び/又は賦形剤と共に少なくとも1種のQC
のエフェクターを、少なくとも1種のDP IVインヒビターと共に含む、非経口、経腸、又
は経口投与に用いる医薬組成物を提供する。
本発明は、一般的に式1により記載され得る、全ての立体異性体を含むQC-インヒビタ
ー、又はその医薬として許容し得る塩を提供する:
ル、並びにグルタミン酸環化反応の両方を触媒することが示された。最も特筆すべきこと
は、シクラーゼ触媒のGlu1-転換がpH 6.0付近で活発なのに対し、pGlu-誘導体へのGln1-
転換は至適pH 8.0付近で起こるという発明である。それ故、pGlu-Aβに関連するペプチド
の産生は、組み換えヒトQC、及びブタ脳下垂体抽出物由来QCの活性阻害によって抑制
できるので、該酵素QCは、本発明に従って、アルツハイマー病治療に用いる薬剤開発の
標的である。
本発明は、任意に従来の担体、及び/又は賦形剤と共に少なくとも1種のQCのエフェ
クターを含むか;又は任意に従来の担体、及び/又は賦形剤と共に少なくとも1種のQC
のエフェクターを、少なくとも1種のDP IVインヒビターと共に含む、非経口、経腸、又
は経口投与に用いる医薬組成物を提供する。
本発明は、一般的に式1により記載され得る、全ての立体異性体を含むQC-インヒビタ
ー、又はその医薬として許容し得る塩を提供する:
アルケニル鎖、分岐又は非分岐アルキニル鎖、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素
環、アザ-アミノ酸、アミノ酸又はその類似物(mimetic)、ペプチド又はその類似物であり
;上記残基の全ては、任意に置換されており、かつnは0-2であり得る。)。
(ペプチド配列)
本明細書中で言及し、かつ使用したペプチドは、下記の配列を有する。
Aβ(1-42):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-
Ile-Ala
Aβ(1-40):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
Aβ(3-42):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala
Aβ(3-40):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
Aβ(3-11)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
本明細書中で言及し、かつ使用したペプチドは、下記の配列を有する。
Aβ(1-42):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-
Ile-Ala
Aβ(1-40):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
Aβ(3-42):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala
Aβ(3-40):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
Aβ(3-11)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
Aβ(1-21)a:
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-NH2
Aβ(3-21)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
Gln3-Aβ(3-40):
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
Gln3-Aβ(3-21)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
Gln3-Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
Gln3-Aβ(3-11)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
ABri
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn
Glu1-ABri
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn
ADan
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr
Glu1-ADan
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-NH2
Aβ(3-21)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
Gln3-Aβ(3-40):
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
Gln3-Aβ(3-21)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
Gln3-Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
Gln3-Aβ(3-11)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2
ABri
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn
Glu1-ABri
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn
ADan
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr
Glu1-ADan
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr
(発明の詳細な説明)
本発明は、a)インビボQC活性の調節によって治療可能な、哺乳動物の疾患の治療、
及び/又は、b)QC活性の調節によって引き起こされる、pGlu含有ペプチドの活性に基
づく生理的プロセスの調節のための、グルタミニルシクラーゼ(QC)のエフェクターを
提供する。
さらに、本発明は哺乳動物におけるグルタミニルシクラーゼ(QC、EC 2.3.2.5)、及
び/又はQC様酵素の阻害に用いる化合物を提供し、かつQC活性に関わる病態の治療の
ための、QC活性のインヒビターの使用を提供する。
さらに本発明は、哺乳動物におけるグルタミニルシクラーゼ(QC, EC2.3.2.5)、及び/
又はQC様酵素を阻害する化合物、及びQC活性に関連した病態を治療するための、QC
活性のインヒビターの使用を提供する。
本発明は、a)インビボQC活性の調節によって治療可能な、哺乳動物の疾患の治療、
及び/又は、b)QC活性の調節によって引き起こされる、pGlu含有ペプチドの活性に基
づく生理的プロセスの調節のための、グルタミニルシクラーゼ(QC)のエフェクターを
提供する。
さらに、本発明は哺乳動物におけるグルタミニルシクラーゼ(QC、EC 2.3.2.5)、及
び/又はQC様酵素の阻害に用いる化合物を提供し、かつQC活性に関わる病態の治療の
ための、QC活性のインヒビターの使用を提供する。
さらに本発明は、哺乳動物におけるグルタミニルシクラーゼ(QC, EC2.3.2.5)、及び/
又はQC様酵素を阻害する化合物、及びQC活性に関連した病態を治療するための、QC
活性のインヒビターの使用を提供する。
また、本発明はアルツハイマー病、及びダウン症の新規な治療方法を提供する。アルツ
ハイマー病、及びダウン症の脳に沈着したアミロイドβ-ペプチドのN末端は、ピログル
タミン酸を有する。pGluの産生は、該疾患の発症、及び進行における重要な事象である。
その理由は、改質されたアミロイドβ-ペプチドは、β-アミロイドの凝集、及び毒性を増
大し、疾患の発病、及び進行を悪化させ得るからである(Russo, C.らの論文、2002 J Ne
urochem 82, 1480-1489)。
ハイマー病、及びダウン症の脳に沈着したアミロイドβ-ペプチドのN末端は、ピログル
タミン酸を有する。pGluの産生は、該疾患の発症、及び進行における重要な事象である。
その理由は、改質されたアミロイドβ-ペプチドは、β-アミロイドの凝集、及び毒性を増
大し、疾患の発病、及び進行を悪化させ得るからである(Russo, C.らの論文、2002 J Ne
urochem 82, 1480-1489)。
これに対し、本来のAβ-ペプチド(3-40/42)においては、グルタミン酸がN末端アミ
ノ酸として存在する。今日までにGluのpGluへの酵素転換は知られていない。さらに、Glu
ペプチドのpGluペプチドへの自然環化反応は、今までのところ観察されていない。したが
って、本発明の一態様は、アルツハイマー病、及びダウン症におけるQCの役割を決定す
ることであった。この一態様においては、3位のアミノ酸としてグルタミン酸の代わりに
グルタミンを含む、Aβ(3-11)a、及びAβ(1-11)aの合成、これらの改質アミロイドβ-ペ
プチドのQC、DP IV、及びDP IV様酵素、及びアミノペプチダーゼに対する基質特性の決
定、並びに、QCインヒビターを使用して、該アミロイドβ-誘導体ペプチド(1-11)、及
び(3-11)のN末端グルタミン残基からpGluの産生を抑制するQCインヒビターの使用に向
けられている。該結果を、実施例8に示す。適用された方法は、実施例3に記載されてい
る。
ノ酸として存在する。今日までにGluのpGluへの酵素転換は知られていない。さらに、Glu
ペプチドのpGluペプチドへの自然環化反応は、今までのところ観察されていない。したが
って、本発明の一態様は、アルツハイマー病、及びダウン症におけるQCの役割を決定す
ることであった。この一態様においては、3位のアミノ酸としてグルタミン酸の代わりに
グルタミンを含む、Aβ(3-11)a、及びAβ(1-11)aの合成、これらの改質アミロイドβ-ペ
プチドのQC、DP IV、及びDP IV様酵素、及びアミノペプチダーゼに対する基質特性の決
定、並びに、QCインヒビターを使用して、該アミロイドβ-誘導体ペプチド(1-11)、及
び(3-11)のN末端グルタミン残基からpGluの産生を抑制するQCインヒビターの使用に向
けられている。該結果を、実施例8に示す。適用された方法は、実施例3に記載されてい
る。
今日まで、該疾患の進行におけるQCの関与が全く示唆されていない。その理由は、グ
ルタミン酸がAβ(3-40/42、及び11-40/42)におけるN末端アミノ酸だからである。し
かし、QCはペプチドのN末端でpGluを産生できる唯一公知の酵素である。本発明の他の
態様は下記の知見、及び発見に関与している:
a)グルタミンに加えて、QCはごく低速度で、グルタミン酸のピログルタミン酸への環
化反応を触媒する、
b)APP、又はその後に形成されるアミロイドβ-ペプチドのグルタミン酸は、未知の酵素
活性により翻訳後にグルタミンに転換され、かつ第二工程として、QCはグルタミンのピ
ログルタミン酸への環化反応を、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセス後に、触媒す
る、
c)グルタミン酸は化学触媒、又は自己触媒により、翻訳後にグルタミンに転換され、か
つ続いて、該アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセス後、QCは、グルタミンのピログ
ルタミン酸への環化反応を触媒する、
d)該アミロイドβ-タンパク質をコードするAPP遺伝子において、3位のGluの代わりにG
lnをもたらす突然変異がある。翻訳、及び該N末端のプロセシング後、QCはグルタミン
のピログルタミン酸への該環化反応を触媒する、
e)グルタミンは、未知の酵素活性の異常により、APPの未完成のペプチド鎖に取り込ま
れ、かつ続いて、該アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCは、N末端グ
ルタミンのピログルタミン酸への環化反応を触媒する。
ルタミン酸がAβ(3-40/42、及び11-40/42)におけるN末端アミノ酸だからである。し
かし、QCはペプチドのN末端でpGluを産生できる唯一公知の酵素である。本発明の他の
態様は下記の知見、及び発見に関与している:
a)グルタミンに加えて、QCはごく低速度で、グルタミン酸のピログルタミン酸への環
化反応を触媒する、
b)APP、又はその後に形成されるアミロイドβ-ペプチドのグルタミン酸は、未知の酵素
活性により翻訳後にグルタミンに転換され、かつ第二工程として、QCはグルタミンのピ
ログルタミン酸への環化反応を、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセス後に、触媒す
る、
c)グルタミン酸は化学触媒、又は自己触媒により、翻訳後にグルタミンに転換され、か
つ続いて、該アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセス後、QCは、グルタミンのピログ
ルタミン酸への環化反応を触媒する、
d)該アミロイドβ-タンパク質をコードするAPP遺伝子において、3位のGluの代わりにG
lnをもたらす突然変異がある。翻訳、及び該N末端のプロセシング後、QCはグルタミン
のピログルタミン酸への該環化反応を触媒する、
e)グルタミンは、未知の酵素活性の異常により、APPの未完成のペプチド鎖に取り込ま
れ、かつ続いて、該アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCは、N末端グ
ルタミンのピログルタミン酸への環化反応を触媒する。
QCは上記全5事例における重要な工程、すなわちアミロイドβ-ペプチドの凝集を促
進するピログルタミン酸の産生に関与している。このように、QCの阻害は、環化反応が
起こる機構に関わらず、アルツハイマー病、及びダウン症の発症と進行を起こす、斑形成
型Aβ(3-40/42)、又はAβ(11-40/42)の沈着の予防を可能にする。
グルタミン酸は、アミロイドβ-ペプチドの3、11、及び22位に見い出される。そ
の中で、22位のグルタミン酸(E)からグルタミン(Q)への突然変異(アミロイド前駆
体タンパク質APP 693、スイスプロットP05067に相当)は、いわゆるオランダ型脳動脈ア
ミロイドーシス突然変異として記載されている。
3、11、及び22位にピログルタミン酸残基を有するβ-アミロイドペプチドは、Aβ
(1-40/42/43)に比べて、細胞毒性、及び疎水性がより高いことが記載されている(Saido
T.C.の論文、2000 Medical Hypotheses 54: 427-429)。
進するピログルタミン酸の産生に関与している。このように、QCの阻害は、環化反応が
起こる機構に関わらず、アルツハイマー病、及びダウン症の発症と進行を起こす、斑形成
型Aβ(3-40/42)、又はAβ(11-40/42)の沈着の予防を可能にする。
グルタミン酸は、アミロイドβ-ペプチドの3、11、及び22位に見い出される。そ
の中で、22位のグルタミン酸(E)からグルタミン(Q)への突然変異(アミロイド前駆
体タンパク質APP 693、スイスプロットP05067に相当)は、いわゆるオランダ型脳動脈ア
ミロイドーシス突然変異として記載されている。
3、11、及び22位にピログルタミン酸残基を有するβ-アミロイドペプチドは、Aβ
(1-40/42/43)に比べて、細胞毒性、及び疎水性がより高いことが記載されている(Saido
T.C.の論文、2000 Medical Hypotheses 54: 427-429)。
多種のN末端変異は、異なる部位でのβ-セクレターゼ酵素、β-部位アミロイド前駆体
タンパク質-切断酵素(BACE)(Huse J.T.らの論文、2002 J. Biol. Chem. 277(18):1
6278-16284)により、及び/又はアミノペプチダーゼのプロセシングによって、産生が可
能である。全ての場合において、先に記載したa)〜e)の経路によって環化反応が起こ
り得る。
タンパク質-切断酵素(BACE)(Huse J.T.らの論文、2002 J. Biol. Chem. 277(18):1
6278-16284)により、及び/又はアミノペプチダーゼのプロセシングによって、産生が可
能である。全ての場合において、先に記載したa)〜e)の経路によって環化反応が起こ
り得る。
今までのところ、経路a)に相当する、未知のグルタミルシクラーゼ(EC)による、
Glu1ペプチドのpGluペプチドへの酵素的転換を支持する証拠はない(Garden, R. W.らの
論文(1998)J Neuropathol Exp Neurol. 57, 1089-1095)。今日までに、弱アルカリpH
条件下で、N末端側がプロトン化され、かつ負電荷のGlu1γ-カルボン酸部分をもつGlu1
ペプチドを、環化できるような酵素活性は同定されていない。
Glu1ペプチドのpGluペプチドへの酵素的転換を支持する証拠はない(Garden, R. W.らの
論文(1998)J Neuropathol Exp Neurol. 57, 1089-1095)。今日までに、弱アルカリpH
条件下で、N末端側がプロトン化され、かつ負電荷のGlu1γ-カルボン酸部分をもつGlu1
ペプチドを、環化できるような酵素活性は同定されていない。
Gln1基質に対するQC活性は、pH 7.0以下で劇的に低下する。これに対し、Glu1転換は
酸性反応条件で起こるようである(Iwatsubo, T.らの論文、(1996)Am J Pathol 149, 1
823-1830;Russo, C.らの論文、1977 FEBS Lett 409, 411-416;Russo, C.らの論文 2001
Neurobiol Dis 8, 173-180;Tekirian, T. L.らの論文(1998)J Neuropathol Exp Neu
rol. 57, 76-94;Russo, C.らの論文(2002)J Neurochem 82, 1480-1489;Hosoda, R.ら
の論文(1998)J Neuropathol Exp Neurol. 57, 1089-1095;Garden, R. W.らの論文(19
99)J Neurochem 72, 676-681)。
酸性反応条件で起こるようである(Iwatsubo, T.らの論文、(1996)Am J Pathol 149, 1
823-1830;Russo, C.らの論文、1977 FEBS Lett 409, 411-416;Russo, C.らの論文 2001
Neurobiol Dis 8, 173-180;Tekirian, T. L.らの論文(1998)J Neuropathol Exp Neu
rol. 57, 76-94;Russo, C.らの論文(2002)J Neurochem 82, 1480-1489;Hosoda, R.ら
の論文(1998)J Neuropathol Exp Neurol. 57, 1089-1095;Garden, R. W.らの論文(19
99)J Neurochem 72, 676-681)。
本発明に従って、QCが弱酸性条件下でアミロイド-β誘導ペプチドを認識し、かつ代
謝回転できるか否かを調べた。したがって、該酵素の潜在的基質として、Gln3-Aβ(1-11)
a、Aβ(3-11)a、Gln3-Aβ(3-11)a、Aβ(3-21)a、Gln3-Aβ(3-21)a、及びGln3-Aβ(3-40)
を合成し、かつ調べた。これらの配列は、翻訳後のGluアミド化が原因で起こり得る、本
来のN末端、及びC末端切断型Glu3-Aβペプチド、及びGln3-Aβペプチドを模倣するよう
に選択された。
謝回転できるか否かを調べた。したがって、該酵素の潜在的基質として、Gln3-Aβ(1-11)
a、Aβ(3-11)a、Gln3-Aβ(3-11)a、Aβ(3-21)a、Gln3-Aβ(3-21)a、及びGln3-Aβ(3-40)
を合成し、かつ調べた。これらの配列は、翻訳後のGluアミド化が原因で起こり得る、本
来のN末端、及びC末端切断型Glu3-Aβペプチド、及びGln3-Aβペプチドを模倣するよう
に選択された。
本発明において、パパイヤ、及びヒトQCがグルタミニル、及びグルタミル環化反応の両
方を触媒することを示した。明らかに、QCの主要生理学的機能は、ホルモン分泌プロセ
スに先立つ、又はその間の、グルタミン環化反応による内分泌細胞内のホルモン成熟を完
成させることである。そのような分泌小胞は、酸性pHであることが知られている。従って
、pH 5.0〜7.0の狭いpH範囲内での該酵素の副活性は、Glu-Aβペプチドをも転換する、新
規に発見されたグルタミルシクラーゼの活性であり得る。しかしながら、Gln転換に比べ
てGlu環化はかなり遅く起こるので、該グルタミル環化反応が有意義な生理的役割を果た
すかどうかは、疑問の余地がある。しかしながら、神経変性疾患の病理においては、該グ
ルタミル環化反応は有意義である。
方を触媒することを示した。明らかに、QCの主要生理学的機能は、ホルモン分泌プロセ
スに先立つ、又はその間の、グルタミン環化反応による内分泌細胞内のホルモン成熟を完
成させることである。そのような分泌小胞は、酸性pHであることが知られている。従って
、pH 5.0〜7.0の狭いpH範囲内での該酵素の副活性は、Glu-Aβペプチドをも転換する、新
規に発見されたグルタミルシクラーゼの活性であり得る。しかしながら、Gln転換に比べ
てGlu環化はかなり遅く起こるので、該グルタミル環化反応が有意義な生理的役割を果た
すかどうかは、疑問の余地がある。しかしながら、神経変性疾患の病理においては、該グ
ルタミル環化反応は有意義である。
該酵素反応のpH依存性を研究し、本発明者らは、プロトン化されていないN末端がGln1
ペプチドの環化反応に不可欠であり、かつ従って、該基質のpKa値は、QC触媒のpKa値と
同一であることを見いだした(図17参照)。このように、QCは、プロトン化されてい
ないα-アミノ部分の、アミド化により親電子的に活性化されたγ-カルボニル炭素への分
子内求核攻撃を安定化させる(スキーム1)。
ペプチドの環化反応に不可欠であり、かつ従って、該基質のpKa値は、QC触媒のpKa値と
同一であることを見いだした(図17参照)。このように、QCは、プロトン化されてい
ないα-アミノ部分の、アミド化により親電子的に活性化されたγ-カルボニル炭素への分
子内求核攻撃を安定化させる(スキーム1)。
N末端グルタミン含有ペプチドに存在する一価の電荷に対して、Glu含有ペプチドにお
けるN末端Glu残基は、中性付近のpHで、大部分は二価に荷電される。グルタミン酸は、
γ-カルボキシル、及びα-アミノ部位に対し、各々、約4.2、及び7.5のpKa値を示す。す
なわち、中性、及びそれ以上のpHでは、該α-アミノ窒素は、部分的に、又は全体的にプ
ロトン化されず、かつ求核的であるが、γ-カルボキシル基はプロトン化されず、かつそ
れにより親電子的カルボニル活性を発揮しない。したがって、分子内環化反応は不可能で
ある。
けるN末端Glu残基は、中性付近のpHで、大部分は二価に荷電される。グルタミン酸は、
γ-カルボキシル、及びα-アミノ部位に対し、各々、約4.2、及び7.5のpKa値を示す。す
なわち、中性、及びそれ以上のpHでは、該α-アミノ窒素は、部分的に、又は全体的にプ
ロトン化されず、かつ求核的であるが、γ-カルボキシル基はプロトン化されず、かつそ
れにより親電子的カルボニル活性を発揮しない。したがって、分子内環化反応は不可能で
ある。
しかしながら、pH約5.2〜6.5の範囲において、その各々のpKa値の間、全N末端Glu含有
ペプチドの約1〜10%(-NH2)、又は10〜1%(-COOH)の濃度で、2官能基は両方非イオ
ン化型で存在する。その結果として、弱酸性pH範囲間で、電荷していない両基を持つN末
端Gluペプチドが存在し、かつ従って、QCがpGluペプチドへの分子内環化反応の中間体
を安定化させることが可能である。すなわち、もし、該γ-カルボキシル基がプロトン化
していると、該カルボニル炭素は親電子的で、プロトン化されていないα-アミノ基によ
る親核攻撃が可能になる。このpHにおいて、水酸基イオンは脱離基として機能する(スキ
ーム3)。これらの仮説は、QCが触媒するGlu-βNAの転換のために得られたpH依存性の
データによって確認された(実施例11参照)。QCによるGln-βNAのグルタミン転換に対
し、該触媒の至適pHはpH 6.0付近の酸性範囲、すなわち、基質分子種がプロトン化された
γ-カルボキシル基、及びプロトン化されていないα-アミノ基を同時に十分に持って存在
するようなpH範囲に移動する。さらに、速度論的に決定したpKa値7.55±0.02は、滴定に
より決定されたGlu-βNAのα-アミノ基のpKa値に極めてよく一致している(7.57±0.05)
。
ペプチドの約1〜10%(-NH2)、又は10〜1%(-COOH)の濃度で、2官能基は両方非イオ
ン化型で存在する。その結果として、弱酸性pH範囲間で、電荷していない両基を持つN末
端Gluペプチドが存在し、かつ従って、QCがpGluペプチドへの分子内環化反応の中間体
を安定化させることが可能である。すなわち、もし、該γ-カルボキシル基がプロトン化
していると、該カルボニル炭素は親電子的で、プロトン化されていないα-アミノ基によ
る親核攻撃が可能になる。このpHにおいて、水酸基イオンは脱離基として機能する(スキ
ーム3)。これらの仮説は、QCが触媒するGlu-βNAの転換のために得られたpH依存性の
データによって確認された(実施例11参照)。QCによるGln-βNAのグルタミン転換に対
し、該触媒の至適pHはpH 6.0付近の酸性範囲、すなわち、基質分子種がプロトン化された
γ-カルボキシル基、及びプロトン化されていないα-アミノ基を同時に十分に持って存在
するようなpH範囲に移動する。さらに、速度論的に決定したpKa値7.55±0.02は、滴定に
より決定されたGlu-βNAのα-アミノ基のpKa値に極めてよく一致している(7.57±0.05)
。
生理学的に、pH 6.0で、QCが触媒するグルタミン酸環化反応の二次速度定数(又は特
異性定数、kcat/KM)は、グルタミン環化反応の該定数より、8,000倍程度遅くなり得る
(図17)。しかしながら、Glu-βNA、及びGln-βNAの両モデル基質の非酵素的転換がご
くわずかであることは、本発明において観察されたごくわずかなpGluペプチド産生と一致
する。それゆえ、QCによるpGluの産生において、酵素対非酵素の速度定数の比から、少
なくとも108の加速を推定することが可能である(該酵素触媒の該二次速度定数を、各非
酵素環化反応の一次速度定数と比較すると、Gln転換、及びGlu転換における触媒有効係数
は、各々109〜1010 M-1である)。これらのデータからの結論は、pGlu産生をもたらす酵
素経路は、インビボでのみあり得ると思われる。
異性定数、kcat/KM)は、グルタミン環化反応の該定数より、8,000倍程度遅くなり得る
(図17)。しかしながら、Glu-βNA、及びGln-βNAの両モデル基質の非酵素的転換がご
くわずかであることは、本発明において観察されたごくわずかなpGluペプチド産生と一致
する。それゆえ、QCによるpGluの産生において、酵素対非酵素の速度定数の比から、少
なくとも108の加速を推定することが可能である(該酵素触媒の該二次速度定数を、各非
酵素環化反応の一次速度定数と比較すると、Gln転換、及びGlu転換における触媒有効係数
は、各々109〜1010 M-1である)。これらのデータからの結論は、pGlu産生をもたらす酵
素経路は、インビボでのみあり得ると思われる。
QCは脳内に非常に豊富に存在しており、かつ最近見い出された、30μM(Gln-)TRH様
ペプチドを成熟するための高代謝回転(0.9分-1)(Prokai, L.らの論文、(1999)J Med C
hem 42, 4563-4571)であるから、同様の反応条件下での適切なグルタミン酸基質には、
約100時間の環化反応半減期を予測し得る。さらに、分泌経路における脳QC/ECの局
在化、および位置を考慮すると、実際のインビボ酵素、及び基質濃度、及び反応条件は、
正常細胞の酵素的環化反応において、なおさら好都合であり得る。かつ、N末端GluがGln
に転換されているなら、QCにより調節される、かなり急速なpGluの産生を予想し得る。
インビトロにおいて、両反応はQC/EC活性のインヒビターを適用することによって抑
制された(図9、10、及び15)。
ペプチドを成熟するための高代謝回転(0.9分-1)(Prokai, L.らの論文、(1999)J Med C
hem 42, 4563-4571)であるから、同様の反応条件下での適切なグルタミン酸基質には、
約100時間の環化反応半減期を予測し得る。さらに、分泌経路における脳QC/ECの局
在化、および位置を考慮すると、実際のインビボ酵素、及び基質濃度、及び反応条件は、
正常細胞の酵素的環化反応において、なおさら好都合であり得る。かつ、N末端GluがGln
に転換されているなら、QCにより調節される、かなり急速なpGluの産生を予想し得る。
インビトロにおいて、両反応はQC/EC活性のインヒビターを適用することによって抑
制された(図9、10、及び15)。
要約すると、本発明は、脳内にかなり豊富に存在するヒトQCが、Glu-Aβ、及びGln-A
β前駆体から、アルツハイマー病で見い出される斑沈着の50%以上を構成する、アミロ
イド生成性pGlu-Aβ-ペプチドを産生する触媒であることを示した。これらの知見は、Q
C/ECを老人斑形成に関わる一因子と同定し、かつ従って、アルツハイマー病の治療に
おける新規な薬剤標的と同定した。
β前駆体から、アルツハイマー病で見い出される斑沈着の50%以上を構成する、アミロ
イド生成性pGlu-Aβ-ペプチドを産生する触媒であることを示した。これらの知見は、Q
C/ECを老人斑形成に関わる一因子と同定し、かつ従って、アルツハイマー病の治療に
おける新規な薬剤標的と同定した。
本発明の第二の実施態様において、アミロイドβ-誘導ペプチドが、ジぺプチジルペプ
チダーゼIV(DP IV)、又はDP IV様酵素、好ましくはジペプチジルペプチダーゼII(DP I
I)の基質であることを見い出された。DP IV、DP II、又はDP IV様酵素は、改質したアミ
ロイドβ-ペプチド(1-11)のN末端からジペプチドを放出し、グルタミンをN末端アミ
ノ酸残基に持つアミロイドβ-ペプチド(3-11)を産生する。その結果は、実施例8に示
した。
チダーゼIV(DP IV)、又はDP IV様酵素、好ましくはジペプチジルペプチダーゼII(DP I
I)の基質であることを見い出された。DP IV、DP II、又はDP IV様酵素は、改質したアミ
ロイドβ-ペプチド(1-11)のN末端からジペプチドを放出し、グルタミンをN末端アミ
ノ酸残基に持つアミロイドβ-ペプチド(3-11)を産生する。その結果は、実施例8に示
した。
DP II、DP IV、又は他のDP IV様酵素の切断に先立ち、アスパラギン酸(アミロイドβ-
ペプチドの1番めの残基)、及びアラニン(アミロイドβ-ペプチドの2番めの残基)間
のペプチド結合は、文献に記載されているように、異性化されイソアスパルチル残基を生
じ得る(Kuo, Y.-M.、Emmerling, M. R.、Woods, A. S.、Cotter, R. J.、及びRoher, A.
E.の論文、(1997)BBRC 237, 188-191;Shimizu, T.、Watanabe, A.、Ogawara, M.、Mo
ri, H.、及びShirasawa, T.の論文、(2000)Arch. Biochem. Biophys. 381, 225-234)
。
これらのイソアスパラチル残基は、該アミロイドβ-ペプチドにアミノペプチダーゼ分
解に対する耐性を与え、かつその結果として、核化老人斑は多量のisoAsp1アミロイドベ
ータペプチドを含んでおり、それはN末端における低下した代謝回転を示唆する。
ペプチドの1番めの残基)、及びアラニン(アミロイドβ-ペプチドの2番めの残基)間
のペプチド結合は、文献に記載されているように、異性化されイソアスパルチル残基を生
じ得る(Kuo, Y.-M.、Emmerling, M. R.、Woods, A. S.、Cotter, R. J.、及びRoher, A.
E.の論文、(1997)BBRC 237, 188-191;Shimizu, T.、Watanabe, A.、Ogawara, M.、Mo
ri, H.、及びShirasawa, T.の論文、(2000)Arch. Biochem. Biophys. 381, 225-234)
。
これらのイソアスパラチル残基は、該アミロイドβ-ペプチドにアミノペプチダーゼ分
解に対する耐性を与え、かつその結果として、核化老人斑は多量のisoAsp1アミロイドベ
ータペプチドを含んでおり、それはN末端における低下した代謝回転を示唆する。
しかしながら、本発明において初めて、N末端ジペプチドH-isoAsp1-Ala2-OHが、特に
酸性条件下でジペプチジルぺプチダーゼにより放出され得ることを示した。さらにまた、
異性化はβ-セクレターゼによる切断に先行することが可能であり、かつ該異性化はタン
パク質分解を促進し、isoAsp1アミロイドβ-ペプチドのN末端イソアスパルチル結合の遊
離を可能にし、次いでDP II、DPIV、又は DP IV様酵素により代謝回転され得ることが示
された(Momand, J.、及びClarke, S.(1987)Biochemistry 26, 7798-7805;Kuo, Y.-M.
らの論文、(1997)BBRC 237, 188-191)。従って、イソアスパルチル産生の阻害は、β-
セクレターゼによる切断の減少を可能にし、かつ順に、アミロイドβ-ペプチドの産生の
減少を可能にし得る。その上、isoAsp1アミロイドβ-ペプチドのDP II、DPIV、又は DP I
V様酵素による代謝回転の阻害は、Glu3-Aβの露出を防げ、QC/EC触媒による[pGlu3]
Aβ産生を抑制し得る。
酸性条件下でジペプチジルぺプチダーゼにより放出され得ることを示した。さらにまた、
異性化はβ-セクレターゼによる切断に先行することが可能であり、かつ該異性化はタン
パク質分解を促進し、isoAsp1アミロイドβ-ペプチドのN末端イソアスパルチル結合の遊
離を可能にし、次いでDP II、DPIV、又は DP IV様酵素により代謝回転され得ることが示
された(Momand, J.、及びClarke, S.(1987)Biochemistry 26, 7798-7805;Kuo, Y.-M.
らの論文、(1997)BBRC 237, 188-191)。従って、イソアスパルチル産生の阻害は、β-
セクレターゼによる切断の減少を可能にし、かつ順に、アミロイドβ-ペプチドの産生の
減少を可能にし得る。その上、isoAsp1アミロイドβ-ペプチドのDP II、DPIV、又は DP I
V様酵素による代謝回転の阻害は、Glu3-Aβの露出を防げ、QC/EC触媒による[pGlu3]
Aβ産生を抑制し得る。
本発明の第三の実施態様において、DP IV活性のインヒビター、及びQCのインヒビタ
ーとの組み合わせを、アルツハイマー病、及びダウン症の治療のために使用することがで
きる。
DP IV、及び/又は DP IV様酵素、及びQCを組合せた効果は、以下に示すとおりであ
る:
a)DP IV、及び/又は DP IV様酵素はAβ(1-40/42)を切断し、H-Asp-Ala-OHを含むジペ
プチド、及びAβ(3-40/42)が放出される、
b)副反応として、QCは低速度でグルタミン酸のピログルタミン酸への環化反応を触媒
する、
c)グルタミン酸は、未知の酵素活性により翻訳後にグルタミンに転換され、かつ続いて
、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCはグルタミンのピログルタミン
酸への環化反応を触媒する、
d)グルタミン酸は化学触媒、又は自己触媒により、翻訳後にグルタミンに転換され、か
つ第二工程として、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCはグルタミン
のピログルタミン酸への環化反応を触媒する、
e)アミロイドβ-タンパク質をコードするAPP遺伝子において、Aβの3位のGluの代わり
にGlnをもたらす突然変異がある。翻訳、及びN末端のプロセシング後、QCはグルタミ
ンのピログルタミン酸への環化反応を触媒する、
f)グルタミンは、未知の酵素活性の異常により未完成のペプチド鎖に取り込まれ、かつ
続いて、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCはグルタミンのピログル
タミン酸への環化反応を触媒する。
ーとの組み合わせを、アルツハイマー病、及びダウン症の治療のために使用することがで
きる。
DP IV、及び/又は DP IV様酵素、及びQCを組合せた効果は、以下に示すとおりであ
る:
a)DP IV、及び/又は DP IV様酵素はAβ(1-40/42)を切断し、H-Asp-Ala-OHを含むジペ
プチド、及びAβ(3-40/42)が放出される、
b)副反応として、QCは低速度でグルタミン酸のピログルタミン酸への環化反応を触媒
する、
c)グルタミン酸は、未知の酵素活性により翻訳後にグルタミンに転換され、かつ続いて
、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCはグルタミンのピログルタミン
酸への環化反応を触媒する、
d)グルタミン酸は化学触媒、又は自己触媒により、翻訳後にグルタミンに転換され、か
つ第二工程として、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCはグルタミン
のピログルタミン酸への環化反応を触媒する、
e)アミロイドβ-タンパク質をコードするAPP遺伝子において、Aβの3位のGluの代わり
にGlnをもたらす突然変異がある。翻訳、及びN末端のプロセシング後、QCはグルタミ
ンのピログルタミン酸への環化反応を触媒する、
f)グルタミンは、未知の酵素活性の異常により未完成のペプチド鎖に取り込まれ、かつ
続いて、アミロイドβ-ペプチドN末端のプロセシング後、QCはグルタミンのピログル
タミン酸への環化反応を触媒する。
また、QC活性への該N末端Glnの露出は、異なるペプチダーゼ活性によって、引き起
こし得る。アミノペプチダーゼは、Aβ(1-40/42)のN末端から、Asp、及びAlaを順次取り
去ることが可能で、従って、環化反応され易い3番目のアミノ酸が露出される。DP I、DP
II、DP IV、DP 8、DP 9、及びDP 10のようなジペプチジルペプチダーゼは、一工程でAsp
-Alaを除去する。従って、アミノペプチダーゼ、又はジペプチジルペプチダーゼの活性の
阻害は、Aβ(3-40/42)の産生を防止するのに有用である。
こし得る。アミノペプチダーゼは、Aβ(1-40/42)のN末端から、Asp、及びAlaを順次取り
去ることが可能で、従って、環化反応され易い3番目のアミノ酸が露出される。DP I、DP
II、DP IV、DP 8、DP 9、及びDP 10のようなジペプチジルペプチダーゼは、一工程でAsp
-Alaを除去する。従って、アミノペプチダーゼ、又はジペプチジルペプチダーゼの活性の
阻害は、Aβ(3-40/42)の産生を防止するのに有用である。
DP IV、及び/又はDP IV様酵素のインヒビター、及びQCの活性低下エフェクターとの
組合せ効果を、下記の経路で示す:
a)DP IV、及び/又はDP IV様酵素は、Aβ(1-40/42)のAβ(3-40/42)への転換を阻害す
る。
b)それにより、グルタミン酸のN末端露出を妨げ、酵素による、又は化学触媒によるグ
ルタミンへの転換はなく、続いてピログルタミン酸産生することは不可能である。
c)さらに、QCのインヒビターは、残基が改質されたAβ(3-40/42)分子、及びAPP遺伝
子の突然変異により産生された、これらの改質Aβ(3-40/42)分子からのピログルタミン
酸形成を阻害する。
本発明の範囲内で、DP IV、又はDP IV様酵素、及びQCとの類似の組合せ効果は、さら
にグルカゴン、CCケモカイン、及びサブスタンスPのような、ペプチドホルモンで示さ
れた。
組合せ効果を、下記の経路で示す:
a)DP IV、及び/又はDP IV様酵素は、Aβ(1-40/42)のAβ(3-40/42)への転換を阻害す
る。
b)それにより、グルタミン酸のN末端露出を妨げ、酵素による、又は化学触媒によるグ
ルタミンへの転換はなく、続いてピログルタミン酸産生することは不可能である。
c)さらに、QCのインヒビターは、残基が改質されたAβ(3-40/42)分子、及びAPP遺伝
子の突然変異により産生された、これらの改質Aβ(3-40/42)分子からのピログルタミン
酸形成を阻害する。
本発明の範囲内で、DP IV、又はDP IV様酵素、及びQCとの類似の組合せ効果は、さら
にグルカゴン、CCケモカイン、及びサブスタンスPのような、ペプチドホルモンで示さ
れた。
グルカゴンは、すい臓のランゲルハンス島アルファ細胞から放出される、29アミノ酸ポ
リペプチドであり、肝臓でのグリコーゲン分解、及びグルコース新生を刺激促進すること
により、血糖値を維持するよう作用する。その重要性にかかわらず、体内でのグルカゴン
排除をつかさどる機構に関しては見解の一致を見ないままである。Pospisilikらは、高感
度の質量分光学的技術を用い、グルカゴンの酵素代謝を測定し、分子産物を同定した。グ
ルカゴンを精製されたブタジペプチジルペプチダーゼIV(DP IV)とインキュベートする
ことにより、グルカゴン(3-29)、及びグルカゴン(5-29)が生じた。ヒト血清では、グルカ
ゴン3-29への分解後速やかにグルカゴンのN末端環化反応が起こり、さらなる加水分解を
抑制した。グルカゴンのバイオアッセイにおいて、精製DP IV、又は、正常ラット血清と
インキュベートの後、高血糖活性の有意な低下が示されたのに対し、DP IV欠損ラット血
清との同様のインキュベートでは、グルカゴン生物活性の低下は示されなかった。質量分
析、およびバイオアッセイによってモニターすると、分解は、DP IV特異的インヒビター
、イソロイシルチアゾリジンにより阻害された。これらの結果により、DP IVがグルカゴ
ンの分解、及び不活性化に関係する主要酵素と同定した。これらの知見は、ヒト血漿中の
グルカゴンレベルの決定に、重要な影響をもたらす((Pospisilik A.らの論文 2001 Regu
l Pept 96, 133-41)。
リペプチドであり、肝臓でのグリコーゲン分解、及びグルコース新生を刺激促進すること
により、血糖値を維持するよう作用する。その重要性にかかわらず、体内でのグルカゴン
排除をつかさどる機構に関しては見解の一致を見ないままである。Pospisilikらは、高感
度の質量分光学的技術を用い、グルカゴンの酵素代謝を測定し、分子産物を同定した。グ
ルカゴンを精製されたブタジペプチジルペプチダーゼIV(DP IV)とインキュベートする
ことにより、グルカゴン(3-29)、及びグルカゴン(5-29)が生じた。ヒト血清では、グルカ
ゴン3-29への分解後速やかにグルカゴンのN末端環化反応が起こり、さらなる加水分解を
抑制した。グルカゴンのバイオアッセイにおいて、精製DP IV、又は、正常ラット血清と
インキュベートの後、高血糖活性の有意な低下が示されたのに対し、DP IV欠損ラット血
清との同様のインキュベートでは、グルカゴン生物活性の低下は示されなかった。質量分
析、およびバイオアッセイによってモニターすると、分解は、DP IV特異的インヒビター
、イソロイシルチアゾリジンにより阻害された。これらの結果により、DP IVがグルカゴ
ンの分解、及び不活性化に関係する主要酵素と同定した。これらの知見は、ヒト血漿中の
グルカゴンレベルの決定に、重要な影響をもたらす((Pospisilik A.らの論文 2001 Regu
l Pept 96, 133-41)。
当初、ヒト単球走化性タンパク質2(MCP-2)は、MCP-1、及びMCP-3と共に生成されるケ
モカインとして、刺激促進された骨肉腫細胞から精製されてきた。Von Coillieら(Van C
oillie, E.らの論文、1998 Biochemistry 37, 12672-12680)は、ヒト精巣cDNAライブラ
リーから5'末端伸張型MCP-2 cDNAをクローニングした。それは76残基のMCP-2タンパク
質をコードしたが、報告されている骨髄由来MCP-2 cDNA配列とはコドン46で異なり、Gl
nの代わりにLysをコードした。一塩基変異多型(SNP)により生じた、該MCP-2Lys46変異
体をMCP-2Gln46と生物学的に比較した。該コード領域をバクテリア発現ベクターpHEN1に
サブクローンし、かつ大腸菌(Escherichia coli)の形質転換後、該2種のMCP-2変異体を
ペリプラズムから回収した。エドマン分解によって、N末端がpGluの代わりにGln残基で
あることが明らかになった。rMCP-2Gln46、及びrMCP-2Lys46、及びそのN末端が環化した
該対応型を、単球細胞上でカルシウム流動、及び走化性アッセイで、分析した。該rMCP-2
Gln46、及びrMCP-2Lys46 アイソフォーム間で、生物学活性には有意な差はなかった。し
かしながら、両MCP-2変異体において、N末端ピログルタミン酸が遊走性に不可欠である
が、カルシウム流動には不可欠でないことが示された。セリンプロテアーゼCD26/ジペプ
チジルペプチダーゼIV(CD26/DPP IV)による、rMCP-2Lys46のN末端切断型は、アミノ
末端Gln-Proジペプチドの放出をもたらすが、NH2末端pGluを含む人工MCP-2は、影響を受
けなかった。CD26/DPP IVで切断されたrMCP-2Lys46(3-76)は、遊走性、及びシグナル
伝達アッセイの両方でほぼ完全に不活性であった。これらの観察は、MCP-2のNH2末端pGlu
が遊走活性に不可欠であること、また、それが該タンパク質をCD26/DPP IVによる分解か
ら保護することを示唆した(van Coillie, E.らの論文、1998, Biochemistry 37, 12672
-80)。
モカインとして、刺激促進された骨肉腫細胞から精製されてきた。Von Coillieら(Van C
oillie, E.らの論文、1998 Biochemistry 37, 12672-12680)は、ヒト精巣cDNAライブラ
リーから5'末端伸張型MCP-2 cDNAをクローニングした。それは76残基のMCP-2タンパク
質をコードしたが、報告されている骨髄由来MCP-2 cDNA配列とはコドン46で異なり、Gl
nの代わりにLysをコードした。一塩基変異多型(SNP)により生じた、該MCP-2Lys46変異
体をMCP-2Gln46と生物学的に比較した。該コード領域をバクテリア発現ベクターpHEN1に
サブクローンし、かつ大腸菌(Escherichia coli)の形質転換後、該2種のMCP-2変異体を
ペリプラズムから回収した。エドマン分解によって、N末端がpGluの代わりにGln残基で
あることが明らかになった。rMCP-2Gln46、及びrMCP-2Lys46、及びそのN末端が環化した
該対応型を、単球細胞上でカルシウム流動、及び走化性アッセイで、分析した。該rMCP-2
Gln46、及びrMCP-2Lys46 アイソフォーム間で、生物学活性には有意な差はなかった。し
かしながら、両MCP-2変異体において、N末端ピログルタミン酸が遊走性に不可欠である
が、カルシウム流動には不可欠でないことが示された。セリンプロテアーゼCD26/ジペプ
チジルペプチダーゼIV(CD26/DPP IV)による、rMCP-2Lys46のN末端切断型は、アミノ
末端Gln-Proジペプチドの放出をもたらすが、NH2末端pGluを含む人工MCP-2は、影響を受
けなかった。CD26/DPP IVで切断されたrMCP-2Lys46(3-76)は、遊走性、及びシグナル
伝達アッセイの両方でほぼ完全に不活性であった。これらの観察は、MCP-2のNH2末端pGlu
が遊走活性に不可欠であること、また、それが該タンパク質をCD26/DPP IVによる分解か
ら保護することを示唆した(van Coillie, E.らの論文、1998, Biochemistry 37, 12672
-80)。
本発明の範囲内で、LC/MS分析により、グルカゴン(3-29)(Pospisilikらの論文、2001
)、及びMCP-2アイソフォーム(van Coillieらの論文、1998)のN末端ピログルタミン酸
残基の産生がQCにより触媒されることが決定された。
さらに、LC/MS実験により、サブスタンスPからLys-Pro、及びArg-Proの2種のジペプ
チドのN末端DP IV触媒による除去後、残存[Gln5]サブスタンスP5-11は、QCにより[pGl
u5]サブスタンスP5-11へ転換されることを証明した。
)、及びMCP-2アイソフォーム(van Coillieらの論文、1998)のN末端ピログルタミン酸
残基の産生がQCにより触媒されることが決定された。
さらに、LC/MS実験により、サブスタンスPからLys-Pro、及びArg-Proの2種のジペプ
チドのN末端DP IV触媒による除去後、残存[Gln5]サブスタンスP5-11は、QCにより[pGl
u5]サブスタンスP5-11へ転換されることを証明した。
DP IVインヒビターは、国際公開第99/61431号において開示されている。特に、アミノ
酸残基、及びチアゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩を含むDP IVインヒビターが
開示されており、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリン、L-アロ-イソロイシルチアゾリ
ン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリン、L-アロ-イソ
ロイシルピロリジン、及びその塩である。
酸残基、及びチアゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩を含むDP IVインヒビターが
開示されており、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリン、L-アロ-イソロイシルチアゾリ
ン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリン、L-アロ-イソ
ロイシルピロリジン、及びその塩である。
低分子量ジペプチジルペプチダーゼIVインヒビターのさらなる例には、テトラヒドロイ
ソキノリン-3-カルボキサミド誘導体、N-置換 2-シアノピロール、及び-ピロリジン、N-
(N'-置換グリシル)2-シアノピロリジン、N-(置換グリシル)-チアゾリジン、N-(置換
グリシル)-4-シアノチアゾリジン、アミノ-アシル-ボロノ-プロピル-インヒビター、シ
クロプロピル-融合ピロリジン、及び複素環化合物のような薬剤がある。ジペプチジルペ
プチダーゼIVインヒビターは、下記の文献に記載されている:米国特許第6,380,398号、
米国特許第6,011,155号、米国特許第6,107,317号、米国特許第6,110,949号、米国特許第6
,124,305号、米国特許第6,172,081号、国際公開第95/15309号、国際公開第99/61431号
、国際公開第99/67278号、国際公開第99/67279号、ドイツ特許第198 34 591号公報、国
際公開第97/40832号、ドイツ特許第196 16 486 C 2号公報、国際公開第98/19998号、国
際公開第00/07617号、国際公開第99/38501号、国際公開第99/46272号、国際公開第99
/38501号、国際公開第01/68603号、国際公開第01/40180号、国際公開第01/8133号、
国際公開第01/81304号、国際公開第01/55105、国際公開第02/02560号、及び国際公開
第02/14271号、国際公開第02/04610号、国際公開第02/051836号、国際公開第02/0684
20号、国際公開第02/076450号、国際公開第02/083128号、国際公開第02/38541号、国
際公開第03/000180号、国際公開第03/000181号、国際公開第03/000250号、国際公開第
03/002530号、国際公開第03/002531号、国際公開第03/002553号、国際公開第03/0025
93号、国際公開第03/004496号、国際公開第03/024942号、及び国際公開第03/024965号
である。これらの文献に教示されている内容は、その全体、特にインヒビター、その定義
、使用、及び産生に関して、引用により本明細書に取り込まれるものとする。
ソキノリン-3-カルボキサミド誘導体、N-置換 2-シアノピロール、及び-ピロリジン、N-
(N'-置換グリシル)2-シアノピロリジン、N-(置換グリシル)-チアゾリジン、N-(置換
グリシル)-4-シアノチアゾリジン、アミノ-アシル-ボロノ-プロピル-インヒビター、シ
クロプロピル-融合ピロリジン、及び複素環化合物のような薬剤がある。ジペプチジルペ
プチダーゼIVインヒビターは、下記の文献に記載されている:米国特許第6,380,398号、
米国特許第6,011,155号、米国特許第6,107,317号、米国特許第6,110,949号、米国特許第6
,124,305号、米国特許第6,172,081号、国際公開第95/15309号、国際公開第99/61431号
、国際公開第99/67278号、国際公開第99/67279号、ドイツ特許第198 34 591号公報、国
際公開第97/40832号、ドイツ特許第196 16 486 C 2号公報、国際公開第98/19998号、国
際公開第00/07617号、国際公開第99/38501号、国際公開第99/46272号、国際公開第99
/38501号、国際公開第01/68603号、国際公開第01/40180号、国際公開第01/8133号、
国際公開第01/81304号、国際公開第01/55105、国際公開第02/02560号、及び国際公開
第02/14271号、国際公開第02/04610号、国際公開第02/051836号、国際公開第02/0684
20号、国際公開第02/076450号、国際公開第02/083128号、国際公開第02/38541号、国
際公開第03/000180号、国際公開第03/000181号、国際公開第03/000250号、国際公開第
03/002530号、国際公開第03/002531号、国際公開第03/002553号、国際公開第03/0025
93号、国際公開第03/004496号、国際公開第03/024942号、及び国際公開第03/024965号
である。これらの文献に教示されている内容は、その全体、特にインヒビター、その定義
、使用、及び産生に関して、引用により本明細書に取り込まれるものとする。
QCのエフェクターと組合せる使用が好ましいのは、Hughesらの論文(1999 Biochemis
try 38 11597-11603)により開示されたNVP-DPP728A(1-[[[2-[{5-シアノピリジン-2-イ
ル}アミノ]エチル]アミノ]アセチル]-2-シアノ-(S)-ピロリジン)(Novartis社)、Hug
hesら(アメリカ糖尿病協会会議、2002年、要旨番号272)により開示されたLAF-237(1-[
(3-ヒドロキシ-アダマント-1-イルアミノ)-アセチル]-ピロリジン-2(S)-カルボニト
リル)(Novartis社)、Yamadaらの論文(1998 Bioorg Med Chem Lett 8, 1537-1540)
に開示されたTSL-225(トリプトフィル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン
酸)、Asworthらの論文(1996 Bioorg Med Chem Lett 6, 1163-1166、及び2745-2748)
に開示された2-シアノピロリジド、及び4-シアノピロリジド、Sudreらの論文(2002 Diab
etes 51, 1461-1469)によって開示されたFE-999011(Ferring社)、及び国際公開第01/
34594号で開示された化合物(Guilford)のようなDP IVインヒビターがあり、上記の文献
で設定した投与量を採用する。
try 38 11597-11603)により開示されたNVP-DPP728A(1-[[[2-[{5-シアノピリジン-2-イ
ル}アミノ]エチル]アミノ]アセチル]-2-シアノ-(S)-ピロリジン)(Novartis社)、Hug
hesら(アメリカ糖尿病協会会議、2002年、要旨番号272)により開示されたLAF-237(1-[
(3-ヒドロキシ-アダマント-1-イルアミノ)-アセチル]-ピロリジン-2(S)-カルボニト
リル)(Novartis社)、Yamadaらの論文(1998 Bioorg Med Chem Lett 8, 1537-1540)
に開示されたTSL-225(トリプトフィル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン
酸)、Asworthらの論文(1996 Bioorg Med Chem Lett 6, 1163-1166、及び2745-2748)
に開示された2-シアノピロリジド、及び4-シアノピロリジド、Sudreらの論文(2002 Diab
etes 51, 1461-1469)によって開示されたFE-999011(Ferring社)、及び国際公開第01/
34594号で開示された化合物(Guilford)のようなDP IVインヒビターがあり、上記の文献
で設定した投与量を採用する。
QCのエフェクターと組合せる使用がより好ましいDP IVインヒビターは、ジペプチド
化合物であり、そのアミノ酸は、例えば、ロイシン、バリン、グルタミン、グルタミン酸
、プロリン、イソロイシン、アスパラギン、及びアスパラギン酸のような天然アミノ酸、
から選択されるのが好ましい。本発明で使用されるジペプチド様化合物は、10μMの(ジ
ペプチド化合物の)濃度で、血漿ジペプチジルペプチダーゼIV、又はDP IVアナログ酵素
活性の少なくとも10%、特に少なくとも40%活性の低下を示す。また、インビボでは、多
くの場合少なくとも60%、又は少なくとも70%の活性の低下が所望される。また、好まし
い化合物では、最高20%、又は30%の活性の低下が示され得る。
化合物であり、そのアミノ酸は、例えば、ロイシン、バリン、グルタミン、グルタミン酸
、プロリン、イソロイシン、アスパラギン、及びアスパラギン酸のような天然アミノ酸、
から選択されるのが好ましい。本発明で使用されるジペプチド様化合物は、10μMの(ジ
ペプチド化合物の)濃度で、血漿ジペプチジルペプチダーゼIV、又はDP IVアナログ酵素
活性の少なくとも10%、特に少なくとも40%活性の低下を示す。また、インビボでは、多
くの場合少なくとも60%、又は少なくとも70%の活性の低下が所望される。また、好まし
い化合物では、最高20%、又は30%の活性の低下が示され得る。
好ましいジペプチド化合物は、N-バリルプロリル、O-ベンゾイルヒドロキシルアミン、
アラニルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-トレオ-イソロイシルピロリ
ジンのようなイソロイシルチアゾリジン、及びその塩、特にフマル酸塩、及び、L-アロ-
イソロイシルピロリジン、及びその塩である。特に好ましい化合物は、グルタミニルピロ
リジン、及びグルタミニルチアゾリジン、H-Asn-ピロリジン、H-Asn-チアゾリジン、H-As
p-ピロリジン、H-Asp-チアゾリジン、H-Asp(NHOH)-ピロリジン、H-Asp(NHOH)-チアゾ
リジン、H-Glu-ピロリジン、H-Glu-チアゾリジン、H-Glu(NHOH)-ピロリジン、H-Glu(N
HOH)-チアゾリジン、H-His-ピロリジン、H-His-チアゾリジン、H-Pro-ピロリジン、H-Pr
o-チアゾリジン、H-Ile-アジジジン、H-Ile-ピロリジン、H-L-アロ-Ile-チアゾリジン、H
-Val-ピロリジン、及びH-Val-チアゾリジン、及び医薬として許容し得るその塩である。
これらの化合物は、国際公開第99/61431号、及び欧州特許出願公開第1 304 327号に記載
されている。
アラニルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-トレオ-イソロイシルピロリ
ジンのようなイソロイシルチアゾリジン、及びその塩、特にフマル酸塩、及び、L-アロ-
イソロイシルピロリジン、及びその塩である。特に好ましい化合物は、グルタミニルピロ
リジン、及びグルタミニルチアゾリジン、H-Asn-ピロリジン、H-Asn-チアゾリジン、H-As
p-ピロリジン、H-Asp-チアゾリジン、H-Asp(NHOH)-ピロリジン、H-Asp(NHOH)-チアゾ
リジン、H-Glu-ピロリジン、H-Glu-チアゾリジン、H-Glu(NHOH)-ピロリジン、H-Glu(N
HOH)-チアゾリジン、H-His-ピロリジン、H-His-チアゾリジン、H-Pro-ピロリジン、H-Pr
o-チアゾリジン、H-Ile-アジジジン、H-Ile-ピロリジン、H-L-アロ-Ile-チアゾリジン、H
-Val-ピロリジン、及びH-Val-チアゾリジン、及び医薬として許容し得るその塩である。
これらの化合物は、国際公開第99/61431号、及び欧州特許出願公開第1 304 327号に記載
されている。
さらに本発明は、ジペプチジルペプチダーゼIV触媒の競合的調節に有用な基質様ペプチ
ド化合物と組合せたQCのエフェクターの使用を提供する。好ましいペプチド化合物は、
2-アミノオクタン酸-Pro-Ile、Abu-Pro-Ile、Aib-Pro-Ile、Aze-Pro-Ile、Cha-Pro-Ile、
Ile-Hyp-Ile、Ile-Pro-アロ-Ile、Ile-Pro-t-ブチル-Gly、Ile-Pro-Val、Nle-Pro-Ile、N
va-Pro-Ile、Orn-Pro-Ile、Phe-Pro-Ile、Phg-Pro-Ile、Pip-Pro-Ile、Ser(Bzl)-Pro-I
le、Ser(P)-Pro-Ile、Ser-Pro-Ile、t-ブチル-Gly-Pro-D-Val、t-ブチル-Gly-Pro-Gly
、t-ブチル-Gly-Pro-Ile、t-ブチル-Gly-Pro-Ile-アミド、t-ブチル-Gly-Pro-t-ブチル-G
ly、t-ブチル-Gly-Pro-Val、Thr-Pro-Ile、Tic-Pro-Ile、Trp-Pro-Ile、Tyr(P)-Pro-Il
e、Tyr-Pro-アロ-Ile、Val-Pro-アロ-Ile、Val-Pro-t-ブチル-Gly、Val-Pro-Val、及びそ
の医薬として許容し得るその塩である。そのうち、t-ブチル-Glyは、下記式のように定義
し、かつ、Ser(Bzl)、及びSer(P)は、それぞれベンジル-セリン、及びホスホリル-セ
リンと定義する。Tyr(P)は、ホスホリル-チロシンと定義する。これらの化合物は、国
際公開第03/002593号に開示されている。
ド化合物と組合せたQCのエフェクターの使用を提供する。好ましいペプチド化合物は、
2-アミノオクタン酸-Pro-Ile、Abu-Pro-Ile、Aib-Pro-Ile、Aze-Pro-Ile、Cha-Pro-Ile、
Ile-Hyp-Ile、Ile-Pro-アロ-Ile、Ile-Pro-t-ブチル-Gly、Ile-Pro-Val、Nle-Pro-Ile、N
va-Pro-Ile、Orn-Pro-Ile、Phe-Pro-Ile、Phg-Pro-Ile、Pip-Pro-Ile、Ser(Bzl)-Pro-I
le、Ser(P)-Pro-Ile、Ser-Pro-Ile、t-ブチル-Gly-Pro-D-Val、t-ブチル-Gly-Pro-Gly
、t-ブチル-Gly-Pro-Ile、t-ブチル-Gly-Pro-Ile-アミド、t-ブチル-Gly-Pro-t-ブチル-G
ly、t-ブチル-Gly-Pro-Val、Thr-Pro-Ile、Tic-Pro-Ile、Trp-Pro-Ile、Tyr(P)-Pro-Il
e、Tyr-Pro-アロ-Ile、Val-Pro-アロ-Ile、Val-Pro-t-ブチル-Gly、Val-Pro-Val、及びそ
の医薬として許容し得るその塩である。そのうち、t-ブチル-Glyは、下記式のように定義
し、かつ、Ser(Bzl)、及びSer(P)は、それぞれベンジル-セリン、及びホスホリル-セ
リンと定義する。Tyr(P)は、ホスホリル-チロシンと定義する。これらの化合物は、国
際公開第03/002593号に開示されている。
本発明に従ってQCのエフェクターと組合せて使用でき、さらに好ましいDP IVインヒ
ビターは、ペプチジルケトンである。例を挙げると、下記化合物、及びその医薬として許
容し得るその塩である:
2-メチルカルボニル-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素
酸塩、2-メチル)カルボニル-1-N-[(L)-バリニル-(L)-プロリル-(L)-バリニル]-(
2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(アセチル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2
S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[ベンゾイル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-
(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-{[(2,6-ジクロロベンジル)チオメチル]カルボニル}-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-
バリニル]-(2S)-ピロリジン、
2-[ベンゾイ-ルオキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[グリシル-(L)-バリニル]-(2S)-ピ
ロリジン臭化水素酸塩、
2-[([1,3]-チアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-
バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L
)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(-ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-グリ
シル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ピリジン-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)
-ピロリジントリフルオロ酢酸塩である。これらの化合物は、国際公開第03/033524号に
開示されている。
ビターは、ペプチジルケトンである。例を挙げると、下記化合物、及びその医薬として許
容し得るその塩である:
2-メチルカルボニル-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素
酸塩、2-メチル)カルボニル-1-N-[(L)-バリニル-(L)-プロリル-(L)-バリニル]-(
2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(アセチル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2
S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[ベンゾイル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-
(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-{[(2,6-ジクロロベンジル)チオメチル]カルボニル}-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-
バリニル]-(2S)-ピロリジン、
2-[ベンゾイ-ルオキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[グリシル-(L)-バリニル]-(2S)-ピ
ロリジン臭化水素酸塩、
2-[([1,3]-チアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-
バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L
)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(-ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-グリ
シル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ピリジン-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)
-ピロリジントリフルオロ酢酸塩である。これらの化合物は、国際公開第03/033524号に
開示されている。
さらに、本発明に従って、置換アミノケトンをQCエフェクターと組合せて使用するこ
とが可能である。好ましい置換アミノケトンを挙げると、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ペンタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロヘキシル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
3-(シクロペンチルカルボニル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリニウムクロライド、
N-(2-シクロペンチル-2-オキソエチル)シクロヘキサンアミニウムクロライド、及び
その医薬として許容し得るその塩がある。
とが可能である。好ましい置換アミノケトンを挙げると、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ペンタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロヘキシル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
3-(シクロペンチルカルボニル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリニウムクロライド、
N-(2-シクロペンチル-2-オキソエチル)シクロヘキサンアミニウムクロライド、及び
その医薬として許容し得るその塩がある。
当初、希少なプロリン特異的プロテアーゼグループのうちで、DP IVは、唯一膜結合性
酵素で、ポリペプチド鎖のアミノ末端でその端から2番目残基のプロリンに特異性がある
と考えられていた。しかしながら、DP IVと構造的に相同性はないが、同様の酵素活性を
もつ、他の分子が同定された。今までに同定されたDP IV様酵素は、例えば、Sedo、及びM
alik(Sedo、及びMalikの論文、2001, Biochim Biophys Acta, 36506, 1-10)、及びAbbo
tt、及びGorrell(Abbott, C.A.、及びGorrell, M.Dの著書、エクトペプチダーゼ(Langn
e、及びAnsorge編集、Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York中、171-195ペー
ジ))による総説に記載されている繊維芽活性化タンパク質α(fibroblast activation
protein α)、ジペプチジルペプチダーゼIV β、ジペプチジルアミノペプチダーゼ様タ
ンパク質、N-アセチル化α結合型酸性ジペプチダーゼ、休止細胞プロリンジペプチダーゼ
(quiescent cell proline dipeptidase)、ジペプチジルペプチダーゼII、アトラクチン
、及びジペプチジルペプチダーゼIV 関連タンパク質(DPP 8)、DPL1(DPX、DP6)、DPL2
、及びDPP 9 がある。最近、ジペプチジルペプチダーゼ10(DPP 10)のクローニング、及
び特性が報告された(Qi, S.Y.らの論文、Biochemical Journal Immediate Publication
において、2003年3月28日に原稿番号BJ20021914として発表)。
酵素で、ポリペプチド鎖のアミノ末端でその端から2番目残基のプロリンに特異性がある
と考えられていた。しかしながら、DP IVと構造的に相同性はないが、同様の酵素活性を
もつ、他の分子が同定された。今までに同定されたDP IV様酵素は、例えば、Sedo、及びM
alik(Sedo、及びMalikの論文、2001, Biochim Biophys Acta, 36506, 1-10)、及びAbbo
tt、及びGorrell(Abbott, C.A.、及びGorrell, M.Dの著書、エクトペプチダーゼ(Langn
e、及びAnsorge編集、Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York中、171-195ペー
ジ))による総説に記載されている繊維芽活性化タンパク質α(fibroblast activation
protein α)、ジペプチジルペプチダーゼIV β、ジペプチジルアミノペプチダーゼ様タ
ンパク質、N-アセチル化α結合型酸性ジペプチダーゼ、休止細胞プロリンジペプチダーゼ
(quiescent cell proline dipeptidase)、ジペプチジルペプチダーゼII、アトラクチン
、及びジペプチジルペプチダーゼIV 関連タンパク質(DPP 8)、DPL1(DPX、DP6)、DPL2
、及びDPP 9 がある。最近、ジペプチジルペプチダーゼ10(DPP 10)のクローニング、及
び特性が報告された(Qi, S.Y.らの論文、Biochemical Journal Immediate Publication
において、2003年3月28日に原稿番号BJ20021914として発表)。
本明細書中で使われる用語、エフェクターは、酵素に結合し、インビボ、及び/又はイ
ンビトロでその活性を上昇、又は低下させる分子として定義される。酵素によっては、そ
の触媒活性に影響する小分子の結合部位を有し;刺激促進分子はアクチベーターと呼ばれ
る。酵素は1種以上のアクチベーター、又はインヒビターを認識するのための複数の結合
部位を有すことすらあり得る。酵素は様々な分子の濃度を感知し、かつその情報を使用し
、それ自身の活性を変えることが可能である。
ンビトロでその活性を上昇、又は低下させる分子として定義される。酵素によっては、そ
の触媒活性に影響する小分子の結合部位を有し;刺激促進分子はアクチベーターと呼ばれ
る。酵素は1種以上のアクチベーター、又はインヒビターを認識するのための複数の結合
部位を有すことすらあり得る。酵素は様々な分子の濃度を感知し、かつその情報を使用し
、それ自身の活性を変えることが可能である。
エフェクターが酵素活性を調節可能なのは、酵素が活性型と不活性型の両構造を呈する
からであり:アクチベーターは、正のエフェクターであり、インヒビターは負のエフェク
ターである。エフェクターは、酵素の活性部位においてだけでなく、調節部位、又はアロ
ステリック部位においても作用し、この用語は、調節部位が触媒部位から異なる酵素の要
素であることを強調し、触媒部位における基質、及びインヒビター間の競合による調節形
態と区別するために用いられる(Darnell, J.、Lodish, H.、及びBaltimore, D. の著書
、分子生物学第2版(1990, Molecular Cell Biology 2nd Edition, Scientific American
Books, New York)63ページ)。
本発明に従って好ましいエフェクターは、QC-、及びEC-活性のインヒビターである。最
も好ましくは、QC-、及びEC-活性の競合的インヒビターである。
適切な場合、QC-、及びEC-活性のアクチベーターが好ましい。
からであり:アクチベーターは、正のエフェクターであり、インヒビターは負のエフェク
ターである。エフェクターは、酵素の活性部位においてだけでなく、調節部位、又はアロ
ステリック部位においても作用し、この用語は、調節部位が触媒部位から異なる酵素の要
素であることを強調し、触媒部位における基質、及びインヒビター間の競合による調節形
態と区別するために用いられる(Darnell, J.、Lodish, H.、及びBaltimore, D. の著書
、分子生物学第2版(1990, Molecular Cell Biology 2nd Edition, Scientific American
Books, New York)63ページ)。
本発明に従って好ましいエフェクターは、QC-、及びEC-活性のインヒビターである。最
も好ましくは、QC-、及びEC-活性の競合的インヒビターである。
適切な場合、QC-、及びEC-活性のアクチベーターが好ましい。
本発明のペプチドにおいて、各アミノ酸残基は、以下の慣用一覧表に従い、アミノ酸の
慣用名に相当する一文字、又は三文字表示で表す。
アミノ酸 一文字表記 三文字表記
アラニン A Ala
アルギニン R Arg
アスパラギン N Asn
アスパラギン酸 D Asp
システイン C Cys
グルタミン Q Gln
グルタミン酸 E Glu
グリシン G Gly
ヒスチジン H His
イソロイシン I Ile
ロイシン L Leu
リシン K Lys
メチオニン M Met
フェニルアラニン F Phe
プロリン P Pro
セリン S Ser
トレオニン T Thr
トリプトファン W Trp
チロシン Y Tyr
バリン V Val
慣用名に相当する一文字、又は三文字表示で表す。
アミノ酸 一文字表記 三文字表記
アラニン A Ala
アルギニン R Arg
アスパラギン N Asn
アスパラギン酸 D Asp
システイン C Cys
グルタミン Q Gln
グルタミン酸 E Glu
グリシン G Gly
ヒスチジン H His
イソロイシン I Ile
ロイシン L Leu
リシン K Lys
メチオニン M Met
フェニルアラニン F Phe
プロリン P Pro
セリン S Ser
トレオニン T Thr
トリプトファン W Trp
チロシン Y Tyr
バリン V Val
本明細書中で使用する用語“QC”とは、グルタミニルシクラーゼ(QC)、及びQC
様酵素を含む。さらに、QC、及びQC様酵素は同一の、又は類似の酵素活性を有し、Q
C活性と定義する。この点において、根本的に、QC様酵素は、分子構造上QCから異な
ることが可能である。
様酵素を含む。さらに、QC、及びQC様酵素は同一の、又は類似の酵素活性を有し、Q
C活性と定義する。この点において、根本的に、QC様酵素は、分子構造上QCから異な
ることが可能である。
本明細書中で使用する用語“QC活性”とは、アンモニア遊離下における、N末端グル
タミン残基のピログルタミン酸(pGlu*)への、又はN末端L-ホモグルタミン、又はL-β
ホモグルタミンの環状ピロ-ホモグルタミン誘導体への分子内環化反応と定義する。スキ
ーム1、及び2を参照されたい。
タミン残基のピログルタミン酸(pGlu*)への、又はN末端L-ホモグルタミン、又はL-β
ホモグルタミンの環状ピロ-ホモグルタミン誘導体への分子内環化反応と定義する。スキ
ーム1、及び2を参照されたい。
本明細書中で使用する用語“EC”とは、QC、及びQC様酵素のグルタミン酸シクラ
ーゼ(EC)ような副活性を含み、さらにEC活性として定義する。
本明細書中で使用する用語“EC活性”とは、QCによるN末端グルタミン酸残基の、
ピログルタミン酸(pGlu*)への分子間環化と定義する。スキーム3を参照されたい。
本明細書中で使用する用語“金属依存性酵素”とは、その触媒機能を果たすために結合
した金属イオンとの結合を必要とする、かつ/又は、触媒活性の構造を形成するために結
合した金属イオンを必要とする酵素と定義する。
ーゼ(EC)ような副活性を含み、さらにEC活性として定義する。
本明細書中で使用する用語“EC活性”とは、QCによるN末端グルタミン酸残基の、
ピログルタミン酸(pGlu*)への分子間環化と定義する。スキーム3を参照されたい。
本明細書中で使用する用語“金属依存性酵素”とは、その触媒機能を果たすために結合
した金属イオンとの結合を必要とする、かつ/又は、触媒活性の構造を形成するために結
合した金属イオンを必要とする酵素と定義する。
本発明のもう一つの態様は、QCの新規の生理学的基質の同定である。これらは、実施
例5に記載した哺乳動物ペプチドでの環化反応実験を行い、同定した。ヒトQC、及びパ
パイヤQCを実施例1に記載されるように精製した。該適用方法は実施例2に記載し、か
つ使用した該ペプチド合成は実施例6に概要を示す。該研究の結果は、表1に示す。
例5に記載した哺乳動物ペプチドでの環化反応実験を行い、同定した。ヒトQC、及びパ
パイヤQCを実施例1に記載されるように精製した。該適用方法は実施例2に記載し、か
つ使用した該ペプチド合成は実施例6に概要を示す。該研究の結果は、表1に示す。
すべての分析は、実施例4に示されるように、ヒト、又は植物QCのいずれかの最適活
性、及び安定性の範囲で行った。N末端にグルタミン残基をもち、かつそれゆえQC酵素
の基質である、生理活性ペプチドのアミノ酸配列は表2に記載する:
性、及び安定性の範囲で行った。N末端にグルタミン残基をもち、かつそれゆえQC酵素
の基質である、生理活性ペプチドのアミノ酸配列は表2に記載する:
第四の実施態様において、Gln1-ガストリン(アミノ酸長さが17、及び34)、Gln1-ニュ
ーロテンシン、及びGln1-FPPペプチドを、QCの新規生理的基質として同定した。ガスト
リン、ニューロテンシン、及びFPPは、N末端位置にpGlu残基を含有する。すべてのペプ
チドで、N末端pGlu残基が、QC触媒作用によりN末端のグルタミンから産生されること
を示した。結果として、これらのペプチドは、N末端グルタミン残基のpGluへの転換によ
り、その生物学機能の点で活性化される。
ーロテンシン、及びGln1-FPPペプチドを、QCの新規生理的基質として同定した。ガスト
リン、ニューロテンシン、及びFPPは、N末端位置にpGlu残基を含有する。すべてのペプ
チドで、N末端pGlu残基が、QC触媒作用によりN末端のグルタミンから産生されること
を示した。結果として、これらのペプチドは、N末端グルタミン残基のpGluへの転換によ
り、その生物学機能の点で活性化される。
経上皮変換細胞、特にガストリン(G)細胞は、胃への食物到来とともに胃酸分泌を調
節する。最近の研究により、複数の活性産物がガストリン前駆体より産生され、かつガス
トリン生合成には、複数のコントロール箇所があることが示された。生合成前駆体、及び
中間体(プロガストリン、及びGly-ガストリン)は、推定成長因子であり;その産物、ア
ミド化されたガストリンは、上皮細胞の増殖、酸産生壁細胞、及びヒスタミン分泌クロム
親和性様(ECL)細胞の分化、及びECL細胞でのヒスタミン合成、及び貯蔵に関わる遺伝子
の発現を、急性の酸分泌刺激促進と同様に調節する。また、ガストリンは、上皮成長因子
(EGF)ファミリーメンバーの産生を刺激促進し、順に壁細胞機能を阻害し、表面上皮細
胞の増殖を促進する。血漿ガストリン濃度は、ヘリコバクターピロリを保有し、十二指腸
癌、及び胃癌のリスクが高いことが公知の個体で上昇する(Dockray, G.J.の論文、1999
J Physiol 15, 315-324)。
節する。最近の研究により、複数の活性産物がガストリン前駆体より産生され、かつガス
トリン生合成には、複数のコントロール箇所があることが示された。生合成前駆体、及び
中間体(プロガストリン、及びGly-ガストリン)は、推定成長因子であり;その産物、ア
ミド化されたガストリンは、上皮細胞の増殖、酸産生壁細胞、及びヒスタミン分泌クロム
親和性様(ECL)細胞の分化、及びECL細胞でのヒスタミン合成、及び貯蔵に関わる遺伝子
の発現を、急性の酸分泌刺激促進と同様に調節する。また、ガストリンは、上皮成長因子
(EGF)ファミリーメンバーの産生を刺激促進し、順に壁細胞機能を阻害し、表面上皮細
胞の増殖を促進する。血漿ガストリン濃度は、ヘリコバクターピロリを保有し、十二指腸
癌、及び胃癌のリスクが高いことが公知の個体で上昇する(Dockray, G.J.の論文、1999
J Physiol 15, 315-324)。
管腔G細胞から放出されるペプチドホルモンガストリンは、CCK-2レセプターを介して、
酸分泌粘膜中のECL細胞由来のヒスタミン合成、及び放出を刺激促進することが知られて
いる。動員されたヒスタミンは、壁細胞にあるH(2)レセプターに結合することにより、
酸分泌を引き起こす。最近の研究により、ガストリンは、完全にアミド化された、及び、
プロセスが少ない型(プロガストリン、及びグリシン延長型ガストリン)の両方で、胃腸
管の成長因子であることが示唆された。アミド化されたガストリンの主要な栄養作用は、
該胃の酸分泌粘膜に対してであり、胃幹細胞、及びECL細胞の細胞増殖の促進を起こし、
壁、及びECL細胞塊増大を生じることが確立している。一方、プロセスが少ないガストリ
ン(例えば、グリシン延長ガストリン)の主要栄養標的は、結腸粘膜であるように思われ
る(Koh, T.J.、及びChen, D.の論文、2000 Regul Pept 93, 337-44)。
酸分泌粘膜中のECL細胞由来のヒスタミン合成、及び放出を刺激促進することが知られて
いる。動員されたヒスタミンは、壁細胞にあるH(2)レセプターに結合することにより、
酸分泌を引き起こす。最近の研究により、ガストリンは、完全にアミド化された、及び、
プロセスが少ない型(プロガストリン、及びグリシン延長型ガストリン)の両方で、胃腸
管の成長因子であることが示唆された。アミド化されたガストリンの主要な栄養作用は、
該胃の酸分泌粘膜に対してであり、胃幹細胞、及びECL細胞の細胞増殖の促進を起こし、
壁、及びECL細胞塊増大を生じることが確立している。一方、プロセスが少ないガストリ
ン(例えば、グリシン延長ガストリン)の主要栄養標的は、結腸粘膜であるように思われ
る(Koh, T.J.、及びChen, D.の論文、2000 Regul Pept 93, 337-44)。
第五の実施態様において、本発明は、胃腸管細胞増殖、特に、胃粘膜細胞及び上皮細胞
の増殖、酸産生壁細胞、及びヒスタミン分泌クロム親和性様(ECL)細胞の分化、及びECL
細胞内のヒスタミン生合成、及び貯蔵に関連した遺伝子の発現を刺激し、かつ、活性型 [
pGlu1]ガストリンの濃度を維持、又は上昇させることによる、哺乳動物における急性酸分
泌を刺激するための、QCの活性上昇エフェクターの使用を提供する。
第六の実施態様において、本発明は、不活性型Gln1-ガストリンの活性型[pGlu1]-ガス
トリンへの転換率を低下させることによる、哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感
染を伴う、又は伴なわない十二指腸潰瘍疾患、胃癌、結腸直腸癌、及びゾリンジャー-エ
リソン症候群(Zolliger-Ellison Syndrome)の治療のための、QCの活性低下エフェクタ
ーの使用を提供する。
の増殖、酸産生壁細胞、及びヒスタミン分泌クロム親和性様(ECL)細胞の分化、及びECL
細胞内のヒスタミン生合成、及び貯蔵に関連した遺伝子の発現を刺激し、かつ、活性型 [
pGlu1]ガストリンの濃度を維持、又は上昇させることによる、哺乳動物における急性酸分
泌を刺激するための、QCの活性上昇エフェクターの使用を提供する。
第六の実施態様において、本発明は、不活性型Gln1-ガストリンの活性型[pGlu1]-ガス
トリンへの転換率を低下させることによる、哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感
染を伴う、又は伴なわない十二指腸潰瘍疾患、胃癌、結腸直腸癌、及びゾリンジャー-エ
リソン症候群(Zolliger-Ellison Syndrome)の治療のための、QCの活性低下エフェクタ
ーの使用を提供する。
ニューロテンシン(NT)は、特に神経伝達物質システムを調節する、統合失調症の病
態生理学に関わる神経ペプチドであり、該疾患において調節障害が生じることが示されて
いる。脳脊髄液(CSF)中のNT濃度を測定する臨床研究では、脳脊髄液(CSF)中のNT
濃度が低下している統合失調症患者の一部は、効果的な抗精神病剤治療で回復することを
示した。また、NTシステムが、抗精神病剤の作用機構に関与することは、公知である。
中枢系に投与されたNTの行動学的、及び生化学的効果は、抗精神病剤を全身に投与した
該効果に類似し、かつ抗精神病剤は、NT神経伝達を上昇させる。従って、NTが内在性
の抗精神病剤として機能するという仮説が導かれた。さらに、典型、及び非典型抗精神病
剤は、黒質線条体系、及び中脳辺縁系のドーパミン経路の終末領域のNT神経伝達を異な
った形で改質し、かつ該効果で、副作用障害、及び有効性が予想可能である(Binder, E.
B.らの論文 2001 Biol Psychiatry 50, 856-872)。
態生理学に関わる神経ペプチドであり、該疾患において調節障害が生じることが示されて
いる。脳脊髄液(CSF)中のNT濃度を測定する臨床研究では、脳脊髄液(CSF)中のNT
濃度が低下している統合失調症患者の一部は、効果的な抗精神病剤治療で回復することを
示した。また、NTシステムが、抗精神病剤の作用機構に関与することは、公知である。
中枢系に投与されたNTの行動学的、及び生化学的効果は、抗精神病剤を全身に投与した
該効果に類似し、かつ抗精神病剤は、NT神経伝達を上昇させる。従って、NTが内在性
の抗精神病剤として機能するという仮説が導かれた。さらに、典型、及び非典型抗精神病
剤は、黒質線条体系、及び中脳辺縁系のドーパミン経路の終末領域のNT神経伝達を異な
った形で改質し、かつ該効果で、副作用障害、及び有効性が予想可能である(Binder, E.
B.らの論文 2001 Biol Psychiatry 50, 856-872)。
第七の実施態様において、本発明は、抗精神病剤の調剤、及び/又は哺乳動物における
統合失調症治療のための、QCの活性上昇エフェクターの使用を提供する。該QCのエフ
ェクターは、活性型[pGlu1]ニューロテンシン濃度を維持、又は上昇させる。
統合失調症治療のための、QCの活性上昇エフェクターの使用を提供する。該QCのエフ
ェクターは、活性型[pGlu1]ニューロテンシン濃度を維持、又は上昇させる。
受精促進ペプチド(FPP)は、サイロトロピン放出ホルモン(TRH)に関連するトリペプ
チドであり、精漿に見い出される。インビトロ、及びインビボから得られた最近の証拠は
、FPPが精子受精能力の調節において重要な役割を果たしていることを示した。特に、FPP
は初めに受精能力のない(受精不能な)精子を“スイッチオン”にし、かつより速やかに
受精可能にするよう刺激促進し、その後、精子が自発アクロソーム損失を起こし、それゆ
え受精能力を喪失しないように、受精能獲得を抑制する。これらの反応は、アデニリルシ
クラーゼ(AC)/cAMPシグナル伝達経路を調節することが公知の、アデノシンによって模
倣され、かつ実際、増大される。FPP、及びアデノシンは両方とも、FPP受容体がどういう
わけかアデノシン受容体、及びGタンパク質と相互作用しACの調節をもたらし、受精不能
な細胞でcAMP産生を刺激促進し、受精可能な細胞ではそれを阻害することが示されている
。これらの事象は、様々なタンパク質のチロシンリン酸化状態に影響し、初期の“スイッ
チオン”において重要なものもあれば、おそらく先体反応自身に関与しているものもある
。また、精漿に存在するカルシトニン、及びアンギオテンシンIIは、インビボで受精不能
な精子に同様の効果をもち、FPPの反応を増大し得る。これらの分子は、インビボで類似
の効果をもち、受精能の刺激促進、及び維持により、受精に影響する。FPP、アデノシン
、カルシトニン、及びアンギオテンシンIIの供給の低下、又はそのレセプターの異常は、
男性不妊に寄与する(Fraser, L.R.、及びAdeoya-Osiguwa, S. A.の論文、2001 Vitam Ho
rm 63, 1-28)。
チドであり、精漿に見い出される。インビトロ、及びインビボから得られた最近の証拠は
、FPPが精子受精能力の調節において重要な役割を果たしていることを示した。特に、FPP
は初めに受精能力のない(受精不能な)精子を“スイッチオン”にし、かつより速やかに
受精可能にするよう刺激促進し、その後、精子が自発アクロソーム損失を起こし、それゆ
え受精能力を喪失しないように、受精能獲得を抑制する。これらの反応は、アデニリルシ
クラーゼ(AC)/cAMPシグナル伝達経路を調節することが公知の、アデノシンによって模
倣され、かつ実際、増大される。FPP、及びアデノシンは両方とも、FPP受容体がどういう
わけかアデノシン受容体、及びGタンパク質と相互作用しACの調節をもたらし、受精不能
な細胞でcAMP産生を刺激促進し、受精可能な細胞ではそれを阻害することが示されている
。これらの事象は、様々なタンパク質のチロシンリン酸化状態に影響し、初期の“スイッ
チオン”において重要なものもあれば、おそらく先体反応自身に関与しているものもある
。また、精漿に存在するカルシトニン、及びアンギオテンシンIIは、インビボで受精不能
な精子に同様の効果をもち、FPPの反応を増大し得る。これらの分子は、インビボで類似
の効果をもち、受精能の刺激促進、及び維持により、受精に影響する。FPP、アデノシン
、カルシトニン、及びアンギオテンシンIIの供給の低下、又はそのレセプターの異常は、
男性不妊に寄与する(Fraser, L.R.、及びAdeoya-Osiguwa, S. A.の論文、2001 Vitam Ho
rm 63, 1-28)。
第八の実施態様において、本発明は、哺乳動物における受精抑制薬の調剤、及び/又は
、受精の低下のための、QCの活性低下エフェクターの使用を提供する。該QCの活性低
下エフェクターは、活性型[pGlu1]FPP濃度を低下させ、精子の受精能獲得を抑制、及び精
子細胞の不活性化をもたらす。これに対し、QCの活性上昇エフェクターにより、男性生
殖能力を刺激し、かつ不妊を治療することが可能であることが示され得る。
、受精の低下のための、QCの活性低下エフェクターの使用を提供する。該QCの活性低
下エフェクターは、活性型[pGlu1]FPP濃度を低下させ、精子の受精能獲得を抑制、及び精
子細胞の不活性化をもたらす。これに対し、QCの活性上昇エフェクターにより、男性生
殖能力を刺激し、かつ不妊を治療することが可能であることが示され得る。
第九の実施態様において、さらなるQCの生理学的基質が、本発明の範囲内で同定され
た。これらは、Gln1-CCL 2、Gln1-CCL 7、Gln1-CCL 8、Gln1-CCL 16、Gln1-CCL 18、及び
Gln1-フラクタルカインである。詳細は、表2を参照されたい。これらのポリペプチドは
、骨髄性前駆細胞増殖の抑制、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマチ
、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応、内皮における白血球接着及び遊
走プロセス、並びにアルツハイマー病、FBD、及びFDDに関連した炎症プロセスのような病
態生理学的状態において、重要な役割を果たす。
た。これらは、Gln1-CCL 2、Gln1-CCL 7、Gln1-CCL 8、Gln1-CCL 16、Gln1-CCL 18、及び
Gln1-フラクタルカインである。詳細は、表2を参照されたい。これらのポリペプチドは
、骨髄性前駆細胞増殖の抑制、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマチ
、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応、内皮における白血球接着及び遊
走プロセス、並びにアルツハイマー病、FBD、及びFDDに関連した炎症プロセスのような病
態生理学的状態において、重要な役割を果たす。
最近、B型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス、及びメラノーマに対する、いくつかの細胞傷
害性Tリンパ球ペプチドを基にしたワクチンが、臨床試験で研究されている。デカペプチ
ドELAは、単独で、或いは腫瘍抗原と組合せる、1種の興味深いメラノーマワクチン候補で
ある。このペプチドは、N末端グルタミン酸をもつ、Melan-A/MART-1抗原免疫優勢ペプ
チドアナログである。グルタミンのアミノ基、及びガンマカルボン酸基は、グルタミン酸
のアミノ基、及びガンマカルボキサミド基と同様に、容易に縮合し、ピログルタミン誘導
体を産生する。医薬上興味深いいくつかのペプチドは、N末端グルタミン、及びグルタミ
ン酸の代わりにピログルタミン誘導体で開発し、医薬上の特性を損失することなくこの安
定性の問題を克服した。残念なことに、ELAに比べ、該ピログルタミン誘導体(PyrELA)
、及びN末端アセチル修飾誘導体(AcELA)は、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の活性を引
き出せなかった。PyrELA、及びAcELAにおける外見上の些少な修飾にかかわらず、おそら
く該二誘導体は該特異クラスI主要組織適合複合体に対して、ELAより低い親和性を示す。
それゆえ、ELAの最大の活性を維持するために、PyrELAの産生を回避しなければならない
(Beck A.らの論文、2001, J Pept Res 57:528-38)。また、最近、メラノーマにおいて
、グルタミニルシクラーゼ(QC)酵素が過剰発現していることが見い出された(Ross D
. T.らの論文、2000, Nat Genet 24:227-35)。
害性Tリンパ球ペプチドを基にしたワクチンが、臨床試験で研究されている。デカペプチ
ドELAは、単独で、或いは腫瘍抗原と組合せる、1種の興味深いメラノーマワクチン候補で
ある。このペプチドは、N末端グルタミン酸をもつ、Melan-A/MART-1抗原免疫優勢ペプ
チドアナログである。グルタミンのアミノ基、及びガンマカルボン酸基は、グルタミン酸
のアミノ基、及びガンマカルボキサミド基と同様に、容易に縮合し、ピログルタミン誘導
体を産生する。医薬上興味深いいくつかのペプチドは、N末端グルタミン、及びグルタミ
ン酸の代わりにピログルタミン誘導体で開発し、医薬上の特性を損失することなくこの安
定性の問題を克服した。残念なことに、ELAに比べ、該ピログルタミン誘導体(PyrELA)
、及びN末端アセチル修飾誘導体(AcELA)は、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の活性を引
き出せなかった。PyrELA、及びAcELAにおける外見上の些少な修飾にかかわらず、おそら
く該二誘導体は該特異クラスI主要組織適合複合体に対して、ELAより低い親和性を示す。
それゆえ、ELAの最大の活性を維持するために、PyrELAの産生を回避しなければならない
(Beck A.らの論文、2001, J Pept Res 57:528-38)。また、最近、メラノーマにおいて
、グルタミニルシクラーゼ(QC)酵素が過剰発現していることが見い出された(Ross D
. T.らの論文、2000, Nat Genet 24:227-35)。
第十の実施態様において、本発明は、骨髄性前駆細胞増殖の抑制、新生組織形成、炎症
性宿主反応、癌、悪性転移、メラノーマ、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化
、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、並びにア
ルツハイマー病、FBD、及びFDDに関連した炎症プロセスのような病態生理学的状態の治療
に用いる薬剤の製造のための、QCのエフェクターの使用を提供する。
性宿主反応、癌、悪性転移、メラノーマ、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化
、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、並びにア
ルツハイマー病、FBD、及びFDDに関連した炎症プロセスのような病態生理学的状態の治療
に用いる薬剤の製造のための、QCのエフェクターの使用を提供する。
第十一の実施態様において、Gln1-オレキシンAは、本発明の範囲内で、QCの生理学
的基質と同定した。摂食、睡眠覚醒の調節に有意な影響を及ぼす神経ペプチドであり、お
そらく、これらの相補的な恒常性機能の複雑な行動、及び生理学的応答を調節している。
また、それは、エネルギー代謝の恒常性調節、自律機能、ホルモンバランス、及び体液調
節において影響を及ぼす。
第十二の実施態様において、本発明は、摂食障害、及び睡眠覚醒、エネルギー代謝の恒
常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害の治療に用いる
薬剤の製造のための、QCのエフェクターの使用を提供する。
的基質と同定した。摂食、睡眠覚醒の調節に有意な影響を及ぼす神経ペプチドであり、お
そらく、これらの相補的な恒常性機能の複雑な行動、及び生理学的応答を調節している。
また、それは、エネルギー代謝の恒常性調節、自律機能、ホルモンバランス、及び体液調
節において影響を及ぼす。
第十二の実施態様において、本発明は、摂食障害、及び睡眠覚醒、エネルギー代謝の恒
常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害の治療に用いる
薬剤の製造のための、QCのエフェクターの使用を提供する。
様々なタンパク質におけるプログルタミン伸長は、パーキンソン病、及びケネディ病の
ような神経変性疾患を生じる。それゆえ、該機構は、ほとんどわかっていない。ポリグル
タミン繰り返し配列の生化学的特性は、1つの考えられる説明を示唆し:グルタミニル-
グルタミニル結合の切断(endolytic cleavage)後の、ピログルタミン酸産生が、ポリグ
ルタミンタンパク質の異化安定性、疎水性、アミロイド凝集性、及び神経傷害性に寄与し
得るということである(Saido, Tの論文、2000 Med Hypotheses Mar;54(3):427-9)
。
したがって、第十三の実施態様において、本発明は、パーキンソン病、及びハンチント
ン病の治療に用いる薬剤の製造のための、QCのエフェクターの使用を提供する。
ような神経変性疾患を生じる。それゆえ、該機構は、ほとんどわかっていない。ポリグル
タミン繰り返し配列の生化学的特性は、1つの考えられる説明を示唆し:グルタミニル-
グルタミニル結合の切断(endolytic cleavage)後の、ピログルタミン酸産生が、ポリグ
ルタミンタンパク質の異化安定性、疎水性、アミロイド凝集性、及び神経傷害性に寄与し
得るということである(Saido, Tの論文、2000 Med Hypotheses Mar;54(3):427-9)
。
したがって、第十三の実施態様において、本発明は、パーキンソン病、及びハンチント
ン病の治療に用いる薬剤の製造のための、QCのエフェクターの使用を提供する。
第十四の実施態様において、本発明は、QCの酵素活性を低下、又は阻害する一般的な
方法を提供する。また、阻害性化合物の例を提供する。
当初、哺乳動物QCの阻害は、1,10-フェナントロリン、及び還元型 6-メチルプテリン
でのみ検出された(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536)。ED
TAはQCを阻害せず、故にQCは金属依存性酵素ではないと結論された(Busby, W. H. J
.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536, Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Bioche
mistry 40, 11246-11250、Booth, R.E.らの論文、2004 BMC Biology 2)。しかしながら
、本発明では、1,10-フェナントロリン、ジピコリン酸、8-ヒドロキシ-キノリン、及び他
のキレーターによるQCの阻害特性(図18、19)、及び遷移金属イオンによるQCの
再活性化(図20)によって明らかであるように、ヒトQC、及び他の動物QCが金属依
存性酵素であることを示した。最後に、該金属依存性を他の金属依存性酵素との配列比較
をまとめ、ヒトQCにも、キレートするアミノ酸残基が保存されていることを示した(図
21)。化合物の、金属イオン結合部位との相互作用は、QC活性を低下、又は阻害する
一般的な方法である。
方法を提供する。また、阻害性化合物の例を提供する。
当初、哺乳動物QCの阻害は、1,10-フェナントロリン、及び還元型 6-メチルプテリン
でのみ検出された(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536)。ED
TAはQCを阻害せず、故にQCは金属依存性酵素ではないと結論された(Busby, W. H. J
.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536, Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Bioche
mistry 40, 11246-11250、Booth, R.E.らの論文、2004 BMC Biology 2)。しかしながら
、本発明では、1,10-フェナントロリン、ジピコリン酸、8-ヒドロキシ-キノリン、及び他
のキレーターによるQCの阻害特性(図18、19)、及び遷移金属イオンによるQCの
再活性化(図20)によって明らかであるように、ヒトQC、及び他の動物QCが金属依
存性酵素であることを示した。最後に、該金属依存性を他の金属依存性酵素との配列比較
をまとめ、ヒトQCにも、キレートするアミノ酸残基が保存されていることを示した(図
21)。化合物の、金属イオン結合部位との相互作用は、QC活性を低下、又は阻害する
一般的な方法である。
本発明では、イミダゾール誘導体がQCの有力なインヒビターであることを示す。連続
分析(詳細は実施例2参照)を用い、多数のイミダゾール誘導体を、高度に保存された哺
乳動物QCの1種であるヒトQCを阻害する能力に関して分析した。
このように、本発明は、QCの活性低下エフェクターとして、イミダゾール誘導体、及
びヒスチジン、及びその誘導体、及びその特性を阻害型、及び有効性の面から提供する。
構造、及びKi値を、表3、及び4に示す。その結果は、実施例7に詳しく記載した。
分析(詳細は実施例2参照)を用い、多数のイミダゾール誘導体を、高度に保存された哺
乳動物QCの1種であるヒトQCを阻害する能力に関して分析した。
このように、本発明は、QCの活性低下エフェクターとして、イミダゾール誘導体、及
びヒスチジン、及びその誘導体、及びその特性を阻害型、及び有効性の面から提供する。
構造、及びKi値を、表3、及び4に示す。その結果は、実施例7に詳しく記載した。
第十五の実施態様において、システアミンを基礎にした、QC、及びQC-様酵素の新しい
インヒビターを提供する。
イミダゾール誘導体、及びヒドロキサム酸塩又はエステル(hydroxamate)の他に、チオ
ール試薬が、金属依存性酵素のインヒビターとして頻繁に記載されている(Lowther, W. T
. 及びMatthews, B. W. 2002 Chem Rev 102, 4581-4607; Lipscomb, W. N. 及びStrter,
N. 1996 Chem Rev 96, 2375-2433)。さらに、チオールペプチドは、該Clan MHのQC-関連
アミノぺプチダーゼのインヒビターとして記載されている(Huntington, K. M. らの論文
1999 Biochemistry 38, 15587-15596)。これらのインヒビターは、哺乳動物のQCに関して
は不活性であるが、強力な競合性QC-インヒビターとして、システアミン誘導体を単離す
ることは可能である(図23)。
本発明は、一般的に式1により記載され得る、全ての立体異性体を含むQC-インヒビタ
ー、又はその医薬として許容し得る塩を提供する:
インヒビターを提供する。
イミダゾール誘導体、及びヒドロキサム酸塩又はエステル(hydroxamate)の他に、チオ
ール試薬が、金属依存性酵素のインヒビターとして頻繁に記載されている(Lowther, W. T
. 及びMatthews, B. W. 2002 Chem Rev 102, 4581-4607; Lipscomb, W. N. 及びStrter,
N. 1996 Chem Rev 96, 2375-2433)。さらに、チオールペプチドは、該Clan MHのQC-関連
アミノぺプチダーゼのインヒビターとして記載されている(Huntington, K. M. らの論文
1999 Biochemistry 38, 15587-15596)。これらのインヒビターは、哺乳動物のQCに関して
は不活性であるが、強力な競合性QC-インヒビターとして、システアミン誘導体を単離す
ることは可能である(図23)。
本発明は、一般的に式1により記載され得る、全ての立体異性体を含むQC-インヒビタ
ー、又はその医薬として許容し得る塩を提供する:
(式中、R1-R6は、独立して、H、若しくは、分岐又は非分岐アルキル鎖、分岐又は非分岐
アルケニル鎖、分岐又は非分岐アルキニル鎖、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素
環、アザ-アミノ酸、アミノ酸又はその類似物、ペプチド又はその類似物であり;上記残
基の全ては、任意に置換されており、かつnは0, 1, 又は2、好ましくは1、最も好ましく
は0である。)。
アルケニル鎖、分岐又は非分岐アルキニル鎖、炭素環、アリール、ヘテロアリール、複素
環、アザ-アミノ酸、アミノ酸又はその類似物、ペプチド又はその類似物であり;上記残
基の全ては、任意に置換されており、かつnは0, 1, 又は2、好ましくは1、最も好ましく
は0である。)。
本明細書、及び請求項を通して、表現"アルキル"は、C1-50アルキル基、好ましくはC1-
30アルキル基、特にC1-12、又はC1-8アルキル基を意味し得る;例えば、アルキル基は、
メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、又はブチル基とすることができる。例えば、
表現"アルコキシ(alkoxy)"の表現"アルク(alk)"、及び表現"アルカノイル(alkanoyl)"の
表現"アルカン(alkan)"は、"アルキル"として規定される;芳香族("アリール")化合物
は、好ましくは、置換、又は任意に非置換である、フェニル、ベンジル、ナフチル、ビフ
ェニル、又はアトンラセン基であり、好ましくは少なくとも8個のC原子を有する;表現"
アルケニル"は、C2-10アルケニル基、好ましくはC2-6アルケニル基を意味することができ
、所望の位置に二重結合を有し、かつ置換、又は非置換であってもよい;表現"アルキニ
ル"は、C2-10アルキニル基、好ましくはC2-6アルキニル基を意味することができ、所望の
位置に三重結合を有し、かつ置換、又は非置換であってもよい;表現"置換"、又は置換基
は、1以上、好ましくは2以上のアルキル、アルケニル、アルキニル、一価又は多価アシ
ル、アルカノイル、アルコキシアルカノイル、又はアルコキシアルキル基による、所望さ
れた置換を意味し得る;該上記置換基は、側基として1以上(しかし、好ましくはゼロ)
のアルキル、アルケニル、アルキニル、一価又は多価アシル、アルカノイル、アルコキシ
アルカノイル、又はアルコキシアルキル基を、入れ替わりに有することができる。
30アルキル基、特にC1-12、又はC1-8アルキル基を意味し得る;例えば、アルキル基は、
メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、又はブチル基とすることができる。例えば、
表現"アルコキシ(alkoxy)"の表現"アルク(alk)"、及び表現"アルカノイル(alkanoyl)"の
表現"アルカン(alkan)"は、"アルキル"として規定される;芳香族("アリール")化合物
は、好ましくは、置換、又は任意に非置換である、フェニル、ベンジル、ナフチル、ビフ
ェニル、又はアトンラセン基であり、好ましくは少なくとも8個のC原子を有する;表現"
アルケニル"は、C2-10アルケニル基、好ましくはC2-6アルケニル基を意味することができ
、所望の位置に二重結合を有し、かつ置換、又は非置換であってもよい;表現"アルキニ
ル"は、C2-10アルキニル基、好ましくはC2-6アルキニル基を意味することができ、所望の
位置に三重結合を有し、かつ置換、又は非置換であってもよい;表現"置換"、又は置換基
は、1以上、好ましくは2以上のアルキル、アルケニル、アルキニル、一価又は多価アシ
ル、アルカノイル、アルコキシアルカノイル、又はアルコキシアルキル基による、所望さ
れた置換を意味し得る;該上記置換基は、側基として1以上(しかし、好ましくはゼロ)
のアルキル、アルケニル、アルキニル、一価又は多価アシル、アルカノイル、アルコキシ
アルカノイル、又はアルコキシアルキル基を、入れ替わりに有することができる。
本明細書、及び請求項を通して、表現"アシル"は、C1-20アシル残基、好ましくはC1-8
アシル残基、特に好ましくはC1-4アシル残基を示すことができ;かつ表現"炭素環"は、C3
-12炭素環残基、好ましくはC4、C5、又はC6炭素環残基を示し得る。"ヘテロアリール"は
、1〜4、及び好ましくは1,2,又は3個の環原子を、N, S, 又はOのようなヘテロ原子で置
換したアリール残基として規定される。"複素環"は、1,2,又は3個の環原子を、N, S,
又はOのようなヘテロ原子で置換したシクロアルキル残基として規定される。
アシル残基、特に好ましくはC1-4アシル残基を示すことができ;かつ表現"炭素環"は、C3
-12炭素環残基、好ましくはC4、C5、又はC6炭素環残基を示し得る。"ヘテロアリール"は
、1〜4、及び好ましくは1,2,又は3個の環原子を、N, S, 又はOのようなヘテロ原子で置
換したアリール残基として規定される。"複素環"は、1,2,又は3個の環原子を、N, S,
又はOのようなヘテロ原子で置換したシクロアルキル残基として規定される。
"ペプチド類似物"それ自体は、当業者に公知である。好ましくは、これらは、ペプチド
のような二次構造、及び任意にさらなる構造特性を有する化合物として規定される;これ
らの作用様式は、該天然ペプチドの作用様式に類似しているか、又は同一である;しかし
、これらの活性(例えば、アンタゴニスト、又はインヒビターとしての活性)は、該天然ペ
プチドと比べて、特にレセプター、又は酵素に関して改質され得る。さらに、これらは、
該天然ペプチド(アゴニスト)の効果を模倣し得る。ペプチド類似物の例は、スキャホー
ルド類似物(scaffold mimetics)、非-ペプチド類似物、ペプトイド(peptoides)、ペプチ
ド核酸、オリゴピロリノン(oligopyrrolinones)、ビニログペプチド(vinylogpeptide)、
及びオリゴカルバメート(oligocarbamates)がある。これらのペプチド類似物の規定に対
しては、Lexikon der Chemie, Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg, Berlin, 199
9を参照されたい。
のような二次構造、及び任意にさらなる構造特性を有する化合物として規定される;これ
らの作用様式は、該天然ペプチドの作用様式に類似しているか、又は同一である;しかし
、これらの活性(例えば、アンタゴニスト、又はインヒビターとしての活性)は、該天然ペ
プチドと比べて、特にレセプター、又は酵素に関して改質され得る。さらに、これらは、
該天然ペプチド(アゴニスト)の効果を模倣し得る。ペプチド類似物の例は、スキャホー
ルド類似物(scaffold mimetics)、非-ペプチド類似物、ペプトイド(peptoides)、ペプチ
ド核酸、オリゴピロリノン(oligopyrrolinones)、ビニログペプチド(vinylogpeptide)、
及びオリゴカルバメート(oligocarbamates)がある。これらのペプチド類似物の規定に対
しては、Lexikon der Chemie, Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg, Berlin, 199
9を参照されたい。
"アザ-アミノ酸"は、該キラルα-CH基が窒素原子で置換されたアミノ酸として規定され
る。一方"アザ-ペプチド"は、該ペプチド鎖の少なくとも1つのアミノ酸残基のキラルα-C
H基が窒素原子で置換されたペプチドとして規定される。
該チオール、及びアミノ基の役割は、表5に示したジメチルシステアミン、システアミ
ン、メルカプトシステアミン、エチレンジアミン、エタノールアミンの該阻害能力の比較
にまとめた。アミノ、及びチオール基を有する化合物のみが、強力であり、一方の基の損
失、又は改質は、阻害力の低下を導く。さらに、システアミン、ジメチル-システアミン
、及びメルカプトエタノールによるネズミQC阻害の該pH-依存性は異なり、該インヒビタ
ーのプロトン化状態が、該活性部位に結合するインヒビターに影響を与える(図22)。
る。一方"アザ-ペプチド"は、該ペプチド鎖の少なくとも1つのアミノ酸残基のキラルα-C
H基が窒素原子で置換されたペプチドとして規定される。
該チオール、及びアミノ基の役割は、表5に示したジメチルシステアミン、システアミ
ン、メルカプトシステアミン、エチレンジアミン、エタノールアミンの該阻害能力の比較
にまとめた。アミノ、及びチオール基を有する化合物のみが、強力であり、一方の基の損
失、又は改質は、阻害力の低下を導く。さらに、システアミン、ジメチル-システアミン
、及びメルカプトエタノールによるネズミQC阻害の該pH-依存性は異なり、該インヒビタ
ーのプロトン化状態が、該活性部位に結合するインヒビターに影響を与える(図22)。
驚くべきことに、該酵素活性の特徴付けの間に、N-末端グルタミニル残基の他に、該N-
末端β-ホモ-グルタミニル残基が、QC基質としての特性も満たしていることを発見した。
該該N-末端β-ホモ-グルタミニル残基は、それぞれヒト、及びパパイヤQCの触媒により、
5員環のラクタム環に転換されることを発見した。該結果は、実施例5に記載されている
。該応用方法は、実施例2に示し、かつ該ペプチド合成を、実施例6に記載したように行
った。
末端β-ホモ-グルタミニル残基が、QC基質としての特性も満たしていることを発見した。
該該N-末端β-ホモ-グルタミニル残基は、それぞれヒト、及びパパイヤQCの触媒により、
5員環のラクタム環に転換されることを発見した。該結果は、実施例5に記載されている
。該応用方法は、実施例2に示し、かつ該ペプチド合成を、実施例6に記載したように行
った。
本発明のもう一つの好ましい実施態様は、QCのエフェクターのスクリーニング方法を
含む。
化合物群からQCの活性を調節するエフェクターを同定する、好ましいスクリーニング
方法は、下記工程を含む:
a)前記の化合物とQCとを、それらの間で結合が可能な条件下で接触させること;
b)QCの基質を加えること;
c)該基質の転換をモニターすること、又は任意に該残存QC活性を測定すること;及び
d)QCの該基質転換、及び/又は、酵素活性の変化を計算し、QCの活性調節フェクタ
ーを同定することである。
含む。
化合物群からQCの活性を調節するエフェクターを同定する、好ましいスクリーニング
方法は、下記工程を含む:
a)前記の化合物とQCとを、それらの間で結合が可能な条件下で接触させること;
b)QCの基質を加えること;
c)該基質の転換をモニターすること、又は任意に該残存QC活性を測定すること;及び
d)QCの該基質転換、及び/又は、酵素活性の変化を計算し、QCの活性調節フェクタ
ーを同定することである。
もう一つの好ましいスクリーニング方法は、QCの金属イオン結合活性部位と、直接、
又は間接的に相互作用するエフェクターの同定、及び選定に用いる方法に関連し、下記の
工程を含む方法である:
a)前記の化合物とQCとを、それらの間で結合が可能な条件下で接触させること;
b)QCにより転換可能な、QCの基質を加えること;
c)該基質の転換をモニターすること、又は任意に該残存QC活性を測定すること;及び
d)QCの該基質転換、及び/又は酵素活性の変化を計算し、QCの活性調節エフェクタ
ーを同定することである。
又は間接的に相互作用するエフェクターの同定、及び選定に用いる方法に関連し、下記の
工程を含む方法である:
a)前記の化合物とQCとを、それらの間で結合が可能な条件下で接触させること;
b)QCにより転換可能な、QCの基質を加えること;
c)該基質の転換をモニターすること、又は任意に該残存QC活性を測定すること;及び
d)QCの該基質転換、及び/又は酵素活性の変化を計算し、QCの活性調節エフェクタ
ーを同定することである。
前記スクリーニング方法での使用が好ましいのは、哺乳動物QC、又はパパイヤQCで
ある。特に好ましいのは哺乳動物QCであり、それはこれらのスクリーニング方法で同定
したエフェクターが哺乳動物、特にヒトの疾患の治療に使用され得るからである。
前記スクリーニング方法で選定された薬剤は、少なくとも1種のQC基質の転換を低下
させる(負のエフェクター、インヒビター)、又は、少なくとも1種のQC基質の転換を
増加させる(正のエフェクター、アクチベーター)ことにより機能することが可能である
。
本発明の化合物は、酸付加塩、特に医薬として許容し得る酸付加塩へ転換することがで
きる。
本発明の化合物の該塩は、無機、又は有機塩の形態とし得る。
ある。特に好ましいのは哺乳動物QCであり、それはこれらのスクリーニング方法で同定
したエフェクターが哺乳動物、特にヒトの疾患の治療に使用され得るからである。
前記スクリーニング方法で選定された薬剤は、少なくとも1種のQC基質の転換を低下
させる(負のエフェクター、インヒビター)、又は、少なくとも1種のQC基質の転換を
増加させる(正のエフェクター、アクチベーター)ことにより機能することが可能である
。
本発明の化合物は、酸付加塩、特に医薬として許容し得る酸付加塩へ転換することがで
きる。
本発明の化合物の該塩は、無機、又は有機塩の形態とし得る。
本発明の該化合物は、転換し、酸付加塩、特に医薬として許容し得る酸付加塩として使
用することが可能である。医薬として許容し得る塩は、一般に、塩基性側鎖が無機、又は
有機酸でプロトン化されているような形態をとる。典型的な有機、又は無機酸は、塩酸、
臭化水素酸、過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸
、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル
酸、メタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸、
パモ酸、2-ナフタレンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン
酸、サリチル酸、サッカリン酸、又はトリフルオロ酢酸を含む。すべての本発明の該化合
物の医薬として許容し得る塩は、本発明の範囲内に取り込むことを意図している。
用することが可能である。医薬として許容し得る塩は、一般に、塩基性側鎖が無機、又は
有機酸でプロトン化されているような形態をとる。典型的な有機、又は無機酸は、塩酸、
臭化水素酸、過塩素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸
、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル
酸、メタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、シュウ酸、
パモ酸、2-ナフタレンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン
酸、サリチル酸、サッカリン酸、又はトリフルオロ酢酸を含む。すべての本発明の該化合
物の医薬として許容し得る塩は、本発明の範囲内に取り込むことを意図している。
化合物自身と、塩の形態の該化合物の密接な関係から、本明細書の文脈で化合物に言及
するときは常に、その状況下でそれが考え得るか、又は適切であるならば、相当する塩も
対象とする。
本発明の該化合物が少なくとも1種の不斉中心を持つ場合は、それ相応に光学異性体が
存在し得る。該化合物が2種以上の不斉中心を持つ場合は、さらにジアステレオマーが存
在し得る。その異性体、及び混合物のすべては、本発明の範囲内に含まれると理解すべき
である。さらに、該化合物の結晶性形態は多形体として存在し得て、それらはさらに、本
発明に含まれる対象である。さらに該化合物によっては、水(すなわち、水和物)、又は
慣用の有機溶媒との溶媒和化合物を形成し得る。
また、その塩を含む該化合物は、水和物の形態で調達することが可能であるか、或いは
その結晶化に用いる他の溶媒を含む。
するときは常に、その状況下でそれが考え得るか、又は適切であるならば、相当する塩も
対象とする。
本発明の該化合物が少なくとも1種の不斉中心を持つ場合は、それ相応に光学異性体が
存在し得る。該化合物が2種以上の不斉中心を持つ場合は、さらにジアステレオマーが存
在し得る。その異性体、及び混合物のすべては、本発明の範囲内に含まれると理解すべき
である。さらに、該化合物の結晶性形態は多形体として存在し得て、それらはさらに、本
発明に含まれる対象である。さらに該化合物によっては、水(すなわち、水和物)、又は
慣用の有機溶媒との溶媒和化合物を形成し得る。
また、その塩を含む該化合物は、水和物の形態で調達することが可能であるか、或いは
その結晶化に用いる他の溶媒を含む。
さらなる実施態様において、本発明は、必要としている個体における、QC酵素活性の
調節を介した疾患状態の予防、又は治療法を提供し、それは、本発明の該化合物、又はそ
の医薬組成物のいずれかを、治療上有効な量、及び投与法で投与し、病態を治療すること
を含む。さらに、本発明は、個体におけるQC活性調節を介した病態の予防、又は治療に
用いる薬剤の調製のための、この発明における化合物、及びそれに相当する医薬として許
容される酸付加塩の形態の使用を含む。該化合物は、静脈注射、経口、皮下注射、筋肉注
射、皮内注射、非経口、及びその組み合わせ含むが、これに限定されない、従来の投与経
路で患者に投与され得る。
さらなる好ましい実施態様において、本発明は、少なくとも1種の本発明の化合物、又
はその塩を、任意に、少なくとも1種の医薬として許容し得る担体、及び/又は溶媒と組
合せて含有する医薬組成物、すなわち、薬剤に関するものである。
調節を介した疾患状態の予防、又は治療法を提供し、それは、本発明の該化合物、又はそ
の医薬組成物のいずれかを、治療上有効な量、及び投与法で投与し、病態を治療すること
を含む。さらに、本発明は、個体におけるQC活性調節を介した病態の予防、又は治療に
用いる薬剤の調製のための、この発明における化合物、及びそれに相当する医薬として許
容される酸付加塩の形態の使用を含む。該化合物は、静脈注射、経口、皮下注射、筋肉注
射、皮内注射、非経口、及びその組み合わせ含むが、これに限定されない、従来の投与経
路で患者に投与され得る。
さらなる好ましい実施態様において、本発明は、少なくとも1種の本発明の化合物、又
はその塩を、任意に、少なくとも1種の医薬として許容し得る担体、及び/又は溶媒と組
合せて含有する医薬組成物、すなわち、薬剤に関するものである。
例えば、医薬組成物は、非経口、又は経腸製剤の形態であり得て、適切な担体を含むか
、又は経口投与に適した適切な担体を含む、経口製剤の形態である。好ましくは、経口製
剤の形態である。
本発明の記載に従って投与されるQC活性のエフェクターは、QC-、及びEC-活性の
インヒビター、好ましくは競合的インヒビター、若しくは酵素インヒビター、競合的酵素
インヒビター、基質、擬似基質、QC発現のインヒビター、哺乳動物のQCタンパク質濃
度を低下させる酵素の結合タンパク質、又は抗体と組合せて、医薬上投与できる製剤、又
は製剤複合物の形で用いられ得る。本発明の該化合物により、患者、及び疾患個々に治療
を調節することが可能になり、特に、個々の不耐性、アレルギー、及び副作用を回避する
ことが可能である。
、又は経口投与に適した適切な担体を含む、経口製剤の形態である。好ましくは、経口製
剤の形態である。
本発明の記載に従って投与されるQC活性のエフェクターは、QC-、及びEC-活性の
インヒビター、好ましくは競合的インヒビター、若しくは酵素インヒビター、競合的酵素
インヒビター、基質、擬似基質、QC発現のインヒビター、哺乳動物のQCタンパク質濃
度を低下させる酵素の結合タンパク質、又は抗体と組合せて、医薬上投与できる製剤、又
は製剤複合物の形で用いられ得る。本発明の該化合物により、患者、及び疾患個々に治療
を調節することが可能になり、特に、個々の不耐性、アレルギー、及び副作用を回避する
ことが可能である。
また、該化合物は、時間の関数として、異なる活性の程度を示す。それによって、治療
を施す医師は、患者の個々の状況に応じて対処する機会を与えられ:医師は、一方では作
用開始の速度、他方では、作用の持続期間、及び特に作用強度を正確に調節することが可
能である。
本発明の好ましい治療方法は、哺乳動物のQC酵素活性の調節を介した病態の予防、又
は治療に用いる新規のアプローチを示す。それは、有利に単純で、商業的適用の余地があ
り、特に、哺乳動物、及び特にヒト医薬において、例えば、表1、及び2に記載された、
生理活性QC基質のアンバランスに基づく疾患の治療における使用に適している。
を施す医師は、患者の個々の状況に応じて対処する機会を与えられ:医師は、一方では作
用開始の速度、他方では、作用の持続期間、及び特に作用強度を正確に調節することが可
能である。
本発明の好ましい治療方法は、哺乳動物のQC酵素活性の調節を介した病態の予防、又
は治療に用いる新規のアプローチを示す。それは、有利に単純で、商業的適用の余地があ
り、特に、哺乳動物、及び特にヒト医薬において、例えば、表1、及び2に記載された、
生理活性QC基質のアンバランスに基づく疾患の治療における使用に適している。
例えば、該化合物は、有効成分を希釈剤、賦形剤、及び/又は、先行技術から公知の担
体のような添加剤を組合せて含む調剤の形態で、有利に投与し得る。例えば、それらは、
非経口的(例えば、生理食塩水の点滴で)、又は経腸的に(例えば、従来の担体と処方さ
れ、経口的に)投与することが可能である。
その内生安定性、及びその生体利用効率に依存して、該化合物は、所望する血糖グルコ
ース値の正常化を達成するために、1日に1回、又は複数回投与することが可能である。
例えば、ヒトにおけるそのような用量域は、1日あたり約0.01 mgから250.0 mgの範囲で
、好ましくは、体重キログラムあたり化合物約0.01 mgから100 mgの範囲であり得る。
体のような添加剤を組合せて含む調剤の形態で、有利に投与し得る。例えば、それらは、
非経口的(例えば、生理食塩水の点滴で)、又は経腸的に(例えば、従来の担体と処方さ
れ、経口的に)投与することが可能である。
その内生安定性、及びその生体利用効率に依存して、該化合物は、所望する血糖グルコ
ース値の正常化を達成するために、1日に1回、又は複数回投与することが可能である。
例えば、ヒトにおけるそのような用量域は、1日あたり約0.01 mgから250.0 mgの範囲で
、好ましくは、体重キログラムあたり化合物約0.01 mgから100 mgの範囲であり得る。
QC活性のエフェクターを哺乳動物に投与することによって、アルツハイマー病、ダウ
ン症、家族性英国型認知症(Familial British Dementia) (FBD)、家族性デンマーク型認
知症(Familial Danish Dementia)(FDD)、ヘリオバクターピロリの感染を伴う、又は伴わ
ない、潰瘍性疾患、及び胃癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、病原性精神
病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマ
チ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着
及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障
害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害から、選択される病態を、予防、又は緩和
、又は治療し得る。
ン症、家族性英国型認知症(Familial British Dementia) (FBD)、家族性デンマーク型認
知症(Familial Danish Dementia)(FDD)、ヘリオバクターピロリの感染を伴う、又は伴わ
ない、潰瘍性疾患、及び胃癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、病原性精神
病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマ
チ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着
及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障
害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害から、選択される病態を、予防、又は緩和
、又は治療し得る。
さらに、QC活性のエフェクターを哺乳動物に投与することによって、胃腸管細胞増殖
、好ましくは、胃粘膜細胞、上皮細胞の増殖、急性の酸分泌、及び酸産生壁細胞、及びヒ
スタミン分泌クロム親和性様細胞分化を刺激、促進し得る。
さらに、哺乳動物へのQCインヒビターの投与は、精子細胞機能の喪失、したがって男
性生殖能力の抑制を可能にし得る。従って、本発明は、男性生殖能力の調節、及びコント
ロールに用いる方法、及び男性用避妊薬剤の製造のための、QCの活性低下エフェクター
の使用を提供する。
さらに、QC活性のエフェクターを哺乳動物に投与することにより、骨髄性前駆細胞増
殖の抑制を可能にし得る。
、好ましくは、胃粘膜細胞、上皮細胞の増殖、急性の酸分泌、及び酸産生壁細胞、及びヒ
スタミン分泌クロム親和性様細胞分化を刺激、促進し得る。
さらに、哺乳動物へのQCインヒビターの投与は、精子細胞機能の喪失、したがって男
性生殖能力の抑制を可能にし得る。従って、本発明は、男性生殖能力の調節、及びコント
ロールに用いる方法、及び男性用避妊薬剤の製造のための、QCの活性低下エフェクター
の使用を提供する。
さらに、QC活性のエフェクターを哺乳動物に投与することにより、骨髄性前駆細胞増
殖の抑制を可能にし得る。
本発明で使用される化合物は、本来の公知の方法で、例えば、不活性無毒の、医薬上適
切な担体、及び添加剤、又は溶媒を用いて、錠剤、カプセル剤、糖衣剤、丸剤、顆粒剤、
噴霧剤、シロップ剤、液剤、固形剤、及びクリーム状乳剤、及び懸濁剤、及び溶液剤のよ
うな慣用調剤形態へ、それ相応に転換することが可能である。その各々の調剤形態におい
て、該治療上有効な化合物は、好ましくは、全混合物の重量に対して約0.1〜80%、より
好ましくは、1〜50%の濃度で、すなわち、言及した投薬量域を得るのに十分な量で存在
する。
切な担体、及び添加剤、又は溶媒を用いて、錠剤、カプセル剤、糖衣剤、丸剤、顆粒剤、
噴霧剤、シロップ剤、液剤、固形剤、及びクリーム状乳剤、及び懸濁剤、及び溶液剤のよ
うな慣用調剤形態へ、それ相応に転換することが可能である。その各々の調剤形態におい
て、該治療上有効な化合物は、好ましくは、全混合物の重量に対して約0.1〜80%、より
好ましくは、1〜50%の濃度で、すなわち、言及した投薬量域を得るのに十分な量で存在
する。
また、該物質は、糖衣剤、カプセル剤、可噛性カプセル剤、錠剤、ドロップ剤、シロッ
プ剤の形態の薬剤として、又は座薬として、又は鼻腔用スプレーとして使用することがで
きる。
例えば、該調剤形態は、有効成分を溶媒、及び/又は担体と共に、任意に乳化剤、及び
/又は分散剤の使用と共に供与され、有利に製造することができ、例えば、水が希釈剤と
して使用される場合は、有機溶媒は、任意に補助溶剤として使用することが可能である。
プ剤の形態の薬剤として、又は座薬として、又は鼻腔用スプレーとして使用することがで
きる。
例えば、該調剤形態は、有効成分を溶媒、及び/又は担体と共に、任意に乳化剤、及び
/又は分散剤の使用と共に供与され、有利に製造することができ、例えば、水が希釈剤と
して使用される場合は、有機溶媒は、任意に補助溶剤として使用することが可能である。
本発明に関わる有用な賦形剤の例を挙げると:水、パラフィン(例えば天然油画分)、
植物油(例えば、ナタネ油、ラッカセイ油、ゴマ油)、グリコール(例えば、プロピレン
グリコール、ポリエチレングリコール)のような無毒性有機溶媒;例えば、天然粉末ミネ
ラル(例えば、抗分散シリカ、ケイ酸塩)、糖類(例えば、粗糖、ラクトース、デキスト
ロース)のような固形担体;非イオン性、及び陰イオン性乳化剤(例えば、ポリオキシエ
チレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエステル、アルキルスルホン
酸、アリールスルホン酸)のような乳化剤、分散剤(例えば、リグニン、亜硫酸溶液、メ
チルセルロース、澱粉、及びポリビニルピロリドン)、潤滑剤(例えば、ステアリン酸マ
グネシウム、滑石粉、ステアリン酸、及びラウリル硫酸ナトリウム)、及び任意の香料が
ある。
植物油(例えば、ナタネ油、ラッカセイ油、ゴマ油)、グリコール(例えば、プロピレン
グリコール、ポリエチレングリコール)のような無毒性有機溶媒;例えば、天然粉末ミネ
ラル(例えば、抗分散シリカ、ケイ酸塩)、糖類(例えば、粗糖、ラクトース、デキスト
ロース)のような固形担体;非イオン性、及び陰イオン性乳化剤(例えば、ポリオキシエ
チレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエステル、アルキルスルホン
酸、アリールスルホン酸)のような乳化剤、分散剤(例えば、リグニン、亜硫酸溶液、メ
チルセルロース、澱粉、及びポリビニルピロリドン)、潤滑剤(例えば、ステアリン酸マ
グネシウム、滑石粉、ステアリン酸、及びラウリル硫酸ナトリウム)、及び任意の香料が
ある。
投与は、従来の方法で、好ましくは経腸的、又は非経口的に、特に経口的に行われ得る
。経腸投与の場合に、錠剤は上記の担体に加えて、さらにクエン酸ナトリウム、炭酸カル
シウム、及びリン酸カルシウムのような添加剤を、澱粉、好ましくは片栗粉、ゼラチン、
及びそのような多様な添加剤と共に含有し得る。さらに、ステアリン酸マグネイウム、ラ
ウリル硫酸ナトリウム、及び滑石粉のような潤滑剤は、錠剤製造に付随して使用すること
が可能である。経口投与を目的とした水性懸濁液、及び/又はエリキシル剤の場合は、多
様な矯味料、又は着色料が、上記記載の賦形剤に加えて、有効成分に付加することが可能
である。
。経腸投与の場合に、錠剤は上記の担体に加えて、さらにクエン酸ナトリウム、炭酸カル
シウム、及びリン酸カルシウムのような添加剤を、澱粉、好ましくは片栗粉、ゼラチン、
及びそのような多様な添加剤と共に含有し得る。さらに、ステアリン酸マグネイウム、ラ
ウリル硫酸ナトリウム、及び滑石粉のような潤滑剤は、錠剤製造に付随して使用すること
が可能である。経口投与を目的とした水性懸濁液、及び/又はエリキシル剤の場合は、多
様な矯味料、又は着色料が、上記記載の賦形剤に加えて、有効成分に付加することが可能
である。
非経口投与の場合、適切な液体担体を用いた有効成分の溶液を使用することができる。
一般に、静脈注射の場合、一日当たり体重に対して約0.01〜2.0 mg/kg、好ましくは、0.
01〜1.0 mg/kgの量を投与すると、効果的な結果が得られる利点が見いだされ、かつ経腸
投与の場合、該投与量は一日当たり体重に対して約0.01〜2 mg/kg、好ましくは、0.01〜
1 mg/kgである。
しかしながら、実験動物、及び患者の体重、又は投与経路の種類だげでなく、動物の種
類、又は薬剤に対する個々の反応、又は投与が行われる間隔などによって、該記載量から
外れることが不可欠である場合もあり得る。したがって、上記記載の最低量より少ない使
用で十分な場合もある一方、記載の上限を超過しなければならない場合もある。比較的大
量に投与される場合は、該投与量を一日に複数回の投薬に分割することが望ましいかもし
れない。ヒト薬剤の投与には、同様の投与許容度を提供する。その場合、上記の所見が同
様に適用される。
一般に、静脈注射の場合、一日当たり体重に対して約0.01〜2.0 mg/kg、好ましくは、0.
01〜1.0 mg/kgの量を投与すると、効果的な結果が得られる利点が見いだされ、かつ経腸
投与の場合、該投与量は一日当たり体重に対して約0.01〜2 mg/kg、好ましくは、0.01〜
1 mg/kgである。
しかしながら、実験動物、及び患者の体重、又は投与経路の種類だげでなく、動物の種
類、又は薬剤に対する個々の反応、又は投与が行われる間隔などによって、該記載量から
外れることが不可欠である場合もあり得る。したがって、上記記載の最低量より少ない使
用で十分な場合もある一方、記載の上限を超過しなければならない場合もある。比較的大
量に投与される場合は、該投与量を一日に複数回の投薬に分割することが望ましいかもし
れない。ヒト薬剤の投与には、同様の投与許容度を提供する。その場合、上記の所見が同
様に適用される。
(医薬調剤形態の例)
1.カプセル剤当り、本発明の化合物100 mgを含有するカプセル剤
およそ10,000カプセル剤に対して、下記組成の溶液を調製する:
本発明の化合物 1.0 kg
グリセロール 0.5 kg
ポリエチレングリコール 3.0 kg
水 0.5 kg
5.0 kg
該溶液は、本質的に公知の方法で、軟ゼラチンカプセルに封入する。該カプセルは、咀
嚼、及び嚥下に適している。
1.カプセル剤当り、本発明の化合物100 mgを含有するカプセル剤
およそ10,000カプセル剤に対して、下記組成の溶液を調製する:
本発明の化合物 1.0 kg
グリセロール 0.5 kg
ポリエチレングリコール 3.0 kg
水 0.5 kg
5.0 kg
該溶液は、本質的に公知の方法で、軟ゼラチンカプセルに封入する。該カプセルは、咀
嚼、及び嚥下に適している。
2.本発明の化合物100 mgを含有する錠剤、又はコーティングされた錠剤、又は糖衣剤
下記の量は錠剤100,000粒の製造に関するものである:
細かく粉砕した本発明の化合物 10.0 kg
グルコース 4.35 kg
ラクトース 4.35 kg
澱粉 4.50 kg
細かく粉砕したセルロース 4.50 kg
下記の量は錠剤100,000粒の製造に関するものである:
細かく粉砕した本発明の化合物 10.0 kg
グルコース 4.35 kg
ラクトース 4.35 kg
澱粉 4.50 kg
細かく粉砕したセルロース 4.50 kg
上記組成物を、混合し、下記成分から製造される溶液と共に提供し、該湿塊をおろし、
かつステアリン酸マグネシウム0.2 kg付加後乾燥させる、本質的に公知の方法で粒状にさ
れる。
ポリビニルピロリドン 2.0 kg
ポリソルベート 0.1 kg
及び水 約5.0 kg
かつステアリン酸マグネシウム0.2 kg付加後乾燥させる、本質的に公知の方法で粒状にさ
れる。
ポリビニルピロリドン 2.0 kg
ポリソルベート 0.1 kg
及び水 約5.0 kg
最終錠剤混合物30.0 kgを加工し、300 mgの重さの突型錠剤を形成する。理想的には、
該錠剤を、本質的に公知の方法でコーティング、又は糖コーティングすることが可能であ
ることである。
有利には、本明細書中で定義された医薬組成物は、少なくとも1種のQC活性のエフェ
クター、及び少なくとも1種のDP IVインヒビターを含有する。そのような医薬組成物は、
特にアルツハイマー病、及びダウン症の治療に有用である。
該錠剤を、本質的に公知の方法でコーティング、又は糖コーティングすることが可能であ
ることである。
有利には、本明細書中で定義された医薬組成物は、少なくとも1種のQC活性のエフェ
クター、及び少なくとも1種のDP IVインヒビターを含有する。そのような医薬組成物は、
特にアルツハイマー病、及びダウン症の治療に有用である。
(実施例1):ヒト、及びパパイヤQCの調製法
(宿主株、及び培地)
ヒトQCの発現に使用される酵母(Pichia pastoris)X33株(AOX1、AOX2)を、製造会
社の取扱説明書(Invitrogen社)に従って、培養し、形質転換し、かつ解析した。酵母(
P.pastoris)が必要とする培地、例えば、緩衝化したグリセロール(BMGY)複合体、又は
メタノール(BMMY)複合体培地、及び、発酵基礎塩培地は、製造会社の推奨にしたがって
調製した。
(宿主株、及び培地)
ヒトQCの発現に使用される酵母(Pichia pastoris)X33株(AOX1、AOX2)を、製造会
社の取扱説明書(Invitrogen社)に従って、培養し、形質転換し、かつ解析した。酵母(
P.pastoris)が必要とする培地、例えば、緩衝化したグリセロール(BMGY)複合体、又は
メタノール(BMMY)複合体培地、及び、発酵基礎塩培地は、製造会社の推奨にしたがって
調製した。
(ヒトQCをコードするプラスミドベクターの分子クローニング)
すべてのクローニング手順は、標準的分子生物学的技法を適用して行なった。酵母にお
ける発現のために、ベクターpPICZαB(Invitrogen社)を使用した。pQE-31ベクター(Qi
agen社)を使用し、ヒトQCを大腸菌において発現させた。第38番目のコドンより始ま
る成熟型QCのcDNAと、6xヒスチジン標識をコードするプラスミドとを、読み枠内で融合
した。pQCyc-1、及びpQCyc-2プライマーを使用し、増幅、かつサブクローニングの後、該
フラグメントを、SphI及び、HindIIIの制限酵素切断部位を用いて、発現ベクターに挿入
した。
すべてのクローニング手順は、標準的分子生物学的技法を適用して行なった。酵母にお
ける発現のために、ベクターpPICZαB(Invitrogen社)を使用した。pQE-31ベクター(Qi
agen社)を使用し、ヒトQCを大腸菌において発現させた。第38番目のコドンより始ま
る成熟型QCのcDNAと、6xヒスチジン標識をコードするプラスミドとを、読み枠内で融合
した。pQCyc-1、及びpQCyc-2プライマーを使用し、増幅、かつサブクローニングの後、該
フラグメントを、SphI及び、HindIIIの制限酵素切断部位を用いて、発現ベクターに挿入
した。
(P. pastorisの形質転換、及び小量発現実験)
プラスミドDNAは、大腸菌JM109内で増幅され、製造会社(Qiagen社)の推奨に従って精
製した。使用した発現プラスミドpPICZαBにおいては、3つの直線化に用いる制限酵素切
断部位が提供される。SacI、及びBstXIは、該QCcDNAの内部で切断するため、PmeIを選
択し、直線化した。20〜30μgのプラスミドDNAをPmeIで切断し、エタノールにより沈澱さ
せ、滅菌脱イオン水に溶かした。その後、10μgのDNAを、製造会社(BioRad社)の取扱説
明書に従って、電気穿孔法による酵母(P.pastoris)コンピテント細胞の形質転換に使用
した。選択は、150μg/ml Zeocinを含むプレートにおいて行なった。直線化されたプラ
スミドを使用した一回の形質転換実験から、数百の形質転換体を得た。
プラスミドDNAは、大腸菌JM109内で増幅され、製造会社(Qiagen社)の推奨に従って精
製した。使用した発現プラスミドpPICZαBにおいては、3つの直線化に用いる制限酵素切
断部位が提供される。SacI、及びBstXIは、該QCcDNAの内部で切断するため、PmeIを選
択し、直線化した。20〜30μgのプラスミドDNAをPmeIで切断し、エタノールにより沈澱さ
せ、滅菌脱イオン水に溶かした。その後、10μgのDNAを、製造会社(BioRad社)の取扱説
明書に従って、電気穿孔法による酵母(P.pastoris)コンピテント細胞の形質転換に使用
した。選択は、150μg/ml Zeocinを含むプレートにおいて行なった。直線化されたプラ
スミドを使用した一回の形質転換実験から、数百の形質転換体を得た。
組み換え酵母クローンをQCの発現に関して調べるために、組み換え体を、2 mlのBMGY
培地を含む10 mlコニカルチューブにおいて、24時間培養した。その後、該酵母を遠心
分離し、0.5%メタノールを含む2 mlのBMMYに再懸濁した。この濃度は、72時間まで、
24時間毎にメタノールを加えることによって維持された。その後、上清のQC活性が決
定した。融合タンパク質の存在を、6xヒスチジン標識に対する抗体(Qiagen社)を使用し
たウェスタンブロット解析によって確認した。最も高いQC活性を示した酵母のクローン
を、さらなる実験、及び発酵のために選択した。
培地を含む10 mlコニカルチューブにおいて、24時間培養した。その後、該酵母を遠心
分離し、0.5%メタノールを含む2 mlのBMMYに再懸濁した。この濃度は、72時間まで、
24時間毎にメタノールを加えることによって維持された。その後、上清のQC活性が決
定した。融合タンパク質の存在を、6xヒスチジン標識に対する抗体(Qiagen社)を使用し
たウェスタンブロット解析によって確認した。最も高いQC活性を示した酵母のクローン
を、さらなる実験、及び発酵のために選択した。
(発酵槽における大量発現実験)
QCの発現は、5 l(リットル)のリアクター(Biostat B,B.Braun biotech社)におい
て、基本的に"酵母Pichia発酵操作ガイドライン(Pichia fermentation process guideli
nes)"(Invitrogen社)に記載されているように行なった。簡潔に述べると、酵母細胞は
、微量の塩を添加し、かつグリセロールを唯一の炭素源とする、発酵基礎塩培地(pH 5.5
)において培養した。約24時間の初期バッチ段階、及びその後の約5時間のフェドバッ
チ(fed-batch)段階の間、酵母細胞塊が蓄積された。細胞湿重量が200 g/lに達した時
点で、約60時間の全発酵時間に三段階の栄養添加プロフィールを適用し、メタノールを
用いたQC発現の誘導を行なった。その後、細胞を、6000x g、4℃における15分間の遠
心によって、QC含有上清から除いた。そのpHは、NaOHの添加により、6.8に調節し、そ
の結果生じた懸濁溶液は、再び、37000x g、4℃において、40分間遠心した。遠心後も
液の濁りが継続した場合は、セルロース膜(孔径0.45μm)を用いた、さらなる濾過工程
を適用した。
QCの発現は、5 l(リットル)のリアクター(Biostat B,B.Braun biotech社)におい
て、基本的に"酵母Pichia発酵操作ガイドライン(Pichia fermentation process guideli
nes)"(Invitrogen社)に記載されているように行なった。簡潔に述べると、酵母細胞は
、微量の塩を添加し、かつグリセロールを唯一の炭素源とする、発酵基礎塩培地(pH 5.5
)において培養した。約24時間の初期バッチ段階、及びその後の約5時間のフェドバッ
チ(fed-batch)段階の間、酵母細胞塊が蓄積された。細胞湿重量が200 g/lに達した時
点で、約60時間の全発酵時間に三段階の栄養添加プロフィールを適用し、メタノールを
用いたQC発現の誘導を行なった。その後、細胞を、6000x g、4℃における15分間の遠
心によって、QC含有上清から除いた。そのpHは、NaOHの添加により、6.8に調節し、そ
の結果生じた懸濁溶液は、再び、37000x g、4℃において、40分間遠心した。遠心後も
液の濁りが継続した場合は、セルロース膜(孔径0.45μm)を用いた、さらなる濾過工程
を適用した。
(P. pastorisにおいて発現された6xヒスチジン標識QCの精製)
最初に、His標識QCは、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー(IMAC)によ
って精製した。典型的な精製においては、1000 mlの培養上清を、750 mMのNaClを含む、5
0 mMのリン酸緩衝液(pH 6.8)で平衡化したNi2+結合キレーティングセファロースFFカラ
ム(Chelating Sepharose FF column)(1.6 cm x 20 cm、Pharmacia社)に、流速5 ml/
分でかけた。10カラム容量の平衡化緩衝液、及び5カラム容量の5 mMヒスチジンを含む
平衡化緩衝液で洗浄した後、150 mM NaCl、及び100 mMヒスチジンを含む50 mMリン酸緩衝
液(pH6.8)へ変更することによって、結合したタンパク質を溶出した。その結果生じた
溶出液を、20 mMのビス-トリス/HCl緩衝液(pH 6.8)に対し、4℃において一晩透析し
た。その後さらに、該QCは、透析緩衝液によって平衡化されたMono Q6カラム(BioRad
社)における陰イオン交換クロマトグラフィーにより、精製した。QC含有画分は、流速
5 ml/分で、Mono Q6カラムへかけた。その後、該Mono Q6カラムを、100 mMのNaClを含む
平衡化緩衝液で洗浄した。溶出は、240 mM、及び360 mMのNaClを含む平衡化緩衝液を、各
々、30カラム容量、又は5カラム容量もたらす、2通りの濃度勾配によって行なった。
6 mlずつの画分を集め、各画分のタンパク質の純度を、SDS-PAGEにより解析した。均質の
QC含有画分を集め、限外濾過により濃縮した。長期保存(-20℃)のため、グルセロー
ルを最終濃度50%まで加えた。タンパク質は、Bradford、又は、Gill、及びvon Hippelの
方法に従い、定量した(Bradford, M. M.の論文、1976 Anal Biochem 72, 248-254;Gill
, S.C.、及びvon Hippel, P.H.の論文、1989 Anal Biochem 182, 319-326)。
最初に、His標識QCは、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー(IMAC)によ
って精製した。典型的な精製においては、1000 mlの培養上清を、750 mMのNaClを含む、5
0 mMのリン酸緩衝液(pH 6.8)で平衡化したNi2+結合キレーティングセファロースFFカラ
ム(Chelating Sepharose FF column)(1.6 cm x 20 cm、Pharmacia社)に、流速5 ml/
分でかけた。10カラム容量の平衡化緩衝液、及び5カラム容量の5 mMヒスチジンを含む
平衡化緩衝液で洗浄した後、150 mM NaCl、及び100 mMヒスチジンを含む50 mMリン酸緩衝
液(pH6.8)へ変更することによって、結合したタンパク質を溶出した。その結果生じた
溶出液を、20 mMのビス-トリス/HCl緩衝液(pH 6.8)に対し、4℃において一晩透析し
た。その後さらに、該QCは、透析緩衝液によって平衡化されたMono Q6カラム(BioRad
社)における陰イオン交換クロマトグラフィーにより、精製した。QC含有画分は、流速
5 ml/分で、Mono Q6カラムへかけた。その後、該Mono Q6カラムを、100 mMのNaClを含む
平衡化緩衝液で洗浄した。溶出は、240 mM、及び360 mMのNaClを含む平衡化緩衝液を、各
々、30カラム容量、又は5カラム容量もたらす、2通りの濃度勾配によって行なった。
6 mlずつの画分を集め、各画分のタンパク質の純度を、SDS-PAGEにより解析した。均質の
QC含有画分を集め、限外濾過により濃縮した。長期保存(-20℃)のため、グルセロー
ルを最終濃度50%まで加えた。タンパク質は、Bradford、又は、Gill、及びvon Hippelの
方法に従い、定量した(Bradford, M. M.の論文、1976 Anal Biochem 72, 248-254;Gill
, S.C.、及びvon Hippel, P.H.の論文、1989 Anal Biochem 182, 319-326)。
(大腸菌におけるQCの発現と精製)
QCをコードするコンストラクトで、M15細胞(Qiagen社)を形質転換し、選択的LB寒
天プレートにおいて、37℃で培養した。タンパク質の発現は、1%グルコース、及び1%の
エタノールを含むLB培地において、室温にて行なった。菌培養液が、OD600約0.8に達した
とき、0.1 mMのIPTGにより、発現を一晩誘導した。一回の凍結溶融のサイクルの後、300
mMのNaCl、及び2mMのヒスチジンを含む、50 mMのリン酸緩衝液、pH 8.0中の、2.5 mg/ml
リゾチーム溶液の添加により、4℃にて、約30分間、細胞を溶解した。該溶液は、37000x
g、4℃、30分間の遠心分離によって、不純物を除去し、その後、ガラスフリットを用いた
濾過(DNAの分離)、及び粗い沈殿物、及び細かい沈殿物用のセルロース・フィルターを
用いた、さらなる2段階の濾過工程を行なった。その上清(約500 ml)は、Ni2+アフィニ
ティーカラム(1.6 x 20 cm)に、流速毎分1 mlでかけた。QCの溶出は、150 mMの塩化
ナトリム、及び100 mMのヒスチジンを含む50 mMリン酸緩衝液によって行なった。QC含
有画分は、限外濾過により濃縮した。
QCをコードするコンストラクトで、M15細胞(Qiagen社)を形質転換し、選択的LB寒
天プレートにおいて、37℃で培養した。タンパク質の発現は、1%グルコース、及び1%の
エタノールを含むLB培地において、室温にて行なった。菌培養液が、OD600約0.8に達した
とき、0.1 mMのIPTGにより、発現を一晩誘導した。一回の凍結溶融のサイクルの後、300
mMのNaCl、及び2mMのヒスチジンを含む、50 mMのリン酸緩衝液、pH 8.0中の、2.5 mg/ml
リゾチーム溶液の添加により、4℃にて、約30分間、細胞を溶解した。該溶液は、37000x
g、4℃、30分間の遠心分離によって、不純物を除去し、その後、ガラスフリットを用いた
濾過(DNAの分離)、及び粗い沈殿物、及び細かい沈殿物用のセルロース・フィルターを
用いた、さらなる2段階の濾過工程を行なった。その上清(約500 ml)は、Ni2+アフィニ
ティーカラム(1.6 x 20 cm)に、流速毎分1 mlでかけた。QCの溶出は、150 mMの塩化
ナトリム、及び100 mMのヒスチジンを含む50 mMリン酸緩衝液によって行なった。QC含
有画分は、限外濾過により濃縮した。
(パパイヤラテックス由来QCの精製)
パパイヤラテックス由来QCは、BioCAD 700E(Perseptive Biosystems、Wiesbaden社
、ドイツ)を用いて、以前に報告された方法(Zerhouni, S.らの論文、1989 Biochim Bio
phys Acta 138, 275-290)の修正版で調製した。50 gのラテックスを水に溶解し、その中
に記載されているように遠心した。プロテアーゼの不活化は、S-メチルメタンチオスルフ
ォネートによって行い、その結果得られた粗抽出液を、透析した。透析後、上清全体は、
100 mMの酢酸ナトリウム緩衝液、pH 5.0で平衡化したSPセファロースファーストフロウ(
Fast Flow)カラム(21 x内径2.5 cm)にかけた(流速3 ml/分)。溶出は、流速2 ml/
分で、酢酸ナトリム緩衝液の濃度を上げていく3工程において行なった。第一工程は、0.
5カラム容量の、0.1 Mから0.5 Mへの酢酸ナトリム緩衝液濃度の直線勾配による溶出であ
った。第二工程は、4カラム容量の、0.5 Mから0.68 Mへの酢酸ナトリム緩衝液濃度の直線
勾配による溶出であった。そして、最終溶出工程の間は、1カラム容量の、0.85 Mの緩衝
液を用いた。最も高い酵素活性を含む画分(6 ml)を溜めた。濃縮と、0.02 Mトリス/HC
l緩衝液(pH 8.0)への緩衝液交換は、限外濾過(アミコン(Amicon);透過分子量10 kD
aの膜を使用)により行なった。
パパイヤラテックス由来QCは、BioCAD 700E(Perseptive Biosystems、Wiesbaden社
、ドイツ)を用いて、以前に報告された方法(Zerhouni, S.らの論文、1989 Biochim Bio
phys Acta 138, 275-290)の修正版で調製した。50 gのラテックスを水に溶解し、その中
に記載されているように遠心した。プロテアーゼの不活化は、S-メチルメタンチオスルフ
ォネートによって行い、その結果得られた粗抽出液を、透析した。透析後、上清全体は、
100 mMの酢酸ナトリウム緩衝液、pH 5.0で平衡化したSPセファロースファーストフロウ(
Fast Flow)カラム(21 x内径2.5 cm)にかけた(流速3 ml/分)。溶出は、流速2 ml/
分で、酢酸ナトリム緩衝液の濃度を上げていく3工程において行なった。第一工程は、0.
5カラム容量の、0.1 Mから0.5 Mへの酢酸ナトリム緩衝液濃度の直線勾配による溶出であ
った。第二工程は、4カラム容量の、0.5 Mから0.68 Mへの酢酸ナトリム緩衝液濃度の直線
勾配による溶出であった。そして、最終溶出工程の間は、1カラム容量の、0.85 Mの緩衝
液を用いた。最も高い酵素活性を含む画分(6 ml)を溜めた。濃縮と、0.02 Mトリス/HC
l緩衝液(pH 8.0)への緩衝液交換は、限外濾過(アミコン(Amicon);透過分子量10 kD
aの膜を使用)により行なった。
イオン交換クロマトグラフィー工程から得られた、濃縮されたパパイヤの酵素に、最終
濃度2 Mになるように硫酸アンモニウムを加えた。この溶液を、2 M硫酸アンモニウムを含
む0.02 Mのトリス/HCl溶液(pH8.0)によって平衡化されたブチルセファロース4 ファー
ストフロウ(Fast Flow)カラム(21 x内径2.5 cm)にかけた(流速1.3 ml/分)。溶出
は、硫酸アンモニウム濃度を下げて行く3工程で行なった。第一工程の間は、2 Mから0.6
Mへの硫酸アンモニウムの直線勾配を、0.5カラム容量の0.02 Mトリス/HCl溶液(pH 8.0
)で用いた(流速1.3 ml/分)。第二工程は、0.6 Mから0 M硫酸アンモニウムの直線勾配
を5カラム容量の0.02 Mのトリス/HCl溶液(pH8.0)により、流速毎分1.5 mlでの溶出で
あった。0.02 Mのトリス/HCl溶液(pH 8.0)を、流速1.5 ml/分で用いることにより、
最終溶出工程を行なった。すべてのQC活性を含む画分を溜め、限外濾過により濃縮した
。その結果得られた均質のQCは、-70℃に保存した。最終タンパク質濃度は、Bradford
の方法を用い、ウシ血清アルブミンで得られた標準曲線と比較して決定した。
濃度2 Mになるように硫酸アンモニウムを加えた。この溶液を、2 M硫酸アンモニウムを含
む0.02 Mのトリス/HCl溶液(pH8.0)によって平衡化されたブチルセファロース4 ファー
ストフロウ(Fast Flow)カラム(21 x内径2.5 cm)にかけた(流速1.3 ml/分)。溶出
は、硫酸アンモニウム濃度を下げて行く3工程で行なった。第一工程の間は、2 Mから0.6
Mへの硫酸アンモニウムの直線勾配を、0.5カラム容量の0.02 Mトリス/HCl溶液(pH 8.0
)で用いた(流速1.3 ml/分)。第二工程は、0.6 Mから0 M硫酸アンモニウムの直線勾配
を5カラム容量の0.02 Mのトリス/HCl溶液(pH8.0)により、流速毎分1.5 mlでの溶出で
あった。0.02 Mのトリス/HCl溶液(pH 8.0)を、流速1.5 ml/分で用いることにより、
最終溶出工程を行なった。すべてのQC活性を含む画分を溜め、限外濾過により濃縮した
。その結果得られた均質のQCは、-70℃に保存した。最終タンパク質濃度は、Bradford
の方法を用い、ウシ血清アルブミンで得られた標準曲線と比較して決定した。
(実施例2):グルタミニルシクラーゼ活性の測定
(蛍光測定法)
すべての測定は、30℃で、マイクロプレート用のバイオアッセイリーダーHTS-7000プラ
ス(BioAssay Reader HTS-7000Plus)(Perkin Elmer社)で行った。QC活性は、H-Gln-
βNAを用い、蛍光測定的に評価した。試料は、20 mM EDTAを含む0.2 Mトリス/HCl溶液(
pH 8.0)中の0.2 mM蛍光基質、0.25 Uピログルタミニルアミノペプチダーゼ(Unizyme, H
orsholm社、Denmark)、及び適切に希釈されたQCの分注液を、最終容量250μlに調節し
た。励起/発光波長は、320/410 nmであった。測定反応は、グルタミニルシクラーゼの
添加により開始した。QC活性は、測定条件下のβ-ナフチルアミンの標準曲線から決定
した。1ユニットは、記載された条件下で、1分当たりH-Gln-βNAから1μmol pGlu-βNA
の産生を触媒するQCの量として定義した。
第二の蛍光測定法において、QCの活性は、H-Gln-AMCを基質に用いて決定した。反応
は、ノボスター(NOVOStar)マイクロプレートリーダー(BMG labtechnologies社)を用
い、30℃で行った。試料は、5 mMのEDTAを含む0.05 Mトリス/HCl溶液(pH 8.0)中の多
様な濃度の該蛍光基質、0.1 Uピログルタミルアミノペプチダーゼ(Qiagen社)、及び適
切に希釈されたQCの分注液を、最終容量を250μlに調節した。励起/発光波長は、380
/460 nmであった。測定反応は、グルタミニルシクラーゼの添加により開始した。QC活
性は、測定条件下の7-アミノ-4-メチルクマリンの標準曲線から決定した。速度論的デー
タは、グラフィト(GraFit)ソフトウェアを用いて査定した。
(蛍光測定法)
すべての測定は、30℃で、マイクロプレート用のバイオアッセイリーダーHTS-7000プラ
ス(BioAssay Reader HTS-7000Plus)(Perkin Elmer社)で行った。QC活性は、H-Gln-
βNAを用い、蛍光測定的に評価した。試料は、20 mM EDTAを含む0.2 Mトリス/HCl溶液(
pH 8.0)中の0.2 mM蛍光基質、0.25 Uピログルタミニルアミノペプチダーゼ(Unizyme, H
orsholm社、Denmark)、及び適切に希釈されたQCの分注液を、最終容量250μlに調節し
た。励起/発光波長は、320/410 nmであった。測定反応は、グルタミニルシクラーゼの
添加により開始した。QC活性は、測定条件下のβ-ナフチルアミンの標準曲線から決定
した。1ユニットは、記載された条件下で、1分当たりH-Gln-βNAから1μmol pGlu-βNA
の産生を触媒するQCの量として定義した。
第二の蛍光測定法において、QCの活性は、H-Gln-AMCを基質に用いて決定した。反応
は、ノボスター(NOVOStar)マイクロプレートリーダー(BMG labtechnologies社)を用
い、30℃で行った。試料は、5 mMのEDTAを含む0.05 Mトリス/HCl溶液(pH 8.0)中の多
様な濃度の該蛍光基質、0.1 Uピログルタミルアミノペプチダーゼ(Qiagen社)、及び適
切に希釈されたQCの分注液を、最終容量を250μlに調節した。励起/発光波長は、380
/460 nmであった。測定反応は、グルタミニルシクラーゼの添加により開始した。QC活
性は、測定条件下の7-アミノ-4-メチルクマリンの標準曲線から決定した。速度論的デー
タは、グラフィト(GraFit)ソフトウェアを用いて査定した。
(QCの分光学的測定法)
この新規測定法を使い、ほとんどのQC基質の速度論的パラメータを決定した。QC活
性は、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを補助酵素として使用した、以前の非連続測定法(
Bateman, R. C. J.の論文、1989 J Neurosci Methods 30, 23-28)を適応させることによ
り得られた、連続法を使って、分光光学的に分析した。最終容量250μl中の試料は、各Q
C基質、0.3 mMの NADH、14 mMのα-ケトグルタル酸、及び30 U/mlのグルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼから成った。測定反応は、グルタミニルシクラーゼの添加により開始し、34
0 nmでの吸光度の減少を8〜15分間モニターすることにより遂行した。産物産生の典型的
経時変化を、図1に示す。
初期の速度を測定し、測定条件下のアンモニアの標準曲線から、該酵素活性を決定した
。全試料は、30℃でスペクトラフルオープラス(SPECTRAFluor Plus)、又はサンライズ
(Sunrise)(両者ともTECAN社)マイクロプレートリーダーを用い、測定した。速度論的
データは、グラフィト(GraFit)ソフトウェアを用いて査定した。
この新規測定法を使い、ほとんどのQC基質の速度論的パラメータを決定した。QC活
性は、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを補助酵素として使用した、以前の非連続測定法(
Bateman, R. C. J.の論文、1989 J Neurosci Methods 30, 23-28)を適応させることによ
り得られた、連続法を使って、分光光学的に分析した。最終容量250μl中の試料は、各Q
C基質、0.3 mMの NADH、14 mMのα-ケトグルタル酸、及び30 U/mlのグルタミン酸デヒ
ドロゲナーゼから成った。測定反応は、グルタミニルシクラーゼの添加により開始し、34
0 nmでの吸光度の減少を8〜15分間モニターすることにより遂行した。産物産生の典型的
経時変化を、図1に示す。
初期の速度を測定し、測定条件下のアンモニアの標準曲線から、該酵素活性を決定した
。全試料は、30℃でスペクトラフルオープラス(SPECTRAFluor Plus)、又はサンライズ
(Sunrise)(両者ともTECAN社)マイクロプレートリーダーを用い、測定した。速度論的
データは、グラフィト(GraFit)ソフトウェアを用いて査定した。
(インヒビター測定)
インヒビター試験において、試料組成は、推定上の阻害性化合物を添加加した以外は、
前記のものと同様であった。短時間QC阻害試験では、試料は4 mMの各インヒビターを含
み、かつ1 KMの基質濃度であった。阻害の詳細な研究、及びKi値の決定においては、最初
に、インヒビターの補助酵素における影響を調べた。どの場合も、どちらかの酵素に対す
る影響は検出されず、従って、信頼性のあるQC阻害測定を可能にした。阻害定数は、グ
ラフィト(GraFit)ソフトウェアを用いて、該時間経過の曲線を競合阻害の一般式に当て
はめることにより決定した。
インヒビター試験において、試料組成は、推定上の阻害性化合物を添加加した以外は、
前記のものと同様であった。短時間QC阻害試験では、試料は4 mMの各インヒビターを含
み、かつ1 KMの基質濃度であった。阻害の詳細な研究、及びKi値の決定においては、最初
に、インヒビターの補助酵素における影響を調べた。どの場合も、どちらかの酵素に対す
る影響は検出されず、従って、信頼性のあるQC阻害測定を可能にした。阻害定数は、グ
ラフィト(GraFit)ソフトウェアを用いて、該時間経過の曲線を競合阻害の一般式に当て
はめることにより決定した。
(実施例3):MALDI-TOF質量分析
ヒューレットパッカード(Hewlett-Packard)G2025 LD-TOFシステムをリニア飛行時間
型分析計と共に用いて、マトリックス支援イオン化−飛行時間型質量分析を行なった。機
器には、337 nm窒素レーザー、加速電位源(5 kV)、及び1.0 mの飛行管を装着した。検
出器操作は、陽イオンモードで、かつシグナルはパーソナルコンピューターに接続したレ
クロイ9350 Mデジタルストレージオシロスコープ(LeCroy 9350M digital storage oscil
loscope)で記録、及びフィルターをかけた。試料(5μl)は、同量のマトリックス溶液
と混合した。マトリックス溶液には、1 mlアセトニトリル/0.1% TFA水溶液(1:1、v/
v)に、30 mgの2',6'-ジヒドロキシアセトフェノン(Aldrich社)、及び44 mgのクエン酸
水素二アンモニウム(Fluka社)を溶解して調製したDHAP/DAHCを用いた。少量(≒1μl
)のマトリックス−検体混合物は、プローブ先端に移動させ、かつ速やかに真空管(Hewl
ett-Packard G2024A 試料調製付属品)の中で蒸発させ、急速、かつ均一な試料結晶化を
確実にした。
ヒューレットパッカード(Hewlett-Packard)G2025 LD-TOFシステムをリニア飛行時間
型分析計と共に用いて、マトリックス支援イオン化−飛行時間型質量分析を行なった。機
器には、337 nm窒素レーザー、加速電位源(5 kV)、及び1.0 mの飛行管を装着した。検
出器操作は、陽イオンモードで、かつシグナルはパーソナルコンピューターに接続したレ
クロイ9350 Mデジタルストレージオシロスコープ(LeCroy 9350M digital storage oscil
loscope)で記録、及びフィルターをかけた。試料(5μl)は、同量のマトリックス溶液
と混合した。マトリックス溶液には、1 mlアセトニトリル/0.1% TFA水溶液(1:1、v/
v)に、30 mgの2',6'-ジヒドロキシアセトフェノン(Aldrich社)、及び44 mgのクエン酸
水素二アンモニウム(Fluka社)を溶解して調製したDHAP/DAHCを用いた。少量(≒1μl
)のマトリックス−検体混合物は、プローブ先端に移動させ、かつ速やかに真空管(Hewl
ett-Packard G2024A 試料調製付属品)の中で蒸発させ、急速、かつ均一な試料結晶化を
確実にした。
長期間Glu1環化反応試験においては、Aβ由来ペプチドは、30℃の100μl 0.1 M酢酸ナ
トリウム緩衝液(pH 5.2)、または0.1 Mビス-トリス緩衝液(pH 6.5)中に準備した。ペ
プチドは、0.5 mM [Aβ3-11a]、又は0.15 mM [Aβ3-21a]濃度で使用し、0.2 U QCは、全2
4時間加えた。Aβ(3-21)aの場合は、1% DMSOを加え測定した。様々な時間で、試料は測
定管から採取され、ペプチドは、製造会社推奨に従いジップチップ(ZipTip)(Millipor
e社)で抽出し、マトリックス溶液と混合(1:1、v/v)し、かつその後、マススペクトル
を記録した。ネガティブコントロールは、QCを加えないか、又は加熱不活化酵素を加え
るかのいずれかであった。インヒビターの研究において、該試料組成は、阻害化合物(5
mMベンズイミダゾール、又は2 mM 1,10-フェナントロリン)を添加する以外は、前記と同
様であった。
トリウム緩衝液(pH 5.2)、または0.1 Mビス-トリス緩衝液(pH 6.5)中に準備した。ペ
プチドは、0.5 mM [Aβ3-11a]、又は0.15 mM [Aβ3-21a]濃度で使用し、0.2 U QCは、全2
4時間加えた。Aβ(3-21)aの場合は、1% DMSOを加え測定した。様々な時間で、試料は測
定管から採取され、ペプチドは、製造会社推奨に従いジップチップ(ZipTip)(Millipor
e社)で抽出し、マトリックス溶液と混合(1:1、v/v)し、かつその後、マススペクトル
を記録した。ネガティブコントロールは、QCを加えないか、又は加熱不活化酵素を加え
るかのいずれかであった。インヒビターの研究において、該試料組成は、阻害化合物(5
mMベンズイミダゾール、又は2 mM 1,10-フェナントロリン)を添加する以外は、前記と同
様であった。
(実施例4):pH依存性
ヒト、及びパパイヤQCの触媒作用のpH依存性を、一次反応条件下で研究し、それ故に
特異性定数kcat/KMにおけるプロトン濃度の影響を示した。この目的のために、ピログル
タミルアミノペプチダーゼを補助酵素、及びGln-βNAを基質として使用した、結合酵素測
定(the coupled enzymatic assay)を使用した。ピログルタミルアミノペプチダーゼは
、pH 5.5〜8.5で活性を有し、かつ安定であることが示された(Tsuru, D.らの論文、1978
J Biochem(Tokyo)84, 467-476)。それ故に、該測定によって、このpH範囲内でQC触
媒の研究が可能になった。得られた速度プロファイルは、図2に示されるように、典型的
ベル型曲線に適合した。ヒトQCは、至適pHがおよそ7.8〜8.0の、大変狭いpH依存性を有
する。該速度は、より塩基性のpHで、降下する傾向があった。これは、pH 8.5まで活性の
降下を示さなかった(図2、差し込み図)、パパイヤQCで見られた速度プロファイルと
対照的である。しかしながら、両酵素は、pH 8で至適特異性を示した。意外にも、曲線の
査定により、ヒト、及びパパイヤの酸性範囲でのpKa値は、各々7.17±0.02、及び7.15±0
.02と、同一であることが明らかになった。
ヒト、及びパパイヤQCの触媒作用のpH依存性を、一次反応条件下で研究し、それ故に
特異性定数kcat/KMにおけるプロトン濃度の影響を示した。この目的のために、ピログル
タミルアミノペプチダーゼを補助酵素、及びGln-βNAを基質として使用した、結合酵素測
定(the coupled enzymatic assay)を使用した。ピログルタミルアミノペプチダーゼは
、pH 5.5〜8.5で活性を有し、かつ安定であることが示された(Tsuru, D.らの論文、1978
J Biochem(Tokyo)84, 467-476)。それ故に、該測定によって、このpH範囲内でQC触
媒の研究が可能になった。得られた速度プロファイルは、図2に示されるように、典型的
ベル型曲線に適合した。ヒトQCは、至適pHがおよそ7.8〜8.0の、大変狭いpH依存性を有
する。該速度は、より塩基性のpHで、降下する傾向があった。これは、pH 8.5まで活性の
降下を示さなかった(図2、差し込み図)、パパイヤQCで見られた速度プロファイルと
対照的である。しかしながら、両酵素は、pH 8で至適特異性を示した。意外にも、曲線の
査定により、ヒト、及びパパイヤの酸性範囲でのpKa値は、各々7.17±0.02、及び7.15±0
.02と、同一であることが明らかになった。
明らかに、ヒトQCの、塩基pH値での活性の減少は、pKa値およそ8.5を有する原子団の
解離に起因した。パパイヤQCの場合は、その第二pKa値の信用できる測定を可能にする
ような、塩基性pHにおけるデータポイント収集はなかった。これは、該データの単独解離
モデルへの適合が、該データの二重解離モデルへの適合と比べて、ほぼ同一のpKa値(pKa
7.13±0.03)をもたらすことにより、支持される。これは、双方のpKa値が、かなり離れ
ていることを示唆する。
解離に起因した。パパイヤQCの場合は、その第二pKa値の信用できる測定を可能にする
ような、塩基性pHにおけるデータポイント収集はなかった。これは、該データの単独解離
モデルへの適合が、該データの二重解離モデルへの適合と比べて、ほぼ同一のpKa値(pKa
7.13±0.03)をもたらすことにより、支持される。これは、双方のpKa値が、かなり離れ
ていることを示唆する。
(pH安定性)
グルタミニルシクラーゼの安定性は、該植物、及び動物酵素をpH 4〜10間の異なるpH値
において、30℃で30分間インキュベートすることにより調べた。その後、QC活性は、標
準的条件下で調べた。その結果を、図3に示す。
パパイヤラテックス由来の該QCは、酸性、又は塩基性の範囲での顕著な不安定性への
傾向はなく、研究したpH範囲内で安定であった。その一方、ヒトQCは、7〜8.5間のpH範
囲内で同程度に安定であった。従って、pH 8のあたりの領域が、植物、及びヒトQCの活
性、及び安定性にとって至適で、かつ該QCの基質特異性の比較を行うのに適しているよ
うである。
グルタミニルシクラーゼの安定性は、該植物、及び動物酵素をpH 4〜10間の異なるpH値
において、30℃で30分間インキュベートすることにより調べた。その後、QC活性は、標
準的条件下で調べた。その結果を、図3に示す。
パパイヤラテックス由来の該QCは、酸性、又は塩基性の範囲での顕著な不安定性への
傾向はなく、研究したpH範囲内で安定であった。その一方、ヒトQCは、7〜8.5間のpH範
囲内で同程度に安定であった。従って、pH 8のあたりの領域が、植物、及びヒトQCの活
性、及び安定性にとって至適で、かつ該QCの基質特異性の比較を行うのに適しているよ
うである。
(実施例5):QCの基質特異性の決定
(分光学的測定)
実施例2に記載したように、連続分光学的測定を行った。従って、QCの活性は、α-
ケトグルタル酸からのグルタミン酸の産生のための、アンモニアの遊離、及びその後のNA
DH/H+の消費に起因する340 nmでの吸光度の減少に反映する。図1に示すように、リニア
プログレス曲線をモニターしたところ、測定した活性、及びQC濃度の間には、直線関係
があった。さらに、ここ(表6)に示す連続測定を使用し、得られたH-Gln-Gln-OHの速度
パラメータは、断続法を使用して得られたものとよく一致した(KM=175±18μM、kcat=
21.3±0.6 s-1)。その上、表1に示したパパイヤQCによる、基質H-Gln-Ala-OH、H-Gln
-Glu-OH、H-Gln-Gln-OH、H-Gln-OtBu、及びH-Gln-NH2の転換速度パラメータは、pH 8.8、
及び37℃の条件で、直接法を使用して決定されたものとよく一致した(Gololobov, M. Y.
らの論文、1996 Biol Chem Hoppe Seyler 377, 395-398)。それ故、新規連続アッセイ法
が、信用できる結果を提供することは明らかである。
(分光学的測定)
実施例2に記載したように、連続分光学的測定を行った。従って、QCの活性は、α-
ケトグルタル酸からのグルタミン酸の産生のための、アンモニアの遊離、及びその後のNA
DH/H+の消費に起因する340 nmでの吸光度の減少に反映する。図1に示すように、リニア
プログレス曲線をモニターしたところ、測定した活性、及びQC濃度の間には、直線関係
があった。さらに、ここ(表6)に示す連続測定を使用し、得られたH-Gln-Gln-OHの速度
パラメータは、断続法を使用して得られたものとよく一致した(KM=175±18μM、kcat=
21.3±0.6 s-1)。その上、表1に示したパパイヤQCによる、基質H-Gln-Ala-OH、H-Gln
-Glu-OH、H-Gln-Gln-OH、H-Gln-OtBu、及びH-Gln-NH2の転換速度パラメータは、pH 8.8、
及び37℃の条件で、直接法を使用して決定されたものとよく一致した(Gololobov, M. Y.
らの論文、1996 Biol Chem Hoppe Seyler 377, 395-398)。それ故、新規連続アッセイ法
が、信用できる結果を提供することは明らかである。
(ジ、トリ、及びジペプチド代用物)
先に記載した該新規連続アッセイ法を使用し、約30種の化合物をパパイヤ(C. papay
a)、及びヒト由来QCの潜在基質として調べた。結果を、表6に示した。特異性の比較
により、ほぼ全部の短いペプチドがパパイヤQCにより、該ヒト酵素に比べてより効果的
に転換されることが示された。興味深いことに、他のトリペプチドと比較したH-Gln-Tyr-
Ala-OH、H-Gln-Phe-Ala-NH2、及びH-Gln-Trp-Ala-NH2の特異性、又はジペプチド基質と比
較した発色基質H-Gln-AMC、H-Gln-βNA、及びH-Gln-Tyr-OHの反応性により示されるよう
に、両酵素において、2位に疎水性の残基を有する基質が、最も有効な基質である。パパ
イヤQCにおいて、この知見は、その特異性が2位のアミノ酸残基の大きさに相関関係が
あるという初期の結果と一致する(Gololobov, M. Y.らの論文、1996 Biol Chem Hoppe S
eyler 377, 395-398)。植物、及び動物QCの特異性における唯一顕著な相違点は、H-Gl
n-OtBuにおいて観察された。エステルはパパイヤQCにより、ジペプチド基質と同様の特
異性で転換されるのに対し、ヒトQCでは、ほぼ一桁遅く転換された。
先に記載した該新規連続アッセイ法を使用し、約30種の化合物をパパイヤ(C. papay
a)、及びヒト由来QCの潜在基質として調べた。結果を、表6に示した。特異性の比較
により、ほぼ全部の短いペプチドがパパイヤQCにより、該ヒト酵素に比べてより効果的
に転換されることが示された。興味深いことに、他のトリペプチドと比較したH-Gln-Tyr-
Ala-OH、H-Gln-Phe-Ala-NH2、及びH-Gln-Trp-Ala-NH2の特異性、又はジペプチド基質と比
較した発色基質H-Gln-AMC、H-Gln-βNA、及びH-Gln-Tyr-OHの反応性により示されるよう
に、両酵素において、2位に疎水性の残基を有する基質が、最も有効な基質である。パパ
イヤQCにおいて、この知見は、その特異性が2位のアミノ酸残基の大きさに相関関係が
あるという初期の結果と一致する(Gololobov, M. Y.らの論文、1996 Biol Chem Hoppe S
eyler 377, 395-398)。植物、及び動物QCの特異性における唯一顕著な相違点は、H-Gl
n-OtBuにおいて観察された。エステルはパパイヤQCにより、ジペプチド基質と同様の特
異性で転換されるのに対し、ヒトQCでは、ほぼ一桁遅く転換された。
(オリゴペプチド)
様々なジペプチド、及びトリペプチドに加えて、パパイヤ、及びヒトQCによる転換に
より、多くのオリゴペプチドを調べた(表6)。興味深いことに、テトラペプチドグルー
プにおけるヒト、及びパパイヤQCにおける特異性の相違点は、ジペプチド、及びトリペ
プチド基質で観察されたほど大きくなかった。これにより、3位及び4位のアミノ酸でも
、特にヒトQCの速度論的挙動に影響することが示唆された。しかしながら、H-Gln-Xaa-Ty
r-Phe-NH2の構造のテトラペプチドグループにおいて著しく減少したkcat/KM値を示す、
2位のアミノ酸がプロリンのペプチドは例外である(表6)。その特異性の低下は、ヒト
QCにおいてより顕著であり、パパイヤQCと比較して該kcat/KM値においてほぼ8倍の
相違をもたらした。
様々なジペプチド、及びトリペプチドに加えて、パパイヤ、及びヒトQCによる転換に
より、多くのオリゴペプチドを調べた(表6)。興味深いことに、テトラペプチドグルー
プにおけるヒト、及びパパイヤQCにおける特異性の相違点は、ジペプチド、及びトリペ
プチド基質で観察されたほど大きくなかった。これにより、3位及び4位のアミノ酸でも
、特にヒトQCの速度論的挙動に影響することが示唆された。しかしながら、H-Gln-Xaa-Ty
r-Phe-NH2の構造のテトラペプチドグループにおいて著しく減少したkcat/KM値を示す、
2位のアミノ酸がプロリンのペプチドは例外である(表6)。その特異性の低下は、ヒト
QCにおいてより顕著であり、パパイヤQCと比較して該kcat/KM値においてほぼ8倍の
相違をもたらした。
また、ヒトQCの特異性の微低下は、H-Gln-Arg-Tyr-Phe-NH2、H-Gln-Arg-Tyr-Phe-NH2
、及びH-Gln-Lys-Arg-Leu-NH2の特異性を他のテトラペプチドと比較して示唆されるよう
に、アミノ酸C末端に正に荷電されたグルタミンを有する基質の転換において観察された
。明らかに、該特異性低下は、主としてより小さい代謝回転数に起因した。この効果は、
該植物酵素では見られなかった。
、及びH-Gln-Lys-Arg-Leu-NH2の特異性を他のテトラペプチドと比較して示唆されるよう
に、アミノ酸C末端に正に荷電されたグルタミンを有する基質の転換において観察された
。明らかに、該特異性低下は、主としてより小さい代謝回転数に起因した。この効果は、
該植物酵素では見られなかった。
また、該テトラペプチドで得られた結果は、もう一つの結論をもたらした。既に指摘し
たように、パパイヤQCは、ジペプチドにより高い特異性を示した。しかしながら、2位
のアミノ酸にグルタミン酸を含有するペプチドグループにおいて、表6に与えられたデー
タを曲線で表した図4で示されるように、テトラペプチドによっては、ヒトQCにおいて
より高い特異性定数が観察された。さらに、ペプチド鎖長が、ジから、テトラペプチドへ
伸張するにつれて、パパイヤQCで得られた結果と対照的に、ヒトQCの選択性は上昇し
た。さらに、ヒトQCは、3位、又は4位のアミノ酸に大型の疎水性残基を有するペプチ
ドにおいて、最も高い選択性を記録し、それにより、該酵素の疎水性相互作用を示唆した
。それぞれのペプチドの速度パラメータを比較すると、該変化は主に低いKM値に起因する
と考えられ、該ペプチドの代謝回転数は同様であることが見い出された。従って、ヒトQ
Cの長いペプチドに対する高選択性は、より疎水性の基質の該酵素へのより強い結合の結
果であると考えられる。
たように、パパイヤQCは、ジペプチドにより高い特異性を示した。しかしながら、2位
のアミノ酸にグルタミン酸を含有するペプチドグループにおいて、表6に与えられたデー
タを曲線で表した図4で示されるように、テトラペプチドによっては、ヒトQCにおいて
より高い特異性定数が観察された。さらに、ペプチド鎖長が、ジから、テトラペプチドへ
伸張するにつれて、パパイヤQCで得られた結果と対照的に、ヒトQCの選択性は上昇し
た。さらに、ヒトQCは、3位、又は4位のアミノ酸に大型の疎水性残基を有するペプチ
ドにおいて、最も高い選択性を記録し、それにより、該酵素の疎水性相互作用を示唆した
。それぞれのペプチドの速度パラメータを比較すると、該変化は主に低いKM値に起因する
と考えられ、該ペプチドの代謝回転数は同様であることが見い出された。従って、ヒトQ
Cの長いペプチドに対する高選択性は、より疎水性の基質の該酵素へのより強い結合の結
果であると考えられる。
また、3位と4位に疎水性アミノ酸を含有するペプチドにおいて観察されたヒト,及び
植物QCの相違点は、H-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2、及びH-Gln-Arg-Tyr-Phe-NH2、又はH-Gln-
Gln-OH、及びH-Gln-Gln-Tyr-Phe-OHに対する該酵素の特異性定数の比較により明らかにな
る。
また、ヒトQCが、N末端にGlnを含有し、かつC末端Ala残基が増加する同族基質にお
いて、より選択的であることを見い出した(表7)。ヒトQCの選択性が、基質の鎖長が
伸張するにつれ増加したのに対し、パパイヤQCにはそのような傾向はなかった。また、
ヒトQCがSer残基を配列に含有するペプチドに対して、より低い特異性であったので、
側鎖の性質が重要であるように考えられる(表6)。
植物QCの相違点は、H-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2、及びH-Gln-Arg-Tyr-Phe-NH2、又はH-Gln-
Gln-OH、及びH-Gln-Gln-Tyr-Phe-OHに対する該酵素の特異性定数の比較により明らかにな
る。
また、ヒトQCが、N末端にGlnを含有し、かつC末端Ala残基が増加する同族基質にお
いて、より選択的であることを見い出した(表7)。ヒトQCの選択性が、基質の鎖長が
伸張するにつれ増加したのに対し、パパイヤQCにはそのような傾向はなかった。また、
ヒトQCがSer残基を配列に含有するペプチドに対して、より低い特異性であったので、
側鎖の性質が重要であるように考えられる(表6)。
(触媒反応におけるイオン強度の影響)
イオン強度は、基質特異性の影響に関して調べたもう1つのパラメータであった。その
目的において、様々な基質の環化反応における速度パラメータを、0.5 M KClの存在、又
は非存在下で決定した(表8)。驚いたことに、パパイヤラテックス由来QC、及びヒト
QCにおいて、荷電されていない基幹をもつ基質の選択性は、塩の付加により有意に変化
しなかったが、ヒトQCのH-Gln-Ala-OH、及びH-Gln-Glu-OHにおける特異性定数は、KCl
の添加により低下した。各々の速度パラメータにより示唆されるように、この効果は、上
昇したKM、及びごくわずかに減少したkcat値に起因した。パパイヤQCの場合は、どちら
のパラメータにおいても効果は検出されなかった。負に荷電されたH-Gln-Glu-Asp-Leu-NH
2において、パラメータの変化が見い出されなかったことから、該効果は、そのように負
に荷電された基質に起因しないように考えられる。塩付加の興味深い効果は、正に荷電さ
れたH-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2、及びH-Gln-Lys-Arg-Leu-NH2において見い出された。植物、
及びヒトQCの場合、触媒反応における正の効果は、主に、より小さいKM値、及びわずか
に高い代謝回転数に起因すると決定した。
イオン強度は、基質特異性の影響に関して調べたもう1つのパラメータであった。その
目的において、様々な基質の環化反応における速度パラメータを、0.5 M KClの存在、又
は非存在下で決定した(表8)。驚いたことに、パパイヤラテックス由来QC、及びヒト
QCにおいて、荷電されていない基幹をもつ基質の選択性は、塩の付加により有意に変化
しなかったが、ヒトQCのH-Gln-Ala-OH、及びH-Gln-Glu-OHにおける特異性定数は、KCl
の添加により低下した。各々の速度パラメータにより示唆されるように、この効果は、上
昇したKM、及びごくわずかに減少したkcat値に起因した。パパイヤQCの場合は、どちら
のパラメータにおいても効果は検出されなかった。負に荷電されたH-Gln-Glu-Asp-Leu-NH
2において、パラメータの変化が見い出されなかったことから、該効果は、そのように負
に荷電された基質に起因しないように考えられる。塩付加の興味深い効果は、正に荷電さ
れたH-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2、及びH-Gln-Lys-Arg-Leu-NH2において見い出された。植物、
及びヒトQCの場合、触媒反応における正の効果は、主に、より小さいKM値、及びわずか
に高い代謝回転数に起因すると決定した。
(生理的基質)
既に、初期の研究において、QCによる[Gln1]-TRH、及び[Gln1]-GnRHの転換は、ウシ
、及びブタ脳下垂体由来QCにおいて示された(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol
Chem 262, 8532-8536;Fischer, W. H.、及びSpiess, J.の論文、1987 Proc Natl Acad
Sci U S A 84, 3628-3632)。既に調べられたこれらの脳下垂体ホルモンに加え、ヒトQ
Cの3つの潜在基質、すなわちGln1-ガストリン、Gln1-ニューロテンシン、及びGln1-FPP
を合成し、調べた。それらの転換の速度パラメータは表1に示した。興味深いことに、グ
ルタミニルペプチドは、その大きさに依存して特異性定数の上昇を伴いながら、各々のピ
ログルタミルペプチドへ転換される。すなわち、17アミノ酸の最も大きいペプチドプロ
ガストリンが最初で、続いて、プロニューロテンシン、プロGnRH、プロTRH、及びプロFPP
である。これらの知見は、合成ペプチドを用いて得られたデータに一致する。
また、驚いたことに、長い基質ほど、該植物酵素による高い選択性で転換され、それは
、より短いオリゴペプチドにおける知見と部分的に対照的である。おそらく、活性部位か
らはるかに離れた、基質、及び酵素間の二次的結合相互作用が存在する。
既に、初期の研究において、QCによる[Gln1]-TRH、及び[Gln1]-GnRHの転換は、ウシ
、及びブタ脳下垂体由来QCにおいて示された(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol
Chem 262, 8532-8536;Fischer, W. H.、及びSpiess, J.の論文、1987 Proc Natl Acad
Sci U S A 84, 3628-3632)。既に調べられたこれらの脳下垂体ホルモンに加え、ヒトQ
Cの3つの潜在基質、すなわちGln1-ガストリン、Gln1-ニューロテンシン、及びGln1-FPP
を合成し、調べた。それらの転換の速度パラメータは表1に示した。興味深いことに、グ
ルタミニルペプチドは、その大きさに依存して特異性定数の上昇を伴いながら、各々のピ
ログルタミルペプチドへ転換される。すなわち、17アミノ酸の最も大きいペプチドプロ
ガストリンが最初で、続いて、プロニューロテンシン、プロGnRH、プロTRH、及びプロFPP
である。これらの知見は、合成ペプチドを用いて得られたデータに一致する。
また、驚いたことに、長い基質ほど、該植物酵素による高い選択性で転換され、それは
、より短いオリゴペプチドにおける知見と部分的に対照的である。おそらく、活性部位か
らはるかに離れた、基質、及び酵素間の二次的結合相互作用が存在する。
(改質アミノ酸含有ペプチド)
さらに、該QCの該特異性、及び該選択性を調べるために、改質N末端グルタミニル残
基、又は2位に改質アミノ酸を含むペプチドを合成した。これらのペプチドの転換は、MA
LDI-TOF質量分析法を用いて、定性的に調べた(実施例3も参照)。グルタミニル残基、
又はその類似体のそれぞれの環化反応に起因して、該基質と該触媒反応生成物の質量差を
検出する。また、基質モル当たり、1モルのアンモニア遊離の場合は、該転換を、分光学
的定量法を用いて定量的に分析した。
さらに、該QCの該特異性、及び該選択性を調べるために、改質N末端グルタミニル残
基、又は2位に改質アミノ酸を含むペプチドを合成した。これらのペプチドの転換は、MA
LDI-TOF質量分析法を用いて、定性的に調べた(実施例3も参照)。グルタミニル残基、
又はその類似体のそれぞれの環化反応に起因して、該基質と該触媒反応生成物の質量差を
検出する。また、基質モル当たり、1モルのアンモニア遊離の場合は、該転換を、分光学
的定量法を用いて定量的に分析した。
(H-Gln-Lys(Gln)-Arg-Leu-Ala-NH2)
N末端において、ペプチド、及び部分イソペプチド結合でリシル残基に結合している2
グルタミニル残基含有する、N末端分鎖ペプチドは、ヒト(図5)、及びパパイヤQC(
図示せず)により明らかに同一の方法で転換された。一貫した基質転換で示唆される(図
5)ように、両グルタミニル残基は、個別の残基に対する検出可能な優先はなく、ピログ
ルタミン酸へ転換された。従って、QCの、異なった結合をしたグルタミニル残基におけ
る選択性は、根本的に相違しない。
N末端において、ペプチド、及び部分イソペプチド結合でリシル残基に結合している2
グルタミニル残基含有する、N末端分鎖ペプチドは、ヒト(図5)、及びパパイヤQC(
図示せず)により明らかに同一の方法で転換された。一貫した基質転換で示唆される(図
5)ように、両グルタミニル残基は、個別の残基に対する検出可能な優先はなく、ピログ
ルタミン酸へ転換された。従って、QCの、異なった結合をしたグルタミニル残基におけ
る選択性は、根本的に相違しない。
(H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2)
唯一、メチル化されたグルタミニル残基は、パパイヤQCにより、ピログルタミル残基
に転換された(図6)。さらに、該ヒトQCの該ペプチドによる阻害は検出されなかった
ので、該メチル化された残基はヒトQCにより認識されないことが示唆された。
唯一、メチル化されたグルタミニル残基は、パパイヤQCにより、ピログルタミル残基
に転換された(図6)。さらに、該ヒトQCの該ペプチドによる阻害は検出されなかった
ので、該メチル化された残基はヒトQCにより認識されないことが示唆された。
(H-Glu(OMe)-βNA、及びH-Glu-βNA)
これらの化合物はどちらも、パパイヤ、及びヒトQCによって転換されなかった。これ
らの蛍光発生基質は、ピログルタミルアミノペプチダーゼを補助酵素として使用しながら
、蛍光分析学的に分析した。しかしながら、O-メチル化グルタミン酸残基は、非酵素的触
媒環化反応する傾向があるトリス、及びトリシン緩衝液両者において顕著な不安定性を示
した。さらに、両QCのH-Gln-AMCを基質とする活性は、H-Glu(OMe)-Phe-Lys-Arg-Leu-
Ala-NH2、又はH-Glu-Phe-Lys-Arg-Leu-Ala-NH2の長鎖ペプチドにより阻害されなかったこ
とは、グルタミン酸、又は誘導体が両QC型により認識されないことを示唆する。さらに
、該結果はグルタミン酸残基の負電荷のみが、該ペプチドの該活性部位からの反発力の原
因でないことを意味する。
これらの化合物はどちらも、パパイヤ、及びヒトQCによって転換されなかった。これ
らの蛍光発生基質は、ピログルタミルアミノペプチダーゼを補助酵素として使用しながら
、蛍光分析学的に分析した。しかしながら、O-メチル化グルタミン酸残基は、非酵素的触
媒環化反応する傾向があるトリス、及びトリシン緩衝液両者において顕著な不安定性を示
した。さらに、両QCのH-Gln-AMCを基質とする活性は、H-Glu(OMe)-Phe-Lys-Arg-Leu-
Ala-NH2、又はH-Glu-Phe-Lys-Arg-Leu-Ala-NH2の長鎖ペプチドにより阻害されなかったこ
とは、グルタミン酸、又は誘導体が両QC型により認識されないことを示唆する。さらに
、該結果はグルタミン酸残基の負電荷のみが、該ペプチドの該活性部位からの反発力の原
因でないことを意味する。
(H-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe))
分子内部分イソペプチド結合を含有するH-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe
)の転換を定量的に分析し、ヒト、及びパパイヤQCにおけるKM値が各々240±14μM、及
び133±5μMであることを明らかにした。ヒトQC(22.8±0.6 s-1)と比較して、パパイ
ヤQC(49.4±0.6 s-1)による転換におけるより高い代謝回転数に起因して、該植物Q
Cは、ヒトQCのおよそ4倍高いkcat/KM値372±9 mM-1min-1を示した。従って、パパイ
ヤQCの場合、特異性定数はH-Gln-Ala-Ala-Ser-Ala-Ala-NH2のような同様の大きさをも
つ基質と比べてごくわずかに小さい。しかしながら、ヒトQCのkcat/KM値は、95±3 mM
-1s-1で、同様の大きさの基質に比べておよそ一桁小さいことを見い出した(表5)。
分子内部分イソペプチド結合を含有するH-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe
)の転換を定量的に分析し、ヒト、及びパパイヤQCにおけるKM値が各々240±14μM、及
び133±5μMであることを明らかにした。ヒトQC(22.8±0.6 s-1)と比較して、パパイ
ヤQC(49.4±0.6 s-1)による転換におけるより高い代謝回転数に起因して、該植物Q
Cは、ヒトQCのおよそ4倍高いkcat/KM値372±9 mM-1min-1を示した。従って、パパイ
ヤQCの場合、特異性定数はH-Gln-Ala-Ala-Ser-Ala-Ala-NH2のような同様の大きさをも
つ基質と比べてごくわずかに小さい。しかしながら、ヒトQCのkcat/KM値は、95±3 mM
-1s-1で、同様の大きさの基質に比べておよそ一桁小さいことを見い出した(表5)。
(H-βホモGln-Phe-Lys-Arg-Leu-Ala-NH2)
N末端β-ホモグルタミニル残基は、ヒト、及びパパイヤQCの触媒作用により、各々
五員ラクタム環へ転換された。アンモニアの付随遊離を、先に記載したように、分光学的
、及びMALDI-tof分析法により分析した。QCを除いたり、又は沸騰した場合、アンモニ
アの遊離が検出されなかったことから、該環化反応の特異的な触媒反応であることが示唆
された。興味深いことに、パパイヤ(C. papaya)(KM=3.1±0.3 mM、kcat=4.0±0.4 s
-1)、及びヒト(KM=2.5±0.2 mM、kcat=3.5±0.1 s-1)由来該QCは、各々1.4±0.1
、及び1.3±0.1 mM-1s-1とほぼ同一のkcat/KMで、該ペプチドの転換を触媒する。従って
、β-グルタミン残基の環化反応は、N末端にグルタミニル残基を含有する同様の大きさ
のペプチドに比べて、およそ1000倍低下した効率で触媒される。これは、基質のα-炭素
の構造が、QC型による基質認識において重要であるが、必須ではないことを示す。基質
である必須条件は、環化反応しやすい距離と角度の、γ-アミド基、及びプロトン化され
ていないN末端アミノ基であり、N末端グルタミニル、及びγ-ホモ-グルタミニル残基は
必須条件を満たしている。
N末端β-ホモグルタミニル残基は、ヒト、及びパパイヤQCの触媒作用により、各々
五員ラクタム環へ転換された。アンモニアの付随遊離を、先に記載したように、分光学的
、及びMALDI-tof分析法により分析した。QCを除いたり、又は沸騰した場合、アンモニ
アの遊離が検出されなかったことから、該環化反応の特異的な触媒反応であることが示唆
された。興味深いことに、パパイヤ(C. papaya)(KM=3.1±0.3 mM、kcat=4.0±0.4 s
-1)、及びヒト(KM=2.5±0.2 mM、kcat=3.5±0.1 s-1)由来該QCは、各々1.4±0.1
、及び1.3±0.1 mM-1s-1とほぼ同一のkcat/KMで、該ペプチドの転換を触媒する。従って
、β-グルタミン残基の環化反応は、N末端にグルタミニル残基を含有する同様の大きさ
のペプチドに比べて、およそ1000倍低下した効率で触媒される。これは、基質のα-炭素
の構造が、QC型による基質認識において重要であるが、必須ではないことを示す。基質
である必須条件は、環化反応しやすい距離と角度の、γ-アミド基、及びプロトン化され
ていないN末端アミノ基であり、N末端グルタミニル、及びγ-ホモ-グルタミニル残基は
必須条件を満たしている。
(実施例6):QC基質の合成
(オリゴペプチド)
ペプチドを、既に記載されたように、ペプチド合成機(ラボーテックSP650(Labortec
SP650)、Bachem社、スイス)を使用し、0.5 mmolスケールで半自動的に合成した(Schil
ling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)。長鎖ペプチドは、記載され
たように、自動化シンフォニーペプチド合成機(Symphony peptide synthesizer)(Rain
in Instrument社)を使用し、25μmolスケールで合成した(Manhart, S.らの論文、2003
Biochemistry 42, 3081-3088)。すべてのペプチド結合において、2-(1H-ベンゾトリア
ゾール-1-イル)-1,1,3,3,-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸(TBTU;Novab
iochem社)/塩基(ジイソプロピルエチルアミン、又はN-メチル- モルホリン;Merck社
)を使用する、改質した固相ペプチド合成のFmocプロトコルを採用し、又は困難な結合の
場合は、N-[(ジメチルアミノ)-1H-1,2,3,-トリアゾロ[4,5-b]ピリジン-1-イルメチレン
]-N-メチルメタンアンモニウムヘキサフルオロリン酸N-オキシド(4,5)(HATU;Applied
Biosystems社)/ジイソプロピルエチルアミンを活性化剤として使用した。カクテルを
含むトリフルオロ酢酸(TFA;Merck社)によるレジンからの開裂の後、粗ペプチドは無酸
性溶媒の分取用HPLCにより精製し、N末端グルタミンのさらなる環化反応を回避した。25
0-21ルナ(Luna)RP18カラム(Phenomenex社)におけるアセトニトリル(Merck社)水溶
液リニアグラジエント(40分間を通して、5〜40%、又は65%アセトニトリル)で分取HPL
Cを行った。ペプチド精度と同定を裏付けるために、分析用HPLC、及びESI-MSを使用した
。
(オリゴペプチド)
ペプチドを、既に記載されたように、ペプチド合成機(ラボーテックSP650(Labortec
SP650)、Bachem社、スイス)を使用し、0.5 mmolスケールで半自動的に合成した(Schil
ling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)。長鎖ペプチドは、記載され
たように、自動化シンフォニーペプチド合成機(Symphony peptide synthesizer)(Rain
in Instrument社)を使用し、25μmolスケールで合成した(Manhart, S.らの論文、2003
Biochemistry 42, 3081-3088)。すべてのペプチド結合において、2-(1H-ベンゾトリア
ゾール-1-イル)-1,1,3,3,-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸(TBTU;Novab
iochem社)/塩基(ジイソプロピルエチルアミン、又はN-メチル- モルホリン;Merck社
)を使用する、改質した固相ペプチド合成のFmocプロトコルを採用し、又は困難な結合の
場合は、N-[(ジメチルアミノ)-1H-1,2,3,-トリアゾロ[4,5-b]ピリジン-1-イルメチレン
]-N-メチルメタンアンモニウムヘキサフルオロリン酸N-オキシド(4,5)(HATU;Applied
Biosystems社)/ジイソプロピルエチルアミンを活性化剤として使用した。カクテルを
含むトリフルオロ酢酸(TFA;Merck社)によるレジンからの開裂の後、粗ペプチドは無酸
性溶媒の分取用HPLCにより精製し、N末端グルタミンのさらなる環化反応を回避した。25
0-21ルナ(Luna)RP18カラム(Phenomenex社)におけるアセトニトリル(Merck社)水溶
液リニアグラジエント(40分間を通して、5〜40%、又は65%アセトニトリル)で分取HPL
Cを行った。ペプチド精度と同定を裏付けるために、分析用HPLC、及びESI-MSを使用した
。
(Glu(NH-NH2)-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2)
直鎖前駆体ペプチド(Fmoc-Glu-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2)は、標準的Fmoc方法(Schillin
g, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)に従って、リンクアミド(Rink a
mide)MBHAリジン(Novabiochem社)において合成した。Fmoc保護ペプチドのレジンから
の開裂後、該ペプチドを、ジエチルエーテル(Merck)で沈殿させ、濾過し、かつ乾燥さ
せた。ジクロロメタン(DCM、Merck社)中で、該前駆体のγ-カルボン酸基(0.3等量)を
結合させるのに、HMBA-AM レジン(1.16 mmol/g、Novabiochem社)を使用した。結合剤
として、ジシクロへキシルカルボジイミド(DCC、Serva社)(4等量)、及びジメチルア
ミノピリジン(DMAP、Aldrich社)(0.1等量)を使用した。12時間後、レジンを、濾過し
、DCMで洗い、反応を繰り返した。20%ピペリジンDMF溶液(5分間、3回)を用いたN末端
Fmoc基の脱保護後、該ペプチドリジンを、5%ヒドラジン溶液(20 ml/g)で1.5時間処理
した。該レジンを、濾過し、ジメチルホルムアミド(DMF、Roth社、ドイツ)、及びTFAで
洗った。蒸発後、該粗ペプチドをエーテルで沈殿し、76%の収率を得た。
直鎖前駆体ペプチド(Fmoc-Glu-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2)は、標準的Fmoc方法(Schillin
g, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)に従って、リンクアミド(Rink a
mide)MBHAリジン(Novabiochem社)において合成した。Fmoc保護ペプチドのレジンから
の開裂後、該ペプチドを、ジエチルエーテル(Merck)で沈殿させ、濾過し、かつ乾燥さ
せた。ジクロロメタン(DCM、Merck社)中で、該前駆体のγ-カルボン酸基(0.3等量)を
結合させるのに、HMBA-AM レジン(1.16 mmol/g、Novabiochem社)を使用した。結合剤
として、ジシクロへキシルカルボジイミド(DCC、Serva社)(4等量)、及びジメチルア
ミノピリジン(DMAP、Aldrich社)(0.1等量)を使用した。12時間後、レジンを、濾過し
、DCMで洗い、反応を繰り返した。20%ピペリジンDMF溶液(5分間、3回)を用いたN末端
Fmoc基の脱保護後、該ペプチドリジンを、5%ヒドラジン溶液(20 ml/g)で1.5時間処理
した。該レジンを、濾過し、ジメチルホルムアミド(DMF、Roth社、ドイツ)、及びTFAで
洗った。蒸発後、該粗ペプチドをエーテルで沈殿し、76%の収率を得た。
(H-Gln-Lys(Gln)-Arg-Leu-Ala-NH2)
直鎖ペプチドを、標準的Fmoc/tBu方法に従って、Fmoc-Lys(Fmoc)-OHを最後から2番
目のアミノ酸結合として使用して、リンクアミド(Rink amide)MBHA(Schilling, S.ら
の論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)において合成した。20%ピペリジン(Mer
ck社)DMF溶液で、レジンの2つのアミノ保護基を脱保護後、4等量のFmoc-Gln(Trt)-OH
を結合させた。標準的開裂法で、95%の収率を得た。
直鎖ペプチドを、標準的Fmoc/tBu方法に従って、Fmoc-Lys(Fmoc)-OHを最後から2番
目のアミノ酸結合として使用して、リンクアミド(Rink amide)MBHA(Schilling, S.ら
の論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)において合成した。20%ピペリジン(Mer
ck社)DMF溶液で、レジンの2つのアミノ保護基を脱保護後、4等量のFmoc-Gln(Trt)-OH
を結合させた。標準的開裂法で、95%の収率を得た。
(H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2)
Fmoc-Gln(NMe)-OHを、Fmoc-MI-AM(Novabiochem社)レジンに充填したFmoc-Glu-OtBu
から開始して合成した。DCMで膨潤後、該レジン(0.5 g)をDMFで洗い、20%ピペリジン
(Merck社)DMF溶液で脱保護した。該レジンを5 ml DMF中に入れ、5等量Fmoc-Glu-OtBu、
5等量HATU、及び10等量DIPEAを次いで加え、6時間振とうした。濾過、及び洗浄後、生成
物を標準的TFA開裂条件に従って、開裂した。該H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2ペプ
チドは、記載されたように合成した(Schilling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 1
0849-10857)。Fmoc-Gln(NMe)-OHは、HATU/DIPEAと一晩結合させた。標準的開裂法で
、78%の収率を得た。
Fmoc-Gln(NMe)-OHを、Fmoc-MI-AM(Novabiochem社)レジンに充填したFmoc-Glu-OtBu
から開始して合成した。DCMで膨潤後、該レジン(0.5 g)をDMFで洗い、20%ピペリジン
(Merck社)DMF溶液で脱保護した。該レジンを5 ml DMF中に入れ、5等量Fmoc-Glu-OtBu、
5等量HATU、及び10等量DIPEAを次いで加え、6時間振とうした。濾過、及び洗浄後、生成
物を標準的TFA開裂条件に従って、開裂した。該H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2ペプ
チドは、記載されたように合成した(Schilling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 1
0849-10857)。Fmoc-Gln(NMe)-OHは、HATU/DIPEAと一晩結合させた。標準的開裂法で
、78%の収率を得た。
(H-Glu(OMe)-β-ナフチルアミド、H-Gln-Val-OH、H-Gln-Tyr-OH)
Boc保護ジペプチドを、クロロ炭酸イソブチル(Merck社)を使用して、標準的無水物混
合法で合成した。C末端メチルエステルBoc-Gln-Tyr-OMe、及びBoc-Gln-Val-OMeを、1 N
NaOHジオキサン溶液により鹸化した。Boc保護ペプチドは、HCl/ジオキサン溶液により、
10分間脱保護した。蒸発後、残基を様々な溶媒で結晶化させ、固体化合物の60〜70%の収
率を得た。
Boc保護ジペプチドを、クロロ炭酸イソブチル(Merck社)を使用して、標準的無水物混
合法で合成した。C末端メチルエステルBoc-Gln-Tyr-OMe、及びBoc-Gln-Val-OMeを、1 N
NaOHジオキサン溶液により鹸化した。Boc保護ペプチドは、HCl/ジオキサン溶液により、
10分間脱保護した。蒸発後、残基を様々な溶媒で結晶化させ、固体化合物の60〜70%の収
率を得た。
(H-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe))
直鎖前駆体Boc-Gln(Trt)-Lys-Arg(Pmc)-Ala-Gly-Phe-OHを、酸感受性2-クロロトリ
チルレジンにおいて合成した。結合を、Fmoc-Lys(Mtt)-OHを用いたFmoc/tBu方法の標
準的プロトコルを用いて行った。3%TFA DCM 溶液(10回、5分)で開裂後、該溶液は、10
%ピリジン(Merck社)メタノール溶液(MeOH;Merck社)で中和し、DCM、及びMeOHで3回
洗い、5%の容量に蒸発させ、粗ペプチドは氷冷水で沈殿させた。その後、該粗シペプチ
ドは、DCC/N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt;Aldrich社)活性化を利用して、環
化した。該粗ペプチドは、乾燥ジクロロメタン溶液(0.2 mmol/50 ml)に、溶解し、0.2
mmolのN-メチルモルホリン、及び0.4 mmolの1-ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加し
た。この溶液を、0℃において、250 mlの0.4 mmolジシクロヘキシルカルボジイミドのジ
クロロメタン溶液へ滴下した。該反応は、室温で、一晩撹拌して完了した。N,N'-ジシク
ロヘキシル尿素の濾過後、溶媒は、蒸発により除いた。残留物は、エチルアセテートに溶
解し、1N HCl、NaHCO3飽和溶液、及び水で数回洗った。該溶液は、無水Na2SO4で乾燥さ
せ、濾過し、真空で乾燥するまで蒸発させた。
直鎖前駆体Boc-Gln(Trt)-Lys-Arg(Pmc)-Ala-Gly-Phe-OHを、酸感受性2-クロロトリ
チルレジンにおいて合成した。結合を、Fmoc-Lys(Mtt)-OHを用いたFmoc/tBu方法の標
準的プロトコルを用いて行った。3%TFA DCM 溶液(10回、5分)で開裂後、該溶液は、10
%ピリジン(Merck社)メタノール溶液(MeOH;Merck社)で中和し、DCM、及びMeOHで3回
洗い、5%の容量に蒸発させ、粗ペプチドは氷冷水で沈殿させた。その後、該粗シペプチ
ドは、DCC/N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt;Aldrich社)活性化を利用して、環
化した。該粗ペプチドは、乾燥ジクロロメタン溶液(0.2 mmol/50 ml)に、溶解し、0.2
mmolのN-メチルモルホリン、及び0.4 mmolの1-ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加し
た。この溶液を、0℃において、250 mlの0.4 mmolジシクロヘキシルカルボジイミドのジ
クロロメタン溶液へ滴下した。該反応は、室温で、一晩撹拌して完了した。N,N'-ジシク
ロヘキシル尿素の濾過後、溶媒は、蒸発により除いた。残留物は、エチルアセテートに溶
解し、1N HCl、NaHCO3飽和溶液、及び水で数回洗った。該溶液は、無水Na2SO4で乾燥さ
せ、濾過し、真空で乾燥するまで蒸発させた。
(実施例7):QCのエフェクターの特性
(イミダゾール誘導体)
五員環の異なった位置に置換基をもつイミダゾール、及びベンズイミダゾール誘導体を
、QCのインヒビターとして調べた(表3)。構造式の数は、イミダゾール環を示す。該
方法は、実施例2に示す。
(イミダゾール誘導体)
五員環の異なった位置に置換基をもつイミダゾール、及びベンズイミダゾール誘導体を
、QCのインヒビターとして調べた(表3)。構造式の数は、イミダゾール環を示す。該
方法は、実施例2に示す。
(C-4(5)、及びC-4,5誘導体)
イミダゾール環の構造上同等の4、又は5位のいずれか、又は両位置に置換基をもつ化
合物は、ヒトQCの阻害において有効性の減少を示した。しかしながら、最も効力のある
阻害化合物の1種であることが証明されたN-ω-アセチル化ヒスタミンは、唯一の例外であ
る。イミダゾールと比べて5-ヒドロキシメチル-4-メチル-イミダゾールが同様の阻害定数
を示したように、これらの位置の小さい置換基は、結合にほとんど効果がなかった。これ
らの位置についた大きく、かつ巨大な基は、酵素による化合物の結合を低下、又は消失し
た。他の調べた置換基の中には、イミダゾール環の電子密度を低下できる負の誘導、又は
メソメリー効果を及ぼすことが知られているものもあり、また、それはより低い結合定数
の原因となる。また、L-ヒスチジン、及びヒスチジンアミドのKi値の相違は、結合におけ
る荷電の若干の影響を示唆する。既に、荷電した基質の静電反発力の証拠は、該基質特異
性の研究において示された。すなわち、グルタミンアミドは、ヒトQCにより容易に生成
物に転換されたが、遊離グルタミンにおける基質としての反応性は観察されなかった。
イミダゾール環の構造上同等の4、又は5位のいずれか、又は両位置に置換基をもつ化
合物は、ヒトQCの阻害において有効性の減少を示した。しかしながら、最も効力のある
阻害化合物の1種であることが証明されたN-ω-アセチル化ヒスタミンは、唯一の例外であ
る。イミダゾールと比べて5-ヒドロキシメチル-4-メチル-イミダゾールが同様の阻害定数
を示したように、これらの位置の小さい置換基は、結合にほとんど効果がなかった。これ
らの位置についた大きく、かつ巨大な基は、酵素による化合物の結合を低下、又は消失し
た。他の調べた置換基の中には、イミダゾール環の電子密度を低下できる負の誘導、又は
メソメリー効果を及ぼすことが知られているものもあり、また、それはより低い結合定数
の原因となる。また、L-ヒスチジン、及びヒスチジンアミドのKi値の相違は、結合におけ
る荷電の若干の影響を示唆する。既に、荷電した基質の静電反発力の証拠は、該基質特異
性の研究において示された。すなわち、グルタミンアミドは、ヒトQCにより容易に生成
物に転換されたが、遊離グルタミンにおける基質としての反応性は観察されなかった。
(C-2誘導体)
調べたすべての誘導体は、イミダゾールのように、より弱くQCを阻害した。プロトン
より大きいすべての置換は、適切なQC結合を妨げる。唯一2-メチル-ベンズイミダゾー
ルのメチル基に起因して、該阻害定数は、およそ一桁の程度低下する。ベンズイミダゾー
ル、及び2-アミノ-ベンズイミダゾールにおけるKi値の比較により、非常に類似した関係
が示された。さらに、その結果により、影響が電子論的改質に関連しないことが示唆され
た。
調べたすべての誘導体は、イミダゾールのように、より弱くQCを阻害した。プロトン
より大きいすべての置換は、適切なQC結合を妨げる。唯一2-メチル-ベンズイミダゾー
ルのメチル基に起因して、該阻害定数は、およそ一桁の程度低下する。ベンズイミダゾー
ル、及び2-アミノ-ベンズイミダゾールにおけるKi値の比較により、非常に類似した関係
が示された。さらに、その結果により、影響が電子論的改質に関連しないことが示唆され
た。
(N-1誘導体)
ヒトQCの阻害を調べたイミダゾール誘導体の中で、イミダゾールと比べて向上したKi
値を持つほとんどの化合物は、1窒素原子において改質が見られた。また、これらの化合
物には、最も有効なQCインヒビターの1種、1-ベンジルイミダゾールが含まれた。興味
深いことに、1-ベンゾイルイミダゾール、及びフェニルイミダゾールにおいて見られるよ
うに、この構造のごくわずかな改質が、阻害特性の消失を起こし、実験条件下では不活性
であった。また、この場合において、該観察された変化は、フェニル基の負のメソメリー
効果に起因するイミダゾール環の低下した電子密度よって引き起こされるだけでないよう
に思われ、それは、正の誘導効果を示す、巨大なトリメチルシリル基もまた、他の残基に
比べて結合の低下を示したからである。興味深いことに、1-アミノプロピル-イミダゾー
ルは、この族においてさほど有効性がない化合物の1種であった。立体的に同様の化合物
1-メチルイミダゾール、及び1-ビニルイミダゾールにおいては、活性部位への結合の向上
が見られたので、この化合物の該低有効性は、該塩基アミノ基によって引き起こされる。
従って、正に荷電されたアミノ基が、該低Ki値の原因となり、その結果はN-ω-アセチル
化ヒスタミン(表3)、及びヒスタミン(表4)により裏付けられる。
ヒトQCの阻害を調べたイミダゾール誘導体の中で、イミダゾールと比べて向上したKi
値を持つほとんどの化合物は、1窒素原子において改質が見られた。また、これらの化合
物には、最も有効なQCインヒビターの1種、1-ベンジルイミダゾールが含まれた。興味
深いことに、1-ベンゾイルイミダゾール、及びフェニルイミダゾールにおいて見られるよ
うに、この構造のごくわずかな改質が、阻害特性の消失を起こし、実験条件下では不活性
であった。また、この場合において、該観察された変化は、フェニル基の負のメソメリー
効果に起因するイミダゾール環の低下した電子密度よって引き起こされるだけでないよう
に思われ、それは、正の誘導効果を示す、巨大なトリメチルシリル基もまた、他の残基に
比べて結合の低下を示したからである。興味深いことに、1-アミノプロピル-イミダゾー
ルは、この族においてさほど有効性がない化合物の1種であった。立体的に同様の化合物
1-メチルイミダゾール、及び1-ビニルイミダゾールにおいては、活性部位への結合の向上
が見られたので、この化合物の該低有効性は、該塩基アミノ基によって引き起こされる。
従って、正に荷電されたアミノ基が、該低Ki値の原因となり、その結果はN-ω-アセチル
化ヒスタミン(表3)、及びヒスタミン(表4)により裏付けられる。
(3,4、及び3,5誘導体化の効果)
4(5)位に、又は両位置に置環基を含有するイミダゾール誘導体は、該酵素の結合に
おいて限られた有効性をもつことを示した。該特異的置換基の効果を、L-ヒスタミン、及
びヒスタミンの生物分解の2中間体3-メチル-4-ヒスタミン、及び3-メチル-5-ヒスタミン
(表4)の阻害定数と比較することにより特定した。L-ヒスタミンは、そのアセチル化対
応物に比べて、およそ一桁小さいKi値を示した。3-メチル-4-ヒスタミンの場合において
、一窒素のメチル化は、有効性をかなり向上させた。しかしながら、3-メチル-5-ヒスタ
ミンをもたらすメチル化は、阻害活性の完全な消失を引き起こした。従って、該観察され
た効果は、主に、塩基窒素に隣接した炭素の誘導体化に起因した、結合の立体障害により
引き起こされるように考えられる。おそらく、該塩基窒素は、該酵素の結合において、重
要な役割を果たす。
4(5)位に、又は両位置に置環基を含有するイミダゾール誘導体は、該酵素の結合に
おいて限られた有効性をもつことを示した。該特異的置換基の効果を、L-ヒスタミン、及
びヒスタミンの生物分解の2中間体3-メチル-4-ヒスタミン、及び3-メチル-5-ヒスタミン
(表4)の阻害定数と比較することにより特定した。L-ヒスタミンは、そのアセチル化対
応物に比べて、およそ一桁小さいKi値を示した。3-メチル-4-ヒスタミンの場合において
、一窒素のメチル化は、有効性をかなり向上させた。しかしながら、3-メチル-5-ヒスタ
ミンをもたらすメチル化は、阻害活性の完全な消失を引き起こした。従って、該観察され
た効果は、主に、塩基窒素に隣接した炭素の誘導体化に起因した、結合の立体障害により
引き起こされるように考えられる。おそらく、該塩基窒素は、該酵素の結合において、重
要な役割を果たす。
(実施例8):Aβ(3-40/42)誘導体の産生
Aβ(3-40/42)のN末端の配列で、その3位にグルタミン酸残基の代わりにグルタミン
を含有する短鎖ペプチド2種、Gln3-Aβ(1-11)a (配列: DAQFRHDSGYE)、及びGln3-Aβ(3-1
1)aを用いて、測定を行った。2種のペプチドのDP IVによる開裂、及びQCによるN末端
グルタミン残基の環化反応を、MALDI-TOF質量分析で調べた。測定は、連続触媒反応測定
用の両酵素においてと同様、精製DP IV(ブタ腎臓)、又は粗ブタ脳下垂体ホモジネート
をQC源として用いて行った。
Aβ(3-40/42)のN末端の配列で、その3位にグルタミン酸残基の代わりにグルタミン
を含有する短鎖ペプチド2種、Gln3-Aβ(1-11)a (配列: DAQFRHDSGYE)、及びGln3-Aβ(3-1
1)aを用いて、測定を行った。2種のペプチドのDP IVによる開裂、及びQCによるN末端
グルタミン残基の環化反応を、MALDI-TOF質量分析で調べた。測定は、連続触媒反応測定
用の両酵素においてと同様、精製DP IV(ブタ腎臓)、又は粗ブタ脳下垂体ホモジネート
をQC源として用いて行った。
(結果)
1.DPIVにより触媒されたGln3-Aβ(1-11)aからGln3-Aβ(3-11)aの産生、及びDP IVイン
ヒビター、Val-ピロリジド(Val-Pyrr)によるその抑制
DPIV、又はDPIV様活性は、Gln3-Aβ(3-11)a産生下における、Gln3-Aβ(1-11)aの開裂を
する(図7)。その3位の残基は、この開裂により露出し、それゆえ他の酵素、例えば、
QCによる改質のために、利用されやすくなる。予想どおり、触媒作用は、Val-Pyrrによ
り完全に抑制することが可能である(表8)。
1.DPIVにより触媒されたGln3-Aβ(1-11)aからGln3-Aβ(3-11)aの産生、及びDP IVイン
ヒビター、Val-ピロリジド(Val-Pyrr)によるその抑制
DPIV、又はDPIV様活性は、Gln3-Aβ(3-11)a産生下における、Gln3-Aβ(1-11)aの開裂を
する(図7)。その3位の残基は、この開裂により露出し、それゆえ他の酵素、例えば、
QCによる改質のために、利用されやすくなる。予想どおり、触媒作用は、Val-Pyrrによ
り完全に抑制することが可能である(表8)。
2.脳下垂体ホモジネートにおけるQC触媒作用によるGln3-Aβ(3-11)aからpGlu3-Aβ(3
-11)aの産生、及び1,10-フェナントロリンによる抑制
ブタ脳下垂体ホモジネートに存在するQCは、Gln3-Aβ(3-11)aの[pGlu3]Aβ(3-11)aへ
の転換を触媒する(図9)。[pGlu3]-Aβ(3-11)aの産生は、1,10-フェナントロリンの添
加により阻害された(図10)。
-11)aの産生、及び1,10-フェナントロリンによる抑制
ブタ脳下垂体ホモジネートに存在するQCは、Gln3-Aβ(3-11)aの[pGlu3]Aβ(3-11)aへ
の転換を触媒する(図9)。[pGlu3]-Aβ(3-11)aの産生は、1,10-フェナントロリンの添
加により阻害された(図10)。
3.[pGlu3]Aβ(3-11)aの産生をもたらすDP IV、及びQCの連続触媒作用、及びVal-Pyrr
、及び1,10-フェナントロリンによる抑制
粗ブタ脳下垂体ホモジネートにブタ腎臓由来DP IVを付加して測定した、Gln3-Aβ(1-11
)aから[pGlu3]Aβ(3-11)aの産生は、DP IV、及びQCによる連続触媒反応後、起こる(図
11)。QCインヒビター1,10-フェナントロリン(図12)、又はDP IVインヒビターVa
l-Pyrrを添加したとき(図13)は、[pGlu3]Aβ(3-11)aは産生されなかった。[pGlu3]A
β(3-11)aのわずかな出現は、アミノペプチダーゼの開裂、次いでグルタミン残基の環化
反応に起因し、また、Gln3-Aβ(2-11)aの産生により示唆された。
、及び1,10-フェナントロリンによる抑制
粗ブタ脳下垂体ホモジネートにブタ腎臓由来DP IVを付加して測定した、Gln3-Aβ(1-11
)aから[pGlu3]Aβ(3-11)aの産生は、DP IV、及びQCによる連続触媒反応後、起こる(図
11)。QCインヒビター1,10-フェナントロリン(図12)、又はDP IVインヒビターVa
l-Pyrrを添加したとき(図13)は、[pGlu3]Aβ(3-11)aは産生されなかった。[pGlu3]A
β(3-11)aのわずかな出現は、アミノペプチダーゼの開裂、次いでグルタミン残基の環化
反応に起因し、また、Gln3-Aβ(2-11)aの産生により示唆された。
4.アミノペプチダーゼ触媒作用による、粗脳下垂体ホモジネートにおける[pGlu3]Aβ(3
-11)aの産生
DPIV触媒作用に依存しない[pGlu3]Aβ(3-11)aに起因して、Gln3-Aβ(1-11)aの分解を、
DP IVを添加しない粗脳下垂体ホモジネートにおいて調べた(図14)。4項におけるデ
ータから予想されるように、[pGlu3]Aβ(3-11)aの産生が観察された。また、該データは
、Gln3-Aβ(1-11)aの分解はアミノペプチダーゼによって触媒され、[pGlu3]Aβ(3-11)aを
生じ得ることを示す。それ故、該結果は、ピログルタミル産生は、この組織におけるN末
端ペプチド分解の指標であることを示し、さらに斑形成におけるQCの役割を支持した。
-11)aの産生
DPIV触媒作用に依存しない[pGlu3]Aβ(3-11)aに起因して、Gln3-Aβ(1-11)aの分解を、
DP IVを添加しない粗脳下垂体ホモジネートにおいて調べた(図14)。4項におけるデ
ータから予想されるように、[pGlu3]Aβ(3-11)aの産生が観察された。また、該データは
、Gln3-Aβ(1-11)aの分解はアミノペプチダーゼによって触媒され、[pGlu3]Aβ(3-11)aを
生じ得ることを示す。それ故、該結果は、ピログルタミル産生は、この組織におけるN末
端ペプチド分解の指標であることを示し、さらに斑形成におけるQCの役割を支持した。
(実施例9):組み換えヒトQCによる[Gln3]Aβ(3-11)a;(3-21)a、及び(3-40)の代謝
回転
調べた全ての[Gln3]Aβ誘導ペプチドは、ヒトQCにより、対応するピログルタミル型
へ効率よく転換された(表9)。水溶液におけるGln3-Aβ(3-21)a、及びGln3-Aβ(3-40)
の難溶解性のため、該決定は、1% DMSOの存在下で行った。しかしながら、Gln3-Aβ(3-1
1)aでは、良好な溶解性により、DMSO存在、及び非存在下におけるQC触媒作用の代謝回
転の動態解析が可能であった(表8)。まとめると、鎖長8、18、及び37アミノ酸の
、QC基質としてのAβ-ペプチドの研究(表9参照)により、基質の鎖長が伸張するにつ
れヒトQC活性が上昇するという観察を裏付けた。従って、その特異性定数を考慮に入れ
ると、Gln1-ガストリン、Gln1-ニューロテンシン、Gln1-GnRHは、QC基質の中でも最良
である。同様に、これまで調べた最長のQC基質であるGln3-Aβ(3-40)、及びグルカゴン
は、1% DMSO存在下においても、高二次速度定数(各々449 mM-1s-1、及び526 mM-1s-1)
を示した(表9)。
興味深いことに、調べたアミロイドペプチドにおける該転換の該速度パラメータが、鎖
長の伸張につれて劇的に変化しなかったことは、QC触媒おけるAβのC末端のごく軽度
の影響を示唆した。従って、より良溶解性、及び実験処理によって、Aβの小断片、Gln3-
Aβ(1-11)a、Gln3-Aβ(3-11)a、及びAβ(3-11)aを用いて、これらのペプチドN末端アミ
ノペプチダーゼプロセズに関するさらなる研究を行った。
回転
調べた全ての[Gln3]Aβ誘導ペプチドは、ヒトQCにより、対応するピログルタミル型
へ効率よく転換された(表9)。水溶液におけるGln3-Aβ(3-21)a、及びGln3-Aβ(3-40)
の難溶解性のため、該決定は、1% DMSOの存在下で行った。しかしながら、Gln3-Aβ(3-1
1)aでは、良好な溶解性により、DMSO存在、及び非存在下におけるQC触媒作用の代謝回
転の動態解析が可能であった(表8)。まとめると、鎖長8、18、及び37アミノ酸の
、QC基質としてのAβ-ペプチドの研究(表9参照)により、基質の鎖長が伸張するにつ
れヒトQC活性が上昇するという観察を裏付けた。従って、その特異性定数を考慮に入れ
ると、Gln1-ガストリン、Gln1-ニューロテンシン、Gln1-GnRHは、QC基質の中でも最良
である。同様に、これまで調べた最長のQC基質であるGln3-Aβ(3-40)、及びグルカゴン
は、1% DMSO存在下においても、高二次速度定数(各々449 mM-1s-1、及び526 mM-1s-1)
を示した(表9)。
興味深いことに、調べたアミロイドペプチドにおける該転換の該速度パラメータが、鎖
長の伸張につれて劇的に変化しなかったことは、QC触媒おけるAβのC末端のごく軽度
の影響を示唆した。従って、より良溶解性、及び実験処理によって、Aβの小断片、Gln3-
Aβ(1-11)a、Gln3-Aβ(3-11)a、及びAβ(3-11)aを用いて、これらのペプチドN末端アミ
ノペプチダーゼプロセズに関するさらなる研究を行った。
(実施例10):組み換えヒトQCによるAβ(3-11)a、及びAβ(3-21)aの代謝回転
QC存在下でのAβ(3-11)a、及びAβ(3-21)aのインキュベートにより、以前の研究と対
照的に、グルタミン酸含有ペプチドがQCの基質になる得ることが示された(図15C、
及びD)。QC触媒による[pGlu3]Aβ(3-11)a、及び[pGlu3]Aβ(3-21)aの産生を、各々pH
5.2、及び6.5で調べた。該QCの添加による活性の開始前に、QCインヒビター、ベン
ズイミダゾールを該溶液に添加した場合は、[pGlu3]Aβ(3-11)a、又は[pGlu3]Aβ(3-21)a
を生じる基質転換は抑制された(図15E、及びF)。QCを添加前に煮沸した場合は、
pGluペプチドの産生はごく僅かであった(図15A、及びB)。
QC存在下でのAβ(3-11)a、及びAβ(3-21)aのインキュベートにより、以前の研究と対
照的に、グルタミン酸含有ペプチドがQCの基質になる得ることが示された(図15C、
及びD)。QC触媒による[pGlu3]Aβ(3-11)a、及び[pGlu3]Aβ(3-21)aの産生を、各々pH
5.2、及び6.5で調べた。該QCの添加による活性の開始前に、QCインヒビター、ベン
ズイミダゾールを該溶液に添加した場合は、[pGlu3]Aβ(3-11)a、又は[pGlu3]Aβ(3-21)a
を生じる基質転換は抑制された(図15E、及びF)。QCを添加前に煮沸した場合は、
pGluペプチドの産生はごく僅かであった(図15A、及びB)。
(実施例11):パパイヤQC触媒のGln-βNA、及びGlu-βNA の環化反応におけるpH依
存性
パパイヤQCは、ミカエリスメンテン速度論に従い、2 mM(基質溶解性により限定され
た)までの濃度範囲においてGlu-βNAを転換した(図16)。pH 6.1〜8.5の間で調べた
、QC触媒のGlu-βNAの転換における基質濃度に対する代謝回転の図を検討することによ
り、このGlu基質における、KM、及びkcatの両パラメータが、pHに依存することが示され
た(図16)。これは、以前に記載されたQC触媒のグルタミン環化反応とは対照的であ
り、その反応においては、該既定のpH範囲ではKMの変化のみが観察された(Gololobov, M
. Y.らの論文、(1994)Arch Biochem Biophys 309, 300-307)。
続いて、Glu、及びGln環化反応中のプロトン濃度の影響を検討するために、低一次速度
条件下(すなわち、KM値をはるかに下回る基質濃度)における、Glu-βNA、及びGln-βNA
の環化反応のpH依存性を調べた(図17)。pH 6.0で至適pHを示したグルタミン酸の該環
化反応に対し、グルタミンの環化反応は、pH 8.0で至適pHを示す。各々の至適pHにおける
該特異性定数は、およそ80,000倍異なる一方、pH 6.0付近でのECに対するQCの活性は
8,000倍だけである。
pH 6.0において4週間調べた、Gln-βNAから非酵素的pGluの産生により、一次速度定数
を1.2*10-7 s-1と示された。しかしながら、同期間においてGlu-βNAからpGlu-βNAは産
生されなかったことから、代謝回転の律速速度定数は1.0*10-9 s-1と推定できた。
存性
パパイヤQCは、ミカエリスメンテン速度論に従い、2 mM(基質溶解性により限定され
た)までの濃度範囲においてGlu-βNAを転換した(図16)。pH 6.1〜8.5の間で調べた
、QC触媒のGlu-βNAの転換における基質濃度に対する代謝回転の図を検討することによ
り、このGlu基質における、KM、及びkcatの両パラメータが、pHに依存することが示され
た(図16)。これは、以前に記載されたQC触媒のグルタミン環化反応とは対照的であ
り、その反応においては、該既定のpH範囲ではKMの変化のみが観察された(Gololobov, M
. Y.らの論文、(1994)Arch Biochem Biophys 309, 300-307)。
続いて、Glu、及びGln環化反応中のプロトン濃度の影響を検討するために、低一次速度
条件下(すなわち、KM値をはるかに下回る基質濃度)における、Glu-βNA、及びGln-βNA
の環化反応のpH依存性を調べた(図17)。pH 6.0で至適pHを示したグルタミン酸の該環
化反応に対し、グルタミンの環化反応は、pH 8.0で至適pHを示す。各々の至適pHにおける
該特異性定数は、およそ80,000倍異なる一方、pH 6.0付近でのECに対するQCの活性は
8,000倍だけである。
pH 6.0において4週間調べた、Gln-βNAから非酵素的pGluの産生により、一次速度定数
を1.2*10-7 s-1と示された。しかしながら、同期間においてGlu-βNAからpGlu-βNAは産
生されなかったことから、代謝回転の律速速度定数は1.0*10-9 s-1と推定できた。
(実施例12):酵素失活化/再活性化法
ヒトQC(0.1-0.5 mg、1 mg/ml)の分注液を、3000倍超過の5 mM 1,10-フェナントロ
リン、又は5 mMジピコリン酸含有0.05 Mビス-トリス/HCl溶液(pH 6.8)溶液に対して一
晩透析して、失活させた。続いて、試料を1 mM EDTA含有0.05 Mビス-トリス/HCl溶液(p
H 6.8)に対する透析(3回、2000倍超過)により、失活物質を注意深く除去した。再活
性実験は0.025 Mビス-トリス(pH 6.8)においてZn++、Mn++、Ni++、Ca++、K+、及びCo++
イオンを1.0、0.5、0.25 mMの濃度で用いて、室温で15分間行なった。QC活性測定は
、2 mM EDTA含有0.05 M トリス/HCl溶液(pH 8.0)で行い、緩衝溶液中に存在する微量
の金属イオンにより急速な再活性化を防いだ。
ヒトQC(0.1-0.5 mg、1 mg/ml)の分注液を、3000倍超過の5 mM 1,10-フェナントロ
リン、又は5 mMジピコリン酸含有0.05 Mビス-トリス/HCl溶液(pH 6.8)溶液に対して一
晩透析して、失活させた。続いて、試料を1 mM EDTA含有0.05 Mビス-トリス/HCl溶液(p
H 6.8)に対する透析(3回、2000倍超過)により、失活物質を注意深く除去した。再活
性実験は0.025 Mビス-トリス(pH 6.8)においてZn++、Mn++、Ni++、Ca++、K+、及びCo++
イオンを1.0、0.5、0.25 mMの濃度で用いて、室温で15分間行なった。QC活性測定は
、2 mM EDTA含有0.05 M トリス/HCl溶液(pH 8.0)で行い、緩衝溶液中に存在する微量
の金属イオンにより急速な再活性化を防いだ。
既に、1,10-フェナントロリンによるブタQCの阻害は、記載されている(Busby, W. H
. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536、Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Bio
chemistry 40 11246-11250)。しかしながら、EDTAがQC触媒反応において活性化する効
果を持つことが示されていた事実は、フェナントロリンによる阻害が金属キレートに起因
しないことを示唆した(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536、
Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Biochemistry 40)。また、1,10-フェナントロリンによ
る阻害に加えて、ヒトQC触媒の基質環化反応は、ジピコリン酸、及び8-ヒドロキシキノ
リン、他の金属酵素インヒビター存在下で消失した。これらのキレーターは、QCを競合
的、及び時間依存的に阻害し、すなわち、既に競合的に阻害された初期の活性は、該化合
物の長時間インキュベート後、さらに低下することが見い出された(図18、19)。興
味深いことに、EDTAは、インキュベート時間、又は条件にかかわらず、顕著な阻害を示さ
なかった。
. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536、Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Bio
chemistry 40 11246-11250)。しかしながら、EDTAがQC触媒反応において活性化する効
果を持つことが示されていた事実は、フェナントロリンによる阻害が金属キレートに起因
しないことを示唆した(Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536、
Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Biochemistry 40)。また、1,10-フェナントロリンによ
る阻害に加えて、ヒトQC触媒の基質環化反応は、ジピコリン酸、及び8-ヒドロキシキノ
リン、他の金属酵素インヒビター存在下で消失した。これらのキレーターは、QCを競合
的、及び時間依存的に阻害し、すなわち、既に競合的に阻害された初期の活性は、該化合
物の長時間インキュベート後、さらに低下することが見い出された(図18、19)。興
味深いことに、EDTAは、インキュベート時間、又は条件にかかわらず、顕著な阻害を示さ
なかった。
ヒトQCは、5 mM 1,10-フェナントロリン、又は5 mMジピコリン酸に対する大規模な透
析後、ほぼ完全に阻害された。キレーター非存在緩衝溶液に対して一晩透析を繰り返した
後、QC活性は50〜60%まで部分的に再活性化された。しかしながら、1 mM EDTA含有緩
衝液に対して透析した場合は、再活性化は観察されなかった。
該タンパク質を0.5 mM EDTA 存在下で0.5 mM ZnSO4と10分間インキュベートすること
により、ジピコリン酸、又は1,10-フェナントロリンのいずれかによる不活性化後のQC
活性の、ほぼ完全な再活性化が実現された(図20)。同様に、再活性化にCo++、及びMn
++を用いて、QCの部分再活性化を得た。0.25 mM Zn++存在下ですら、本来の活性の25%
までの再活性化が可能だった。Ni++、Ca++、又はK+イオンを利用すると再活性化は観察さ
れなかった。同様に、完全な活性型QCと、これらのイオンとのインキュベートは、該酵
素活性に影響しなかった。
(図面の簡単な説明)
本発明のこれらおよび他の態様のさらなる理解は、以下の図を参照することより、得ら
れるであろう。
析後、ほぼ完全に阻害された。キレーター非存在緩衝溶液に対して一晩透析を繰り返した
後、QC活性は50〜60%まで部分的に再活性化された。しかしながら、1 mM EDTA含有緩
衝液に対して透析した場合は、再活性化は観察されなかった。
該タンパク質を0.5 mM EDTA 存在下で0.5 mM ZnSO4と10分間インキュベートすること
により、ジピコリン酸、又は1,10-フェナントロリンのいずれかによる不活性化後のQC
活性の、ほぼ完全な再活性化が実現された(図20)。同様に、再活性化にCo++、及びMn
++を用いて、QCの部分再活性化を得た。0.25 mM Zn++存在下ですら、本来の活性の25%
までの再活性化が可能だった。Ni++、Ca++、又はK+イオンを利用すると再活性化は観察さ
れなかった。同様に、完全な活性型QCと、これらのイオンとのインキュベートは、該酵
素活性に影響しなかった。
(図面の簡単な説明)
本発明のこれらおよび他の態様のさらなる理解は、以下の図を参照することより、得ら
れるであろう。
国際公開第99/61431号に記載された該DP IVインヒビターは、アミノ酸残基、及びチア
ゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-アロ-イソロイシルピロリジン、及びその塩を含む。
ゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-アロ-イソロイシルピロリジン、及びその塩を含む。
本発明は、Glu1-ABri, Glu1-ADan, Gln3- Aβ(3-40/42), 及びGln1-ガストリン(17、及び34)からなる群から選択された哺乳動物QCの新規生理学的基質、並びにQC活性の調節によって治療可能な病態、好ましくは、哺乳動物におけるヘリコバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群(Zolliger-Ellison Syndrome)、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク型認知症からなる群から選択される病態の治療のための、QCエフェクターの使用、及びQCエフェクターを含む医薬組成物を提供する。
(ペプチド配列)
本明細書中で言及し、かつ使用したペプチドは、下記の配列を有する。
Aβ(1-42):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-
Ile-Ala(配列番号:1)
Aβ(1-40):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
(配列番号:2)
Aβ(3-42):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala
(配列番号:3)
Aβ(3-40):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val(配列番
号:4)
Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:5)
Aβ(3-11)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:6)
本明細書中で言及し、かつ使用したペプチドは、下記の配列を有する。
Aβ(1-42):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-
Ile-Ala(配列番号:1)
Aβ(1-40):
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val
(配列番号:2)
Aβ(3-42):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala
(配列番号:3)
Aβ(3-40):
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val(配列番
号:4)
Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:5)
Aβ(3-11)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:6)
Aβ(1-21)a:
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-NH2
(配列番号:7)
Aβ(3-21)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
(配列番号:8)
Gln3-Aβ(3-40):
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val(配列番
号:9)
Gln3-Aβ(3-21)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
(配列番号:10)
Gln3-Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:11)
Gln3-Aβ(3-11)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:12)
ABri
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn(配列番号:13)
Glu1-ABri
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn(配列番号:14)
ADan
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr(配列番号:15)
Glu1-ADan
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr(配列番号:16)
Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-
Ala-NH2
(配列番号:7)
Aβ(3-21)a:
Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
(配列番号:8)
Gln3-Aβ(3-40):
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-
Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val(配列番
号:9)
Gln3-Aβ(3-21)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2
(配列番号:10)
Gln3-Aβ(1-11)a:
Asp-Ala-Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:11)
Gln3-Aβ(3-11)a:
Gln-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-NH2(配列番号:12)
ABri
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn(配列番号:13)
Glu1-ABri
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Ser-Arg-Thr-Val-Lys-Lys-Asn-Ile-Ile-Glu-Glu-Asn(配列番号:14)
ADan
pGlu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu
-Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr(配列番号:15)
Glu1-ADan
Glu-Ala-Ser-Asn-Cys-Phe-Ala-Ile-Arg-His-Phe-Glu-Asn-Lys-Phe-Ala-Val-Glu-Thr-Leu-
Ile-Cys-Phe-Asn-Leu-Phe-Leu-Asn-Ser-Gln-Glu-Lys-His-Tyr(配列番号:16)
DP IVインヒビターは、国際公開第99/61431号において開示されている。特に、アミノ酸残基、及びチアゾリジン、又はピロリジン群、及びその塩を含むDP IVインヒビターが開示されており、特にL-トレオ-イソロイシルチアゾリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-トレオ-イソロイシルピロリジン、L-アロ-イソロイシルチアゾリジン、L-アロ-イソロイシルピロリジン、及びその塩である。
本発明に従ってQCのエフェクターと組合せて使用でき、さらに好ましいDP IVインヒビターは、ペプチジルケトンである。例を挙げると、下記化合物、及びその医薬として許容し得るその塩である:
2-メチルカルボニル-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、2-メチルカルボニル-1-N-[(L)-バリニル-(L)-プロリル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(アセチル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(ベンゾイル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-{[(2,6-ジクロロベンジル)チオメチル]カルボニル}-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン、
2-[(ベンゾイル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[グリシル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[([1,3]-チアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-グリシル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ピリジン-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩である。これらの化合物は、国際公開第03/033524号に開示されている。
2-メチルカルボニル-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、2-メチルカルボニル-1-N-[(L)-バリニル-(L)-プロリル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(アセチル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[(L)-アラニル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(ベンゾイル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-{[(2,6-ジクロロベンジル)チオメチル]カルボニル}-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン、
2-[(ベンゾイル-オキシ-メチル)カルボニル]-1-N-[グリシル-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[([1,3]-チアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル)カルボニル]-1-N-[{(L)-アラニル}-グリシル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[(ピリジン-2-イル)カルボニル]-1-N-[N-{(L)-アラニル}-(L)-バリニル]-(2S)-ピロリジントリフルオロ酢酸塩である。これらの化合物は、国際公開第03/033524号に開示されている。
第五の実施態様において、本発明は、胃腸管細胞増殖、特に、胃粘膜細胞及び上皮細胞
の増殖、酸産生壁細胞、及びヒスタミン分泌クロム親和性様(ECL)細胞の分化、及びECL細胞内のヒスタミン生合成、及び貯蔵に関連した遺伝子の発現を刺激し、かつ、活性型 [pGlu1]ガストリンの濃度を維持、又は上昇させることによる、哺乳動物における急性酸分泌を刺激するための、QCの活性上昇エフェクターの使用を提供する。
第六の実施態様において、本発明は、不活性型Gln1-ガストリンの活性型[pGlu1]-ガストリンへの転換率を低下させることによる、哺乳動物におけるヘリコバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸潰瘍疾患、胃癌、結腸直腸癌、及びゾリンジャー-エリソン症候群(Zolliger-Ellison Syndrome)の治療のための、QCの活性低下エフェクターの使用を提供する。
の増殖、酸産生壁細胞、及びヒスタミン分泌クロム親和性様(ECL)細胞の分化、及びECL細胞内のヒスタミン生合成、及び貯蔵に関連した遺伝子の発現を刺激し、かつ、活性型 [pGlu1]ガストリンの濃度を維持、又は上昇させることによる、哺乳動物における急性酸分泌を刺激するための、QCの活性上昇エフェクターの使用を提供する。
第六の実施態様において、本発明は、不活性型Gln1-ガストリンの活性型[pGlu1]-ガストリンへの転換率を低下させることによる、哺乳動物におけるヘリコバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸潰瘍疾患、胃癌、結腸直腸癌、及びゾリンジャー-エリソン症候群(Zolliger-Ellison Syndrome)の治療のための、QCの活性低下エフェクターの使用を提供する。
QC活性のエフェクターを哺乳動物に投与することによって、アルツハイマー病、ダウ
ン症、家族性英国型認知症(Familial British Dementia) (FBD)、家族性デンマーク型認
知症(Familial Danish Dementia)(FDD)、ヘリコバクターピロリの感染を伴う、又は伴わない、潰瘍性疾患、及び胃癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、病原性精神病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害から、選択される病態を、予防、又は緩和、又は治療し得る。
ン症、家族性英国型認知症(Familial British Dementia) (FBD)、家族性デンマーク型認
知症(Familial Danish Dementia)(FDD)、ヘリコバクターピロリの感染を伴う、又は伴わない、潰瘍性疾患、及び胃癌、結腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、病原性精神病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害から、選択される病態を、予防、又は緩和、又は治療し得る。
(オリゴペプチド)
様々なジペプチド、及びトリペプチドに加えて、パパイヤ、及びヒトQCによる転換に
より、多くのオリゴペプチドを調べた(表6)。興味深いことに、テトラペプチドグルー
プにおけるヒト、及びパパイヤQCにおける特異性の相違点は、ジペプチド、及びトリペ
プチド基質で観察されたほど大きくなかった。これにより、3位及び4位のアミノ酸でも
、特にヒトQCの速度論的挙動に影響することが示唆された。しかしながら、H-Gln-Xaa-Ty
r-Phe-NH2(配列番号:28)の構造のテトラペプチドグループにおいて著しく減少したk
cat/KM値を示す、2位のアミノ酸がプロリンのペプチドは例外である(表6)。その特
異性の低下は、ヒトQCにおいてより顕著であり、パパイヤQCと比較して該kcat/KM値
においてほぼ8倍の相違をもたらした。
様々なジペプチド、及びトリペプチドに加えて、パパイヤ、及びヒトQCによる転換に
より、多くのオリゴペプチドを調べた(表6)。興味深いことに、テトラペプチドグルー
プにおけるヒト、及びパパイヤQCにおける特異性の相違点は、ジペプチド、及びトリペ
プチド基質で観察されたほど大きくなかった。これにより、3位及び4位のアミノ酸でも
、特にヒトQCの速度論的挙動に影響することが示唆された。しかしながら、H-Gln-Xaa-Ty
r-Phe-NH2(配列番号:28)の構造のテトラペプチドグループにおいて著しく減少したk
cat/KM値を示す、2位のアミノ酸がプロリンのペプチドは例外である(表6)。その特
異性の低下は、ヒトQCにおいてより顕著であり、パパイヤQCと比較して該kcat/KM値
においてほぼ8倍の相違をもたらした。
また、ヒトQCの特異性の微低下は、H-Gln-Arg-Tyr-Phe-NH2(配列番号:29)、H-G
ln-Arg-Tyr-Phe-NH2(配列番号:29)、及びH-Gln-Lys-Arg-Leu-NH2(配列番号:30
)の特異性を他のテトラペプチドと比較して示唆されるように、アミノ酸C末端に正に荷
電されたグルタミンを有する基質の転換において観察された。明らかに、該特異性低下は
、主としてより小さい代謝回転数に起因した。この効果は、該植物酵素では見られなかっ
た。
ln-Arg-Tyr-Phe-NH2(配列番号:29)、及びH-Gln-Lys-Arg-Leu-NH2(配列番号:30
)の特異性を他のテトラペプチドと比較して示唆されるように、アミノ酸C末端に正に荷
電されたグルタミンを有する基質の転換において観察された。明らかに、該特異性低下は
、主としてより小さい代謝回転数に起因した。この効果は、該植物酵素では見られなかっ
た。
また、3位と4位に疎水性アミノ酸を含有するペプチドにおいて観察されたヒト,及び
植物QCの相違点は、H-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2(配列番号:31)、及びH-Gln-Arg-Tyr-P
he-NH2(配列番号:29)、又はH-Gln-Gln-OH、及びH-Gln-Gln-Tyr-Phe-OH(配列番号:
42)に対する該酵素の特異性定数の比較により明らかになる。
また、ヒトQCが、N末端にGlnを含有し、かつC末端Ala残基が増加する同族基質にお
いて、より選択的であることを見い出した(表7)。ヒトQCの選択性が、基質の鎖長が
伸張するにつれ増加したのに対し、パパイヤQCにはそのような傾向はなかった。また、
ヒトQCがSer残基を配列に含有するペプチドに対して、より低い特異性であったので、
側鎖の性質が重要であるように考えられる(表6)。
植物QCの相違点は、H-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2(配列番号:31)、及びH-Gln-Arg-Tyr-P
he-NH2(配列番号:29)、又はH-Gln-Gln-OH、及びH-Gln-Gln-Tyr-Phe-OH(配列番号:
42)に対する該酵素の特異性定数の比較により明らかになる。
また、ヒトQCが、N末端にGlnを含有し、かつC末端Ala残基が増加する同族基質にお
いて、より選択的であることを見い出した(表7)。ヒトQCの選択性が、基質の鎖長が
伸張するにつれ増加したのに対し、パパイヤQCにはそのような傾向はなかった。また、
ヒトQCがSer残基を配列に含有するペプチドに対して、より低い特異性であったので、
側鎖の性質が重要であるように考えられる(表6)。
(触媒反応におけるイオン強度の影響)
イオン強度は、基質特異性の影響に関して調べたもう1つのパラメータであった。その
目的において、様々な基質の環化反応における速度パラメータを、0.5 M KClの存在、又
は非存在下で決定した(表8)。驚いたことに、パパイヤラテックス由来QC、及びヒト
QCにおいて、荷電されていない基幹をもつ基質の選択性は、塩の付加により有意に変化
しなかったが、ヒトQCのH-Gln-Ala-OH、及びH-Gln-Glu-OHにおける特異性定数は、KCl
の添加により低下した。各々の速度パラメータにより示唆されるように、この効果は、上
昇したKM、及びごくわずかに減少したkcat値に起因した。パパイヤQCの場合は、どちら
のパラメータにおいても効果は検出されなかった。負に荷電されたH-Gln-Glu-Asp-Leu-NH
2(配列番号:41)において、パラメータの変化が見い出されなかったことから、該効
果は、そのように負に荷電された基質に起因しないように考えられる。塩付加の興味深い
効果は、正に荷電されたH-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2(配列番号:31)、及びH-Gln-Lys-Arg
-Leu-NH2(配列番号:30)において見い出された。植物、及びヒトQCの場合、触媒反
応における正の効果は、主に、より小さいKM値、及びわずかに高い代謝回転数に起因する
と決定した。
イオン強度は、基質特異性の影響に関して調べたもう1つのパラメータであった。その
目的において、様々な基質の環化反応における速度パラメータを、0.5 M KClの存在、又
は非存在下で決定した(表8)。驚いたことに、パパイヤラテックス由来QC、及びヒト
QCにおいて、荷電されていない基幹をもつ基質の選択性は、塩の付加により有意に変化
しなかったが、ヒトQCのH-Gln-Ala-OH、及びH-Gln-Glu-OHにおける特異性定数は、KCl
の添加により低下した。各々の速度パラメータにより示唆されるように、この効果は、上
昇したKM、及びごくわずかに減少したkcat値に起因した。パパイヤQCの場合は、どちら
のパラメータにおいても効果は検出されなかった。負に荷電されたH-Gln-Glu-Asp-Leu-NH
2(配列番号:41)において、パラメータの変化が見い出されなかったことから、該効
果は、そのように負に荷電された基質に起因しないように考えられる。塩付加の興味深い
効果は、正に荷電されたH-Gln-Arg-Gly-Ile-NH2(配列番号:31)、及びH-Gln-Lys-Arg
-Leu-NH2(配列番号:30)において見い出された。植物、及びヒトQCの場合、触媒反
応における正の効果は、主に、より小さいKM値、及びわずかに高い代謝回転数に起因する
と決定した。
(H-Gln-Lys(Gln)-Arg-Leu-Ala-NH2(配列番号:45))
N末端において、ペプチド、及び部分イソペプチド結合でリシル残基に結合している2
グルタミニル残基含有する、N末端分鎖ペプチドは、ヒト(図5)、及びパパイヤQC(
図示せず)により明らかに同一の方法で転換された。一貫した基質転換で示唆される(図
5)ように、両グルタミニル残基は、個別の残基に対する検出可能な優先はなく、ピログ
ルタミン酸へ転換された。従って、QCの、異なった結合をしたグルタミニル残基におけ
る選択性は、根本的に相違しない。
N末端において、ペプチド、及び部分イソペプチド結合でリシル残基に結合している2
グルタミニル残基含有する、N末端分鎖ペプチドは、ヒト(図5)、及びパパイヤQC(
図示せず)により明らかに同一の方法で転換された。一貫した基質転換で示唆される(図
5)ように、両グルタミニル残基は、個別の残基に対する検出可能な優先はなく、ピログ
ルタミン酸へ転換された。従って、QCの、異なった結合をしたグルタミニル残基におけ
る選択性は、根本的に相違しない。
(H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2(配列番号:46))
唯一、メチル化されたグルタミニル残基は、パパイヤQCにより、ピログルタミル残基に
転換された(図6)。さらに、該ヒトQCの該ペプチドによる阻害は検出されなかったの
で、該メチル化された残基はヒトQCにより認識されないことが示唆された。
唯一、メチル化されたグルタミニル残基は、パパイヤQCにより、ピログルタミル残基に
転換された(図6)。さらに、該ヒトQCの該ペプチドによる阻害は検出されなかったの
で、該メチル化された残基はヒトQCにより認識されないことが示唆された。
(H-Glu(OMe)-βNA、及びH-Glu-βNA)
これらの化合物はどちらも、パパイヤ、及びヒトQCによって転換されなかった。これ
らの蛍光発生基質は、ピログルタミルアミノペプチダーゼを補助酵素として使用しながら
、蛍光分析学的に分析した。しかしながら、O-メチル化グルタミン酸残基は、非酵素的触
媒環化反応する傾向があるトリス、及びトリシン緩衝液両者において顕著な不安定性を示
した。さらに、両QCのH-Gln-AMCを基質とする活性は、H-Glu(OMe)-Phe-Lys-Arg-Leu-
Ala-NH2(配列番号:47)、又はH-Glu-Phe-Lys-Arg-Leu-Ala-NH2(配列番号:48)の
長鎖ペプチドにより阻害されなかったことは、グルタミン酸、又は誘導体が両QC型によ
り認識されないことを示唆する。さらに、該結果はグルタミン酸残基の負電荷のみが、該
ペプチドの該活性部位からの反発力の原因でないことを意味する。
これらの化合物はどちらも、パパイヤ、及びヒトQCによって転換されなかった。これ
らの蛍光発生基質は、ピログルタミルアミノペプチダーゼを補助酵素として使用しながら
、蛍光分析学的に分析した。しかしながら、O-メチル化グルタミン酸残基は、非酵素的触
媒環化反応する傾向があるトリス、及びトリシン緩衝液両者において顕著な不安定性を示
した。さらに、両QCのH-Gln-AMCを基質とする活性は、H-Glu(OMe)-Phe-Lys-Arg-Leu-
Ala-NH2(配列番号:47)、又はH-Glu-Phe-Lys-Arg-Leu-Ala-NH2(配列番号:48)の
長鎖ペプチドにより阻害されなかったことは、グルタミン酸、又は誘導体が両QC型によ
り認識されないことを示唆する。さらに、該結果はグルタミン酸残基の負電荷のみが、該
ペプチドの該活性部位からの反発力の原因でないことを意味する。
(H-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe)(配列番号:49))
分子内部分イソペプチド結合を含有するH-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe
(配列番号:49))の転換を定量的に分析し、ヒト、及びパパイヤQCにおけるKM値が
各々240±14μM、及び133±5μMであることを明らかにした。ヒトQC(22.8±0.6 s-1)
と比較して、パパイヤQC(49.4±0.6 s-1)による転換におけるより高い代謝回転数に
起因して、該植物QCは、ヒトQCのおよそ4倍高いkcat/KM値372±9 mM-1min-1を示し
た。従って、パパイヤQCの場合、特異性定数はH-Gln-Ala-Ala-Ser-Ala-Ala-NH2(配列
番号:44)のような同様の大きさをもつ基質と比べてごくわずかに小さい。しかしなが
ら、ヒトQCのkcat/KM値は、95±3 mM-1s-1で、同様の大きさの基質に比べておよそ一
桁小さいことを見い出した(表5)。
分子内部分イソペプチド結合を含有するH-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe
(配列番号:49))の転換を定量的に分析し、ヒト、及びパパイヤQCにおけるKM値が
各々240±14μM、及び133±5μMであることを明らかにした。ヒトQC(22.8±0.6 s-1)
と比較して、パパイヤQC(49.4±0.6 s-1)による転換におけるより高い代謝回転数に
起因して、該植物QCは、ヒトQCのおよそ4倍高いkcat/KM値372±9 mM-1min-1を示し
た。従って、パパイヤQCの場合、特異性定数はH-Gln-Ala-Ala-Ser-Ala-Ala-NH2(配列
番号:44)のような同様の大きさをもつ基質と比べてごくわずかに小さい。しかしなが
ら、ヒトQCのkcat/KM値は、95±3 mM-1s-1で、同様の大きさの基質に比べておよそ一
桁小さいことを見い出した(表5)。
(H-βホモGln-Phe-Lys-Arg-Leu-Ala-NH2(配列番号:50))
N末端β-ホモグルタミニル残基は、ヒト、及びパパイヤQCの触媒作用により、各々
五員ラクタム環へ転換された。アンモニアの付随遊離を、先に記載したように、分光学的
、及びMALDI-tof分析法により分析した。QCを除いたり、又は沸騰した場合、アンモニ
アの遊離が検出されなかったことから、該環化反応の特異的な触媒反応であることが示唆
された。興味深いことに、パパイヤ(C. papaya)(KM=3.1±0.3 mM、kcat=4.0±0.4 s
-1)、及びヒト(KM=2.5±0.2 mM、kcat=3.5±0.1 s-1)由来該QCは、各々1.4±0.1
、及び1.3±0.1 mM-1s-1とほぼ同一のkcat/KMで、該ペプチドの転換を触媒する。従って
、β-グルタミン残基の環化反応は、N末端にグルタミニル残基を含有する同様の大きさ
のペプチドに比べて、およそ1000倍低下した効率で触媒される。これは、基質のα-炭素
の構造が、QC型による基質認識において重要であるが、必須ではないことを示す。基質
である必須条件は、環化反応しやすい距離と角度の、γ-アミド基、及びプロトン化され
ていないN末端アミノ基であり、N末端グルタミニル、及びγ-ホモ-グルタミニル残基は
必須条件を満たしている。
N末端β-ホモグルタミニル残基は、ヒト、及びパパイヤQCの触媒作用により、各々
五員ラクタム環へ転換された。アンモニアの付随遊離を、先に記載したように、分光学的
、及びMALDI-tof分析法により分析した。QCを除いたり、又は沸騰した場合、アンモニ
アの遊離が検出されなかったことから、該環化反応の特異的な触媒反応であることが示唆
された。興味深いことに、パパイヤ(C. papaya)(KM=3.1±0.3 mM、kcat=4.0±0.4 s
-1)、及びヒト(KM=2.5±0.2 mM、kcat=3.5±0.1 s-1)由来該QCは、各々1.4±0.1
、及び1.3±0.1 mM-1s-1とほぼ同一のkcat/KMで、該ペプチドの転換を触媒する。従って
、β-グルタミン残基の環化反応は、N末端にグルタミニル残基を含有する同様の大きさ
のペプチドに比べて、およそ1000倍低下した効率で触媒される。これは、基質のα-炭素
の構造が、QC型による基質認識において重要であるが、必須ではないことを示す。基質
である必須条件は、環化反応しやすい距離と角度の、γ-アミド基、及びプロトン化され
ていないN末端アミノ基であり、N末端グルタミニル、及びγ-ホモ-グルタミニル残基は
必須条件を満たしている。
(実施例6):QC基質の合成
(オリゴペプチド)
ペプチドを、既に記載されたように、ペプチド合成機(ラボーテックSP650(Labortec
SP650)、Bachem社、スイス)を使用し、0.5 mmolスケールで半自動的に合成した(Schil
ling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)。長鎖ペプチドは、記載され
たように、自動化シンフォニーペプチド合成機(Symphony peptide synthesizer)(Rain
in Instrument社)を使用し、25μmolスケールで合成した(Manhart, S.らの論文、2003
Biochemistry 42, 3081-3088)。すべてのペプチド結合において、2-(1H-ベンゾトリア
ゾール-1-イル)-1,1,3,3,-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸(TBTU;Novab
iochem社)/塩基(ジイソプロピルエチルアミン、又はN-メチル- モルホリン;Merck社
)を使用する、改質した固相ペプチド合成のFmocプロトコルを採用し、又は困難な結合の
場合は、N-[(ジメチルアミノ)-1H-1,2,3,-トリアゾロ[4,5-b]ピリジン-1-イルメチレン
]-N-メチルメタンアミニウムヘキサフルオロリン酸N-オキシド(4,5)(HATU;Applied B
iosystems社)/ジイソプロピルエチルアミンを活性化剤として使用した。カクテルを含
むトリフルオロ酢酸(TFA;Merck社)によるレジンからの開裂の後、粗ペプチドは無酸性
溶媒の分取用HPLCにより精製し、N末端グルタミンのさらなる環化反応を回避した。250-
21ルナ(Luna)RP18カラム(Phenomenex社)におけるアセトニトリル(Merck社)水溶液
リニアグラジエント(40分間を通して、5〜40%、又は65%アセトニトリル)で分取HPLC
を行った。ペプチド精度と同定を裏付けるために、分析用HPLC、及びESI-MSを使用した。
(オリゴペプチド)
ペプチドを、既に記載されたように、ペプチド合成機(ラボーテックSP650(Labortec
SP650)、Bachem社、スイス)を使用し、0.5 mmolスケールで半自動的に合成した(Schil
ling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)。長鎖ペプチドは、記載され
たように、自動化シンフォニーペプチド合成機(Symphony peptide synthesizer)(Rain
in Instrument社)を使用し、25μmolスケールで合成した(Manhart, S.らの論文、2003
Biochemistry 42, 3081-3088)。すべてのペプチド結合において、2-(1H-ベンゾトリア
ゾール-1-イル)-1,1,3,3,-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸(TBTU;Novab
iochem社)/塩基(ジイソプロピルエチルアミン、又はN-メチル- モルホリン;Merck社
)を使用する、改質した固相ペプチド合成のFmocプロトコルを採用し、又は困難な結合の
場合は、N-[(ジメチルアミノ)-1H-1,2,3,-トリアゾロ[4,5-b]ピリジン-1-イルメチレン
]-N-メチルメタンアミニウムヘキサフルオロリン酸N-オキシド(4,5)(HATU;Applied B
iosystems社)/ジイソプロピルエチルアミンを活性化剤として使用した。カクテルを含
むトリフルオロ酢酸(TFA;Merck社)によるレジンからの開裂の後、粗ペプチドは無酸性
溶媒の分取用HPLCにより精製し、N末端グルタミンのさらなる環化反応を回避した。250-
21ルナ(Luna)RP18カラム(Phenomenex社)におけるアセトニトリル(Merck社)水溶液
リニアグラジエント(40分間を通して、5〜40%、又は65%アセトニトリル)で分取HPLC
を行った。ペプチド精度と同定を裏付けるために、分析用HPLC、及びESI-MSを使用した。
(Glu(NH-NH2)-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2(配列番号:51))
直鎖前駆体ペプチド(Fmoc-Glu-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2(配列番号:52))は、標準的
Fmoc方法(Schilling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)に従って、リ
ンクアミド(Rink amide)MBHAリジン(Novabiochem社)において合成した。Fmoc保護ペ
プチドのレジンからの開裂後、該ペプチドを、ジエチルエーテル(Merck)で沈殿させ、
濾過し、かつ乾燥させた。ジクロロメタン(DCM、Merck社)中で、該前駆体のγ-カルボ
ン酸基(0.3等量)を結合させるのに、HMBA-AM レジン(1.16 mmol/g、Novabiochem社)
を使用した。結合剤として、ジシクロへキシルカルボジイミド(DCC、Serva社)(4等量
)、及びジメチルアミノピリジン(DMAP、Aldrich社)(0.1等量)を使用した。12時間後
、レジンを、濾過し、DCMで洗い、反応を繰り返した。20%ピペリジンDMF溶液(5分間、3
回)を用いたN末端Fmoc基の脱保護後、該ペプチドリジンを、5%ヒドラジン溶液(20 ml
/g)で1.5時間処理した。該レジンを、濾過し、ジメチルホルムアミド(DMF、Roth社、
ドイツ)、及びTFAで洗った。蒸発後、該粗ペプチドをエーテルで沈殿し、76%の収率を
得た。
直鎖前駆体ペプチド(Fmoc-Glu-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2(配列番号:52))は、標準的
Fmoc方法(Schilling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)に従って、リ
ンクアミド(Rink amide)MBHAリジン(Novabiochem社)において合成した。Fmoc保護ペ
プチドのレジンからの開裂後、該ペプチドを、ジエチルエーテル(Merck)で沈殿させ、
濾過し、かつ乾燥させた。ジクロロメタン(DCM、Merck社)中で、該前駆体のγ-カルボ
ン酸基(0.3等量)を結合させるのに、HMBA-AM レジン(1.16 mmol/g、Novabiochem社)
を使用した。結合剤として、ジシクロへキシルカルボジイミド(DCC、Serva社)(4等量
)、及びジメチルアミノピリジン(DMAP、Aldrich社)(0.1等量)を使用した。12時間後
、レジンを、濾過し、DCMで洗い、反応を繰り返した。20%ピペリジンDMF溶液(5分間、3
回)を用いたN末端Fmoc基の脱保護後、該ペプチドリジンを、5%ヒドラジン溶液(20 ml
/g)で1.5時間処理した。該レジンを、濾過し、ジメチルホルムアミド(DMF、Roth社、
ドイツ)、及びTFAで洗った。蒸発後、該粗ペプチドをエーテルで沈殿し、76%の収率を
得た。
(H-Gln-Lys(Gln)-Arg-Leu-Ala-NH2(配列番号:45))
直鎖ペプチドを、標準的Fmoc/tBu方法に従って、Fmoc-Lys(Fmoc)-OHを最後から2番
目のアミノ酸結合として使用して、リンクアミド(Rink amide)MBHA(Schilling,
S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)において合成した。20%ピペリジン
(Merck社)DMF溶液で、レジンの2つのアミノ保護基を脱保護後、4等量のFmoc-Gln(Trt
)-OHを結合させた。標準的開裂法で、95%の収率を得た。
直鎖ペプチドを、標準的Fmoc/tBu方法に従って、Fmoc-Lys(Fmoc)-OHを最後から2番
目のアミノ酸結合として使用して、リンクアミド(Rink amide)MBHA(Schilling,
S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857)において合成した。20%ピペリジン
(Merck社)DMF溶液で、レジンの2つのアミノ保護基を脱保護後、4等量のFmoc-Gln(Trt
)-OHを結合させた。標準的開裂法で、95%の収率を得た。
(H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2(配列番号:46))
Fmoc-Gln(NMe)-OHを、Fmoc-MI-AM(Novabiochem社)レジンに充填したFmoc-Glu-OtBu
から開始して合成した。DCMで膨潤後、該レジン(0.5 g)をDMFで洗い、20%ピペリジン
(Merck社)DMF溶液で脱保護した。該レジンを5 ml DMF中に入れ、5等量Fmoc-Glu-OtBu、
5等量HATU、及び10等量DIPEAを次いで加え、6時間振とうした。濾過、及び洗浄後、生成
物を標準的TFA開裂条件に従って、開裂した。該H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2(配
列番号:46)ペプチドは、記載されたように合成した(Schilling, S.らの論文、2002
Biochemistry 41, 10849-10857)。Fmoc-Gln(NMe)-OHは、HATU/DIPEAと一晩結合させ
た。標準的開裂法で、78%の収率を得た。
Fmoc-Gln(NMe)-OHを、Fmoc-MI-AM(Novabiochem社)レジンに充填したFmoc-Glu-OtBu
から開始して合成した。DCMで膨潤後、該レジン(0.5 g)をDMFで洗い、20%ピペリジン
(Merck社)DMF溶液で脱保護した。該レジンを5 ml DMF中に入れ、5等量Fmoc-Glu-OtBu、
5等量HATU、及び10等量DIPEAを次いで加え、6時間振とうした。濾過、及び洗浄後、生成
物を標準的TFA開裂条件に従って、開裂した。該H-Gln(NMe)-Phe-Lys-Ala-Glu-NH2(配
列番号:46)ペプチドは、記載されたように合成した(Schilling, S.らの論文、2002
Biochemistry 41, 10849-10857)。Fmoc-Gln(NMe)-OHは、HATU/DIPEAと一晩結合させ
た。標準的開裂法で、78%の収率を得た。
(H-Gln-シクロ(Nε-Lys-Arg-Pro-Ala-Gly-Phe)(配列番号:49))
直鎖前駆体Boc-Gln(Trt)-Lys-Arg(Pmc)-Ala-Gly-Phe-OH(配列番号:53)を、酸
感受性2-クロロトリチルレジンにおいて合成した。結合を、Fmoc-Lys(Mtt)-OHを用いた
Fmoc/tBu方法の標準的プロトコルを用いて行った。3%TFA DCM 溶液(10回、5分)で開
裂後、該溶液は、10%ピリジン(Merck社)メタノール溶液(MeOH;Merck社)で中和し、
DCM、及びMeOHで3回洗い、5%の容量に蒸発させ、粗ペプチドは氷冷水で沈殿させた。そ
の後、該粗シペプチドは、DCC/N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt;Aldrich社)活
性化を利用して、環化した。該粗ペプチドは、乾燥ジクロロメタン溶液(0.2 mmol/50 m
l)に、溶解し、0.2 mmolのN-メチルモルホリン、及び0.4 mmol の 1-ヒドロキシベン
ゾトリアゾールを添加した。この溶液を、0℃において、250 mlの0.4 mmol ジシクロヘ
キシルカルボジイミドのジクロロメタン溶液へ滴下した。該反応は、室温で、一晩撹拌し
て完了した。N,N'-ジシクロヘキシル尿素の濾過後、溶媒は、蒸発により除いた。残留物
は、エチルアセテートに溶解し、1N HCl、NaHCO3飽和溶液、及び水で数回洗った。該溶
液は、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空で乾燥するまで蒸発させた。
直鎖前駆体Boc-Gln(Trt)-Lys-Arg(Pmc)-Ala-Gly-Phe-OH(配列番号:53)を、酸
感受性2-クロロトリチルレジンにおいて合成した。結合を、Fmoc-Lys(Mtt)-OHを用いた
Fmoc/tBu方法の標準的プロトコルを用いて行った。3%TFA DCM 溶液(10回、5分)で開
裂後、該溶液は、10%ピリジン(Merck社)メタノール溶液(MeOH;Merck社)で中和し、
DCM、及びMeOHで3回洗い、5%の容量に蒸発させ、粗ペプチドは氷冷水で沈殿させた。そ
の後、該粗シペプチドは、DCC/N-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt;Aldrich社)活
性化を利用して、環化した。該粗ペプチドは、乾燥ジクロロメタン溶液(0.2 mmol/50 m
l)に、溶解し、0.2 mmolのN-メチルモルホリン、及び0.4 mmol の 1-ヒドロキシベン
ゾトリアゾールを添加した。この溶液を、0℃において、250 mlの0.4 mmol ジシクロヘ
キシルカルボジイミドのジクロロメタン溶液へ滴下した。該反応は、室温で、一晩撹拌し
て完了した。N,N'-ジシクロヘキシル尿素の濾過後、溶媒は、蒸発により除いた。残留物
は、エチルアセテートに溶解し、1N HCl、NaHCO3飽和溶液、及び水で数回洗った。該溶
液は、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空で乾燥するまで蒸発させた。
(実施例8):Aβ(3-40/42)誘導体の産生
Aβ(3-40/42)のN末端の配列で、その3位にグルタミン酸残基の代わりにグルタミン
を含有する短鎖ペプチド2種、Gln3-Aβ(1-11)a (配列: DAQFRHDSGYE(配列番号:54))
、及びGln3-Aβ(3-11)aを用いて、測定を行った。2種のペプチドのDP IVによる開裂、及
びQCによるN末端グルタミン残基の環化反応を、MALDI-TOF質量分析で調べた。測定は
、連続触媒反応測定用の両酵素においてと同様、精製DP IV(ブタ腎臓)、又は粗ブタ脳
下垂体ホモジネートをQC源として用いて行った。
Aβ(3-40/42)のN末端の配列で、その3位にグルタミン酸残基の代わりにグルタミン
を含有する短鎖ペプチド2種、Gln3-Aβ(1-11)a (配列: DAQFRHDSGYE(配列番号:54))
、及びGln3-Aβ(3-11)aを用いて、測定を行った。2種のペプチドのDP IVによる開裂、及
びQCによるN末端グルタミン残基の環化反応を、MALDI-TOF質量分析で調べた。測定は
、連続触媒反応測定用の両酵素においてと同様、精製DP IV(ブタ腎臓)、又は粗ブタ脳
下垂体ホモジネートをQC源として用いて行った。
Claims (13)
- Glu1-ADan, Glu1-ABri, 及びGln1-ガストリン(17、及び34)から選択される少な
くとも1つのQC-基質のN-末端で、グルタミン酸、又はグルタミン残基のピログルタミン酸
残基への転換を調節するのための、薬剤製造用のグルタミニルシクラーゼ(QC)のエフェク
ターの使用。 - 該エフェクターが、少なくとも1つの従来の担体、及び/又は賦形剤と組み合わせて使用
される、請求項1記載の使用。 - 非経口、経腸的、又は経口投与のための、請求項1〜2のいずれか1項記載の使用。
- 経口投与のための、請求項1〜3のいずれか1項記載の使用。
- ヘリオバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結腸直腸癌、ゾリン
ジャー-エリソン症候群、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク型認知症からなる
群から選択される疾患の治療のための、請求項1〜4のいずれか1項記載の使用。 - Glu1-ADan, Glu1-ABri, 及びGln1-ガストリン(17、及び34)から選択される少な
くとも1つのQC-基質のN-末端で、グルタミン酸、又はグルタミン残基のピログルタミン酸
残基への転換を調節する方法であって、哺乳動物に、治療上有効量の、少なくとも1つの
グルタミニルシクラーゼ(QC)を投与することを含む、前記方法。 - 哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結
腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク
型認知症からなる群から選択される疾患の治療のための、請求項7項記載の方法。 - 該哺乳動物が、ヒトである、請求項8記載の方法。
- 哺乳動物におけるヘリオバクターピロリの感染を伴う、又は伴なわない十二指腸癌、結
腸直腸癌、ゾリンジャー-エリソン症候群、家族性英国型認知症、及び家族性デンマーク
型認知症からなる群から選択される疾患の治療方法であって、前記哺乳動物に、医薬組成
物を投与することを含み、該医薬組成物が、非経口、経腸的、又は経口投与用であり、か
つ任意に従来の担体、及び/又は賦形剤と組み合わせた、少なくとも1つのQCエフェクター
を含む、前記方法。 - 該医薬組成物が、経口投与用である、請求項11記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US51203803P | 2003-10-15 | 2003-10-15 | |
US60/512,038 | 2003-10-15 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006534704A Division JP5707014B2 (ja) | 2003-10-15 | 2004-10-15 | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015057400A true JP2015057400A (ja) | 2015-03-26 |
Family
ID=34520046
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006534704A Expired - Fee Related JP5707014B2 (ja) | 2003-10-15 | 2004-10-15 | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 |
JP2014213807A Withdrawn JP2015057400A (ja) | 2003-10-15 | 2014-10-20 | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006534704A Expired - Fee Related JP5707014B2 (ja) | 2003-10-15 | 2004-10-15 | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7462599B2 (ja) |
EP (2) | EP1675578B9 (ja) |
JP (2) | JP5707014B2 (ja) |
KR (3) | KR101121882B1 (ja) |
CN (2) | CN102302781A (ja) |
AU (1) | AU2004283461B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0415409A (ja) |
CA (1) | CA2542419C (ja) |
DK (1) | DK1675578T3 (ja) |
EA (1) | EA010108B1 (ja) |
IL (1) | IL174372A (ja) |
MX (1) | MXPA06003998A (ja) |
NZ (1) | NZ546322A (ja) |
WO (1) | WO2005039548A2 (ja) |
Families Citing this family (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101837127A (zh) * | 2003-05-05 | 2010-09-22 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基和谷氨酸环化酶效应物的应用 |
US7371871B2 (en) * | 2003-05-05 | 2008-05-13 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
US8338120B2 (en) | 2003-05-05 | 2012-12-25 | Probiodrug Ag | Method of treating inflammation with glutaminyl cyclase inhibitors |
CN102302781A (zh) | 2003-10-15 | 2012-01-04 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基环化酶效应物和谷氨酸环化酶效应物的应用 |
US7667044B2 (en) | 2003-11-03 | 2010-02-23 | Probiodrug Ag | Compounds for the treatment of neurological disorders |
US20100099721A1 (en) * | 2003-11-03 | 2010-04-22 | Probiodrug Ag | Novel compounds for the treatment of neurological disorders |
US20050171112A1 (en) * | 2003-11-03 | 2005-08-04 | Probiodrug Ag | Combinations useful for the treatment of neuronal disorders |
CA2544573A1 (en) * | 2003-11-03 | 2005-06-02 | Probiodrug Ag | Combinations useful for the treatment of neuronal disorders |
CA2554809C (en) | 2004-02-05 | 2014-04-29 | Probiodrug Ag | Novel n-alkyl thiourea- and thioamide-substituted imidazolyl inhibitors of glutaminyl cyclase |
US7728031B2 (en) * | 2006-02-24 | 2010-06-01 | Abbott Laboratories | Octahydro-pyrrolo[3,4-b]pyrrole derivatives |
KR20090024811A (ko) * | 2006-06-23 | 2009-03-09 | 아보트 러보러터리즈 | 히스타민 h3 수용체 조절제로서의 사이클로프로필 아민 유도체 |
US9108948B2 (en) * | 2006-06-23 | 2015-08-18 | Abbvie Inc. | Cyclopropyl amine derivatives |
US8889709B2 (en) | 2006-09-21 | 2014-11-18 | Probiodrug Ag | Use of isoQC inhibitors in the treatment and prevention of inflammatory diseases or conditions |
NZ590631A (en) * | 2006-09-21 | 2011-12-22 | Probiodrug Ag | Novel genes related to glutaminyl cyclase |
US9277737B2 (en) | 2006-09-21 | 2016-03-08 | Probiodrug Ag | Mouse models carrying a knock-out mutation of the QPCTL-gene |
WO2008055945A1 (en) | 2006-11-09 | 2008-05-15 | Probiodrug Ag | 3-hydr0xy-1,5-dihydr0-pyrr0l-2-one derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase for the treatment of ulcer, cancer and other diseases |
DK2086960T3 (da) | 2006-11-09 | 2014-06-10 | Probiodrug Ag | Nye inhibitorer af glutaminylcyclase. |
US8420684B2 (en) | 2006-11-09 | 2013-04-16 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
SI2091948T1 (sl) | 2006-11-30 | 2012-07-31 | Probiodrug Ag | Novi inhibitorji glutaminil ciklaze |
ZA200905537B (en) * | 2007-03-01 | 2010-10-27 | Probiodrug Ag | New use of glutaminyl cyclase inhibitors |
GB2447017A (en) * | 2007-03-01 | 2008-09-03 | Probiodrug Ag | New use for inhibitors of glutaminyl peptide cyclotransferinase |
WO2008110523A1 (en) | 2007-03-09 | 2008-09-18 | Probiodrug Ag | Imidazo [1,5-a] pyridine derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
WO2008128986A1 (en) | 2007-04-18 | 2008-10-30 | Probiodrug Ag | Urea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors |
ES2474693T3 (es) | 2007-04-18 | 2014-07-09 | Probiodrug Ag | Derivados de ciano-guanidina como inhibidores de glutaminil ciclasa |
JP5675344B2 (ja) | 2007-04-18 | 2015-02-25 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのニトロビニルジアミン誘導体 |
EP2142514B1 (en) | 2007-04-18 | 2014-12-24 | Probiodrug AG | Thiourea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors |
WO2008128981A1 (en) * | 2007-04-18 | 2008-10-30 | Probiodrug Ag | Nitrovinyl-diamine derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors |
US9034907B2 (en) | 2007-04-18 | 2015-05-19 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
JP5676249B2 (ja) | 2007-04-20 | 2015-02-25 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼ阻害剤としてのアミノピリジン誘導体 |
EP2188288A1 (en) * | 2007-09-11 | 2010-05-26 | Abbott Laboratories | Octahydro-pyrrolo[3,4-b]pyrrole n-oxides |
NZ583799A (en) | 2007-09-12 | 2011-12-22 | Probiodrug Ag | Transgenic mice comprising a DNA transgene encoding ABeta peptide |
WO2009090190A1 (en) | 2008-01-14 | 2009-07-23 | Probiodrug Ag | Mouse models carrying a knock-out mutation of the glutaminyl cyclase gene |
KR101682728B1 (ko) * | 2008-07-31 | 2016-12-05 | 프로비오드룩 아게 | 신경변성 질환에 대한 진단적/예후적 지표로서 글루타미닐 사이클라제 |
US9186353B2 (en) | 2009-04-27 | 2015-11-17 | Abbvie Inc. | Treatment of osteoarthritis pain |
ES2548913T3 (es) | 2009-09-11 | 2015-10-21 | Probiodrug Ag | Derivados heterocíclicos como inhibidores de glutaminil ciclasa |
EP2537029A1 (en) * | 2010-02-18 | 2012-12-26 | Probiodrug AG | Methods of diagnosing inflammatory diseases by determining pyroglutamate-modified mcp-1 and screening methods for inhibitors of glutaminyl cyclase |
JP6026284B2 (ja) | 2010-03-03 | 2016-11-16 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼの阻害剤 |
JP5688745B2 (ja) | 2010-03-10 | 2015-03-25 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼ(qc、ec2.3.2.5)の複素環阻害剤 |
WO2011131748A2 (en) | 2010-04-21 | 2011-10-27 | Probiodrug Ag | Novel inhibitors |
DK2606129T3 (en) | 2010-08-19 | 2015-06-29 | Probiodrug Ag | Glutaminyl cyclase crystal structure |
WO2012037258A1 (en) | 2010-09-16 | 2012-03-22 | Abbott Laboratories | Processes for preparing 1,2-substituted cyclopropyl derivatives |
WO2012123563A1 (en) | 2011-03-16 | 2012-09-20 | Probiodrug Ag | Benz imidazole derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
BR112017028448A2 (pt) * | 2015-07-02 | 2018-08-28 | Horizon Orphan Llc | análogos de cisteamina resistentes a ado e usos dos mesmos |
ES2938445T3 (es) | 2017-07-24 | 2023-04-11 | Stichting Het Nederlands Kanker Inst Antoni Van Leeuwenhoek Ziekenhuis | Tratamiento de estados patológicos mediante acción selectiva directa e indirecta sobre la interacción SIRPA-CD47 |
EP3461819B1 (en) | 2017-09-29 | 2020-05-27 | Probiodrug AG | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
CN112816581A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-05-18 | 浙江大学 | 衍生化-固相萃取-液相色谱串联质谱检测饮用水中卤代醌亚胺的方法 |
CN112898286A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-06-04 | 中国药科大学 | 苯并噻吩类化合物或其可药用的盐、异构体及其制备方法、药物组合物和用途 |
TW202317549A (zh) | 2021-06-24 | 2023-05-01 | 香港商英科智能有限公司 | 用於治療疾病之β-內醯胺衍生物 |
Family Cites Families (113)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2961377A (en) * | 1957-08-05 | 1960-11-22 | Us Vitamin Pharm Corp | Oral anti-diabetic compositions and methods |
US3174901A (en) * | 1963-01-31 | 1965-03-23 | Jan Marcel Didier Aron Samuel | Process for the oral treatment of diabetes |
US3879541A (en) * | 1970-03-03 | 1975-04-22 | Bayer Ag | Antihyperglycemic methods and compositions |
US3960949A (en) * | 1971-04-02 | 1976-06-01 | Schering Aktiengesellschaft | 1,2-Biguanides |
CH602612A5 (ja) * | 1974-10-11 | 1978-07-31 | Hoffmann La Roche | |
US4935493A (en) * | 1987-10-06 | 1990-06-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Protease inhibitors |
US5433955A (en) * | 1989-01-23 | 1995-07-18 | Akzo N.V. | Site specific in vivo activation of therapeutic drugs |
CA2073856C (en) | 1990-01-24 | 2002-12-03 | Douglas I. Buckley | Glp-1 analogs useful for diabetes treatment |
US5462928A (en) * | 1990-04-14 | 1995-10-31 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase type IV |
WO1991016339A1 (en) | 1990-04-14 | 1991-10-31 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase type iv |
US6517824B1 (en) * | 1990-05-14 | 2003-02-11 | University Of Medicine & Denistry Of New Jersey | Polymer compositions comprising antifibrotic agents, and methods of treatment, pharmaceutical compositions, and methods of preparation therefor |
WO1991017767A1 (en) | 1990-05-21 | 1991-11-28 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Method of treating inhibition of dipeptidyl aminopeptidase type iv |
GB9115740D0 (en) | 1991-07-20 | 1991-09-04 | Smithkline Beecham Plc | Medicaments |
CA2121369C (en) | 1991-10-22 | 2003-04-29 | William W. Bachovchin | Inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase type iv |
EP0633882A1 (en) | 1992-04-01 | 1995-01-18 | The University Of Toledo | 4- 4'-piperidinyl or 3'-pirrolidinyl] substituted imidazoles as h3-receptor antagonists and therapeutic uses thereof |
IL106998A0 (en) * | 1992-09-17 | 1993-12-28 | Univ Florida | Brain-enhanced delivery of neuroactive peptides by sequential metabolism |
WO1995011689A1 (en) | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Trustees Of Tufts College | Use of inhibitors of dipeptidyl-aminopeptidase to block entry of hiv into cells |
IL111785A0 (en) | 1993-12-03 | 1995-01-24 | Ferring Bv | Dp-iv inhibitors and pharmaceutical compositions containing them |
EP0658568A1 (en) | 1993-12-09 | 1995-06-21 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
US5705483A (en) * | 1993-12-09 | 1998-01-06 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
AU1891295A (en) | 1994-02-22 | 1995-09-04 | Knoll Aktiengesellschaft | Use of 1-(arylalkylaminoalkyl) imidazoles for treating neurological damage |
US5543396A (en) * | 1994-04-28 | 1996-08-06 | Georgia Tech Research Corp. | Proline phosphonate derivatives |
US5552426A (en) * | 1994-04-29 | 1996-09-03 | Eli Lilly And Company | Methods for treating a physiological disorder associated with β-amyloid peptide |
US5512549A (en) | 1994-10-18 | 1996-04-30 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptide analogs, compositions, and methods of use |
US5614379A (en) * | 1995-04-26 | 1997-03-25 | Eli Lilly And Company | Process for preparing anti-obesity protein |
US6448282B1 (en) * | 1995-05-30 | 2002-09-10 | Gliatech, Inc. | 1H-4(5)-substituted imidazole derivatives |
CZ272598A3 (cs) * | 1996-02-27 | 1999-01-13 | Sankyo Company, Limited | Isoxazolové deriváty |
DE19616486C5 (de) | 1996-04-25 | 2016-06-30 | Royalty Pharma Collection Trust | Verfahren zur Senkung des Blutglukosespiegels in Säugern |
ZA974147B (en) | 1996-05-14 | 1997-11-14 | Novo Nordisk As | Somatostatin agonists and antagonists. |
WO1997045117A1 (en) | 1996-05-29 | 1997-12-04 | Prototek, Inc. | Prodrugs of thalidomide and methods for using same as modulators of t-cell function |
US6006753A (en) * | 1996-08-30 | 1999-12-28 | Eli Lilly And Company | Use of GLP-1 or analogs to abolish catabolic changes after surgery |
US5827898A (en) * | 1996-10-07 | 1998-10-27 | Shaman Pharmaceuticals, Inc. | Use of bisphenolic compounds to treat type II diabetes |
US6011155A (en) | 1996-11-07 | 2000-01-04 | Novartis Ag | N-(substituted glycyl)-2-cyanopyrrolidines, pharmaceutical compositions containing them and their use in inhibiting dipeptidyl peptidase-IV |
TW492957B (en) | 1996-11-07 | 2002-07-01 | Novartis Ag | N-substituted 2-cyanopyrrolidnes |
AR016751A1 (es) | 1996-11-22 | 2001-08-01 | Athena Neurosciences Inc | Metodo para inhibir la liberacion del peptido beta-amiloide en una celula, composicion farmaceutica y compuestos utiles en dicho metodo |
ATE448782T1 (de) * | 1996-12-31 | 2009-12-15 | Antioxidant Pharmaceuticals Co | Pharmazeutische glutathionpräparate und methoden zu dern verabreichung |
KR20010031065A (ko) | 1997-10-21 | 2001-04-16 | 케임브리지 뉴로사이언스, 인코포레이티드 | 약제학적 활성 화합물 및 사용방법 |
JP2002501889A (ja) | 1998-02-02 | 2002-01-22 | トラスティーズ オブ タフツ カレッジ | グルコース代謝を調節する方法、およびそれに関連する試薬 |
US5994379A (en) | 1998-02-13 | 1999-11-30 | Merck Frosst Canada, Inc. | Bisaryl COX-2 inhibiting compounds, compositions and methods of use |
JP2002506075A (ja) | 1998-03-09 | 2002-02-26 | フォンダテッヒ・ベネルクス・ナムローゼ・フェンノートシャップ | セリンペプチダーゼ調節剤 |
DE19823831A1 (de) * | 1998-05-28 | 1999-12-02 | Probiodrug Ges Fuer Arzneim | Neue pharmazeutische Verwendung von Isoleucyl Thiazolidid und seinen Salzen |
AU765370B2 (en) | 1998-06-05 | 2003-09-18 | Point Therapeutics, Inc. | Cyclic boroproline compounds |
NZ508765A (en) | 1998-06-12 | 2003-10-31 | Sod Conseils Rech Applic | Beta-carboline derivatives and pharmaceuticals thereof that selectively bind somatostatin receptor subtypes |
DE19828114A1 (de) | 1998-06-24 | 2000-01-27 | Probiodrug Ges Fuer Arzneim | Produgs instabiler Inhibitoren der Dipeptidyl Peptidase IV |
DE19828113A1 (de) | 1998-06-24 | 2000-01-05 | Probiodrug Ges Fuer Arzneim | Prodrugs von Inhibitoren der Dipeptidyl Peptidase IV |
EP1092046A4 (en) | 1998-07-02 | 2003-02-19 | Invitro Diagnostics Inc | METHODS, COMPOSITIONS AND DEVICE FOR MANUFACTURING NUCLEIC ACIDS HAVING SELECTIVE AFFINITY FOR A TARGET MOLECULE |
DE69911975T2 (de) | 1998-07-31 | 2004-09-09 | Novo Nordisk A/S | In-vitro stimulation von beta zellen vermehrung |
DE19834591A1 (de) * | 1998-07-31 | 2000-02-03 | Probiodrug Ges Fuer Arzneim | Verfahren zur Steigerung des Blutglukosespiegels in Säugern |
AU5480199A (en) | 1998-08-21 | 2000-03-14 | Point Therapeutics, Inc. | Regulation of substrate activity |
WO2000053171A1 (en) | 1999-03-05 | 2000-09-14 | Molteni L. E C. Dei Fratelli Alitti Societa' Di Esercizio S.P.A. | Use of metformin in the preparation of pharmaceutical compositions capable of inhibiting the enzyme dipeptidyl peptidase iv |
US6211182B1 (en) | 1999-03-08 | 2001-04-03 | Schering Corporation | Imidazole compounds substituted with a six or seven membered heterocyclic ring containing two nitrogen atoms |
DE60012721T4 (de) | 1999-03-29 | 2010-09-09 | Uutech Ltd., Coleraine | Analoge des magensaft inhibierenden peptides und ihre verwendung für die behandlung von diabetes |
CZ20013786A3 (cs) * | 1999-04-29 | 2002-02-13 | Merck Patent Gmbh | Inhibitory glycinového ątěpicího systému jako moľná antipsychotika |
US6110949A (en) * | 1999-06-24 | 2000-08-29 | Novartis Ag | N-(substituted glycyl)-4-cyanothiazolidines, pharmaceutical compositions containing them and their use in inhibiting dipeptidyl peptidase-IV |
US6107317A (en) * | 1999-06-24 | 2000-08-22 | Novartis Ag | N-(substituted glycyl)-thiazolidines, pharmaceutical compositions containing them and their use in inhibiting dipeptidyl peptidase-IV |
US6172081B1 (en) * | 1999-06-24 | 2001-01-09 | Novartis Ag | Tetrahydroisoquinoline 3-carboxamide derivatives |
GB9917909D0 (en) | 1999-07-31 | 1999-09-29 | Synphar Lab Inc | Cysteine protease inhibitors |
KR100878855B1 (ko) | 1999-11-03 | 2009-01-15 | 에이엠알 테크놀로지, 인크. | 4-페닐-치환 테트라히드로이소퀴놀린, 및 노르에피네프린과 도파민과 세로토닌의 재흡수를 차단하기 위한 이의 용도 |
JP2003535034A (ja) | 1999-11-12 | 2003-11-25 | ギルフォード ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ジペプチジルペプチダーゼiv阻害剤並びにジペプチジルペプチダーゼiv阻害剤の製造及び使用法 |
GB9928330D0 (en) | 1999-11-30 | 2000-01-26 | Ferring Bv | Novel antidiabetic agents |
US6380398B2 (en) | 2000-01-04 | 2002-04-30 | Novo Nordisk A/S | Therapeutically active and selective heterocyclic compounds that are inhibitors of the enzyme DPP-IV |
EP1254113A1 (en) | 2000-01-24 | 2002-11-06 | Novo Nordisk A/S | N-substituted 2-cyanopyroles and -pyrrolines which are inhibitors of the enzyme dpp-iv |
US7064145B2 (en) * | 2000-02-25 | 2006-06-20 | Novo Nordisk A/S | Inhibition of beta cell degeneration |
JP2003523396A (ja) | 2000-02-25 | 2003-08-05 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | ベータ細胞変性の抑制 |
DE60042585D1 (de) | 2000-02-29 | 2009-09-03 | Univ Firenze | 3-Aza-6,8-dioxabicycloÄ3.2.1Üoctane und Analoga sowie diese enthaltende kombinatorische Bibliotheken |
US6395767B2 (en) | 2000-03-10 | 2002-05-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Cyclopropyl-fused pyrrolidine-based inhibitors of dipeptidyl peptidase IV and method |
US6605589B1 (en) * | 2000-03-31 | 2003-08-12 | Parker Hughes Institute | Cathepsin inhibitors in cancer treatment |
DK1283735T4 (da) * | 2000-03-31 | 2013-02-04 | Royalty Pharma Collection Trust | Fremgangsmåde til forbedring signalering af øceller ved diabetes mellitus og til forebyggelse deraf |
US6573096B1 (en) | 2000-04-01 | 2003-06-03 | The Research Foundation At State University Of New York | Compositions and methods for inhibition of cancer invasion and angiogenesis |
GB0010188D0 (en) | 2000-04-26 | 2000-06-14 | Ferring Bv | Inhibitors of dipeptidyl peptidase IV |
GB0010183D0 (en) | 2000-04-26 | 2000-06-14 | Ferring Bv | Inhibitors of dipeptidyl peptidase IV |
US6841685B2 (en) | 2000-06-07 | 2005-01-11 | State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University | Methods for making bis-heterocyclic alkaloids |
GB0014969D0 (en) | 2000-06-19 | 2000-08-09 | Smithkline Beecham Plc | Novel method of treatment |
AU2001268958B2 (en) | 2000-07-04 | 2006-03-09 | Novo Nordisk A/S | Heterocyclic compounds, which are inhibitors of the enzyme dpp-iv |
WO2002004610A2 (en) | 2000-07-10 | 2002-01-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Regulation of human dipeptidyl-peptidase iv-like enzyme |
ATE556048T1 (de) | 2000-08-10 | 2012-05-15 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Prolinderivate und ihre verwendung als heilmittel |
EP1313470A4 (en) | 2000-08-17 | 2005-02-16 | Gliatech Inc | NEW ALICYCLIC IMIDAZOLE AS H 3 ACTIVE SUBSTANCES |
ATE393141T1 (de) | 2000-08-21 | 2008-05-15 | Pacific Corp | Neue thiourea-derivate und pharmazeutische zusammensetzungen die diese enthalten |
ATE475887T1 (de) | 2000-09-09 | 2010-08-15 | Univ New York State Res Found | Verfahren und zusammensetzungen zur isolierung von metastatischen krebszellen und anwendung zur messung des metastatischen potentials eines krebses |
ZA200302394B (en) | 2000-10-27 | 2004-03-29 | Probiodrug Ag | Method for the treatment of neurological and neuropsychological disorders. |
TWI243162B (en) | 2000-11-10 | 2005-11-11 | Taisho Pharmaceutical Co Ltd | Cyanopyrrolidine derivatives |
CA2433090A1 (en) | 2000-12-27 | 2002-07-04 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Dipeptidyl peptidase iv inhibitor |
JP2002226457A (ja) * | 2001-02-02 | 2002-08-14 | Ajinomoto Co Inc | 新規シスチン誘導体及び炎症因子活性化抑制剤 |
SE0100566D0 (sv) | 2001-02-20 | 2001-02-20 | Astrazeneca Ab | Compounds |
PT1757606E (pt) | 2001-02-24 | 2009-05-26 | Boehringer Ingelheim Pharma | Utilização de derivados de xantina como produto farmacêutico, bem como seu processo de preparação |
US7026316B2 (en) | 2001-03-27 | 2006-04-11 | Merck & Co., Inc. | Dipeptidyl peptidase inhibitors for the treatment or prevention of diabetes |
US6573287B2 (en) | 2001-04-12 | 2003-06-03 | Bristo-Myers Squibb Company | 2,1-oxazoline and 1,2-pyrazoline-based inhibitors of dipeptidyl peptidase IV and method |
US7053072B2 (en) * | 2001-05-11 | 2006-05-30 | Medimmune Oncology, Inc. | Methods for the administration of amifostine and related compounds |
CA2450579A1 (en) | 2001-06-20 | 2003-01-03 | Merck & Co., Inc. | Dipeptidyl peptidase inhibitors for the treatment of diabetes |
ATE318139T1 (de) | 2001-06-20 | 2006-03-15 | Merck & Co Inc | Dipeptidylpeptidase-hemmer zur behandlung von diabetes |
GB0115517D0 (en) | 2001-06-25 | 2001-08-15 | Ferring Bv | Novel antidiabetic agents |
DE10150203A1 (de) | 2001-10-12 | 2003-04-17 | Probiodrug Ag | Peptidylketone als Inhibitoren der DPIV |
CN1321682C (zh) | 2001-06-27 | 2007-06-20 | 前体生物药物股份有限公司 | 新的二肽基肽酶iv抑制剂和它们作为抗癌药的用途 |
DE60223920T2 (de) | 2001-06-27 | 2008-11-13 | Smithkline Beecham Corp. | Pyrrolidine als dipeptidyl-peptidase-inhibitoren |
HUP0400321A2 (hu) | 2001-06-27 | 2004-08-30 | Smithkline Beecham Corp. | Fluorpirrolidin-származékok mint dipeptidil-dipeptidáz inhibitorok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények |
US7183290B2 (en) | 2001-06-27 | 2007-02-27 | Smithkline Beecham Corporation | Fluoropyrrolidines as dipeptidyl peptidase inhibitors |
WO2003002593A2 (en) | 2001-06-27 | 2003-01-09 | Probiodrug Ag | Peptide structures useful for competitive modulation of dipeptidyl peptidase iv catalysis |
WO2003004496A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-01-16 | Novo Nordisk A/S | Dpp-iv-inhibiting purine derivatives for the treatment of diabetes |
US6948038B2 (en) * | 2001-07-24 | 2005-09-20 | Microsoft Corporation | System and method for backing up and restoring data |
US7279550B2 (en) | 2001-08-13 | 2007-10-09 | Probiodrug Ag | Irreversible cysteine protease inhibitors of legumain |
KR20040033048A (ko) | 2001-09-14 | 2004-04-17 | 미츠비시 웰파마 가부시키가이샤 | 티아졸리딘 유도체 및 이의 약학적 용도 |
WO2003024965A2 (en) | 2001-09-19 | 2003-03-27 | Novo Nordisk A/S | Heterocyclic compounds that are inhibitors of the enzyme dpp-iv |
GB0125446D0 (en) | 2001-10-23 | 2001-12-12 | Ferring Bv | Novel anti-diabetic agents |
AU2003219690A1 (en) | 2002-02-19 | 2003-09-09 | Pharmacia And Upjohn Company | Fused bicyclic-n-bridged-heteroaromatic carboxamides for the treatment of disease |
WO2004089366A1 (en) | 2003-04-10 | 2004-10-21 | Pfizer Japan, Inc. | Bicyclic compounds as nr2b receptor antagonists |
CN101837127A (zh) * | 2003-05-05 | 2010-09-22 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基和谷氨酸环化酶效应物的应用 |
PL1620082T3 (pl) * | 2003-05-05 | 2010-10-29 | Probiodrug Ag | Medyczne zastosowanie inhibitorów cyklazy glutaminylowej i glutaminianowej do leczenia choroby Alzheimera i zespołu Downa |
US8338120B2 (en) * | 2003-05-05 | 2012-12-25 | Probiodrug Ag | Method of treating inflammation with glutaminyl cyclase inhibitors |
US7371871B2 (en) * | 2003-05-05 | 2008-05-13 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
US7732162B2 (en) * | 2003-05-05 | 2010-06-08 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase for treating neurodegenerative diseases |
CN102302781A (zh) | 2003-10-15 | 2012-01-04 | 前体生物药物股份公司 | 谷氨酰胺酰基环化酶效应物和谷氨酸环化酶效应物的应用 |
WO2005059100A2 (en) * | 2003-12-12 | 2005-06-30 | New York University | Methods and compositions relating to cystatin c |
GB0704100D0 (en) | 2006-03-17 | 2007-04-11 | Vodafone Plc | Improvements in an ehspa architecture |
-
2004
- 2004-10-15 CN CN2011102597085A patent/CN102302781A/zh active Pending
- 2004-10-15 US US10/966,645 patent/US7462599B2/en active Active
- 2004-10-15 WO PCT/EP2004/011630 patent/WO2005039548A2/en active Application Filing
- 2004-10-15 CA CA2542419A patent/CA2542419C/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-15 JP JP2006534704A patent/JP5707014B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-15 NZ NZ546322A patent/NZ546322A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-10-15 EP EP04765975.0A patent/EP1675578B9/en not_active Not-in-force
- 2004-10-15 EP EP10177029A patent/EP2289498A1/en not_active Withdrawn
- 2004-10-15 DK DK04765975.0T patent/DK1675578T3/da active
- 2004-10-15 BR BRPI0415409-6A patent/BRPI0415409A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-10-15 KR KR1020067007310A patent/KR101121882B1/ko active IP Right Grant
- 2004-10-15 AU AU2004283461A patent/AU2004283461B2/en not_active Ceased
- 2004-10-15 KR KR1020127024628A patent/KR101313975B1/ko active IP Right Grant
- 2004-10-15 EA EA200600618A patent/EA010108B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-10-15 KR KR1020117031195A patent/KR20120007079A/ko not_active Application Discontinuation
- 2004-10-15 CN CNA2004800302025A patent/CN1867324A/zh active Pending
- 2004-10-15 MX MXPA06003998A patent/MXPA06003998A/es active IP Right Grant
-
2006
- 2006-03-16 IL IL174372A patent/IL174372A/en not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-07-29 US US12/182,113 patent/US8470781B2/en active Active
-
2014
- 2014-10-20 JP JP2014213807A patent/JP2015057400A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EA010108B1 (ru) | 2008-06-30 |
EP1675578B1 (en) | 2013-05-22 |
KR101313975B1 (ko) | 2013-10-01 |
EP2289498A1 (en) | 2011-03-02 |
NZ546322A (en) | 2008-11-28 |
IL174372A (en) | 2011-09-27 |
KR20120125379A (ko) | 2012-11-14 |
BRPI0415409A (pt) | 2006-12-05 |
KR20120007079A (ko) | 2012-01-19 |
JP2007508347A (ja) | 2007-04-05 |
KR101121882B1 (ko) | 2012-04-12 |
US7462599B2 (en) | 2008-12-09 |
WO2005039548A3 (en) | 2005-06-30 |
EP1675578B9 (en) | 2014-06-25 |
IL174372A0 (en) | 2006-08-01 |
MXPA06003998A (es) | 2006-06-27 |
KR20070017477A (ko) | 2007-02-12 |
US20090149394A1 (en) | 2009-06-11 |
CA2542419C (en) | 2013-06-04 |
JP5707014B2 (ja) | 2015-04-22 |
WO2005039548A2 (en) | 2005-05-06 |
AU2004283461A1 (en) | 2005-05-06 |
AU2004283461B2 (en) | 2010-02-11 |
DK1675578T3 (da) | 2013-08-26 |
CN102302781A (zh) | 2012-01-04 |
EP1675578A2 (en) | 2006-07-05 |
US20060189523A1 (en) | 2006-08-24 |
CN1867324A (zh) | 2006-11-22 |
EA200600618A1 (ru) | 2006-10-27 |
CA2542419A1 (en) | 2005-05-06 |
AU2004283461A2 (en) | 2005-05-06 |
US8470781B2 (en) | 2013-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5707014B2 (ja) | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 | |
JP5690463B2 (ja) | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 | |
JP2012184237A (ja) | グルタミニル、及びグルタミン酸シクラーゼのエフェクターの使用 | |
ES2348500T3 (es) | Uso medico de inhibidores de glutaminil y glutamato ciclasas para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer y el sindrome de down. | |
AU2013211539A1 (en) | Use of effectors of glutaminyl and glutamate cyclases | |
AU2011265545A1 (en) | Use of effectors of glutaminyl and glutamate cyclases |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20150331 |