JP2003300903A

JP2003300903A - ｐ５３ワクチン

Info

Publication number: JP2003300903A
Application number: JP2003127986A
Authority: JP
Inventors: Arnold J Levine; アーノルド，ジェー．レビン，
Original assignee: Princeton University
Current assignee: Princeton University
Priority date: 1992-07-22
Filing date: 2003-05-06
Publication date: 2003-10-21
Also published as: JPH07509251A; WO1994002167A1; CA2140624C; DE69333448D1; EP0651653B1; EP0651653A1; ATE261314T1; EP1421947A1; AU4788693A; CA2140624A1; EP0651653A4

Abstract

(57)【要約】【課題】腫瘍細胞に対する特異性が十分で、患者自身
の免疫系を刺激することによる癌治療を提供する。【解決手段】哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的
な免疫応答を誘発するような形態の、即ち、抗原提示細
胞の表面で、または薬学的に許容される補助剤と結合し
た形態の、突然変異型または野性型のｐ５３タンパクを
含むワクチン組成物、及び免疫学的に効果のある量の突
然変異型または野性型のｐ５３タンパクを用いて哺乳類
を治療することを含む哺乳類における腫瘍の成長を阻止
する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本出願は、１９９２年７月２
２日出願の出願第０７／９１８，２９２号の一部継続出
願であり、その出願を本出願の一部を構成するものとし
てここに引用する。

【０００２】本発明は癌を治療するためのワクチンに関
するものである。そのワクチンは、ｐ５３タンパクを免
疫原として含有する。

【０００３】

【従来の技術】ヒトゲノムの染色体１７ｐ上に見い出さ
れるｐ５３遺伝子は、野性型の状態では腫瘍抑制遺伝子
である。レビン（Ｌｅｖｉｎｅ）らによる“ｐ５３腫瘍
抑制遺伝子”と題された研究記事がネイチャー（３５
１、４５３〜４５６、１９９１年）に掲載されている。

【０００４】ヒトの腫瘍の５０％以上は、ｐ５３遺伝子
の突然変異型を発現する細胞を含有している。多くの腫
瘍では、ｐ５３遺伝子の１つの対立遺伝子がタンパクの
突然変異型をコードする点突然変異を含有しているが、
他の対立遺伝子は部分的または完全に失われる。このよ
うなパターンは、例えば、結腸癌の約７０〜８０％、乳
癌の約５０％、肺癌の約５０％で観察され、小細胞肺癌
の１００％で観察される。野性型ｐ５３の消失を検出す
ることによって癌の診断を行なう提案がなされている
（ボゲルスタイン（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ）らのヨーロ
ッパ特許出願第３９０，３２３号、およびベイカー（Ｂ
ａｋｅｒ）ら、Ｓｉｅｎｃｅ２４４、２１７〜２２１
（１９８９年）参照）。

【０００５】ｐ５３遺伝子中の点突然変異の位置あるい
は場所は腫瘍の種類によって異なる。例えば、Ｂ型肝炎
とアフロトキシンに暴露されたヒトの肝細胞カルシノー
マの５０％はコドン２４９にｐ５３突然変異を有し、肺
腫瘍では、コドン１５４と２７３に優先的に突然変異を
有するようであり、結腸腫瘍では、コドン１７５、２４
８および２７３に複数の独立した突然変異を有してい
る。癌および前癌状態における重症度と性質を含む種々
の表現型は、ｐ５３突然変異の場所を決定することによ
って区別できることを示す証拠が提出されている。レビ
ン（Ｌｅｖｉｎｅ）らの国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９１
／０４６０８（１９９１年６月２７日出願）参照。

【０００６】癌を有するヒトの約１０〜２０％は、ｐ５
３タンパクに対する抗体を産生する腫瘍を持っている
（デ・フロメンテル（ｄｅＦｒｏｍｅｎｔｅｌ）ら、
ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆ
Ｃａｎｃｅｒ３９、１８５〜１８９（１９８７年）；
クローフォード（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）ら、Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒ
３０、４０３〜４０８（１９８２年））。これらの抗
体の存在は、ヒトＨＬＡまたはネズミＨ−２遺伝子座の
クラスＩＩ受容体が、ＣＤ−４ヘルパーＴ細胞およびＢ
細胞システムに対してｐ５３のペプチド抗原を提供で
き、その結果免疫応答が生じることを示唆する。しか
し、抗体は、効果的な抗腫瘍剤ではないと考えられてい
る。したがって、癌を有するヒトにおける抗ｐ５３抗体
の存在は、癌患者が効果的な抗腫瘍免疫応答をしている
可能性を示唆するものでない。

【０００７】腫瘍抗原によって免疫処理された動物は同
じ抗原からは保護されると報告されている。したがっ
て、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）ラージＴ抗原を
用いて動物を免疫処理すると、生きた腫瘍形成ＳＶ４０
によって形質転換された細胞によるその後の攻撃から保
護できる（テベチア（Ｔｅｖｅｔｈｉａ）ら、Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＳｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．
Ｂｉｏｌ．４４、２３５〜２４２、１９８０年参照）。

【０００８】同様に、フレイ（Ｆｒｅｙ）とレビン（Ｌ
ｅｖｉｎｅ）は、ｐ５３付加ｒａｓ−転換の、Ｂ３と命
名された照射されたフィッシャーラット細胞株で免疫さ
れたラットは、同じ生細胞によるその後の腫瘍攻撃から
保護できたことを報告した。そのｐ５３付加ｒａｓ−転
換ラット細胞株は、別個に得たｐ５３付加ｒａｓ−転換
細胞株の８５％と共通する腫瘍特異的な移植拒絶抗原を
発現することが報告された。フレイとレビンは、ｐ５３
タンパクが腫瘍特異的な移植拒絶抗原でなく、Ｂ３細胞
による攻撃に対して保護できないことを示す証拠を提出
した（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙ６
３、５４４０〜５４４４、１９８９年を参照）。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】現在の癌治療では、化
学物質や放射線など、腫瘍細胞に対する特異性が不十分
な細胞毒性剤を使用している。正常な細胞に影響を与え
ることがない、より特異的な治療が要求されている。特
に、患者自身の免疫系を刺激することによる癌治療が必
要とされている。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記の目的および当業者
に明らかとなるであろう他の目的は、哺乳類の免疫系に
投入されたとき効果的な免疫応答を誘発するような形の
突然変異型または野性型のｐ５３タンパクを含むワクチ
ン組成物を提供することによって達成される。

【００１１】さらに、本発明は、免疫学的に効果のある
量の突然変異型または野性型のｐ５３タンパクを用いて
哺乳類を治療することを含む、ヒトの腫瘍の成長を阻止
する方法を提供する。

【００１２】本発明は、哺乳類の免疫系に投入されたと
き効果的な免疫応答を誘発するような形の突然変異型ま
たは野性型のｐ５３タンパクを含むワクチン組成物を提
供する。例えば、突然変異型または野性型のｐ５３タン
パクは、抗原提示細胞の表面、または薬学的に許容され
る補助剤と結合して提供される。

【００１３】

【発明の実施の形態】本明細書では、“野性型のｐ５３
タンパク”という語は、マトラシェウスキー（Ｍａｔｌ
ａｓｈｅｗｓｋｉ）ら、ＥＭＢＯＪ．１３、３２５７
〜３２６２、１９８４年；ザカット・ホウリ（Ｚａｋｕ
ｔ−Ｈｏｕｒｉ）ら、ＥＭＢＯＪ．４、１２５１〜１
２５５、１９８５年；およびラム（Ｌａｍｂ）とクロー
フォード（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂ
ｉｏｌ．５、１３７９〜１３８５、１９８６年）にて報
告されているヌクレオチドまたはアミノ酸配列を意味す
る。これらの配列はゲンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）から
入手可能である。野性型のｐ５３には、アミノ酸７２に
おけるプロリン／アルギニン多型および対応するヌクレ
オチド多型が含まれる。

【００１４】ｐ５３タンパクは突然変異されてもよい。
腫瘍細胞において突然変異が起きることが頻繁に見い出
される位置か、または野性型ｐ５３遺伝子の不活化を導
く位置において突然変異が行なわれることが好ましい。
突然変異は、単一の置換または複数（即ち、２〜２０、
好ましくは２〜１０、より好ましくは２〜５）の置換で
ある。

【００１５】好ましい突然変異体ヒトｐ５３遺伝子は、
レビン・エー・ジェー（ＬｅｖｉｎｅＡ．Ｊ．））
ら、“ｐ５３腫瘍抑制遺伝子”、Ｎａｔｕｒｅ、３５
１、４５３〜４５６（１９９１年）に記載されている。
ｐ５３遺伝子で生じる点突然変異の殆どは、ミスセンス
突然変異であり、変換されたｐ５３タンパクを生じさせ
る。突然変異の多くは、アミノ酸残基１３０から２９０
の間に密集しており、そのタンパクの、４個の“ホット
スポット”領域に最も集中している。このホットスポッ
ト領域は、ｐ５３遺伝子の４つの最も保存された領域に
一致している（ニグロ（Ｎｉｇｒｏ）ら、Ｎａｔｕｒ
ｅ、３４２、７０５〜７０８（１９８９年）参照）。４
個の“ホットスポット”突然変異領域は、１３２〜１４
３、１７４〜１７９、２３６〜２４８、および２７２〜
２８１のコドンに存在する。これらのホットスポットの
生成頻度と分布は癌ができた組織の種類によって異な
る。

【００１６】野性型ｐ５３遺伝子とタンパクは知られて
おり、公知の方法により自然にまたはリコンビナントと
して得られる。その方法には、細胞からタンパクを直接
分離する方法、当該タンパクをコードするＤＮＡを分離
または合成し、このＤＮＡを使用してリコンビナントタ
ンパクを産生する方法、個々のアミノ酸から当該タンパ
クを化学的に合成する方法が含まれる。野性型ｐ５３遺
伝子とタンパクを得る方法は、マトラシェウスキー（Ｍ
ａｔｌａｓｈｅｗｓｋｉ）ら、ＥＭＢＯＪ．１３、３
２５７〜３２６２、１９８４年；ザカット・ホウリ（Ｚ
ａｋｕｔ−Ｈｏｕｒｉ）ら、ＥＭＢＯＪ．４、１２５
１〜１２５５、１９８５年；およびラム（Ｌａｍｂ）と
クローフォード（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｂｉｏｌ．５、１３７９〜１３８５、１９８６年）
に記載されている。突然変異株は、位置特異的突然変異
生成により野性型ｐ５３遺伝子から調製してもよい（例
えば、ゾラー（Ｚｏｌｌｅｒ）とスミス（Ｓｍｉｔ
ｈ）、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１０、６４８７〜
６５００（１９８２年）；ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ１００、４６８〜５００（１９８３
年）；およびＤＮＡ３、４７９〜４８８（１９８４年）
参照）。

【００１７】完全なｐ５３遺伝子またはｐ５３遺伝子の
フラグメントは、例えば、オリゴヌクレオチド・プロー
ブを構築するための公知のＤＮＡ配列を用いて分離して
もよい。こうするために、公知の配列から得た標識化オ
リゴヌクレオチドを使用し、サザン・ハイブリダイゼー
ションによってＤＮＡ制限フラグメントを同定する。あ
るいは、ｐ５３をコードするＤＮＡを個々のヌクレオチ
ドから合成してもよい。ＤＮＡを合成する公知の方法に
は、重複する二重鎖オリゴヌクレオチドを調製し、空隙
に充填し、終端を相互に結合する方法が含まれる。

【００１８】上記のようにして調製されたＤＮＡを複製
連鎖反応（ＰＣＲ）によって増殖してもよい。あるい
は、そのＤＮＡをクローニングベクターに挿入して増殖
し、それを適切な宿主細胞に形質移入し、その宿主細胞
からｐ５３ＤＮＡを回収するようにしもよい。サンブル
ック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、“分子クローニング”、
第２版、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ（１９８７年）の全般を
参照のこと。

【００１９】当該タンパクを調製するためには、当技術
分野でよく知られたリコンビナント法を使用してもよ
い。簡単に述べると、ｐ５３をコードするＤＮＡを発現
ベクターに挿入し、それを好適な宿主細胞に形質移入す
る。ＤＮＡの発現後、当該タンパクを収穫する。サンブ
ルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら参照（前述）。

【００２０】突然変異型または野性型ｐ５３タンパクの
同等物を本発明のワクチンに使用してもよい。そのよう
な同等物には、突然変異型または野性型ｐ５３タンパク
に匹敵する免疫応答を誘発する類似体が含まれる。さら
に、当該同等物は、それらに対応する突然変異型または
野性型ｐ５３タンパクと免疫学的に交差反応性（ｃｒｏ
ｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ）を有する。その同等物は、例
えば、タンパクのフラグメント、あるいは突然変異型ま
たは野性型ｐ５３タンパクの置換型、付加型または削除
型突然変異株でもよい。

【００２１】突然変異型または野性型ｐ５３タンパク
は、抗原のエピトープを定義するための十分なアミノ酸
残基を含有していることが好ましい。例えば、そのフラ
グメントは、エピトープのみをコードするミニ遺伝子で
あってもよい。公知の免疫タンパクから免疫原性フラグ
メントを分離して同定する方法は、サルフェルド（Ｓａ
ｌｆｅｌｄ）らによって、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３、７９
８〜８０８（１９８９年）に、およびイソラ（Ｉｓｏｌ
ａ）らによって、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３、２３２５〜２
３３４（１９８９年）に記載されている。

【００２２】フラグメントがエピトープを定義している
ものの、免疫原としては短すぎる場合には、キャリヤー
となる分子に結合してもよい。好ましいキャリヤー分子
には、キーホール・リンペット・ヘモシアニン、Ｉｇ配
列、ＴｒｐＥ、およびヒトまたはウシ血清アルブミンが
含まれる。結合は、当技術分野で知られている方法で行
なうことができる。その一つの方法は、当該フラグメン
トのシステイン残基をキャリヤー分子上のシステイン残
基と結合させることである。

【００２３】同等のタンパクは、同等のアミノ酸配列を
有する。他の配列と実質的に同一であるが、１つ以上の
置換、付加または削除によって当該他の配列と相違する
アミノ酸配列は、同等な配列と考えることができる。好
ましくは、配列内のアミノ酸残基の数の２５％以下、よ
り好ましくは１０％以下、最も好ましくは５％以下の数
のアミノ酸残基が、本発明のタンパクに対して、置換、
付加、または削除される。

【００２４】例えば、配列内のアミノ酸を同等なアミノ
酸を用いて置換することは知られている。一般に同等と
考えられているアミノ酸のグループは下記の通りであ
る。（ａ）Ａｌａ（Ａ）Ｓｅｒ（Ｓ）Ｔｈｒ（Ｔ）Ｐｒｏ（Ｐ）Ｇｌｙ（Ｇ）（ｂ）Ａｓｎ（Ｎ）Ａｓｐ（Ｄ）Ｇｌｕ（Ｅ）Ｇｌｎ（Ｑ）（ｃ）Ｈｉｓ（Ｈ）Ａｒｇ（Ｒ）Ｌｙｓ（Ｋ）（ｄ）Ｍｅｔ（Ｍ）Ｌｅｕ（Ｌ）Ｉｌｅ（Ｉ）Ｖａｌ（Ｖ）（ｅ）Ｐｈｅ（Ｆ）Ｔｙｒ（Ｙ）Ｔｒｐ（Ｗ）

【００２５】本発明の突然変異型または野性型ｐ５３タ
ンパクは、免疫系に適切に与えた場合、予想を越えた効
果的な免疫応答を誘発する。本明細書では、効果的な免
疫応答とは、癌細胞の成長を禁止、すなわち阻止、遅延
または停止するか、癌細胞を無くすことを意味する。そ
の効果的な免疫応答は、キラーＴ細胞反応であることが
好ましい。哺乳類は、ヒト、またはマウス、ラットまた
はウサギのような実験に通常使用される動物である。

【００２６】突然変異型または野性型ｐ５３タンパク
は、ベヒクルによりワクチンとして免疫系に与えられ
る。例えば、突然変異型または野性型のｐ５３タンパク
は、抗原提示細胞の表面、または薬学的に受け入れられ
る補助剤と結合して与えられる。

【００２７】抗原提示細胞は、一般に、主要組織適合性
遺伝子複合体（ＭＨＣ）を有する真核性細胞であり、好
ましくは、それらの細胞表面にあるクラスＩＩの遺伝子
産物である。本明細書の目的の範囲では、抗原提示細胞
には、抹消血細胞などのリコンビナント真核細胞、およ
びリコンビナント細菌細胞も含まれる。本明細書によっ
て定義された抗原提示細胞の例には、樹枝状細胞、ＭＨ
ＣクラスＩＩ陽性であることが好ましいマクロファー
ジ、ＭＨＣクラスＩＩ陽性であることが好ましい単核細
胞、およびリンパ球が含まれる。

【００２８】本発明の一実施例においては、抗原提示細
胞は、突然変異型または野性型ｐ５３タンパクをコード
する外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント真核細胞で
ある。リコンビナント真核細胞は、インビボ、またはイ
ンビトロで調製できる。

【００２９】本発明の一実施例においては、突然変異型
または野性型ｐ５３をコードするＤＮＡを、リコンビナ
ント・ウイルスベクターを用い、インビボで真核細胞に
挿入する。ベクターには、ワクシニアウイルスのような
弱毒化したリコンビナント・ポックスウイルスが含ま
れ、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０１９０６（１９９２
年３月２日）に記載されたように、必須でないウイルス
コード化遺伝子機能が不活化されたオウムポックスが好
ましい。ワクシニアゲノムに外部のＤＮＡを挿入するた
めの技術は、当技術分野で知られている。リコンビナン
トを構築するためのプラスミドベクターは、例えば、チ
ャクラバーティ（Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ）ら、１９８
５年、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３４０３；マ
ケット（Ｍａｃｋｅｔｔ）ら、１９８４年、Ｊ．Ｖｉｒ
ｏｌ．４９：８５７；およびモス（Ｍｏｓｓ）、１９８
７年、『哺乳類細胞のための遺伝子転移ベクター』の第
１０頁、ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）とカロス（Ｃａｌｏ
ｓ）編、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙ、コールド・スプリング・ハーバー、
ニューヨーク、に記載されている。そして、突然変異型
または野性型ｐ５３タンパクの発現は、リコンビナント
・ポックスウイルスを用いて免疫処理した実験対象の抗
原提示細胞内にインビボで生じる。

【００３０】他の実施例では、突然変異型または野性型
ｐ５３をコードするＤＮＡを、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩ
Ｌｓ）のために記載されたレトロウイルス形質導入のよ
うな公知の技術を使用してインビトロで真核細胞に挿入
する（エス・エー・ローゼンベルグ（Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅ
ｎｂｅｒｇ）ら、ＮＥＪＭ、３２３（９）：５７０〜５
７８（１９９０年８月３０日）およびケー・カルバー
（Ｋ．Ｃｕｌｖｅｒ）ら、ＰＮＡＳＵＳＡ８８：３
１５５〜３１５９（１９９１年４月）参照）。

【００３１】他の実施例では、突然変異型または野性型
ｐ５３エピトープをコードするミニ遺伝子を公知の技術
を使用してインビトロで真核細胞に挿入する（ハーン
（ｈａｒｎ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ８９：２６７９〜２６８３（１９９２年４
月）参照）。

【００３２】真核細胞にＤＮＡを挿入するための好適な
クローニング／発現ベクターには、ＳＶ−４０、アデノ
ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の公知の誘
導体、およびレトロウイルス由来のＤＮＡ配列が含まれ
る。これらのベクターは何れも、プラスミドと、ファー
ジＤＮＡ、即ちシャトルベクターとの組合せから得られ
るベクターと結合することにより、原核細胞および真核
細胞の両方においてタンパクをコードする配列をクロー
ニングおよび／または発現することができる。他の真核
性発現ベクターも本技術分野で知られている。例えば、
ピー・ジェー・サザーン（Ｐ．Ｊ．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ）
とピー・バーグ（Ｐ．Ｂｅｒｇ）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐ
ｌ．Ｇｅｎｅｔ．１、３２７〜３４１（１９８２年）；
エス・サブラマニ（Ｓ．Ｓｕｂｒａｍａｎｉ）ら、Ｍｏ
ｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ１、８５４〜８６４（１９８１
年）；アール・ジェー・カフマン（Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍ
ａｎｎ）とピー・エー・シャープ（Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒ
ｐ）、“ジヒドロフォレート・リダクターゼ分子相補Ｄ
ＮＡ遺伝子を用いて共形質移入した配列の増殖と発
現”、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９、６０１〜６２１
（１９８２年）；アール・ジェー・カフマンとぴー・エ
ー・シャープ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５９、
６０１〜６６４（１９８２年）；エス・アイ・スカーヒ
ル（Ｓ．Ｉ．Ｓｃａｈｉｌｌ）ら、“中国ハムスター・
オバリー細胞におけるヒト免疫インターフェロンＤＮＡ
遺伝子の産物の発現と特徴化”、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０、４６５４〜４６５９
（１９８３年）；ジー・ウルラウ（Ｇ．Ｕｒｌａｕｂ）
とエル・エー・チャシン（Ｌ．Ａ．Ｃｈａｓｉｎ）、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７、４
２１６〜４２２０（１９８０年）を参照。

【００３３】突然変異型または野性型ｐ５３タンパク
は、リコンビナント細菌細胞の表面上で、免疫系に投与
してもよい。好適なリコンビナント細菌細胞は、カルメ
ット・ゲラン杆菌（ＢＣＧ）などの牛型結核菌（Ｍｙｃ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｏｖｉｓ）の無毒性の菌種、
またはネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）
などのサルモネラの無毒性菌種である。リコンビナント
細菌細胞は、本技術分野で知られているように、無毒性
菌種内のｐ５３タンパクの活性部分を含むＤＮＡをクロ
ーニングすることによって調製してもよい。例えば、リ
コンビナント・サルモネラを調製するには、カーチス
（Ｃｕｒｔｉｓｓ）ら、Ｖａｃｃｉｎｅ６、１５５〜
１６０（１９８８年）およびガラン（Ｇａｌａｎ）ら、
Ｇｅｎｅ９４、２９〜３５（１９９０年）、リコンビ
ナントＢＣＧを調製するためには、ストバー，ケー・エ
ス（Ｓｔｏｖｅｒ，Ｋ．Ｓ．）ら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ
９１、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂ
ｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ｐｐ．３９３〜３９８
（１９９１年）を参照のこと。

【００３４】クローニングベクターは、染色体、非染色
体、および合成ＤＮＡ配列のセグメントを含んでいても
よい。幾つかの好適な原核クローニングベクターは、ｃ
ｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ｐＵ
Ｃ、ｐＫＳＭ、およびＲＰ４などの大腸菌からのプラス
ミドを含有する。また原核ベクターは、Ｍ１３などのフ
ァージＤＮＡの誘導体、および他の線状一重鎖ＤＮＡフ
ァージを含有する。

【００３５】細菌、特に大腸菌のタンパクを発現するた
めのベクターも知られている。そのようなベクターに
は、ｐＫ２３３（またはプラスミドのｔａｃファミリー
の何れか）、Ｔ７、およびλＰ₁が含まれる。融合タン
パクを発現するベクターの例としては、ディエックマン
（Ｄｉｅｃｋｍａｎｎ）とトザゴロフ（Ｔｚａｇｏｌｏ
ｆｆ）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０、１５１３〜
１５２０（１９８５年）に述べられているＰＡＴＨベク
ターが挙げられる。これらのベクターは、カルボキシ末
端のポリリンカーの前にあるアントラニル酸・シンセタ
ーゼ（ＴｒｐＥ）をコードするＤＮＡ配列を含有してい
る。他の発現ベクターシステムは、β−ガラクトシダー
ゼ（ｐＥＸ）、λＰ₁、マルトース結合タンパク（ｐＭ
ＡＬ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ｐＧＳ
Ｔ）に基づいている（Ｇｅｎｅ６７、３１（１９８８
年）、およびＰｅｐｔｉｄｅＲｅｓｅａｒｃｈ３、
１６７（１９９０年）参照）。

【００３６】本発明で有用な発現ベクターは、発現すべ
きＤＮＡ配列またはフラグメントに適切に結合された少
なくとも１つの発現コントロール配列を含んでいる。ク
ローン化ＤＮＡ配列の発現を制御し、調節するために、
ベクターにコントロール配列を挿入する。有用な発現コ
ントロール配列の例は、ｌａｃシステム、ｔｒｐシステ
ム、ｔａｃシステム、ｔｒｃシステム、ファージλの主
要なオペレータおよびプロモータ領域、ｆｄ外皮タンパ
クのコントロール領域、および、ポリオーマ、アデノウ
イルス、レトロウイルス、およびシミアンウイルスから
得たプロモータ、例えば、ＳＶ−４０の早期および晩期
プロモータ、および原核細胞または真核細胞内での遺伝
子の発現をコントロールするとして知られている他の配
列、およびそれらのウイルスまたはその組合せである。

【００３７】本ワクチンは、ムラミルペプチドなどの薬
学的に許容される補助剤、インターフェロン、インター
ロイキン−１およびインターロイキン６などのリンフォ
カイン、または細菌的補助剤を更に含有していてもよ
い。その補助剤は、突然変異型または野性型ｐ５３タン
パクを吸着する、酸化アルミニウムなどの適切な粒子を
含有していてもよい。補助剤を含むこれらのワクチン
は、本技術分野で知られた方法で調製できる。

【００３８】細菌性補助剤の例はＢＣＧである。上記の
ように抗原提示細胞として使用した場合、リコンビナン
トＢＣＧはそれ自身の補助剤としても作用するであろ
う。この場合、追加の補助剤は必要でないが、１種類以
上の補助剤を任意的に存在させてもよい。天然（リコン
ビナントでない）の状態で使用する場合、ＢＣＧは突然
変異型または野性型ｐ５３と組合せられることによって
単独で補助剤として作用し、効果的な免疫応答を誘発す
る形になる。

【００３９】本ワクチンは、適切な媒体を含んでいても
よい。好ましい媒体には、燐酸緩衝生理食塩水、リポゾ
ームおよびエマルジョンなどの薬学的に許容されるキャ
リアーが挙げられる。

【００４０】さらに、本発明は、突然変異型または野性
型のｐ５３を含むワクチンを免疫的に効果のある量だけ
用い、腫瘍を有するか、腫瘍形成の可能性に切迫した哺
乳類を治療することを含む、哺乳類における腫瘍の成長
を阻止する方法を包含する。哺乳類が異常な前癌状態に
あると診断された場合、その哺乳類は腫瘍形成の危険に
切迫している。

【００４１】突然変異型または野性型ｐ５３は、効果的
な免疫応答を誘発するような形で、即ち、抗原提示細胞
の表面で、または薬学的に許容される補助剤と結合して
哺乳類の免疫系に提供される。突然変異型または野性型
ｐ５３は、薬学的に許容されるキャリアーなどの媒体中
にあるのが好ましい。

【００４２】本ワクチンは、本技術分野で知られた方法
によって哺乳類に投与される。そのような方法には、静
脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、または皮内の投与
が含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者レビン，アーノルド，ジェー. アメリカ合衆国 08540 ニュージャージー，プリンストン，フリッツランドルフロード 138 Ｆターム(参考） 4B065 AA26X AA93Y AB01 BA02 CA24 CA45 CA46 4C085 AA03 BB01 BB11 EE01 EE05 GG01 GG02

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】哺乳類の免疫系に投入されたとき効果的
な免疫応答を誘発する形態の突然変異体ｐ５３タンパク
を含有するワクチン組成物。
【請求項２】薬学的に許容される媒体をさらに含有す
る請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項３】上記形態が、突然変異体ｐ５３タンパク
が抗原提示細胞の表面にある形態か、または突然変異体
ｐ５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した
形態である請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項４】突然変異体ｐ５３タンパクが抗原提示細
胞の表面にある形態である請求項３に記載のワクチン組
成物。
【請求項５】突然変異体ｐ５３タンパクが薬学的に許
容される補助剤と結合した形態である請求項３に記載の
ワクチン組成物。
【請求項６】抗原提示細胞が真核細胞である請求項４
に記載のワクチン組成物。
【請求項７】真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適合
複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞で
ある請求項６に記載のワクチン組成物。
【請求項８】抗原提示細胞が樹枝状細胞である請求項
７に記載のワクチン組成物。
【請求項９】樹枝状細胞が、表面に突然変異体ｐ５３
タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビ
ナント枝状細胞である請求項８に記載のワクチン組成
物。
【請求項１０】薬学的に許容される補助剤が細菌細胞
である請求項５に記載のワクチン組成物。
【請求項１１】細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌で
ある請求項１０に記載のワクチン組成物。
【請求項１２】カルメット・ゲラン杆菌が、突然変異
体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現する
リコンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項
１１に記載のワクチン組成物。
【請求項１３】哺乳類の免疫系に投入されたとき効果
的な免疫応答を誘発するような形態の突然変異体ｐ５３
タンパクを含むワクチン組成物を免疫学的に効果のある
量だけ用いて哺乳類を治療することを含む哺乳類におけ
る腫瘍の成長を阻止する方法。
【請求項１４】ワクチン組成物が薬学的に許容される
媒体も含有する請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】形態が、突然変異体ｐ５３タンパクが
抗原提示細胞の表面にある形態か、または突然変異体ｐ
５３タンパクが薬学的に許容される補助剤と結合した形
態である請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】突然変異体ｐ５３タンパクが抗原提示
細胞の表面にある形態である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】突然変異体ｐ５３タンパクが薬学的に
許容される補助剤と結合した形態である請求項１５に記
載の方法。
【請求項１８】抗原提示細胞が真核細胞である請求項
１６に記載の方法。
【請求項１９】真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適
合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞
である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】抗原提示細胞が樹枝状細胞である請求
項１９に記載の方法。
【請求項２１】樹枝状細胞が、表面に突然変異体ｐ５
３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコン
ビナント枝状細胞である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】薬学的に許容される補助剤が細菌細胞
である請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌で
ある請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】カルメット・ゲラン杆菌が、突然変異
体ｐ５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現する
リコンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項
２３に記載の方法。
【請求項２５】突然変異体ｐ５３タンパクをコードす
る外因性ＤＮＡを発現するリコンビナント・抗原提示細
胞。
【請求項２６】哺乳類の免疫系に投入されたとき効果
的な免疫応答を誘発するような形態の野性型ｐ５３タン
パクを含むワクチン組成物。
【請求項２７】薬学的に許容される媒体をさらに含有
する請求項２６に記載のワクチン組成物。
【請求項２８】形態が、野性型ｐ５３タンパクが抗原
提示細胞の表面にある形態か、または野性型ｐ５３タン
パクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である
請求項２６に記載のワクチン組成物。
【請求項２９】野性型ｐ５３タンパクが抗原提示細胞
の表面にある形態である請求項２８に記載のワクチン組
成物。
【請求項３０】野性型ｐ５３タンパクが薬学的に許容
される補助剤と結合した形態である請求項２８に記載の
ワクチン組成物。
【請求項３１】抗原提示細胞が真核細胞である請求項
２９に記載のワクチン組成物。
【請求項３２】真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適
合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞
である請求項３１に記載のワクチン組成物。
【請求項３３】抗原提示細胞が樹枝状細胞である請求
項３２に記載のワクチン組成物。
【請求項３４】樹枝状細胞が、表面に野性型ｐ５３タ
ンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナ
ント枝状細胞である請求項３３に記載のワクチン組成
物。
【請求項３５】薬学的に許容される補助剤が細菌細胞
である請求項３０に記載のワクチン組成物。
【請求項３６】細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌で
ある請求項３５に記載のワクチン組成物。
【請求項３７】カルメット・ゲラン杆菌が、野性型ｐ
５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコ
ンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項３６
に記載のワクチン組成物。
【請求項３８】哺乳類の免疫系に投入されたとき効果
的な免疫応答を誘発するような形態の野性型ｐ５３タン
パクを含むワクチン組成物を免疫的に効果のある量だけ
用いて哺乳類を治療することを含む哺乳類における腫瘍
の成長を阻止する方法。
【請求項３９】ワクチン組成物が薬学的に許容される
媒体をさらに含有する請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】形態が、野性型ｐ５３タンパクが抗原
提示細胞の表面にある形態か、または野性型ｐ５３タン
パクが薬学的に許容される補助剤と結合した形態である
請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】野性型ｐ５３タンパクが抗原提示細胞
の表面にある形態である請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】野性型ｐ５３タンパクが薬学的に許容
される補助剤と結合した形態である請求項４０に記載の
方法。
【請求項４３】抗原提示細胞が真核細胞である請求項
４１に記載の方法。
【請求項４４】真核細胞が、樹枝状細胞、主要組織適
合複合体クラスＩＩ陽性マクロファージまたは単核細胞
である請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】抗原提示細胞が樹枝状細胞である請求
項４４に記載の方法。
【請求項４６】樹枝状細胞が、表面に野性型ｐ５３タ
ンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコンビナ
ント枝状細胞である請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】薬学的に許容される補助剤が細菌細胞
である請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】細菌細胞がカルメット・ゲラン杆菌で
ある請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】カルメット・ゲラン杆菌が、野性型ｐ
５３タンパクをコードする外因性ＤＮＡを発現するリコ
ンビナント・カルメット・ゲラン杆菌である請求項４８
に記載の方法。