JP2014515763A - 抗α４β７抗体のための製剤 - Google Patents

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Abstract

抗α４β７抗体、抗酸化剤又はキレート剤、及び少なくとも１つの遊離のアミノ酸の混合物を含む抗体製剤が記載される。開示される製剤は改善された安定性、低下した凝集体形成又はその双方を有し得る。本発明はさらに、経過観察し易い、治療上有効量の抗α４β７抗体を生体内で生じるこれら抗体製剤の安全な投与計画を提供する。

Description

関連出願
本出願は、２０１１年１０月６日に出願された米国仮特許出願６１／５４４４，０５４及び２０１１年５月２日に出願された米国仮特許出願６１／４８１，５２２に対して優先権を主張する。前述の出願の内容全体は参照によって本明細書に組み入れられる。
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出されている、その全体が参照によって本明細書に組み入れられる配列表を含有する。２０１２年４月３０日に創られた前記ＡＳＣＩＩコピーは、９２５９６６０３.ｔｘｔと名付けられ、１６，９８６バイトのサイズである。
バイオテクノロジーの進歩によって組換えＤＮＡを用いて医薬応用のための種々のタンパク質を製造することが可能になっている。タンパク質は、従来の無機及び有機の薬剤よりも大きく、複雑なので（すなわち、複雑な三次元構造に加えて複数の官能基を持つ）、そのようなタンパク質の製剤化は特別な問題を提起する。タンパク質の生物活性を維持するには、製剤はタンパク質のアミノ酸の少なくともコア配列の構造的な整合性を保存しなければならない一方で同時に、タンパク質の複数の官能基が分解するのを保護しなければならない。タンパク質は安定性の欠如に悩まされ得るし、モノクローナル抗体及びポリクローナルの抗体は特に相対的に不安定であり得る（たとえば、Wang, et al., J. Pharm Sci. 96:1-26 (2007)を参照）。多数の製剤化の選択肢が利用可能であり、１つのアプローチ又はシステムがタンパク質すべてに好適であるわけではない。考慮されるべき幾つかの因子が報告されている（たとえば、 Wang et al.を参照）。
多数の特徴がタンパク質の安定性に影響し得る。実際、精製した抗体の場合でさえ、抗体構造は不均質であり得、それがさらにそのような系の製剤化を複雑にする。さらに、抗体製剤に含まれる賦形剤は好ましくは、潜在的な免疫応答をできるだけ抑える。
抗体の場合、構造的な整合性の保存は一層さらに重要である。タンパク質の分解経路には、化学的不安定性（すなわち、結合形成又は新しい化学実体を生じる切断によるタンパク質の修飾が関与する過程）又は物理的不安定性（すなわち、タンパク質の高次構造における変化）が関与し得る。化学的不安定性は、たとえば、脱アミド化、異性化、加水分解、酸化、断片化、グリカンβ排除又はジスルフィド変換において現れる。物理的不安定性は、たとえば、変性、凝集、沈殿又は吸収の結果生じる。４つの最も一般的なタンパク質分解経路は、タンパク質の断片化、凝集、脱アミド化及び酸化である。治療用タンパク質の化学的な又は物理的な不安定性の結果には、有効な投与量の低下、たとえば、刺激又は免疫反応性による治療の安全性の低下、及び短い保存期間による頻繁な製造が挙げられる。
幾つかの出版物は炎症性大腸疾患を治療する種々の方法を一般に開示しており、炎症性大腸疾患を治療するように設計された剤の投与のための投薬スキームを提供している。たとえば、ＷＯ９６／２４６７３は、粘膜性血管アドレシン及びＭＡｄＣＡＭを発現する細胞に白血球が結合した結果としての消化管への白血球の動員に関連する疾患の治療を開示している。ＵＳ２００５／００９５２３８は、粘膜組織の白血球浸潤に関連する疾患を治療する方法及びα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒトの又はヒト化された免疫グロブリン又は抗原結合断片の有効量のヒトへの投与を開示している。ＵＳ２００５／００９５２３８はさらに、種々の用量（たとえば、体重ｋｇ当たり０．１５、約０．５、約１．０、約１．５又は約２．０ｍｇの免疫グロブリン又は断片）及び種々の投与間隔（７、１４、２１、２８及び３０日間）を記載している。しかしながら、前述の特許及び出版物は抗α４β７抗体の特定の製剤又は本明細書で記載され、請求される特定の用量及び投与計画を開示していない。重要なことに、前述の特許は、本明細書で記載され、請求される治療方法（臨床試験データによって支持される）を提供する製剤、用量及び投与計画を開示していない。
本発明の抗体製剤は、ＭＡｄＣＡＭを発現している細胞に結合する白血球を阻害するのに有用であり得るので、患者における炎症性大腸疾患の治療に役立つ。従って、これらの化合物の好適な投与量及び投与計画を発見し、安定して好都合な形態にて長い間にわたって抗体製剤の安定した治療上有効な血中レベルを生じる製剤、好ましくは皮下製剤を開発する緊急のニーズがある。
本発明は、その不安定性の故に脱アミド化、酸化、異性化及び／又は凝集に敏感になる抗α４β７製剤を製剤化するのに有用な賦形剤としての抗酸化剤又はキレート剤、及び少なくとも１つのアミノ酸の特定に関する。製剤は、安定性を改善し、凝集体形成を低減し、その中での抗体の分解を遅らせる。
従って、第１の態様では、本発明は、抗α４β７抗体、抗酸化剤又はキレート剤、及び少なくとも１つの遊離のアミノ酸の混合物を含む安定な液体医薬製剤に関する。
一部の実施形態では、安定な液体医薬製剤は、室温で１２ヵ月後、約１．０％未満の凝集体形成を有する。安定な液体医薬製剤は、室温で１２ヵ月後、約０．２％未満の凝集体形成を有することができる。
一部の実施形態では、抗酸化剤又はキレート剤はクエン酸塩である。一部の実施形態では、キレート剤はＥＤＴＡである。
一部の実施形態では、製剤の遊離のアミノ酸はヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸又はそれらの組み合わせである。製剤は、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭの間の遊離のアミノ酸を含むことができる。製剤は、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭの間の遊離のアミノ酸を含むことができる。遊離のアミノ酸と抗体のモル比の比率は少なくとも２５０：１であることができる。
製剤はまた界面活性剤を含有することもできる。界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリキサマー又はそれらの組み合わせであることができる。
一部の実施形態では、抗酸化剤と界面活性剤のモル比は約３：１〜約１５６：１である。
製剤は約６．３〜約７．０の間のｐＨを有することができる。製剤のｐＨは約６．５〜約６．８の間であることができる。製剤は約６．１〜約７．０の間又は約６．２〜６．８の間のｐＨを有することができる。
一部の実施形態では、安定な液体医薬製剤は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体を含有する。製剤は少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体を含有することができる。製剤は、約１５０〜約１８０ｍｇ／ｍＬの抗体、又は約１６５ｍｇ／ｍＬの抗体を含有することができる。
別の態様では、本発明は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、緩衝化剤及び少なくとも約１０ｍＭのクエン酸塩を含む安定な液体医薬製剤に関する。緩衝化剤はヒスチジン緩衝液であることができる。
別の態様では、本発明は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ〜約１８０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、緩衝剤及び少なくとも約５ｍＭのクエン酸塩を含む安定な液体医薬製剤に関する。緩衝化剤はヒスチジン緩衝液であることができる。
別の態様では、本発明は、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体及び少なくとも約１０ｍＭのクエン酸塩を含む安定な液体医薬製剤に関する。製剤はさらにポリソルベート８０を含有することができる。
別の態様では、本発明は、約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体及び少なくとも約５ｍＭのクエン酸塩を含む安定な液体医薬製剤に関する。製剤はさらにポリソルベート８０を含有することができる。
別の態様では、本発明は、抗α４β７抗体とクエン酸塩とヒスチジンとアルギニンとポリソルベート８０の混合物を含む安定な液体医薬製剤に関する。製剤は、たとえば、バイアル、カートリッジ、シリンジ又は自動注入器のような容器に存在することができる。
本発明の安定な液体医薬製剤における抗α４β７抗体は、ベドリズマブであることができる。本発明の製剤は、皮下投与、静脈内投与又は筋肉内投与のためであり得る。
一部の態様では、製剤は抗α４β７抗体の免疫原性をできるだけ抑えることができる。
別の態様では、本発明は、それを必要とする患者に本明細書で記載される安定な液体医薬製剤を投与することを含む炎症性大腸疾患を投与する方法に関する。投与することは、皮下投与することであり得る。投与することは、自己投与することであり得る。
さらに別の態様では、本発明は、容器と、本明細書で記載される安定な液体医薬製剤と、使用のための指示書を含む製造物品に関する。
態様の１つでは、本発明は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法に関するものであり、該方法は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：（ａ）初回投与、たとえば、誘導相治療計画における、２日ごとの皮下注射として１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の６回投与；（ｂ）その後、６週目にて、たとえば、維持相治療計画における、必要に応じて２週間ごと又は４週間ごとに皮下注射として１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の７回目及びその後の用量：
に従って患者に投与され；該投与計画が炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
態様の１つでは、本発明は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法に関するものであり、該方法は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、静脈内投与の誘導相と皮下投与の維持相を含む以下の投与計画：（ａ）静脈内点滴としてのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片３００ｍｇの初回の静脈内投与、（ｂ）その後、初回投与の約２週間後の静脈内点滴としてのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片３００ｍｇの第２の静脈内後続投与、（ｃ）その後、６週目で開始する、必要に応じて１週ごと、２週ごと、３週ごと又は４週ごとの皮下注射としてのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片１６５ｍｇの第３の及びその後の投与：に従って患者に投与し、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
別の態様では、本発明は、炎症性大腸疾患の治療療法についての投与計画に関するものであり、該投与計画は、炎症性大腸疾患で苦しむ患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約９〜約１３μｇ／ｍＬの免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均定常状態トラフ血清濃度を維持する皮下の又は筋肉内の投与計画に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
別の態様では、本発明は、炎症性大腸疾患の治療療法についての投与計画に関するものであり、該投与計画は、炎症性大腸疾患で苦しむ患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約３５〜約４０μｇ／ｍＬのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均定常状態トラフ血清濃度を維持する皮下の又は筋肉内の投与計画に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
別の態様では、本発明は、炎症性大腸疾患で苦しむ患者を治療する方法に関するものであり、該方法は、炎症性大腸疾患で苦しむ患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：（ａ）約６週間の初回投与までに約２０〜３０μｇ／ｍＬのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均トラフ血清濃度を達成するのに十分なヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の複数の誘導相の用量；（ｂ）その後、必要に応じて約９〜約１３μｇ／ｍＬ又は約３５〜４０μｇ／ｍＬの免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均定常状態トラフ血清濃度を維持するためのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の複数の維持相の用量：に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
一部の態様では、製剤、治療方法、用量及び／又は投与計画は、患者が抗α４β７抗体に対して反応性の抗体を発生させる最小限の可能性を保証する。
患者は、免疫調節剤、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも１つによる治療との適切な応答を欠いていた、それに対する応答を欠如していた、又はそれに対して認容性ではなかった可能性がある。
炎症性大腸疾患は、クローン病又は潰瘍性大腸炎であり得る。炎症性大腸疾患は、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎であり得る。
投与計画は、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎に苦しむ患者にて結果的に粘膜治癒を生じる。
患者は、炎症性大腸疾患のために少なくとも１つのコルチコステロイドで以前治療を受けていた可能性がある。患者は同時に炎症性大腸疾患のための少なくとも１つのコルチコステロイドによる治療を受けてもよい。投与計画は、患者によるコルチコステロイドの使用の低減、排除又は低減及び排除を結果的に生じる。
一部の態様では、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１．４ｍｇ／ｍＬの間の濃度での最終投与形態で投与される。ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約１．２ｍｇ／ｍＬの最終投与形態で投与することができる。
一部の態様では、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片は、約７０〜約２５０ｍｇの間、約９０〜約２００ｍｇの間、約１５０〜約１８０ｍｇの間、又は少なくとも１６０ｍｇの抗α４β７抗体の量を有する最終投与形態で投与される。
一部の態様では、投与計画は、前記治療を受けている患者の脳脊髄液におけるＣＤ４とＣＤ８の比を変えることはない。
患者は６５歳以上のヒトであり、投与計画の調整を必要としない。
一部の態様では、抗α４β７抗体製剤による治療方法、用量又は投与計画は抗α４β７抗体の免疫原性をできるだけ抑えることができる。
ヒト化抗α４β７免疫グロブリンの重鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号１）及び重鎖の推定アミノ酸配列（配列番号２）を示す図である。ヌクレオチド配列は、クローニング部位（小文字）、コザック配列（大文字、配列番号１のヌクレオチド１８〜２３）、及び重鎖の５’末端におけるリーダー配列（小文字、配列番号１のヌクレオチド２４〜８６）を含有する。ヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームは、配列番号１のヌクレオチド２４〜１４３３である。 同上。 本明細書でベドリズマブと呼ばれるヒト化免疫グロブリンの軽鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号３）及び軽鎖の推定アミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。ヌクレオチド配列は、クローニング部位（小文字）、コザック配列（大文字、配列番号３のヌクレオチド１８〜２３）、及び重鎖の５’末端におけるリーダー配列（小文字、配列番号３のヌクレオチド２４〜８０）を含有する。ヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームは、配列番号３のヌクレオチド２４〜７３７である。 （Ａ）本明細書でベドリズマブと呼ばれるヒト化免疫グロブリンの成熟ヒト化軽鎖（配列番号４のアミノ酸２０〜２３８）と（Ｂ）本明細書でＬＤＰ−０２と呼ばれるヒト化免疫グロブリンの成熟ヒト化軽鎖（配列番号５）（ＬＤＰ−０２に関してはWO 98/06248 and Feagan et al., N. Eng. J. Med. 352:2499-2507 (2005)を参照）のアミノ酸配列の配列比較を示す図である。Ｆｅａｇａｎらは、ＬＤＰ−０２の臨床試験を記載しているが、論文中では彼らはＬＤＰ−０２をＭＬＮ０２と呼ぶ。配列比較は、ベドリズマブとＬＤＰ−０２の軽鎖のアミノ酸配列が成熟軽鎖の１１４位と１１５位で異なることを示す。 （Ａ）ヒトの一般的なκ軽鎖定常領域（配列番号６）と（Ｂ）マウスの一般的なκ軽鎖定常領域（配列番号７）のアミノ酸配列の配列比較を示す図である。アミノ酸残基Ｔｈｒ及びＶａｌ（成熟ベドリズマブ軽鎖の１１４位及び１１５位に存在する）（配列番号４のアミノ酸１３３と１３４）は、ヒトκ軽鎖の定常領域に存在するが、アミノ酸残基Ａｌａ及びＡｓｐ（成熟ＬＤＰ−０２軽鎖の１１４位及び１１５位に存在する）（配列番号５）は、マウスκ軽鎖の定常領域に存在する。 ベクターｐＬＫＴＯＫ３８Ｄ（ｐＴＯＫ３８ＭＬＮ０２−ＴＶとも呼ばれる）のマップを示す図であり、それは、ＭＬＮ０２のヒト化重鎖及びヒト化軽鎖をコードし、ＣＨＯ細胞におけるベドリズマブの産生に好適である（ｐＬＫＴＯＫ３８を開示している米国特許出願公開番号２００４／００３３５６１Ａ１を参照。ｐＬＫＴＯＫ３８Ｄは、マップで示した制限部位が軽鎖可変領域をコードする配列に隣接するｐＬＫＴＯＫ３８の変異体である）。 タンパク質濃度、ｐＨ及び界面活性剤：タンパク質のモル比への変化の結果としての形成（１日当たりの％）のＳＥＣ凝集体の傾きを示す。ｐＨ６．０〜６．５の範囲では、凝集体の形成は、０．７〜１．５のモル比の範囲でのポリソルベート８０：タンパク質を伴う製剤に類似する。 １．５を超えるポリソルベート８０：タンパク質のモル比では、凝集体形成率はｐＨの上昇につれて増大することを示すグラフである。 凝集体の形成に対する賦形剤の効果を示すグラフである。２５ｍＭのクエン酸塩、５ｍＭのクエン酸塩、５ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのシステイン、又は５ｍＭのシステインを製剤に加えた。３つの賦形剤はすべて凝集体の形成を低減した。 製剤における２５ｍＭのクエン酸塩の存在による凝集体形成の低減、及び高いタンパク質濃度と高い凝集体形成率の間の相関を示すグラフである。 ４０℃におけるＣＥＸ種の分解の結果を示すグラフである。データはＣＥＸ分解に対するｐＨの影響を示す。 製剤のｐＨに対する温度の影響を示すグラフである。ヒスチジンを含有する製剤のｐＨは温度とともに低下するが、クエン酸製剤のｐＨは温度に影響されない。 １２ヵ月の期間にわたるＣＥＸ主要アイソフォームの比率を示すグラフである。ｐＨ６．０〜６．２を有する製剤はｐＨ６．３〜６．４を有する製剤よりも約１〜２％少ない主要アイソフォームを示した。 粘度が主としてタンパク質の濃度及びｐＨによって影響を受けることを明らかにする一揃いのグラフである。スクロース、ヒスチジン及びアルギニンの添加は製剤の粘度に対して軽微な影響を有することを示す。 （Ａ）ヒトの成熟ＧＭ６０７’ＣＬ抗体κ軽鎖可変領域と（Ｂ）ヒト２１／２８’ＣＬ重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す図である。 同上。 事前に充填されたシリンジにおけるタンパク質製品の構成成分を示す図である。 調べた種々のシリンジの注入力に対する（Ａ）タンパク質濃度及び（Ｂ）粘度の影響を示す図である。 （Ａ）タンパク質濃度と針サイズの関数としての当初の滑り力を示す図である。（Ｂ）各シリンジメーカーと針サイズについての当初の滑り力を示す図である。 ベドリズマブの吸収特性を示す図である。グラフは筋肉内投与と皮下投与の濃度が一般に重複することを示す。投与のこれらの経路の吸収特性に明らかな肉眼での差異はない。
本発明は、抗α４β７抗体を含む医薬製剤に関する。医薬製剤は、抗酸化剤又はキレート剤（たとえば、クエン酸塩）、抗α４β７抗体及び遊離のアミノ酸を含む混合物であってもよい。医薬製剤は、固体形態又は液体形態であり得る。
定義
用語「医薬製剤」は、有効であるべき抗体の生物活性を可能にするような形態で抗α４β７抗体を含有し、製剤が投与される対象に対して受け入れがたいほど毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。
「安定な」製剤は、保存の際、その中の抗体がその物理的な安定性及び／又はその化学的な安定性及び／又はその生物活性を実質的に保持するものである。態様の１つでは、製剤は、保存の際、その生物活性と同様にその物理的な安定性及び化学的な安定性を実質的に保持する。保存期間は一般に製剤の意図される有効期限に基づいて選択される。タンパク質の安定性を測定する種々の分析法が当該技術で利用可能であり、たとえば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）にて概説されている。選択した温度にて選択した期間、安定性を測定することができる。たとえば、液体製剤は４０℃にて少なくとも約３日間、５日間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、又は６週間、安定である。別の態様では、凍結乾燥した製剤は４０℃で少なくとも約２〜４週間、少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１２ヵ月間、又は少なくとも約１８ヵ月間、安定である。液体の及び／又は凍結乾燥した製剤は約５℃及び／又は２５℃にて少なくとも約１ヵ月間、少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１２ヵ月間、少なくとも約１８ヵ月間、少なくとも約２４ヵ月間、少なくとも約３０ヵ月間、又は少なくとも約３６ヵ月間、安定であり、及び／又は−２０℃及び／又は―７０℃にて少なくとも約１ヵ月間、少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１２ヵ月間、少なくとも約１８ヵ月間、少なくとも約２４ヵ月間、少なくとも約３０ヵ月間、少なくとも約３６ヵ月間、少なくとも約４２ヵ月間、又は少なくとも約４８ヵ月間、安定である。さらに、一部の実施形態では、液体製剤は、凍結（たとえば、−８０℃への）及び融解の後、たとえば、１、２又は３回の凍結及び融解の後、安定であり得る。
液体製剤の安定性は、二量体、多量体及び／又は凝集体の形成の評価（たとえば、サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）を用いて、マトリクス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）、分析用超遠心、光散乱（光子）相関分光分析法、動的光散乱（ＤＬＳ）法、静的光散乱法、多角レーザー光散乱法（ＭＡＬＬＳ）、フローベース顕微鏡画像化法、電子インピーダンス（コルター）計数法、光不明瞭化法又は他の液体粒子計数方式、濁度を測定することによる及び／又は視覚検査による）；カチオン交換クロマトグラフィ（ＣＥＸ）、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、たとえば、キャピラリ―法（ｃＩＥＦ）又はキャピラリ―ゾーン電気泳動を用いて電荷の非均質性を評価すること；アミノ末端又はカルボキシ末端の配列解析；質量分光解析；断片化した、無傷の及び多量体（たとえば、二量体、三量体等）の抗体を比較するためのＳＤＳ−ＰＡＧＥ又はＳＥＣ解析；ペプチドマップ（たとえば、トリプシン又はＬＹＳ-Ｃ）解析；抗体の生物活性又は抗原結合機能を評価すること；等を含む種々の異なった方法にて定性的に及び／又は定量的に評価することができる。固体状態の製剤の安定性もまた、たとえば、Ｘ線粉末回析（ＸＲＰＤ）による結晶構造の同定；フーリエ変換赤外線分光分析法（ＦＴＩＲ）を用いて固体状態における抗体の構造を評価すること；及び示差走査熱量分析（ＤＳＣ）法を用いて凍結乾燥固体における熱転移（融解、ガラス転移等）を測定することのような直接試験；並びにたとえば、加水分解を介した化学的不安定性の可能性を外挿するためにＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ試験によって水分含量を測定することのような間接試験を含む種々の異なった方法にて定性的に及び／又は定量的に評価することもできる。不安定性には、凝集（たとえば、非共有の可溶性凝集、共有の可溶性凝集（たとえば、ジスルフィド結合の再構成／ごちゃ混ぜ）、不溶性凝集）、脱アミド化（たとえば、Ａｓｎの脱アミド化）、酸化（たとえば、Ｍｅｔの酸化）、異性化（たとえば、Ａｓｐの異性化）、切抜き／加水分解／断片化（たとえば、ヒンジ領域、断片化）、スクシンイミドの形成、Ｎ−末端の伸長、Ｃ−末端のプロセッシング、グリコシル化の差異等の任意の１以上が関与する。
「脱アミド化された」モノクローナル抗体は、１以上のアスパラギン又はそのグルタミン残基がアスパラギン酸又はイソアスパラギン酸に誘導体化されているものである。
「脱アミド化に感受性」である抗体は、脱アミド化しやすいことが分っている１以上の残基を含むものである。
「酸化に感受性」である抗体は、酸化しやすいことが分っている１以上の残基を含むものである。
「凝集に感受性」である抗体は、特に凍結、加熱、乾燥、再構成及び/又は撹拌の際、他の抗体分子と凝集することが分っているものである。
「断片化に感受性」である抗体は、たとえば、そのヒンジ領域にて２以上の断片に切断されることが分っているものである。
「脱アミド化、酸化、凝集又は断片化を低減する」ことによって、異なるｐＨ又は異なる緩衝液にて製剤化されたモノクローナル抗体に比べて脱アミド化、凝集又は断片化を妨げる又はその量を減らす（たとえば、８０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％又は１０％に）ことを意味するように意図される。
「凝集体」、「ＳＥＣ凝集体」又は「可溶性凝集体」は、共有結合、イオン結合又は疎水性の相互作用を介して一緒に会合してさらに大きなタンパク質体を形成する１を超えて１０以下の抗体タンパク質及び／又は断片である。
「不溶性凝集体」又は「粒子」は、共有結合、イオン結合又は疎水性の相互作用を介して一緒に会合してさらに大きなタンパク質体を形成する１０を超える抗体タンパク質及び／又は断片である。
本明細書で使用されるとき、モノクローナル抗体の「生物活性」は、抗原に結合し、試験管内又は生体内で測定することができる測定可能な生物反応を生じる抗体の能力を指す。そのような活性は拮抗性又は作動性であってもよい。
細胞表面の分子、「α４β７インテグリン」又は「α４β７」は、α４鎖（ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ４）及びβ７（ＩＴＧＢ７）のヘテロダイマーである。各鎖は代替のインテグリン鎖とヘテロダイマーを形成し、たとえば、α４β１又はαＥβ７を形成することができる。ヒトのα４とβ７の遺伝子（GenBank (National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD）、それぞれＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＭ＿０００８８５及びＮＭ＿０００８８９は、Ｂ及びＴリンパ球、特に記憶ＣＤ４＋リンパ球によって発現される。多数のインテグリンα４β７は通常、休止状態又は活動状態に存在し得る。α４β７のリガンドには、血管細胞接着因子（ＶＣＡＭ）、フィブロネクチン及び粘膜アドレシン（ＭＡｄＣＡＭ、たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）が挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「α４β７複合体に結合特異性」を有するヒト免疫グロブリン又はその抗原結合断片はα４β７に結合するが、α４β１又はαＥβ７には結合しない。
本明細書で使用されるとき、「等張の」製剤は、ヒト血液と実質的に同一の浸透圧を有する。等張の製剤は一般に約２５０〜３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。等張性は、たとえば、蒸気圧型又は氷凍結型の浸透圧計を用いて測定することができる。
本明細書で使用されるとき、「緩衝化剤」は、その酸／塩基抱合成分の作用によるｐＨの変化に耐性である緩衝液を指す。緩衝化剤は本発明の液体又は固体の製剤に存在し得る。一部の実施形態では、本発明の緩衝化剤は、製剤のｐＨを約５．０〜約７．５に、約５．５〜約７．５のｐＨに、約６．０〜約７．０のｐＨに、又は約６．３〜約６．５のｐＨに調整する。態様の１つでは、単独で又は組み合わせで５．０〜７．５の範囲にてｐＨを制御するであろう緩衝化剤の例には、酢酸塩、コハク酸塩、グルコン酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、カコジレート、２−［Ｎ−モルフォリノ］エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス［ヒドロキシメチル］メタン（ビス−トリス）、Ｎ−［２−アセトアミド］−２−イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、グリシルグリシン、及び他の有機酸緩衝液が挙げられる。別の態様では、本明細書での緩衝化剤はヒスチジン又はクエン酸塩である。
「ヒスチジン緩衝液」はヒスチジンイオンを含む緩衝液である。ヒスチジン緩衝液の例には塩化ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン、硫酸ヒスチジンの溶液が挙げられる。ヒスチジン緩衝液又はヒスチジン／ＨＣｌ緩衝液は、ｐＨ約５．５〜約７．０の間、ｐＨ約６．１〜約６．９の間、又はｐＨ約６．５のｐＨを有する。
「クエン酸緩衝液」はクエン酸イオンを含む緩衝液である。クエン酸緩衝液の例にはクエン酸ナトリウム、クエン酸アンモニウム、クエン酸カルシウム、クエン酸カリウムの溶液が挙げられる。クエン酸緩衝液は、約３．０〜６．２、ｐＨ約５．５〜６．５、ｐＨ約６．１〜約６．５、ｐＨ約６．１、ｐＨ約６．２又はｐＨ約６．５のｐＨを有する。
「糖類」は本明細書では、単糖類、二糖類、三糖類、多糖類、糖アルコール、還元糖、非還元糖などを含む一般式（ＣＨ２Ｏ）ｎを有する化合物及びその誘導体である。本明細書での糖類の例には、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、シリトール、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソ−マルツロース等が挙げられる。糖類は凍結保護剤であることができる。態様の１つでは、糖類は本明細書では非還元性の二糖類、たとえば、スクロースである。
本明細書では、「界面活性剤」は液体の表面張力を低下させる剤を指す。態様の１つでは、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。本明細書での界面活性剤の例には、ポリソルベート（ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、たとえば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）；ＴＲＩＴＯＮ（ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、非イオン性界面活性剤、ミシガン州、ミッドランドのダウケミカル社のユニオンカーバイド子会社）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；ナトリウムオクチルグリコシド；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−又はステアリル−サクロシン；リノレイル−、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカアミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリストアミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアルアミドプロピル−ベタイン（たとえば、ラウロアミドプロピル）；ミリストアミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアルアミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−又は二ナトリウムメチルオレイル−酒石酸；モノパルミチン酸ソルビタン；及びＭＯＮＡＱＵＡＴシリーズ（ニュージャージー州、パターソンのモナ・インダストリーズ社）；ポリエチルグリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びポロキシエチレンとポロキシプロピレングリコールのコポリマー（たとえば、プルロニクス／ポロキサマー、ＰＦ６８等）などが挙げられる。別の態様では、本明細書での界面活性剤はポリソルベート８０である。
用語「キレート剤」は、１を超える結合を介して原子に結合する剤を指す。態様の１つでは、本明細書でのキレート剤の例にはクエン酸塩、エチレンジアミン四酢酸、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、ジメルカプロール、ジエチレントリアミン五酢酸及びＮ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシンが挙げられる。別の態様では、キレート剤はクエン酸塩又はＥＤＴＡである。
用語「抗酸化剤」は、他の分子の酸化を阻害する剤を指す。抗酸化剤の例には、クエン酸塩、リポ酸、尿酸、グルタチオン、トコフェロール、カロテン、リコペン、システイン、ホスホネート化合物、たとえば、エチドロン酸、デスフェロキサミン及びリンゴ酸塩が挙げられる。
本明細書での用語「抗体」は、最も広義で使用され、ヒトの抗体、ヒト化抗体及び非ヒト種に由来する抗体及び単一機能抗体や２機能抗体のような組換え抗原結合形態を含めて、完全長のモノクローナル抗体、免疫グロブリン、ポリクローナル抗体、たとえば、それぞれ異なる抗原又はエピトープに対する少なくとも２つの完全長の抗体から形成される多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体）、及びｄＡｂｓ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’を含む個々の抗原結合断片を具体的に網羅する。
本明細書で記載される他の賦形剤に対する抗α４β７抗体のモル量及びモル比は、抗体についての約１５０，０００ダルトンという近似分子量の仮定の上で算出される。実際の抗体の分子量は、アミノ酸組成及び転写後修飾によって、たとえば、抗体を発現させる細胞株によって１５０，０００ダルトンとは異なり得る。実際の抗体の分子量は、１５０，０００ダルトンの±５％であり得る。
用語「ヒト抗体」には、ヒトの免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウス（たとえば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ遺伝的に操作されたマウス（カリフォルニア州、フレモントのＡｂｇｅｎｉｘ）、ＨＵＭＡＢ−ＭＯＵＳＥ（登録商標）、ＫＩＲＩＮ ＴＣ ＭＯＵＳＥ（商標）導入染色体マウス、ＫＭＭＯＵＳＥ（登録商標）（ニュージャージー州、プリンストンのＭＥＤＡＲＥＸ））に由来する抗体のようなヒトの生殖細胞の免疫グロブリン配列、ヒトファージディスプレイライブラリ、ヒト骨髄腫細胞又はヒトＢ細胞に由来する配列を持つ抗体が含まれる。
用語「モノクローナル抗体」は本明細書で使用されるとき、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、たとえば、一般的に軽微な集団で存在する変異体のようなモノクローナル抗体の産生の間に生じ得る考えられる変異体を除いて、集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／又は同一のエピトープを結合する。通常、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に向けられる。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られるような抗体の特徴を指し示すのであって、特定の方法による抗体の調製を必要とするとは解釈されるべきではない。たとえば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよいし、又は組換えＤＮＡ法（たとえば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」は、たとえば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載された技法を用いてファージ抗体ライブラリから単離されてもよい。
本明細書のモノクローナル抗体は具体的には、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の種に由来する又は特定の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一である又は相同である一方で、鎖の残りが別の種に由来する又は別の抗体のクラス若しくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一である又は相同である「キメラ」抗体、同様にそのような抗体の断片を、それらが所望の生物活性を呈する限り、含む（米国特許第４，８１６，５６７号; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書での当該キメラ抗体は、非ヒト霊長類（たとえば、旧世界のサル、類人猿等）に由来する可変ドメイン抗原結合配列とヒトの定常領域の配列を含む「霊長類化」抗体を含む。
本発明の製剤で調製されるヒト化免疫グロブリンの「抗原結合断片」は、抗α４β７抗体の重鎖及び／又は軽鎖の少なくとも可変領域を含む。たとえば、ベドリズマブの抗原結合断片は配列番号４のヒト化軽鎖配列のアミノ酸残基２０〜１３１を含む。そのような抗原結合断片の例には、当該技術で既知のヒト化免疫グロブリンのＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ及びＦ（ａｂ’）２断片が挙げられる。本発明のヒト化免疫グロブリンの抗原結合断片は、酵素切断又は組換え法によって作出することができる。たとえば、パパイン切断又はペプシン切断を用いてそれぞれＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）２断片を生成することができる。天然の停止部位の上流に１以上の停止コドンを導入した抗体遺伝子を用いて種々の切り詰めた形態で抗体を作出することもできる。たとえば、Ｆ（ａｂ’）２断片の重鎖をコードする組換え構築物を設計して重鎖のＣＨ１ドメインとヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含めることができる。態様の１つでは、抗原結合断片はα４β７インテグリンがそのリガンドの１以上（たとえば、粘膜アドレシンＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）、フィブロネクチン）に結合するのを阻害する。
抗体のパパイン消化は、それぞれ単一の抗原結合部位を持つ「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及びその名が結晶化し易いその能力を反映する残りの「Ｆｃ」断片を生じる。ペプシン処理によって、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することが可能であるＦ（ａｂ’）２断片が得られる。
「Ｆｖ」は、非共有結合の会合にて重鎖可変ドメイン１つと軽鎖可変ドメイン１つの二量体から成る抗体断片である。
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域に由来する１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での少数のの残基の付加によってＦａｂとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは定常領域のシステイン残基が少なくとも１つの遊離のチオール基を持つＦａｂ’についての本明細書での記号表示である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、その間にヒンジシステインを有する一対のＦａｂ’断片として作出された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインが単一ポリペプチド鎖に存在する。態様の１つでは、Ｆｖポリペプチドはさらに、ｓｃＦｖが抗原結合の所望の表面を形成するのを可能にするＶＨ及びＶＬドメインの間でのポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
用語「２機能性抗体」は、２つの抗原結合部位を持つ小型の抗体断片を指し、その断片は同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）にて可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に接続された可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖における２つのドメイン間で対合できるには短すぎるリンカーを用いて、ドメインを強制的に他の鎖の相補性のドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を創る。２機能性抗体は、たとえば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）にてさらに完全に記載されている。
「完全長の抗体」は、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３と共に抗原結合可変領域を含むものである。定常ドメインは天然の配列の定常ドメイン（たとえば、ヒトの天然の配列の定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列の変異体であってもよい。態様の１つでは、完全長の抗体は１以上のエフェクター機能を有する。
「アミノ酸配列の変異体」抗体は本明細書では、主要種抗体とは異なるアミノ酸配列を持つ抗体である。普通、アミノ酸配列の変異体は、主要種抗体との少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の相同性を持つであろう。アミノ酸配列の変異体は、主要種抗体のアミノ酸の範囲内で又はそれに隣接して特定の位置にて置換、欠失及び／又は付加を持つが、抗原結合活性を保持する。抗体の定常領域の配列における変異は可変領域における変異よりも抗原結合部位に対する影響が少ない。可変領域では、アミノ酸配列の変異体は、主要種抗体と少なくとも約９０％相同性、少なくとも約９５％相同性、少なくとも約９７％相同性、少なくとも約９８％相同性、又は少なくとも約９９％相同性であろう。
「相同性」は、配列を並べ、必要に応じてギャップを導入し、最大比率の相同性を達成した後、同一であるアミノ酸配列変異体における残基の比率として定義される。配列比較の方法及びコンピュータプログラムは当該技術で周知である。
「治療用モノクローナル抗体」は、ヒト対象の治療法に使用される抗体である。本明細書で開示される治療用モノクローナル抗体には抗α４β７抗体が含まれる。
「グリコシル化変異体」抗体は本明細書では、主要種抗体に連結される１以上の糖質部分とは異なる、それに連結される１以上の糖質部分を持つ抗体である。グリコシル化変異体の例には本明細書では、そのＦｃ領域に連結されるＧ０オリゴ糖の代わりにＧ１又はＧ２オリゴ糖を持つ抗体、その１又は２の軽鎖に連結される１又は２の糖質部分を持つ抗体、抗体の１又は２の重鎖に連結される糖質がない抗体、等、及びグリコシル化変化体の組み合わせが挙げられる。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然の配列のＦｃ領域又はアミノ酸配列変異体のＦｃ領域）に起因するそれらの生物活性を指す。抗体のエフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性の細胞介在性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（たとえば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方調節などが挙げられる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、完全長の抗体は異なる「クラス」に割り振られる。完全長の抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、いＧＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらの幾つかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ及びＩｇＡ２に分けられ得る。抗体の異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの様々なクラスのサブユニット構造及び三次元構成は周知である。
脊椎動物種に由来する抗体の「軽鎖」はその定常ドメインのアミノ酸配列に基づいたカッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明瞭に異なる型の１つに割り振られる。
「抗体依存性の細胞介在性の細胞傷害性」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性の細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、その後標的細胞の溶解を引き起こす細胞が介在する反応を指す。ＡＤＣＣに介在する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血系細胞上でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページの表３にて要約されている。当該分子のＡＤＣＣ活性を評価するには、米国特許第５，５００，３６２号又は同第５，８２１，３３７号に記載されたような試験管内のＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代わりに又はさらに、当該分子のＡＤＣＣ活性は、たとえば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）にて開示されたような動物モデルにて生体内で評価されてもよい。
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載するのに使用される。態様の１つでは、ＦｃＲは天然配列のヒトＦｃＲである。別の態様では、ＦｃＲはＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、対立遺伝子変異体及びこれら受容体の選択的にスプライスされた形態を含むＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩのサブクラスを含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、主としてその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性型受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型受容体」）が挙げられる。活性型受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンを基にした活性化モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。阻害型受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンを基にした阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７)における概説を参照）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５−３４（１９９４）；並びにｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ．１２６：３３−４１（１９９５）にて概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは本明細書では用語「ＦｃＲ」によって包含される。用語はまた、母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児受容体、ＦｃＲｎも含む（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）。
用語「超可変領域」は本明細書で使用されるとき、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」（たとえば、軽鎖可変領域における残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）及び重鎖可変領域における残基３１−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）及び９５−１０２（Ｈ３）；Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）に由来するアミノ酸残基及び／又は「超可変ループ」（たとえば、軽鎖可変領域における残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）及び９１−９６（Ｌ３）及び重鎖可変領域における残基２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）及び９６−１０１（Ｈ３）；Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）に由来する残基を含む。「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」の残基は、本明細書で定義されるような超可変領域の残基以外のそれら可変ドメインの残基である。超可変領域又はそのＣＤＲ１つの抗体鎖又は別の鎖又は別のタンパク質に移して得られる（複合）抗体又は結合タンパク質に抗原結合特異性を付与する。
非ヒト（たとえば、齧歯類）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最少限の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分については、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（レシピエント）であり、レシピエントの超可変領域に由来する残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有する、たとえば、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような非ヒト種の超可変領域に由来する残基（ドナー抗体）で置き換えられる。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（ＦＲ）の残基が相当する非ヒトの残基で置き換えられる。さらに、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体に見られない残基を含み得る。これらの修飾を行って抗体の性能をさらに改良する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべて又は実質的にすべては非ヒト免疫グロブリンのそれに相当し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてはヒト免疫グロブリンのそれである。ヒト化抗体は任意で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常ヒト免疫グロブリンのそれを含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
「親和性成熟」抗体は、それらの変化を持たない親抗体に比べて抗原への抗体の親和性を改善する、その１以上の超可変領域における１以上の変化をもつものである。態様の１つでは、親和性成熟抗体は、標的抗原についてナノモル又はさらにピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術で既知の手順によって作出される。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２）はＶＨとＶＬの入れ替えによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基の無作為変異誘発はＢａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ、９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）によって記載されている。
「単離された」抗体は、その天然環境の成分から特定され、分離されている及び／又は回収されているものである。特定の実施形態では、抗体は、（１）ローリー法で測定されるときタンパク質の９５重量％を超えて、或いは９９重量％を超えて、（２）スピンキャップシークエネータの使用によって少なくとも１５残基のＮ末端又内部のアミノ酸配列を得るのに十分な程度に、又は（３）クマシーブルー染色又は銀染色を用いて還元条件下若しくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均質性まで精製されるであろう。単離された抗体には、抗体の天然環境の成分の少なくとも１つが存在しないので、組換え細胞内のその場での抗体が含まれる。しかしながら、普通、単離された抗体は少なくとも１回の精製工程で調製されるであろう。
「治療」は治療療法及び予防的な又は防御的な対策の双方を指す。治療を必要とするものには、すでに疾患のあるものと同様に疾患又はその再発が防がれるべきものが含まれる。従って、本明細書で治療される患者は、疾患を有すると診断されていてもよく、又は疾患に罹りやすい若しくは感受性であってもよい。用語「患者」及び「対象」は本明細書では相互交換可能に使用される。
製剤化される抗体は実質的に純粋であり、望ましくは実質的に均質である（混入するタンパク質等を含まない）。「実質的に純粋な」抗体は、タンパク質の総重量に基づいて少なくとも約９０重量％、或いは少なくとも約９５又は９７重量％の抗体を含む組成物を意味する。「実質的に均質な」抗体は、タンパク質の総重量に基づいて少なくとも約９９重量％のタンパク質が特異抗体、たとえば、抗α４β７抗体であるタンパク質を含む組成物を意味する。
「臨床的な寛解」は、潰瘍性大腸炎の対象に関して本明細書で使用されるとき、完全なＭａｙｏスコア２点以下であり及び１点を超える個々のサブスコアがないことを指す。クローン病の「臨床的な寛解」は１５０点以下のＣＤＡＩスコアを指す。
「臨床的な応答」は、潰瘍性大腸炎の対象に関して本明細書で使用されるとき、１点以上の直腸出血サブスコアの低下又は１点以下の絶対直腸出血スコアを伴った、完全Ｍａｙｏスコアの３点以上又はベースラインからの３０％の低下（外来では完全Ｍａｙｏスコアを実施しなかったのであれば、部分Ｍａｙｏスコアの２点以上又はベースラインからの２５％以上）を指す。「臨床的な応答」は、クローン病の対象に関して本明細書で使用されるとき、ベースライン（０週）からのＣＤＡＩスコアでの７０点以上の低下を指す。
「粘膜治癒」は、潰瘍性大腸炎の対象に関して本明細書で使用されるとき、１点以下の内視鏡サブスコアを指す。
本明細書で使用されるとき、「治療の失敗」は潰瘍性大腸炎又はクローン病の治療について疾患の悪化、救急療法の必要性、又は外科的介入を指す。救急療法は、新しい又は未解決の潰瘍性大腸炎又はクローン病の症状を治療するのに必要とされる新しい投薬又はベースライン投薬の用量に増加である（慢性下痢を制御するための下痢止め剤以外）。
製剤
本明細書で記載されるように、抗α４β７抗体は抗酸化剤又はキレート剤と共に製剤化されるとさらに安定であることが発見された。加えて、本明細書で記載されるように、抗α４β７抗体は凝集体形成を減らすように製剤化され得る（たとえば、製剤化におけるポリソルベート８０の量を減らし得る）。たとえば、クエン酸塩又はＥＤＴＡと抗α４β７抗体を含む製剤は保存中の抗体の凝集体形成の比率を減らす。製剤を酸素なしで保存して凝集体形成を減らし得る。一実施形態では、製剤は、２５℃にて１２ヵ月後、約２．５％未満の抗体の凝集体形成を有する。一実施形態では、製剤は、２５℃にて１２ヵ月後、約２.０％未満の抗体の凝集体形成を有する。一実施形態では、製剤は、２５℃にて１２ヵ月後、約１．６％未満の抗体の凝集体形成を有する。一実施形態では、製剤は、２５℃にて１２ヵ月後、約１．３％未満の抗体の凝集体形成を有する。一実施形態では、製剤は、２５℃にて１２ヵ月後、約１．０％未満の抗体の凝集体形成を有する。別の実施形態では、製剤は、５℃にて１２ヵ月後、約０．５％未満の抗体の凝集体形成を有する。別の実施形態では、製剤は、５℃にて１２ヵ月後、約０．３％未満の抗体の凝集体形成を有する。
本発明は、第１の態様にて安定な抗α４β７抗体製剤を提供する。製剤は、抗α４β７抗体と抗酸化剤又はキレート剤を含む。製剤はまた１以上の遊離のアミノ酸であり得る緩衝化剤も含む。製剤はまた任意でさらに界面活性剤を含む。製剤中の抗体は完全長の抗体又は、たとえば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’若しくはＦ（ａｂ’）２断片のようなその抗原結合断片であり得る。
製剤から酸素を取り除くことによって凝集体形成を低減することができる。或いは、製剤は抗酸化剤又はキレート剤を含有することができる。態様の１つでは、製剤に含めることができる例となる抗酸化剤及びキレート剤には、リポ酸、尿酸、グルタチオン、トコフェロール、カロテン、リコペン、システイン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、ジメルカプロール、ジエチレントリアミン五酢酸及びＮ，Ｎ−ビス（カルボキシメチル）グリシン、ホスホネート化合物、たとえば、エチドロン酸、デスフェロキサミン、リンゴ酸塩及びクエン酸塩が挙げられる。一部の抗酸化剤及びキレート剤は製剤の保存中、凝集体形成の比率を下げることができる。別の態様では、キレート剤及び／又は抗酸化剤はクエン酸塩又はＥＤＴＡである。液体製剤のための例となるキレート剤の濃度は、０ｍＭ〜約６０ｍＭ、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約２５ｍＭ、及び約２０〜約３０ｍＭを超えない範囲である。別の態様では、キレート剤の濃度は約０ｍＭ〜約３０ｍＭである。一実施形態では、キレート剤及び／又は抗酸化剤はクエン酸塩であり、クエン酸塩の濃度は０ｍＭ〜約１５ｍＭ、約０ｍＭ〜約１０ｍＭ又は約０ｍＭ〜約５ｍＭである。
製剤は、所望の遊離のアミノ酸を１つ含有することができ、それはＬ−形態、Ｄ−形態又はこれらの形態の所望の混合物であることができる。態様の１つでは、製剤に含まれ得る遊離のアミノ酸には、たとえば、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸、セリン、リジン、トリプトファン、バリン、システイン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。一部のアミノ酸は、製造、乾燥、凍結乾燥及び／又は保存の間での分解に対して、たとえば、水素結合、塩架橋、抗酸化特性又は疎水性相互作用を介して、又はタンパク質表面からの排除によってタンパク質を安定化することができる。アミノ酸は、等張性調節因子として作用することができ、又は製剤の粘度を下げるように作用することができる。別の態様では、ヒスチジンやアルギニンのような遊離のアミノ酸は凍結保護剤として作用することができ、製剤の成分として凍結乾燥された場合、結晶化しない。グルタミン酸やヒスチジンのような遊離のアミノ酸は、単独で又は組み合わせで、５〜７．５の範囲のｐＨにて水溶液において緩衝化剤として作用することができる。その上さらに別の態様では、製剤はヒスチジン、アルギニン又はヒスチジンとアルギニンの組み合わせを含有する。その上さらに別の態様では、液体製剤のための遊離のアミノ酸の濃度は、約９ｍＭ〜約０．５Ｍ、たとえば、約１０ｍＭ〜約９０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約７５ｍＭ、約１０ｍＭ〜約４０ｍＭ、約２５ｍＭ〜約５０ｍＭ、約１５ｍＭ〜約３００ｍＭ、約２０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約７５ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１２０ｍＭ、約５０〜約１５０ｍＭ、又は約５０ｍＭ又は約１２５ｍＭの範囲内である。
製剤は任意でさらに、たとえば、可溶性及び不溶性の凝集体形成を制御するために少なくとも１つの界面活性剤を含有することができる。態様の１つでは、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。別の態様では、界面活性剤はイオン性の界面活性剤である。製剤に含めることができる例となる界面活性剤には、たとえば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー（プルロニック（登録商標）及びそれらの組み合わせが挙げられる。存在する場合、界面活性剤は一般に、シリコーン、充填バイアル、事前に充填されたシリンジ及び／又はカートリッジの存在下で、たとえば、ビン詰め、凍結、乾燥、凍結乾燥及び／又は再構成の間、抗体の不溶性の凝集体の形成を低減する量で含められる。界面活性剤の濃度は一般に、約０．０００１％〜約１．０％、約０．０１％〜約０．５％、たとえば、約０．０５％、０．１％、０．１５％、０．２０％、０．３％、０．４％、又は０．５％（ｗ／ｖ）である。高い濃度の界面活性剤、たとえば、ポリソルベート８０はさらに多くのＳＥＣ凝集体形成をもたらし得る。ポリソルベート８０の濃度を下げることは保存の際のＳＥＣ凝集体形成を減らすことができる。態様の１つでは、界面活性剤と抗体のモル比は約０．７：１〜約２．０：１である。別の態様では、界面活性剤と抗体のモル比は１．５：１である。
抗α４β７抗体製剤の実施形態は高濃度の抗α４β７抗体を含有する。たとえば、一実施形態では、液体製剤は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約３００ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ〜約１９０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ〜約１７０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体、約１５０ｍｇ／ｍｌ〜約１８０ｍｇ／ｍｌ、又は約１６０ｍｇ／ｍｌ又は約１６５ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体を含むことができる。或いは、別の態様では、液体製剤は少なくとも約１５４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１７６ｍｇ／ｍｌを含むことができる。
製剤は液体又は固体であることができる。液体製剤は、水又は、水・アルコール混合物のような水性／有機性混合物のような好適な水性溶媒にて調製される水溶液又は水性懸濁液である。液体製剤は、たとえば、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、又は６．９のような約５．５〜約７．５の間、約６．０〜７．３の間、約６．０〜約７．０の間、約６．０〜６．５の間、約６．０〜６．３の間、約６．３〜７．１の間、又は約６．４〜７．０の間、又は６．３〜６．８の間のｐＨを有する。液体製剤は室温、冷蔵（たとえば、２〜８℃）又は冷凍（たとえば、−２０℃又は−７０℃）で保存することができる。
固体製剤は好適な方法で調製することができ、たとえば、凍結保護剤の添加によってケーキ又は粉末の形態であることができる。態様の１つでは、本明細書で記載される液体製剤を乾燥させることによって、たとえば、凍結乾燥又はスプレー乾燥によって固体製剤を調製する。製剤が固体製剤である場合、製剤は、わずか約５％、わずか約４．５％、わずか約４％、わずか約３．５％、わずか約３％、わずか約２．５％、わずか約２％、わずか約１．５％、わずか約１％の水分を含むことができ、又は実質的に無水である。固体製剤は溶解することができ、すなわち、好適な媒体で再構成し、投与に好適な液体になることができる。固体製剤を再構成するのに好適な溶媒には、水、等張の生理食塩水、緩衝液、たとえば、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー（乳酸加又はデキストロース）溶液、必須無機質媒体、アルコール／水溶液、デキストロース溶液等が挙げられる。溶媒の量は、乾燥の前の量よりも高い、同じ又は低い治療用タンパク質の濃度を生じ得る。別の態様では、再構成された抗α４β７抗体の濃度は乾燥前の液体製剤と同じ濃度である。
製剤は無菌であり得るが、これは、製剤の調製の前又は後でヒト対象への投与に好適な無菌医薬製剤を生成するための当業者に既知の手順に従って達成することができる。製剤は、たとえば、乾燥前及び／又は再構成後、小さな孔を介した濾過によって、無菌処理を介して又は紫外線照射への暴露によって、液体として無菌化することができる。フィルターの孔サイズは微生物を濾過するには０．１μｍ〜０．２μｍであり、ウイルス粒子を濾過するには１０〜２０ｎｍであることができる。代わりに又はさらに、乾燥製剤は、たとえば、γ線照射に暴露することによって無菌化することができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体液体製剤は乾燥前の濾過によって無菌化される。
態様の１つでは、製剤は保存に際して安定である。製剤の安定性を確認するために種々の安定性アッセイが技量のある医師に利用可能である。たとえば、液体製剤は、約２５℃での保存で少なくとも約４週間、少なくとも約２ヵ月間、少なくとも約３ヵ月間、又は少なくとも約６ヵ月間、又は少なくとも約９ヵ月間、又は少なくとも約１２ヵ月間；約２〜８ｏＣでは少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間以上安定であり得る。代わりに又はさらに、製剤における抗体は約１５℃での保存にて少なくとも約４週間、少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１年間以上安定であり得る。代わりに又はさらに、製剤における抗体は約−２０℃又は−７０℃での保存にて少なくとも約４週間；少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約９ヵ月間、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間以上安定であり得る。
安定性は、製剤化の前後、同様に言及した温度で保存した後に、製剤における抗体の物理的安定性、化学的安定性及び／又は生物学的安定性を評価することによって調べることができる。液体製剤又は再構成した乾燥粉末の物理的な及び／又は化学的な安定性は、可溶性及び不溶性の凝集体形成の評価（たとえば、サイズ排除クロマトグラフィ、分析用超遠心、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ、光散乱法（動的（ＤＬＳ）又はＭＡＬＬＳ）、フローベースの顕微鏡画像化、又は他の液体粒子計数方式を用いて、濁度を測定することによる、密度勾配遠心による及び／又は視覚検査による）；カチオン交換クロマトグラフィ（Vlasak and Ionescu, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:468-481 (2008) and Harris et al. J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl. 752:233-245 (2001)も参照）、等電点電気泳動又はキャピラリ―ゾーン電気泳動を用いて電荷不均質性を評価することによる；アミノ末端又はカルボキシ末端の配列解析；質量分光測定解析；断片化した、無傷の及び多量体（たとえば、二量体、三量体等）の抗体を比較するためのＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析；ペプチドマップ（たとえば、トリプシン又はＬＹＳ等）を含む種々の異なる方法（たとえば、Analytical Techniques for Biopharmaceutical Development, Rodriguez-Diaz et al. eds. Informa Healthcare (2005)を参照）にて定性的に及び／又は定量的に評価することができる。不安定性は、凝集、脱アミド化（たとえば、Ａｓｎの脱アミド化）、酸化（たとえば、Ｍｅｔの酸化）、異性化（たとえば、Ａｓｐの異性化）、変性、クリッピング／加水分解／断片化（たとえば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミドの形成、非対合システイン、Ｎ−末端の伸長、Ｃ−末端のプロセッシング、グリコシル化の差異等を生じ得る。生物活性又は抗原結合機能、たとえば、抗α４β７抗体のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）への結合又はα４β７インテグリンを発現している細胞のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）、たとえば、不動化ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）への結合の阻害は、技量のある医師に利用可能な種々の技法を用いて評価することができる（たとえば、 Soler et al., J. Pharmacol. Exper. Ther. 330:864-875 (2009)を参照）。乾燥製剤の水分の測定は、製剤がどのように化学的な又は物理的な分解を受けるかを示し、水分が高いほうが分解はさらに進む。
安定な製剤は、抗α４β７抗体の低い免疫原性に寄与することができる。免疫原性の抗α４β７抗体は、ヒト対象又は患者においてヒト／抗ヒト抗体（ＨＡＨＡ）反応を招き得る。抗α４β７抗体に対してＨＡＨＡ反応を発症する患者は、治療の際、有害事象（たとえば、部位注入反応）を有することができ、又は抗α４β７抗体を迅速に排除することができ、治療により計画されたのよりも低い用量を生じる。抗α４β７抗体治療の早期試験の報告（Feagen et al. (2005) N. Engl. J. Med. 352:2499-2507）は、治療した患者の４４％にて８週までにヒト抗ヒト抗体が発生することを示した。この試験における抗体は液体として保存され、ポリソルベートを含有しなかった。
一部の実施形態では、製剤は、あまり安定ではない製剤のＨＡＨＡの結果に比べて、ＨＡＨＡ陰性の患者の比率を患者の少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％まで増やすことができる。
一部の実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、≧５０％の主要な荷電アイソフォーム、≧５５％の主要な荷電アイソフォーム、又は６５〜７０％の主要な荷電アイソフォームを有する。他の態様では、安定な抗α４β７抗体製剤は、≦４５％の酸性荷電アイソフォーム、≦４０％の酸性荷電アイソフォーム、≦３０％の酸性荷電アイソフォーム又は２２〜２８％の酸性荷電アイソフォームを有する。さらに他の態様では、安定な抗α４β７抗体製剤は、≦２５％の塩基性アイソフォーム、≦２０％の塩基性アイソフォーム、≦１５％の塩基性アイソフォーム、約５％の塩基性アイソフォーム又は約１０％の塩基性アイソフォームを有する。態様の１つでは、安定な抗α４β７抗体製剤は、たとえば、ＣＥＸによって測定されると、≧５５％の主要アイソフォーム、≦３０％の酸性アイソフォーム及び／又は≦２０％の塩基性アイソフォームを有する。別の態様では、たとえば、ｃＩＥＦによって測定されると、≧５０％の主要アイソフォーム、≦４５％の酸性アイソフォーム及び／又は≦１０％の塩基性アイソフォームを有する。
一部の態様では、抗α４β７抗体乾燥固体製剤は、≦１０％の水分、≦５％の水分又は＜２．５％の水分を有する。再構成に必要とされる時間は、≦６０分、≦５０分又は≦４０分又は≦３０分又は≦２０分である。
液体製剤又は再構成製剤における単量体含量及び／又は凝集体含量（たとえば、二量体、三量体、四量体、五量体、オリゴマー及びさらに高次の凝集体として）は、ＳＥＣ、分析用超遠心、光散乱法（ＤＬＳ又はＭＡＬＬＳ）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ又はナノスケールの測定、たとえば、ナノ粒子追跡解析ＮＴＡ（英国、ウィルトシャーのＮａｎｏＳｉｇｈｔ社）によって測定することができる。凝集体の解像、性状分析及び定量は、たとえば、さらに長いカラムによって又は当初の分析用ＳＥＣカラムに沿って第２以上のＳＥＣカラムを連続連結することによってＳＥＣカラム分離の長さを増すこと、光散乱によって単量体のＳＥＣ定量を補完することを含む多数の方法にて、又はＮＴＡを用いることによって達成することができる。
一実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、≧９０％の単量体抗体、≧９５％の単量体抗体、又は９７〜９９％の単量体抗体を有する。別の実施形態では、抗α４β７抗体製剤における物質の大半は、≦２０ｎｍ、≦１５ｎｍ、≦１０ｎｍ、又は約５〜約７ｎｍの平均半径を有する。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤はタンパク質解析によって≧８０％量の重鎖と軽鎖を有する。態様の１つでは、≧９０％の重鎖と軽鎖がある。別の態様では、抗α４β７抗体製剤は≦１０％の凝集体、≦５％の凝集体、≦２．５％の凝集体、≦１．５％の凝集体、≦１％の凝集体又は≦０．５％の凝集体を有する。別の態様では、抗α４β７抗体製剤は≧９６％の単量体及び／又は≦２．５％の凝集体を有する。さらに別の態様では、抗α４β７抗体製剤は≧９９％の単量体及び／又は≦１％の凝集体を有する。
たとえば、液体製剤又は再構成した製剤における凝集体又は溶解されない賦形剤の１又は２ミクロンを超える粒度は、光不明瞭化法（たとえば、Ｈａｃｈ Ｕｌｔｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ（オレゴン州、グランパス）による液体粒子計数方式（ＨＩＡＣ）、顕微鏡、コールターカウンタ、又はＢｒｉｇｈｔｗｅｌｌ（カナダ、オタワ）によるマイクロ流体工学画像化（ＭＦＩ）のようなデジタル（フローベース）顕微鏡画像化に基づく方式、又は流体画像化法（メイン州、ヤーマス）によるＦＬＯＷＣＡＭ（登録商標）画像粒子アナライザによって測定することができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体調製物における粒度は、約３０μｍ、約２５μｍ、約１０μｍ、約５μｍ、約２μｍ、又は１μｍ以下である。粒子の量は、抗体製剤においてできるだけ減らすべきである。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤における粒子の量は、１回量包装（米国薬局方、Ｃｈｐ.７８８、光不明瞭化計数法；顕微鏡定量法による量の半分）において＜６０００粒子≧１０μｍ直径及び／又は＜６００粒子≧２５μｍ直径である。別の態様では、抗α４β７抗体製剤の一用量における粒子の量は約１０００粒子≧１０μｍ及び０〜１００粒子≧２５μｍ（ＭＦＩ法）である。さらに別の態様では、抗α４β７抗体製剤の一用量における、たとえば、ＭＦＩ測定によるミリリットル当たりの粒子の量は２〜１０μｍの粒子でｍＬ当たり約５００〜約２０００、≧１０μｍの粒子でｍＬ当たり約５０〜約３５０、及び≧２５μｍの粒子でｍＬ当たり約０〜約５０である。さらに別の態様では、抗α４β７抗体製剤の一用量における粒子の量は２〜１０μｍの粒子でｍＬ当たり約５００〜約１００，０００、約１０００〜約５０００又は約１５００〜約３０００である。
皮下投与又は筋肉内投与のために抗α４β７抗体製剤の粘度を制御することができる。粘度はタンパク質の濃度及びｐＨに影響され得る。たとえば、タンパク質の濃度が高まるにつれて粘度は上昇し得る。ｐＨの上昇は、抗α４β７抗体製剤の粘度を下げることができる。一部のタンパク質製剤では、塩化ナトリウムを加えて製剤の粘度を低下させる。抗α４β７抗体製剤の粘度に影響することができる追加の成分はヒスチジン及びアルギニンのようなアミノ酸である。
たとえば、皮下投与又は筋肉内投与のために抗α４β７抗体製剤は、等張（たとえば、２５０〜３５０ｍＯｓｍ）又は高張（たとえば、３５０ｍＯｓｍを超える、４５０ｍＯｓｍを超える、５５０ｍＯｓｍを超える、６５０ｍＯｓｍを超える）であることができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤は高張ではなく、たとえば、２５０ｍＯｓｍ未満である。別の態様では、抗α４β７抗体製剤は約３５０〜約４００ｍＯｓｍ、約４００〜約４５０ｍＯｓｍ又は約３５０〜約４５０ｍＯｓｍである。
変性を招く不安定性は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって評価することができる。抗体は、ＤＳＣにおいて２つの溶融温度（Ｔｍ）、たとえば、Ｔｍ１及びＴｍ２を有する。特定の賦形剤は元々の抗α４β７抗体の安定性に影響を及ぼし得る。ＤＳＣによって製剤を比較するとより高い溶融温度の知見は、より高いＴｍを持つより安定な抗α４β７抗体製剤を示し得る。たとえば、ｐＨ５．７では、抗α４β７抗体製剤のＴｍは低いので、ｐＨ６．５よりも安定性は低い。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤のＴｍ１は＞６０℃である。別の態様では、抗α４β７抗体製剤のＴｍ１は約６５℃〜約７０℃又は約６９℃である。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤のＴｍ２は＞８０℃である。別の態様では、抗α４β７抗体製剤のＴｍ２は約８２℃〜約８８℃又は８６℃である。
一実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、参照標準の抗α４β７抗体の約６０％〜約１４０％の結合親和性又はＥＣ５０値を有する。態様の１つでは、本明細書で記載される製剤における抗α４β７抗体は、参照標準の約８０％〜約１２０％の値で、たとえば、細胞（ＷＯ９８／０６２４８又は米国特許第７，１４７，８５１号）上のα４β７に結合する。別の実施形態では、抗α４β７抗体製剤は、α４β７インテグリンを発現している細胞のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）、たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−Ｉｇキメラ（参照標準試料でもある米国特許出願番号２００７０１２２４０４を参照）への結合を少なくとも５０％又は少なくとも６０％阻害する能力を有する。
上記で言及したように、製剤の凍結は本明細書では具体的に企図される。従って、凍結融解に際する安定性について製剤を調べることができる。その結果、液体製剤における抗体は製剤の凍結融解に際して安定であり得るし、たとえば、抗体は１、２、３、４、５回以上の凍結融解の後、安定であることができる。
一部の実施形態では、医薬製剤は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ〜約１７０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、緩衝化剤（たとえば、ヒスチジン）及び少なくとも約５ｍＭのクエン酸塩を含む液体製剤である。他の実施形態では、製剤は、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ〜約１７０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、緩衝化剤（たとえば、クエン酸塩）、アミノ酸（たとえば、アルギニン）及び界面活性剤（たとえば、ポリソルベート８０）を含む液体製剤である。
別の実施形態では、製剤は、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍＬ又は約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約１７０ｍｇ／ｍＬ、たとえば、約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、緩衝化剤（たとえば、ヒスチジン）、少なくとも５ｍＭのクエン酸塩及び遊離のアミノ酸（たとえば、アルギニン）を含む。
さらに別の実施形態では、製剤は、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、緩衝化剤（たとえば、ヒスチジン）、少なくとも５ｍＭのクエン酸塩、０．２％のポリソルベート８０及び遊離のアミノ酸（たとえば、アルギニン）を含む。実施形態では、製剤における緩衝液の濃度は約１５〜約７５ｍＭ、約２５〜約６５ｍＭ又は約５０ｍＭである。製剤における遊離のアミノ酸の濃度は、約５０〜約２５０ｍＭ、約７５〜約２００ｍＭ、約１００〜約１５０ｍＭ又は約１２５ｍＭであり；製剤におけるポリソルベート８０の濃度は約０．０５％〜０．４％、約０．１％〜０．４％、約０．１％〜０．３％、約０．１％〜０．２５％、約０．１％〜０．２％又は約０．２％である。
一部の実施形態では、製剤は抗α４β７抗体、クエン酸塩、ヒスチジン、アルギニン、ポリソルベート８０、及び凍結防止剤又は非還元糖のような糖を含む固体製剤（たとえば、凍結乾燥製剤）である。糖は液体製剤に含められて０％〜２０％又は約６％〜約１０％の濃度に達する。
一実施形態では、製剤は凍結乾燥され、容器１つ、たとえば、バイアル、シリンジ、カートリッジ、及び／又は自動注入器にて単回用量として保存される。容器は、それを必要とする患者にそれを投与するまで２〜８℃又は２５℃で保存することができる。バイアルはたとえば、５、１０又は２０ｃｃのバイアル（たとえば、１６０ｍｇ／ｍＬ用量のための）であり得る。バイアルは、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約７０ｍｇ、少なくとも約８０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１５５ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、又は少なくとも約９００ｍｇの抗α４β７抗体を含有し得る。態様の１つでは、容器は約１６５ｍｇの抗α４β７抗体を含有する。
別の実施形態では、製剤は液体であり、１又は２のバイアル、カートリッジ、シリンジ又は自動注入器にて単回用量として保存される。バイアル、カートリッジ、シリンジ又は自動注入器は、その内容物、たとえば、抗α４β７抗体がそれを必要とする対象に投与されるまで約２〜８℃で保存することができる。バイアルはたとえば、５、１０又は２０ｃｃのバイアル（たとえば、１６０ｍｇ／ｍＬ用量のための）であり得る。バイアルは、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約７０ｍｇ、少なくとも約８０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１５５ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約５４０ｍｇ、又は少なくとも約９００ｍｇの抗α４β７抗体を含有し得る。態様の１つでは、バイアルは約１６５ｍｇの抗α４β７抗体を含有する。シリンジ又はカートリッジは１ｍＬ若しくは２ｍＬ容器（たとえば、１６０ｍｇ／ｍＬ用量のための）又はたとえば、さらに高い用量（少なくとも３２０ｍｇ又は４００ｍｇ以上）のための２ｍＬを超える容器であり得る。シリンジ又はカートリッジは、少なくとも約２０ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約７０ｍｇ、少なくとも約８０ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１２０ｍｇ、少なくとも約１５５ｍｇ、少なくとも約１８０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２４０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３６０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、又は少なくとも約５００ｍｇの抗α４β７抗体を含有し得る。
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２１版，Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｒ．Ｅｄ．（２００５）に記載されたような１以上他の薬学上許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤は、それらが製剤の所望の特徴に有害に影響しないという条件で製剤に含められ得る。許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤は、採用される投与量及び濃度にてレシピエントに非毒性であり、それらには、追加の緩衝化剤；共溶媒；クエン酸塩及びシステインを含む抗酸化剤；ＥＤＴＡのようなキレート剤；金属錯体（たとえば、Ｚｎ／タンパク質錯体）；ポリエステルのような生分解性ポリマー；保存剤；注入の容易さのための容器壁潤滑剤、たとえば、シリコーン、鉱物油、グリセリン又はＴＲＩＢＯＧＬＩＤＥ（登録商標）（Ｔｒｉｂｏ Ｆｉｌｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社）パーフルオロポリエーテル誘導体及び／又はナトリウムのような塩形成の対イオンが挙げられる。
α４β７抗体
製剤での使用に好適な抗α４β７抗体には、たとえば、完全なヒト抗体、マウス抗体、ウサギ抗体等のような所望の供給源からの抗体、及びたとえば、キメラ抗体、ヒト化抗体等のような所望の操作された抗体が含まれる。たとえば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片のような、これらの種類の抗体のいずれかの抗原結合断片も製剤での使用に好適である。
抗α４β７抗体は、α４鎖上のエピトープ（たとえば、ヒト化ＭＡｂ２１．６(Bendig et al., U.S. Pat. No. 5,840,299)）、β７鎖上のエピトープ（ＦＩＢ５０４又はヒト化誘導体（たとえば、Ｆｏｎｇらの米国特許第７，５２８，２３６号））、又はα４鎖とβ７鎖の会合によって形成される組み合わせエピトープに結合することができる。態様の１つでは、抗体はα４β７複合体上の組み合わせエピトープを結合するが、鎖が互いに会合しない限り、α４鎖又はβ７鎖上のエピトープを結合しない。α４インテグリンのβ７インテグリンとの会合は、エピトープを一緒に含む両鎖上に存在する残基を近接させることによって、又は一方の鎖、たとえば、α４インテグリン鎖又はβ７インテグリン鎖の上で、適当なインテグリンの相手の非存在下又はインテグリン活性化の非存在下では抗体結合にアクセスできない抗体結合部位を立体的に暴露することによって、組み合わせエピトープを創り出すことができる。別の態様では、抗α４β７抗体は、α４インテグリン鎖及びβ７インテグリン鎖の双方を結合するのでα４β７インテグリン複合体に対して特異的である。そのような抗体は、α４β７を結合することができるが、たとえば、α４β１を結合することはできず、及び／又はαＥβ７を結合することはできない。別の態様では、抗α４β７抗体は、Ａｃｔ−１抗体（Lazarovits, A. I. et al., J. Immunol., 133(4): 1857-1862 (1984), Schweighoffer et al., J. Immunol., 151(2): 717-729, 1993; Bednarczyk et al., J. Biol. Chem., 269(11): 8348-8354, 1994）と同じ又は実質的に同じエピトープに結合する。マウスのＡｃｔ−１モノクローナル抗体を産生するマウスのＡＣＴ−１ハイブリドーマ細胞株は、２００１年８月２２日のブタペスト条約の規定のもとで、米国０２１３９マサチューセッツ州、ケンブリッジ、Ｌａｎｄｓｄｏｗｎｅ通り４０のＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社の利益となるように、米国２０１１０−２２０９バージニア州、マナッサスのブルバード大学１０８０１のアメリカンタイプカルチャーコレクションに受入番号ＰＴＡ−３６６３で寄託された。別の態様では、抗α４β７抗体は、米国特許出願公開番号２０１０／０２５４９７５で提供されたＣＤＲを用いたヒト抗体又はα４β７結合タンパク質である。
態様の１つでは、抗α４β７抗体は、そのリガンド（たとえば、粘膜アドレシン、たとえば、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）、フィブロネクチン及び／又は血管アドレシン（ＶＣＡＭ））の１以上へのα４β７の結合を阻害する。霊長類のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）はＰＣＴ公開ＷＯ９６／２４６７３に記載されており、その教示全体が参照によって本明細書に組み入れられる。別の態様では、抗α４β７抗体は、ＶＣＡＭの結合を阻害することなく、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）及び／又はフィブロネクチンへのα４β７の結合を阻害する。
態様の１つでは、製剤で使用するための抗α４β７抗体は、マウスＡｃｔ−１抗体のヒト化型である。ヒト化抗体を調製する好適な方法は当該技術で周知である。一般に、ヒト化抗α４β７抗体は、マウスＡｃｔ−１抗体の３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲｓ、ＣＤＲ１、配列番号：８、ＣＤＲ２、配列番号：９及びＣＤＲ３、配列番号：１０）を含有する重鎖と好適なヒト重鎖フレームワーク領域を含有し；且つマウスＡｃｔ−１抗体の３つのＣＤＲｓ（ＣＤＲ１、配列番号：１１、ＣＤＲ２、配列番号：１２及びＣＤＲ３、配列番号：１３）を含有する軽鎖と好適なヒト軽鎖フレームワーク領域を含有するであろう。ヒト化Ａｃｔ−１抗体は、アミノ酸置換を伴って又は伴わずにコンセンサスフレームワーク領域を含む好適なヒトフレームワーク領域を含有することができる。たとえば、フレームワークアミノ酸の１以上をマウスＡｃｔ−１抗体における相当する位置でのアミノ酸のような別のアミノ酸で置き換えることができる。ヒトの定常領域又はその一部は、存在するならば、対立遺伝子変異体を含めてヒト抗体のκ又はλ軽鎖及び／又はγ（たとえば、γ１、γ２、γ３、γ４）、μ、α（たとえば、α１、α２）、δ又はε重鎖に由来することができる。特定の定常領域（たとえば、ＩｇＧ1）、その変異体又は一部はエフェクター機能を誂えるように選択することができる。たとえば、変異のある定常領域（変異体）を融合タンパク質に組み入れてＦｃ受容体への結合及び／又は補体を固定する能力をできるだけ抑えることができる（例えば, Winter et al., GB 2,209,757 B; Morrison et al., WO 89/07142; Morgan et al., WO 94/29351, Dec. 22, 1994参照）。Ａｃｔ−１抗体のヒト化型は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／０６２４８及びＷＯ０７／６１６７９に記載されたが、そのそれぞれの教示全体が参照によって本明細書に組み入れられる。
別の態様では、製剤で使用するための抗α４β７ヒト化抗体は、配列番号２のアミノ酸２０〜１４０を含む重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸２０〜１３１又は配列番号５のアミノ酸２１〜１３２を含む軽鎖可変領域を含む。所望であれば、好適なヒト定常領域が存在することができる。たとえば、ヒト化抗α４β７抗体は配列番号２のアミノ酸２０〜４７０を含む重鎖及び配列番号５のアミノ酸２１〜２３９を含む軽鎖を含むことができる。別の例では、ヒト化抗α４β７抗体は配列番号２のアミノ酸２０〜４７０を含む重鎖及び配列番号４のアミノ酸２０〜２３８を含む軽鎖を含むことができる。図４はヒト抗体とマウス抗体の一般的な軽鎖を比較する配列比較を示す。配列比較によって、２つのマウス残基がヒト残基に入れ替わったベドリズマブ（たとえば、化学アブストラクトサービス（ＣＡＳ、米国化学会）登録番号９４３６０９−６６−３）のヒト化軽鎖はＬＤＰ−０２の軽鎖（図３）よりもヒト型であることを説明する。加えて、ＬＤＰ−０２は、幾分疎水性で自由度の高いアラニン１１４と、やや親水性でヒドロキシル含有のスレオニン１１４及び疎水性で内向きの可能性があるバリン１１５残基を持つベドリズマブにて置き換えられる親水性部位（アスパラギン酸１１５）とを有する。
抗体配列に対するさらなる置換は、たとえば、重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域に対する変異であることができ、たとえば、配列番号１４の残基２におけるイソロイシンのバリンへの変異；配列番号１４の残基４におけるメチオニンのバリンへの変異；配列番号１５の残基２４におけるアラニンのグリシンへの変異；配列番号１５の残基３８におけるアラニンのリジンへの変異；配列番号１５の残基４０におけるアラニンのアルギニンへの変異；配列番号１５の残基４８におけるメチオニンのイソロイシンへの変異；配列番号１５の残基６９におけるイソロイシンのロイシンへの変異；配列番号１５の残基７１におけるアルギニンのバリンへの変異；配列番号１５の残基７３におけるスレオニンのイソロイシンへの変異；又はそれらの組み合わせ；重鎖ＣＤＲｓのマウスＡｃｔ−１抗体のＣＤＲｓ（ＣＤＲ１、配列番号：８、ＣＤＲ２、配列番号：９及びＣＤＲ３、配列番号：１０）による置換、及び軽鎖ＣＤＲｓのマウスＡｃｔ−１抗体の軽鎖ＣＤＲｓ（ＣＤＲ１、配列番号：１１、ＣＤＲ２、配列番号：１２及びＣＤＲ３、配列番号：１３）による置換であることができる。
一部の実施形態では、製剤で使用するための抗α４β７ヒト化抗体は、配列番号２のアミノ酸２〜１４０に対して約９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸２０〜１３１又は配列番号５のアミノ酸２１〜１３２に対して約９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む。アミノ酸の配列同一性は、初期設定パラメータを用いる、たとえば、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ方式（ウィスコンシン州、マジソンのＤＮＡＳＴＡＲ社）のような好適な配列比較アルゴリズムを用いて決定することができる。実施形態では、製剤で使用するための抗α４β７抗体は、ベドリズマブ（ＣＡＳ、米国化学会、登録番号９４３６０９−６６−３）である。
他のα４β７抗体も本明細書で記載される製剤及び投与計画に使用され得る。たとえば、その全体が参照によって本明細書に組み入れられるＵＳ２０１０／０２５４９７５（Ａｍｇｅｎ社）に記載されたα４β７抗体は個体における炎症性大腸疾患を治療する製剤及び方法での使用に好適である。
抗α４β７抗体は、生細胞、たとえば、培養中の細胞にて各鎖をコードする核酸配列を発現させることによって作出することができる。種々の宿主／発現ベクター系を利用して本発明の抗体分子を発現させ得る。そのような宿主／発現ベクター系は、当該コーディング配列が作られ、その後精製される媒体を表すが、適当なヌクレオチドコーディング配列で形質転換された又は形質移入された場合その場で抗α４β７抗体を発現し得る細胞を表すものではない。これらには、たとえば、抗体コーディング配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（たとえば、大腸菌、枯草菌）；抗体コーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（たとえば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ，Ｐｉｃｈｉａ）のような微生物；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（たとえば、バキュロウイルス）を感染させた昆虫細胞系；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（たとえば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）を感染させた又は抗体コーディング配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（たとえば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞系；又は哺乳類細胞のゲノムに由来する（たとえば、メタロチオネインプロモータ）又は哺乳類ウイルスに由来する（たとえば、アデノウイルス後期プロモータ；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモータ）プロモータを含有する組換え発現構築物を抱く哺乳類細胞系（たとえば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、３Ｔ３、ＮＳ０）が挙げられるが、これらに限定されない。たとえば、ヒトのサイトメガロウイルスに由来する主要中早期遺伝子プロモータエレメントのようなベクターを併せたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳類細胞は、抗体の有効な発現系である（Foecking et al., Gene 45:101 (1986); Cockett et al., Bio/Technology 8:2 (1990)）。
細菌の系では、発現される抗体分子の用途によって多数の発現ベクターが有利に選択され得る。たとえば、抗体分子の医薬組成物を生成するために大量のそのようなタンパク質が製造されるべきであるなら、精製しやすい融合タンパク質生成物を高レベルで発現することを指向するベクターが望ましくてもよい。そのようなベクターには、融合タンパク質が産生されるように抗体コーディング配列をｌａｃＺコーディング領域と共にフレーム内でベクターに個々に連結し得る大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ruther et al., EMBO J. 2:1791 (1983)）；ｐＩＮベクター（Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem.24:5503-5509 (1989)）等が挙げられるが、これらに限定されない。ｐＧＥＸベクターを使用してグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）による融合タンパク質として外来ポリペプチドも発現させ得る。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリクスグルタチオン／アガロースビーズへの吸着及び結合、その後の遊離のグルタチオンの存在下での溶出によって容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングした標的遺伝子がＧＳＴ部分から解放できるようにトロンビン又は因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
昆虫系では、外来遺伝子を発現するベクターとしてＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が使用される。ウイルスはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞の中で増殖する。抗体コーディング配列を個々にウイルスの非必須領域（たとえば、ポリヘドリン遺伝子）にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモータ（たとえば、ポリヘドリンプロモータ）の制御下に置く。
哺乳類宿主細胞では、多数のウイルスに基づく発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合では、当該抗体コーディング配列をアデノウイルスの転写／翻訳制御複合体、たとえば、後期プロモータ及び三分節リーダー配列に連結し得る。次いで、試験管内又は生体内の組換えによってこのキメラ遺伝子をアデノウイルスのゲノムに挿入し得る。ウイルスゲノムの非必須領域（たとえば、領域Ｅ１又はＥ３）における挿入は、感染宿主にて生存可能で、抗体分子を発現することが可能である組換えウイルスを生じる（たとえば、Logan & Shenk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:355-359 (1984)を参照）。挿入された抗体コーディング配列の効率的な翻訳には特定の開始シグナルも必要とされ得る。これらのシグナルにはＡＴＧ開始コドン及び隣接配列が含まれる。さらに、開始コドンは所望のコーディング配列のリーディングフレームと同調して挿入物全体の翻訳を確保しなければならない。これらの外因性の翻訳制御シグナル及び開始コドンは種々の起源であってもよく、天然及び合成の双方であり得る。発現の効率は適当な転写エンハンサエレメント、転写終結因子等を含むことによって高められ得る（Bittner et al., Methods in Enzymol. 153:51-544 (1987)を参照）。
加えて、挿入された配列の発現を調節し、遺伝子産物を所望の特定の方式で修飾し、プロセッシングする宿主細胞株を選択し得る。タンパク質産物のそのような修飾（たとえば、グリコシル化）及びプロセッシング（たとえば、切断）はタンパク質の機能にとって重要であり得る。様々な宿主細胞がタンパク質及び遺伝子産物の翻訳後のプロセッシング及び修飾について特徴及び特定のメカニズムを有する。適当な細胞株又は宿主系を選択して発現される外来タンパク質の正しい修飾及びプロセッシングを確保する。この目的で、一次転写物の適切なプロセッシング、遺伝子産物のグリコシル化及びリン酸化について細胞機構を持つ真核宿主細胞が使用され得る。そのような哺乳類宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳ０、ＨｅＬａ、ＶＥＲＹ、幼若ハムスター腎臓（ＢＨＫ）、サル腎臓（ＣＯＳ）、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、ＷＩ３８、ヒト肝細胞癌細胞（たとえば、ＨｅｐＧ２）、たとえば、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄのような乳癌細胞株、並びにたとえば、ＣＲＬ７０３０及びＨｓ５７８Ｂｓｔのような正常乳腺細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。
様々な細胞種のグリコシル化機構は別の細胞種とは異なるグリコシル化組成を持つ抗体を作出することができ、又は細菌と同様にグリコシル化のない抗体を作出することができる。態様の１つでは、抗α４β７抗体の産生用の細胞種は、ＮＳ０細胞又はＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞である。態様の１つでは、哺乳類細胞は、細胞のメカニズムに関与する酵素の欠失を含むことができ、当該外因性遺伝子は、たとえば、形質転換又は形質移入によって細胞に導入されるための構築物又はベクターにて置き換え酵素に操作可能に連結され得る。外因性遺伝子を伴った構築物又はベクターは、構築物又はベクターを招き入れる細胞に対して構築物又はベクターによってコードされるポリペプチドの産生を促す選択優位性を付与する。一実施形態では、ＣＨＯ細胞は、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子の欠失又は不活化を含むＤＧ４４細胞（Chasin and Urlaub (1980) PNAS USA 77:4216）である。別の実施形態では、ＣＨＯ細胞は、グルタミンシンターゼ酵素の欠失又は不活化を含むＣＨＯＫ１細胞である（たとえば、米国特許第５，１２２，４６４号又は同第５，８２７，７３９号を参照）。
固体製剤
本発明の固体製剤は一般に液体製剤を乾燥することによって調製される。任意の好適な乾燥方法、たとえば、凍結乾燥又はスプレー乾燥を使用することができる。態様の１つでは、凍結乾燥に先立って凍結保護剤が製剤に添加される。凍結乾燥には普通、製剤を保存する、出荷する及び流通させるのに使用されるであろう容器（たとえば、バイアル、シリンジ（たとえば、単一又は二重のチャンバーシリンジ）又はカートリッジ（たとえば、単一又は二重のチャンバーカートリッジ）にて液体製剤を乾燥させることが関与する（たとえば、Gatlin and Nail in Protein Purification Process Engineering, ed. Roger G. Harrison, Marcel Dekker Inc., 317-367 (1994)を参照）。製剤がいったん凍結されると、大気圧が下げられ、温度は、たとえば、昇華を介して凍結溶媒を除けるように調整される。凍結乾燥過程のこの工程は、一次乾燥と呼ばれることもある。所望であれば、次いで温度を上げて乾燥製剤に依然として結合する溶媒を蒸発によって除くことができる。凍結乾燥過程のこの工程は、二次乾燥と呼ばれることもある。製剤が所望の乾燥程度に達すると、乾燥過程を終了し、容器を密封する。最終的な固体製剤を「凍結乾燥製剤」又は「ケーキ」と呼ぶこともある。凍結乾燥過程は好適な機器を用いて実施することができる。好適な凍結乾燥機器は多数の商業的供給源から入手可能である（たとえば、ニューヨーク州、ストーンリッジのＳＰ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
種々の好適な装置を用いて液体製剤を乾燥して固体（たとえば、凍結乾燥した）製剤を製造することができる。一般に、凍結乾燥製剤は、その上に乾燥される液体製剤のバイアルが置かれる棚を含有する密閉チャンバーを用いて当業者によって調製される。棚の温度は冷却速度や加熱速度と同様に、チャンバー内部の圧のように制御することができる。本明細書で議論される種々の工程パラメータがこの種の装置を用いて実施される工程を指すことが理解されるであろう。当業者は本明細書で記載されるパラメータを所望であれば、他の種の乾燥装置に容易に適合させることができる。
一次乾燥及び二次乾燥のために好適な温度及び真空の量は当業者によって容易に決定され得る。一般に、製剤は約−３０℃以下、たとえば、−４０℃又は−５０℃の温度で凍結される。冷却の速度は、マトリクスにおける氷結晶の量及びサイズに影響を及ぼし得る。一次乾燥は一般に凍結温度よりも約１０℃、約２０℃、約３０℃、約４０℃、又は約５０℃温かい温度で実施される。態様の１つでは、一次乾燥の条件は、製剤のガラス転移温度又は崩壊温度を下回って抗α４β７抗体を維持するように設定することができる。崩壊温度を上回ると、非晶性の凍結マトリクスが流れ（崩壊し）、タンパク質分子が硬い固体マトリクスに囲まれないかもしれない、タンパク質分子が崩壊マトリクスにて安定でないかもしれない結果となる。また、崩壊が起きるとすると、製剤は完全に乾燥しにくい可能性がある。製剤における結果的に多い水分量は、高い比率のタンパク質分解を招き得るし、品質が許容不能なレベルに低下する前に凍結乾燥製品を保存できる時間量が低下し得る。態様の１つでは、棚の温度及びチャンバーの圧は、一次乾燥の間、崩壊温度を下回る温度で製品を維持するように選択される。凍結製剤のガラス転移温度は、当該技術で既知の方法によって、たとえば、示差走査熱量法（ＤＳＣ）によって測定することができる。崩壊温度は、当該技術で既知の方法によって、たとえば、凍結乾燥顕微鏡、光学コヒーレンス断層撮影によって測定することができる。乾燥工程は少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％以上の溶媒を取り除くことができる。態様の１つでは、一次乾燥工程は、抗α４β７抗体組成物から８０％を超える溶媒を取り除く。
バイアルのサイズは凍結乾燥の間、棚及び真空にさらされる表面積に基づいて選択することができる。乾燥時間はケーキの高さに直接比例するので、理に適ったケーキの高さであると決定されるものに基づいて選択され得る。体積に比べて大きな直径を持つバイアルは凍結乾燥サイクルの間、効率的な熱移転のために棚に接触する高い量を提供する。液体の体積が多い希釈抗体溶液は乾燥にさらに多くの時間を必要とするであろう。大きなバイアルほど保存し、輸送するのに高価であり、上部空間と製剤の高い比を有し、高い比率の製剤を長期保存の間、水分の分解効果にさらし得るので、バイアルのサイズと製剤の体積のバランスを取る必要がある。１６５ｍｇ用量については、抗α４β７抗体製剤のバイアルサイズは３ｍＬ、５ｍＬ又は１０ｍＬであることができる。態様の１つでは、バイアルサイズは１６０ｍＬ溶液について５ｍＬである。
凍結乾燥用のカートリッジ又はシリンジのサイズを選択する原理はバイアルに類似する。ケーキ高さの深さは高さが増すので乾燥時間も増すであろう。シリンジ又はカートリッジの直径及びサイズは最終的な製剤の体積と釣り合わせなければならない。大きな直径は凍結乾燥ケーキ中の水分の取り込みの比率を高めるので、保存中の水分の分解効果を高める。１６５ｍｇ用量については、抗α４β７抗体製剤の体積は１ｍＬ又は２ｍＬであることができる。態様の１つでは、１６０ｍＬ溶液についてシリンジ又はカートリッジのサイズは１ｍＬを超える。
凍結乾燥の後、シリンジ又はカートリッジは真空下で密封される、たとえば、栓で塞がれる。或いは、密封に先立って、容器の中に気体、たとえば、乾燥空気又は窒素を入れることができる。酸化が懸念される場合、凍結乾燥チャンバーに気体を入れることができ、凍結乾燥製品の酸化を遅らす又は妨げる気体を含むことができる。態様の１つでは、気体は含酸素ではない気体、たとえば、窒素又は不活性気体、たとえば、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン又はキセノンである。別の態様では、気体は窒素又はアルゴンである。
抗体製剤による治療
態様の１つでは、本発明は、たとえば、ヒトにおける疾患又は障害を治療するのに有効な量で本明細書に記載される抗α４β７抗体製剤を対象に投与することを含む、対象にて疾患又は障害を治療する方法を提供する。ヒト対象は、成人（たとえば、１８歳以上）、若者又は小児であり得る。ヒト対象は６５歳以上のヒトであり得る。代替の治療用投与計画とは対照的に、６５歳以上のヒト対象は本明細書で記載される投与計画の修正を必要とせず、本明細書に記載される従来の抗α４β７抗体製剤が投与され得る。
対象は、免疫調節因子ＴＮＦ−α拮抗剤又はその組み合わせとの適切な応答を欠いていた、それに対する応答を欠如していた、又はそれによる治療に対して認容性ではなかった可能性がある。患者は、炎症性大腸疾患に対して少なくとも１つのコルチコステロイド（たとえば、プレドニゾロン）による治療を以前受けていた可能性がある。コルチコステロイドに対する不適正な応答は、毎日経口で２週間又は静脈内で１週間のプレドニゾロン３０ｍｇと同等の用量を含む少なくとも１回の４週間誘導計画の経験にもかかわらず、持続して活動性の疾患の兆候及び症状を指す。コルチコステロイドに対する応答の欠如は、毎日経口のプレドニゾロン１０ｍｇと同等の用量を下回るコルチコステロイドを徐々に減らす試みに２回失敗したことを指す。コルチコステロイドの非認容性には、クッシング症候群、骨減少症／骨粗鬆症、高血糖症、不眠症及び／又は感染の既往が挙げられる。
免疫調節剤は、たとえば、経口のアザチオプリン、６−メルカプトプリン又はメソトレキセートであり得る。免疫調節剤に対する不適正な応答は、少なくとも１回の経口のアザチオプリン（≧１．５ｍｇ／ｋｇ）、６−メルカプトプリン（≧０．７５ｇ／ｋｇ）又はメソトレキセート（≧１２．５ｇ／ｋｇ）８週間の計画の経験にもかかわらず、持続して活動性の疾患の兆候及び症状を指す。免疫調節剤の非認容性には、嘔吐／吐き気、腹痛、膵炎、ＬＦＴの異常、リンパ球減少症、ＴＰＭＴ遺伝子変異及び／又は感染が挙げられるが、これらに限定されない。
ＴＮＦ−α拮抗剤は、たとえば、ＴＮＦ−αの生物活性を阻害する、好ましくはＴＮＦ−αを結合する剤、たとえば、モノクローナル抗体、たとえば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（インフリキシマブ）、ＨＵＭＩＲＡ（アダリムマブ）、ＣＩＭＺＩＡ（セルトリズマブペコール）、ＳＩＭＰＯＮＩ（ゴリムマブ）であり、又はＥＮＢＲＥＬ（エタネルセプト）のような循環受容体融合タンパク質である。ＴＮＦ−α拮抗剤に対する不適正な応答は、インフリキシマブ５ｍｇ／ｋｇＩＶの少なくとも２週間離して２用量；８０ｍｇアダリムマブの１回皮下投与、その後少なくとも２週間離して４０ｍｇの単回投与；又は４００ｍｇのセルトリズマブペコールの皮下投与、少なくとも２週間離して２用量の少なくとも１回の４週間誘導計画の経験にもかかわらず、持続して活動性の疾患の兆候及び症状を指す。ＴＮＦ−α拮抗剤に対する応答の欠如は、前の臨床的利益に続く維持投与の間での症状の再発を指す。ＴＮＦ−α拮抗剤の非認容性には、点滴関連の反応、脱髄、鬱血性心不全及び／又は感染が挙げられるが、これらに限定されない。
寛解の維持の喪失は、潰瘍性大腸炎患者について本明細書で使用されるとき、Ｍａｙｏスコアで少なくとも３点及び改変Ｂａｒｏｎスコアで少なくとも２点の上昇を指す。
別の態様では、本発明は、（１）試験管内及び／又は生体内でα４β７インテグリンを結合することができ、（２）α４β７インテグリンの活性又は機能、たとえば、（ａ）結合機能（たとえば、α４β７インテグリンのＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）、フィブロネクチン及び／又はＶＣＡＭ−１に結合する能力）及び／又は（ｂ）組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む白血球の浸潤（たとえば、腸管粘膜組織へのリンパ球の移動を阻害する能力）を調節することができる抗α４β７抗体製剤を提供する。一実施形態では、製剤中の抗体は、α４β７インテグリンを結合することができ、そのリガンド（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）、ＶＣＡＭ−１、フィブロネクチン）の１以上へのα４β７インテグリンの結合を阻害することができ、それによって組織への白血球の浸潤（組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む）を阻害する。別の実施形態では、製剤中の抗体は、α４β７インテグリンを結合することができ、そのリガンド（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）、ＶＣＡＭ−１、フィブロネクチン）の１以上へのα４β７インテグリンの結合を選択的に阻害することができ、それによって組織への白血球の浸潤（組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む）を阻害する。そのような抗α４β７抗体製剤は、試験管内及び／又は生体内で消化管関連の組織、リンパ系臓器又は白血球（特にＴ細胞又はＢ細胞のようなリンパ球）を含む粘膜組織にて血管内皮細胞へのα４β７インテグリンを持つ細胞の細胞接着を阻害することができる。さらに別の実施形態では、本発明の抗α４β７抗体製剤は、α４β７のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）及び／又はフィブロネクチンとの相互作用を阻害することができる。その上さらに別の実施形態では、本発明の抗α４β７抗体製剤は、たとえば、α４β７のＶＣＡＭとの相互作用を阻害することなく選択的にα４β７のＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）及び／又はフィブロネクチンとの相互作用を阻害することができる。
本発明の抗α４β７抗体製剤を用いて、α４β７インテグリンの結合機能及び／又は白血球（たとえば、リンパ球、単球）の浸潤機能を調節する（たとえば、阻害する（低減する又は妨げる）ことができる。たとえば、白血球（たとえば、リンパ球、単球）の組織、特に分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）を発現している組織への浸潤（組織における白血球の動員及び／又は蓄積を含む）に関連する疾患の治療における方法に従って、リガンド（すなわち、１以上のリガンド）へのα４β７インテグリンの結合を阻害するヒト化免疫グロブリンを投与することができる。
そのような疾患を治療するために、有効量の本発明の抗α４β７抗体製剤が個体（たとえば、ヒト又は他の霊長類のような哺乳類）に投与される。たとえば、消化管（消化管関連の内皮細胞を含む）、他の粘膜組織又は分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）を発現している組織（たとえば、小腸及び大腸の固有層の小静脈のような消化管関連の組織、及び乳腺（たとえば、授乳している乳腺）に関連する疾患を含む炎症性疾患を本方法に従って治療することができる。同様に、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）を発現している細胞への白血球の結合の結果としての組織への白血球の浸潤に関連する疾患を有する個体を本発明に従って治療することができる。
一実施形態では、従って治療することができる疾患には、たとえば、潰瘍性大腸炎、クローン病、回腸炎、セリアック病、非熱帯性スプルー、血清陰性の関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的又はコラーゲン性の大腸炎、好中球性胃腸炎、又は直腸結腸切除後に生じる回腸嚢炎、及び回腸肛門吻合のような炎症性大腸疾患（ＩＢＤ）が挙げられる。一部の実施形態では、炎症性大腸疾患はクローン病又は潰瘍性大腸炎である。潰瘍性大腸炎は、中程度から重度の活動性潰瘍性大腸炎であり得る。治療は、中程度から重度の活動性潰瘍性大腸炎で苦しんでいる患者にて粘膜治癒を生じ得る。治療はまた患者によるコルチコステロイドの使用の低減、排除又は低減と排除も生じ得る。
膵炎及びインスリン依存性の糖尿病は本発明の製剤を用いて治療することができる他の疾患である。ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）は、ＢＡＬＢ／ｃ及びＳＪＬマウスと同様にＮＯＤ（非肥満糖尿病）に由来する膵外分泌腺における一部の血管によって発現されることが報告されている。ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）の発現は報告によれば、ＮＯＤマウスの膵臓の炎症を起こした島における内皮細胞上に誘導され、ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ-１）は、膵島炎の早期段階でＮＯＤの島内皮によって発現される優勢なアドレシンであった（Hanninen, A., et al., J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)）。抗ＭＡｄＣＡＭ抗体又は抗α４β７抗体によるＮＯＤマウスの処理は、糖尿病の発症を妨げた（Yang et al., Diabetes, 46:1542-1547 (1997)）。さらに、島内でのα４β７を発現するリンパ球の蓄積が認められ、ＭＡｄＣＡＭ−１が炎症を起こした島の血管への（Hanninen, A., et al., J. Clin. Invest., 92: 2509-2515 (1993)）又はマントル細胞リンパ腫における消化管への（Geissmann et al., Am. J. Pathol., 153:1701-1705 (1998)）α４β７を介したリンパ腫細胞の結合に関与するとみなされた。
本発明の製剤を用いて治療することができる粘膜組織に関連する炎症性疾患の例には、胆嚢炎、胆管炎（Adams and Eksteen Nature Reviews 6:244-251 (2006) Grant et al., Hepatology 33:1065-1072 (2001)）、たとえば、原発性硬化性胆管炎、たとえば、腸のベーチェット病、又は胆管周囲炎（胆管及び肝臓の周囲の組織）、及び移植片対宿主病（たとえば、消化管にて（たとえば、骨髄移植後）（Petrovic et al. Blood 103:1542-1547 (2004)）が挙げられる。クローン病で見られるように、炎症は粘膜表面を越えて広がることが多いので、たとえば、サルコイドーシス、慢性胃炎、たとえば、自己免疫性胃炎（Katakai et al., Int. Immunol., 14:167-175 (2002)）及び他の特発性の状態のような慢性の炎症性疾患は治療を受け入れることができる。
本発明は、粘膜組織への白血球の浸潤を阻害する方法に関する。本発明はまた癌（たとえば、リンパ腫のようなα４β７陽性腫瘍）を治療する方法にも関する。本発明の製剤を用いて治療することができる粘膜組織に関連する炎症性疾患の他の例には、乳腺炎（乳腺）及び過敏性腸症候群が挙げられる。
その病因がα４β７とのＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）の相互作用を利用する疾患又は病原体は、本明細書で記載される製剤における抗α４β７抗体によって治療することができる。そのような疾患の例にはたとえば、ヒト免疫不全ウイルス（たとえば、ＷＯ２００８１４０６０２を参照）が原因で起きる免疫不全障害が挙げられる。
本発明の製剤は、α４β７がそのリガンドに結合するのを阻害するのに有効な量で投与される。治療法については、有効な量は、所望の治療（予防を含む）効果を達成するのに十分であろう（たとえば、α４β７インテグリンが介在する結合及び／又はシグナル伝達を低減し又は妨げ、それによって白血球の接着及び浸潤及び／又は関連する細胞性の応答を阻害するのに十分な量）。有効な量、たとえば、α４β７インテグリンの飽和、たとえば、中和を維持するのに十分な力価の抗α４β７抗体は、炎症性大腸疾患において臨床的な応答又は寛解を誘導することができる。有効な量の抗α４β７抗体は、潰瘍性大腸炎又はクローン病にて粘膜治癒をもたらすことができる。本発明の製剤は単位用量又は複数回用量で投与することができる。投与量は当該技術で既知の方法によって決定することができ、たとえば、個体の年齢、感受性、認容性及び全体的な健康状態に左右され得る。投与様式の例には、たとえば、鼻内又は吸入又は経皮の投与のような局所経路、たとえば、補給チューブや座薬を介した経腸経路、及びたとえば、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、腹腔内又は硝子体内の投与のような非経口経路が挙げられる。抗体の好適な投与量は、治療当たり約０．１ｍｇ／体重ｋｇ〜約１０．０ｍｇ／体重ｋｇ、たとえば、約２ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇ、又は約３．５〜約５ｍｇ／ｋｇであり得る。特定の実施形態では、投与される用量は、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、又は約１０ｍｇ／ｋｇである。総用量は、約２２ｍｇ、約５０ｍｇ、約７２ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１６５ｍｇ、又は約４３２ｍｇであり得る。総用量は、少なくとも７７ｍｇ、少なくとも１２５ｍｇ又は少なくとも３５６ｍｇであり得る。一実施形態では、総用量は、１６５ｍｇである。別の実施形態では、総用量は、１０８ｍｇである。別の実施形態では、総用量は、２１６ｍｇである。
投与後の経時的な抗α４β７抗体の利用効率の試験からの薬物動態（ＰＫ）データを用いたモデル化及びシミュレーション（カリフォルニア大学、ＢＥＲＫＥＬＥＹ ＭＡＤＯＮＮＡ（商標）ソフトウエア）は、皮下又は筋肉内投与のための可能な投与計画を評価することができる。誘導及び維持計画についてＰＫデータを評価することができる。別のモデル化の方法は、集団薬物動態／薬力学解析（アイルランド、ダブリンのＩＣＯＮ ｐｌｃ，ＮＯＮＭＥＭ（登録商標）非線形混合効果のモデル化ツール）である。暴露レベル及びトラフレベル双方を解析することができる。
通常、標的、たとえば、α４β７インテグリンの飽和が達成された後、血中の抗体濃度は投与される用量に対して線形関係を有する。皮下又は筋肉内の経路で投与された抗α４β７抗体は、静脈内経路で投与された抗α４β７抗体の生体利用効率の約６０％〜約９０％を有する。この関係の例では、ＩＶ投与が１００％の生体利用効率を有すると仮定し、皮下投与が６９．５％の生体利用効率を有することが見い出されるとすると、そのとき、３００ｍｇの静脈内投与は皮下投与による４３２ｍｇ用量に一致し得る。従って、１５０ｍｇの静脈内投与は、６９．５％の相対生体利用効率にて２１６ｍｇの皮下投与に一致し得る。同様に、皮下投与が７５％の生体利用効率を有することが見い出され、筋肉内投与が８０％の生体利用効率を有することが見い出されるのであれば、そのとき、３００ｍｇの静脈内投与に一致するには、皮下投与は４００ｍｇ及び筋肉内投与は３７５ｍｇであり得る。実施例における表４０〜４３は、これらの関係を説明し、抗α４β７抗体の有用な用量及び投与計画を提供する。
一部の態様では、投与計画は２つの相、誘導相及び維持相を有する。誘導相では、たとえば、抗体又はその抗原結合断片に対する免疫寛容を誘導すること又は臨床な応答を誘導すること及び炎症性大腸疾患の症状を改善することのような特定の目的に好適な有効量の抗体又はその抗原結合断片を迅速に提供するような方法で、抗体又はその抗原結合断片が投与される。患者は、初めて抗α４β７抗体によって治療される場合、抗α４β７抗体療法以来、たとえば、３ヵ月を超えて、４ヵ月を超えて、６ヵ月を超えて、９ヵ月を超えて、１年を超えて、１８ヵ月を超えて又は２年を超えて長い間治療を受けていない場合、又は抗α４β７抗体の維持相の間に、炎症性大腸疾患の症状の再発、たとえば、疾患の寛解からの再発があれば、誘導相の治療を受けることができる。一部の実施形態では、誘導相の計画は、維持計画の間で維持される平均定常状態のトラフ血清濃度よりも高い平均トラフ血清濃度、たとえば、次の用量の直前の濃度を生じる。
維持相では、抗体又はその抗原結合断片は、誘導療法で達成された安定した抗体又はその抗原結合断片のレベルによる応答を継続するような方法で投与される。維持計画は症状の再発又は炎症性大腸疾患の再発を防ぐことができる。維持計画は、たとえば、単純な投与計画又は治療のための外来訪問が頻繁ではないなどのような患者に利便性を提供することができる。一部の実施形態では、維持計画には、低用量、少ない投与、自己投与及び前述の組み合わせから成る群から選択される戦略による、たとえば、本明細書で記載される製剤中の抗α４β７抗体又はその抗原結合断片の投与が含まれる。
一実施形態では、たとえば、治療法の誘導相の間、投与計画は、ヒト患者における炎症性大腸疾患の寛解を誘導するために本明細書で記載される製剤における有効量の抗α４β７抗体又は抗原結合断片を提供する。一部の実施形態では、有効量の抗α４β７抗体は、誘導相の終了までに約５iｇ／ｍｌ〜約６０iｇ／ｍｌ、約１５iｇ／ｍｌ〜約４５iｇ／ｍｌ、約２０iｇ／ｍｌ〜約３０iｇ／ｍｌ、又は約２５iｇ／ｍｌ〜約３５iｇ／ｍｌの抗α４β７抗体の平均トラフ血清濃度を達成するのに十分である。誘導相の持続時間は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、又は約８週間の治療であり得る。一部の実施形態では、誘導計画は、たとえば、本明細書で記載される製剤における抗α４β７抗体又はその抗原結合断片の高用量、頻繁な投与、及び高用量と頻繁な投与の組み合わせから成る群から選択される戦略を利用することができる。誘導投与は、１回又は１回を超える複数投与、たとえば、少なくとも２回投与であり得る。誘導相の間、用量は１日１回、２日に１回、週に２回、週に１回、１０日に１回、２週間に１回又は３週間に１回投与することができる。一部の実施形態では、誘導用量は、治療の最初の２週間以内に抗α４β７抗体によって投与される。一実施形態では、誘導投与は、治療の開始（０日目）で１回及び治療の開始後約２週間で１回であり得る。別の実施形態では、誘導相の持続時間は６週間である。別の実施形態では、誘導相の持続時間は６週間であり、最初の２週間に複数の誘導用量が投与される。
一部の実施形態では、たとえば、重度の炎症性大腸疾患の患者（たとえば、抗ＴＮＦ−α療法が上手く行かなかった患者）の治療を開始する場合、誘導相は、軽度又は中程度の患者よりも長い持続時間を有する必要がある。一部の実施形態では、重度の患者の誘導相は、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、又は少なくとも１４週間の持続時間を有することができる。一実施形態では、重度疾患の患者のための誘導投与計画は、０週目での投与（治療の開始）、２週目の投与及び６週目の投与を含むことができる。別の実施形態では、重度疾患の患者のための誘導投与計画は、０週目での投与（治療の開始）、２週目の投与、６週目の投与及び１０週目の投与を含むことができる。
一実施形態では、たとえば、治療法の維持相の間、投与計画は、平均定常状態トラフ血清濃度、たとえば、約５〜約２５μｇ／ｍＬ、約７〜約２０μｇ／ｍＬ、約５〜約１０μｇ／ｍＬ、約１０〜約２０μｇ／ｍＬ、約１５〜約２５μｇ／ｍＬ又は約９〜約１３μｇ／ｍＬの抗α４β７抗体の次の投与直前のプラトー濃度を維持する。別の実施形態では、投与計画は、たとえば、治療法の維持相の間、約２０〜約３０μｇ／ｍＬ、約２０〜約５５μｇ／ｍＬ、約３０〜約４５μｇ／ｍＬ、約４５〜約５５μｇ／ｍＬ又は約３５〜約４０μｇ／ｍＬの抗α４β７抗体の平均定常状態トラフ血清濃度を維持する。別の実施形態では、投与計画は、たとえば、治療法の維持相の間、約１５〜約４０μｇ／ｍＬ、約１０〜約５０μｇ／ｍＬ、約１８〜約２６μｇ／ｍＬ、又は約２２〜約３３μｇ／ｍＬの抗α４β７抗体の長期の平均血清濃度、たとえば、暴露（たとえば、曲線下面積−濃度−時間）を維持する。さらに別の実施形態では、投与計画は、たとえば、治療法の維持相の間、約３５〜約９０μｇ／ｍＬ、約４５〜約７５μｇ／ｍＬ、約５２〜約６０μｇ／ｍＬ又は約５０〜約６５μｇ／ｍＬの抗α４β７抗体の長期の平均血清濃度、たとえば、暴露（たとえば、曲線下面積−濃度−時間）を維持する。
最終投与形態は、抗体製剤の約０．５ｍｌにて、約１ｍｌにて、約１．５ｍｌにて、約２ｍｌにて、約２．５ｍｌにて、約３ｍｌにて全体用量を含むことができる。
静脈内投与用の最終投与形態は、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．０〜約１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ〜約１．３ｍｇ／ｍｌ、又は約１．３ｍｇ／ｍｌ〜約１．４ｍｇ／ｍｌの間の濃度であり得る。最終投与形態は、約０．６ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ、約１．６ｍｇ／ｍｌ、約１．８ｍｇ／ｍｌ又は約２．０ｍｇ／ｍｌであり得る。
用量は、１週当たり1回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回、６週ごとに１回、８週ごとに１回、又は１０週ごとに１回投与することができる。さらに高い又は頻繁な用量、たとえば、２日に１回、１週当たり1回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回は、活動性疾患の寛解を誘導するために又は新しい患者を治療するために、たとえば、抗α４β７抗体に対して寛容を誘導するために有用であり得る。２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回、５週ごとに１回、６週ごとに１回、８週ごとに１回、又は１０週ごとに１回の用量は、予防療法のために、たとえば、慢性疾患の患者で寛解を維持するために有用であり得る。態様の１つでは、治療計画は、０日目、約２週間、約６週間での、又はその後１〜２週間ごとの治療である。別の態様では、誘導治療計画は合計６回の治療について２日に１回の治療である。
投与計画は患者の炎症性大腸疾患において臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導するために最適化することができる。一部の実施形態では、投与計画は治療を受けている患者の脳脊髄液にてＣＤ４とＣＤ８の比を変えない。
一部の態様では、長く続く臨床的な寛解、たとえば、治療の開始後６ヵ月又は１年以内で担当医との少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回の外来を介して持続する臨床的な寛解は最適化された投与計画によって達成され得る。
一部の態様では、長く続く臨床的な応答、たとえば、治療の開始後少なくとも６ヵ月、少なくとも９ヵ月、少なくとも１年持続する臨床的な応答は最適化された投与計画によって達成され得る。
製剤は単回注射又は複数回注射によって皮下に投与され得る。たとえば、単回注射の体積は約０．５ｍｌ〜約３ｍｌに及び得る。実施形態では、単回注射の体積は約０．６ｍｌ〜約１．１ｍｌ又は約１ｍｌ〜約３ｍｌであり得る。態様の１つでは、単回注射の体積は約１ｍｌである。皮下で製剤を投与するのに使用される針のゲージは、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９又は約３０Ｇであり得る。
製剤は単回注射又は複数回注射によって筋肉内に投与され得る。たとえば、単回注射の体積は約０．５ｍｌ〜約５ｍｌに及び得る。実施形態では、単回注射の体積は約２ｍｌ〜約５ｍｌ、約０．６ｍｌ〜約１．１ｍｌ又は約１ｍｌ〜約３ｍｌであり得る。態様の１つでは、単回注射の体積は約１ｍｌ、約２ｍｌ、約３ｍｌ、約４ｍｌ又は約５ｍｌである。筋肉内で製剤を投与するのに使用される針は、約５／８”、約７／８”、約１”、約１．２５”、約１．５”、約２”又は約３”であり得る。筋肉内投与についての針のゲージは２０〜２２Ｇの間であり得る。
態様の１つでは、本発明は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法に関するものであり、方法は、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者に投与する工程を含み；ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：（ａ）１日ごとの皮下注射として１６５ｍｇの初回用量のヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を６回投与；（ｂ）その後の必要に応じて２週間ごと又は４週間ごとの皮下注射として１６５ｍｇの７回目及びその後の用量のヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片に従って、患者に投与され；投与は、患者の炎症性大腸疾患における臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；さらに、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
態様の１つでは、本発明は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法に関するものであり、該方法は、炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：（ａ）静脈内点滴としてのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片３００ｍｇの初回の静脈内投与、（ｂ）その後の、静脈内点滴としてのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片３００ｍｇの第２の静脈内後続投与、（ｃ）その後の、６週目で開始する、必要に応じて１週ごと、２週ごと、又は３週ごとの皮下注射としてのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片１６５ｍｇの第３の後続投与に従って患者に投与し、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
別の態様では、本発明は、炎症性大腸疾患の治療療法についての投与計画に関するものであり、該投与計画は、炎症性大腸疾患で苦しむ患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約９〜約１３μｇ／ｍＬの免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均定常状態トラフ血清濃度を維持する皮下の又は筋肉内の投与計画に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
別の態様では、本発明は、炎症性大腸疾患の治療療法についての投与計画に関するものであり、該投与計画は、炎症性大腸疾患で苦しむ患者にヒトα４β７インテグリンに対する結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、約３５〜約４０μｇ／ｍＬのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の定常状態血清トラフ濃度を維持する皮下の又は筋肉内の投与計画に従って患者に投与され、該投与計画が患者の炎症性大腸疾患における臨床な応答及び臨床的な寛解を誘導し；且つさらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片がα４β７複合体に対して結合特異性を有し；抗原結合領域が、以下で示すアミノ酸配列の軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む：軽鎖ＣＤＲ１ 配列番号：９，ＣＤＲ２ 配列番号：１０，ＣＤＲ３ 配列番号：１１；重鎖：ＣＤＲ１ 配列番号：１２，ＣＤＲ２配列番号：１３，ＣＤＲ３ 配列番号：１４。
一部の実施形態では、治療の方法、用量又は投与計画は、患者が抗α４β７抗体に対するＨＡＨＡ反応を発生する可能性を低減する。たとえば、抗α４β７抗体に反応性である抗体によって測定されるようなＨＡＨＡの発生は、抗α４β７抗体のクリアランスを高めることができ、たとえば、抗α４β７抗体の血清濃度を下げることができ、たとえば、α４β７インテグリンに結合した抗α４β７抗体の数を減らすので、治療効果を下げてしまう。一部の実施形態では、ＨＡＨＡを防ぐために、その後に維持計画が続く誘導計画によって患者を治療することができる。一部の実施形態では、誘導計画と維持計画の間には休止期間はない。一部の実施形態では、誘導計画は複数用量の抗α４β７抗体を患者に投与することを含む。ＨＡＨＡを防ぐために、抗α４β７抗体による治療法を開始する場合、高い初回用量、たとえば、少なくとも１．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも３ｍｇ／ｋｇ、少なくとも５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも８ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ又は約２〜約６ｍｇ／ｋｇ、又は頻繁な初回投与、たとえば、ほぼ１週間当たり１回、ほぼ２週ごとに１回又はほぼ３週ごとに１回の標準用量で患者を治療することができる。一部の実施形態では、治療方法は、患者の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％をＨＡＨＡ陰性として維持する。他の実施形態では、治療方法は、少なくとも６週間、少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、少なくとも６ヵ月間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、又は治療法の持続期間について患者をＨＡＨＡ陰性として維持する。一部の実施形態では、患者又はＨＡＨＡを発生している患者の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％又は少なくとも６０％は抗α４β７抗体の低力価、たとえば、≦１２５を維持する。実施形態では、治療方法は、患者の少なくとも７０％を抗α４β７抗体による治療法を開始した後少なくとも１２週間、ＨＡＨＡ陰性として維持する。
製剤は、単独で又は別の剤と併用して個体（たとえば、ヒト）に投与され得る。本発明の製剤は、追加の剤の投与の前、それと共に、又はその後投与することができる。一実施形態では、α４β７インテグリンのそのリガンドへの結合を阻害する１を超える製剤が投与される。そのような実施形態では、剤、たとえば、抗ＭＡｄＣＡＭ又は抗ＶＣＡＭ−１モノクローナル抗体のようなモノクローナル抗体を投与することができる。別の実施形態では、追加の剤はα４β７経路とは異なる経路における白血球の内皮リガンドへの結合を阻害する。そのような剤は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体９（ＣＣＲ９）を発現するリンパ球の胸腺が発現するケモカイン（ＴＥＣＫ又はＣＣＬ２５）又はＬＦＡ−１の細胞内接着分子（ＩＣＡＭ）への結合を阻害する剤への結合を阻害することができる。たとえば、抗ＴＥＣＫ抗体又は抗ＣＣＲ９抗体又はＰＣＴ公開ＷＯ０３／０９９７７３又はＷＯ０４／０４６０９２で開示された阻害剤のような小分子ＣＣＲ９阻害剤、又は抗ＩＣＡＭ−１抗体、又はＩＣＡＭの発現を妨げるオリゴヌクレオチドが、本発明の製剤に加えて投与される。さらに別の実施形態では、追加の有効成分（たとえば、たとえば、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、５−アミノサリチル酸含有抗炎症剤のような抗炎症性化合物、別の非ステロイド性抗炎症性化合物、ステロイド性抗炎症性化合物、又はＩＢＤの制御のために一般に投与される抗生剤（たとえば、シプロフロキサシン、メトロニダゾール）、又は他の生物剤（たとえば、ＴＮＦα拮抗剤）を本発明の製剤と併用して投与することができる。
実施形態では、一緒に投与される薬剤の用量は、抗α４β７抗体を含む製剤による治療期間の間、経時的に減らすことができる。たとえば、抗α４β７抗体製剤による治療の開始時、又はその前にステロイド（たとえば、プレドニゾン、プレドニゾロン）で治療されていた患者は、抗α４β７抗体製剤による治療の早ければ６週間で開始するステロイドの用量を減らす投薬計画を受けることになる。ステロイドの用量は、当初の薬量漸減の４〜８週以内で約２５％、抗α４β７抗体製剤による治療の間の薬量漸減の約８〜１２週で５０％及び約１２〜１６週で７５％減らされるであろう。態様の１つでは、抗α４β７抗体製剤による治療の約１６〜２４週までにステロイド投与は排除することができる。別の例では、抗α４β７抗体製剤による治療の開始時、又はその前に６−メルカプトプリンのような抗炎症性化合物で治療されていた患者は、上記で言及したようにステロイド投与についての薬量漸減計画に類似する抗炎症性化合物の用量を低下させる投薬計画を受けることになる。
一実施形態では、方法は有効量の本発明の製剤を患者に皮下投与すること又は筋肉内投与することを含む。別の実施形態では、製剤を自己投与用に調製することができる。
製剤が固体、たとえば、乾燥状態であるならば、投与の過程は製剤を液体状態に変換する工程を含むことができる。態様の１つでは、注射、たとえば、静脈内、筋肉内又は皮下の注射で使用するために、たとえば、上述のような液体によって乾燥製剤を再構成することができる。別の態様では、固体の又は乾燥した製剤を、たとえば、貼付剤、クリーム、エアゾール又は座薬にて局所に投与することができる。
本発明は、分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）を発現している組織の白血球浸潤に関連する疾患を治療する方法にも関する。方法は、それを必要とする患者に有効量の本発明の抗α４β７抗体製剤を投与することを含む。実施形態では、疾患は移植片対宿主病である。一部の実施形態では、疾患は、分子ＭＡｄＣＡＭ（たとえば、ＭＡｄＣＡＭ−１）を発現している消化管関連の内皮へのα４β７インテグリンを発現している白血球の結合の結果としての組織の白血球浸潤に関連する疾患である。他の実施形態では、疾患は胃炎（たとえば、好中球性胃炎又は自己免疫性胃炎）、膵炎、又はインスリン依存性糖尿病である。さらに他の実施形態では、疾患は、胆嚢炎、胆管炎又は胆管周囲炎である。
本発明はまた、患者において炎症性大腸疾患を治療する方法にも関する。一実施形態では、方法は有効量の本発明の抗α４β７抗体製剤を患者に皮下投与することを含む。一部の実施形態では、炎症性大腸疾患は潰瘍性大腸炎又はクローン病である。他の実施形態では、炎症性大腸疾患はセリアック病、血清陰性の関節症に関連する腸疾患、顕微鏡的又はコラーゲン性の大腸炎、胃腸炎（たとえば、好中球性胃腸炎）、又は回腸嚢炎である。
一部の実施形態では、抗α４β７抗体による治療はＣＤ４：ＣＤ８リンパ球の比を変えない。ＣＤ４：ＣＤ８の比は血液、リンパ節吸引液及び脳脊髄液（ＣＳＦ）にて測定することができる。健常な個体におけるＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋のリンパ球の比は通常約１以上である（Svenningsson et al., J. Neuroimmunol. 1995;63:39-46; Svenningsson et al., Ann Neurol. 1993; 34:155-161）。免疫調節剤はＣＤ４：ＣＤ８の比を１未満に変化させることができる。
製造物品
別の態様では、本発明は、本発明の医薬製剤を含有し、使用のための指示書を提供する製造物品である。製造物品は容器を含む。好適な容器には、たとえば、ビン、バイアル（たとえば、二重チャンバーバイアル、針付き又は針なしの液体製剤のバイアル、針付き又は針なしの再構成液のバイアル付き又はなしの固体製剤のバイアル）、シリンジ（たとえば、二重チャンバーシリンジ、事前負荷したシリンジ、自動注入器）、カートリッジ及び試験管が挙げられる。容器は、たとえば、ガラス、金属又はプラスチックのような種々の物質から形成され得る。容器は、製剤とその上の又はそれに関連するラベルを保持し、容器は使用のための指示を示し得る。別の実施形態では、製剤は自己投与のために調製され、及び／又は自己投与のための指示書を含有することができる。態様の１つでは、製剤を保持する容器は単回使用バイアルであり得る。別の態様では、製剤を保持する容器は複数回使用バイアルであってもよく、それは再構成された製剤の１を超える部分を用いて製剤の反復投与（たとえば、２〜６回の投与）を可能にする。製造物品はさらに、他の緩衝液、希釈液、充填剤、針、シリンジ、前の項で言及した使用のための指示書を伴った添付文書を含む、商業的な見地及びユーザーの見地から望ましい他の物質を含み得る。
一実施形態では、製造物品は針付きのシリンジである。針のゲージは２５Ｇ、２６Ｇ、２７Ｇ、２９Ｇ、３０Ｇであり得る。薄壁針、たとえば、１９Ｇ又は２３Ｇ以上は粘度の高い製剤の注入を円滑にすることができる。態様の１つでは、針のゲージは２７Ｇ以上である。針の長さは皮下投与に好適であればよく、長さ１／２インチ、約５／８インチ又は１インチであることができる。一部の実施形態では、シリンジは事前に充填されたシリンジである。
事前に充填されたシリンジ製品の開発
一部の態様では、事前に充填されたシリンジ（ＰＦＳ）（たとえば、皮下送達又は筋肉内送達のための製剤の投与で使用するための）におけるタンパク質製品（たとえば、抗α４β７抗体）にとって望ましい幾つかの製品特質がある。競合する効果を軽減するために特質の一部のバランスを取ることは役に立つ。たとえば、少ない注入体積が所望である場合、製剤の高いタンパク質濃度が好まれ得る。しかしながら、タンパク質濃度が高い場合、不純物形成（たとえば、シリンジから製剤ににじみ出る凝集した不純物）の比率が高く、シリンジを操作するのに必要な手動力が高くなり得る。注射部位で心地よい患者に使用するサイズの小さな針はシリンジを操作するのに大きな力を必要とし得る。たとえば、タンパク質濃度、ｐＨ及び針の内径のような製剤と針双方のパラメータによって製品の安定性及び性能はどのように影響を受けるのかを理解することはタンパク質製品（たとえば、事前に充填されたシリンジにおける抗α４β７抗体）を開発するのに役立つ。
態様の１つでは、事前に充填されたシリンジで使用するためのタンパク質製品（たとえば、抗α４β７抗体）を開発する方法は、シリンジのパラメータ及び製剤のパラメータを一緒に、たとえば、協調した方式で又は同時に変えることを含む。各態様が別々に又は連続して変わるのであれば、これは、事前に充填されたシリンジにおけるタンパク質製品から期待され得る製品の安定性及び製品の性能の範囲のよりよい理解をもたらすことができる。
事前に充填されたシリンジ製品（たとえば、抗α４β７抗体）の開発は、ある時点で事前に充填されたシリンジの幾つかの成分と接触する液体製剤があるという理解に関連する（図１５）。たとえば、製剤は注射筒と接触し得るが、それは、ガラス（たとえば、Ｉ型のホウケイ酸ガラス）又はプラスチック（たとえば、環状オレフィンポリマー（ＣＯＰ）、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）、ポリプロピレン又はポリテトラフルオロエチレン）から構築され得る。製剤は、シリンジ、プランジャー及び／又は先端キャップと接触し得るが、それらは、エラストマー（たとえば、同じ又は異なる物質（たとえば、ポリエチレン、ポリスチレン又はポリプロピレンのようなプラスチック又はゴム（天然、合成、ブチル）若しくはシリコーンのような伸縮素材）の）であり得る。製剤はプランジャーの動きを容易にするために注射筒に加えられる潤滑剤と接触し得る。潤滑剤は、たとえば、シリコーン油、鉱物油又はグリセリンであり得る。提供された針付きシリンジの実施形態では、金属合金針（たとえば、ステンレススチール針及び針をその場で止める接着剤）があり得る。事前に充填されたシリンジにおけるタンパク質製品について熟慮すべき事柄は、液体のタンパク質溶液が製品の有効期間全体を通してこれらのシリンジ構成成分の１以上に直接接触するということである。製剤及びシリンジ構成成分の双方がタンパク質の安定性に影響を有することができる。
事前に充填されたシリンジ製品の安定性に影響を及ぼすことができる製剤のパラメータには、タンパク質の濃度、ｐＨ、緩衝液の種類、イオン強度、安定剤の種類及び安定剤の濃度が挙げられる。タンパク質製剤のための安定剤の例には、たとえば、イオン性の塩、多糖類、アミノ酸、抗酸化剤、キレート剤、及び前の項で記載したような界面活性剤が挙げられる。
事前に充填されたシリンジ製品の安定性に影響を及ぼすことができるシリンジ構成成分には、たとえば、潤滑剤、プランジャー及び先端キャップの組成、及び不純物が挙げられる。潤滑剤（たとえば、注射筒におけるシリコーン油）の量は製品の安定性に影響を及ぼし得る。これらの構成成分の酸素透過性に影響を及ぼし、タンパク質製品（たとえば、抗α４β７抗体製剤）のこれら構成成分から浸出物を導入することができるプランジャー及び先端キャップの組成も製品の安定性に影響を及ぼし得る。製品の安定性に影響を及ぼし得る別のシリンジのパラメータには、（たとえば、筒（たとえば、ガラスの筒）及び／又は針（たとえば、ステンレススチールの針）から）製品製剤ににじみ出すことができる不純物（たとえば、重金属（たとえば、タングステン））の種類及び／又は量が挙げられる（Ludwig et al. J.Pharm. Sci.99:1721-1733 (2010); Nashed-Samuel et al., American Pharmaceutical Review Jan/Feb:74-80 (2011); Badkar et al. AAPS PharmSciTech 12:564-572も参照）。
事前に充填されたシリンジは手動で注入に用いることができ、又は自動注入装置と共に使用することができる。事前に充填されたシリンジの機能性試験には、抜け出し力、プランジャーを動かし始めるのに必要な力、及び滑り力、シリンジの内容物を一定の速度で注入するのに必要な力を測定することが挙げられる。事前に充填されたシリンジの機械的な性能は、たとえば、製剤の粘度及びシリンジにおける潤滑剤（たとえば、シリコーン油）の量のような製剤及びシリンジの幾つかのパラメータに左右され得る。
事前に充填されたシリンジにおけるタンパク質製品の幾つかの特質及びこれらの製品特質に影響を及ぼすことができる製剤及びシリンジの因子を表１に示す。多数の製品特質は、製剤及びシリンジの幾つかのパラメータの複雑な関数であり得る。たとえば、粘度は、たとえば、タンパク質濃度、安定剤濃度及びｐＨのような製剤の幾つかの因子に左右され得るが、シリンジの滑り力は製剤の粘度の関数である。
Figure 2014515763
態様の１つでは、たとえば、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０のような界面活性剤を、事前に充填されたシリンジにおけるタンパク質製剤に加えることができる（たとえば、液体／空気及び／又は液体／潤滑剤（たとえば、シリコーン油）の界面でタンパク質分子が吸着する及び変性するのを防ぐために）。タンパク質の表面での吸着及び変性は、目に見えにくい及び目で見えるタンパク質様粒子の核生成のメカニズムの１つであり得る。従って、事前に充填されたシリンジへの界面活性剤の添加は、事前に充填されたシリンジの製品における目に見えにくい及び目で見える粒子の形成を低減することができる。一実施形態では、少量の界面活性剤は潤滑剤を乳化することができる（たとえば、シリコーン油は溶液にて油滴を作り、それによって目に見えにくい及び目で見える潤滑剤（たとえば、シリコーン油の油滴）の形成を低減する）（上記Ludwig et al.,）。別の実施形態では、タンパク質製剤に対する多量の界面活性剤の有害効果の可能性があるので製剤における界面活性剤の量をできるだけ減らす。ポリソルベートに存在する過酸化物不純物は、タンパク質の高い酸化をもたらすことができる（Wang and Wang J. Pharm. Sci.91:2252-2264 (2002)）。多量の界面活性剤はシリンジの壁からのシリコーン油の有意な量を乳化することができ、有効期間にわたって機能的な滑り力の上昇をもたらすことができる。製品開発の研究は、製品の安定性及びシリンジの性能の双方に対する様々な界面活性剤レベルの効果を調べるように設計されるべきである。
タンパク質／ＰＦＳ系における製剤のパラメータとシリンジのパラメータの間での複雑な相互作用は、設計による質（ＱｂＤ）又は実験アプローチの設計（ＤＯＥ）を用いたこれらの系の試験に適している。製剤のパラメータとシリンジのパラメータを同時に変化させてこれらの複雑な系のよりよい理解を得る試験を設計することができる。これは、事前に充填されたシリンジ製品の開発に対する包括的なアプローチを生じる。表２は、事前に充填されたシリンジ製品のための実験の設計及び採用される分析試験の例を検討する入力パラメータ及びレベルの例を示す。ＱｂＤ試験に使用される実験設計の種類に応じて、実験の数は、スクリーニング設計の９から完全要因の設計（考えられる組み合わせすべて）の８１まで変化し得る。実験の数が多ければ多いほど、解決できる製品パラメータ間の相互作用の数が多い。この分析のために設計されたソフトウエア、たとえば、ＪＭＰ（登録商標）統計発見ソフトウエア（ノースカロライナ州、カリー）はＱｂＤ試験に役立ち得る。この分析は、製剤のパラメータとシリンジのパラメータがどのように相互作用して製品特質に影響を及ぼすかの定量的な理解を生じる。
Figure 2014515763
表２に示した例の実験から得ることができる予測モデルの例を以下に提供するが、式中Ｃｎは数値定数である。
経時的な可溶性凝集体の形成＝Ｃ0＋Ｃ１［タンパク質濃度］＋Ｃ２［タンパク質濃度］２＋Ｃ３［ｐＨ］＋Ｃ４［界面活性剤濃度］＋Ｃ５［潤滑剤の量］
シリンジの多数のパラメータが製品の安定性及び性能に影響を及ぼすことができるので、実施形態には、シリンジのパラメータにおける許容可能な認容性が製品の安定性及び性能にどのように影響を及ぼすのかという性状分析が含まれる。注射筒における潤滑剤（たとえば、シリコーン油）の量は、シリンジごとによって５０〜１００％変化し得る。量におけるこの変異は、表１に示すように製品の幾つかの特徴に影響を及ぼし得る。注射筒の内径は、注入力に影響を及ぼすシリンジごとに変化し得る。提供された針付きシリンジについては、針の内径は、ロットごとに又はメーカーごとに異なり、それは注入力に影響を及ぼすであろう。シリンジのパラメータが性能にどのように影響を及ぼすかを調べるＱｂＤアプローチを用いて、シリンジのパラメータにおける許容可能な認容性が製品性能にどのように影響を及ぼすかを推定するのに使用することができる予測モデルを得ることができる。ＱｂＤアプローチを用いて得られる予測モデルを用いて所望の製品特質を満たす製剤及びシリンジのパラメータを選択し、製品の安定性及び性能を予測することができる。
事前に充填されたシリンジは、タンパク質製剤へのシリコーンエマルジョン又はタングステンの添加を含有し得る。事前に充填されたシリンジに存在し得るシリコーンの例となる量は約０．３ｍｇ〜約０．８ｍｇの範囲である。態様の１つでは、事前に充填されたシリンジに存在し得るシリコーンの量は、約０．３ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．７ｍｇ、又は約０．８ｍｇである。別の態様では、製剤の粘度は、２００ｍｍ／分の速度で５Ｎ〜８０Ｎの注入力を生じる２〜６０ｃＰの範囲であろう。その上さらに別の態様では、製剤の粘度は２００ｍｍ／分の速度で１０Ｎ〜４０Ｎの注入力を生じる４〜２７ｃＰの範囲であろう。
以下の実施例を参照することによって本発明はさらに完全に理解されるであろう。しかしながら、それらは本発明の範囲を限定するとして解釈されるべきではない。文献及び特許の引用はすべて参照によって本明細書に組み入れられる。
製剤を作製するためのプロトコール
接線流濾過システムにて抗α４β７抗体の溶液を透析濾過し、クエン酸塩、ヒスチジン、アルギニン緩衝液にて特定の濃度に到達させ、次いで、プールし、クエン酸塩、ヒスチジン、アルギニン緩衝液におけるポリソルベート８０の溶液と混合する。２Ｌ又は５Ｌのビンにて溶液を−７０℃で保存する。次いで溶液を融解し、０．２μｍのフィルターで２回濾過する。およそ１．０ｍＬを無菌シリンジに充填し、無菌プランジャー（ストッパー）で閉鎖する。製剤を保存し、最終薬剤製品を２〜８℃のシリンジにて出荷する。
実施例１：製剤の製造
因子
賦形剤の濃度
抗体製剤における凝集体の形成を調べた。タンパク質濃度、ｐＨ及び界面活性剤：タンパク質のモル比を調べる実験データからＳＥＣ凝集体モデルを開発した。６．０〜６．５のｐＨ範囲では、凝集体の形成は、ポリソルベート８０とタンパク質のモル比０．７〜１．５に類似していた（図６）。一般に、１．５より高いＰＳ８０とタンパク質の比では、凝集体形成の速度はｐＨの上昇と共に高くなる（図７）。
空気の存在下でのＳＥＣ凝集体の形成を調べる実験を行った。１１の組成を変えた様々な製剤をボロケイ酸バイアルに入れ、空気の上部空間と共にエラストマーのストッパーで栓をした。同一セットの製剤を作って空気の上部空間をアルゴンで置き換えた。これらの試料を４０℃にて２週間、安定して置いた。空気の上部空間がある試料はすべて、アルゴンの上部空間がある同じ製剤と比較して実験の終了時に大量の凝集体を生じた。
Figure 2014515763
これらの実験に基づいて、ＳＥＣ凝集体は、酸化によって又はジスルフィド結合によって形成すると仮定された。抗酸化剤及び／又はキレート剤の添加を調べた。ｐＨ６．６にてポリソルベート８０とタンパク質のモル比１．５と共に４０ｍＭのヒスチジン、９０ｍＭのアルギニン及び１６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有する製剤を作製した。製剤に２５ｍＭのクエン酸塩、５ｍＭのクエン酸塩、５ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのシステイン又は５ｍＭのシステインを加えた。３種の添加した賦形剤はすべて凝集体の形成を抑えた（図８）。抗酸化剤及び／又はキレート剤の添加は性能の順に、クエン酸塩＞ＥＤＴＡ＞システインとしてランク付けされた。５ｍＭ又は２５ｍＭのクエン酸塩は対照の製剤と比べてＳＥＣ凝集体の形成を抑えた。
ｐＨ、タンパク質濃度、クエン酸塩濃度、ヒスチジン濃度及びポリソルベート８０とタンパク質のモル比の影響を判定する実験を行った。ｐＨは６．０〜６．３で変化させ、タンパク質濃度は６０〜１６０ｍｇ／ｍＬで変化させ、クエン酸塩濃度は０〜２５ｍＭで変化させ、ヒスチジン濃度は２５〜５０ｍＭで変化させ、ポリソルベート８０とタンパク質のモル比は０．７〜１．５で変化させた。製剤は、１ｍＬ長さ２７Ｇ1／２”のシリンジ（０．５５±０．２ｍｇのシリコーン）に充填した。製剤はすべて約１２５ｍＭのアルギニンを含有した。
ＣＥＸ及びＳＥＣを用いて、４０℃にて２週間、安定性を調べた。結果（図９及び表４）は、タンパク質濃度を高めることが凝集体形成の比率を高めた一方で、製剤における２５ｍＭのクエン酸塩の存在下で凝集体形成の低下を示している。５℃での単量体の量が２４ヵ月まで本質的に変化しない一方で、単量体の量は２５℃及び４０℃では凝集体形成に対して対向する傾向を示す（表５）。
別のセットの製剤は、４０℃、２５℃、５℃での４０〜６３ｍＭのクエン酸塩は存在するが、ヒスチジンは存在しない場合のＳＥＣ凝集体の形成比率を調べた。これらの製剤における凝集体形成の比率は４０℃にてヒスチジンを伴った製剤よりもやや高かった。しかしながら、５℃では、クエン酸塩を伴うが、ヒスチジンを伴わない製剤における凝集体の形成比率は、クエン酸塩とヒスチジンを含有する製剤に匹敵した（表６）。また５℃では、単量体の量は、２４ヵ月まで本質的に変化しなかった（表７）。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
ｐＨ
幾つかのｐＨ実験を行って５℃でのＣＥＸ分解に対するｐＨを影響を確定した。ベドリズマブ抗体製剤は、１６０ｍｇ／ｍＬの抗α４β７抗体、１２５ｍＭのアルギニン、５０ｍＭのヒスチジン及び２５ｍＭのクエン酸塩で構成された。４０℃、２５℃及び５℃での安定性について幾つかの異なるｐＨレベル、６．３、６．５、６．７及び６．９を調べた。
４０℃でのＣＥＸモデル（図１０）は、ｐＨがＣＥＸ分解に最も影響を及ぼすことを示している。ヒスチジンを含有する製剤のｐＨは温度の上昇とともに低下するが、クエン酸塩製剤のｐＨは温度に影響されないことが示された（図１１）。ヒスチジン／クエン酸塩製剤は、４０℃にて１週間後、ｐＨ６．８にて、２５℃にて６ヵ月後ｐＨ６．３〜６．５にて及び５℃にて６ヵ月後ｐＨ６．３〜６．５にて良好な安定性を有することが確定された。追加の試験に基づいて、製剤の安定性は、６．２〜６．９のｐＨ範囲にて２５℃と５℃では類似していた（表８及び9）
Figure 2014515763
Figure 2014515763
実施例２
安定性
１２ヵ月の経過にわたって安定性について４つの異なる抗α４β７抗体製剤を調べた。６．０〜６．２のｐＨを有する製剤は、６．３〜６．４のｐＨを有する製剤よりもおよそ１〜２％少ない主要種を示した（図１２）。６．３〜６．４のｐＨを有する製剤は、５℃にて塩基性種又は主要種において１％未満の変化を示した。
１２ヵ月の経過にわたってＳＥＣによる安定性について１０の異なる抗α４β７抗体製剤を調べた（表１０）。６０ｍｇ/ｍＬのタンパク質濃度で２５ｍＭのクエン酸塩を含有する製剤が１年後０．１〜０．２％の凝集体の変化を有した一方で、１６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質と２５ｍＭのクエン酸塩を含有する製剤は、１年にわたって０．２〜０．３％の凝集体の増加を有した。クエン酸塩を伴わない６０、１１０又は１６０ｍｇ／ｍＬを含有する製剤については、０．４〜０．６％の凝集体の増加があった。
Figure 2014515763
実施例３
粘度
医薬製剤を投与するのに必要とされる注入力は製剤の粘度に関係する。様々なｐＨを持ち、様々な濃度のタンパク質、アルギニン、ヒスチジン、クエン酸塩、スクロース及びポリソルベート８０を伴った製剤を作製した。これらの製剤の粘度を調べた。Ｌｎ（粘度）の統計モデルを開発した。モデルは、粘度が主としてタンパク質の濃度及びｐＨに影響されることを示した（図１３）。スクロース、ヒスチジン及びアルギニンも粘度に対して軽微な影響を有することができる。一部のタンパク質製剤では、塩化ナトリウムを加えて製剤の粘度を低下させる。しかしながら、粘度に対する塩化ナトリウムの効果はタンパク質及び製剤に依存性であることが分っている。
１４０ｍｇ／ｍｌのベドリズマブ、１２５ｍＭのアルギニン、２５ｍＭのヒスチジン、２５ｍＭのクエン酸塩及びポリソルベート８０とタンパク質のモル比１．５でのポリソルベート８０を含有し、６．４のｐＨである製剤に塩化ナトリウムを加えた。ＮａＣｌは製剤の粘度に影響を有さなかった。
調べた種々のシリンジの注入力に対する粘度の影響を図１６Ａ及び１６Ｂに示す。
実施例４
方法
カチオン交換クロマトグラフィ（ＣＥＸ）
高速液体クロマトグラフィ方式にて弱カチオン交換カラムでリン酸塩／塩化ナトリウムの勾配を用いて抗α４β７抗体製剤における荷電種を分離し、抗体種の電荷組成を測定する。主要アイソフォームの前に酸性アイソフォームが溶出し、主要アイソフォームの後に塩基性アイソフォームが溶出する。
ＣＥＸアッセイを用いて生成したベドリズマブ製剤の安定性データは、主要アイソフォームの％が５５．０％を上回ることを示した。
キャピラリ等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）
ｉＣＥ２８０全カラム検出ｃＩＥＦシステム（オンタリオ州、トロントのＣｏｎｖｅｒｇｅｎｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてｃＩＥＦを行う。両性電解質はメーカーによって推奨されるように選択することができ、市販の両性電解質の組み合わせであり得る。有用な組み合わせは、３〜１０及び５〜８のＰＨＡＲＭＡＬＹＴＥ（商標）（ニュージャージー州、ピスカタウエイのＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）である。
ｃＩＥＦアッセイを用いて生成したベドリズマブ製剤の安定性データは、主要アイソフォームの％は約５３％であり、酸性種は約４２％であり、塩基性種は約５％であることを示した。
サイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）
分析用ＳＥＣカラム（ペンシルベニア州、キングオブプラシャのＴｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ）を用いてＳＥＣを行う。移動相はリン酸緩衝化生理食塩水溶液であり、吸収は２８０ｎｍでモニターする。
ＳＥＣアッセイを用いて生成したベドリズマブ製剤の安定性データは、単量体の％は９９．０％であり、凝集体の％は＜０．５％であり、低分子量物質の％は＜１.０％であることを示した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥアッセイ
還元条件では４〜２０％及び非還元条件では４〜１２％にてＩｎｖｉｔｏｒｇｅｎ（カリフォルニア州、カールスバッド）のトリス／グリシンゲルを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う。再構成した抗体製剤を液体製剤緩衝液で希釈し、次いで、１０％の２−メルカプトエタノールと共に（還元試料緩衝液）又は２−メルカプトエタノールを含まずに（非還元試料緩衝液）トリス／グリシンＳＤＳ試料緩衝液（２Ｘ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１：２に希釈する。試料を手短に加熱し、分子量マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と対比させて負荷する。メーカーの指示書に従ってコロイド状のクマシーブルー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によってゲルを染色する。濃度測定法によってタンパク質バンドを解析し、還元ゲルでは重鎖及び軽鎖の％を特定し、非還元ゲルではＩｇＧの％を特定する。
結合有効性
ＰＢＳ、０．０１％アジ化ナトリウム中１％ＢＳＡに浮遊させたＨｕＴ７８細胞（ヒトＴ細胞リンパ腫細胞、バージニア州、マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクション）を連続希釈した一次試験抗体と接触させる。氷上でインキュベートした後、細胞を洗浄し、蛍光標識した二次抗体で処理する。さらに洗浄した後、細胞を固定し、フローサイトメトリー（ニュージャージー州、フランクリンレイクスのＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）による解析のためにＦＡＣＳ試薬に浮遊させる。また、米国特許第７，１４７，８５１号も参照のこと。
Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒによる水分
電量Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ水分決定法のために製剤をメタノールで滴定する。
実施例５
抗α４β７抗体製剤を事前に充填したシリンジ製品からのシリコーンの影響
Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−アルギニン塩酸塩、クエン酸塩及びポリソルベート８０を含有する緩衝液にて６０〜１６０ｍｇの抗α４β７抗体タンパク質を含有する皮下製剤を用いてタンパク質製剤の安定性及び容器／蓋の特質に対するシリコーンの影響を調べる。試験は０．５ｍＬ分量で行う。
タンパク質濃度、ポリソルベート８０とタンパク質のモル比、及び注射筒に噴霧されるシリコーンの量を含むパラメータを調べる。入力パラメータのそれぞれの範囲を表１１に示す。
Figure 2014515763
実験の設計を用いて調べる製剤のセットを決定する。製剤の理に適った数は６〜８の製剤の範囲である。調べる製剤の例を表１２に示す。
Figure 2014515763
製剤のセットに一部の対照を加え、少数の選択時点で調べてもよい。
幾つかの異なる温度（たとえば、５℃、２５℃／６０％ＲＨ、４０℃／７５％ＲＨ）でこれらの製剤を安定に置き、種々の時点（たとえば、０週、１週、２週、４週、８週、１２週、６ヵ月及び１２ヵ月）で試験のために取り出す。対照は０週、１２週、６ヵ月及び１２ヵ月で調べる。
各安定性の時間で取り出して行う試験には、ＳＥＣ、ＣＥＸ、インストロン、ＭＦＩ、及びシリコーンの定量が含まれる。シリンジ１つをインストロンで調べ、放出された物質をＳＥＣ、ＣＥＸ、注入力測定、及びマイクロフロー画像化（ＭＦＩ）及びシリコーンの定量に使用する。
実施例６
抗α４β７抗体製剤を充填した事前に充填されたシリンジの構成成分の分析
この試験は、種々のシリンジのメーカー、プランジャー（ストッパー）、エラストマー物質、及び製剤におけるＰＳ８０の量がシステムの機械的特性及び製剤の安定性にどのように影響するかを調べた。
３種の異なるシリンジメーカー、２種の異なるプランジャー（ストッパー）の材料種、及び２種の異なるＰＳ８０とタンパク質のモル比を調べて実験の設計を創った。製剤の残りは、１７０ｍｇ／ｍＬのタンパク質、１２５ｍＭのアルギニン、５０ｍＭのヒスチジン、２５ｍＭのクエン酸塩及び６．５のｐＨで一定に保持した。これらの事前に充填されたシリンジの針サイズは２７Ｇ１／２’又は２９Ｇ１／２”の薄壁だった。実施した実験を表１５にて詳述する。
実験の動きのある部分の実験設計入力を表１３で以下に示すが、一定の部分は表１４に示す。表１３に示す入力を利用して実験設計を創った。
実験のリストは表１０に示す。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
濃縮した製剤、抗α４β７抗体製剤にポリソルベート８０を入れ、１７０ｍｇ／ｍＬに希釈する。出発製剤の組成を表１６で以下に示す。
Figure 2014515763
物質を所望の製剤組成に希釈するために、２５ｍＭのクエン酸塩、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、ｐＨ６．４８におけるＰＳ８０のストック溶液を作る。
Figure 2014515763
製剤の希釈スキームを表１８で詳述する。
Figure 2014515763
希釈スキームに基づいて配合を行い、出発製剤は秤量すべきであるが、他のストック溶液は容量分析的にピペットで取ることができる。製剤を濾過する。０．５ｍＬの製剤をできるだけ多くの１ｍＬの長いシリンジに分配する。２〜４ｍｍの泡１つと共に締め機によってシリンジを締める。各時点について、シリンジの１つは針を下にして保存し、シリンジの１つは横向きに保存する。余分なシリンジは針を下にして保存する。
５、２５及び４０℃にて２週目及び１ヵ月でシリンジを調べる。分析試験（外見、インストロン、ｐＨ、浸透圧、密度、粘度、ＳＥＣ、ＣＥＸ及びブライトウエル）を最初に行い、次いで再び２週間目に２５℃及び４０℃で、４週間目に２５℃で行う。
実施例７
抗α４β７抗体製剤を事前に充填された２７Ｇの薄壁針シリンジで使用される皮下容器閉止の分析
この試験は、２７Ｇの薄壁針を持つ種々のシリンジモデル及び種々のプランジャー（ストッパー）のメーカーやモデルがシステムの機械的な特性及び製剤の安定性に経時的にどのように影響するのかを調べる。
この試験は、シリンジのメーカー及び２７ＧＴＷ針を持つシリンジ用のプランジャー（ストッパー）のモデルによって事前に充填されたシリンジにおける抗α４β７抗体皮下液体製剤の安定性及びシリンジの機械的特性がどのように影響を受けるのかを調べる。試験から生成されるデータは液体皮下抗α４β７抗体製剤についての容器／閉止の構成成分を決定し得る。
実験設計の入力を表１９で以下に示すが、定数は表２０に示す。表１９に示す入力を利用して実験の設計を創った。
実施される実験のリストを表２１に示す。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
濃縮した抗α４β７抗体製剤にポリソルベート８０を入れ、１６０ｍｇ／ｍＬに希釈する。出発製剤の組成を表２２で以下に示す。
Figure 2014515763
所望の製剤組成に物質を希釈するために、２５ｍＭのクエン酸塩、５０ｍＭのヒスチジン及び１２５ｍＭのアルギニン、ｐＨ６．３におけるＰＳ８０のストック溶液を作製する。
Figure 2014515763
製剤のための希釈スキームは表２４で詳説する。
Figure 2014515763
希釈スキームに基づいて配合を行い、出発製剤は秤量すべきであるが、他のストック溶液は容量分析的にピペットで取ることができる。製剤を濾過する。０．５ｍＬの製剤をできるだけ多くの１ｍＬの長いシリンジに分配する。２〜４ｍｍの泡１つと共に締め機によってシリンジを締める。各時点について、シリンジの１つは針を下にして保存する（水平位置）。
５℃、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで１ヵ月、３ヵ月、6ヵ月、9ヵ月（任意）、１２ヵ月、１８ヵ月、及び２４ヵ月にてシリンジを調べる。
１、３、６、９、１２、１８、２４ヵ月（５℃）、１、３、６、９、１２、１８ヵ月（２５℃）１、３、６、９、１２ヵ月（４０℃）及び１、３ヵ月（４０℃）にて液体製剤を分析的に調べる（濃度、浸透圧、ｐＨ、インストロン、ＭＦＩ、ＳＥＣ、及び／又はＣＥＸ）。
実施例８
プラスチック製の事前に充填されたシリンジにおける皮下抗α４β７抗体製剤の分析
抗α４β７抗体皮下製剤のための容器／閉止方式としてのプラスチック製シリンジの使用を研究するためにこの試験を開始する。プラスチック製の事前に充填された候補シリンジにおける代表的な抗α４β７抗体皮下製剤の安定性を検討する。この試験で生成されるデータは、液体皮下抗α４β７抗体製剤へのプラスチック製シリンジの使用に適用性を判断するのに役立つ。
安定性試験試料は以下に示すように調製される。安定性試験は、４０℃／７５％ＲＨ、２５℃／６０％ＲＨ及び５℃の保存条件下で実施される。
表２６に示す液体皮下抗α４β７抗体製剤と共に、表２５における２種類のプラスチック製シリンジ及び１種のガラス製シリンジ（対照）を調べる。表２７は、実験で調べられる各セットの試料の詳細を示す。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
前に調製した液体皮下抗α４β７抗体製剤をこの検討に使用する。製剤を濾過する。「充填前」試料として品質試験のために濾過した溶液を試料採取すること（外見、ＭＦＩ、ＤＬＳ）。０．５ｍＬの製剤を１ｍＬのプラスチック製シリンジに分配する。真空締め機でシリンジを締める。針を下にしてシリンジを保存する。
最初のチェックを行ってｐＨ、浸透圧、密度、粘度及びタンパク質濃度を測定する。分析試験（外見、ＳＥＣ（凝集体、単量体、ＬＭＷ）、ＣＥＸ（酸性、主要、塩基性）、滑り力、ＭＦＩ、ＤＬＳ及び／又は重量）４０℃にて１週間後、４０℃にて２週間後、5、２５及び４０℃にて１ヵ月後、５及び２５℃にて３ヵ月後、５及び２５℃にて６ヵ月後、５及び２５℃にて９ヵ月後、５及び２５℃にて１２ヵ月後に実施する。
試料は、５℃及び２５℃にて１ヵ月、３ヵ月、６ヵ月、９ヵ月、及び１２ヵ月に採取する。試料は４０℃にて１週間、２週間及び１ヵ月で採取する。
実施例９
０、１、３、６及び１２ヵ月を含んでいてもよい種々の時点で５℃及び２５℃にて外見、注入力、ＳＥＣ、ＣＥＸ及びマイクロフロー画像化について試料を分析した。ＳＥＣ及びＣＥＸによって測定されるような製剤の安定性は実施例１及び２で議論されたものに類似した。注入力試験については、滑り力を測定した（表２８）。統計モデルは、滑り力に影響を及ぼす唯一の有意な因子はシリンジのメーカーであることを割り出し、Ａは、Ｃより高かったＢより高い滑り力を有した（図１７）。５℃での１２ヵ月及び２５℃での６ヵ月にわたるシリンジの滑り力の変化は、１０Ｎ未満であり、ほとんど５Ｎ未満であった。
Figure 2014515763
実施例１０
抗α４β７抗体製剤を充填した２７Ｇの薄壁針シリンジで使用される事前に充填されたシリンジの構成成分の分析
この試験は、２７Ｇ薄壁針の種々のシリンジのメーカー及びプランジャー（ストッパー）のメーカー及びエラストマー物質が、事前に充填されたシリンジのシステムの機械的特性及び製剤の安定性に経時的にどのように影響するかを調べた。
２７Ｇ１／２”の薄壁針及び６．５のｐＨで１６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質、１２５ｍＭのアルギニン、５０ｍＭのヒスチジン、２５ｍＭのクエン酸塩、０．２％のＰＳ８０を含有する製剤と共に、３種の異なるシリンジのメーカー及び４種の異なるプランジャー（ストッパー）モデルを調べた。創り、調べた試料はすべて表２９に示す。
Figure 2014515763
０、１、３、６及び１２ヵ月を含んでいてもよい種々の時点で５℃、２５℃及び４０℃にて外見、注入力、ＳＥＣ、ＣＥＸ及びマイクロフロー画像化について試料を分析した。ＳＥＣ及びＣＥＸによって測定されるような製剤の安定性は実施例１及び２で議論されたものに類似した。注入力試験については、抜け出し及び滑り力を測定した。当初の時点での結果を表３０に示す。
Figure 2014515763
統計モデルは、シリンジのメーカーＡ及びＣは類似し、メーカーＢよりも低い滑り力を有したが、プランジャー（ストッパー）Ｅは他のプランジャー（ストッパー）よりもやや高い滑り力を有することを示した。
一般に、当初の抜け出し力は調べた試料間で類似していた。
５℃、２５℃及び４０℃にて１２ヵ月にわたって、滑り力は有意に変化しなかった。しかしながら、プランジャー（ストッパー）Ｆを持つシリンジの抜け出し力は２５℃及び４０℃で１２ヵ月まで上昇した。
実施例１１
事前に充填されたシリンジにおける抗α４β７抗体製剤の分析
この試験は、様々なレベルのタンパク質濃度、ポリソルベート８０の濃度、クエン酸塩濃度及びｐＨが事前に充填されたシリンジにおける抗α４β７抗体製剤にどのように影響を及ぼすかを究明する。
タンパク質濃度（６０〜１６０ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ（６．０〜６．３）、ポリソルベート８０：タンパク質のモル比（０．７２３〜１．５）及びクエン酸塩（０〜２５ｍＭ）の２レベルの一部実施によるＪＭＰにて実験設計の一部を創る。これらの製剤はヒスチジン濃度（５０ｍＭ）とアルギニン濃度（１２５ｍＭ）は一定値を有する（製剤１〜８）。２５ｍＭのヒスチジンを伴ったこれら製剤の変異形を加える（製剤９〜１０）。
追加のセットの製剤を開発してヒスチジンが存在せず、クエン酸塩だけが緩衝液として作用する製剤を調べる（製剤１１〜１６）。調べる製剤すべてについて入力のレベルを表３１に示す。製剤すべてに使用する定数を表３２に示す。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
各製剤は、抗α４β７抗体を含有し、種々の賦形剤ストック溶液で希釈した出発ストック製剤から生成する。理に適った希釈体積を達成するために、使用した抗α４β７抗体ストック溶液を表３４に示す。２つの異なるＴＦＦ操作を実施して製剤ＴＦＦ１及び２を得る。ＴＦＦ１の一部を透析に使用して「透析」と標識した製剤を得る。
Figure 2014515763
物質を所望の製剤組成に希釈するために、表３５で特定される濃度で各賦形剤の水溶液を作る。
Figure 2014515763
製剤のための希釈スキームは表３６及び３７で詳述する。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
希釈スキームに基づいて配合を行い、出発製剤は秤量するが、他のストック溶液は容量分析的にピペットで取る。製剤を濾過する。０．５ｍＬの製剤をできるだけ多くの１ｍＬの長いシリンジに分配する。シリンジを締め機によって締める。シリンジは針を下にして保存する。
液体製剤は、当初、４０℃で１週間にて、４０℃で２週間にて、２５℃と４０℃で１ヵ月にて、５℃と２５℃で２ヵ月にて、５℃と２５℃で３ヵ月にて、５℃と２５℃で６ヵ月にて、５℃と２５℃で９ヵ月にて、５℃と２５℃で１２ヵ月にて、分析上（外見、ｐＨ、浸透圧、密度、ＤＬＳ、ＳＥＣ、ＣＥＸ及び／又はブライトウエル）調べる。
表３８に係る特定の製剤に取り出しも実施する。
Figure 2014515763
実施例１２
ガラス製のシリンジ又は２つの異なるＣＯＰプラスチック製シリンジのいずれかにおける安定性について、１６０ｍｇ／ｍｌのタンパク質、５０ｍＭのヒスチジン、２５ｍＭのクエン酸塩、１２５ｍＭのアルギニンをｐＨ６．５にて含有する製剤を調べた。１２ヵ月後、５℃又は２５℃にて凝集体と単量体の量は、プラスチック製とガラス製のシリンジで匹敵していた。
Figure 2014515763
実施例１３：
皮下注射及び筋肉内注射によって投与されたベドリズマブの生体利用効率
健常な男性対象に皮下注射及び筋肉内注射によって投与されたベドリズマブの生体利用効率のフェーズＩ試験が完了した。合計４２人の健常男性が試験に登録した。対象を各１４対象の３群（皮下、筋肉内及び静脈内の投与）に分けた。その日、対象に180mgのベドリズマブを投与した。ｐＨ６．３で５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロースにおける６０ｍｇ／ｍＬの抗体の凍結乾燥製剤から投与物を再構成した。筋肉内及び皮下の対象については、投与物を各１．５ｍＬの２回注射に分けた。血液を採取して血漿のベドリズマブ濃度を確定し、各セットの対象におけるベドリズマブの生体利用効率を測定した。
重篤な有害事象又は重大な感染、臨床的に重大な異常、陽性の主観的な／客観的なＲＡＭＰチェックリスト、又は臨床的に重大なＥＣＧ所見は報告されなかった。
ＰＫ／ＰＤのモデル化及びシミュレーションを完了して、トラフレベルでこの所望の血清濃度を維持するために静脈内用量と類似する暴露を生じる用量及び血管外用量の投薬計画を決定した。
吸収特性（図１８）は、筋肉内用量と皮下用量の濃度が一般に重複することを示した。これらの投与経路の吸収特性には明らかな肉眼的差異はない。ＳＣ注射に続くベドリズマブの絶対的な生体利用効率は、およそ７５％であり、ＩＭ注射に続くものはおよそ８０％だった。
実施例１４
モデル化皮下投与の計画
ＰＫ／ＰＤのモデル化及びシミュレーションを完了して、トラフレベルで特定の血清濃度を維持するために静脈内用量と類似する暴露を生じる用量及び血管外用量の投薬計画を決定した。
最終的な組み合わせデータセット（ＩＶ、ＳＣ及びＩＭのデータ）は、クリアランス（ＣＬ）及び分布の中央値（Ｖ２）、分布の末梢値（Ｖ３）、血管外経路に依存する吸収速度定数（ＫＡ）並びに血管外用量（Ｆ）の相対的な生体利用効率（静脈内投与と比べて）という点でパラメータ化される２区画線形モデルを示した。ＩＩＶ用語は、相対成長効果を介してＣＬ及びＶ３に影響を及ぼす唯一の共変量としての体重と共にＣＬ、Ｖ２及びＶ３に含められた。
モデルの受容性及び予測性は、ブートストラップパラメータ推定、視覚予測チェック及びプロットの当てはまりの良さを介して明らかにした。モデルの解析は、ベドリズマブのＰＫの予測因子として体重を特定し、ＰＫの変動性は対象と対象の中の成分の間に起因した。
モデルがシミュレーションに適するといったん分かると、投与経路（ＩＶ、ＩＭ又はＳＣ）の効果を評価し、定常状態のトラフ濃度に対する投与回数（毎週、２週に１回、４週に１回、８週に１回）の効果を評価するためにシミュレーションを行った。これらの値とＩＭ及びＳＣの投与に続くベドリズマブの相対的な生体利用効率（Ｆ＝６９．５％）に基づいて、用量を選択し、ＩＶ用量として類似のトラフ濃度を達成した。
シミュレーションは、静脈内の誘導計画と維持計画を調和させるように用量及び投薬計画をモデル化した。標的は、暴露（血清薬剤濃度−時間の曲線下面積（ＡＵＣ））及びトラフ薬剤濃度の双方だった。表４０〜４３は、シミュレーションの結果を提供する。
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
Figure 2014515763
実施例１５
フェーズ２ａ複数回用量試験
フェーズ２ａ複数回用量試験は、皮下投与経路によるベドリズマブの複数回投与の後のベドリズマブの安全性、認容性、定常状態のＰＫを評価し、静脈内投薬計画に比べた皮下投薬計画の相対的な生体利用効率を評価することができる。皮下投与後のＨＡＨＡの発生及びＨＡＨＡの中和及びベドリズマブの複数回投与のＰＤに対する効果を評価することができる。
１〜１２の部分Ｍａｙｏスコアを有する潰瘍性大腸炎の患者及び１５０を超えるＣＤＡＩを有するクローン病の患者を試験に含めることができる。コホートは、０週目と２週目にＩＶで投与されるベドリズマブ（３００ｍｇ）の誘導投薬計画を受け、続いて以下のいずれかの維持投薬計画：
６〜２２週にて４週ごとにＩＶで投与されるベドリズマブ（３００ｍｇ）、
６〜２２週にて８週ごとにＩＶで投与されるベドリズマブ（３００ｍｇ）、
６〜２２週にて毎週ＳＣで投与されるベドリズマブ（１０８ｍｇ）、
６〜２２週にて２週ごとにＳＣで投与されるベドリズマブ（１０８ｍｇ）、
６〜２２週にて３週ごとにＳＣで投与されるベドリズマブ（１６５ｍｇ）を受け取ることができる。
試料は、１日目の投与前、次いで再び１日目（１２時間）、２、３、５、８、１５、２９、４３、１２７、１２７（１２時間）、１２８、１２９、１３１、１３４、１４１、及び１５５で採取してＰＫ及びＰＤを評価することができる。
実施例１６
ＩＢＤ治療でのベドリズマブによる長期の臨床経験
フェーズ２の非盲検安全性延長試験を完了してベドリズマブの長期の薬物動態（ＰＫ）、薬力学（ＰＤ）、安全性及び有効性を評価した。患者は１８歳〜７５歳であり、潰瘍性大腸炎患者における以前のＰＫ／ＰＤ安全性試験に以前加わったことがあるか、又は３６ヵ月のスクリーニング内で内視鏡で、及び／又は組織病理学的に及び／又は放射線検査で確認された少なくとも２ヵ月間のＩＢＤの症状を有していた。
患者はすべて、２ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇのベドリズマブ（５ｍｇ／ｍＬの抗体、２０ｍＭのクエン酸塩／クエン酸、１２５ｍＭの塩化ナトリウム、０．０５％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０（長期には−７０℃で３ヵ月までは−２０℃で保存）を１、１５及び４３日目、その後、合計７８週まで８週ごとに受け取った。患者は、治療を受けたことがない潰瘍性大腸炎若しくはクローン病の患者、又は以前の臨床試験に加わったことがある潰瘍性大腸炎患者であった。
有効性／生活の質（ＱoＬ）、部分Ｍａｙｏスコア（ＰＭＳ）、クローン病活動性指数（ＣＤＡＩ）及び炎症性大腸疾患アンケート（ＩＢＤＱ）を用いて試験の結果を評価した。
ＰＫの結果
平均の点滴前のベドリズマブ濃度は用量比例性であり、固定したままであり、試験全体を通して検出可能だった。
ＰＤの結果
すべての用量レベルで試験全体を通して受容体（％ＡＣＴ−１＋［ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ高］及び％ＭＡＤＣＡＭ＋［ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ高］はほぼ完全に阻害された。
部分Ｍａｙｏスコア
ベースラインの平均ＰＭＳは、潰瘍性大腸炎を繰り返す患者（２．３）よりも治療したことがない潰瘍性大腸炎患者の方が（５．４）高かった。４３日目までに、ＰＭＳは、繰り返し患者及び治療したことがない潰瘍性大腸炎患者の双方で顕著な低下を示した。１５５日目までに、２群の平均スコアは類似した。平均ＰＭＳは２６７日目までの間、低下し続け、その後、平らになった。
クローン病活動性指標
ＣＤ患者のＣＤＡＩはベースラインの２９４．６から４３日目で２３７．７まで低下し、１５５日目までの間低下し続けた（１５６．１）。
ＩＢＤＱ
潰瘍性大腸炎を繰り返す患者はベースラインで最高平均値のＩＢＤＱスコアを有した。４３日目までに平均ＩＢＤＱスコアは３つの疾患群すべてで増加した。平均ＩＢＤＱスコアは３つの疾患群すべてで経時的に増加し続け、クローン病患者では１５５日目に、治療したことがない潰瘍性大腸炎患者及び潰瘍性大腸炎を繰り返す患者では４９１日目に最高に達した。
Ｃ−反応性タンパク質
潰瘍性大腸炎を繰り返す患者及びクローン病患者は１５５日目までの間低下する平均ＣＲＰレベルを示し、その後平らになった。治療したことがない潰瘍性大腸炎患者は、潰瘍性大腸炎を繰り返す患者よりもベースラインで低い平均ＣＲＰレベルを有した（２．２８対７．０９）。治療したことがない潰瘍性大腸炎患者の平均ＣＲＰレベルは、評価された時点すべてで相対的に一定のままだった。
他の安全性の結果
試験の間、全身性の日和見感染（ＰＭＬを含む）は報告されなかった。患者１人が単一時点でＪＣウイルス血症陽性であったが、他の時点ではすべてＪＣＶ陰性だった。７２人の患者のうち３人（４％）が陽性のＨＡＨＡ成績（これらのうち２人は一時的に陽性）を有した。試験は、肝臓毒性、リンパ球増加症、又はリンパ球減少症、又は他の薬剤関連の臨床検査値の変化の証拠を示さなかった。
結論
７８週まで８週ごとに１回、２．０又は６．０ｍｇ／ｋｇで投与されたベドリズマブは、標的受容体の飽和を達成し、疾患の活動性の長く続く平均的な低下と改善されたＩＢＤＱを伴い、一般に安全で上手く認容され、許容可能な免疫原性を示した。
実施例１７
中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎患者における応答と寛解の誘導と維持
中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎患者における応答と寛解の誘導と維持を評価するために２つの無作為二重盲検多施設試験を含む単回試験を設計した。人口統計的な及びベースラインの疾患の特徴は治療群すべてにわたって同等だった。
静脈内投与を用いた誘導試験を、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗体の凍結乾燥製剤から再構成した３００ｍｇ用量にて、ベドリズマブの２回投与後６週間での終点でベドリズマブに対するプラセボと比較した。
誘導試験と同じ製剤及び経路を用いた維持試験をベドリズマブに対するプラセボと比較したが、ベドリズマブは４週ごとに投与し、ベドリズマブに対するプラセボは８週ごとに投与した。この試験の終点は５２週であり、誘導応答者の集団を解析した。
血液試料を採取して試験中のベドリズマブの濃度を測定した。誘導相の終了時でのベドリズマブの平均血清濃度は２０〜３０μｇ／ｍＬだった。３００ｍｇ用量投与の３０分間ＩＶ点滴の後の定常状態でのベドリズマブの平均トラフ血清濃度はｑ８ｗｋｓ投薬計画（８週計画）では９〜１３μｇ／ｍＬの間であり、ｑ４ｗｋｓ投薬計画（４週計画）では３５〜４０μｇ／ｍＬの間であった。点滴終了時のベドリズマブの中央値血漿濃度は、ｑ８ｗｋｓ投薬計画では９８〜１０１μｇ／ｍＬの間であり、ｑ４ｗｋｓ投薬計画では１２９及び１３７μｇ／ｍＬ前後であった。
誘導試験及び維持試験の応答の要約を表４４〜４７に提供する。ベドリズマブで治療した患者の有意に大きな集団がプラセボに比べて６週間で臨床的な応答、寛解及び粘膜治癒を達成した（表４４）。誘導相の包括解析集団の３９％は過去の抗ＴＮＦ−α療法で失敗を有した。臨床的な応答及び寛解の比率は、過去の抗ＴＮＦ療法での失敗がある患者及び抗ＴＮＦに暴露されていない患者の双方でベドリズマブの方がプラセボより高かった。６週間までの間での予備的な解析では、有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ及び試験の中止を招く有害事象の比率はベドリズマブ群よりプラセボ群で高かった。プラセボ患者よりも有意に高いベドリズマブ患者の集団が、５２週での臨床的な寛解、粘膜治癒、及びコルチコステロイドなしの寛解、及び長く続く応答と寛解を達成した（表４５）。維持試験の集団の３２％は過去の抗ＴＮＦ−α療法で失敗を有した。臨床的な寛解及び長く続く応答の比率は、ＴＮＦで失敗した患者及びＴＮＦ経験のない患者の双方でプラセボよりもベドリズマブの方が高かった。０〜５２週での安全性の集団（Ｎ＝８９５）では、有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ及び重篤な感染は、ベドリズマブ群とプラセボ群の間で類似していた。日和見感染又は腸内感染の比率の上昇はベドリズマブ群では認められなかった。
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実施例１８
中程度から重度の活動性のクローン病患者における応答と寛解の誘導と維持
中程度から重度の活動性のクローン病患者における応答と寛解の誘導と維持を評価するために２つの無作為二重盲検多施設試験を含む単回試験を設計した。人口統計的な及びベースラインの疾患の特徴は治療群すべてにわたって同等だった。
静脈内投与を用いた誘導試験を、５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗体の凍結乾燥製剤から再構成した３００ｍｇ用量にて、ベドリズマブの２回投与後６週間での終点でベドリズマブに対するプラセボと比較した。
誘導試験と同じ製剤及び経路を用いた維持試験をベドリズマブに対するプラセボと比較したが、ベドリズマブは４週ごとに投与し、ベドリズマブに対するプラセボは８週ごとに投与した。この試験の終点は５２週であり、誘導応答者の集団を解析した。
驚くべきことに、この試験は、Ｑ４週及びＱ８週の群ではよく似た結果が得られることを示した。誘導試験及び維持試験の応答の要約を表４８〜５１に提供する。プラセボに比べてベドリズマブで治療した患者の有意に大きな集団が臨床的な寛解及び高い応答を達成した（表４８）。臨床的な寛解及び高い応答の比率は、過去にＴＮＦで失敗したもの及び過去にＴＮＦ暴露のないもの双方でプラセボよりもベドリズマブ患者において高かった。有害事象（ＡＥ）、重篤なＡＥ及び重篤な感染の比率はベドリズマブ群及びプラセボ群の双方で類似していた。日和見感染又は腸内感染の比率の上昇はベドリズマブ群では認められなかった。
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実施例１９
中程度から重度の活動性クローン病患者における応答と寛解の誘導
無作為二重盲検プラセボ対照多施設試験を完了して、６週目（０及び２週目での２回の投与の後）及び１０週目（３回投与後）にてＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者において３００ｍｇ用量（凍結乾燥した５０ｍＭのヒスチジン、１２５ｍＭのアルギニン、０．０６％のポリソルベート８０、１０％スクロース、ｐＨ６．３における６０ｍｇ／ｍｌの抗体の製剤から再構成した）でのベドリズマブの誘導効果を評価した。試験は４１６人の患者から成り、そのうち７５％はＴＮＦα拮抗剤で失敗した患者であり、２５％はＴＮＦαの投薬経験がなかった。人口統計学及び付随するＩＢＤの投薬は治療群全体にわたって均衡を取った。ベースラインの疾患の特徴もベースラインの疾患の活動性を除いて治療群全体にわたって均衡を取った。
試験で指定された一次終点は、ＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した集団では６週目の寛解（％）であった。評価される（順次試験手順）鍵となる二次終点は、集団全体での６週目の寛解（％）、ＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した集団及び集団全体での１０週目の寛解（％）（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を用いて）、ＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した集団及び集団全体での６週と１０週での持続した寛解（％）（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を用いて）、及びＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した集団での６週目の向上した応答（％）であった。
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試験は、ＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した患者が寛解の誘導に３回の投与を必要とすることを示した。ＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した患者における寛解率は６週目と１０週目の間で増加したが、ベドリズマブ群（プラセボではない）についてのみだった。ＴＮＦ-α拮抗剤の投与経験がない患者についての寛解率は６週目と１０週目の間では実質的に増加しなかった。疾患の重症度の程度が高いＴＮＦ-α拮抗剤で失敗した患者のうち、４３％はＴＮＦα拮抗剤に決して応答しなかったし、４５％は応答を喪失した。
実施例２０：安定性
５℃にて６〜２４ヵ月の経過にわたって、種々の異なった抗α４β７抗体製剤を安定性について調べた（表６及び７）。６．０〜６．２のｐＨを有する製剤は６ヵ月後及び２４ヵ月後、およそ４％未満の主要種の分解を示した。
２４ヵ月までＳＥＣによって種々の異なった抗α４β７抗体製剤を安定性について調べた（表４及び５）。６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度で２５ｍＭのクエン酸塩を含有する製剤は、２年後０．１〜０．２％の凝集体の変化を有したが、１６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度及び２５ｍＭのクエン酸塩を含有する製剤は、２年後およそ０．３％の凝集体の増加を有した。クエン酸塩を含まずに６０、１１０又は１６０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有する製剤については０．６〜１．１％の凝集体の増加があった。クエン酸を含有するが、ヒスチジンを含有しない１２ヵ月及び２４ヵ月に調べた製剤については、およそ０．３〜０．４％の凝集体の増大があった。
実施例２１：
ＣＤ４：ＣＤ８の比に対するベドリズマブの効果の判定
１０％スクロースの凍結乾燥製剤から再構成し、０．９％生理食塩水の点滴系に希釈した４５０ｍｇベドリズマブの単回投与で１８〜４５歳の健常対象を処理した。４５０ｍｇベドリズマブの単回投与の前（ベースライン）及び５週間後腰椎穿刺によって脳脊髄液（ＣＳＦ）を採取した。各対象は彼ら自身が対照として役立った。
５週間の時点は、ナタリズマブで治療したＭＳ患者がたった１回の投与の後、ＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋のリンパ球の比に対する効果及び脳病変の数の低下を実証したことを示す以前の試験（Stuve et al. Arch Neurol. 2006; 63: 1383-1387; Stuve et al. Ann Neurol. 2006;59:743-747. Miller et al. N Engl J Med. 2003;348(1):15-23）に基づいて、及びまた５週目で４５０ｍｇ用量のベドリズマブは標的を飽和するのに十分であり、４週ごとに３００ｍｇのフェーズ３用量試験に関連する推定の定常状態トラフレベルを超える血清レベルを提供するので、５週の時点を選択した。
免疫表現型決定のためにおよそ１５ｍＬのＣＳＦが各対象から得られた。以下の基準：試料当たり≦１０のＲＢＣ／μＬ（末梢血の混入をできるだけ抑えるために）；否定的なＣＳＦ培養結果；各フローサイトメトリー試料における適正なＴリンパ球数；及びベドリズマブに対する血清抗体が検出されないことを満たせば、ＣＳＦ試料を解析に含めた。
５週目の中央値（３４．８０μｇ／ｍＬ）及び個々の対象の血清ベドリズマブ濃度（２４．９〜４７．９μｇ／ｍＬの範囲）は、フェーズ３の投与計画のための投影される定常状態のトラフ濃度（約２４μｇ／ｍＬ）より高かった。高い程度（＞９０％）のα４β７受容体の飽和はＭＡｄＣＡＭ−１-Ｆｃによって測定されるように５週で認められ、終点評価の時点での標的のベドリズマブの飽和を示していた。
ベドリズマブはどのＣＳＦ試料においても検出されなかった（検出限界＝０．１２５μｇ／ｍＬ）。
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋のリンパ球の数及び比に対する効果
ベドリズマブはＣＤ４＋：ＣＤ８＋の比を有意に低下させなかった（表５６）。対象は誰も＜１の投与後ＣＤ４＋：ＣＤ８＋の比を有さなかった（ｐ＜０．０００１、片方ｔ検定）。ベドリズマブはＣＳＦ中のＣＤ４＋又はＣＤ８＋のＴリンパ球の数を有意に低下させなかった。加えて、ＣＳＦのＣＤ４＋又はＣＤ８＋のＴリンパ球の％に有意な変化はなかった（表５７）。末梢血ＷＢＣ、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の記憶Ｔリンパ球における有意な変化も認められなかった（表５８）。
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要約
ベドリズマブは、４５０ｍｇの単回投与の後、健常な志願者にてＣＳＦのＣＤ４＋及びＣＤ８＋の細胞数又はＣＤ４＋：ＣＤ８＋の比に影響を及ぼさなかった。対象は誰も投与後のＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋の比の１未満への低下を有さなかった。ベドリズマブはＣＳＦでは検出されなかった。加えて、末梢血では全ＷＢＣ又は記憶Ｔリンパ球のＣＤ４＋及びＣＤ８＋のサブセットにて認められる変化はなかった。血中の標的（α４β７）の飽和は終点評価の時点にて対象すべてで生じた。ＣＳＦのＣＤ４＋：ＣＤ８＋のリンパ球のレベル及び比は文献にて報告された以前のものに類似していた。
これらの結果は、サルの生理的なＣＮＳ免疫監視及び病理的なＣＮＳの炎症の双方に対する効果をベドリズマブが欠くことに一致する。
本発明はその好まれる実施形態を参照して特に示され、記載されてきたが、添付のクレームに包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細において種々の変更がその中で為され得ることが当業者によって理解されるであろう。
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Claims (63)

  1. 安定な液体医薬製剤であって、抗α４β７抗体、抗酸化剤又はキレート剤、及び少なくとも１つの遊離のアミノ酸の混合物を含み、前記製剤が液体形状である安定な液体医薬製剤。
  2. 抗α４β７抗体と抗酸化剤又はキレート剤のモル比が約１：４〜約１：１００である請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  3. ５℃にて１２ヵ月後、前記安定な液体製剤が約１．０％未満の凝集体形成を有する請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  4. 前記製剤が約０．２％未満の凝集体形成を有する請求項３に記載の安定な液体医薬製剤。
  5. 前記抗酸化剤又はキレート剤がクエン酸塩である請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  6. 前記キレート剤がＥＤＴＡである請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  7. 前記遊離のアミノ酸が、ヒスチジン、アラニン、アルギニン、グリシン、グルタミン酸及びそれらの組み合わせから成る群から選択される請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  8. 前記製剤がさらに界面活性剤を含む請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  9. 抗酸化剤又はキレート剤と界面活性剤のモル比が約３：１〜約１５６：１である請求項８に記載の安定な液体医薬製剤。
  10. 前記界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー及びそれらの組み合わせから成る群から選択される請求項８に記載の安定な液体医薬製剤。
  11. 前記製剤が約６．１〜約７．０の間のｐＨを有する請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  12. 前記製剤が約６．５〜約６．８の間のｐＨを有する請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  13. 前記製剤が、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体を含む請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  14. 前記製剤が、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体を含む請求項１に記載の安定な液体医薬製剤。
  15. 安定な液体医薬製剤であって、少なくとも約６０ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体、緩衝化剤及び少なくとも約５ｍＭのクエン酸塩を含み、前記製剤は液体製剤である安定な液体医薬製剤。
  16. 前記緩衝化剤がヒスチジン緩衝液である請求項１５に記載の安定な液体医薬製剤。
  17. 少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌの抗α４β７抗体及び少なくとも約５ｍＭのクエン酸塩を含む安定な液体医薬製剤。
  18. 前記製剤がポリソルベート８０をさらに含む請求項１７に記載の安定な液体医薬製剤。
  19. 安定な液体医薬製剤であって、抗α４β７抗体、クエン酸塩、ヒスチジン、アルギニン及びポリソルベート８０の混合物を含み、製剤が液体形態である安定な液体医薬製剤。
  20. 前記製剤が、バイアル、カートリッジ、シリンジ及び自動注入器から成る群から選択される容器に存在する請求項１９に記載の安定な液体医薬製剤。
  21. 表２の製剤のいずれか１つから選択される安定な液体製剤。
  22. 前記抗体がベドリズマブである請求項１〜２１のいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
  23. 前記製剤が、皮下投与用又は筋肉内投与用である請求項１〜２１のいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤。
  24. 炎症性大腸疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に請求項１に記載の医薬製剤を投与することを含む方法。
  25. 前記投与が皮下投与である請求項２４に記載の方法。
  26. 前記投与が自己投与である請求項２４に記載の方法。
  27. 製造物品であって、容器、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の安定な液体医薬製剤及びその使用のための指示書を含む製造物品。
  28. 物品が事前に充填されたシリンジである請求項２７に記載の製造物品。
  29. 炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法であって、前記方法が、
    症性大腸疾患で苦しむヒト患者にヒトα４β７インテグリンに結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、
    以下の投与計画：
    （ａ）６回投与について２日に１回の皮下注射としての１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の初回投与；
    （ｂ）続いて、必要に応じて２週ごと又は４週ごとの皮下投与としての１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の７回目及びその後の投与に従ってヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が患者に投与され；
    投与計画が、患者の炎症性大腸疾患の臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；
    さらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、α４β７複合体に対する結合特異性を有し、抗原結合領域が、ＣＤＲｓ：
    軽鎖：ＣＤＲ１配列番号９、ＣＤＲ２配列番号１０、ＣＤＲ３配列番号１１
    重鎖：ＣＤＲ１配列番号１２、ＣＤＲ２配列番号１３、ＣＤＲ３配列番号１４を含む方法。
  30. 患者が、免疫調節因子、腫瘍壊死因子−α拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも１つによる治療に対して適切な応答を欠いた、それとの応答を喪失した、又はそれに非認容性であった請求項２９に記載の方法。
  31. 炎症性大腸疾患が、クローン病又は潰瘍性大腸炎である請求項２９に記載の方法。
  32. 炎症性大腸疾患が、潰瘍性大腸炎である請求項３１に記載の方法。
  33. 炎症性大腸疾患が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎である請求項３１に記載の方法。
  34. 投与計画が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎で苦しむ患者にて粘膜治癒を生じる請求項３３に記載の方法。
  35. 投与計画が、患者によるコルチコステロイドの使用の軽減、排除又は軽減及び排除を生じる請求項２９に記載の方法。
  36. 患者が以前、炎症性大腸疾患のための少なくとも１つのコルチコステロイドによる治療を受けていた請求項２９に記載の方法。
  37. ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１．４ｍｇ／ｍＬの間の濃度での最終投与形態で投与される請求項２９に記載の方法。
  38. ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．２ｍｇ／ｍＬでの最終投与形態で投与される請求項３７に記載の方法。
  39. 投与計画が、前記治療を受けている患者の脳脊髄液にてＣＤ４とＣＤ８の比を変えない請求項２９に記載の方法。
  40. 炎症性大腸疾患の治療療法のための投与計画であって、
    方法が、炎症性大腸疾患で苦しむ患者に、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、その際、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片は非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画に従って患者に投与され、
    炎症性大腸疾患で苦しむ患者に、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を投与する工程を含み、その際、ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：
    （ａ）６回投与について２日に１回の皮下注射としての１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の初回投与；
    （ｂ）続いて、必要に応じて２週ごと又は４週ごとの皮下投与としての１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の７回目及びその後の投与；
    に従って患者に投与され、
    投与計画が、患者の炎症性大腸疾患の臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；
    さらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、α４β７複合体に対する結合特異性を有し、抗原結合領域が、ＣＤＲｓ：
    軽鎖：ＣＤＲ１配列番号９、ＣＤＲ２配列番号１０、ＣＤＲ３配列番号１１
    重鎖：ＣＤＲ１配列番号１２、ＣＤＲ２配列番号１３、ＣＤＲ３配列番号１４を含む投与計画。
  41. 患者が、免疫調節因子、腫瘍壊死因子−α拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも１つによる治療に対して適切な応答を欠いた、それとの応答を喪失した、又はそれに非認容性であった請求項４０に記載の投与計画。
  42. 炎症性大腸疾患が、クローン病又は潰瘍性大腸炎である請求項４０に記載の投与計画。
  43. 炎症性大腸疾患が、潰瘍性大腸炎である請求項４１に記載の投与計画。
  44. 炎症性大腸疾患が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎である請求項４３に記載の投与計画。
  45. 投与計画が、中程度から重度の活動性の潰瘍性大腸炎で苦しむ患者にて粘膜治癒を生じる請求項４４に記載の投与計画。
  46. 投与計画が、患者によるコルチコステロイドの使用の軽減、排除又は軽減及び排除を生じる請求項４０に記載の投与計画。
  47. 患者が以前、炎症性大腸疾患のための少なくとも１つのコルチコステロイドによる治療を受けていた請求項４０に記載の投与計画。
  48. ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約１．４ｍｇ／ｍＬの間の濃度での最終投与形態で投与される請求項４０に記載の投与計画。
  49. ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片が、約１．２ｍｇ／ｍＬでの最終投与形態で投与される請求項４８に記載の投与計画。
  50. 投与計画が、前記治療を受けている患者の脳脊髄液にてＣＤ４とＣＤ８の比を変えない請求項４０に記載の投与計画。
  51. 患者が６５歳以上のヒトであり、さらに、患者が投与計画の調整を必要としない請求項４０に記載の方法。
  52. 患者が６５歳以上のヒトであり、さらに、患者が投与計画の調整を必要としない請求項４０に記載の投与計画。
  53. 炎症性大腸疾患で苦しむヒト患者を治療する方法であって、方法が、ヒトα４β７インテグリンに対して結合特異性を有するヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片を、炎症性大腸疾患で苦しむ患者に投与する工程を含み、
    ヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片は、以下の投与計画：
    （ａ）初回投与の約６週間までに約２０〜約３０μｇ／ｍＬのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均トラフ血清濃度を達成するのに十分なヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の複数の誘導相の用量；
    （ｂ）その後の、約９〜約１３μｇ／ｍＬ又は約３５〜４０μｇ／ｍＬのヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の平均定常状態トラフ血清濃度を維持するのに必要とされるヒト化免疫グロブリン又はその抗原結合断片の複数の維持相の用量
    に従って患者に投与され、
    投与計画が、患者の炎症性大腸疾患の臨床的な応答及び臨床的な寛解を誘導し；
    さらに、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、非ヒト起源の抗原結合領域及びヒト起源の抗体の少なくとも一部を含み、ヒト化免疫グロブリン又は抗原結合断片が、α４β７複合体に対する結合特異性を有し、抗原結合領域が、ＣＤＲｓ：
    軽鎖：ＣＤＲ１配列番号９、ＣＤＲ２配列番号１０、ＣＤＲ３配列番号１１
    重鎖：ＣＤＲ１配列番号１２、ＣＤＲ２配列番号１３、ＣＤＲ３配列番号１４を含む方法。
  54. 用量が皮下又は筋肉内に投与される請求項５３に記載の方法。
  55. 誘導相の用量が静脈内に投与され、維持相の用量が皮下又は筋肉内に投与される請求項５３に記載の方法。
  56. 誘導相の用量が、２日ごとに１回、ほぼ１週ごとに１回及びほぼ２週ごとに１回から成る群から選択される間隔で投与される請求項５４に記載の方法。
  57. 維持相の用量が、ほぼ１週ごとに１回、ほぼ２週ごとに１回、ほぼ３週ごとに１回、ほぼ４週ごとに１回、ほぼ６週ごとに１回、ほぼ８週ごとに１回、及びほぼ１０週ごとに１回から成る群から選択される間隔で投与される請求項５４に記載の方法。
  58. 誘導相の用量がほぼ０及び２週目で投与され、維持相の用量が、ほぼ６週目で開始し、ほぼ１週ごとに１回、ほぼ２週ごとに１回、ほぼ３週ごとに１回、ほぼ４週ごとに１回、ほぼ６週ごとに１回、ほぼ８週ごとに１回、及びほぼ１０週ごとに１回から成る群から選択される間隔で投与される請求項５５に記載の方法。
  59. 用量が自己投与される請求項５４に記載の方法。
  60. 維持相の用量が自己投与される請求項５５に記載の方法。
  61. 用量がそれぞれ約１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリンを含む請求項５４に記載の方法。
  62. 維持相の用量がそれぞれ約１６５ｍｇのヒト化免疫グロブリンを含む請求項５５に記載の方法。
  63. 患者が、免疫調節因子、腫瘍壊死因子−α拮抗剤又はそれらの組み合わせの少なくとも１つによる治療に対して適切な応答を欠いた、それとの応答を喪失した、又はそれに非認容性であった請求項５３に記載の方法。
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