JP2013543386A - 組み換えられた遺伝子発現調節配列を有する腫瘍特異的発現の改善された遺伝子伝達システム - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
アデノウイルスは、中間程度のゲノムサイズ、操作の便宜性、高い力価、広範囲のターゲット細胞、及び優れた感染性から、遺伝子伝達ベクターとしてよく利用されている。ゲノムの両末端は、100bp〜200bpの末端逆位配列(inverted terminal repeat,ITR)を含み、これは、DNA複製及びパッケージングに必須のシスエレメントである。ゲノムのE1領域(E1A及びE1B)は、転写及び宿主細胞遺伝子の転写を調節するタンパク質をコードする。E2領域(E2A及びE2B)は、ウイルスDNA複製に関与するタンパク質をコードする。
レトロウイルスは、自分の遺伝子を宿主のゲノムに挿入し、大量の外来遺伝物質を運搬することができ、感染できる細胞のスペクトルが広いため、遺伝子伝達ベクターとしてよく利用されている。
アデノ関連ウイルス(AAV)は、非分裂細胞を感染させることができ、多様な種類の細胞に感染できる能力を有しているため、本発明の遺伝子伝達システムに適している。AAVベクターの製造及び用途に対する詳細な説明は、米国特許第5,139,941号及び第4,797,368号に詳細に開示されている。
他のウイルスベクターも、本発明の遺伝子伝達システムとして利用することができる。ワクシニアウイルス(Puhlmann M.et al.,Human Gene Therapy 10:649−657(1999);Ridgeway,”Mammalian expression vectors,” In:Vectors:A survey of molecular cloning vectors and their uses.Rodriguez and Denhardt,eds.Stoneham:Butterworth,467−492(1988);Baichwal and Sugden,”Vectors for gene transfer derived from animal DNA viruses:Transient and stable expression of transferred genes,” In:Kucherlapati R,ed.Gene transfer.New York:Plenum Press,117−148(1986)及びCoupar et al.,Gene,68:1−10(1988))、レンチウイルス(Wang G.et al.,J.Clin.Invest.104(11):R55−62(1999))、又は単純ヘルペスウイルス(Chamber R.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci USA 92:1411−1415(1995))、ポックスウイルス(GCE,NJL,Krupa M,Esteban M.,The poxvirus vectors MVA and NYVAC as gene delivery systems for vaccination against infectious diseases and cancer Curr Gene Ther 8(2):97−120(2008))由来のベクターも、目的ヌクレオチド配列を細胞内に運搬可能な運搬システムとして利用することができる。
非ウイルス性遺伝子伝達システムとして幅広く使用されるポリマー系伝達システムとしては、ゼラチン、キトサン(Carreno GB,Duncan R.Evaluation of the biological properties of soluble chitosan and chitosan microspheres.Int J Pharm 148:231−240(1997))、PLL(ポリ−Lリジン)(Maruyama A,Ishihara T,Kim JS,Kim SW,Akaike T.Nanoparticle DNA carrier with poly(L−lysine)grafted polysaccharide copolymer and poly(D,Llactide).Bioconjugate Chem 8:735−742(1997))及びPEI(polyethyleneamine)(Abdallah B,Hassan A,Benoist C,Goula D,Behr JP,Demeneix BA.A powerful nonviral vector for in vivo gene transfer into the adult mammalian brain:Polyethyleneimine.Human Gene Ther 7:1947−1954(1996))などが利用されている。ポリマー系遺伝子伝達システムの長所は、免疫反応と急性毒性の発現率が低く、製造法が簡単であり、大量生産が可能であるという点である。
リポソームは、水相に分散された燐脂質により自然に形成される。外来DNA分子をリポソームにより成功的に細胞内に運搬した例は、Nicolau及びSene,Biochim.Biophys.Acta,721:185−190(1982)、及びNicolau et al.,Methods Enzymol.,149:157−176(1987)に開示されている。一方、リポソームを利用した動物細胞の形質転換に最もよく利用される試薬としては、Lipofectamine(Gibco BRL)がある。運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を内包したリポソームは、エンドサイトーシス、細胞表面への吸着又はプラズマ細胞膜との融合などのメカニズムを通じて細胞と相互作用し、細胞内に運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を運搬する。
(a)本発明は、HRE、E2F及びTERTの組み合わせからなる遺伝子発現調節配列及び選択的腫瘍細胞退縮活性の大きく改善された遺伝子伝達システムを提供する。
(b)本発明は、特に低酸素条件で更に向上した抗腫瘍効果を示し、TK遺伝子の挿入及びGCVの併用投与により、現在癌の遺伝子治療療法の最も大きい制限である、全ての癌細胞に治療遺伝子を移入することができないという欠点を大きく改善する。
E2Fプロモーター2コピーによりアデノウイルスの腫瘍選択的退縮活性がさらに向上したアデノウイルスを製作するために、pSP72−E2FクローニングベクターからSalI/NheIでE2FプロモーターDNAを切り取った後、p△E1sp1B−E2FクローニングベクターのXhoI/BamHI位置に挿入してp△E1sp1B−E2F−E2Fベクターを製作し、このベクターのEcoRI/BglII部位にEcoRI/BamHIで切り取ったRb7△19 DNAをサブクローニングして、E2Fプロモーター2コピーを有したp△E1sp1B−E2F−E2F−Rb7△19アデノウイルスE1シャトルベクターを製作した。製作したp△E1sp1B−E2F−E2F−Rb7△19シャトルベクターを、アデノウイルストータルベクターであるdl324 BstのE1部分に相同組み換えさせて、腫瘍選択的退縮アデノウイルスであるEE−Rd19を製作した。
前記製作したE−Rd19、EE−Rd19、及びHEE−Rd19腫瘍選択的退縮アデノウイルスの癌細胞特異的退縮活性を検証するために、それぞれのウイルスを様々な濃度の力価で、種々の癌細胞と、BJ及びMRC5のような正常細胞に感染させた後、細胞退縮の程度を比較観察した。図2から分かるように、HRE−E2F−E2Fプロモーターにより複製が調節される腫瘍選択的退縮アデノウイルス(HEE−Rd19)の癌細胞退縮活性は、E2F,HRE−E2F又はE2F−E2Fにより複製が調節される腫瘍選択的退縮アデノウイルス(E−Rd19,HE−Rd19,EE−Rd19)より優れた癌細胞退縮力を示すことを確認し、特に、本発明に使用された全ての癌細胞株において組み換えられたHREE2F−E2Fプロモーターにより複製が調節される腫瘍選択的退縮アデノウイルス(HEERd19)の癌細胞退縮活性が、対照群であるRd19又は野生型アデノウイルス(XC)と比較して類似しているか、より向上したことが観察されたのに対し、正常細胞株では、野生型アデノウイルスに比べ、細胞退縮力が減少することを確認することができ、癌細胞特異性にも優れていることを確認した。癌細胞退縮活性をより定量化するためのMTT分析結果においても、組み換えられたHRE−E2F−E2Fプロモーターにより複製が調節される腫瘍選択的退縮アデノウイルス(HEE−Rd19)の癌細胞退縮活性が、対照群であるAd−Rb7△19又は野生型アデノウイルスと比較して類似しているか、より向上したことを確認し、HEE−Rd19の癌細胞退縮活性がHREにより、正常条件に比べ低酸素条件でさらに増加したことを確認した(図3)。これと同様に、HRE6が組み合わされたHE−Rd19の癌細胞退縮活性がE−Rd19に比べて低酸素症状態で増加することを確認することができ、低酸素症状態でHRE6がエンハンサーとして作用することが分かった。
血管内皮細胞の増殖を阻害するLK8が挿入されたE1シャトルベクターを製作するために、pcDNAに挿入されているLK8遺伝子をNheI/XhoIで切り取った後、NheI/SalIを処理したp△E1sp1A−HRE−E2F−E2F−Rb7△19に挿入してE1アデノウイルスシャトルベクターとしてp△E1sp1A−LK8−HRE−E2F−E2F−Rb7△19を製作した。アデノウイルストータルベクターであるdl324−35KのE1部分をBstBI制限酵素で切断した後、XmnIで切断したLK8を発現するE1シャトルベクターp△E1sp1A−LK8−HRE−E2F−E2F−Rb7△19を相同組み換えてE1にLK8を発現する腫瘍選択的退縮アデノウイルスであるHEE−Rd19−K35/LKを製作した(図4)。
LK8を発現する組み換えられたE2Fプロモーターにより複製が調節されるアデノウイルスであるHEE−Rd19−K35/LKの癌細胞退縮活性を検証するために、それぞれのウイルスを様々な濃度の力価で癌細胞に感染させた後、癌細胞退縮程度を比較観察した(図5)。図5から分かるように、HEE−Rd19−K35/LKの癌細胞退縮活性力は、対照群であるRd19又は野生型アデノウイルスであるXCと比較し、非常に向上したことを観察することができた。また、HEE−Rd19−K35/LKの癌細胞退縮効果をより定量化するためにMTT分析を行った結果、種々のヒト肺癌細胞株(A549,H358,H2009,H596,H2172,HCC827)に、陰性対照群である複製不能アデノウイルスのdE1、ファイバーを置換しなかった対照群複製可能アデノウイルスのRd19、修飾されたE2Fプロモーターにより複製が調節されてアデノウイルスタイプ35のファイバーで置換された腫瘍選択的退縮アデノウイルスのHEE−Rd19−K35/LKウイルスを0.1−0.5MOI力価で感染させた後、時間帯別に生き残った細胞の生存率をMTT分析を通じて測定した(図6)。図6から分かるように、本実験に利用された全ての肺癌細胞株において、対照群ウイルスであるRd19に比べ、HEE−Rd19−K35/LKの細胞退縮活性が増加したことを観察することができた。特に、H322細胞株では、ファイバーが置換されなかった対照群ウイルスであるRd19が、アデノウイルスタイプ35のファイバーで置換された腫瘍選択的退縮アデノウイルスであるHEE−Rd19−K35/LKと類似したウイルス複製能と癌細胞退縮活性を確認し、このような結果は、H322がアデノウイルス細胞受容体であるCAR(コクサッキーウイルス・アデノウイルス受容体)の発現が高く、タイプ35ファイバーのレセプターであるCD46の発現が低いことと一致する結果である。上記の結果を要約すると、本研究で製作した修飾されたE2Fプロモーターにより複製が調節され、アデノウイルスタイプ35ファイバーで置換した改善された腫瘍選択的退縮アデノウイルスのHEE−Rd19−K35/LKは、プロモーターの組み換えとファイバーの置換による癌細胞感染能が増加し、これにより、効果的な癌細胞退縮活性を誘導することを検証することができた。
HEE−Rd19−K35/LK腫瘍選択的複製可能アデノウイルスの生体内抗腫瘍効果を検証するために、ヒト肺癌細胞株であるA549細胞株をヌードマウスの腹部皮下に注射して、形成された腫瘍に、1×1010 VPのRd19又はHEE−Rd19−K35/LKアデノウイルスを陰性対照群のPBSと共に二日間隔で3回腫瘍内に投与した後、腫瘍の成長を観察した(図7)。対照群のPBSを投与したマウスの場合、ウイルス投与後25日頃に腫瘍の容積が約500mm3に急激に成長したが、腫瘍特異的退縮アデノウイルスであるRd19又はHEE−Rd19−K35/LKを投与した場合は、腫瘍の成長が非常に遅延されることを確認した。即ち、Rd19又はHEE−Rd19−K35/LKアデノウイルスを投与したマウスの場合、ウイルス投与後25日頃に腫瘍の容積が約300mm3又は100mm3で、それぞれ対照群に比べて60%と20%に大いに減少することを確認した。また、現在商品化された遺伝子治療剤であるゲンディシンを投与したマウスの場合、ウイルス投与後25日に腫瘍の容積が約350mm3であって、HEE−Rd19−K35/LKは、ゲンディシンに比べても著しく優れた抗腫瘍効果が誘導されることを確認することができた。
HRE6コピー、修飾されたTERTプロモーター及びE2Fプロモーターを合体させたプロモーターによるアデノウイルスの複製能の差を確認するために、まず、HRE6コピーと修飾されたTERTプロモーター及びE2FプロモーターをHRE6/TERT/E2F順に組み換えたプロモーターによりGFPの発現が調節される複製不能アデノウイルスを製作した。まず、本発明者らが製作したpSP72−mTERTのSfuI,SalI部位に、pSP72−E2FベクターからClaI,SalI制限酵素で切り取ったE2FプロモーターをクローニングしてpSP72−TERT−E2Fを製作し、ClaI部位にpGL3−HRE6−APFベクターからClaI制限酵素で切り取ったHRE6コピーをクローニングしてpSP72−HRE6/TERT/E2Fを製作した。次いで、アデノウイルスE1シャトルベクターであるpΔE1sp1B(Ψ)をXhoI,EcoRIで切り取って、pSP72−HRE6/TERT/E2FをSalI,EcoRIで切り取った組み換えプロモーターHRE6/TERT/E2FをクローニングしたpΔE1sp1B(Ψ)−HRE6/E2F/TERTを製作した。
製作した組み換えプロモーターの活性を比較するために、種々の癌細胞に、製作した複製不能アデノウイルスを感染させて、36時間後FACSを利用してGFPの発現を確認した(図9)。図9から分かるように、HREエンハンサーがプロモーターに挿入されている二種類のdE1−HEmT−k35/GFPとdE1−HmTE−k35/GFPウイルスにより、低酸素条件におけるGFP発現が正常条件に比べ大きく増加することを確認した。このことは、HREが低酸素条件でエンハンサーとして作用し、ウイルス(dE1−HEmT−k35/GFP,dE1−HmTE−k35/GFP)の遺伝子の伝達効率を増加させることができることを意味する。また、脳癌細胞株であるU343とその他の癌細胞株(Hep1,MDA MB231)においてdE1−HEmTk35/GFPとdE1−HmTE−k35/GFPによる遺伝子伝達効率が優れており、特に、dE1−HEmT−k35/GFPが感染した細胞のGFP発現が、dE1−HmTE−k35/GFPが感染した細胞と比較して著しく増加することを確認した。このような結果を通じて、癌細胞におけるHEmT組み換えプロモーターの活性が、HmTE組み換えプロモーターの活性に比べて大きく増加することを確認した。図10から分かるように、CMVプロモーターによりGFPの発現が調節されるdE1−CMV−k35/GFPのGF発現が、癌細胞株であるU373MGと正常細胞であるBJ,CBHEL,IMR90の両方において高い。これに対して、dE1−HEmT−k35/GFPによるGFP発現は、癌細胞株であるU373MGではdE1−CMV−k35/GFPによるGFP発現と類似していた。したがって、プロモーター活性が非常に高いことを確認した。また、dE1−HEmT−k35/GFPによるGFP発現は、正常細胞では、何の処理もしなかった陰性対照群と類似しており、したがって、HEmTプロモーターの癌細胞特異性が非常に高いことを確認した。
HRE6コピー、E2Fプロモーター、及び修飾されたTERTプロモーター順に合体された組み換えプロモーターにより複製が調節される腫瘍選択的退縮アデノウイルスであるHEmT−Rd19−k35を製作するために、まず、本発明者らが製作したE1シャトルベクターのΔE1sp1B(Ψ)−Rb7△19をClaI,SalIで切断し、pSP72−E2FにClaI,SalIで切断して得たE2Fプロモーターを挿入してpΔE1sp1B(Ψ)−Rb7△19−E2Fを製作した。これを再びEcoRI,XhoI部位で切断した後、pcDNA3.1−mTERTをEcoRI,XhoI制限酵素で切断して得た修飾されたTERTプロモーターとクローニングし、そして、pSP72−E2FベクターからClaI,SalI制限酵素で切り取ったE2FプロモーターをクローニングしてpΔE1sp1B(Ψ)−Rb7△19−E2F−TERTを製作した。最後に、pΔE1sp1B(Ψ)−Rb7△19−E2F−TERTのClaI部位にpGL3−HRE6−APFベクターからClaI制限酵素で切り取ったHRE6をクローニングして、アデノウイルスE1シャトルベクターであるpΔE1sp1B(Ψ)−Rb7△19−HRE6/E2F/mTERTを製作した。
デコリン(Decorin)は、SLRP(スモールロイシンリッチプロテオグリカン)分類に属するタンパク質であって、10個〜12個のロイシンリッチな反復配列から構成されており、コア部位は、アーチ状になっており、細胞外基質に存在する種々の成長因子あるいはデコリン受容体との結合が容易な構造に形成されている。デコリンは、TGF(tumor growth factor)−βの活性を抑制させることにより、コラーゲンの繊維化を防ぎ、細胞外基質アセンブリーに関与し、腫瘍細胞成長を抑制し、腫瘍の形成と成長に天然の拮抗剤として作用すると知られている。また、デコリンは、成長因子や金属イオンのような細胞外基質の構成成分と反応し、MMP−1のような様々な種類のMMPの発現を促進させ細胞外基質を分解させる。最近の研究結果によると、デコリンを、EGFR(上皮成長因子受容体)の新しい生物学的リガンドとして、様々な種類の癌細胞に処理すると、EGFRと結合することにより、EGFRの役割を不活性化させると共に、内在性のサイクリン依存性p21WAF1の発現が促進され、細胞周期G1停止誘導により細胞退縮を誘導することが報告された。したがって、デコリンを発現するアデノウイルスは、ウイルスの拡散を増加させることにより、アデノウイルスを利用した治療遺伝子の伝達効率を高めることができるだけではなく、デコリンそのものによる癌細胞退縮効果も誘導することができる。
HSV−TK(単純ヘルペスウイルス−チミジンキナーゼ)は、現在最も高い頻度で使用される薬剤感受性遺伝子であって、毒性のないプロドラッグであるガンシクロビル(GCV)をリン酸化させ、感染された細胞のDNA合成を抑制し、分裂する細胞を選択的に退縮できる癌治療遺伝子である。チミジンキナーゼ(TK)は、DNA合成時、サルベージ経路に利用される酵素である。HSV−TKは、チミジンだけではなく、ヌクレオチド類似体でありながら抗ウイルス製剤として利用されるガンシクロビルもリン酸化させることができる。リン酸化されたガンシクロビル−トリホスフェートは、DNA合成時、DNA鎖に挿入され、DNA鎖形成を中断させ、結果的にDNA合成を抑制する。また、死んだ癌細胞のアポトーシスビヒクルを、隣接した生きている癌細胞が貪食(ファゴサイトーシス)することにより、HSV−TKが移入されなかった癌細胞にもガンシクロビル−トリホスフェートが入って細胞死を起こし傍観者効果を誘導することができる。癌細胞退縮による癌細胞特異的免疫反応が誘導されることによっても傍観者効果を誘導することができる。また、CD(シトシンデアミナーゼ)は、毒性のない5−FC(5−フルオロシトシン)を強力な細胞毒性と放射線感受性を有する5−FU(5−フルオロウラシル)に転換させる作用をする。最近、このようなCD遺伝子を移入させた遺伝子治療において、CD遺伝子の発現による癌細胞退縮効果が報告された。このようなことに着目し、癌細胞特異的活性に優れたHemT組み換えプロモーターにより複製が調節されるアデノウイルスのE1部位でデコリン遺伝子を、E3部位ではCDとTKを同時に発現する腫瘍選択的退縮アデノウイルスを製作した。
上記の方法により製作したHEmT−Rd19−k35/DCN腫瘍選択的アデノウイルスがデコリンを十分発現するかどうか確認するために、ウエスタンブロットアッセイを行った(図14)。図14から分かるように、本研究に使用されたRd19−k35/DCN,HEmTRd19−k35/DCNアデノウイルスによりデコリンが正常に発現していることを確認した。
上記で製作したHEmT−Rd19−K35/DCN腫瘍選択的退縮アデノウイルスの退縮活性を検証するために、それぞれのウイルスを様々な濃度の力価で脳癌細胞株(U373MG,U87MG,T98G,U343)と頭頸部癌細胞株(CAL27,IMR90,SJSA)、その他の種々の癌細胞株(H460,H358,C33A,Hep1)、そして正常細胞株(IMR90,BJ,CBHEL)に感染させた後、退縮程度を比較観察した(図15)。図15から分かるように、デコリンを発現するRd19−K35/DCN又はHEmT−Rd19−K35/DCN腫瘍選択的退縮アデノウイルスの癌細胞退縮活性が、対照群のRd19−K35又はHEmT−Rd19−K35に比べ、それぞれ増加したことを観察することができた。したがって、デコリン発現による癌細胞退縮活性増大効果を確認した。
デコリンを発現するHEmT−Rd19−k35/DCN腫瘍選択的退縮アデノウイルスの退縮活性をより定量的に検証するために、脳癌細胞株(U343,U87MG)とその他の種々の癌細胞株(Huh7,C33A)にRd19−k35,HEmT−Rd19−k35,Rd19−k35/DCN,HEmT−Rd19−k35/DCNをそれぞれ感染させた後、退縮程度を比較観察した(図16)。図16から分かるように、本研究に使用された全ての癌細胞株において、HEmTプロモーターにより複製が調節されるHEmT−Rd19−k35腫瘍選択的退縮アデノウイルスの癌細胞退縮活性が、対照群であるRd19−k35より優れていることを確認した。また、デコリンを発現するRd19−k35/DCN又はHEmT−Rd19−k35/DCN腫瘍選択的退縮アデノウイルスの癌細胞退縮活性が、各ウイルスの対照群であるRd19−k35,HEmT−Rd19−k35に比べ、大きく増加したことを確認することができた。
Claims (20)
- (i)低酸素応答配列(HRE)エンハンサー配列と、
(ii)E2Fプロモーター配列とを含み、
前記E2Fプロモーターが、前記HREエンハンサー配列の下流に位置し、前記HREエンハンサー配列及び前記E2Fプロモーターが、協同的に同一の遺伝子の発現を促進することを特徴とする遺伝子発現調節配列。 - E2Fプロモーター配列が、2回〜10回繰り返される請求項1に記載の遺伝子発現調節配列。
- HREエンハンサー配列が、2回〜20回繰り返される請求項1に記載の遺伝子発現調節配列。
- 遺伝子発現調節配列が、テロメラーゼ逆転写酵素(TERT)プロモーター配列を更に含む請求項1に記載の遺伝子発現調節配列。
- 遺伝子発現調節配列が、組み換えアデノウイルスベクターのE1領域に挿入され、5’から3’方向にHRE配列、E2Fプロモーター配列及びTERTプロモーター配列を含む請求項4に記載の遺伝子発現調節配列。
- HRE配列が6回繰り返され、かつE2F配列が2回繰り返される請求項5に記載の遺伝子発現調節配列。
- (a)請求項1から6のいずれかに記載の遺伝子発現調節配列と、
(b)前記遺伝子発現調節配列に作動的に連結された、発現させようとする目的遺伝子と、
を含むことを特徴とする腫瘍特異的発現の改善された遺伝子伝達システム。 - 遺伝子伝達システムが、プラスミド、組換えアデノウイルス、アデノ関連ウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスシンプレックスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリマー、リポソーム又はニオソームである請求項7に記載の遺伝子伝達システム。
- 遺伝子伝達システムが、組換えアデノウイルスベクターである請求項8に記載の遺伝子伝達システム。
- (a)アデノウイルスの末端逆位配列(ITR)配列と、
(b)(i)低酸素応答配列(HRE)エンハンサー配列と、(ii)E2Fプロモーター配列とを含み、前記E2Fプロモーターが、前記HREエンハンサー配列の下流に位置し、前記HREエンハンサー配列及びE2Fプロモーターが、協同的に同一の遺伝子の発現を促進する遺伝子発現調節配列と、
(c)前記遺伝子発現調節配列に作動的に連結された、腫瘍抑制因子遺伝子、抗原性遺伝子、細胞毒性遺伝子、細胞増殖抑制遺伝子、アポトーシス遺伝子及び抗血管新生遺伝子から構成された群から選択される治療学的トランス遺伝子と、
を含むことを特徴とする癌細胞特異的退縮活性の改善された組換えアデノウイルス。 - 遺伝子発現調節配列内のE2Fプロモーター配列が、2回〜10回繰り返される請求項10に記載の組換えアデノウイルス。
- 遺伝子発現調節配列内のHREエンハンサー配列が、2回〜20回繰り返される請求項10に記載の組換えアデノウイルス。
- 遺伝子発現調節配列が、テロメラーゼ逆転写酵素(TERT)プロモーター配列を更に含む請求項10に記載の組換えアデノウイルス。
- 遺伝子発現調節配列が、組み換えアデノウイルスベクターのE1領域に挿入され、5’から3’方向にHRE配列、E2Fプロモーター配列及びTERTプロモーター配列を含む請求項13に記載の組換えアデノウイルス。
- HRE配列が6回繰り返され、かつE2F配列が2回繰り返される請求項14に記載の組換えアデノウイルス。
- 治療学的トランス遺伝子が、アポリポタンパク質Klingle8(LK8)遺伝子、シトシンキナーゼ(CD)遺伝子、チミジンキナーゼ(TK)遺伝子及びデコリン遺伝子から構成された群から選択される一つ又は二つ以上の遺伝子である請求項10に記載のアデノウイルス。
- (a)請求項10から16のいずれかに記載の組換えアデノウイルスの治療学的有効量と、(b)薬剤学的に許容される担体と、を含むことを特徴とする抗腫瘍組成物。
- 組成物が、有効成分としてガンシクロビル(GCV)を更に含む請求項17に記載の抗腫瘍組成物。
- 請求項10から16のいずれかに記載の組換えアデノウイルスの治療学的有効量を含む抗腫瘍組成物を哺乳動物対象に投与する工程を含むことを特徴とする癌治療方法。
- 組成物が、有効成分としてガンシクロビル(GCV)を更に含む請求項19に記載の方法。
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