JPH07509251A

JPH07509251A - ｐ５３ワクチン

Info

Publication number: JPH07509251A
Application number: JP6504772A
Authority: JP
Inventors: レビン，アーノルド，ジェー．
Original assignee: ザトラスティーズオブプリンストンユニバーシティ
Priority date: 1992-07-22
Filing date: 1993-07-22
Publication date: 1995-10-12
Also published as: AU4788693A; CA2140624C; DE69333448D1; JP2003300903A; ATE261314T1; WO1994002167A1; EP1421947A1; CA2140624A1; EP0651653B1; EP0651653A4; EP0651653A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本出願は、１９９２年７月２２日出願の出願第０７／９１８，２９２号の一部継続出願であり、その出願を本出願の一部を構成するものとしてここに引用する。

本発明は癌を治療するためのワクチンに関するものである。そのワクチンは、ｐ５３タンパクを免疫原として自存する。

ヒトゲノムの染色体１７ｐ上に見い出されるｐ５３遺伝子は、野性型の状態では腫瘍抑制遺伝子である。レビン（Ｌｅｖｉｎｅ）らによる“ｐ５３腫瘍抑制遺伝子“と題された研究記事がネイチャー（以、４５３〜４５６．１９９１年）に掲載されている。

ヒトの腫瘍の５０％以上は、ｐ５３遺伝子の突然変異型を発現する細胞を含有している。多くの腫瘍では、り５３遺伝子の１つの対立遺伝子がタンパクの突然変異型をコードする点突然変異を自存しているが、他の対立遺伝子は部分的または完全に失われる。このようなパターンは、例えば、結腸癌の約７０〜８０％、乳癌の約５０％、肺癌の約５０％で観察され、小細胞肺癌の１００％で観察される。野性型ｐ５３の消失を検出することによって癌の診断を行なう提案がなされている（ボゲルスタイン（Ｖｏｇｅ　Ｉ　ｓ　ｔ　ｅ　ｉｎ）らのヨーロッパ特許出願第３９０．３２３号、およびペイカー（Ｂａｋｅｒ）ら、５ｉｅｎｃｅ　２４４．２１７〜２２１　（１９８９年）参照）。

ｐ５３遺伝子中の点突然変異の位置あるいは場所は腫瘍の種類によって異なる。

例えば、Ｂ型肝炎とアフロトキシンに暴露されたヒトの肝細胞カルシノーマの５０％はコドン２４９にｐ５３突然変異を有し、肺腫瘍では、コドン１５４と２７３に優先的に突然変異を存するようであり、結腸腫瘍では、コドン１７５．２４８および２７３に複数の独立した突然変異を有している。癌および前癌状態における重症度と性質を含む種々の表現型は、ｐ５３突然変異の場所を決定することによって区別できることを示す証拠が提出されている。レビン（Ｌｅｖｉｎｅ）らの国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９１１０４６０８　（１９９１年６月２７日出願）参照。

癌を有するヒトの約１０〜２０％は、ｐ５３タンパクに対する抗体を産生ずる腫瘍を持っている（デ・フロメンチル（ｄｅ　Ｆｒｏｍｅｎｔｅｌ）ら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　３９．１８５〜Ｉ　８９　（１９８７年）：クローフオード（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）ら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　３０．４０３〜４０Ｂ　（１９８２年））。これらの抗体の存在は、ヒトＨＬＡまたはネズミＨ−２遺伝子座のクラスＩＩ受容体が、ＣＤ−４ヘルパーＴ細胞およびＢ細胞システムに対してｐ５３のペプチド抗原を提供でき、その結果免疫応答が生じることを示唆する。しかし、抗体は、効果的な抗腫瘍剤ではないと考えられている。したがって、癌を有するヒトにおける抗ｐ５３抗体の存在は、癌患者が効果的な抗腫瘍免疫応答をしている可能性を示唆するものでない。

腫瘍抗原によって免疫処理された動物は同じ抗原からは保護されると報告されている。したがって、シミアンウィルス４０（ＳＶ４０）ラージＴ抗原を用いて動物を免疫処理すると、生きた腫瘍形成ＳＶ４０によって形質転換された細胞によるその後の攻撃から保護できる（テベチア（Ｔｅｖｅｔｈｉａ）ら、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ、Ｑｕａｎｔ、Ｂｉｏｌ、土工、２３５〜２４２．１９８０年参照）。

同様に、フレイ（Ｆ　ｒ　ｅ　ｙ）とレビン（Ｌｅｖｉｎｅ）は、ｐ５３付加ｒａｓ−転換の、Ｂ３と命名された照射されたフィッシャーラット細胞株で免疫されたラットは、同じ生細胞によるその後の腫瘍攻撃から保護できたことを報告した。

そのｐ５３付加ｒａｓ−転換ラット細胞株は、別個に得たｐ５３付加ｒａｓ−転換細胞株の８５％と共通する腫瘍特異的な移植拒絶抗原を発現することが報告された。フレイとレビンは、ｐ５３タンパクが腫瘍特異的な移植拒絶抗原でなく、Ｂ３細胞による攻撃に対して保護できないことを示す証拠を提出した（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　６３，５４４０〜５４４４．１９８９年を参照）。

現在の癌治療では、化学物質や放射線など、腫瘍細胞に対する特異性が不十分な細胞毒性剤を使用している。正常な細胞に影響を与えることがない、より特異的な治療が要求されている。特に、患者自身の免疫系を刺激することによる癌治療が必要とされている。

発明の概要上記の目的および当業者に明らかとなるであろう他の目的は、哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的な免疫応答を誘発するような形の突然変異型または野性型のｐ５３タンパクを含むワクチン組成物を提供することによって達成される。

さらに、本発明は、免疫学的に効果のある量の突然変異型または野性型のｐ５３タンパクを用いて哺乳類を治療することを含む、ヒトの腫瘍の成長を阻止する方法を提供する。

発明の詳細な説明本発明は、哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的な免疫応答を誘発するような形の突然変異型または野性型のｐ５３タンパクを含むワクチン組成物を提供する。例えば、突然変異型または野性型のｐ５３タンパクは、抗原表現細胞の表面、または薬学的に許容される補助剤と結合して提供される。

本明細書では、“野性型のｐ５３タンパク“という語は、マトラシェウスキ−（Ｍａｔ　Ｉａｓｈｅｗｓｋｉ）ら、ＥＭＢＯＪ、＋３．３２５７〜３２６２．１９８４年、サカット・ホウリ（Ｚａｋｕ　ｔ−Ｈｏｕｒ　ｉ）ら、ＥＭＢＯＪ。

↓、１２５１〜＋２５５．１９８５年：およびラム（Ｌａｍｂ）とクローフォート　（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）、Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　５　、　１３７９〜１３８５．１９８６年）にて報告されているヌクレオチドまたはアミノ酸配列を意味する。これらの配列はアンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）から入手可能である。

野性型のｐ５３には、アミノ酸７２におけるプロリン／アルギニン多型および対［５口するヌクレオチド多型が含まれる。

ｐ５３タンパクは突然変異されてもよい。腫瘍細胞において突然変異が起きることか頻繁に見い出される位置か、または野性型ｐ５３遺伝子の不活化を導く位置において突然変異が行なわれることが好ましい。突然変異は、単一の置換または複数（即ち、２〜２０、好ましくは２〜ＩＯ１より好ましくは２〜５）の置換である。

好ましい突然変異体ヒトｐ５３遺伝子は、レビ〉・・ニー・ジエー（Ｌｅｖｉｎｅ　Ａ、Ｊ、））ら、“ｐ５３腫瘍抑制遺伝子”、Ｎａｔｕｒｅ、３５１．４５３〜４５６（１９９１年）に記載されている。ｐ５３遺伝子で生じる点突然変異の殆どは、ミスセンス突然変異であり、変換されたｐ５３タンパクを生しさせる。突然変異の多くは、アミノ酸残基１３０から２９０の間に密集しており、そのタンパクの、４個の“ホットスポット”領域に最も集中している。

このホントスポット領域は、ｐ５３遺伝子の４つの最も保存された領域に一致しているにクロ（Ｎｉｇｒｏ）ら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２．７０５〜７０８（１９８９年）参照）。４個の“ホットスポット“突然変異領域は、１３２〜１４３．１７４〜１７９．２３６〜２４８、および２７２〜２８１のコドンに存在する。

これらのホットスポットの生成頻度と分布は癌ができた組織の種類によって異なる。

野性型ｐ５３遺伝子とタンパクは知られており、公知の方法により自然にまたはりコンビナンドとして得られる。その方法には、細胞からタンパクを直接分離する方法、当該タンパクをコードするＤＮＡを分離または合成し、このＤＮＡを使用してリコンビナントタンパクを産生する方法、個々のアミノ酸から当該タンパクを化学的に合成する方法が含まれる。野性型ｐ５３遺伝子とタンパクを得る方法は、マトラシエウスキ−（Ｍａｔ　Ｉａｓｈｅｗｓｋｉ）ら、ＥＭＢＯＪ。

ラム（Ｌａｍｂ）とクローフォード（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）、Ｍｏ１．Ｃｅ１ｌ。

Ｂｉｏｌ、５．１３７９〜１３８５．１９８６年）に記載されている。突然変異株は、位置特異的突然変異生成により野性型ｐ５３遺伝子から調製してもよい（例えば、１ラー（Ｚｏｌｌｅｒ）とスミス（Ｓｍｉ　ｔｈ）　、Ｎｕｃ　Ｉ。

完全なｐ５３遺伝子またはｐ５３遺伝子のフラグメントは、例えば、オリゴヌクレオチド・プローブを横築するための公知のＤＮＡ配列を用いて分離してもよい。こうするために、公知の配列から得た探識化オリゴヌクレオチドを使用し、サザン・ハイブリダイゼーションによってＤＮＡ制限フラグメントを同定する。

あるいは、ｐ５３をコードするＤＮＡを個々のヌクレオチドから合成してもよい。ＤＮＡを合成する公知の方法には、重複する二重鎖オリゴヌクレオチドを調製し、空隙に充填し、終端を相互に結合する方法が含まれる。

上記のようにして調製されたＤＮＡを複製連鎖反応（ＰＣＲ）によって増殖してもよい。あるいは、そのＤＮＡをクローニングベクターに挿入して増殖し、それを適切な宿主細胞に形質移入し、その宿主細胞から９５３ＤＮＡを回収するようにしもよい。サンプルツク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、“分子クローニング、第２版、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ　（１９８７年）の全般を参照のこと。

当該タンパクを調製するためには、当技術分野でよく知られたりコンビナンド法を使用してもよい。簡単に述へると、ｐ５３をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入し、それを好適な宿主細胞に形質移入する。ＤＮＡの発現後、当該タンパクを収穫する。サンプルツク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら参照（前述）。

突然変異型または野性型ｐ５３タンパクの同等物を本発明のワクチンに使用してもよい。そのような同等物には、突然変異型または野性型ｐ５３タンパクに匹敵する免疫応答を誘発する類似体が含まれる。さらに、当該同等物は、それらに対応する突然変異型または野性型ｐ５３タンパクと免疫学的に交差反応性（ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔ　１ｖｅ）を存する。その同等物は、例えば、タンパクのフラグメント、あるいは突然変異型または野性型ｐ５３タンパクの置換型、付加型または削除型突然変異株でもよい。

突然変異型または野性型ｐ５３タンパクは、抗原のエピトープを定義するための十分なアミノ酸残基を含有していることが好ましい。例えば、そのフラグメントは、エピトープのみをコートするミニ遺伝子であってもよい。公知の免疫タンパクから免疫原性フラグメントを分離して同定する方法は、サルフェルト（Ｓａｌｆｅｌｄ）らによって、Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、６３，７９８〜８０８（１９８９年）に、およびイソラ（Ｉｓｏｌａ）らによって、Ｊ、Ｖｉｒｏｌ。

６３．２３２５〜２３３４　（１９８９年）に記載されている。

フラグメントがエピトープを定義しているものの、免疫原としては短すぎる場合には、キャリヤーとなる分子に結合してもよい。好ましいキャリヤー分子には、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、Ｉｇ配列、ＴｒｐＥ、およびヒトまたはウシ血清アルブミンが含まれる。結合は、当技術分野で知られている方法で行なうことができる。その一つの方法は、当該フラグメントのシスティン残基をキャリヤー分子上のシスティン残基と結合させることである。

同等のタンパクは、同等のアミノ酸配列を有する。他の配列と実質的に同一であるが、１つ以上の置換、付加または削除によって当該能の配列と相違するアミノ酸配列は、同等な配列と考えることができる。好ましくは、配列内のアミノ酸残基の数の２５％以下、より好ましくは１０％以下、最も好ましくは５％以下の数のアミノ酸残基が、本発明のタンパクに対して、置換、付加、または削除される。

例えば、配列内のアミノ酸を同等なアミノ酸を用いて置換することは知られている。一般に同等と考えられているアミノ酸のグループは下記の通りである。

（ａ）　Ａｌａ（八）　Ｓｅｔ　（Ｓ）　Ｔｈｒ　（Ｔ）　Ｐｒｏ　ＣＰ）Ｇｌｙ（Ｇ）（ｂ）　Ａｓｎ　（Ｎ）　Ａｓｐ　（Ｄ）　Ｇｌｕ　（Ｅ）　Ｇｉｎ　（Ｑ）（ｃ）　Ｈｉｓ　（Ｈ）　Ａｒｇ　（Ｒ）　Ｌｙｓ　（Ｋ）（ｄ）　Ｍｅｔ　（Ｍ）　Ｌｅｕ　（Ｌ）　１１ｅ　（１）　Ｖａｌ　（Ｖ）（ｅ）　Ｐｈｅ　（Ｆ）　Ｔｙｒ　（Ｙ）　Ｔｒｐ　（Ｗ）本発明の突然変異型または野性Ｗｐ５３タンパクは、免疫系に適切に与えた場合、予想を越えた効果的な免疫応答を誘発する。本明細書では、効果的な免疫応答とは、癌細胞の成長を禁止、すなわち阻止、遅延または停止するか、癌細胞を無くすことを意味する。その効果的な免疫応答は、キラーＴ細胞反応であることが好ましい。哺乳類は、ヒト、またはマウス、ラットまたはウサギのような実験に通常使用される動物である。

突然変異型または野性型ｐ５３タンパクは、ベヒクルによりワクチンとして免疫系に与えられる。例えば、突然変異型または野性型のｐ５３タンパクは、抗原表現細胞の表面、または薬学的に受け入れられる補助剤と結合して与えられる。

抗原表現細胞は、一般に、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）を有する真核性細胞であり、好ましべは、それらの細胞表面にあるクラスＩＩの遺伝子産物である。本明細書の目的の範囲では、抗原表現細胞には、抹消血細胞なとのりコンビナンド真核細胞、およびリコンビナント細菌細胞も含まれる。本明細書によって定義された抗原表現細胞の例には、樹枝状細胞、ＭＨＣクラスＩｉ陽性であることが好ましいマクロファージ、ＭＨＣクラスＩＩ陽性であることが好ましい単核細胞、およびリンパ球が含まれる。

本発明の一実施例においては、抗原表現細胞は、突然変異型または野性型ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するりコンビナンド真核細胞である。

リコンビナント真核細胞は、インビボ、またはインビトロで調製できる。

本発明の一実施例においては、突然変異型または野性型ｐ５３をコードするＤＮＡを、リコンビナント・ウィルスベクターを用い、インビボで真核細胞に挿入する。ベクターには、ワクシニアウィルスのような弱毒化したりコンビナンド・ポックスウィルスが含まれ、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ　９２１０１９０６（１９９２年３月２日）に記載されたように、必須でないウィルスコード化遺伝子機能が不活化されたオウムボックスが好ましい。ワクシニアゲノムに外部のＤＮＡを挿入するだめの技術は、当技術分野で知られている。リコンビナントを構築するためのプラスミドベクターは、例えば、チャクラパーティ（Ｃｈａｋｒａｂａｒ　ｔ　ｉ）　ら、１９８５年、Ｍｏ１．Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ。

５：３４０３：マケット（Ｍａｃｋｅｔｔ）ら、１９８４年、Ｊ、Ｖｉｒｏｌ。

４９　：　８５７　；オヨｃＪ’モス（Ｍｏｓ　ｓ）、１９８７年、ｒ＠乳類細胞（Ｄため（Ｄ遺伝子転移ヘクター１の第１Ｏ頁、ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）と力ロス（Ｃａｌｏｓ）編、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｄ−ルド・スプリング・ハーバ−、ニューヨーク、に記載されている。そして、突然変異型または野性型ｐ５３タンパクの発現は、リコンビナント・ポックスウィルスを用いて免疫処理した実験対象の抗原表現細胞内にインビボで生じる。

他の実施例では、突然変異型または野性型ｐ５３をコードするＤＮＡを、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬｓ）のために記載されたレトロウィルス形質導入のような公知の技術を使用してインビトロで真核細胞に挿入する（ニス・ニー・ローゼンベルグ（Ｓ、Ａ、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）ら、ＮＥＪＭ、３２３　（９）：５７０〜５７８　（１９９０年８月３０日）およびケー・カルバ−（Ｋ、Ｃｕ１ｖｅｒ）ら、ＰＮＡＳ　ＵＳＡ　８８：３１５５〜３１５９　（１９９１年４月）参照）。

他の実施例では、突然変異型または野性型ｐ５３エピトープをコードするミニ遺伝子を公知の技術を使用してインビトロで真核細胞に挿入する（））−ン（ｈａｒｎ）ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８９：２６７９〜２６８３　（１９９２年４月）参照）。

真核細胞にＤＮＡを挿入するための好適なりローニング／発現ベクターには、５Ｖ−４０、アデノウィルス、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）の公知の誘導体、およびレトロウィルス由来のＤＮＡ配列が含まれる。これらのベクターは何れも、プラスミドと、ファージＤＮＡ、即ちシャトルベクターとの組合せから得られるベクターと結合することにより、原核細胞および真核細胞の両方においてタンパクをコードする配列をクローニングおよび／または発現することができる。

他の真核性発現ベクターも本技術分野で知られている。例えば、ピー・ジエー・サザーン（Ｐ、Ｊ、５ｏｕｔｈｅｒｎ）とピー・バーブ（Ｐ、Ｂｅｒｇ）、Ｊ。

Ｍｏ１．ＡＩ）Ｉ）１．Ｇｅｎｅｔ、Ｉ、３２７〜３４１　（１９８２年）；ニス・サブラマ＝　（Ｓ、Ｓｕｂｒａｍａｎ　ｉ）ら、Ｍｏ１．Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌｌ、８５４〜８６４　（１９８１年）１アール・ジエー・カフマン（Ｒ，Ｊ。

Ｋａｕｆｍａｎｎ）とピー・ニー・シャープ（Ｐ、Ａ、５ｈａｒｐ）、“ジヒドロフオレート・リダクターゼ分子相補ＤＮＡ遺伝子を用いて共形質移入した配列の増殖と発現”、Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、＋５９．６０１〜６２１（１９８２年）；アール・ジエー・カフマンとび−・ニー・シャープ、Ｍｏｌ。

Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、＋５９．６０１〜６６４　（１９８２年）：ニス・アイ・スカーヒル（Ｓ、Ｔ、５ｃａｈｉｌ　Ｉ）ら、“中国ハムスター・オバリー細胞におけるヒト免疫インターフェロンＤＮＡ遺伝子の産物の発現と特徴化”、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８０，４６５４〜４６５９（１９８３年）、ジー・ウルラウ（Ｇ、Ｕｒ　Ｉ　ａｕｂ）とエル・ニー・チャシン（Ｌ、Ａ、Ｃｈａｓ　ｉｎ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ７７．４２１６〜４２２０　（１９８０年）を参照。

突然変異型または野性型ｐ５３タンパクは、リコンビナント細菌細胞の表面上で、免疫系に投与してもよい。好適なりコンビナンド細菌細胞は、カルメビナント細菌細胞は、本技術分野で知られているように、無毒性菌種内のｐ５３タンパクの活性部分を含むＤＮＡをクローニングすることによって調製してもよい。例えば、リコンビナント・サルモネラを調製するには、カーチスコンビナントＢＣＧを調製するためには、ストバー、ケー・ニス（ｓｔｏｖｅｒ。

Ｋ、Ｓ、　）ら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ　９１．Ｃｏ１ｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、ｐｐ、３９３〜３９８（１９９１年）を参照のこと。

クローニングベクターは、染色体、非染色体、および合成りＮＡ配列のセグメントを含んでいてもよい。幾つかの好適な原核クローニングベクターは、ｃｏＩＥｌ、ｐｃＲＩ％ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ｐＵＣＳｐＫｓＭ、およびＲＰ４などの大腸菌からのプラスミドを含有する。また原核ベクターは、Ｍ１３なとのファージＤＮＡの誘導体、および他の線状−重鎖ＤＮＡファージを含有する。

細菌、特に大腸菌のタンパクを発現するためのベクターも知られている。そのようなベクターには、ｐＫ２３３（またはプラスミドの１見旦フアミリーの何れか）、Ｔ７、およびλＰ１が含まれる。融合タンパクを発現するベクターの例としては、ディニックマン（Ｄｉｅｃｋｍａｎｎ）とトザゴロフ（Ｔｚａｇｏｌｏｆｆ）、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６０−１１５１３〜１５２０　（１９８５年）に述△、られているＰＡＴＨベクターが挙げられる。これらのベクターは、カルボキシ末端のポリリンカーの前にあるアントラニル酸・シンセターゼ（Ｔ　ｒ　ｐ　Ｅ）をコードするＤＮＡ配列を含有している。他の発現ベクターシステムは、β−ガラクトシダーゼ（ｐＥＸ）、λＰ１、マルトース結合タンパク（ｐＭＡＬ）　、グルタチオン　Ｓ−）ランスフェラーゼ（ｐＧＳＴ）に基づいている（Ｇｅｎｅ　６７−１３１　（１９８８年）、およびＰｅｐｔｉｄｅＲｅＳｅａｒＣｈ　３．１６７　（１９９０年）参照）。

本発明で有用な発現ベクターは、発現すべきＤＮＡ配列またはフラグメントに適切に結合された少な（とも１つの発現コントロール配列を含んでいる。クローン化ＤＮＡ配列の発現を制御し、調節するために、ベクターにコントロール配列を挿入する。有用な発現コントロール配列の例は、Ｉａｃシステム、ｍシステム、ｔａｃシステム、↓ｒｃシステム、ファージλの主要なオペレータおよびプロモータ領域、ｆｄ外皮タンパクのコントロール領域、および、ポリオーマ、アデノウィルス、レトロウィルス、およびシミアンウィルスから得たプロモータ、例えば、５Ｖ−４０の早期および晩期プロモータ、および原核細胞または真核細胞内での遺伝子の発現をコントロールするとして知られている他の配列、およびそれらのウィルスまたはその組合せである。

本ワクチンは、ムラミルペプチドなどの薬学的に許容される補助剤、インターフェロン、インターロイキン−１およびインターロイキン６などのリンフ才力イン、または細菌的補助剤を更に含有していてもよい。その補助剤は、突然変異型または野性型ｐ５３タンパクを吸着する、酸化アルミニウムなどの適切な粒子を含有していてもよい。補助剤を含むこれらのワクチンは、本技術分野で知られた方法で調製できる。

細菌性補助剤の例はＢＣＧである。上記のように抗原表現細胞として使用した場合、リコンビナントＢＣＧはそれ自身の補助剤としても作用するであろう。この場合、追加の補助剤は必要てないが、１種類以上の補助剤を任意的に存在させてもよい。天然（リコンビナントでない）の状態で使用する場合、ＢＣＧは突然変異型または野性Ｗｐ５３と組合せられることによって単独で補助剤として作用し、効果的な免疫応答を誘発する形になる。

本ワクチンは、適切な媒体を含んでいてもよい。好ましい媒体には、燐酸緩衝生理食塩水、リボゾームおよびエマルジョンなどの薬学的に許容されるキャリアーが挙げられる。

さらに、本発明は、突然変異型または野性型のｐ５３を含むワクチンを免疫的に効果のある量だけ用い、腫瘍を有するか、腫瘍形成の可能性に切迫した哺乳類を治療することを含む、哺乳類における腫瘍の成長を阻止する方法を包含する。

哺乳類が異常な前癌状態にあると診断された場合、その哺乳類は腫瘍形成の危険に切迫している。

突然変異型または野性型ｐ５３は、効果的な免疫応答を誘発するような形で、即ち、抗原表現細胞の表面で、または薬学的に許容される補助剤と結合して哺乳類の免疫系に提供される。突然変異型または野性型ｐ５３は、薬学的に許容されるキャリアーなとの媒体中にあるのが好ましい。

本ワクチンは、本技術分野で知られた方法によって哺乳類に投与される。そのような方法には、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、または皮肉の投与が含まれる。

フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号（Ｃ１２Ｐ　２１１００Ｃ１２Ｒ１：９１）（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ）、　ＡＵ、　ＣＡ、　ＦＩ、　ＨＵ、ＪＰ、ＫＲ，Ｎｏ、ＲＯ，ＲＵＩ

Claims

【特許請求の範囲】

１．哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的な免疫応答を誘発する形態の突然変異体ｐ５３タンパクを含有するワクチン組成物。
２．薬学的に許容される媒体をさらに含有する請求項１に記載のワクチン組成物。
３．上記形態が、突然変異体ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態か、または突然変異体ｐ５３タンパクが秦学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項１に記載のワクチン組成物。
４．突然変異体ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態である請求項３に記載のワクチン組成物。
５．突然変異体ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項３に記載のワクチン組成物。
６．抗原表現細胞が真核細胞である請求項４に記載のワクチン組成物。
７．真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞である請求項６に記載のワクチン組成物。
８．抗原表現細胞が樹枝状細胞である請求項７に記載のワクチン組成物。
９．樹枝状細胞が、表面に突然変異体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント枝状細胞である請求項８に記載のワクチン組成物。
１０．薬学的に許容される補助剤が細菌細胞である請求項５に記載のワクチン組成物。
１１．細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌である請求項１０に記載のワクチン組成物。
１２．カルメット・ゲラン杆菌が、突然変異体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項１１に記載のワクチン組成物。
１３．哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的な免疫応答を誘発するような形態の突然変異体ｐ５３タンパクを含むワクチン組成物を免疫学的に効果のある量だけ用いて哺乳類を治療することを含む哺乳類における腫瘍の成長を阻止する方法。
１４．ワクチン組成物が薬学的に許容される媒体も含有する請求項１３に記載の方法。
１５．形態が、突然変異体ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態か、または突然変異体ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項１３に記載の方法。
１６．突然変異体ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態である請求項１５に記載の方法。
１７．突然変異体ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項１５に記載の方法。
１８．抗原表現細胞が真核細胞である請求項１６に記載の方法。
１９．真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞である請求項１８に記載の方法。
２０．抗原表現細胞が樹枝状細胞である請求項１９に記載の方法。
２１．樹枝状細胞が、表面に突然変異体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント枝状細胞である請求項２０に記載の方法。
２２．薬学的に許容される補助剤が細菌細胞である請求項１７に記載の方法。
２３．細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌である請求項２２に記載の方法。
２４．カルメット・ゲラン杆菌が、突然変異体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項２３に記載の方法。
２５．突然変異体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・抗原表現細胞。
２６．哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的な免疫応答を誘発するような形態の野性型ｐ５３タンパクを含むワクチン組成物。
２７．薬学的に許容される媒体をさらに含有する請求項２６に記載のワクチン組成物。
２８．形態が、野性型ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態か、または野性型ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項２６に記載のワクチン組成物。
２９．野性型ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態である請求項２８に記載のワクチン組成物。
３０．野性型ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項２８に記載のワクチン組成物。
３１．抗原表現細胞が真核細胞である請求項２９に記載のワクチン組成物。
３２．真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞である請求項３１に記載のワクチン組成物。
３３．抗原表現細胞が樹枝状細胞である請求項３２に記載のワクチン組成物。
３４．樹枝状細胞が、表面に野性型ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント枝状細胞である請求項３３に記載のワクチン組成物。
３５．薬学的に許容される補助荊が細菌細胞である請求項３０に記載のワクチン組成物。
３６．細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌である請求項３５に記載のワクチン組成物。
３７．カルメット・ゲラン杆菌が、野性型ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項３６に記載のワクチン組成物。
３８．哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的な免疫応答を誘発するような形態の野性型ｐ５３タンパクを含むワクチン組成物を免疫的に効果のある量だけ用いて哺乳類を治療することを含む哺乳類における腫瘍の成長を阻止する方法。
３９．ワクチン組成物が薬学的に許容される媒体をさらに含有する請求項３８に記載の方法。
４０．形態が、野性型ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態か、または野性型ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項３８に記載の方法。
４１．野性型ｐ５３タンパクが抗原表現細胞の表面にある形態である請求項４０に記載の方法。
４２．野性型ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である請求項４０に記載の方法。
４３．抗原表現細胞が真核細胞である請求項４１に記載の方法。
４４．真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞である請求項４３に記載の方法。
４５．抗原表現細胞が樹枝状細胞である請求項４４に記載の方法。
４６．樹枝状細胞が、表面に野性型ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント枝状細胞である請求項４５に記載の方法。
４７．薬学的に許容される補助剤が細菌細胞である請求項４２に記載の方法。
４８．細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌である請求項４７に記載の方法。
４９．カルメット・ゲラン杆菌が、野性型ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項４８に記載の方法。
５０．野性型ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・抗原表現細胞。