MX2011010045A

MX2011010045A - Composicion farmaceutica que contiene un farmaco y siarn.

Info

Publication number: MX2011010045A
Application number: MX2011010045A
Authority: MX
Inventors: Giancarlo Francese; Michael Keller
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2009-03-25
Filing date: 2010-03-24
Publication date: 2011-10-11
Also published as: EP2410988A1; AU2010227549B2; CN102361631A; RU2011142620A; US20120015026A1; WO2010108934A1; AU2010227549A1; JP2012521389A; KR20120013336A; CA2756499A1; BRPI1012246A2

Abstract

La presente invención se refiere, en términos generales, a los campos de biología molecular, medicina, oncología, y suministro de compuestos terapéuticos. En particular, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen una sustancia de fármaco hidrofóbica y una molécula de ácido nucleico inhibidora, tal como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), en un solo sistema de suministro de fármaco, así como a un proceso para su elaboración, y a un proceso para su administración.

Description

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA QU E CONTIENE UN FÁRMACO Y siARN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere, en términos generales, a los campos de biología molecular, medicina, oncología, y suministro de compuestos terapéuticos. En particular, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen una sustancia de fármaco hidrofóbica y una molécula de ácido nucleico inhibidora, tal como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), en un solo sistema de suministro de fármaco, así como a un proceso para su elaboración, y a un proceso para su administración .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Existe un número siempre creciente de sustancias de fármaco que son pobremente solubles en agua pero altamente solubles en solventes orgánicos. EPO906 (epotilona B) es una patupilona que cae en esta categoría; es pobremente soluble en agua (<0.1 miligramos/litro) pero altamente soluble en solventes orgánicos, tales como etanol, acetato de etilo, dicloro-metano, etc. Las sustancias de fármaco pobremente solubles en agua, es decir, hid rofóbicas, presentan desafíos al suministro en una forma inyectable, tal como a través de la administración parenteral. Las formulaciones que incluyen estos fármacos deben ser capaces de presentar una cantidad terapéuticamente efectiva del fármaco ante el sitio de absorción deseado en una forma absorbible. Las composiciones farmacéuticas para el suministro de fármacos pobremente solubles deben llevar el fármaco a través del medio ambiente acuoso, mientras que se mantenga el fármaco en una forma absorbible, y mientras se evite el uso de solventes o excipientes fisiológicamente dañinos. Se conocen un número de planteamientos para la formulación de fármacos hidrofóbicos para suministro oral o parenteral, tales como las formulaciones en donde el fármaco está presente en una emulsión de aceite en agua, una microemulsión, o una solución de micelios, liposomas, u otras partículas portadoras multilamelares. Los liposomas son vesículas microscópicas formadas de moléculas anfipáticas, tales como lípidos, que contienen las regiones tanto hidrofóbicas como hidrofílicas y pueden encerrar un volumen acuoso.

Los ARNs de interferencia cortos (siARNs) son secuencias de ribonucleótidos de doble cadena de 19 a 27 pares de bases de longitud, altamente cargadas negativamente, y solubles predominantemente en agua. Los ARNs de interferencia cortos (siARNs) son responsables de la interferencia del ARN, el proceso del silenciamiento genético posterior a la transcripción específico de la secuencia en animales y plantas. Los ARNs de interferencia cortos (siARNs) se generan mediante la disociación de la ribonucleasa III a partir del ARN de doble cadena más largo (dsARN), los cuales son homólogos al gen silenciado o mediante el suministro de ARNs sintéticos a las células. Se sabe que es muy difícil el suministro del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) ¡n vivo, limitando, por consiguiente , el potencial terapéutico del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) . Por ejem plo, los métodos de sum inistro que son efectivos para otros tipos de m oléculas de ácidos nucleicos no son necesariamente efectivos para el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) . La mayoría de los estudios q ue utilizan el ácido ribonucleico de interferencia corto (siAR N) in vivo, involucran la manipulación de la expresión genética en una línea celular antes de su introducción en un modelo animal, o la incorporación del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) en un vector viral. El suministro del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) "desnudo" in vivo se ha restringido a inyecciones específicas en el sitio o a través de medios de alta presión , los cuales no son clínicamente prácticos. Además, el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) sistémicamente administrado se elimina rápidamente por los ríñones o por el hígado debido a su alta solubilidad en agua y a su carga negativa . Por consiguiente, es preferible encapsular los ARNs de interferencia cortos (siARNs) en un sistema de suministro de fármaco (DDS) que mejore su tiempo de circulación en el cuerpo, y que prevenga la deg radación por las nucleasas extracelulares.

Los planteamientos de combinación anteriores para el tratamiento de cáncer involucran una administración separada de dos fármacos de acción sinérgica utilizando dos modos de formulación separados para suministrar las dos sustancias de fármaco activas. Por ejemplo, la Publicación I nternacional Número WO 20061 1 3679 da a conocer el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) formulado dentro de liposomas neutros para una primera administración y una segunda administración separada de un agente quimioterapéutico (por ejemplo, doxorrubicina, etc.), la cual puede tener lugar antes de, simultáneamente con, o después de la primera administración. La técnica anterior existente describe el uso de un sistema de suministro de fármaco (DDS) individualmente hecho a la medida para cada sustancia de fármaco, lo cual da como resultado múltiples pasos inconvenientes de administración de las sustancias de fármaco.

Por consiguiente, existe una necesidad de un solo sistema de suministro de fármaco conveniente que comprenda un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) y una sustancia de fármaco hidrofóbica. La presente invención satisface esta necesidad al proporcionar un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), el cual comprende cuando menos dos sustancias de fármaco: una molécula de ácido nucleico, tal como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y un fármaco hidrofóbico. La presente invención proporciona además un proceso para la elaboración del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), y un proceso para administrar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 ilustra un esquema de reacción sintético para la síntesis de liposomas, el cual comprende un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) de ácido nucleico y una sustancia de fárm aco hid rofóbica , E PO906.

La Figura 2 ilustra una configuración del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) que muestra u n fármaco hidrofóbico EPO906 incorporado en la bicapa de lípido, y un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) de ácido nucleico encapsulado por el liposoma en el recinto acuoso con una fracción de dirección opcional, folato-PEG-lípido unida al sistema de suministro de fármaco .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención es un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) , el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa; (b) una molécula de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenida dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido. De acuerdo con la presente invención, la bicapa de lípido comprende un lípido neutro que es fosfatidil-colina. La presente invención incluye además una modalidad en donde la bicapa de lípido comprende una combinación de fosfatidil-colina y cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional.

La presente invención incluye además una modalidad en donde una "fracción de dirección" o un ligando se une al sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) para reconocer el tejido objetivo con el fin de mejorar el suministro intracelular de las sustancias de fármaco suministradas mediante los sistemas de suministro de fármaco vesiculares (VDDSs). La fracción de dirección se puede acoplar a un polímero hid rofílico (por ejemplo, polietilenglicol (PEG)).

La presente invención proporciona un método para la elaboración de un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa, en donde el lípido comprende fosfatidil-colina; (b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido.

El método comprende los pasos de: (i) formar una primera solución, la cual comprende un lípido neutro de fosfatidil-colina, cuando menos un fármaco hidrofóbico, y un solvente orgánico miscible en agua, (ii) formar una película de lípido mediante la evaporación del solvente orgánico miscible en agua a partir de la primera solución, (iii) formar una segunda solución, la cual comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y una solución acuosa, (iv) combinar la película de lípido de (ii) con la segunda solución de (iii) para formar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

La presente invención proporciona además un método para la elaboración de un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa, en donde el lípido comprende una combinación de un lípido neutro de fosfatidil-colina y cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional; (b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido.

El método comprende los pasos de: (i) formar una primera solución, la cual comprende el lípido neutro de fosfatidil-colina, los lípidos neutros o catiónicos o aniónicos adicionales, cuando menos un fármaco hidrofóbico, y un solvente orgánico miscible en agua, (ii) formar una película de lípido mediante la evaporación del solvente orgánico miscible en agua a partir de la primera solución, (iii) formar una segunda solución, la cual comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y una solución acuosa, (iv) combinar la película de lípido de (ii) con la segunda solución de (iii) para formar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

La presente invención proporciona además un método para el co-suministro simultáneo de cuando menos una sustancia de fármaco hidrofobica y cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) a un sujeto, comprendiendo este método, administrar al sujeto un sistema de suministro de fármaco vesicular, el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa; (b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido. De acuerdo con la presente invención, la bicapa o las bicapas de lípido se forman mediante cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina y, opcionalmente, cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que contiene una sustancia de fármaco hidrofóbica y una molécula de ácido nucleico inhibidora, tal como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), en un solo sistema de suministro de fármaco (DDS). El sistema de suministro de fármaco (DDS) de la presente invención elimina la necesidad de administraciones separadas de un fármaco hidrofóbico y moléculas de ácidos nucleicos inhibidoras, tales como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), lo cual da como resultado un mejor cumplimiento del paciente con el régimen de tratamiento.

Como se utiliza en la presente, el término "sistema de suministro de fármaco" o "DDS" significa una composición farmacéutica que contiene cuando menos una sustancia de fármaco o molécula de ácido nucleico terapéutica para administrarse a un mamífero, por ejemplo, a un ser humano. Una composición farmacéutica es "farmacéuticamente aceptable", lo cual se refiere a estos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación, que, dentro del alcance de un buen juicio médico, son adecuados para hacer contacto con los tejidos de los mamíferos, en especial de los seres humanos, sin una toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, y otras complicaciones problemáticas, de una manera conmensurada con una proporción razonable de beneficio/riesgo.

Como se utiliza en la presente, el término "sustancia de fármaco" significa cualquier compuesto, sustancia, medicamento, secuencia de ácido nucleico o de aminoácidos, o ingrediente activo que tiene un efecto terapéutico o farmacológico, y el cual es adecuado para su administración a un mamífero. Este término se puede referir a cualquiera o a ambos de los ácidos ribonucleicos de interferencia cortos ("siARNs") y los fármacos hidrofóbicos.

Como se utiliza en la presente, el término "ARN de interferencia corto" o "si AR " significa las secuencias de ribonucleótidos de doble cadena típicamente de 15 a 50 pares de bases, y de preferencia de 19 a 27 pares de bases de longitud, que están altamente cargadas negativamente y que son solubles predominantemente en agua. El ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) puede estar compuesto ya sea de dos secuencias de ribonucleótidos templadas, o bien de una sola secuencia de ribonucleótido que forme una estructura de horquilla. Un experto ordinario entendería que el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) es responsable de la interferencia del ARN, el proceso del silenciamiento genético posterior a la transcripción específico de la secuencia en animales y plantas. Los ARNs de interferencia cortos (siARNs) se generan mediante la disociación de la ribonucleasa III a partir del ARN de doble cadena más largo (dsARN), los cuales son homólogos al gen silenciado, o mediante el suministro de ARNs sintéticos a las células. Las técnicas para el diseño de las moléculas para utilizarse en la inhibición dirigida de la expresión genética son bien conocidas por un experto en la materia.

El sistema de suministro de fármaco de la presente invención es un sistema de suministro de fármaco vesicular ("VDDS"), el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa; (b) una molécula de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenida dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido. La bicapa o las bicapas de lípido de la presente invención se forman mediante cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina y, opcionalmente, cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional.

En una modalidad de la invención, el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra una cavidad acuosa, en donde el lípido está comprendido de un lípido neutro de fosfatidil-colina y, opcionalmente, cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional; (b) una molécula de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenida dentro de la cavidad acuosa; y (c) una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la bicapa de lípido.

En otra modalidad de la invención, el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) se forma de una vesícula multilamelar (es decir, un liposoma con múltiples bicapas), la cual comprende: (a) varias bicapas de lípido que encierran varias cavidades acuosas, en donde el lípido está comprendido de un lípido neutro de fosfatidil-colina o de una combinación de un lípido neutro de fosfatidil-colina y cuando menos un lípido neutro adicional; (b) una molécula de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenida dentro de cada cavidad acuosa; y (c) una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en las varias bicapas de lípido.

En cualquiera de las modalidades anteriores, los diferentes componentes se pueden configurar de acuerdo con la conveniencia y la necesidad. Por ejemplo, un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) que tenga una secuencia de nucleótidos particular, se puede encapsular en una cavidad acuosa del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS). De una manera alternativa, se pueden encapsular diferentes moléculas de Ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) que tengan diferentes secuencias de nucleótidos, en la cavidad o en las cavidades acuosas del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS). De la misma manera, un fármaco hidrofobico particular se puede empotrar en la bicapa de lípido, o, varios fármacos hidrofóbicos diferentes se pueden empotrar en la bicapa de lípido.

El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención comprende una o múltiples bicapas de un lípido, las cuales comprenden de preferencia cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina, que forma un liposoma. Los ejemplos incluyen, el sistema de suministro de fármaco vesicular unilamelar (ULVDDS) o un sistema de suministro de fármaco vesicular multilamelar (MLVDDS). Un sistema de suministro de fármaco vesicular unilamelar (ULVDDS) contiene una sola bicapa de lípido que rodea a una cavidad acuosa, mientras que un sistema de suministro de fármaco vesicular multilamelar (MLVDDS) contiene múltiples compartimientos acuosos y bicapas. Las sustancias de fármaco de la presente invención se pueden incluir en un sistema de suministro de fármaco vesicular multilamelar (MLVDDS) con el objeto de proporcionar la liberación temporizada de las sustancias de fármaco una vez que se liberan las sustancias de fármaco hidrofílicas atrapadas en los fluidos acuosos entre las bicapas y/o las sustancias de fármaco hidrofóbicas incorporadas en las bicapas, a medida que se degrada cada bicapa. Se espera que el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención tenga un tamaño de partículas en el intervalo de entre 50 y 250 nanómetros, de preferencia de entre 50 y 150 nanómetros, y de una manera muy preferible, de entre 50 y 100 nanómetros.

Los lípidos formadores de liposomas son bien conocidos, y en términos generales incluyen a los fosfolípidos, con una carga neta neutra o negativa. El término "fosfolípido" se refiere a una molécula hidrofóbica que comprende cuando menos un grupo fósforo, el cual puede ser natural o sintético. Por ejemplo, un fosfolípido puede comprender un grupo que contenga fósforo y un grupo alquilo saturado o insaturado, opcionalmente sustituido con grupos OH, COOH, oxo, amina, o arilo sustituido o insustituido. Los fosfolípidos difieren unos de otros en su longitud y grado de saturación de sus cadenas acílicas. Un experto ordinario entendería que los fosfolípidos se pueden seleccionar basándose en el tamaño del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) final deseado.

Los liposomas catiónicos se describen en las Publicaciones Internacionales del TCP Números WO02/100435A1 , WO 03/ 015757A1, y WO040292 3A2; en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,962,016, 5,030,453, y 6,680,068; y en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2004/0208921. Adicionalmente, los lípidos neutros se han incorporado en los liposomas catiónicos, los cuales se han utilizado para suministrar el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) a diferentes tipos de células.

El lípido o los lípidos formadores de liposomas utilizados en la presente invención incluyen cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina. El término "fosfatidil-colina", como se utiliza en la presente, se refiere tanto a la fosfatidil-colina como a sus derivados. Los ejemplos de las fosfatidil-colinas adecuadas para utilizarse en la presente invención incluyen dipalmitoil-fosfatidil-colina (DPPC), diestearoil-fosfatidil-colina (DSPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC), fosfatidil-colina (PLPC), fosfatidil-colina de huevo (EPC), dilauriloil-fosfatidil-colina (DLPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC), 1 -miristoil-2-palmitoil-fosfatidil-colina (MPPC), 1 -palmitoil-2- miristoil-fosfatidil-colina (PMPC), 1 -palmitoil-2-estearoil-fosfatidil- colina (PSPC), 1 -estearoil-2-palm itoil-fosfatidil-colina (SPPC), palmitoil-oleoil-fosfatidil-colina (POPC), lisofosfatidil-colina, dilinoleoil-fosfatidil-colina, diestearoil-fosfatidil-etanolamina (DSPE), dimiristoil-fosfatidil-etanolam ina (D M PE) , dipalm itoil-fosfatidil-etanolam ina (DPPE), o una combinación de las m ismas.

En una modalidad muy preferida, la fosfatidil-colina utilizada en la presente invención se selecciona a partir del grupo que consiste en dipalmitoil-fosfatidil-colina (DPPC) , diestearoil-fosfatidil-colina (DSPC) , fosfocolina (DOPC) , y dimiristoil-fosfatidil-colina (DM PC).

La presente invención incluye una modalidad en donde se utiliza una combinación de cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina y cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un l ípido aniónico adicional, para formar la bicapas de lípido en el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención.

De preferencia, los lípidos neutros se combinan con fosfatidil-colina en el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención . Los ejemplos de los lípidos neutros que se pueden utilizar para la presente invención incluyen: colesterol , dipalmitoil-fosfatidil-colina (DPPC) , diestearoil-fosfatidil-colina (DSPC), fosfocolina (DOPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC) , fosfatidil-colina (PLPC) , fosfatidil-etanolamina (PE) , fosfatidil-colina de huevo (EPC), dilauriloil-fosfatidil-colina (DLPC), dimiristoil- fosfatidil-colina (DM PC), 1 -miristoil-2-palmitoil-fosfatidil-colina (M PPC) , 1 -palmitoil-2-miristoil-fosfatidil-colina (PM PC) , 1 -palmitoil-2- estearoil-fosfatidil-colina (PSPC), 1 -estearoil-2-palmitoil-fosfatidil- colina (SPPC), 1 ,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DAPC) , 1 ,2- diaraquidoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DBPC) , 1 ,2-dieicosenoil-sn- glicero-3-fosfocol'ina (DE PC), palmitoil-oleoil-fosfatidil-colina (POPC), lisofosfatidil-colina, dilinoleoil-fosfatidil-colina, diestearoil-fosfatidil-etanolamina (DSPE), dimiristoil-fosfatidil-etanolamina (DMPE), dipalmitoil-fosfatidil-etanolamina (DPPE), palmitoil-oleoil-fosfatidil-etanolamina (POPE), Msofosfatidil-etanolamina, o una combinación de las mismas.

Los lipidos neutros combinados con fosf atid il-co lina en el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención, pueden incluir a los lipidos acoplados con polietilenglicol (PEG). Los ejemplos de los lipidos acoplados con polietilenglicol (PEG) que se pueden utilizar en la presente invención incluyen: carbonil-metoxi-polietilenglicol-diestearoil-fosfatidil-etanolamina (MPEG-750-DSPE, MPEG-2000-DSPE y MPEG-5000-DSPE), carbonil-metoxi-polietilenglicol-dipalmitoil-fosfatidil-etanolamina (MPEG-2000-DPPE y MPEG-5000-DPPE), carbonil-metoxi-polietilenglicol-dimiristoil-fosfatidil-etanolamina (MPEG-2000-DMPE y MPEG-5000-DMPE), y sus derivados.

En una modalidad muy preferida, el lípido neutro se selecciona a partir del grupo que consiste en colesterol, d i pa I m ito i l-fosf atid i I-colina (DPPC), diestearoil-fosfatidil-colina (DSPC), fosfocolina (DOPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC), y mPEG-2000-DMPE.

Los lipidos catiónicos adecuados para la presente invención incluyen, por ejemplo, cloruro de N-1-(2,3-dioleiloxi)-propil-N,N,N-trimetil-amonio (DOTMA), 1 ,2-bis-(oleoiloxi)-3-(4'-trimetil-amonio)-propano (DOTAP), 1 ,2-dioleo¡l-3-(4'-trimetil-amonio)-butano¡l-sn- glicerol (DOTB), éster de 1 ,2-dioleoil-3-succin¡l-sn-glicerol-colina (DOSC), (4'-trimet¡l-amonio)-butanoato de colesterilo (ChoTB), bromuro de 1 ,2-dioleoil-3-dimetil-hidroxi-etil-amonio (DORI), bromuro de 1 ,2-dioleiloxi-propil-3-dimetil-hidroxi-etil-amonio (DORIE), bromuro de 1 ,2-dimiristiloxi-propil-3-dimetil-h¡droxi-etil-amonio (DMRIE), cloruro de 0,0'-didodecil-N-p-(2-trimetil-amonio-etiloxi)-benzoil-N,N,N-trimetil-amonio, Lipospermina, DC-Col (3a-N-(N',N"-dimetil-amino-etano)-carbonil-colesterol), lipo-poli-(L-lisina), cloruro de N-(a-trimetil-amon¡o-acetil)-didodecil-D-glutamato (TMAG), o una combinación de los mismos.

Los lípidos aniónicos adecuados para la presente invención incluyen, por ejemplo, fosfatidil-serina, fosfatidil-g licerol , dimiristoil-fosfatidil-serina (DMPS), dipalmitoil-fosfatidil-serina (DPPS), fosfatidil-serina del cerebro (BPS), dilauriloil-fosfatidil-glicerol (DLPG), dimiristoil-fosfatidil-glicerol (DMPG), dipalmitoil-fosfatidil-glicerol (DPPG), diestearoil-fosfatidil-glicerol (DSPG), dioleoil-fosfatid i l-g licerol (DOPG), o una combinación de los mismos.

Adicionalmente se pueden utilizar excipientes farmacéuticamente aceptables en el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención. Los ejemplos de los excipientes farmacéuticamente aceptables que se pueden utilizar en la presente invención incluyen inhibidores de la oxidación de lípidos (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,605,703 y Publicación Internacional Número WO 9202208), agentes estabilizantes, tales como esteróles, polietilenglicol (PEG) o tocoferol, antioxidantes, tales como a-tocoferol o su sal de acetato; vitamina E; ß-caroteno; carotenoides, tales como a-caroteno, licopeno, luteína, zeaxantina, y similares; y agentes reguladores, tales como regulador de citrato, regulador-Tris, regulador de fosfato, y similares; o agentes acidificantes, tales como ácido cítrico, ácido maleico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, y similares.

En la presente invención se puede utilizar cualquier fármaco o combinación de fármacos hidrofobicos, es decir, insolubles en agua, incluyendo cuando menos un fármaco hidrofóbico. Los fármacos adecuados incluyen fármacos contra la hipertensión, fármacos antibióticos, y fármacos contra el cáncer o anti-tumorales. Los ejemplos de los fármacos hidrofobicos que se pueden incorporar en las bicapas de fosfolípido del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, análogos de mostaza nitrogenados como ciclofosfamida; melfalano; ifosfamida; o trofosfamida; etileniminas, tales como tiotepa; nitrosoureas como carmustina; agentes alquilantes, tales como temozolomida; o dacarbazina; anti-metabolitos análogos de ácido fólico, tales como metotrexato o raltitrexed; análogos de purinas, tales como tioguanina, cladribina o fludarabina; análogos de pirimidinas como fluoro-uracilo, tegafur o gemcitabina; alcaloides vinca y análogos, tales como vinblastina, vincristina o vinorelbina; derivados de podofilotoxina, tales como una etoposida; taxanos, tales como docetaxel o paclitaxel; antraciclinas, tales como doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina y mitoxantrona; otros antibióticos citotóxicos, tales como bleomicina y mitomicina; compuestos de platino, tales como cisplatina, carboplatina y oxaliplatina; anticuerpos monoclonales, tales como rituximab; otros agentes antineoplásicos, tales como pentostatina, miltefosina, estramustina, topotecano, irinotecano, bicalutamida, procarbazina, mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalano, clorambucil, busulfano, nitrosourea, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina, plicomicina, mitomicina, etoposida (VP 16), tamoxifeno, raloxifeno, agentes de enlace de los receptores de estrógeno, taxol, gemcitabina, navelbina, inhibidores de farnesil-transferasa de proteína, transplatino, 5-fluoro-uracilo, vincristina, vinblastina, metotrexato, taxoides, camptotecinas, doxorrubicina, miquelamina B y vincristina, o combinaciones de los mismos. El término "taxoide" se refiere a paclitaxel, cefalomanina, bacatina III, 10-desacetil-bacatina III, desacetil-paclitaxel y desacetil-7-epipaclitaxel, y derivados y precursores de los mismos.

En una modalidad de la invención, la sustancia de fármaco hidrofóbica es la EPO906 (epotilona B), la cual es pobremente soluble en agua (<0.1 miligramos/litro) pero altamente soluble en solventes orgánicos (etanol, acetato de etilo, dicloro-metano, etc.). Por consiguiente, es conveniente incorporar la EPO9906 en un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), de preferencia en un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) liposomal, para mejorar la concentración efectiva durante la administración.

Mecánicamente, los ARNs de interferencia cortos (siARNs) y la EPO906 difieren en su modo de acción. La EPO906 altera las estructuras de tubulina de las células, conduciendo a la muerte celular, mientras que el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) se puede dirigir hacia secuencias genéticas de interés específicas utilizando la secuencia de ácido nucleico complementaria del ARNm del gen de interés ("gen objetivo"). La dirección de este Ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) conduce a la degradación catalítica del ARNm objetivo por medio de un complejo de múltiples proteínas RISC (complejo silenciador inducido por el ARN) duplicado, y, por consiguiente, la sub-regulación de la proteína codificada por este ARNm.

La presente invención supera el problema de solubilidad de la EPO906 y otros fármacos pobremente solubles en agua, mediante su incorporación en la estructura macromolecular de un liposoma o vesícula multilamelar. La presente invención también supera el inconveniente de que el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) sea rápidamente degradado y excretado mediante la incorporación del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) en el recinto interior acuoso del liposoma o vesícula multilamelar, mientras que simultáneamente se incrementa el perfil farmacocinético y farmacodinámico de ambas sustancias de fármaco mediando la absorción celular. Este planteamiento denominado "combo" de integrar dos sustancias de fármaco farmacéuticamente activas físico-químicamente diferentes, en un suministro de fármaco, supera una serie de inconvenientes de las dos sustancias de fármaco individuales, tales como (i) mejorar la concentración local efectiva del fármaco pobremente soluble en agua, (¡i) aumentar la protección de tanto el fármaco hidrofóbico como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) de la degradación mediante hidrólisis y/o enzimas específicas (esterasas, nucleasas), (Mi) mejorar los perfiles farmacocinéticos y farmacodinámicos de ambas sustancias de fármaco, y (iv) crear un efecto sinérgico atacando a la célula objetivo desde dos sendas moleculares distintas (por ejemplo, la inhibición de tubulina en el caso de la EPO906 y la degradación específica objetivo del ARNm).

El uso de los ARNs de interferencia cortos (siARNs) es bien conocido en la materia. En el diseño de un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención, se dirige cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) hacia una secuencia genética de interés específica, conduciendo a una sub-regulación de la proteína codificada por este ARNm. Se puede dirigir hacia un gen de interés que pueda o no constituir un fármaco, mediante el diseño de una secuencia de Ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) homologa al ARNm de interés. Con el genoma humano entero ahora secuenciado, cualquier porción del mismo puede servir como una secuencia objetivo en el diseño de un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) para utilizarse en un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención. Por ejemplo, el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) se podría diseñar para dirigirse hacia un oncogén, tal como BCI-2, lo cual da como resultado la sub-regulación y la prevención de la proliferación de las células de cáncer. Las secuencias de muchos oncogenes son conocidos y están fácilmente disponibles. Los ejemplos incluyen EphA2, cinasa de adhesión focal (FAK), receptor adrenérgico-U2 (IS2AR), ESR1, proteína supresora de tumor pRB, MDR-1 , NKkappaB y Nek2.

Por consiguiente, la secuencia para un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) para utilizarse en la presente invención se puede obtener a partir del ADN del plasma o del genoma humano. El Ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) se puede generar mediante la disociación de la ribonucleasa III a partir del ARN de doble cadena más largo (dsARN), el cual es homólogo al gen silenciado, o mediante el suministro de ARNs sintéticos a las células. La secuencia genética objetivo puede constituir o no un fármaco. Los ARNs de interferencia cortos (siARNs) para utilizarse en el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención, también se puede derivar a partir de las secuencias anti-sentido conocidas.

Los ARNs de interferencia cortos (siARNs) para utilizarse en la presente invención son secuencias de ribonucleótidos de doble cadena típicamente de 15 a 50 pares de bases de longitud, que están altamente cargadas negativamente, y que son solubles predominantemente en agua. De preferencia, la secuencia del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) de la presente invención está en el intervalo de aproximadamente 19 a aproximadamente 27 pares de bases de longitud, y es altamente homologa o el 100 por ciento homologa a la secuencia objetivo. El ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) puede ser de extremos romos, o de otra manera, puede tener colgaduras de pares de bases. El ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) puede incluir además una secuencia de aminoácidos de repetición que consiste en serina-ácido aspártico-treonina y/o modificaciones de la estructura base de fosforotioato.

Diferentes tipos de ARN pueden servir como el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) para utilizarse en un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención. Por ejemplo, se pueden utilizar ARN de doble cadena (dsARN), micro-ARN (miARN), ARN de horquilla corto (shARN), o combinaciones de los mismos.

La proporción del lípido al Ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) utilizado en la presente invención, puede estar en el intervalo de 10:1 (masa) a 20:1 (masa). De preferencia, la proporción del lípido al Ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) utilizado en la presente invención es de aproximadamente 14:1.

En una modalidad de la invención, el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) y las composiciones farmacéuticas que incluyen el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención, se pueden formular en una variedad de formulaciones adecuadas, y se pueden administrar oralmente, en forma de aerosol, parenteralmente, subcutáneamente, intravenosamente, intramuscularmente, intraperitonealmente, interperitoneal-mente, rectalmente, tópicamente, y vaginalmente.

De preferencia, el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) se mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y se administra intravenosamente (iv), intraperitonealmente (ip) o tópicamente (tp). La administración por vía intravenosa (iv) o intraperitoneal (ip) da como resultado una reducción en el riesgo de efectos secundarios, tales como inflamación del sitio de inyección.

De acuerdo con la presente invención, se puede unir una "fracción de dirección" o un ligando al sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) para reconocer el tejido objetivo y, por consiguiente, mejorar el suministro intracelular de las sustancias de fármaco suministradas mediante los sistemas de suministro de fármaco vesiculares (VDDSs), por ejemplo, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, polisacáridos, azúcares, y otros ligandos u otros agentes y/o métodos conocidos por aquéllos de una experiencia ordinaria en este campo (Klibanov y colaboradores, J. Liposome Res., 2(3): 321 (1992)). Se pueden unir gangliósidos, polisacáridos y polímeros, tales como polietilenglicol, a los sistemas de suministro de fármaco vesiculares (VDDSs), para disminuir su absorción no específica mediante el sistema reticuloendotelial in vivo. También se han incorporado diferentes proteínas celulares y virales en los liposomas para propósitos de dirección, y por sus propiedades fusogénicas. De acuerdo con una m odalidad de la presente invención , la fracción de dirección se acopla a u n polímero hid rofílico (por ejem plo, polietilenglicol (P EG)), con el objeto de modifica r la especificidad de dirección . De acuerdo con una m odal idad de la presente invención , la fracción de dirección es folato-m PEG-DS P E transferrina , alfa-tocoferol , ácido retinoico o el péptido RG D .

La presente invención proporciona un método para la elaboración de un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido, la cual comprende un lípido neutro de fosfatidil-colina que encierra cuando menos una cavidad acuosa; (b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido.

El método comprende los pasos de: (i) formar una primera solución, la cual comprende un lípido neutro de fosfatidil-colina, cuando menos un fármaco hid rofóbico, y un solvente orgánico miscible en agua, (ii) formar una película de lípido mediante la evaporación del solvente orgánico miscible en agua a partir de la primera solución , (iii) formar una segunda solución , la cual comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y una solución acuosa, y (iv) combinar la película de lípido de (ii) con la segunda solución de (iii) para formar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

La proporción del lípido al ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) empleada para hacer el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención puede estar en el intervalo de 10:1 (masa) a 20:1 (masa). De preferencia, la proporción del lípido al ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) empleada en la presente invención es de aproximadamente 14:1.

El "solvente orgánico miscible en agua" utilizado en la presente invención se selecciona dependiendo de la solubilidad del fármaco hidrofóbico en el solvente, del grado hasta el cual el solvente sea miscible en agua, y de la toxicidad del solvente. Los ejemplos de los solventes que se pueden utilizar incluyen, pero no se limitan a, sulfóxido de dimetilo (DMSO), dimetil-acetamida (DMA), dimetil-formamida, diferentes alcoholes, tales como etanol, glicoles, glicerina, propilenglicol, y diferentes polietilenglicoles. De acuerdo con una modalidad de la presente invención, el método para la elaboración del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), utiliza etanol como el solvente orgánico miscible en agua, para formar una mezcla que comprende el cuando menos un fosfolípido y cuando menos un fármaco hidrofóbico para mezclarse adicionalmente con la solución acuosa que comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), para formar los sistemas de suministro de fármaco vesiculares (VDDSs).

La solución acuosa utilizada para formar la segunda solución que contiene el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) incluye tanto un regulador a un pH de entre 3 y 6, de preferencia a un pH de 4, y una sal de metal. Esta solución acuosa se selecciona dependiendo de la solubilidad del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN). Un experto ordinario entendería la manera de seleccionar un regulador y una sal de metal para la solución acuosa en la presente invención. Los ejemplos de los reguladores adecuados incluyen cualquier sal de ácido acético, incluyendo acetato de sodio y acetato de potasio, regulador de succinato, regulador de fosfato, regulador de citrato, HEPES, suero regulado con fosfato, y cualesquiera otros conocidos en este campo. Los ejemplos de las sales de metales adecuadas incluyen cloruro de calcio, cloruro de zinc, y cloruro de magnesio.

Se pueden agregar aditivos para el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) que mejoren la estabilidad o que reduzcan la toxicidad de las sustancias de fármaco, tales como inhibidores de la oxidación de lípidos (Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 5,605,703 y Publicación Internacional Número WO 9202208), y agentes estabilizantes, tales como esteróles, polietilenglicol (PEG) o tocoferol. Los esteróles, tales como colesterol, cuando se incluyen en un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), promueven la estabilidad haciendo que las bicapas sean menos permeables a las moléculas pequeñas y a los iones, y reduciendo el tráfico de proteínas entre las bicapas.

Una "fracción de dirección" o un ligando para reconocer el tejido objetivo, se puede unir al sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), empleando los métodos conocidos por aquéllos de una experiencia ordinaria en este campo (Klibanov y colaboradores, J. Liposome Res., 2(3): 321 (1992)). Estos métodos conocidos se incorporan a la presente como referencia.

La remoción del fármaco libre, no liposomal, y del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), se puede lograr utilizando un sistema de filtración de flujo tangencial (de membrana) (TFF), o diálisis.

La presente invención proporciona además un método para la elaboración de un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido, la cual comprende una combinación de un lípido neutro de fosfatidil-colina y cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional que encierra cuando menos una cavidad acuosa; (b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido.

El método comprende los pasos de: (i) formar una primera solución, la cual comprende el lípido neutro de fosfatidil-colina, los lípidos neutros o catiónicos o amónicos adicionales, cuando menos un fármaco hidrofóbico, y un solvente orgánico miscible en agua, (ii) formar una película de lípido mediante la evaporación del solvente orgánico miscible en agua a partir de la primera solución, (iii) formar una segunda solución, la cual comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y una solución acuosa, y (iv) combinar la película de lípido de (ii) con la segunda solución de (iii) para formar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

La proporción del lípido al ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) empleada para elaborar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención, puede estar en el intervalo de 10:1 (masa) a 20:1 (masa). De preferencia, la proporción del lípido al ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) empleada en la presente invención es de aproximadamente 14:1.

Una formulación preferida de un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención tiene una proporción de PC . col : DMPE-PEG2000 : D,L-a-tocoferol (Vitamina E) de 81.9 : 15.4 : 2: 0.7 (molar), en donde "PC" es fosfatidil-colina, "col" es colesterol, y "DMPE-PEG2000" es dimiristil-fosfatidil-etanolamina/polietilenglicol 2000. Una proporción preferida del lípido al ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) es de 14:1 (masa). La cantidad de fármaco que se intercala en la bicapa liposomal depende del fármaco particular. En el caso de la EPO906, se prefiere una concentración final de 0.5 miligramos/mililitro intercalada en la bicapa. La acumulación del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) en el interior acuoso del liposoma está de preferencia en una concentración final de aproximadamente 1 a 1.2 miligramos/mililitro.

La presente invención proporciona además un método para el co-suministro simultáneo de cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica y cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) a un sujeto, comprendiendo este método, administrar al sujeto un sistema de suministro de fármaco vesicular, el cual comprende: (a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa; (b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y (c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de lípido. De acuerdo con la presente invención, la bicapa de lípido comprende un lípido neutro que es fosfatidil-colina. La presente invención incluye además una modalidad en donde la bicapa de lípido comprende una combinación de fosfatidil-colina y cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, y/o un lípido aniónico adicional.

Un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención es útil en el tratamiento de diferentes enfermedades, en especial en aplicaciones de oncología. Por ejemplo, se puede utilizar un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS), el cual comprende la EPO906 y un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), para el tratamiento de cáncer de ovario, en donde la administración es de preferencia intraperitoneal o administración sistémica/parenteral. También se puede utilizar un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención, el cual comprende la EPO906 y un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), en el tratamiento de cáncer de mama, pulmón, melanoma, peritoneal, de trompas de Falopio, y colo-rectal. Un intervalo de dosis preferido es de 0.1 a 10 miligramos/kilogramo del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) por aplicación individual, lo cual es igual a 0.05 a 5 miligramos/kilogramo de la EPO906 por aplicación individual.

El siguiente ejemplo es ilustrativo pero no sirve para limitar el alcance de la invención descrita en la presente. El ejemplo pretende solamente sugerir un método para la práctica de la invención.

EJEMPLO 1 Preparación de película de lípido sin una fracción de dirección: La fosfatidil-colina (PLPC, 104.4 miligramos), colesterol (10 miligramos), MPEG-2000-DMPE (9 miligramos), y D,L-a-tocoferol (0.49 miligramos), se disuelven en 2 mililitros de etanol, para dar 62.01 miligramos/mililitro (ó 0.0840 milimoles/mililitro). Se agrega la EPO906 (22.14 miligramos), y se disuelve completamente. A partir de esta solución , se pasan por pipeta 1 , 1 29 m icrolitros hacia u n matraz de fondo redondo separado , y se evapora todo el etanol , para generar una película de lípido .

Preparación de película de lípido con una fracción de dirección: La fracción de dirección utilizada en este ejemplo es FA-mPEG-DSPE. La fosfatidil-colina (PLPC, 1 04.1 miligramos), colesterol (10.22 miligramos) , mPEG-2000-DM PE (9 miligramos), FA-PEG3000-DSPE (2.2 miligramos), y D, L-a-tocoferol (0.52 miligramos), se disuelven en 2 mililitros de etanol, para dar 62.92 miligramos/mililitro (ó 0.084 milimoles/mililitro). Se agrega la EPO906 (22.46 miligramos) , y se disuelve completamente. A partir de esta solución, se pasan por pipeta 1 , 1 1 3 microlitros hacia un matraz de fondo redondo separado y se evapora el etanol , para generar una película de lípido.

Preparación de una solución acuosa de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) : En este ejemplo, se utiliza un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) específico del gen de luciferasa. Se prepara una solución de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) de 1 ,000 microlitros de suministro de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) (5 miligramos/mililitro) , 1 25 microlitros de CaCI2 (0.1 M) , 1 25 microlitros de una solución reguladora de ácido acético (pH de 4, 1 M) , y 250 microlitros de agua , mediante mezcla. La solución de ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) se calienta en u n baño de agua a 45°C.

Preparación del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS): La película de lípido particular se mezcla y se hidrata con la solución acuosa del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), para formar una solución de lipoplex. La solución de lipoplex se deja en un baño de agua caliente a 45°C durante 30 minutos antes de la adición de 1,000 microlitros de etanol. La solución de lipoplex se congela utilizando nitrógeno líquido, y se calienta en el baño de agua caliente a 45°C. El paso de congelación y calentamiento se repite tres veces con el objeto de aumentar las eficiencias de atrape para las sustancias de fármaco solubles en agua, lo cual da como resultado un sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la presente invención. El análisis de las partículas muestra un tamaño promedio de 140 ± 56 nanómetros, y un PDI de 0.5 con eficiencias de encapsulación del 80 por ciento, como se determinan mediante electroforesis en gel.

La remoción de la EPO906 libre no liposomal y del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) se logra utilizando un sistema de filtración de flujo tangencial (de membrana) (TFF).

Claims

REIVI N DICAC ION ES

1 . Un sistema de suministro de fármaco vesicular, el cual comprende: a) cuando menos una bicapa de lípido que encierra cuando menos una cavidad acuosa, en donde el lípido comprende cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina ; b) cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) contenido dentro de la cuando menos una cavidad acuosa; y c) cuando menos una sustancia de fármaco hidrofóbica empotrada en la cuando menos una bicapa de l ípido.

2. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 1 , en donde el lípido comprende además cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, o un lípido aniónico adicional .

3. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde el cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) comprende ARN de doble cadena (dsARN), micro-ARN (miARN) , ARN de horquilla corto (shARN) , o combinaciones de los mismos.

4. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 1 ó 2 , en donde la secuencia de nucleótidos del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) mencionado se deriva a partir de un oligonucleótido anti-sentido, de ADN de plasma, o del genoma humano.

5. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 1 ó 2, en donde el fármaco hidrofóbico se selecciona a partir del grupo que consiste en un taxoide, docetaxel, paclitaxel, cisplatina (CDDP), carboplatina, procarbazina, mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalano, clorambucil, busulfano, nitrosourea, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina, plicomicina, mitomicina, etoposida (VP 16), tamoxifeno, raloxifeno, agentes de enlace de los receptores de estrógeno, taxol, gemcitabina, navelbina, inhibidores de farnesil-transferasa de proteína, transplatino, 5-fluoro-uracilo, vincristina, vinblastina, metotrexato, ciclosporina, miquelamina B, briostatina-1 , halomon, cisplatina, EPO906, o una combinación de los mismos.

6. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 5, en donde el fármaco hidrofóbico es la EPO906.

7. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 2, en donde el cuando menos un lípido neutro adicional es colesterol, dipalm itoil-fosfatidil-colina (DPPC), diestearoil-fosfatidil-colina (DSPC), fosfocolina (DOPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC), fosfatidil-colina (PLPC), fosfatidil- etanolamina (PE), fosfatidil-colina de huevo (EPC), dilauriloil- fosfatidil-colina (DLPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC), 1- miristoil-2-palmitoil-fosfatidil-colina (MPPC), 1 -palmitoil-2-miristoil- fosfatidil-colina (PMPC), 1 -palmitoil-2-estearoil-fosfatidil-colina (PSPC), 1 -estearoil-2-palmitoil-fosfatidil-colina (SPPC), 1,2- diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DAPC), 1 ,2-diaraquidoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DBPC), 1 ,2-dieicosenoil-sn-glicero-3-fosfo-colina (DEPC), palmitoil-oleoil-fosfatidil-colina (POPC), lisofosfatidil-colina, dilinoleoil-fosfatidil-colina, diestearoil-fosfatidil-etanolamina (DSPE), dimiristoil-fosfatidil-etanolamina (DMPE), dipalmitoil-fosfatidil-etanolamina (DPPE), pal mitoil-oleoil-fosfatidil-etanol amina (POPE), lisofosfatidil-etanolamina, una carbonil-metoxi-poli-etilenglicol-diestearoil-fosfatidil-etanolamina (MPEG-750-DSPE, MPEG-2000-DSPE y PEG-5000-DSPE), carbonil-metoxi-poli-etilenglicol-dipalmitoil-fosfatidil-etanolamina (MPEG-2000-DPPE y MPEG-5000-DPPE), carbonil-metoxi-polietilenglicol-dimiristoil-fosfatidil-etanolamina (MPEG-2000-DMPE y MPEG-5000-DMPE) o una combinación de los mismos.

8. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 7, en donde el lípido neutro es DPPC, DSPC, DOPC, DMPC, PLPC, PE, M PEG-2000-DM PE, o una combinación de los mismos.

9. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 2, en donde el cuando menos un lípido catiónico adicional es cloruro de N-1-(2,3-dioleiloxi)-propil-N,N,N-trimetil-amonio (DOTMA), 1 ,2-bis-(oleoiloxi)-3-(4'-trimetil-amonio)-propano (DOTAP), 1 ,2-dioleoil-3-(4'-trimetil-amonio)-butanoil-sn-glicerol (DOTB), éster de 1 ,2-dioleoil-3-succinil-sn-glicerol-colina (DOSC), (4'-trimetil-amonio)-butanoato de colesterilo (ChoTB), bromuro de 1 ,2-dioleoil-3-dimetil-hidroxi-etil-amonio (DORI), bromuro de 1,2- dioleiloxi-propil-3-dimetil-hidroxi-etil-amonio (DORIE), bromuro de 1 ,2-dimiristiloxi-propil-3-dimetil-hidroxi-etil-amonio (DMRIE), cloruro de 0,0'-didodecil-N-p-(2-trimet¡l-amonio-et¡lox¡)-benzoil-N,N,N-tr¡-metil-amonio, Lipospermina, DC-Chol (3a-N-(N',N"-dimet¡l-am¡no-etano)-carbonil-colesterol), Mpo-poli-(L-risina), cloruro de N-(a-tr¡-metil-amonio-acetil)-d¡dodecil-D-glutamato (TMAG), o una combinación de los mismos.

10. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 2, en donde el cuando menos un lípido aniónico adicional es fosfatidil-serina, fosfatidil-glicerol, dimiristoil-fosfatidil-serina (DMPS), dipalm itoil-fosfatidil-serina (DPPS), fosfatidil-serina del cerebro (BPS), dilauriloil-fosfatidil-glicerol (DLPG), dimiristoil-fosfatidil-glicerol (DMPG), d i pa t m it o i l-fosfati d il-g I i ce ro I (DPPG), diestearoil-fosfatidil-glicerol (DSPG), dioleoil-fosfatidil-glicerol (DOPG), o una combinación de los mismos.

11. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de las reivindicaciones 1 ó 2, el cual comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable adicional.

12. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 11, en donde el excipiente farmacéuticamente aceptable adicional es un agente estabilizante seleccionado a partir del grupo que consiste en colesterol, polietilenglicol (PEG), o tocoferol.

13. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) inhibe la traducción de un gen que promueve el crecimiento de una célula hiperplásica o cancerosa.

14. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde el ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) es de 15 a 50 nucleobases.

15. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 13, en donde el gen se selecciona a partir del grupo que consiste en EphA2, cinasa de adhesión focal (FAK), receptor adrenérgico beta-2 ([beta]2AR), ESR1, proteína supresora de tumor pRB, MDR-1 , NKkappaB, y Nek2.

16. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 1, el cual comprende además una fracción de dirección.

17. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 16, en donde la fracción de dirección se selecciona a partir del grupo que consiste en folato-mPEG-DSPE transferrina, alfa-tocoferol, ácido retinoico, y péptido RGD.

18. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 9, el cual comprende además colesterol, dimiristoil-fosfatidil-etanolamina/polietilenglicol 2000 (DMPE-PEG2000), y tocoferol.

19. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) como en la reivindicación 18, en donde la proporción de PC : colesterol : DMPE-PEG2000 : tocoferol, es de aproximadamente 81.9 : 15.4 : 2 : 0.7 (molar).

20. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) como en la reivindicación 1, en donde la proporción de lípido : ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) está en el intervalo de entre 10 : 1 (masa) y 20 : 1 (masa).

21. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) como en la reivindicación 20, en donde la proporción de fosfolípido : ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) es de 14:1 (masa).

22. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) como en la reivindicación 1, en donde la concentración del fármaco hidrofóbico es de cuando menos aproximadamente 0.5 miligramos/ mililitro.

23. El sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) como en la reivindicación 1, en donde la concentración del ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) es de aproximadamente 1 a 1.2 miligramos/mililitro.

24. Un método para la elaboración del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 1, comprendiendo este método: a) formar una primera solución, la cual comprende cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina, cuando menos un fármaco hidrofóbico, y un solvente orgánico miscible en agua, b) formar una película de lípido mediante la evaporación del solvente orgánico miscible en agua a partir de la primera solución, c) formar una segunda solución, la cual comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y una solución acuosa, d) combinar la película de lípido de (b) con la segunda solución de (c) para formar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

25. Un método para la elaboración del sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS) de la reivindicación 2, comprendiendo este método: a) formar una primera solución, la cual comprende cuando menos un lípido neutro que es fosfatidil-colina; cuando menos un lípido neutro, un lípido catiónico, o un lípido aniónico adicional; cuando menos un fármaco hidrofóbico, y un solvente orgánico miscible en agua; b) formar una película de lípido mediante la evaporación del solvente orgánico miscible en agua a partir de la primera solución; c) formar una segunda solución, la cual comprende cuando menos un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN), y una solución acuosa; y d) combinar la película de lípido de (b) con la segunda solución de (c) para formar el sistema de suministro de fármaco vesicular (VDDS).

26. El método de las reivindicaciones 24 ó 25, en donde se agrega una fracción de dirección a la primera solución de (a).

27. El método de las reivindicaciones 24 ó 25, en donde el fármaco hidrofóbico mencionado es un taxoide, camptotecina, doxorrubicina, miquelamina B, vincristina, briostatina-1 , halomon, cisplatina, EPO906, docetaxel, paclitaxel, cisplatina (CDDP), carboplatina, procarbazina, mecloretamina, ciclofosfamida, camptotecina, ifosfamida, melfalano, clorambucil, busulfano, nitrosourea, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina, plicomicina, mitomicina, etoposida (VP 16), tamoxifenp, raloxifeno, agentes de enlace de los receptores de estrógeno, taxol, gemcitabina, navelbina, inhibidores de farnesil-transferasa de proteína, transplatino, 5-fluoro-uracilo, vincristina, vinblastina, metotrexato, y ciclosporina, o una combinación de los mismos.

28. El método de las reivindicaciones 24 ó 25, en donde el solvente orgánico miscible en agua mencionado se selecciona a partir del grupo que comprende un alcohol, acetona, dimetil-formamida, sulfóxido de dimetilo, dimetil-acetamida, o un polietiienglicol.

29. El método de la reivindicación 28, en donde el solvente orgánico miscible en agua es un alcohol seleccionado a partir del grupo que comprende metanol, glicol, glicerol, propilenglicol, o etanol.

30. El método de las reivindicaciones 24 ó 25, en donde el cuando menos un lípido neutro adicional se selecciona a partir del grupo que comprende dipalmitoil-fosfatidil-colina (DPPC), diestearoil- fosfatidil-colina (DSPC), fosfocolina (DOPC), dimiristoil-fosfatidil- colina (D PC), fosfatidil-colina (PLPC), fosfatidil-etanolamina (PE), fosfatidil-colina de huevo (EPC), dilauriloil-fosfatidil-colina (DLPC), dimiristoil-fosfatidil-colina (DMPC), 1 -miristoil-2-palmitoil-fosfatidil-colina (MPPC), 1 -palmitoil-2-m iristoil-fosfatidil-colina (PMPC), 1-palmitoil-2-estearoil-fosfatidil-colina (PSPC), 1 -estearoil-2-palmitoil-fosfatidil-colina (SP C), 1 ,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DAPC), 1 ,2-diaraquidoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DBPC), 1,2-dieicosenoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DEPC), palmitoil-oleoil-fosfatidil-colina (POPC), lisofosfatidil-colina, dilinoleoil-fosfatidil-colina, diestearoil-fosfatidil-etanolamina (DSPE), dimiristoil-fosfatidil-etanolamina (DMPE), dipalmitoil-fosfatidil-etanolamina (DPPE), palmitoil-oleoil-fosfatidil-etanolamina (POPE), y lisofosfatidil-etanolamina, o una combinación de las mismas.

31. El método de las reivindicaciones 24 ó 25, en donde se agrega un agente estabilizante a la primera solución de (a).

32. El método de la reivindicación 31, en donde el agente estabilizante es colesterol, polietilenglicol (PEG) o tocoferol.

33. Un método para el co-suministro simultáneo de una sustancia de fármaco hidrofóbica y un ácido ribonucleico de interferencia corto (siARN) a un sujeto, comprendiendo este método, administrar al sujeto un sistema de suministro de fármaco vesicular de la reivindicación 1.