JP2012521389A - 薬物及びsiRNAを含有する医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
ホスファチジルコリン(PLPC、104.4mg)、コレステロール(10mg)、MPEG−2000−DMPE(9mg)、及びD,L−α−トコフェロール(0.49mg)を、2mLのエタノールに溶解して、62.01mg/mL(又は0.0840mmol/mL)を得る。EPO906(22.14mg)を加えて、完全に溶解する。この溶液から、1129μLを別の丸底フラスコにピペットで取り、全てのエタノールを蒸発させて、脂質薄膜を生成する。
この実施例に使用する標的化部分は、FA−mPEG−DSPEである。ホスファチジルコリン(PLPC、104.1mg)、コレステロール(10.22mg)、mPEG−2000−DMPE(9mg)、FA−PEG3000−DSPE(2.2mg)及びD,L−α−トコフェロール(0.52mg)を、2mLのエタノールに溶解して、62.92mg/mL(又は0.084mmol/mL)を得る。EPO906(22.46mg)を加え、完全に溶解する。この溶液から、1113μLを別の丸底フラスコにピペットで取り、エタノールを蒸発させて、脂質薄膜を生成する。
この実施例において、ルシフェラーゼ遺伝子特異的siRNAを使用する。1000μLのsiRNAストック(5mg/mL)、125μLのCaCl2(0.1M)、125μLの酢酸緩衝溶液(pH4、1M)及び250μLの水のsiRNA溶液を、混合することによって調製する。そのsiRNA溶液を45℃の水浴中で加温する。
特定の脂質薄膜を混合し、siRNA水溶液で水和して、リポプレックス溶液を形成する。そのリポプレックス溶液を、45℃の温水浴中に30分間置いておき、その後、1000μLのエタノールを加える。リポプレックス溶液を、液体窒素を用いて凍結させ、45℃の温水浴中で加温する。水溶性薬物物質についての捕集効率を増加させるために、凍結し、加温する工程を3回繰り返し、本発明のVDDSを得る。粒子の分析により、ゲル電気泳動によって測定すると、80%のカプセル化効率を有し、140±56nmの平均サイズ及び0.5のPDIが示される。
Claims (33)
- a)少なくとも1つの水性キャビティを取り囲む少なくとも1つの脂質二重層であって、前記脂質はホスファチジルコリンである少なくとも1つの中性脂質を含む、少なくとも1つの脂質二重層と、
b)前記少なくとも1つの水性キャビティ内に含有される少なくとも1つの低分子干渉リボ核酸(siRNA)と、
c)前記少なくとも1つの脂質二重層に埋め込まれている少なくとも1つの疎水性薬物物質と、
を含む、小胞薬物送達系。 - 前記脂質が、少なくとも1つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質を更に含む、請求項1に記載の小胞薬物送達系。
- 前記少なくとも1つのsiRNAが、二本鎖RNA(dsRNA)、マイクロRNA(miRNA)、低分子ヘアピン型RNA(shRNA)、又はそれらの組み合わせを含む、請求項1又は2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記siRNAのヌクレオチド配列が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、血漿DNA又はヒトゲノムに由来する、請求項1又は2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記疎水性薬物が、タキソイド、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン(CDDP)、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド(VP16)、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、5−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、シクロスポリン、ミケラミンB、ブリオスタチン−1、ハロモン、シスプラチン、EPO906又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項1又は2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記疎水性薬物がEPO906である、請求項5に記載の小胞薬物送達系。
- 前記少なくとも1つの更なる中性脂質が、コレステロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)、ホスホコリン(DOPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ホスファチジルコリン(PLPC)、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、卵ホスファチジルコリン(EPC)、ジラウリルオイルホスファチジルコリン(DLPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、1−ミリストイル−2−パルミトイルホスファチジルコリン(MPPC)、1−パルミトイル−2−ミリストイルホスファチジルコリン(PMPC)、1−パルミトイル−2−ステアロイルホスファチジルコリン(PSPC)、1−ステアロイル−2−パルミトイルホスファチジルコリン(SPPC)、1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DAPC)、1,2−ジアラキドイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DBPC)、1,2−ジエイコセノイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DEPC)、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン(POPC)、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(DSPE)、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン(DMPE)、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン(POPE)、リソホスファチジルエタノールアミン、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(MPEG−750−DSPE、−MPEG−2000−DSPE及びMPEG−5000−DSPE)、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(MPEG−2000−DPPE及びMPEG−5000−DPPE)、カルボニルメトキシポリエチレングリコール−ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン(MPEG−2000−DMPE及びMPEG−5000−DMPE)又はそれらの組み合わせである、請求項2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記中性脂質が、DPPC、DSPC、DOPC、DMPC、PLPC、PE、MPEG−2000−DMPE又はそれらの組み合わせである、請求項7に記載の小胞薬物送達系。
- 前記少なくとも1つの更なる陽イオン性脂質が、N−1−(2,3−ジオレイルオキシ)プロピル−N,N,N−トリメチルアンモニウムクロリド(DOTMA)、1,2−ビス(オレオイルオキシ)−3−(4’−トリメチルアンモニオ)プロパン(DOTAP)、1,2−ジオレオイル−3−(4’−トリメチルアンモニオ)ブタノイル−sn−グリセロール(DOTB)、1,2−ジオレオイル−3−スクシニル−sn−グリセロールコリンエステル(DOSC)、コレステリル(4’−トリメチルアンモニオ)ブタノエート(ChoTB)、1,2−ジオレオイル−3−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド DORI、1,2−ジオレイルオキシプロピル−3−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド(DORIE)、1,2−ジミリスチルオキシプロピル−3−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド(DMRIE)、O,O’−ジドデシル−N−p−(2−トリメチルアンモニオエチルオキシ)ベンゾイル−N,N,N−トリメチルアンモニウムクロリド、リポスペルミン、DC−Chol(3a−N−(N’,N’’−ジメチルアミノエタン)カルボニルコレステロール)、リポポリ(L−リシン)、N−(a−トリメチルアンモニオアセチル)−ジドデシル−D−グルタメートクロリド(TMAG)、又はそれらの組み合わせである、請求項2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記少なくとも1つの更なる陰イオン性脂質が、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルセリン(DMPS)、ジパルミトイルホスファチジルセリン(DPPS)、脳ホスファチジルセリン(BPS)、ジラウリルオイルホスファチジルグリセロール(DLPG)、ジミリストイルホスファチジルグリセロール(DMPG)、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール(DPPG)、ジステアロイルホスファチジルグリセロール(DSPG)、ジオレオイルホスファチジルグリセロール(DOPG)、又はそれらの組み合わせである、請求項2に記載の小胞薬物送達系。
- 更なる医薬上許容される賦形剤を更に含む、請求項1又は2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記更なる医薬上許容される賦形剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール(PEG)、又はトコフェロールからなる群から選択される、安定剤である、請求項11に記載の小胞薬物送達系。
- 前記siRNAが、過形成細胞又は癌性細胞の増殖を促進する遺伝子の翻訳を阻害する、請求項1又は2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記siRNAが15〜50個の核酸塩基である、請求項1又は2に記載の小胞薬物送達系。
- 前記遺伝子が、EphA2、接着斑キナーゼ(FAK)、[ベータ]2−アドレナリン受容体([ベータ]2AR)、ESR1、腫瘍抑制タンパク質pRB、MDR−1、NKカッパB及びNek2からなる群から選択される、請求項13に記載の小胞薬物送達系。
- 標的化部分を更に含む、請求項1に記載の小胞薬物送達系。
- 前記標的化部分が、葉酸−mPEG−DSPEトランスフェリン、アルファ−トコフェロール、レチノイン酸及びRGDペプチドからなる群から選択される、請求項16に記載の小胞薬物送達系。
- コレステロール、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミンポリエチレングリコール2000(DMPE−PEG2000)及びトコフェロールを更に含む、請求項9に記載の小胞薬物送達系。
- PC:コレステロール:DMPE−PEG2000:トコフェロールの比が、約81.9:15.4:2:0.7(モル濃度)である、請求項18に記載の小胞薬物送達系。
- 脂質:siRNAの比が、10:1(質量)から20:1(質量)の間の範囲である、請求項1に記載の小胞薬物送達系。
- リン脂質:siRNAの比が、14:1(質量)である、請求項20に記載の小胞薬物送達系。
- 前記疎水性薬物の濃度が少なくとも約0.5mg/mLである、請求項1に記載の小胞薬物送達系。
- 前記siRNAの濃度が約1〜1.2mg/mLである、請求項1に記載の小胞薬物送達系。
- 請求項1に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
a)ホスファチジルコリンである少なくとも1つの中性脂質、少なくとも1つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第1の溶液を形成する工程と、
b)前記第1の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
c)少なくとも1つの低分子干渉リボ核酸(siRNA)及び水溶液を含む第2の溶液を形成する工程と、
d)前記(b)の脂質薄膜と前記(c)の第2の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。 - 請求項2に記載の小胞薬物送達系を作製する方法であって、前記方法は、
a)ホスファチジルコリンである少なくとも1つの中性脂質;少なくとも1つの更なる中性脂質、陽イオン性脂質又は陰イオン性脂質;少なくとも1つの疎水性薬物及び水混和性有機溶媒を含む第1の溶液を形成する工程と、
b)前記第1の溶液から前記水混和性有機溶媒を蒸発させることによって脂質薄膜を形成する工程と、
c)少なくとも1つの低分子干渉リボ核酸(siRNA)及び水溶液を含む第2の溶液を形成する工程と、
d)前記(b)の脂質薄膜と前記(c)の第2の溶液とを混合して、前記小胞薬物送達系を形成する工程と
を含む、方法。 - 標的化部分が前記(a)の第1の溶液に加えられる、請求項24又は25に記載の方法。
- 前記疎水性薬物が、タキソイド、カンプトテシン、ドキソルビシン、ミケラミンB、ビンクリスチン、ブリオスタチン−1、ハロモン、シスプラチン、EPO906、ドセタキセル、パクリタキセル、シスプラチン(CDDP)、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド(VP16)、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、タキソール、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナム、5−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキサート、及びシクロスポリン、又はそれらの組み合わせである、請求項24又は25に記載の方法。
- 前記水混和性有機溶媒が、アルコール、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド又はポリエチレングリコールからなる群から選択される、請求項24又は25に記載の方法。
- 前記水混和性有機溶媒が、メタノール、グリコール、グリセロール、プロピレングリコール又はエタノールからなる群から選択されるアルコールである、請求項28に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの更なる中性脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)、ホスホコリン(DOPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ホスファチジルコリン(PLPC)、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、卵ホスファチジルコリン(EPC)、ジラウリルオイルホスファチジルコリン(DLPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、1−ミリストイル−2−パルミトイルホスファチジルコリン(MPPC)、1−パルミトイル−2−ミリストイルホスファチジルコリン(PMPC)、1−パルミトイル−2−ステアロイルホスファチジルコリン(PSPC)、1−ステアロイル−2−パルミトイルホスファチジルコリン(SPPC)、1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DAPC)、1,2−ジアラキドイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DBPC)、1,2−ジエイコセノイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(DEPC)、パルミトイルオエオイルホスファチジルコリン(POPC)、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(DSPE)、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン(DMPE)、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)、パルミトイルオエオイルホスファチジルエタノールアミン(POPE)、及びリソホスファチジルエタノールアミン又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項24又は25に記載の方法。
- 安定剤が前記(a)の第1の溶液に加えられる、請求項24又は25に記載の方法。
- 前記安定剤が、コレステロール、ポリエチレングリコール(PEG)又はトコフェロールである、請求項31に記載の方法。
- 疎水性薬物物質及びsiRNAを対象に同時に両方送達する方法であって、前記方法は、請求項1に記載の小胞薬物送達系を前記対象に投与する工程を含む、方法。
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