JP2014525262A - 間葉系幹細胞の基本培養培地の調製方法、間葉系幹細胞の基本培養培地及びこれを利用して培養分化した細胞治療剤 - Google Patents
間葉系幹細胞の基本培養培地の調製方法、間葉系幹細胞の基本培養培地及びこれを利用して培養分化した細胞治療剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014525262A JP2014525262A JP2014528250A JP2014528250A JP2014525262A JP 2014525262 A JP2014525262 A JP 2014525262A JP 2014528250 A JP2014528250 A JP 2014528250A JP 2014528250 A JP2014528250 A JP 2014528250A JP 2014525262 A JP2014525262 A JP 2014525262A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- mesenchymal stem
- stem cells
- culture medium
- abm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 172
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 94
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 31
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 210000005009 osteogenic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 193
- 239000000306 component Substances 0.000 claims description 77
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 47
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 47
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 47
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 46
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 claims description 33
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 28
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 25
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 25
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 24
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 24
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 24
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 21
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims description 17
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims description 17
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 12
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 12
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 10
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 claims description 10
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 10
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 claims description 10
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 10
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 10
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims description 10
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims description 10
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 10
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 10
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 9
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 9
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 9
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 9
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 102100024210 CD166 antigen Human genes 0.000 claims description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 101000980840 Homo sapiens CD166 antigen Proteins 0.000 claims description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 8
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 claims description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 8
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 7
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 7
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 6
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 6
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 6
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 claims description 6
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 6
- -1 Sodium Sodium Phosphate Anhydride Chemical class 0.000 claims description 6
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N alpha-Lipoic acid Natural products OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940073640 magnesium sulfate anhydrous Drugs 0.000 claims description 6
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 claims description 6
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010049931 Bone Morphogenetic Protein 2 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100024506 Bone morphogenetic protein 2 Human genes 0.000 claims description 5
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 5
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229940052299 calcium chloride dihydrate Drugs 0.000 claims description 5
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 5
- FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Chemical group Cl.CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims description 5
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 claims description 4
- WIGIZIANZCJQQY-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-3-methyl-N-[2-[4-[[[(4-methylcyclohexyl)amino]-oxomethyl]sulfamoyl]phenyl]ethyl]-5-oxo-2H-pyrrole-1-carboxamide Chemical compound O=C1C(CC)=C(C)CN1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)NC2CCC(C)CC2)C=C1 WIGIZIANZCJQQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 4
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 4
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 4
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 4
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000011665 D-biotin Substances 0.000 claims description 3
- 235000000638 D-biotin Nutrition 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 claims description 3
- HHGZUQPEIHGQST-UHFFFAOYSA-N [2-[(2-azaniumyl-2-carboxyethyl)disulfanyl]-1-carboxyethyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.OC(=O)C(N)CSSCC(N)C(O)=O HHGZUQPEIHGQST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 claims description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims 9
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- CIFDKEOHAJGWGZ-FHNDMYTFSA-N (2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N CIFDKEOHAJGWGZ-FHNDMYTFSA-N 0.000 claims 1
- 241000212342 Sium Species 0.000 claims 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- BCKBRDKKMUBGOS-IMJSIDKUSA-N [(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoyl] (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoate Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O BCKBRDKKMUBGOS-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 abstract description 38
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 21
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 40
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 40
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 40
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 23
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 22
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 19
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 15
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 12
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 9
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 8
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N Arginine hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 5
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 5
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 5
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 4
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- NWNOWCGAHDFNFJ-RUCXOUQFSA-N (2s)-2,5-bis(azanyl)-5-oxidanylidene-pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O NWNOWCGAHDFNFJ-RUCXOUQFSA-N 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 3
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 3
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Inorganic materials [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 3
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 3
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 3
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FBVVGPMIPAZFAW-RZVRUWJTSA-N (2S)-pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 FBVVGPMIPAZFAW-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 2
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 2
- LLIANSAISVOLHR-GBCQHVBFSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxidanylidene-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21.N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 LLIANSAISVOLHR-GBCQHVBFSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L beta-glycerolphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CC(CO)OOP([O-])([O-])=O GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- VCJMYUPGQJHHFU-UHFFFAOYSA-N iron(3+);trinitrate Chemical compound [Fe+3].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O VCJMYUPGQJHHFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000004108 pentose phosphate pathway Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 2
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- FRIHGXGYWUWBED-ZLELNMGESA-N (2s)-2,6-bis(azanyl)hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O FRIHGXGYWUWBED-ZLELNMGESA-N 0.000 description 1
- KCUJGKQDHCBUIM-MDTVQASCSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 KCUJGKQDHCBUIM-MDTVQASCSA-N 0.000 description 1
- KWINRPAFRAQHAG-SCGRZTRASA-N (2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydrochloride Chemical group Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N KWINRPAFRAQHAG-SCGRZTRASA-N 0.000 description 1
- NYLGITXFVVEBLZ-UHFFFAOYSA-N 1-methylindazol-3-amine Chemical compound C1=CC=C2N(C)N=C(N)C2=C1 NYLGITXFVVEBLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAWLKTDBUQOFEF-UHFFFAOYSA-N 3-(4-bromophenyl)propanenitrile Chemical compound BrC1=CC=C(CCC#N)C=C1 QAWLKTDBUQOFEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 239000000592 Artificial Cell Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWQVYZXPYSYPJD-RYUDHWBXSA-N Glu-Gly-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZWQVYZXPYSYPJD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102000009485 HLA-D Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010048896 HLA-D Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWVPFVHTQIDCFF-UHFFFAOYSA-J O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Zn++].[Zn++].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Zn++].[Zn++].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GWVPFVHTQIDCFF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- 230000001201 calcium accumulation Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-UHFFFAOYSA-M cobalt(2+);[5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] 1-[3-[2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7,12,17-tetrahydro-1h-corrin-21-id-3-yl]propanoylamino]propan-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].OCC1OC(N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)C(O)C1OP(O)(=O)OC(C)CNC(=O)CCC1(C)C(CC(N)=O)C2[N-]\C1=C(C)/C(C(C\1(C)C)CCC(N)=O)=N/C/1=C\C(C(C/1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\1=C(C)/C1=NC2(C)C(C)(CC(N)=O)C1CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000002308 glutamine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 150000004688 heptahydrates Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-UHFFFAOYSA-N hexopyranose Chemical compound OCC1OC(O)C(O)C(O)C1O WQZGKKKJIJFFOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- ATADHKWKHYVBTJ-UHFFFAOYSA-N hydron;4-[1-hydroxy-2-(methylamino)ethyl]benzene-1,2-diol;chloride Chemical compound Cl.CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 ATADHKWKHYVBTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- MKLSLVKLQOIPCY-BXRBKJIMSA-N l-alanin-l-alanin Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O MKLSLVKLQOIPCY-BXRBKJIMSA-N 0.000 description 1
- BRHPBVXVOVMTIQ-ZLELNMGESA-N l-leucine l-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O BRHPBVXVOVMTIQ-ZLELNMGESA-N 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 1
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N methane;hydrate Chemical compound C.O VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000004686 pentahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- SQXZWFDWXOBDPR-UHFFFAOYSA-M sodium;2-oxopropanoate;2-oxopropanoic acid Chemical compound [Na+].CC(=O)C(O)=O.CC(=O)C([O-])=O SQXZWFDWXOBDPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- RVUXIPACAZKWHU-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.OS(O)(=O)=O RVUXIPACAZKWHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004685 tetrahydrates Chemical class 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- JVDOIAUKIRFSOB-UHFFFAOYSA-L zinc sulfuric acid sulfate heptahydrate Chemical compound S(=O)(=O)([O-])[O-].[Zn+2].O.O.O.O.O.O.O.S(=O)(=O)(O)O JVDOIAUKIRFSOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
葉系幹細胞を急速な成長速度で大量増殖培養可能な間葉系幹細胞の基本培養培地を提供す
る。また、間葉系幹細胞の基本培養培地を用いて、体外(invitro)で成体組織から由来し
た未分化状態の間葉系幹細胞を骨形成細胞、軟骨細胞及び脂肪細胞に分化させ、未分化し
た間葉系幹細胞を含む細胞治療剤を提供する。
【選択図】図5
Description
、特に、骨髄及び脂肪由来の間葉系幹細胞を体外で培養する過程で、従来の常用化した培
地(常用培地)を利用する培養に比べ間葉系幹細胞の増殖率を高め、採取から大量培養ま
での時間を短縮し得、このように早期培養された間葉系幹細胞を利用して、骨形成細胞、
軟骨細胞及び脂肪細胞の治療剤として、多重分化可能な間葉系幹細胞の基本培養培地の調
製方法、間葉系幹細胞の基本培養培地及びこれの利用により培養分化した細胞治療剤に関
するものである。
な分野として提示されている。よって、幹細胞の研究に対する関心は高まり、増殖と分化
を通じて組織を形成し得る幹細胞が、ほぼ全ての疾病治療だけでなく、組織損傷などを解
決し得ると認識されている。
細胞に分化する性質を有している。幹細胞は、その起源によって胚性幹細胞(Embryonic s
tem cell)と成体幹細胞(Adult stem cell)に区分される。
ヒト胚性幹細胞は、人間の生命体で発生し得る胚芽から得られるため、細胞増殖及び分
化能力は優れるが、生命倫理的問題を抱えている。成体幹細胞は、胚性幹細胞に比べ分化
能力は限定されるが、人体の各種臓器に既存する細胞を骨髄、血液、脳、皮膚などから採
取して幹細胞に発展させているため、倫理的問題は少ない。
al., Nature, 418:41, 2002)、その後、皮膚、血管、筋肉及び脳組織から骨髄のような間
葉系幹細胞が確認された(J.G. Toma et al., Nat. Cell Biol., 3:778, 2001:M. Sampalo
esi et al., Science, 301:487, 2003:Y. Jiang et al., Hematol., 30:896, 2002)。
また、最近、脂肪組織から骨髄のような分化能を有する脂肪由来の間葉系幹細胞(Adiop
ose-derived stem cell)が確認された(B. Cousin et al., BBRC., 301:1016, 2003:A. Mi
ranville et al., Circulation, 110:349, 2004:S. Bronthos et al., J. Cell Physiol.
, 189:54, 2001:M.J. Seo et al., BBRC., 328:258, 2005)。
る技法は、それぞれ、Pittengerなど(Science 284:143, 1997)とvan(J. Clin Invest., 5
8:699, 1976)などの文献に開示されている。
これらの文献では、細胞培養のためにアルファ(alpha)-MEMやDMEM培地及び10-20%のウ
シ胎児血清を使用した。
細胞の数々は、未分化状態で増殖率が低く、同時に長期間維持が非常に難しいため、特異
的にスクリーンされた培地なしでは、体外での増殖培養及び保存が困難であるとの欠点が
ある。
生合成に利用される部分と生物学的なエネルギー代謝に利用される部分、そして、色々な
代謝作用の触媒的な役割と、細胞内の生理的な現象の調節に利用される部分などに分けら
れる。
即ち、細胞培養に使用される培地は、等張液成分と緩衝液成分、そして、エネルギ
ー供給源であるアミノ酸、ビタミン及び無機塩類を含む栄養成分とその他の多種の添加剤
(supplement)などで構成されている。
各種のホルモン、成長因子、脂肪、ビタミンなどを供給し、タンパク質分解酵素の成長と
活性を抑え、pH調節用緩衝剤の役割をするなど、哺乳動物細胞の成長と活性を促進させる
。
哺乳動物細胞培養のための培地を構成する成分の数々は、濃度だけでなく、その組成面
でも各培地の種類によって異なる。このような方法で、1950年頃、モーガン(Morgan)など
が体液組成を根拠にM119倍地を作りだし、胎児細胞(primary chick)を培養した(Morgan,
et al., 1950)。
ark Memorial Institute(RPMI)-1640(Moore et al., 1967)及び DEME(Dulbecco’s modif
ication of Eagle’s medium)(Dulbecoo, et al., 1959)のように、より単純、且つ細胞
培養で共通的に使用される培地と IMDM(Iscove’s modification of DMEM)、Ham’s F(Ha
m,1965)及びCMRL(Connaught Medical Research Laboratories)-1666のように、より複雑
、且つ色々な製品が強化された培地に分けられる。
代謝産物であるアンモニウムとブドウ糖代謝産物である乳酸の蓄積により、遅延期末から
生きた細胞の濃度が急激に減少する。哺乳動物細胞の主な代謝経路には、ブドウ糖とグル
タミン(glutamine)が主要炭素源及びエネルギー源として使用される。
哺乳動物細胞によりブドウ糖が代謝すると、該当過程を経てピルビン酸(Pyrubic acid)
になる。また、ペントースリン酸経路(Pentose Phosphate pathway)により、ペントース
を生成し核酸を合成する。該当過程で生成されたピルビン酸は、TCA回路により二酸化炭
素と水に分解されたり、乳酸、或いは、脂肪酸になる場合もある。
哺乳動物細胞の代謝に使用される炭素源の中、特異なのはグルタミン(Glutamine)であ
るが、代謝過程中、一部はグルタメート(Glutamate)になり、グルタメートは、TCA回路に
入り、別のアミノ酸合成のための炭素骨格(Carbon skeleton)を作る。哺乳動物細胞の重
要排泄物は、乳酸とアンモニアであるが、アラニン(Alanine)の排出もまた重要である。
乳酸塩(Lctate)とアンモニアは、細胞内部とリソゾームのpHを変化させるため、細胞の毒
性として作用する場合もある。
細胞培養に使用される培地の種類もまた、特性に応じて異なる必要がある。従って、人間
の骨髄及び脂肪組織などの成体組織から由来した未分化状態の間葉系幹細胞を体外で増殖
培養するためには、未分化状態の間葉系幹細胞の成長条件に合った培地の組成は異なるは
ずである。
に多くの研究が進められてきた。
、Ham’s F-12を添加して間葉系幹細胞から成長因子の分化を促進、人間成長因子の大量
合成を造作する無血清培地に対して述べているが、これは、DMEMとHam’s F-12を混合し
た基本培地に間葉系幹細胞の増殖より、間葉系幹細胞から塩基性繊維牙細胞成長因子、脈
管内皮細胞成長因子、または、人間形質転換成長因子‐βを大量生産するためのものであ
る。
に必要な培地組成物」)は、ウシ胎児血清の量を減らすために、幹細胞培養培地の構成成
分として、大豆タンパク質加水分解物をウシ胎児血清が含まれた低ブドウ糖のDMEM培地に
添加する技術に関するものである。
間葉系幹細胞を利用して毛乳頭組織を製造する方法」)は、間葉系幹細胞をDMEM培地、DME
M/F-12、F-12、McCoy’s5A、RPMI 1640培地、ウイリアム培地E(Williams’medium E)、ま
たは、IMDM(Iscove’s Modified Dulbecco’s Modification)培地で培養した後、毛乳頭
組織への分化を誘導する技術として、常用化した基本培養培地にヒドロコルチゾン(hydro
cortisone)、インシュリン(Insulin)、トランスフェリン(Transferrin)及びソディウムセ
レナイト(Sodium selenite)が追加された培地に関するものである。
は、常用化した培地に栄養混合物(Nutrient Mixture)を混合した培地を基本とし、追加的
に間葉系幹細胞の成長因子であるインシュリン、ヒドロコルチゾン、EGF、LIF、GM-CSFな
どを添加し培養する技術として、既に常用化した培養培地に栄養混合物を混合する技術で
ある。
EM培地を基本とし、NAC、rEGF、BPE、インシュリン(insulin)などが添加されたケラチノ
サイト(Keratinocyte)-SFM培地を添加して、間葉系幹細胞を増殖する技術に関するもので
、基本細胞培養培地は、DMEM培地である。
組成物」)と特許文献8(分離された全分化能成体幹細胞及びその分離と培養方法)は、DME
M/Ham’s F-12混合培地、DMEM培地及びDMEM/F-12を利用して間葉系幹細胞培養する技術
である。
どの添加剤を添加して培養する技術に限定されている。
軟骨細胞の特異的な培養方法)は、従来の常用化した培地に成長因子などの添加剤無添加
の培養培地を開発したものである。
特許文献9の軟骨細胞早期培養培地(ABM-C)を利用して、骨髄及び脂肪などの成体組織
から分離された間葉系幹細胞を培養したが、図13に示すように、細胞培養の間、形態異
常が発生、また、付着性の喪失により細胞培養培地に浮遊し、体外(invitro)で付着して
増殖する間葉系幹細胞はそれ以上増殖しなかった。
状態の間葉系幹細胞を急速な成長速度で大量増殖培養可能な間葉系幹細胞の基本培養培地
を提供することにある。
織から由来した未分化状態の間葉系幹細胞を骨形成細胞、軟骨細胞及び脂肪細胞に分化さ
せ、未分化した間葉系幹細胞を含む細胞治療剤を提供することにある。
の培養培地を組合わせて、多種類の候補基本培養培地組成を準備する段階と、候補基本培
養培地組成を対象に、10〜20%のウシ胎児血清が含まれた完全培地から間葉系幹細胞の増
殖率を分析し、間葉系幹細胞の早期培養に適した基本培養培地組成をスクリーンする段階
を含む間葉系幹細胞の基本培養培地の調製方法により達成される。
)、RPMI-1640及びHam’s F-12を1:1の割合で混合した培地とDMEM ハイグルコース(high
glucose)、RPMI-1640及びHam’s F-12の各培地を比較するが、DMEM ハイグルコース(high
glucose)培地成分を基本成分とし、各培地の中で重複する成分は高濃度を選択、DMEM ハ
イグルコース(high glucose)培地に含まれない成分は、DMEM ハイグルコース(high gluco
se)培地に含め、各培地の一つの培地にだけ入っている成分の濃度はそのまま維持、DMEM
ハイグルコース(high glucose)培地に含まれない成分はDMEM ハイグルコース(high gluco
se)に含め、各培地の成分の中、同一供給源である成分は、一つの成分を選択し、選択し
た一つの成分が各培地に重複する成分であれば高濃度を選択、DMEM ハイグルコース(high
glucose)培地に含まれない成分は、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含めて、
ABM-M(Advanced basic Media-Mesenchymal stem cell)培地を調製した間葉系幹細胞の基
本培養培地により達成される。
培地に含まれる成分は、アミノ酸(Amino Acids)では、L-アラニン(L-Alanine)、L-アスパ
ラギン無水物(L-Asparagine Anhydrous)、L-アスパラギン酸(L-Aspartic acid)、L-グル
タミン酸(L-Glutamic acid)、L-ヒドロキシL-プロリン(L-(L-(L-Hydroxy-L-proline)、L-
プロリン(L-Proline)であり、無機塩(Inorganic Salts)では、硫酸銅5水和物(Cupric Su
lfate Pentahydrate)、硫酸鉄(II)7水和物(Ferrous Sulfate Heptahydrate)、リン酸水
素二ナトリウム無水物(Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous)、硫酸亜鉛7水和物(Zinc
Sulfate Heptahydrate)、ビタミン(Vitamins)では、D-ビオチン(D-Biotin)、P-アミノ安
息香酸(P-Aminobenzoic Acid;PABA)、ビタミン(Vitamine)B12、その他の成分(Other comp
onents)では、ハイポキサンチン(Hypoxanthine)、還元型L-グルタチオン(L-Glutathione
Reduced)、リノール酸(Linoliec acid)、プトレシン(Putrescine)+2HCL、チオクト酸(Thi
octic Acid)、チミジン(Thymindine)であることを特徴とする。
は、人間の血清、L-グルタミン(L-glutamine)、抗生剤及び抗真菌剤の中から一つ以上が
含まれる。
清と2mMのL-グルタミン(L-glutamine)が余計に含まれる。
の成分は、アミノ酸(Amino Acids)では、L-アルギニンモノヒドロクロライド(L-Arginine
Monohydrochloride)、L-アスパラギン酸(L-Aspartic acid)、L-シスチンジヒドロキシク
ロライド(L-Cystine Dihydrochloride)、L-ヒスチジンモノヒドロクロライド(L-Histidin
e Monobydrochloride Monohydrate)であり、無機塩(Inorganic Salts)では、塩化カルシ
ウム二水和物(Calcium Chloride Dihydrate)、硫酸鉄(II)7水和物(Ferrous Sulfate Hep
tahydrate)、硫酸マグネシウム無水物(Magnesium Sulfate Anhydrous)、リン酸二水素ナ
トリウム無水物(Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous)、ビタミン(Vitamins)では、ピリ
ドキサル塩酸塩(Pyridoxal Hydrochloride)であることを特徴とする。
D44、CD29、CD73、HLA-ABC陽性表面マーカーを80%以上発現するが、CD44、CD105、CD90
、CD73とCD166陽性表面マーカーは95%以上発現、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80とHLA-D
R陰性表面マーカーを5%以下発現することを特徴とする。
間葉系幹細胞が培養された後、ウシ胎児血清、デキサメタゾン(Dexamethasone)、ベータ
グリセロリン酸(β-Glycerophosphate)、アスコルビン酸(Ascorbic acid)を含むα−MEM
培地で再び培養分化され、骨形成細胞に分化することを特徴とする骨欠損治療用細胞治療
剤により達成する。
間葉系幹細胞が培養された後、デキサメタゾン(Dexamethasone)、アスコルビン酸(Ascorb
ic acid)とピルビン酸ナトリウム(Sodium pyruvate)、TGF-β、BMP-2を含むDMEM 低グル
コース(low glucose)培地で再び培養分化され、軟骨細胞に分化することを特徴とする骨
関節炎治療用細胞治療剤により達成する。
間葉系幹細胞が培養された後、ウシ胎児血清、デキサメタゾン(Dexamethasone)、インド
メタシン(Indomethacin)、インシュリン(Insulin)を含むα−MEM培地で再び培養分化され
、脂肪細胞に分化することを特徴とする脂肪組織形成用細胞治療剤により達成する。
た間葉系幹細胞の大量増殖培養が急速な成長速度で可能であり、1ヶ月以上の長期培養増
殖でも細胞の核型を維持し、骨形成細胞、軟骨細胞及び脂肪細胞の誘導体に分化させ、細
胞治療剤として使用できる。
供するが、本発明の間葉系幹細胞の基本培養培地は、常用化した培地構成成分の種類を分
析した後、2種類以上の培地を組合わせて、多種類の候補基本培養培地組成を準備する段
階と、候補基本培養培地組成を対象に、10〜20%のウシ胎児血清を含む完全培地から間葉
系幹細胞の増殖率を分析し、間葉系幹細胞に適した基本培養培地組成をスクリーンする段
階を含み調製される。
度で早期培養した間葉系幹細胞が免疫学的細胞特性を示すかを分析、骨形成細胞、軟骨細
胞及び脂肪細胞への分化のために分化能を分析、染色体異常による突然変異が発生せず、
長期間の培養が可能であるかの確認のための細胞核型を分析し、骨欠損治療用、骨関節炎
治療用及び脂肪組織形成を通じた脂肪細胞治療用細胞治療剤に使用できるかの有無を検証
することになる。
るかの有無を検証するためには、免疫学的細胞特性、分化能及び細胞核型の分析が必要で
あるが、次のような手順に沿った実験を通じての検証が望ましい。先ず、スクリーンされ
た培地組成で培養した間葉系幹細胞の免疫学的細胞特性を分析する段階と;スクリーンさ
れた培地組成で培養した間葉系幹細胞の分化能を分析する段階;及びスクリーンされた培
地組成で培養した間葉系幹細胞の長期間培養可能の有無を確認するための細胞核型を分析
する段階で検証することである。
stem cell)培地は、常用化した培養培地であるDMEM ハイグルコース(high glucose)、RPM
I-1640及びHam’s F-12を1:1:1の割合で混合した基本培地を準備、DMEM ハイグルコース(
high glucose)培地成分を基本成分とし、上記基本培地をDMEM ハイグルコース(high gluc
ose)、RPMI-1640及びHam’s F-12の各培地と比較して、各培地の中で重複する成分は高濃
度を選択、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含まれない成分は、DMEM ハイグル
コース(high glucose)培地に含み(表1の備考欄1)、各培地の一つの培地にだけ入ってい
る成分の濃度はそのまま維持、DMEM ハイグルコース(high glucose)に含まれない成分は
、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含み(表1の備考欄2)、各培地の成分中、
同一供給源である成分は、一つの成分を選択し、選択した一つの成分が各培地の重複する
成分であれば、高濃度を選択、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含まれない成
分は、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含み(表1の備考欄3)、下記の表1の
ように調製される。
ルコース(high glucose)培地にない成分で追加され含まれる成分は、アミノ酸(Amino Aci
ds)では、L-アラニン(L-Alanine)、L-アスパラギン酸無水物(L-Aspartic acid)、L-アス
パラギン酸(L-Aspartic acid)、L-グルタミン酸(L-Glutamic acid)、L-ヒドロキシL-プロ
リン(L-Hydroxy-L-proline)、L-プロリン(L-Proline)であり、無機塩(Inorganic Salts)
では、硫酸銅5水和物(Cupric Sulfate Pentahydrate)、硫酸鉄(II)7水和物(Ferrous Su
lfate Heptahydrate)、リン酸二水素ナトリウム無水物(Sodium Phosphate Dibasic Anhyd
rous)、硫酸亜鉛7水和物(Zinc Sulfate Heptahydrate)、ビタミン(Vitamins)では、D-ビ
オチン(D-Biotin)、P-アミノ安息香酸(P-Aminobenzoic Acid;PABA)、ビタミン(Vitamine)
B12、その他の成分(Other components)では、ハイポキサンチン(Hypoxanthine)、還元型L
-グルタチオン(L-Glutathione Reduced)、リノール酸(Linoliec acid)、プトレシン(Putr
escine)+2HCL、チオクト酸(Thioctic Acid)、チミジン(Thymindine)である。
enchymal stem cell)培地を調製した表1の備考欄に対する説明は、次の通りである。
ucose)培地に含まれない成分で、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含まれるも
のは、表1の備考欄1に該当する。
体幹細胞から由来した間葉系幹細胞を培養した結果、細胞の形態異常及び付着性の喪失が
誘発したため、これの補強のために、増殖率及び細胞の合成と関連する成分を補強した。
oleucine)、L-ロイシン(L-Leucine)、L-リジン(L-Lysine)、L-メチオニb(L-Methionine)
、L-フェニルアラニン(L-Phenylalaine)、L-セリン(L-Serine)、L-トレオニン(L-Threoni
ne)、L-トリプトファン(L-Tryptophan)、L-チロシン(L-Tyrosine)、L-バリン(L-Valine)
は、タンパク質合成の主要アミノ酸として、高い方の濃度を選択することで、タンパク質
合成の増進と同時に細胞の増殖を高めた。
)は、細胞内外の浸透圧と関連するため、適正浸透圧の維持のために高い方の成分を選択
した。
ine Chloride)、D-ビオチン(D-Biotin)(DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含む)
、D-パントテン酸カルシウム(D-Ca Pantothenate)、葉酸(Folic Acid)、ミオイノシトー
ル(Myo-Inositol)、ニコチンアミド(Nicotinamide)、リボフラビン(Riboflavin)、塩酸チ
アミン水和物(Thiamine Hydrochloride)、ビタミン(Vitamine) B12(DMEM ハイグルコース
(high glucose)培地に含む)は、抗酸化剤として、細胞の高増殖により生成された老廃物
を取除くために高濃度を選択した。
として、高増殖の維持のためのエネルギー源として高濃度を選択、ピルビン酸ナトリウム
(Sodium Pyruvate)は、細胞内合成に関して高い方を選択した。Phenol Red Sodium Salt
は、細胞の増殖とは関連しないが、細胞の活発な増殖により排出された老廃物で、Phenol
Redの色が赤色から黄色に変化するため、高増殖率により排出された老廃物の量を視覚的
に測定するために高濃度を選択した。
。高増殖の間葉系幹細胞内コラーゲン合成を増加させるのために、DMEM ハイグルコース(
high glucose)培地に含ませた。
回路に連結された、プリン塩基とピリミジン塩基のアミノ基供給体である。従って、高増
殖率を示す細胞のDNA合成の主要供給源は、プリンとピリミジン塩基を主要供給体とし、D
MEM ハイグルコース(high glucose)培地に含ませた。
胞の活発な増殖のために、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含ませた。
コース(high glucose)に含まれない成分で、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に
含まれるものは、表1の備考欄2に該当する。
付着性が喪失された。これの補強のために、細胞内のコラーゲン合成を高め、高まった合
成により誘発した老廃物を取除くために、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地にな
い成分を含ませた。
て、間葉系幹細胞の増殖を高めるために含ませ、アミノ酸であるL-ヒドロキシ-L-プロリ
ン(L-Hydroxy-L-Proline)、その他の成分であるチオクト酸(Thioctic Acid)とリノール酸
(Linoleic Acid)、ビタミン類であるP-アミノ安息香酸(P-Aminobenzoic Acid)(PABA)は、
細胞内のコラーゲン構成成分として、細胞内のコラーゲン合成と細胞の付着性を高めるた
めに、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含ませた。
inc Sulfate Heptahydrate)、その他の成分である還元型グルタチオン(Glutathione Redu
ced)は、抗酸化剤として、高増殖率を示す細胞内の多様な老廃物の排出を更に増進させ、
高い細胞増殖率を示すために、EME ハイグルコース(high glucose)培地に含ませた。
チン(Hypoxanthine)は、DNA合成に関与する成分として、細胞増殖を高めるためには、DNA
合成を先行する必要があるため、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含ませた。
の成分が各培地に重複する成分であれば高濃度を選択、DMEM ハイグルコース(high gluco
se)培地に含まれない成分で、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地に含まれるのは、
表1の備考欄3に該当する。
イン(L-Cysteine)/シスチン(cystine)、L-ヒスチジン(L-Histidine)、無機質塩であるカ
ルシウム(Calcium)塩化物(Chloride)/硝酸塩(Nitrate)、三硝酸鉄(Ferric Nitrage)/硫酸
第一鉄(Ferrous Sulfate)、リン酸ナトリウム(Sodium Phosphate)、ビタミン類であるピ
リドキサール塩酸塩(Phridoxal Hydrochloride)/ピリドキシン塩酸塩(Pyridoxine Hydroc
hloride)の場合、同一供給源成分が2つ以上追加されると、培地内の浸透圧が高まり細胞
に悪影響を及ぼし得るので、同一成分は、高濃度成分に限り、一つの供給源だけを選択し
た。
少量付いている成分を選択した。
透圧が上昇し、細胞に悪影響を及ぼし得るので、適正浸透圧の維持のために142.04mg/Lを
選択した。
物(Magnesium Sulfate Anhydrous)は、細胞内代謝の主要物質であるマグネシウム(Magnes
ium)の供給源として、培地製造の際、塩の生成を減らすために無水化の硫酸マグネシウム
無水物(Magnesium Sulfate Anhydrous)を選択するが、重複する成分であるため、高濃度
を選択した。
、L-Arginine Free Base(RPMI)とL-Arginine Monobydrochloride(DEMEとF12)の中では、L
-Arginine Monobydrochloride(211mg/L)を選択、L-Asparagine MonobydrateとL-Asparati
c acidでは、L-Asparatic acid(20mg/L)を選択、L-Cysteine Monobydrochloride Monobyd
rateとL-Cystine Dibydrochlorideでは、L-Cystine Dibydrochloride(62.6mg/L)を選択、
L-HistidimeとL-Histidine Monobydrochloride Monobydrateでは、L-Histidine Monobydr
ochloride Monobydrate(42mg/L)を選択するのである。
Tetrahydrateの中では、Calcium Chloride Dihydrate(265mg/L)を選択、Ferric Nitrate
NonabydrateとFerrous Sulfate Heptabydrateでは、Ferrous Sulfate Heptabydrate(0.8
34mg/L)を選択、Magnesium Chloride HexabydrateとMagnesium Sulfate Anbydrousでは、
Magnesium Sulfate Anbydrous(97.67mg/L)を選択、Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous
とSodium Phosphate Monobasic Anhydrousでは、Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous(1
42.04mg/L)を選択するのである。
eの中、Pyridoxal Hydrochloride(4mg/L)を選択するのである。
ための間葉系幹細胞の基本培養培地(Advanced Basic Media-Mesenchymal stem cell、ABM
-M)組成は、DMEM ハイグルコース(high glucose)、RPMI-1640及びHam’s F-12倍地の組成
から出発するが、DMEM ハイグルコース(high glucose)の成分を基本成分として調製され
る。
胞に分類され、アミノ酸濃度が高いDMEM ハイグルコース(high glucose)培地の成分を基
本成分とし、DMEM ハイグルコース(high glucose)培地には無いか、或いは、濃度が低い
アミノ酸、無機塩、ビタミンなどの構成成分の濃度を調整した培地である。
未分化細胞を指し、成体組織は、骨髄、血液、脳、皮膚、脂肪、臍帯血などが含まれる。
離できる。例えば、パーコール(Percoll)など、密度勾配遠心分離による分離方法(Majumd
ar MK et al., J. Cell Physiol. 176:57, 1998;Majka SM et al., J. Clin. Invest., 1
11:71, 2003)(collagnease)の利用、或いは、コラゲナーゼ(collagnease)などの酵素処理
で分離した細胞をLuria(Luria et al., Transfusion, 11:345, 1971)などの方法で、培養
容器の底に付着して育つ全細胞を分離する方法などで、容易に分離できる。
、臍帯血などから分離された間葉系幹細胞を培養するためのもので、必要に応じて、一つ
以上の成分を添加可能であるが、胎児子牛、馬、または、人間の血清及びL-グルタミン(L
-glutamine)を始め、微生物の汚染防止のための抗生剤及び抗真菌剤を添加して使用でき
、好ましくは、10-20%のウシ胎児血清と2-4mMのL-グルタミン(L-glutamine)を添加する
ことが望ましい。
、本発明の基本培養培地で培養する。このように培養された間葉系幹細胞の免疫学的細胞
特性を探って見ると、CD166、CD105、CD90、CD44、CD29、CD73、HLA-ABC陽性表面マーカ
ーは、80%以上発現し、ここで特に、CD44、CD105、CD90、CD73とCD166陽性表面マーカー
は、95%以上発現、CD31、CD34、CD45、CD80とHLA-DR陰性表面マーカーは、5%以下発現
する免疫学的細胞特性を示す。
特性を示し、二分化状態で増殖して分化能力を持つ特徴を示す。
可能な多分化能の間葉系幹細胞であることを確認できた。
培地で培養された後、ウシ胎児血清、デキサメタゾン(Dexamethasone)、β-ベータグリセ
ロリン酸(phosphate)、アスコルビン酸(Ascorbic acid)を含むα-MEM培地で再び培養され
、骨形成細胞に分化し得る間葉系幹細胞を含む骨欠損治療用細胞治療剤を提供する。
培地で培養された後、デキサメタゾン(Dexamethasone)、アスコルビン酸(Ascorbic acid)
、ピルビン酸ナトリウム(Sodium pyruvate)、TGF-β、BMP-2を含むDMEM 低グルコース(lo
w glucose)培地で再び培養され、軟骨細胞に分化し得る間葉系幹細胞を含む骨関節炎治療
用細胞治療剤を提供する。
培地で培養された後、ウシ胎児血清、デキサメタゾン(dexamethasone)、インドメタシン(
Indomethacin)、インシュリン(Insulin)を含むα-MEM培地で再び培養され、脂肪細胞に分
化し得る間葉系幹細胞を含む脂肪組織形成用細胞治療剤を提供する。
cell、ABM-M)での間葉系幹細胞の増殖率を別の培地と比較、ABM-M培地で培養された間葉
系幹細胞の免疫学的細胞特性を確認、ABM-M培地で培養された間葉系幹細胞の分化能確認
及びABM-M培地で培養された間葉系幹細胞の細胞核型維持に対して、下記の実施例を通じ
て、より詳細な説明を行なう。
殖力を分析するために、凍結保管された骨髄由来の間葉系幹細胞と脂肪由来の間葉系幹細
胞をロンザ(Lonza)社から購入し、骨髄由来の間葉系幹細胞は、Poietics MSCGMTM Bullek
itで培養、脂肪由来の間葉系幹細胞は、Poietics ADSC-GMTM Bullekitにて、培養社の専
用培地と比較した。
後、5mLのMSCGMTM培地を有する15mLチューブに入れて、300gで5分間遠心分離した。遠心
分離後、上層液培地を除去、新しいMSCGM培地10mLで縣濁し、細胞数及び細胞生存率を測
定した。準備した細胞は、T25フラスコで当り5,000個の細胞を接種し、37℃と5%CO2を維
持しながら培養した。3-4日毎、培養容器別にMSCGM培地5mLで培養液の交換を行ないなが
ら培養、細胞がフラスコ床面積の90%以上成長すると継代培養を実施した。2次、3次及び
4次培養を行い、試験用細胞数を準備した。
した後、5mL ADSC-GM培地を有する15mLチューブに入れて、300gで5分間遠心分離した。遠
心分離後、上層液培地を除去、新しいADSC-GM培地10mLで縣濁し、細胞数及び細胞生存率
を測定した。準備した細胞は、T25フラスコで当り5,000個の細胞を接種し、37℃と5%CO2
を維持しながら培養した。3-4日毎、培養容器別に10%のウシ胎児血清を含むADSC-GM培地
5mLで培養液の交換を行ないながら培養、細胞がフラスコ床面積の90%以上成長すると継
代培養を実施した。2次、3次及び4次継代培養を行い、試験用細胞数を準備した。
、本発明のABM-M培地での増殖力を調査した。MSCGM培地は、MSC-BMである基本培地と添加
剤(50mL growth supplement、0mL L-glutamine、0.5mL penicillin-streptomyで構成)で
構成されているため、ABM-M培地でも添加剤を添加して比較試験を実施した(表2)。
接種し、37℃と5%CO2を維持しながら培養した。3-4日毎、培養容器別に其々の培地で培
養液の交換を行ないながら10日間培養した後、細胞数を測定した。
を添加した培地(MSC-BM+FBS)は、10日間増殖せず、添加剤を添加したMSC-BMであるMSCGM
培地もまた、増殖が行なわれなかった。
(ABM-B+FBS)は、MSCGMより高い増殖を示し、倍加時間(doubling time)も速かった。ABM-M
に添加剤を含めた培地もまた、MSCGMより高い増殖と速い倍加時間(doubling time)を示し
たため、ABM-M培地組成が骨髄由来の間葉系幹細胞の増殖率を高めたことを確認した。
血清と2mM L-グルタミン(L-glutamine)を含むABM-M培地で、骨髄由来の間葉系幹細胞は増
殖された。これは、MSCGM培地で培養した間葉系幹細胞の増殖能は喪失したが、ABM-M培地
では増殖能を維持することを示している。
でァイ当り5,000個の細胞を接種し、37℃と5%CO2を維持しながら培養した。3-4日毎、培
養容器別に10%のウシ胎児血清、2mM L-グルタミン(L-glutamine)を含むABM-M培地で培養
液の交換を行ないながら10日間培養した後、細胞数を測定した結果、3,357,500の細胞を
回収、接種細胞数750,000対比447%の増殖率を示し、増殖能の持続を確認した。従って、
本発明のABM-M培地は、骨髄由来の間葉系幹細胞の増殖能に優れることを確認できた。
、ABM-M培地での増殖力を調査した。ADSC-GM培地は、ADSCC-BMである基本培地と添加剤(5
0mLウシ胎児血清、50mL L-glutamine、0.5mL gentamicin-amphotercinで構成)で構成され
るため、本発明のABM-M培地に10%のウシ胎児血清と2mM L-グルタミン(L-glutamine)を添
加して比較試験を実施した。
し、37℃と5%CO2を維持しながら培養した。3-4日毎、培養容器別に其々の培地で培養液
の交換を行ないながら7日間培養した後、細胞数を測定した。また、回収した細胞を継代
培養して、培地が入っているT175フラスコにァイ当り5,000個の細胞を接種し、37℃と5%
CO2を維持しながら培養した。3-4日毎、培養容器別に其々の培地で培養液の交換を行ない
ながら7日間培養した後、細胞数を測定した。
発明のABM-M培地で、10%のウシ胎児血清を含む培地(ABM-M+FBS)が、5、6次継代培養で速
い倍加時間(doubling time)を示すと同時に回収した細胞も多いため、本発明のABM-M培地
による脂肪由来の間葉系幹細胞の増殖率が高いことを確認した(表4)。
分間遠心分離して細胞を獲得した後、FASC溶液で2回洗浄、洗浄した細胞を5×105個ずつ
分注してanti-CD166、CD105、CD90、CD44、CD29、CD73、HLA-ABC、CD31、CD34、CD45、CD
80とHLA-DR抗体で2分間反応させた後に洗浄、FACS溶液で浮遊させ柔細胞分析器を利用し
て分析した。細胞表面を分析して、間葉系幹細胞の表現型を確認した。
のウシ胎児血清、2mM L-グルタミン(L-glutamine)を含むABM-M培地で培養した細胞で、CD
166、CD105、CD90、CD44、CD29、CD73、HLA-ABCは陽性発現をCD14、CD31、CD34、CD45、C
D80とHLA-DRは陰性発現を示し、間葉系幹細胞の特性を有することを確認した(表5)。
で5分間遠心分離して獲得した細胞をin vitro条件で多重分化能を確認した。
et al., Tissue Eng Par C Mechod 14:185,2008)の方法に従い、次のような分化を誘導
した。
胞を10%のウシ胎児血清、10mM ベータグリセロリン酸(β-glycerolphosphate)、50uM ア
スコルビン酸(Ascorbic acid)と10-7M デキサメタゾン(dexamethasone)を含むα-MEM培地
で更に2-3週間培養分化した後、アルカリフォスファターゼ(alkaline phosphatase)発現
の有無は、カリフォスファターゼ(ALPase)染色で測定、カルシウムの蓄積は、フォン コ
ッサ(von Kossa)染色で確認した。
を10%のウシ胎児血清、10-7M デキサメタゾン(dexamethasone)、100uM インドメタシン(
indomethacin)と10ug/mL インシュリン(insulin)を含むα-MEM培地で更に2週間培養分化
した後、oil Red-O染色で細胞内に蓄積した脂肪滴を染色して確認した。
た5ラ105程度の間葉系幹細胞を300gで5分間遠心分離して細胞の塊を作った後、10-7M dex
amethasone、50uM アスコルビン酸(ascorbic acid)、1nM ピルビン酸ナトリウム(sodium
pyruvate)、10ng/mL TGF-β、100mg/mL BMP-2を含むDMEM 低グルコース(low glucose)培
地で更に3週間培養分化した。分化誘導された軟骨組織は、パラフィン包埋過程を経て5um
連続切片を製作、H/E染色、サフラニン(sasfranin) O染色、染色、シリウス レッド(sir
ius red)染色、COMP染色、コラーゲン(collagen) typeIIとI染色を通じて、軟骨組織への
分化能を確認した。
多重分化を誘導して、誘導していない対照群と比較した。骨形成細胞で誘導し、ALP染色
とカルシウムの沈着を遂行した結果、分化を誘導しなかった対照群と違って、アルカリ
フォスファターぜ(alkaline phosphatase)の発現及びカルシウムの沈着を確認した。ま
た、脂肪細胞に誘導してoil Red-O染色を遂行した結果、分化を誘導しなかった対照群と
違って、脂肪細胞に分化することを確認した。間葉系幹細胞の塊で軟骨細胞への分化を誘
導し、サフラニン(safranin) O染色、アルシアン ブルー(alcian blue)染色、シリウス
レッド(sirius red)染色、COMP染色、コラーゲン(collagen) typeIIとI染色を通じて、
正常軟骨と類似するグリコサミノグリカン(glycosaminoglycan)(GAG)、プロテオグリカン
(proteoglycan)、コラーゲン(collagen) typeIの発現が確認された。
織から間葉計幹細胞を分離して、10%のウシ胎児血清と2mM L-グルタミン(L-glutamine)
を含むABM-M培地で10回の継代培養後、培養された間葉系幹細胞の核型を分析した。20個
の分裂中期像をGTG分染法を利用して分析、国際命名規約(international System for Cyt
ogenetic Nomenclature)(2009)に準じて核型を表記した。観察を行なった5個全ての分裂
中期で、図11は、正常な46、XY核型を、図12は、正常な46、XX核型を示した。
胞培養培地に比べ、間葉系幹細胞の細胞特性及び分化能を維持、また、細胞成長及び増殖
に優れる培地であるため、これを利用して間葉系幹細胞を大量培養することで、純粋な間
葉系幹細胞を獲得できる。
【請求項1】
常用化した培養培地であるDEME 高グルコース(high glucose)、RPMI-1640及びHam’s F-12を1:1の割合で混合した基本培地と、DMEM 高グルコース(high glucose)、RPMI-1640及びHam’s F-12の各培地を比較するが、DMEM 高グルコース(high glucose)培地成分を基本成分とし、各培地で重複する成分は、高濃度を選択、DMEM 高グルコース(high glucose)培
地に含まれない成分は、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含み、
各培地の一つの培地にだけ入っている成分の濃度はそのまま維持、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含まれない成分は、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含み、
各培地の成分の中、同一供給源である成分は、一つの成分を選択し、選択した一つの成分が各培地に重複する成分であれば、高濃度を選択、DMEM 高グルコース(high glucose)培
地に含まれない成分は、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含み、ABM-M(アドバン
スド基本培地-間葉系幹細胞;Advanced Basic Media-Mesenchymal stem cell)培地が調製されていることを特徴とする間葉系幹細胞の基本培養培地。
【請求項2】
請求項1において、
DMEM 高グルコース(high glucose)に含まれる成分は、
アミノ酸(Amino Acids)では、L-アラニン(L-Alanine)、L-アスパラギン無水物(L-Asparagine Anhydrous)、L-アスパラギン酸(L-Aspartic acid)、L-グルタミン酸(L-Glutamic acid)、L-ヒドロキシL-プロリン(L-(L-(L-Hydroxy-L-proline)、L-プロリン(L-Proline)であり、
無機塩(Inorganic Salts)では、硫酸銅5水和物(Cupric Sulfate Pentahydrate)、硫酸鉄(II)7水和物(Ferrous Sulfate Heptahydrate)、リン酸水素二ナトリウム無水物(Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous)、硫酸亜鉛7水和物(Zinc Sulfate Heptahydrate)、
ビタミン(Vitamins)では、D-ビオチン(D-Biotin)、P-アミノ安息香酸(P-Aminobenzoic Acid;PABA)、ビタミン(Vitamine)B12、
その他の成分(Other components)では、ハイポキサンチン(Hypoxanthine)、還元型L-グルタチオン(L-Glutathione Reduced)、リノール酸(Linoliec acid)、プトレシン(Putrescine)+2HCL、チオクト酸(Thioctic Acid)、チミジン(Thymindine)であることを特徴とする間葉系幹細胞の基本培養培地。
【請求項3】
請求項1において、
ABM-M培地には、胎児、子牛、馬、または、人間の血清、(L-glutamine)、抗生剤及び抗真菌剤の中から更に一つ以上を含む間葉系幹細胞の基本培養培地。
【請求項4】
請求項1において、
ABM-M培地には、10-20%のウシ胎児血清と2-4mMのL-グルタミン(L-glutamine)を更に含む間葉系幹細胞の基本培養培地。
【請求項5】
請求項1において、
同一供給源である成分から選択される一つの成分は、
アミノ酸(Amino Acids)では、L-アルギニンモノヒドロクロライド(L-Arginine Monohydrochloride)、L-アスパラギン酸(L-Aspartic acid)、L-シスチンジヒドロキシクロライド(L-Cystine Dihydrochloride)、L-ヒスチジンモノヒドロクロライド(L-Histidine Monobydrochloride Monohydrate)であり、
無機塩(Inorganic Salts)では、塩化カルシウム二水和物(Calcium Chloride Dihydrate)
、硫酸鉄(II)7水和物(Ferrous Sulfate Heptahydrate)、硫酸マグネシウム無水物(Magnesium Sulfate Anhydrous)、リン酸二水素ナトリウム無水物(Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous)、
ビタミン(Vitamins)では、ピリドキサル塩酸塩(Pyridoxal Hydrochloride)であることを
特徴とする間葉系幹細胞の基本培養培地。
【請求項6】
請求項1において、
ABM-M培地は、CD166、CD105、CD90、CD44、CD29、CD73、HLA-ABC陽性表面マーカーを80%以上発現するが、CD44、CD105、CD90、CD73とCD166陽性表面マーカーは、95%以上発現、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80とHLA-DR陰性表面マーカーを5%以下発現することを特徴
とする間葉系幹細胞の基本培養培地。
Claims (10)
- 常用化した培養培地の構成成分の種類を分析後、2種類以上の培養培地を組合せ、多種類
の候補基本培養培地組成を準備する段階と、
候補基本培養培地組成を対象に、10〜20%のウシ胎児血清が含まれた完全培地で間葉系幹
細胞の増殖率を分析し、間葉系幹細胞の早期培養に適した基本培養培地組成をスクリーン
する段階を含む間葉系幹細胞の基本培養培地の調製方法。 - 常用化した培養培地であるDEME 高グルコース(high glucose)、RPMI-1640及びHam’s F-1
2を1:1の割合で混合した基本培地と、DMEM 高グルコース(high glucose)、RPMI-1640及び
Ham’s F-12の各培地を比較するが、DMEM 高グルコース(high glucose)培地成分を基本成
分とし、各培地で重複する成分は、高濃度を選択、DMEM 高グルコース(high glucose)培
地に含まれない成分は、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含み、
各培地の一つの培地にだけ入っている成分の濃度はそのまま維持、DMEM 高グルコース(hi
gh glucose)培地に含まれない成分は、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含み、
各培地の成分の中、同一供給源である成分は、一つの成分を選択し、選択した一つの成分
が各培地に重複する成分であれば、高濃度を選択、DMEM 高グルコース(high glucose)培
地に含まれない成分は、DMEM 高グルコース(high glucose)培地に含み、ABM-M(アドバン
スド基本培地-間葉系幹細胞;Advanced Basic Media-Mesenchymal stem cell)培地が調製
されていることを特徴とする間葉系幹細胞の基本培養培地。 - 請求項2において、
DMEM 高グルコース(high glucose)に含まれる成分は、
アミノ酸(Amino Acids)では、L-アラニン(L-Alanine)、L-アスパラギン無水物(L-Asparag
ine Anhydrous)、L-アスパラギン酸(L-Aspartic acid)、L-グルタミン酸(L-Glutamic aci
d)、L-ヒドロキシL-プロリン(L-(L-(L-Hydroxy-L-proline)、L-プロリン(L-Proline)であ
り、
無機塩(Inorganic Salts)では、硫酸銅5水和物(Cupric Sulfate Pentahydrate)、硫酸鉄
(II)7水和物(Ferrous Sulfate Heptahydrate)、リン酸水素二ナトリウム無水物(Sodium
Phosphate Dibasic Anhydrous)、硫酸亜鉛7水和物(Zinc Sulfate Heptahydrate)、
ビタミン(Vitamins)では、D-ビオチン(D-Biotin)、P-アミノ安息香酸(P-Aminobenzoic Ac
id;PABA)、ビタミン(Vitamine)B12、
その他の成分(Other components)では、ハイポキサンチン(Hypoxanthine)、還元型L-グル
タチオン(L-Glutathione Reduced)、リノール酸(Linoliec acid)、プトレシン(Putrescin
e)+2HCL、チオクト酸(Thioctic Acid)、チミジン(Thymindine)であることを特徴とする間
葉系幹細胞の基本培養培地。 - 請求項2において、
ABM-M培地には、胎児、子牛、馬、または、人間の血清、(L-glutamine)、抗生剤及び抗真
菌剤の中から更に一つ以上を含む間葉系幹細胞の基本培養培地。 - 請求項2において、
ABM-M培地には、10-20%のウシ胎児血清と2-4mMのL-グルタミン(L-glutamine)を更に含む
間葉系幹細胞の基本培養培地。 - 請求項2において、
同一供給源である成分から選択される一つの成分は、
アミノ酸(Amino Acids)では、L-アルギニンモノヒドロクロライド(L-Arginine Monohydro
chloride)、L-アスパラギン酸(L-Aspartic acid)、L-シスチンジヒドロキシクロライド(L
-Cystine Dihydrochloride)、L-ヒスチジンモノヒドロクロライド(L-Histidine Monobydr
ochloride Monohydrate)であり、
無機塩(Inorganic Salts)では、塩化カルシウム二水和物(Calcium Chloride Dihydrate)
、硫酸鉄(II)7水和物(Ferrous Sulfate Heptahydrate)、硫酸マグネシウム無水物(Magne
sium Sulfate Anhydrous)、リン酸二水素ナトリウム無水物(Sodium Phosphate Dibasic A
nhydrous)、
ビタミン(Vitamins)では、ピリドキサル塩酸塩(Pyridoxal Hydrochloride)であることを
特徴とする間葉系幹細胞の基本培養培地。 - 請求項2において、
ABM-M培地は、CD166、CD105、CD90、CD44、CD29、CD73、HLA-ABC陽性表面マーカーを80%
以上発現するが、CD44、CD105、CD90、CD73とCD166陽性表面マーカーは、95%以上発現、
CD14、CD31、CD34、CD45、CD80とHLA-DR陰性表面マーカーを5%以下発現することを特徴
とする間葉系幹細胞の基本培養培地。 - 請求項2のABM-M(Advanced Basic Media-Mesenchymal stem cell)培地で、間葉系幹細胞
が培養された後に、ウシ胎児血清、デキサメタゾン(Dexamethasone)、β-グリセロリン酸
(β-Glycerophosphate)、アスコルビン酸(Ascorbic acid)を含む培地で、再度培養分化さ
れ、骨形成細胞に分化することを特徴とする骨欠損用細胞治療剤。 - 請求項2のABM-M(Advanced Basic Media-Mesenchymal stem cell)培地で、間葉系幹細胞
が培養された後に、デキサメタゾン(Dexamethasone)、アスコルビン酸(Ascorbic acid)と
ピルビン酸ナトリウム(Sodium pyruvate)、TGF-、BMP-2を含むCMEM 低グルコース(low gl
ucose)培地で、再度培養分され、軟骨細胞に分化することを特徴とする骨関節炎細胞治療
剤。 - 請求項2のABM-M(Advanced Basic Media-Mesenchymal stem cell)培地で、間葉系幹細胞
が培養された後に、ウシ胎児血清、デキサメタゾン(Dexamethasone)、インドメタシン(In
domethacin)、インスリン(Insulin)を含む培地で、再度培養分化され、脂肪細胞に分化す
ることを特徴とする脂肪組織形成用細胞治療剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2011-0087498 | 2011-08-31 | ||
KR1020110087498A KR101138091B1 (ko) | 2011-08-31 | 2011-08-31 | 중간엽 줄기세포 기본 배양 배지 조성방법, 중간엽 줄기세포 기본 배양 배지 및 이를 이용하여 배양분화된 세포치료제 |
PCT/KR2011/006582 WO2013032052A1 (ko) | 2011-08-31 | 2011-09-06 | 중간엽 줄기세포 기본 배양 배지 조성방법, 중간엽 줄기세포 기본 배양 배지 및 이를 이용하여 배양분화된 세포치료제 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014525262A true JP2014525262A (ja) | 2014-09-29 |
JP5872046B2 JP5872046B2 (ja) | 2016-03-01 |
Family
ID=46143924
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014528250A Expired - Fee Related JP5872046B2 (ja) | 2011-08-31 | 2011-09-06 | 間葉系幹細胞の基本培養培地の調製方法 |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9879226B2 (ja) |
EP (1) | EP2752484B1 (ja) |
JP (1) | JP5872046B2 (ja) |
KR (1) | KR101138091B1 (ja) |
CN (1) | CN103857789B (ja) |
CY (1) | CY1119924T1 (ja) |
DK (1) | DK2752484T3 (ja) |
ES (1) | ES2660898T3 (ja) |
HR (1) | HRP20180266T1 (ja) |
HU (1) | HUE036910T2 (ja) |
LT (1) | LT2752484T (ja) |
NO (1) | NO2752484T3 (ja) |
PL (1) | PL2752484T3 (ja) |
PT (1) | PT2752484T (ja) |
SI (1) | SI2752484T1 (ja) |
TR (1) | TR201802355T4 (ja) |
WO (1) | WO2013032052A1 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018515211A (ja) * | 2015-05-08 | 2018-06-14 | ウニベルシテ カソリーク デ ルーベン | 間葉系幹細胞を含む組成物およびその使用 |
JP2021526125A (ja) * | 2018-04-12 | 2021-09-30 | セルリサーチ コーポレイション プライベート リミテッド | 間葉系幹細胞の創傷治癒特性を誘導するまたは改善する方法 |
WO2022075294A1 (ja) * | 2020-10-07 | 2022-04-14 | 富士フイルム株式会社 | 関節治療用細胞製剤の製造方法、関節治療用細胞製剤および間葉系幹細胞の培養方法 |
Families Citing this family (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2014262590B2 (en) | 2013-05-10 | 2018-05-10 | Children's Medical Center Corporation | Wound healing and tissue engineering |
KR101548956B1 (ko) | 2013-09-05 | 2015-09-01 | 메디포스트(주) | 세포 크기에 따른 간엽줄기세포 배양방법 |
WO2016027850A1 (ja) * | 2014-08-21 | 2016-02-25 | 味の素株式会社 | 間葉系幹細胞用培地 |
CN104877961A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-09-02 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种无血清的人羊膜间充质干细胞培养基及其制备方法 |
CN104877962A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-09-02 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种无血清的脂肪干细胞培养基及其制备方法 |
CN105039247B (zh) * | 2015-07-13 | 2018-07-20 | 暨南大学 | 一种用于诱导干细胞向成软骨分化的制剂及制备方法与应用 |
US11111480B2 (en) | 2016-04-29 | 2021-09-07 | Hope Biosctences, Llc | Culture media for multipotent stem cells |
US10894947B1 (en) | 2016-04-29 | 2021-01-19 | Hope Biosciences, Llc | Method for generating protein rich conditioned medium |
US10988731B2 (en) | 2016-04-29 | 2021-04-27 | Hope Biosciences, Llc | Formulation for storage, transportation, and delivery of protein rich conditioned medium |
US10959425B2 (en) | 2016-04-29 | 2021-03-30 | Hope Biosciences, Llc | Method of banking stem cells |
WO2018021805A1 (ko) * | 2016-07-25 | 2018-02-01 | 고려대학교 산학협력단 | 자궁 유래 성체줄기세포 분리 및 제조 방법 |
CN106520687B (zh) * | 2016-10-12 | 2019-12-27 | 广东艾时代生物科技有限责任公司 | 一种诱导多能干细胞向间充质干细胞分化的方法 |
CN106367387A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-02-01 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 培养基及其应用 |
CN106635975A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-05-10 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 培养基及其应用 |
USD848022S1 (en) | 2017-07-14 | 2019-05-07 | Hope Biosciences, Llc | Container for storing biological material |
USD875967S1 (en) | 2017-07-14 | 2020-02-18 | Hope Biosciences, Llc | Container for storing biological material |
CN108456657B (zh) * | 2018-03-31 | 2020-08-18 | 天津博雅秀岩生物技术有限公司 | 犬脐带间充质干细胞及其制备方法和冻存方法 |
US20210301252A9 (en) * | 2018-04-12 | 2021-09-30 | Cellresearch Corporation Pte. Ltd. | Method of inducing or improving wound healing properties of mesenchymal stem cells |
CN108795853B (zh) * | 2018-05-28 | 2021-08-24 | 天津博雅秀岩生物技术有限公司 | 制备犬胎膜间充质干细胞的方法和犬胎膜间充质干细胞 |
CN108728408B (zh) * | 2018-05-28 | 2021-08-24 | 天津博雅秀岩生物技术有限公司 | 犬胎膜间充质干细胞及制备方法和使用的培养基 |
CA3103570A1 (en) * | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Abraham J And Phyllis Katz Cord Blood Foundation | Isolation of mesenchymal stromal cells from umbilical cord blood |
CN108865987A (zh) * | 2018-07-20 | 2018-11-23 | 深圳市第二人民医院 | 一种人关节液间充质干细胞用的培养基及其制备方法 |
CN109432130A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-03-08 | 中科广聚(北京)生物医学技术中心有限公司 | 间充质干细胞外泌体在制备预防和治疗放射性肺损伤的药物中的应用 |
CN110117527A (zh) * | 2019-05-15 | 2019-08-13 | 刘宝全 | 一种干细胞代谢废物的强化排出方法 |
CN110295140A (zh) * | 2019-06-04 | 2019-10-01 | 河北贝特赛奥生物科技有限公司 | 一种无血清培养骨髓间充质干细胞的方法 |
CN110373384A (zh) * | 2019-07-24 | 2019-10-25 | 安徽科门生物科技有限公司 | 一种无血清脂肪干细胞培养基及脂肪干细胞的培养方法 |
JP7348892B2 (ja) * | 2019-12-30 | 2023-09-21 | 佛教慈濟醫療財團法人 | 眼疾患を予防または治療する組成物及び方法 |
CN113201492A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-08-03 | 浙江三誉生物科技有限公司 | 一种骨髓间充质干细胞的培养基及培养方法 |
CN113999810B (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-26 | 北京赛尔富森生物科技有限公司 | 一种mrc-5细胞复苏培养液以及复苏方法 |
CN115372233B (zh) * | 2022-10-25 | 2023-03-24 | 华夏源(上海)生命科技有限公司 | 一种脂肪干细胞细胞周期的检测方法 |
CN118028229B (zh) * | 2024-04-11 | 2024-06-21 | 成都云测医学生物技术有限公司 | 一种从神经类器官获得间充质干细胞的制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007123363A1 (en) * | 2006-04-24 | 2007-11-01 | Corestem Co., Ltd. | Culture media and methods for culturing mesenchymal stem cell |
JP2009527221A (ja) * | 2005-11-16 | 2009-07-30 | アールエヌエル バイオ カンパニー リミテッド | ヒト脂肪組織由来の多能性幹細胞及びそれを含む細胞治療剤 |
JP2009540826A (ja) * | 2006-06-20 | 2009-11-26 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞増幅のための無血清培地およびその使用 |
KR101037002B1 (ko) * | 2008-09-30 | 2011-05-25 | 세원셀론텍(주) | 연골세포 조기배양을 위한 연골세포 특이적 배양방법 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5573937A (en) * | 1989-12-07 | 1996-11-12 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Serum free culture medium |
JP3638614B2 (ja) * | 1996-07-25 | 2005-04-13 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞培地組成および培養方法 |
WO2007069813A1 (en) * | 2005-12-16 | 2007-06-21 | Modern Cell & Tissue Technologies Inc. | Methods for culturing mesenchymal stem cell and compositions comprising mesenchymal stem cell for reparing skin defects |
KR101037008B1 (ko) * | 2007-08-23 | 2011-05-25 | 주식회사 엘지화학 | 환형올레핀, 아크릴레이트 및 불포화 유기산을 포함하는공중합체, 및 이의 제조방법 |
KR101078419B1 (ko) * | 2009-03-20 | 2011-10-31 | 주식회사 스템메디언스 | 양수 내 태아 유래 중간엽줄기세포를 이용한 피부 상태개선용 조성물 |
CN102021143B (zh) * | 2010-11-24 | 2012-07-25 | 浙江大学 | 一种提高间充质干细胞迁移能力的预处理方法 |
-
2011
- 2011-08-31 KR KR1020110087498A patent/KR101138091B1/ko active IP Right Grant
- 2011-09-06 WO PCT/KR2011/006582 patent/WO2013032052A1/ko active Application Filing
- 2011-09-06 PL PL11871607T patent/PL2752484T3/pl unknown
- 2011-09-06 DK DK11871607.5T patent/DK2752484T3/en active
- 2011-09-06 CN CN201180073169.4A patent/CN103857789B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-09-06 US US14/241,393 patent/US9879226B2/en active Active
- 2011-09-06 TR TR2018/02355T patent/TR201802355T4/tr unknown
- 2011-09-06 ES ES11871607.5T patent/ES2660898T3/es active Active
- 2011-09-06 NO NO11871607A patent/NO2752484T3/no unknown
- 2011-09-06 EP EP11871607.5A patent/EP2752484B1/en active Active
- 2011-09-06 SI SI201131429T patent/SI2752484T1/en unknown
- 2011-09-06 HU HUE11871607A patent/HUE036910T2/hu unknown
- 2011-09-06 PT PT118716075T patent/PT2752484T/pt unknown
- 2011-09-06 LT LTEP11871607.5T patent/LT2752484T/lt unknown
- 2011-09-06 JP JP2014528250A patent/JP5872046B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2018
- 2018-02-13 HR HRP20180266TT patent/HRP20180266T1/hr unknown
- 2018-02-21 CY CY20181100198T patent/CY1119924T1/el unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009527221A (ja) * | 2005-11-16 | 2009-07-30 | アールエヌエル バイオ カンパニー リミテッド | ヒト脂肪組織由来の多能性幹細胞及びそれを含む細胞治療剤 |
WO2007123363A1 (en) * | 2006-04-24 | 2007-11-01 | Corestem Co., Ltd. | Culture media and methods for culturing mesenchymal stem cell |
JP2009540826A (ja) * | 2006-06-20 | 2009-11-26 | ジェンザイム・コーポレーション | 軟骨細胞増幅のための無血清培地およびその使用 |
KR101037002B1 (ko) * | 2008-09-30 | 2011-05-25 | 세원셀론텍(주) | 연골세포 조기배양을 위한 연골세포 특이적 배양방법 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018515211A (ja) * | 2015-05-08 | 2018-06-14 | ウニベルシテ カソリーク デ ルーベン | 間葉系幹細胞を含む組成物およびその使用 |
JP2021526125A (ja) * | 2018-04-12 | 2021-09-30 | セルリサーチ コーポレイション プライベート リミテッド | 間葉系幹細胞の創傷治癒特性を誘導するまたは改善する方法 |
JP7541730B2 (ja) | 2018-04-12 | 2024-08-29 | セルリサーチ コーポレイション プライベート リミテッド | 間葉系幹細胞の創傷治癒特性を誘導するまたは改善する方法 |
WO2022075294A1 (ja) * | 2020-10-07 | 2022-04-14 | 富士フイルム株式会社 | 関節治療用細胞製剤の製造方法、関節治療用細胞製剤および間葉系幹細胞の培養方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9879226B2 (en) | 2018-01-30 |
HRP20180266T1 (hr) | 2018-04-06 |
DK2752484T3 (en) | 2018-03-05 |
PL2752484T3 (pl) | 2018-06-29 |
PT2752484T (pt) | 2018-03-01 |
JP5872046B2 (ja) | 2016-03-01 |
US20140370600A1 (en) | 2014-12-18 |
EP2752484A1 (en) | 2014-07-09 |
EP2752484B1 (en) | 2018-01-10 |
LT2752484T (lt) | 2018-03-12 |
EP2752484A4 (en) | 2015-04-15 |
CN103857789B (zh) | 2016-08-31 |
NO2752484T3 (ja) | 2018-06-09 |
CN103857789A (zh) | 2014-06-11 |
HUE036910T2 (hu) | 2018-08-28 |
SI2752484T1 (en) | 2018-04-30 |
TR201802355T4 (tr) | 2018-03-21 |
CY1119924T1 (el) | 2018-12-12 |
ES2660898T3 (es) | 2018-03-26 |
WO2013032052A1 (ko) | 2013-03-07 |
KR101138091B1 (ko) | 2012-04-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5872046B2 (ja) | 間葉系幹細胞の基本培養培地の調製方法 | |
CN103060264B (zh) | 一种干细胞培养基及其应用和干细胞培养方法 | |
US10184112B2 (en) | Culture medium additive for use in serum-free culturing of animal cell, kit and use thereof | |
JP4749331B2 (ja) | 脂肪由来前駆細胞の細胞分化 | |
JP4532493B2 (ja) | 細胞培養培地 | |
Mimuma et al. | Growth factor-defined culture medium for human mesenchymal stem cells | |
Lambrechts et al. | Large-scale progenitor cell expansion for multiple donors in a monitored hollow fibre bioreactor | |
EP3385372B1 (en) | Method for manufacturing mesenchymal cell line derived from vertebrate animal adipose tissue | |
KR20130112028A (ko) | 무혈청 합성 세포배양 배지 | |
US20100015710A1 (en) | Methods and Compositions for Isolating, Maintaining and Serially Expanding Human Mesenchymal Stem Cells | |
WO2021185198A1 (zh) | 一种无血清、无异源成分的间充质干细胞培养基及其应用 | |
AU2011277156A1 (en) | Culture medium composition for culturing amnion-derived mesenchymal stem cell, and method for culturing amnion-derived mesenchymal stem cell by using same | |
CN111440764B (zh) | 间充质干细胞的无血清培养基及间充质干细胞的临床级规模化培养方法 | |
CA2825070A1 (en) | Method for culturing human pluripotent stem cells | |
US20230117670A1 (en) | Bioactive substance composition, serum-free medium comprising the composition, and uses thereof | |
TW200927927A (en) | Stem cell medium | |
CN115094031A (zh) | 间充质干细胞的快速诱导分化方法、试剂盒及其应用 | |
AU756151B2 (en) | Immortalised cell lines derived from normal human skin tissues | |
Deng et al. | Combination of retinoic acid, dimethyl sulfoxide and 5-azacytidine promotes cardiac differentiation of human fetal liver-derived mesenchymal stem cells | |
WO2023065384A1 (zh) | 一种人间充质干细胞培养基 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150519 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150819 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20151222 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160112 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5872046 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |