JP2015042167A - 細胞濃縮液の製造方法および細胞懸濁液処理システム - Google Patents
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Abstract
Description
また、本発明の他の目的は、前記のような細胞濃縮液を効率よく製造することができる細胞懸濁液処理システムを提供することにある。
(1)溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートを有する、細胞懸濁液の貯留容器と、
細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口および濾液用出口を有する容器内に中空糸分離膜が充填された、細胞懸濁液から液体を濾して濃縮を行うための細胞懸濁液処理器と、
前記貯留容器の循環入口ポートおよび前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導入口を連通する導入用連通管ならびに前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導出口および前記貯留容器の循環出口ポートを連通する導出用連通管とからなり、貯留容器および細胞懸濁液処理器の間で細胞懸濁液を循環させながら濃縮を行うための循環回路と、
濃縮された細胞濃縮液の回収容器と、
前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および前記循環回路内の細胞濃縮液を前記回収容器に送液するための回収路と、
前記貯留容器の溶液入口ポートに溶液を注入するための注入路と、
前記貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知するための検知手段と
を備えた細胞懸濁液処理システムを用いる細胞濃縮液の製造方法であって、
a)前記溶液入口ポートより細胞懸濁液を貯留容器に供給して貯留する工程と、
b)貯留容器内の細胞懸濁液を、循環回路の導入用連通管を経て細胞懸濁液処理器へ通液し、次いで循環回路の導出用連通管を経て貯留容器へと循環させて細胞懸濁液を濃縮する工程と、
c)貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知することにより、前記b)工程を停止させる工程と、
d)前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および循環回路内の細胞濃縮液を回収路を経て回収容器に送液して回収する工程と
を含む細胞濃縮液の製造方法。
(2)c)工程後に、前記貯留容器の溶液入口ポートより希釈液を貯留容器に注入して貯留容器内の細胞濃縮液を希釈した後、b)工程およびc)工程をさらに繰り返す前記細胞濃縮液の製造方法。
(3)a)工程前に、溶液入口ポートよりプライミング液を注入し、プライミングを行う前記細胞濃縮液の製造方法。
(4)a)工程とb)工程を並行して実施する前記細胞濃縮液の製造方法。
(5)循環回路内の液量を検知する検知手段が、前記循環回路の導入用連通管に備えられている気泡センサーである前記細胞濃縮液の製造方法。
(6)貯留容器内の液量を検知する検知手段が、貯留容器に平行な、貯留容器下部と連通する回路上に1つ以上備えている気泡センサーである前記細胞濃縮液の製造方法。
(7)前記貯留容器下部と連通する回路にチャンバーを備えている前記細胞濃縮液の製造方法。
(8)前記注入路に気泡センサーが備えられている前記細胞濃縮液の記載の製造方法。
(9)溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートを有する、細胞懸濁液の貯留容器と、
細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口および濾液用出口を有する容器内に中空糸分離膜が充填されてなり、細胞懸濁液から液体を濾して濃縮を行うための細胞懸濁液処理器と、
前記貯留容器の循環入口ポートおよび前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導入口を連通する導入用連通管ならびに前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導出口および前記貯留容器の循環出口ポートを連通する導出用連通管とからなり、貯留容器および細胞懸濁液処理器の間で細胞懸濁液を循環させながら濃縮を行うための循環回路と、
濃縮された細胞濃縮液を回収する回収容器と、
前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および前記循環回路内の細胞濃縮液を前記回収容器に送液するための回収路と、
前記貯留容器の溶液入口ポートに溶液を注入するための注入路と、
前記貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知するための検知手段と
前記検知手段で細胞濃縮液が所定の液量にまで濃縮されたことを検知して、前記貯留容器から細胞懸濁液処理器への細胞濃縮液の送液を停止させる制御手段と
を備えた細胞懸濁液処理システム。
(10)循環回路内の液量を検知する検知手段が、前記循環回路の導入用連通管に備えられている気泡センサーである前記細胞懸濁液処理システム。
(11)貯留容器内の液量を検知する検知手段が、貯留容器に平行な、貯留容器下部と連通する回路上に備えている気泡センサーである前記細胞懸濁液処理システム。
(12)前記貯留容器下部と連通する回路にチャンバーを備えている前記細胞懸濁液処理システム。
(13)前記注入路に気泡センサーが備えられている前記細胞懸濁液処理システム。
(14)前記溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートが、全て貯留容器の下部に備えられている前記細胞懸濁液処理システム。
(15)貯留容器上部付近に通気口を備え、貯留容器内が大気開放系になっている前記細胞懸濁液処理システム。
また、前記貯留容器下部と連通する回路にチャンバーを備えていることで、回路に誤って気泡が浸入しても気泡センサーで検知される不具合の発生を低減することができる。
溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートを有する、細胞懸濁液の貯留容器と、
細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口および濾液用出口を有する容器内に中空糸分離膜が充填された、細胞懸濁液から液体を濾して濃縮を行うための細胞懸濁液処理器と、
前記貯留容器の循環入口ポートおよび前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導入口を連通する導入用連通管ならびに前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導出口および前記貯留容器の循環出口ポートを連通する導出用連通管とからなり、貯留容器および細胞懸濁液処理器の間で細胞懸濁液を循環させながら濃縮を行うための循環回路と、
濃縮された細胞濃縮液の回収容器と、
前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および前記循環回路内の細胞濃縮液を前記回収容器に送液するための回収路と、
前記貯留容器の溶液入口ポートに溶液を注入するための注入路と、
前記貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知するための検知手段と
を備えた細胞懸濁液処理システムを用いる。
細胞懸濁液処理システムで用いる貯留容器は、処理するための細胞懸濁液を貯留し、後述のように細胞懸濁液処理器に細胞懸濁液を通液して得られる細胞濃縮液を循環して貯留する容器である。貯留容器は、溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートを有する。
溶液入口ポートとは、細胞懸濁液を貯留容器内に供給するためのポートをいう。循環入口ポートとは、貯留容器から細胞懸濁液処理器に通液するためのポートをいい、循環出口ポートとは、細胞懸濁液処理器で濃縮された細胞濃縮液を貯留容器に通液するためのポートをいう。
これらのポートは、貯留容器の下部に設置されていることが好ましい。下部にこれらポート全てを設置することにより、溶液入口ポートを通じて供給される細胞懸濁液や希釈のための溶液が貯留容器や循環回路内を循環する液体と効率よく撹拌されることによって、効率的に濃縮および希釈を行うことができる。
なお、溶液入口ポート、循環出口ポート、循環入口ポートの数としては、それぞれ1つあればよいが、必要に応じて複数に増やしてもよい。例えば、前記溶液入口ポートは、細胞懸濁液だけでなく、希釈液やプライミング液用のポートとしても使用できるが、細胞懸濁液用のポートのほかに、希釈液やプライミング液用の入口ポートを設けてもよい。
また、前記の3種類のポートとは別の目的のポートを設けてもよい。例えば、細胞濃縮液を回収容器に通液するための回収用ポートが挙げられる。貯留容器の回収用ポートと回収容器とを直接接続することで、貯留容器内の細胞濃縮液を速やかに回収することが可能になる。
また、貯留容器の内面はナシジ加工されていることが、貯留容器内から懸濁液を排出する際の残液を少なくてできる点などから利点がある。
貯留容器の容積は、特に制限なく用いることができる。ただし、大きすぎると希釈に用いる希釈液量が多く必要になることから、1000mL以下であることが好ましい。
細胞懸濁液処理器は、細胞懸濁液から液体を濾して濃縮を行うための装置であり、前記貯留容器から細胞懸濁液を通液できるように接続されている。
細胞懸濁液処理器は、細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口および濾液用出口を有する容器内に中空糸分離膜が充填されている。
前記細胞懸濁液導出口は、濃縮処理された細胞懸濁液(細胞濃縮液)を取り出すための出口である。本発明では、この細胞懸濁液導出口を前記貯留容器の循環出口ポートと接続することで、貯留容器と細胞懸濁液処理器との間で細胞懸濁液を循環させて濃縮を行うことができる。
前記濾液用出口は、細胞懸濁液から濾された液体を取り出すための出口である。
また、所定の濃度まで濃縮された細胞濃縮液を回収容器に通液して回収する際には、前記ポンプを停止しておくことで、速やかな回収が可能になる。
循環回路は、前記貯留容器の循環入口ポートおよび前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導入口を連通する導入用連通管と、前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導出口および前記貯留容器の循環出口ポートを連通する導出用連通管とからなる回路である。
本発明では、この循環回路を通じて、貯留容器および細胞懸濁液処理器の間で細胞懸濁液を循環させながら濃縮を行うことで細胞濃縮液を作製することができる。
循環回路を構成する管としては、一般的なプラスチック製のチューブを好適に用いることができる。塩化ビニールが安全性や耐久性の面から好適に用いることができる。
回収容器は、所定の濃度にまで濃縮された細胞濃縮液を回収するための容器である。
回収容器は、可撓性のプラスチック容器であればよい。また、その内面にナシジ加工が施されていれば、細胞濃縮液を回収した後の残液を少なくできる利点がある。また、回収容器は針やシリンジなどが接続できる接続口を具備していてもよい。このような構成とすることで、回収容器に回収された細胞濃縮液を他の容器に移し替える場合などに好適に用いることができる。回収容器の形状としては、特に限定はない。例えば、容量が大きくなると回収された細胞が接触する容器の内面積が大きくなり、付着した細胞が容器内に残り細胞の損失につながることがあることから、容器内側の容量は小さくなる形状が好ましい。
回収路は、前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および前記循環回路内の細胞濃縮液を前記回収容器に送液するための路である。回収路を構成する管としては、一般的なプラスチック製のチューブを用いることができ、中でも、塩化ビニール製のチューブを安全性や耐久性の面から好適に用いることができる。
1)前記循環回路上に分岐部を設けた場合には、この分岐部と回収容器とを連結する経路が回収路となる。
2)前記貯留容器の回収ポートと回収容器とを接続した場合には、この接続した経路が回収路となる。
3)細胞懸濁液処理器の細胞濃縮液回収口と回収容器とを接続した場合には、この接続した経路が回収路となる。
回収路については、上記いずれかの態様であればよいが、2つ以上を併用することも可能である。
注入路は、前記貯留容器の溶液入口ポートに溶液を注入するための経路である。注入路を構成する管としては、一般的なプラスチック製のチューブを用いることができ、中でも、塩化ビニール製のチューブを安全性や耐久性の面から好適に用いることができる。
本発明に用いる希釈液には生理食塩水、輸液、蒸留水、緩衝液、培地、血漿や無機塩、糖類、血清、蛋白質を含む液体等が挙げられ、特に安全性の観点から生理食塩水や輸液を好適に用いることができる。また、プライミング液にも生理食塩水、輸液、蒸留水、緩衝液、培地、血漿や無機塩、糖類、血清、蛋白質を含む液体等が挙げられ、特に安全性の観点から生理食塩水や輸液を好適に用いることができる。本発明において希釈液およびプライミング液には同一の溶液を使用してもよいし、異なる溶液を使用してもよい。異なる溶液を使用する場合は、貯留容器の溶液入口ポートに繋がる回路上にある分岐部分より分離し、各接続部に連結する回路を設置することができる。
検知手段は、前記貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知するための手段である。
また、他の実施形態としては、例えば、貯留容器に対して上下方向に平行になるようにチューブを設置し、下方で貯留容器とチューブが連通した回路とし、チューブ内の液面が貯留容器内の液面と等しくなるように調整し、このチューブに気泡センサーを設置してもよい。この手段であれば、貯留容器内の液面として、チューブ内の液面を気泡センサーで検知することができる。
また、貯留容器と平行に設置された前記チューブの下方にチャンバーを設置してもよい。特にチューブより内径が大きなチャンバーを設置することにより、平行に設置されたチューブに誤って気泡が浸入して検知される不具合の発生を低減することが期待される。
また、前記導入用連通管に設置する気泡センサーの位置としては、特に限定はないが、貯留容器に近接している位置に設置することで、貯留容器と気泡センサーとをつなぐ回路の長さを短くすることができる。
本発明のように細胞懸濁液処理器を用いて細胞懸濁液の濃縮を行う場合、細胞懸濁液処理器へ空気が入ると濃縮能力が低下するだけでなく、細胞を回収する際に細胞懸濁液処理器内に細胞が付着するなどして、細胞のロスが大幅に増加する問題がある。濃縮工程の終了時点を判断する手段としては、細胞懸濁液処理器への送液量や細胞懸濁液処理器から廃棄される廃液量を予め決定する方法が考えられる。しかしながら、実際に細胞懸濁液処理システムの回路や経路に設置したポンプの送液量などを調整しても、細胞懸濁液の濃度、細胞の大きさ、細胞の種類などにより細胞懸濁液処理器での濃縮の程度が一定とならず、また細胞懸濁液処理器内に空気が入るまで濃縮をしてしまうこともあるため、濃縮を行っている間は細胞懸濁液処理器の状態を監視している必要があり、自動化は困難な状況であった。
これに対して、本発明では、前記検知手段を用いて細胞懸濁液の濃縮工程の終了を判断していることで、細胞懸濁液の状態等に関わらず、細胞懸濁液処理器内に空気が入ることもなく、充分に濃縮された細胞濃縮液を精度よく得ることが可能になる。
また、分岐部分よりの貯留容器3側の注入路27にはポンプ12が設けられており、その駆動速度を調整することで前記溶液の貯留容器3への供給量を調整できる。
前記ポンプ12より貯留容器3側の注入路27には気泡センサー10が設置されている。供給している溶液がなくなって注入路27に入ってきた空気を気泡センサー10が検知すれば、ポンプ12を止めることで前記溶液の貯留容器3への供給を最適なタイミングで停止することができる。また、前記ポンプ12と気泡センサー10とを電気的に接続しておくことで、自動的に溶液の供給を調整することができる。
注入路27の他方端は貯留容器3の下部にある溶液入口ポート15に接続されている。
前記濾液用出口20は廃液容器4と配管を介して接続しており、この配管には濾液の排出と前記中空糸分離膜での濃縮を促進するためのポンプ14が設けられている。
また、本発明では、濃縮を行う際、導入用連通管28に設置したポンプ13により前記貯留容器3と細胞懸濁液処理器6との間で細胞懸濁液等を循環させるが、回路32が導入用連通管28に連結されていると、ポンプ13の脈動の影響により回路32上の気泡センサー9aでも正確な液面の測定が難しくなる傾向がある。
これに対して、上記のように導入用連通管28とは別の経路である注入路27に回路32を接続することで、回路32の液面を貯留容器3内の液体の液面として正確に測定することが可能になるという利点もある。
回路32を構成するチューブについては、細い口径のものを用いることで、液面の揺れを抑えることができるが、口径については特に限定はない。
すなわち、貯留容器3に回収ポート33を設け、この回収ポート33と回収容器5とを接続した回収路31’としてもよい。この経路にはクランプ34を設ければよい。
また、細胞懸濁液処理器6に細胞濃縮液回収口35を設け、この細胞濃縮液回収口35と回収容器5とを接続して回収路33’’としてもよい。この経路にもクランプ36を設ければよい。
本発明の細胞濃縮液の製造方法は、前記のような構成を有する細胞懸濁液処理システムを用い、
a)前記溶液入口ポートより細胞懸濁液を貯留容器に供給して貯留する工程と、
b)貯留容器内の細胞懸濁液を、循環回路の導入用連通管を経て細胞懸濁液処理器へ通液し、次いで循環回路の導出用連通管を経て貯留容器へと循環させて細胞懸濁液を濃縮する工程と、
c)貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知することにより、前記b)工程を停止させる工程と、
d)前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および循環回路内の細胞濃縮液を回収路を経て回収容器に送液して回収する工程と
を含むことを特徴とする方法である。
まず、細胞培養バッグ接続部1を細胞培養バッグに、希釈液バッグ接続部2を希釈液バッグにそれぞれ接続する。次にクランプ22を開け、クランプ21が閉じていることを確認し、細胞培養バッグ接続部1よりポンプ12を駆動して所定の流速で、細胞懸濁液を貯留容器3に貯留する。貯留する液量は、貯留容器の容量を超えなければ特に制限なく貯留することができる。また、流速としては、50mL/分〜300mL/分の範囲が好ましい。
次に、クランプ23を開け、ポンプ13を用いて貯留容器3と細胞懸濁液処理器6との間に循環回路30を通して細胞懸濁液を循環させながら、細胞懸濁液より培地等の液体成分を中空糸膜を用いて濾過し、濃縮する。この時に循環させる方向は、貯留容器3の循環入口ポート17から細胞懸濁液処理器6の細胞懸濁液導入口18に流れる方向とする。細胞懸濁液を濃縮する方法は、中空糸分離膜の内側を細胞懸濁液が流れる際に内側を流れる液体の圧力を利用した濾過でも、ポンプ14を用いた濾過でもどちらを用いてもよい。
導入用連通管28に設けた気泡センサー11で気泡を検知するまで細胞懸濁液の濃縮を行った後、ポンプ13、14を停止して濃縮を停止する。図1に示す細胞懸濁液処理システムAでは、前記のように、貯留容器3内に細胞濃縮液が貯留しなくなるまでの精度がよい濃縮を実施できる。
次いで、クランプ23を閉じ、クランプ24を開け、ポンプ13を駆動させることで、前記貯留容器3内、前記細胞懸濁液処理器6内および循環回路30内にある充分に濃縮された細胞懸濁液を、回収路31を経て回収容器5に回収することができる。
また、c)工程後の導入用連通管28では気泡センサー11の位置まで気泡が入りこんでいるため、ポンプ13を逆方向に駆動させて細胞濃縮液の液面が貯留容器3下部の循環入口ポート17付近または貯留容器3内にまで戻しておくことで、再度b)工程を行う場合でも気泡が細胞懸濁液処理器6に入らないようにできる。
a)工程の貯留工程は、図1に示す細胞濃縮処理システムAを用いた場合と同様に処理できる。ただし、図2に示す細胞濃縮処理システムA’で、a)工程前にプライミングを行う場合には、まず、プライミング液バッグ接続部26にプライミング液バッグを接続してクランプ21、25を開けて、プラミング液を貯留容器3に貯留すればよい。その後、希釈液バッグ接続部2に希釈液バッグを装着すればよい。
この後、細胞懸濁液をさらに貯留容器3に追加してもよいし、前記のように、希釈液による希釈工程を行ってもよい。この場合、再びb)工程、c)工程を行えばよい。
また、本発明で用いる細胞懸濁液としては、前記細胞を含む懸濁液であれば特に限定されないが、例えば、脂肪、皮膚、血管、角膜、口腔、腎臓、肝臓、膵臓、心臓、神経、筋肉、前立腺、腸、羊膜、胎盤、臍帯などの生体組織を酵素処理や破砕処理や抽出処理や分解処理や超音波処理などをした後の懸濁液、血液や骨髄液を密度勾配遠心処理やろ過処理や酵素処理や分解処理や超音波処理などの前処理をして調製された細胞懸濁液等が例示される。または、上記に例示した細胞を生体外で培養液、例えば、DMEM、α−MEM、MEM、IMEM、RPMI−1640や、サイトカイン、抗体やペプチドなどの刺激因子などを用いて培養した後の細胞懸濁液が例示される。
図1に示す細胞懸濁液処理システムAを用いて細胞懸濁液の濃縮処理を行った。
なお、クランプ21、22、23、24はいずれも閉じた状態であった。
また、使用した細胞懸濁液は、jurkat細胞を10%FBSの入ったRPMI−1640培地で培養したものを用いた。
なお、気泡が細胞懸濁液処理器6に入らないようにするため、ポンプ13を逆方向に駆動させて生理食塩水の液面を貯留容器3下部の循環入口ポート17付近に戻しておいた。
なお、気泡が細胞懸濁液処理器6に入らないようにするため、ポンプ13を逆方向に駆動させて細胞懸濁液の液面を貯留容器3下部の循環入口ポート17付近に戻しておいた。
回収された細胞懸濁液は、細胞懸濁液中の不要な成分が目的の濃度まで低減された細胞濃縮液であり、プライミング、濃縮(b)、および濃縮停止(c)工程において、前記細胞懸濁液処理器6内への空気の侵入がなかったことから、細胞の損失も少なく精度のよい濃縮ができていた。
処理後の細胞生存率を処理前の細胞生存率で除した細胞生存比率は99%以上であり、細胞のダメージは見られなかった。なお、細胞生存率は公知の手法で測定した。
図4に概略を記載した細胞懸濁液処理システムBを用いて実施した細胞懸濁液の処理に関して説明する。図4に示す細胞懸濁液処理システムBは、循環回路30の導入用連通管28に気泡センサー11を設置していない以外は、図1に示す細胞懸濁液処理システムAと同じ構成を有する。
また、比較例1と比較例2とでは、実施例1と同じ条件で作製された細胞懸濁液を用いたが、細胞培養バッグは異なるものを使用した。
2.希釈液バッグ接続部
3.貯留容器
4.廃液容器
5.回収容器
6.細胞懸濁液処理器
7.チャンバー
8. エアフィルタ
9. 気泡センサー
10.気泡センサー
11.気泡センサー
12〜14.ポンプ
15.溶液入口ポート
16.循環出口ポート
17.循環入口ポート
18.細胞懸濁液導入口
19.細胞懸濁液導出口
20.濾液用出口
21〜25、34、36.クランプ
26.プライミング液バッグ接続部
27.注入路
28.導入用連通管
29.導出用連通管
30. 循環回路
31. 回収路
32. 回路
33. 回収ポート
35. 細胞濃縮液回収口
A、A’、A’’ 細胞懸濁液処理システム
B 比較例1、2で使用した細胞懸濁液処理システム
Claims (15)
- 溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートを有する、細胞懸濁液の貯留容器と、
細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口および濾液用出口を有する容器内に中空糸分離膜が充填された、細胞懸濁液から液体を濾して濃縮を行うための細胞懸濁液処理器と、
前記貯留容器の循環入口ポートおよび前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導入口を連通する導入用連通管ならびに前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導出口および前記貯留容器の循環出口ポートを連通する導出用連通管とからなり、貯留容器および細胞懸濁液処理器の間で細胞懸濁液を循環させながら濃縮を行うための循環回路と、
濃縮された細胞濃縮液の回収容器と、
前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および前記循環回路内の細胞濃縮液を前記回収容器に送液するための回収路と、
前記貯留容器の溶液入口ポートに溶液を注入するための注入路と、
前記貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知するための検知手段と
を備えた細胞懸濁液処理システムを用いる細胞濃縮液の製造方法であって、
a)前記溶液入口ポートより細胞懸濁液を貯留容器に供給して貯留する工程と、
b)貯留容器内の細胞懸濁液を、循環回路の導入用連通管を経て細胞懸濁液処理器へ通液し、次いで循環回路の導出用連通管を経て貯留容器へと循環させて細胞懸濁液を濃縮する工程と、
c)貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知することにより、前記b)工程を停止させる工程と、
d)前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および循環回路内の細胞濃縮液を回収路を経て回収容器に送液して回収する工程と
を含む細胞濃縮液の製造方法。 - c)工程後に、前記貯留容器の溶液入口ポートより希釈液を貯留容器に注入して貯留容器内の細胞濃縮液を希釈した後、b)工程およびc)工程をさらに繰り返す請求項1に記載の製造方法。
- a)工程前に、溶液入口ポートよりプライミング液を注入し、プライミングを行う請求項1または2に記載の製造方法。
- a)工程とb)工程を並行して実施する請求項1〜3のいずれかに記載の製造方法。
- 循環回路内の液量を検知する検知手段が、前記循環回路の導入用連通管に備えられている気泡センサーである請求項1〜4のいずれかに記載の製造方法。
- 貯留容器内の液量を検知する検知手段が、貯留容器に平行な、貯留容器下部と連通する回路上に1つ以上備えている気泡センサーである請求項1〜4のいずれかに記載の製造方法。
- 前記貯留容器下部と連通する回路にチャンバーを備えている請求項6記載の製造方法。
- 前記注入路に気泡センサーが備えられている請求項1〜7のいずれかに記載の製造方法。
- 溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートを有する、細胞懸濁液の貯留容器と、
細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口および濾液用出口を有する容器内に中空糸分離膜が充填されてなり、細胞懸濁液から液体を濾して濃縮を行うための細胞懸濁液処理器と、
前記貯留容器の循環入口ポートおよび前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導入口を連通する導入用連通管ならびに前記細胞懸濁液処理器の細胞懸濁液導出口および前記貯留容器の循環出口ポートを連通する導出用連通管からなり、貯留容器および細胞懸濁液処理器の間で細胞懸濁液を循環させながら濃縮を行うための循環回路と、
濃縮された細胞濃縮液を回収する回収容器と、
前記貯留容器内、前記細胞懸濁液処理器内および前記循環回路内の細胞濃縮液を前記回収容器に送液するための回収路と、
前記貯留容器の溶液入口ポートに溶液を注入するための注入路と、
前記貯留容器内または循環回路の導入用連通管内の細胞濃縮液の液量を検知するための検知手段と、
前記検知手段で細胞濃縮液が所定の液量にまで濃縮されたことを検知して、前記貯留容器から細胞懸濁液処理器への細胞濃縮液の送液を停止させる制御手段と、
を備えた細胞懸濁液処理システム。 - 循環回路内の液量を検知する検知手段が、前記循環回路の導入用連通管に備えられている気泡センサーである請求項9に記載の細胞懸濁液処理システム。
- 貯留容器内の液量を検知する検知手段が、貯留容器に平行な、貯留容器下部と連通する回路上に備えている気泡センサーである請求項9に記載の細胞懸濁液処理システム。
- 前記貯留容器下部と連通する回路にチャンバーを備えている請求項11に記載の細胞懸濁液処理システム。
- 前記注入路に気泡センサーが備えられている請求項9〜12のいずれかに記載の細胞懸濁液処理システム。
- 前記溶液入口ポート、循環出口ポートおよび循環入口ポートが、全て貯留容器の下部に備えられている請求項9〜13のいずれかに記載の細胞懸濁液処理システム。
- 貯留容器上部付近に通気口を備え、貯留容器内が大気開放系になっている請求項9〜14のいずれかに記載の細胞懸濁液処理システム。
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