JP2013177457A

JP2013177457A - ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末の治療的使用

Info

Publication number: JP2013177457A
Application number: JP2013126599A
Authority: JP
Inventors: Aviv Shaish; アビブ・シヤイシユ; Dror Harats; ドロル・ハラツ
Original assignee: Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd; Nikken Sohonsha Corp
Current assignee: Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd; Nikken Sohonsha Corp
Priority date: 2003-09-24
Filing date: 2013-06-17
Publication date: 2013-09-09
Also published as: EP2269620A1; EP1522310A1; JP2005097255A; US7763255B2; JP6321074B2; US7264813B2; IL162987A; JP2016147916A; ATE548046T1; JP5020463B2; JP6490782B2; HK1071845A1; JP2009256392A; JP5356946B2; EP1522310B1; JP2018035200A; US20080019997A1; US20100221348A1; US20050063991A1; US8343549B2

Abstract

【課題】アテローム硬化症に罹患している患者の処置法を提供する。
【解決手段】有効量の粗製の（ｃｒｕｄｅ）ドウナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を個体に投与することを含んでなる、アテローム硬化症を処置するための方法を提供する
【選択図】なし

Description

発明の分野
本発明は、高いトリグリセリドおよび低い高−密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロールレベル、アテローム硬化症および糖尿病を含む多数の状態の処置における粗製ドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）粉末の使用に関する。
参考文献
以下の参考文献リストは、本発明の背景として直接関係があると考えられる：
１．非特許文献１
２．１９８０年３月１８日に発効された特許文献１
３．１９８０年４月２９日に発効された特許文献２
４．非特許文献２
５．非特許文献３
６．非特許文献４

発明の背景
ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の２種であるドナリエラサリーナ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｓａｌｉｎａ）Ｔｅｏｄ．およびドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）は、単細胞で２本の鞭毛を持ち（ｂｉｆｌａｇｅｌｌａｔｅ）、壁が無い緑藻で、大変大量のβ−カロテンを生産することができる^（１）。Ｄ．バーダウィル（ｂａｒｄａｗｉｌ）は、β−カロテン含量が約５０％の全トランス−β−カロテンから構成され、そして残りのほとんどが９−シスβ−カロテンおよび幾らかの他のβ−カロテン異性体からなる耐塩性の藻である^（２）。最高約５重量％のβ−カロテンを含む藻を得るために、Ｄ．バーダウィル（ｂａｒｄａｗｉｌ）を培養する方法が記載された^（３）。後にこの方法を開発して、この割合が８％以上に増加した。藻であるドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）に蓄積するβ−カロテンの天然の異性体混合物は、合成の全トランス−β−カロテンを与えることにより観察されるよりも約１０倍高い程度で、ラットおよびニワトリの脂肪組織に蓄積することが示された^（４）。

Ｂｅｔａｔｅｎｅ（商標）（ヘンケル社（ＨｅｎｋｅｌＣｏｒｐ．）により製造、ドイツ）およびＮｕｔｒｉｌｉｔｅ（商標）（アムウェイ社（ＡｍｗａｙＩｎｃ．）、米国）のような種々のカロテノイドが豊富なドナリエラの市販品を利用することができる。これらの製品はドナリエラに由来するカロテノイドの油抽出物である。

レチノイドは視力、細胞の成長、分化、および生物の一般的な健康状態を維持するために生きている生物にとって必須である。９−シス−レチノイン酸および全トランス−レチノイン酸は、β−カロテン（ＢＣ）の開裂により体内で生産される。オーファン受容体ＲＡＲおよびＲＸＲとしても知られているレチノイド核内受容体は、転写因子を活性化することにより明確な生理学的特性を有する。全トランス−レチノイン酸はＲＡＲに結合するがＲＸＲには結合せず、一方、９−シスレチノイン酸はＲＸＲに結合し、これは重要な生物学的プロセスに鍵となる役割を果たす。

核内受容体の活性化は細胞の代謝、特に脂質およびグルコースに関して必須である。数種の核内受容体がコレステロールの恒常性に関わってきた。これらの受容体には：それぞれオキシステロールおよび胆汁酸に結合し、そして活性化される肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲａ／ＮＲ１Ｈ３およびＬＸＲｂ／ＮＲ１Ｈ２）およびファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ／ＮＲ１Ｈ４）を含む。ＬＸＲおよびＦＸＲは、９−シスレチノイン酸および合成アゴニスト（レキシノイド（ｒｅｘｉｎｏｉｄ）と命名）により活性化されるＲＸＲと絶対的（ｏｂｌｉｇａｔｅ）ヘテロ二量体を形成する。最近、ＲＸＲのそのリガンドによる活性化がコレステロール代謝の２つの中心的プロセスに影響を及ぼす可能性が見いだされた：Ｉ．腸内のコレステロール吸収（ＲＸＲ／ＦＸＲヘテロ二量体の活性化はコレステロール７α−ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ７Ａ１）発現を抑制し、減少した胆汁酸合成およびコレステロール吸収をもたらした）。ＩＩ．末梢組織からの逆コレステロール輸送（ＲＸＲ／ＬＸＲヘテロ二量体の活性化は、コレステロール吸収を抑制し、そして末梢組織の逆コレステロール輸送を誘導した）。

以下の核内受容体はＲＸＲとヘテロ二量体を形成し、したがって９−シスレチノイン酸投与により潜在的に活性化され得ることが知られている：甲状腺ホルモン（ＴＲａ／ｂ）；ビタミンＤ（ＶＤＲ）；脂肪酸／エイコサノイド（ＰＰＡＲα／βγ）；オキシステロール（ＬＸＲａ／ｂ）；胆汁酸（ＦＸＲ）；プレグナン／胆汁酸／生体異物（ＰＸＲ）；アドレノスタン／生体異物（ＣＡＲ）。

フィブラート（ｆｉｂｒａｔｅ）（クロフィブラート（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）、フェノフィブラート（ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ）、ベザフィブラート（ｂｅｚａｆｉｂｒａｔｅ）、シプロフィブラート（ｃｉｐｒｏｆｉｂｒａｔｅ）、ベクロフィブラート（ｂｅｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）およびゲムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）は現在、高トリグリセリド血症（高血漿ＴＧ）の患者を処置するために薦められている。高トリグリセリド血症の処置はトリグリセリドが豊富なリポタンパク質の血漿レベルの低下をもたらす。ＨＤＬコレステロールレベルは通常、ベースラインレベルが低い時に上げられる。ＨＤＬコレステロールの上昇は通常、ＨＤＬアポリポタンパク質Ａ−ＩおよびＡ−ＩＩレベルの上昇を伴う。さらにフィブラートはアテローム発生性アポＣ−ＩＩＩを含む粒子を減少させ、食後の脂肪血症に影響を与え、そして幾つかのフィブラートは血漿フィブリノーゲンおよびＣＲＰレベルを下げる。

脂質代謝に及ぼすフィブラートの効果の結果として、それらは合併した高脂血症、原発性高トリグリセリド血症、ＩＩＩ型異βリポ蛋白血症およびインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）のような特別なリポタンパク質疾患に影響を及ぼすことが示された。

フィブラートは優れた安定性プロフィールで良好に耐容されると考えられる。低い毒性がほとんどすべての臓器系で報告された。フェノフィブラート処置は副作用が低頻度であることが明らかとなった。長期の投与によりヒトの肝臓のペルオキシソーム増殖に及ぼす効果は無く、そして発癌の証拠は無いことが明らかとなった。臨床的に関連するフィブラートと他の抗−高脂血症薬との相互作用には、数種の胆汁酸金属イオン封鎖剤と合わせた時の横紋筋融解症および低下した生物学的利用性を含む。クマリンの抗凝固効果の強化は、出血を引き起こすかもしれない。

フィブラートはそれらの効果の少なくとも一部をペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α（ＰＰＡＲ−α）により媒介する。フィブラートでの活性化で、ＰＰＡＲｓは別の核内受容体である９−シスレチノイン酸受容体（ＲＸＲ）とヘテロ二量体を形成する。この二量体はペルオキシソーム増殖因子応答要素（ＰＰＲＥｓ）と呼ばれる特異的な応答要素に結合し、そして遺伝子発現を調節する。

高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の低血漿レベルおよび高トリグリセリド（ＴＧ）血漿レベルは、アテローム硬化症の危険因子である。低レベルの血漿ＨＤＬコレステロール、アポリポタンパク質ＡＩ（アポＡ−Ｉ）および高レベルのトリグリセリド（ＴＧ）は、西洋社会における罹病率および死亡率の主な原因であるアテローム硬化症の危険性の増加と関連している。最近の研究では、フィブラートゲムフィブロジルで処置した患者のＨＤＬコレステロールレベルを上げ、そして血漿ＴＧレベルを下げることにより、２２％まで冠状動脈の事故の割合が減ることが示された。

アテローム硬化症に有利な効果を及ぼすフィブラートについて幾つかの作用様式が提案された：アポＣ−ＩＩＩレベルを下げ、かつ／またはリポタンパク質リパーゼ活性を上げることによるリポタンパク質の脂肪分解の誘導。ＦＡ−輸送タンパク質およびアシル−ＣｏＡシンテターゼの誘導による肝脂肪酸（ＦＡ）取り込みの誘導。アポＢおよびＶＬＤＬ生産の減少。ペルオキシソーム（齧歯類のみ）またはミトコンドリアβ−酸化経路の誘導、およびＦＡ合成の阻害による肝ＴＧ生産の減少。最も重要なことは、フィブラートが肝臓においてアポＡ−ＩおよびアポＡ−ＩＩの生産を増加し、これが恐らく逆コレステロール輸送プロセスに貢献するということである。

２型糖尿病は深刻な健康上の問題である。これはインスリンのグルコース低下効果に対する耐性と欠陥のあるインスリン分泌とが組合わさって、血中グルコースレベルが正常範囲を越えて上がる時に起こる。チアゾリジンジオンは２型糖尿病の個体においてインスリンの感度を向上させ、そして血漿グルコースおよび血圧を下げる新しい種類の抗糖尿病薬である^（５）。この薬剤は、共通するパートナーであるレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）とのヘテロ二量体としてＤＮＡに結合するＰＰＡＲγに結合し、そして活性化して転写を調節する。ＲＸＲアゴニストはインスリン増感剤として機能することが示され、肥満マウスの血清グルコース、トリグリセリドおよびインスリンを顕著に下げる^（６）。

特許文献３は、ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類に由来するカロテノイド組成物を記載し、ここでβ−カロテン含量は主に９−シスβ−カロテンである。いかなる医学的応用にも言及していない。

特許文献４（Ｋａｔｏｃｓ）は、治療的量のレチノイド全トランス−レチノイン酸および９−シス−レチノイン酸を投与することにより、冠状動脈疾患を処置および防止するために血漿ＨＤＬレベルを上げる方法を開示する。

特許文献５は、医学的および核照射の有害効果に対して哺乳動物を保護するために、実質的に粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類調製物の使用を開示する。

特許文献６は、ＲＸＲアゴニストおよび場合によりペルオキシソーム増殖活性化受容体ガンマアゴニストを投与することにより、インスリン非依存性糖尿病の新たな処置を教示する。

特許文献７は、例えば癌、心血管疾患、骨粗鬆症、糖尿病、閉経後障害および炎症状態を処置するために使用する核内受容体活性を調節する化合物を同定する。

特許文献８は、血中グルコースレベルを下げるために、脂質代謝を調節するために、そして例えば糖尿病、肥満、心血管疾患および胸部癌の処置に、レチノイドＸ受容体調節物質として有用な新規レチノイドＸ同族体を明らかとする。

特許文献９および特許文献１０（Ｈｅｙｍａｎ）は、ＲＸＲアゴニストをＰＰＡＲγアゴニストと一緒に使用してインスリン非依存性糖尿病を処置するための方法および組成物を開示する。

特許文献１１は、ＲＸＲアゴニストとしての選択性を有し、そして血中グルコースを下げ、そして体重を管理するのに効果的な、すなわち糖尿病（ＮＩＤＤＩＭ）および肥満の処置に効果的な新規レチノイド化合物を提供する。

非特許文献５は、スタチンおよびフィブラートでの脂質強化は、糖尿病における心血管疾患の結果を改善するのに効果的であることを教示する。

非特許文献６は、ドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）に由来するβ−カロテンが糖尿病患者の食事に補充された。食事の栄養補助は、これらの患者において酸化に対して強化されたＬＤＬ感受性を正常化した。

米国植物特許第４，５１１号明細書米国特許第４，１９９，８９５号明細書国際公開第９３／２４４５４号パンフレット米国特許第５，２１９，８８８号明細書米国特許第５，９４８，８２３号明細書国際公開第９７／１０８１９号パンフレット国際公開第９９／５０６５８号パンフレット国際公開第２００１１１９７７０パンフレット米国特許第５，９７２，８８１号明細書米国特許第６，０２８，０５２号明細書国際公開第０３／０２７０９０号パンフレット

Ｂｅｎ−Ａｍｏｔｚ，Ａ．ａｎｄＳｈａｉｓｈ，Ａ．，ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）におけるカロテンの生合成：生理学、生化学およびバイオテクノロジー（ＣａｒｏｔｅｎｅＢｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＤｕｎａｌｉｅｌｌａ：Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ），ＥｄＡｖｒｏｎ，Ｍ．ａｎｄＢｅｎ−Ａｍｏｔｚ．，９：２０６−１６，１９９２Ｂｅｎ−Ａｍｏｔｚ，Ａ．，Ｍｏｋａｄｙ，Ｓ．，Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ，Ｓ．ａｎｄＡｖｒｏｎ，Ｍ．，ラットおよびニワトリを対象とした合成の全トランスβ−カロテンと比較した天然の異性体混合物の生物学的利用性（Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆａｎａｔｕｒａｌｉｓｏｍｅｒｍｉｘｔｕｒｅａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｓｙｎｔｈｅｔｉｃａｌｌ−ｔｒａｎｓｂｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｅｉｎｒａｔｓａｎｄｃｈｉｃｋｓ），Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１１９：１０１３−１０１９，１９８９Ｄａｙ，Ｃ．，チアゾリジンジオン：新規種類の抗糖尿病薬（Ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅｓ；ａｎｅｗｃｌａｓｓｏｆａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃｄｒｕｇｓ），ＤｉａｂｅｔｉｃＭｅｄ．１６：１７９−１９２，１９９９Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ，Ｒ．，Ｄａｖｉｅｓ，Ｐ．Ｊ．Ａ．ｅｔａｌ．，レチノイドＸ受容体アゴニストによるインスリンに対する糖尿病および肥満マウスの感作（ＳｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｏｆｄｉａｂｅｔｉｃａｎｄｏｂｅｓｅｍｉｃｅｔｏｉｎｓｕｌｉｎｂｙｒｅｔｉｎｏｉｄＸｒｅｃｅｐｔｏｒａｇｏｎｉｓｔ），Ｎａｔｕｒｅ，３８６：４０７−４１０，１９９７ＣｏｌａｇｉｕｒｉＳ．ａｎｄＢｅｓｔ．Ｊ．，２型糖尿病患者における脂質−低下治療（Ｌｉｐｉｄ−ｌｏｗｅｒｉｎｇｔｈｅｒａｐｙｉｎｐｅｏｐｌｅｗｉｔｈｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ），ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＬｉｐｉｄｏｌｏｇｙ（２００２）１３：６１７−６２３Ｌｅｖｙ，Ｙ．ｅｔａｌ．，β−カロテンの天然の異性体混合物の栄養補助食は、糖尿病患者に由来するＬＤＬの酸化を阻害する（ＤｉｅｔａｒｙｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆａｎａｔｕｒａｌｉｓｏｍｅｒｍｉｘｔｕｒｅｏｆＢｅｔａ−ｃａｒｏｔｅｎｉｎｈｉｂｉｔｓｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆＬＤＬｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉａｂｅｔｓｍｅｌｌｉｔｕｓ），Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ＆Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２０００）４４：５４−６０

発明の要約
本発明の目的は糖尿病、低血漿ＨＤＬおよび／または高血漿ＴＧおよび／またはアテローム硬化症に罹患している患者の処置法を提供することである。

本発明は１つの観点により、有効量の粗製の（ｃｒｕｄｅ）ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を個体に投与することを含んでなる、糖尿病およびアテローム硬化症から選択される疾患を処置するための方法を提供する。

また本発明は別の観点により、有効量の粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を個体に投与することを含んでなる、個体の血漿中のトリグリセリドを減少させ、および／またはＨＤＬコレステロールレベルを上昇させる方法を提供する。

本発明の別の観点に従い、有効量の実質的に粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類調製物を含んでなる、糖尿病、低血漿ＨＤＬおよび／または高血漿ＴＧおよび／またはアテローム硬化症の処置に使用するための薬剤を提供する。

本発明のさらなる観点に従い、糖尿病、低血漿ＨＤＬおよび／または高血漿ＴＧおよび／またはアテローム硬化症の処置に使用するための製薬学的組成物の調製に、有効量の実質的に粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類調製物の使用を提供する。

本発明による有効成分は、実質的に粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類調製物、典型的には乾燥したドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類である。ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類は好ましくはドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）である。

本明細書において用語「処置する」または「処置」とは、疾患の治癒ならびに疾患を病理学的症状において改善をもたらすことの両方を含むと理解されるべきである。この用語はまた、疾患の防止も含むことができる。この用語はまた、疾患の防止も含むことができる。これらの用語はまたアテローム硬化症の発生または進行の両方を抑制する能力、および炎症の減少にも関係し、これにより疾患の合併を抑制し、そして防止する。

「有効量」は所望する治療効果、すなわち示されている疾患の処置を達成するための有効成分の十分な量または用量と理解するべきである。有効量は疾患の重篤度、投与計画、例えば調製物を期間中１回または数回与えるのかどうか、個体の身体的条件等を含む種々の因子に依存する。当業者は各例の有効量を最少の実験により難無く決定できるはずである。

用語「アテローム硬化症」は、石灰化プラーク、非石灰化プラーク、繊維石灰化（ｆｉｂｒｏｃａｌｃｉｆｉｅｄ）プラークおよびその他を含むすべての種類の疾患を含む。用語「糖尿病」にはすべての種類の糖尿病、特に２型糖尿病を含む。

好適な態様では、粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を核内受容体の１以上のアクチベーターと一緒に投与する。核内受容体のアクチベーターは、フィブラートおよびチアゾリジンジオンのような好ましくはペルオキシソーム増殖因子−活性化受容体αまたはγ（ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲγ）アゴニストである。フィブラートの非限定的例は、クロフィブラート、フェノフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート、ベクロフィブラートおよびゲムフィブロジルである。チアゾリジンジオンの非限定的例は、アバンディア、トログリタゾン、ＢＲＬ４９６５３、ピオグリタゾン、シグリタゾン、ＷＡＹ−１２０，７４４、エングリタゾン、ＡＤ５０７５、ダルグリタゾンおよびロシグリタゾンである。

粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末は好ましくは例えばカプセル化形態で経口的に投与される。

本発明を理解するために、そして実際にどのように本発明が行われるかを知るために、単に非限定的な実施例により、添付する図面を参照にしてこれから好適な態様を記載する。

ヒトアポＡＩ−トランスジェニックマウスにおける血漿ＨＤＬコレステロールレベルに及ぼすフィブラートおよび粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末の組み合わせ処置の効果を具体的に説明する。オスのアポＥ−欠損マウスにおいて、大動脈洞でアテローム性損傷のサイズ（面積）によりアテローム発生に及ぼす粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末の効果を示す。オスのアポＥ−欠損マウスにおいて、大動脈洞でアテローム性損傷のサイズ（面積）によりアテローム発生に及ぼす粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末の効果を示す。オスのＬＤＬ受容体−欠損マウスにおいて、大動脈洞でアテローム性損傷のサイズ（面積）によりアテローム発生に及ぼす粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末の効果を示す。アポＥ−欠損マウスにおけるコレステロール吸収の測定を具体的に説明する。粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を含むか、または含まないフィブラートの二重処置を受けた患者のＨＤＬ−コレステロールレベルを示す。糖尿病を誘導したオスのＬＤＬＲ−／−マウスの血漿グルコースレベルを示す。糖尿病を誘導したオスのＬＤＬＲ−／−マウスの血漿インスリンレベルを示す。糖尿病を誘導したオスのＬＤＬＲ−／−マウスの血漿コレステロールレベルを示す。糖尿病を誘導したオスのＬＤＬＲ−／−マウスの血漿トリグリセリドレベルを示す。

発明の態様の詳細な説明
方法および材料
以下に記載するすべてのヒトの実験には、以下のように調製したドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を含むカプセルを使用した。

ドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）（今後、“Ｄｂ”と呼ぶ）は、５０，０００ｍ^２の大きな胴体の開放塩水槽で成長させ、そして培養して、約１：１の比率の全トランスおよび９−シスＢＣ（４，９）で８重量％のβ−カロテン（今後”ＢＣ”と呼ぶ）を含んでなる藻を得た。この藻を遠心機に移してペーストに濃縮することにより回収した。ペーストを洗浄して塩を除去し、そして滅菌し、そして次いで噴霧乾燥して、約８％ＢＣおよび５％未満の水分を含んでなるＤｂ粉末を得た。この粉末は、各々が藻のすべての天然成分を一緒に含む２０ｍｇのＢＣを含有する２５０ｍｇの藻のカプセルに包装した。カプセルのＢＣは元の１：１比の異性体を保持する。カプセルを最高３年の寿命を有する真空密閉ブリスターに包装する。動物実験については、Ｄｂ粉末を食事に混合して飼料中に８％のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を与えた。

（実施例１）
第１実験の目的は、フィブラートと粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末が豊富な食事とを組み合わせた処置が、血漿アポＡＩおよびＨＤＬコレステロールレベルに及ぼす効果を実験することであった。

６カ月齢のオス同腹子であり、素姓がＣ５７ＢＬ／６マウスのトランスジェニックヒトアポＡＩマウスを使用した（ＲｕｂｉｎＥＭ，ＩｓｈｉｄａＢＹ，ＣｌｉｆｔＳＭ．ＫｒａｕｓｓＲＭ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．Ｊａｎ１５；８８（２）：４３４−８、トランスジェニックマウスにおけるヒトアポリポタンパク質Ａ−Ｉの発現は、マウスアポリポタンパク質Ａ−Ｉの血漿レベルを下げ、そして２つの新規高密度リポタンパク質サイズのサブクラスの出現をもたらす（ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡ−ＩｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｒｅｄｕｃｅｄｐｌａｓｍａｌｅｖｅｌｓｏｆｍｕｒｉｎｅａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡ−Ｉａｎｄｔｈｅａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｔｗｏｎｅｗｈｉｇｈｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓｉｚｅｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ））。マウスは肝アポＡ−Ｉ発現を駆動するために必要なヒトアポＡ−Ｉ遺伝子プロモーターの肝臓特異的エンハンサーを含む。マウス（ｎ＝２４）を４群に分け（各群ｎ＝６）、そして毎日、標準的な食事（Ｋｏｆｆｏｌｋ，イスラエルダイエット（ＩｓｒａｅｌＤｉｅｔ）、ｎｏ．１９５１０）を自由に与えた。第１群（対照）はリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を投与した。第２群（フィブラート）はシプロフィブラート（リパノール（Ｌｉｐａｎｏｒ）、ＣＴＺ、イスラエル）をＰＢＳ中、３０ｍｇ／Ｋｇ体重で投与した。第３群（ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ））は、ＰＢＳおよび粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を補充した。第４群はシプロフィブラートおよび粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を補充し、これには１Ｋｇの食事あたり〜４ｇの９−シス−β−カロテンが提供された。マウスは処置から４週間後に屠殺した。

結果（図１）は、血漿ＨＤＬコレステロールレベルがフィブラートおよび粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末の両方で処置したマウスで最高レベルに達したこたを示した（ｐ＜０．０５すべての対式多重比較法、「対照」群対「シプロフィブラートに粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を加えた群」）。対照群で最低レベルの４０８±４２ｍｇ／ｄｌが、そしてシプロフィブラートおよび粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を組み合わせて処置した群で最高レベルの５３５±７１ｍｇ／ｄｌが検出された。統計的に有意ではないが同様の傾向がアポＡＩ血漿レベルで観察された。

（実施例２）
ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）のアテローム発生に及ぼす効果について試験するために、オスのアポ−Ｅ欠損マウス（ｎ＝１０）に、８％の粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を補充した上記のような標準的な餌を６週間与えた。対照群（ｎ＝１０）は餌のみを受けた。大動脈洞で損傷サイズにより決定されるアテローム硬化症は、対照群のマウスよりも粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末で処置したマウスの群で３４％低かった（図２）。

（実施例３）
ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末がアテローム発生に及ぼす効果について試験するために、オスのアポ−Ｅ欠損マウス（ｎ＝１３）に、８％のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を補充した標準的な餌を８週間与えた。第２群（ｎ＝１２）はβ−カロテンを含まない酸化したドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末で処置する一方、対照群（ｎ＝１２）は餌のみを受けた。大動脈洞で損傷サイズにより決定されるアテローム硬化症は、対照群のマウスよりもドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の処置群で３３％低かった、ｐ＝０．０２７（図３）。対照的に、酸化したドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末はアテローム発生に影響しなかった。

（実施例４）
ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）がアテローム発生に及ぼす効果について試験するために、オスのＬＤＬ受容体欠損マウス（ｎ＝１０）に、８％のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を補充した標準的な餌を３週間与え、続いて西洋食を７週間与えた。第２群は酸化したドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末で処置し（ｎ＝１０）、そして対照群（ｎ＝１０）は餌、続いて西洋食のみを受けた。大動脈洞で損傷サイズにより決定されるアテローム硬化症は、ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）で処置した群で対照群よりも６５％低かった、ｐ＝０．００４（図４）。対照的に、酸化したドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末はアテローム発生に影響しなかった。

（実施例５）
コレステロール吸収は、^１４Ｃ−コレステロール（これは様々に吸収される）に対する^３Ｈ−シトステノール（これは吸収されない）の便排出の比率を測定する糞便二重アイソトープ法（ｆｅｃａｌｄｕａｌｉｓｏｔｏｐｅｍｅｔｈｏｄ）により測定した。アポ−Ｅ欠損マウスを２群に分け、ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）で処置したマウス群は、餌の中に８％の粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末を３週間投与して（ｎ＝６）、そして対照群（ｎ＝６）は餌のみを受けた。粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末のアポ−Ｅ欠損マウスへの投与は（ＲＸＲアゴニストについて前に記載したものに類似して）、コレステロール吸収の阻害をもたらした（図５）。

（実施例６）
ヒトの実験の目的は、低ＨＤＬ（＜３５ｍｇ／ｄｌ）および高ＴＧレベル（＞２５０ｍｇ／ｄｌ）の患者においてフィブラートと粗製ドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）の粉末との組み合わせの効果を実験することであった。

第１段階で患者（ｎ＝２０）はフィブラート（シプロフィブラートまたはベザフィブラート）を少なくとも３カ月間受けた。実験の第２段階で患者は本発明による粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末のピル４個（朝食に２個、そして夕食に２個）を受けて、１日に全８０ｍｇのβ−カロテンの摂取を提供した。血漿脂質プロフィールは、実験の各段階後に検出した。

結果（図６）は、血漿ＨＤＬレベルがフィブラート単独に比べてフィブラートと粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末処置の組み合わせ処置後に有意（ｐ＝０．００２、ペアードｔ−検定）に高かったことを示す（それぞれ２９．３±６．８ｍｇ／ｄｌ対３６．５±９．９ｍｇ／ｄｌ；２４．５％の上昇）。

有意ではないが同様な傾向（ｐ＝０．３５）が血漿アポＡＩレベルで観察され、フィブラートおよびβ−カロテンと一緒のフィブラートでそれぞれ１２０．９±１５．２対１２８．４±２８．２であった。これらの知見は組み合わせ処置がアポＡＩ合成および逆コレステロール輸送プロセスの両方に影響を及ぼすことを示唆している。

（実施例７）
ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の糖尿病に及ぼす効果を試験するために、オスのＬＤＬＲ−／−マウス（ｎ＝３０）に糖尿病を誘導するために西洋食（脂肪から４２％のカロリー）を与えた。西洋食の摂取から４週間後、マウスを６群に分け（各群ｎ＝５）、そしてロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）（食事の０．０２重量／重量％）、粗製ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末（食事の８重量／重量％）または９−シスレチノイン酸（２４ナノモル／マウスｘ日）により強化された西洋食を与えた。処置は４週間続けた。

８％のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末は、〜１．５ナノモルの９−シスレチノイン酸／マウスｘ日を提供した。この算出された量はβ−カロテンのビタミンＡへの転換に基づく（２７分子が１分子のビタミンＡを提供し、そしてビタミンＡに対するレチノイン酸の比率に基づき、これは３００分子のレチノール、レチナールおよびレチノイン酸に対して約１分子のレチノイン酸である）。

以下の群を含んだ：
１．対照、西洋食のみ（対照）
２．９−シスレチノイン酸（ＲＡ）
３．ロシグリタゾン（Ｒｏｓｉ）
４．ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末８％（Ｄｕｎ）
結果
ドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の処置は、ロシグリタゾンおよび対照群に比べて血漿グルコースおよびインスリンレベルの両方を下げた（図７および８）。さらにドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の処置は、ロシグリタゾン群に比べて血漿コレステロールおよびＴＧレベルの両方を有意に下げた（図９および１０）。他方、９−シスレチノイン酸は血漿インスリンおよびグルコースレベルに影響を与えず、そしてドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）群のそれらのレベルは有意に低かった。結果はドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末が、ＬＤＬＲ−／−マウスモデルにおいて９−シスレチノイン酸またはロシグリタゾンよりも効果的に血漿インスリンおよびグルコースレベルを下げることができることを証明する。

Claims

有効量の実質的に粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類調製物を、核内受容体の１以上のアクチベーターと共に含んでなる、アテローム硬化症の処置に使用するための薬剤。
核内受容体のアクチベーターがペルオキシソーム増殖因子活性化受容体αまたはγ（ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲγ）アゴニストである、請求項１に記載の薬剤。
ＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲγアゴニストがフィブラートである、請求項２に記載の薬剤。
フィブラートがクロフィブラート、フェノフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート、ベクロフィブラートおよびゲムフィブロジルから選択される、請求項３に記載の薬剤。
上記の粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末が経口的に投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬剤。
上記藻類がドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）である請求項１から５のいずれか一項に記載の薬剤。
上記粉末がカプセル化されている、請求項１から６のいずれか一項に記載の薬剤。
アテローム硬化症の処置に使用するための製薬学的組成物の調製における、フィブラートと有効量の実質的に粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類調製物の使用。
フィブラートがクロフィブラート、フェノフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート、ベクロフィブラートおよびゲムフィブロジルから選択される、請求項８に記載の使用。
上記の粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末が経口的に投与される、請求項８または９に記載の使用。
上記藻類がドナリエラバーダウィル（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｂａｒｄａｗｉｌ）である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の使用。
上記粉末がカプセル化されている、請求項８から１１のいずれか一項に記載の使用。
アテローム硬化症に罹患した患者の大動脈洞におけるアテローム発生の阻害に使用するための製薬学的組成物の調製における、有効量の粗製のドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の藻類の使用。