JP2011121981A - 多価dtpポリオワクチン - Google Patents
多価dtpポリオワクチン Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011121981A JP2011121981A JP2011024221A JP2011024221A JP2011121981A JP 2011121981 A JP2011121981 A JP 2011121981A JP 2011024221 A JP2011024221 A JP 2011024221A JP 2011024221 A JP2011024221 A JP 2011024221A JP 2011121981 A JP2011121981 A JP 2011121981A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vaccine
- pertussis
- toxoid
- prp
- tetanus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0016—Combination vaccines based on diphtheria-tetanus-pertussis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/05—Actinobacteria, e.g. Actinomyces, Streptomyces, Nocardia, Bifidobacterium, Gardnerella, Corynebacterium; Propionibacterium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/099—Bordetella
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
- C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32611—Poliovirus
- C12N2770/32634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【解決手段】(a)精製した状態の百日咳トキソイド、線状赤血球凝集素、ペルタクチン、凝集原、(b)破傷風トキソイド、(c)ジフテリアトキソイド、(d)破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、インフルエンザ菌b型の莢膜多糖から選択されたキャリア分子の複合体から成り、各成分の免疫原性が製剤内の他の個別の成分により障害を受けないように、製剤の各成分が調整されている、百日咳菌(Bordetella pertussis)、破傷風菌(Clostridium tetani)、ジフテリア菌(Corynebacterium diphtheriae)、および/またはインフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)の感染が原因となる疾病に対する宿主内防御を与える多価免疫原性成分。
【選択図】なし
Description
多様な非細胞性の百日咳ワクチンが開発されており、それらのワクチンには、その抗原として、百日咳菌(Bordetella pertussis)抗原としての百日咳毒素(PT)、線状赤血球凝集素(FHA)、69kDa外膜タンパク質(ペルタクチン:pertactin)、線毛凝集原が使用されている(下表1参照。表は本出願書の最後に記載)。
百日咳毒素(PT)は、ADPリボシル転移酵素活性を有する細菌毒素のA/B毒素ファミリーの1種類である外毒素である(文献8)。この毒素の半分を構成するA部分は、ADPリボシル転移酵素活性を示し、別の半分を構成するB部分は、毒素の細胞受容体への結合およびA部分の作用部位への転移を仲介する。PTは、百日咳菌が線毛状上皮細胞に接着することを促進させ(文献9)、百日咳菌によるマクロファージの侵入にも関与している(文献10)。全部の非細胞性百日咳ワクチンに、このPTが含まれ、主要ビルレンス要素として、および感染防御抗原として使用されている(文献11,12)。百日咳菌が自然感染した場合は、このPTに対する体液性および細胞性免疫応答が誘起されることになる(文献13〜17)。乳幼児は、経胎盤的に獲得した抗-PT抗体を持っており(参考文献16,18)、抗-PT抗体を含んでいるヒトの初乳は、マウスでのエアロゾル感染に対する受動感染防御に有効であることが認められている(文献19)。無細胞ワクチンで免疫した後のPTサブユニットに対する細胞性免疫が誘起されることが報告されており(文献20)、さらに、全細胞ワクチンの接種の後もPTに対する細胞性免疫が誘導されている。全細胞性ワクチンまたはコンポーネントワクチンに化学的に不活化させたPTを抗原として使用した場合、動物にもヒトにも感染防御作用が認められている(文献21)。また、S1サブユニットに特異的であるモノクローナル抗体が百日咳菌に対する感染防御作用を示している(文献22,23)。
線状赤血球凝集素(FHA)は、細菌集落形成中に、百日咳菌が上部気道の線毛状細胞に付着する作用を仲介する非毒性の大型のタンパク質(220kDa)である(文献9,29)。百日咳菌が自然感染をした場合には、抗-FHA抗体の産生と細胞性免疫が現れる(文献13,15,17,30,31)。抗−FHA抗体は、ヒトの初乳に存在し、経胎盤により移行する(文献17,18,19)。全細胞百日咳ワクチンまたは無細胞性百日咳ワクチンを接種すると、抗-FHA抗体を産生させ、FHAを含む無細胞性ワクチンの投与により、FHAに対する細胞性免疫を誘発する(文献20,32)。マウスの呼吸系チャレンジモデルにおいては、このFHAは、能動免疫または受動免疫での感染防御抗原となる(文献33,34)。しかし、マウスでの大脳内効果試験では、FHAだけでは効果がないことが判明している(文献28)。
この69kDaの外膜タンパク質は、本来は、気管支敗血症菌由来のものである(文献35)。このタンパク質は、ペルタクチンまたはP.69として知られているものである。これは、気管支敗血症菌に対する感染防御抗原として認識されていたが、その後、百日咳菌およびパラ百日咳菌にも存在することが判明している。この69kDaタンパク質は、真核細胞に直接に結合し(文献36)、百日咳菌の自然感染があると、抗―P.69体液性免疫応答(文献14)および細胞性免疫応答を誘発される(文献17,37,38)。全細胞百日咳ワクチンまたは無細胞性ワクチンの接種により抗−P.69抗体が産生し(文献32,39)、無細胞性ワクチンの投与で抗−P.69に対する細胞性免疫を誘発させる(文献39)。このペルタクチンは、マウスのエアロゾル試験では百日咳菌に感染防御作用を示し(文献40)、FHAを組み合わせた投与では、大脳内での百日咳菌感染を防御する(文献41)。ポリクローナルまたはモノクローナル抗-P.69抗体の投与でもマウスのエアロゾル試験における百日咳菌感染防御作用を示す(文献42)。
百日咳菌の血清型は、その凝集線毛により規定される。WHOは、全細胞ワクチンに、血清型が1,2,3型の凝集原(Agg)を含めることを勧めている。その理由は、これらが交差防御性の抗原でないからである(文献43)。Aggの血清型が1のものは、非線毛性のもので、すべての百日咳菌株に見つかっており、2型と3型のAggは線毛性である。全細胞性または無細胞性のワクチンによる免疫またはその自然感染では、抗−Agg抗体の産生を誘発する(文献15,32)。マウスでは、Agg2とAgg3をエアロゾル感染させると、ある特定の細胞性免疫反応が起こる(文献17)。マウスでの実験では、このAgg2、3は、呼吸系での感染防御作用を示し、さらに、抗−凝集素を含むヒト初乳の場合にも感染防御作用がある(文献19,44,45)。
サトウらにより最初に開発された無細胞性ワクチンは、PTとFHAの2成分を含むワクチン(JNIH6と呼ばれる)であった(文献46)。このワクチンは、百日咳菌Tohama株の培養物上清からPTとFHAを同時精製し、その後ホルマリン処理をしてトキソイドを調整したものであった。この無細胞性ワクチンを、種々のメーカが多様な成分を使用して製造し、1981年以来、日本の小児に投与され成功を納め、その結果、日本での百日咳罹患率が劇的に低下した(文献47)。このJNIH6とPTの単一成分トキソイドワクチン(JNIH7)の臨床試験が1986年にスエーデンで実施された。最初の臨床結果では、全細胞性ワクチンの効果より劣るとの結果であったが、血清学的検査では、軽度のものと診断された百日咳に対しては、この無細胞性ワクチンのほうが有効であることが示された(文献48、49、50、51)。しかし、これらのワクチンにおいて、ホルマリン処理をして無毒化したPTの毒性が復帰するという証拠が見つかった。さらに、これらのワクチンは、感染防止というよりは、感染した後の発病を抑えることに有効であることが判明した。
破傷風は、破傷風菌が原因菌である急性感染症である。この疾患の特徴は、過敏症、反射亢進、自律神経刺激の増加などを伴った重篤で痛みのある筋肉硬直である。軽度の刺激により反射筋肉痙攣の原因となる。極度の筋肉痙攣による発熱がある。破傷風は、顔、首、腹部、躯幹に広がる系統性(全身性)の場合もあり、特定の身体部分(創傷部位)に局在する局所性の場合もある。顔部の咬筋がこの菌で侵されると開口障害または「痙笑」として知られている顔面表現障害が発症する(文献78)。破傷風菌は、ヒトおよび動物の消化管内にも非病原性のものとして存在している。この微生物は糞などで汚染した土壌中に生存し、感染性胞子として数年に亘り土壌中で生き続ける(文献79)。
ジフテリアは、ジフテリア菌 (Corynebacterium diphtheriae)が原因菌となる急性の感染症である。主な感染部位は、上部気道(鼻、咽頭、喉頭、気管)である(文献80)。細胞毒素が原因で起こる病変としては、炎症で囲まれた緑色の偽膜の班である。ジフテリアの合併症として、頸部リンパ節症、咽喉の腫脹および浮腫が発症する。重篤な場合には、腫脹が閉塞にまで進む(咽頭ジフテリア)。その他の合併症として、心筋炎、中枢神経系障害(頭蓋、上行性麻痺のような運動神経、感覚神経障害)、血小板増加症がある。頻繁ではないが、その他の粘膜が侵されることもある。臨床的発現としては、無症候の感染症である場合もあり、劇症で死に至る場合もある(文献79)。ジフテリアによる皮膚と創傷での感染は熱帯地方や米国の貧困層住民に発生することが報告されている。ジフテリア菌の感染の唯一の貯蔵庫はヒトである(文献79)。
不活化ポリオワクチン(IPV)と弱毒生ポリオワクチン(OPV)の両方のワクチンが世界のポリオ拡散の制御に大きく寄与した。DPT-IPV組み合わせワクチンの特許がヨーロッパとカナダで認められ、世界の数百万の小児に投与されてポリオ予防に有効で、安全であることが示された。
有効なワクチンが使用できるようになる前は、インフルエンザ菌b型(Hib)(Haemophilus influenzae type b)が若年小児における侵襲性血液感染性の髄膜炎の主要原因であり、生後2才までの幼児の髄膜炎の原因であった(文献81)。インフルエンザ菌による髄膜炎の患者の10%が死亡している。治癒後にも永久後遺症が残る。このインフルエンザ菌に対する免疫治療として、インフルエンザ菌b型由来の多糖ワクチン(硫酸ポリリボース・リビトール、PRP)を使用したワクチン投与がカナダにおいて1987年に開始された。PRPをジフテリアトキソイドに結合させた複合体(コンジュゲート)(PRP-D)から成るワクチンを、生後18カ月前後の小児に接種することで免疫原性が改善された。1992年以来、1才以下の幼児に免疫原性を示すPRP結合ワクチン(破傷風トキソイド結合PRP:PRP−T)の使用が認可されて、幼児に対するこのワクチンの接種が開始された。これらのインフルエンザ菌由来の結合ワクチンを使用しているカナダその他の国での侵襲性インフルエンザ感染症の発症率は減少している(文献82)。英国のコロンビアおよびカナダのアルバータで実施された約900例の小児を対象とした2つの臨床研究により、凍結乾燥したPRP−Tを、通常の生理食塩水希釈液の他に、DPT(COMBIPACK)(文献83)またはDPT-ポリオ・アドソーブド(PENTA:登録商標)(文献84)を使用して、液体状に戻せることが示された。世界の10万人の小児が参加した臨床試験においても、凍結乾燥PRP-T(ActHib:登録商標)接種の有効性が確認されている。生後2カ月からPRP-Tを3回投与するか、あるいは、生後12カ月後のPRP−Tを一回投与することにより、臨床試験の対象の90%以上において、感染防御作用があるレベルとされる抗-PRPレベル(≧0.15μg/ml)を達成している。長期感染防御ができるレベル(≧1.0μg/ml)を達成する割合については、各試験により70〜100%の幅でバラツキがあった。1992年以来、数百万の用量のPRP−Tが販売された。PRP−Tを使用したワクチン接種により侵襲性インフルエンザ感染症を根絶することは無理であるが、これは、おそらく、この疾患が免疫不全が関連しているものと考えられる(文献85)。
多様な病原菌に対して同時に防御作用を示すように抗原を組み合わせたワクチンには実際上は多くの潜在的な長所があるけれども、組み合わせることによりそれぞれの成分の免疫原性に悪い影響を与えることもあり得る。ジフテリアと破傷風と全細胞性百日咳の3種の組み合わせワクチン(DTP)が50年以上も使用されており、これらの組み合わせワクチンに対する全体の綜合的な抗体産生は、個々のワクチン成分に対する個別の抗体産生よりも優れており、これは多分、全細胞性百日咳ワクチンのアジュバント効果が寄与しているためであろう。さらに、不活化ポリオウイルスワクチンも含んだDTP・ポリオ組み合わせワクチンが、この組み合わせにしたことにより、ワクチンの中の百日咳抗原に対する抗体応答が減少するにもかかわらず、多くの国で認可されている(文献69〜71)。DTPワクチンをHib結合ワクチンと組み合わせることによる有効性には変動がある。フランスで実施されたDTPとPRPTを使用した治験では、安全性においては同じような効果を示したが、PRPに対する抗体産生は減少してしまった(文献72〜73:非特許文献1、2)。カナダでのDTPとPRPTワクチンを使用した研究では、PRPに対する抗体産生効果はないが、百日咳凝集素に対しては少しの抗体産生があり、副作用として、この組み合わせたワクチン使用群での注射部位に痛みが発生した(文献74,75:非特許文献3、4)。
(a)精製した状態の、百日咳トキソイド、線状赤血球凝集素、ペルタクチン及び凝集原、
(b)破傷風トキソイド、
(c)ジフテリアトキソイド、及び
(d)担体分子とインフルエンザ菌b型の莢膜多糖との複合体
を含み、宿主にin vivo投与するワクチンとして調剤された、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌及びインフルエンザウイルスの少なくとも1種の感染が原因となる疾病に対する宿主内防御を与える多価免疫原性組成物であって、
該組成物中の各成分が、その免疫原性が該組成物中の他の成分により障害を受けないように製剤化されていることを特徴とする多価免疫原性ワクチン組成物である。
(a)精製品としての、百日咳トキソイド、線状赤血球凝集、ペルタクチン及び凝集原、
(b)破傷風トキソイド
(c)ジフテリアトキソイド
(d)不活化ポリオウイルス、およびオプションで、
(e)破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、インフルエンザ菌b型の莢膜多糖の担体分子の複合体から成る、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、ポリオウイルスおよび/またはインフルエンザ菌の感染が原因となる疾病に対しての免疫防御性を宿主に賦与する多価免疫原性成分を提供する。
図1には、ボルデテラ菌から凝集原を調製する法が図示されている。図1に示されたように、百日咳菌細胞のような凝集原を含むボルデテラ菌細胞ペーストを、例えば、10mMのリン酸カリウム、150mM塩化ナトリウム、4M尿素のような緩衝液で抽出するが、その場合、細胞ペーストから凝集原をまず選択的に抽出して、凝集素を含む最初の上清(sp1)と最初の残留沈殿物(ppt1)を作製する。最初の上清(sp1)は、遠心分離などの方法により、最初の残留沈殿物から分離する。その後、その残留沈殿物(ppt1)は廃棄する。その後、精製した上清(sp1)を遠心分離して、例えば、100〜300kDa・NMWL膜フィルタを使用して、10mMリン酸カリウム/150mM塩化ナトリム/0.1%トリトン(Triton)X−100で濾過してもよい。その後、最初の上清は、ある温度で、ある一定の時間、インキュベートして、凝集原を含む精製した上清(sp2)と非凝集原汚濁物を含む第2の沈澱物(ppt2)を生産する。適当な温度としては、約70℃〜約85℃の範囲を含む約50℃〜約100℃であり、適当なインキュベーション時間は、約1〜約60分である。精製した上清は、その後、例えば、分子量約8000(PEG8000)のポリエチレングリコールを添加して遠心分離して、最終濃度を約4.5±0.2%にした後、少なくとも30分間はゆっくり撹拌して、第3の沈殿物(ppt3)を遠心分離で集めて作製する。残りの上清(sp3)を廃棄する。
PTは、従来の方法により、百日咳株の培養上清から分離することができる。例えば、セクラ(Sekura)らの方法を使用できる(文献55)。それによれば、まず最初に、その培養上清を色素リガンド・ゲル・マトリックスであるアフィゲル・ブルー(Affi-Gel Blue)(Bio-Rad Laboratories社、リッチモンド、CA)を含むカラムに吸収させることによりPTを分離する。次に、そのPTを0.75M・塩化マグネシウムのような濃度の高い塩を使用してこのカラムから溶出させ、その塩を除去した後、臭化シアン活性化セファロースに結合させたフェチインを含むフェチュイン・セファロース・アフィニティマトリックスのカラム内を通過させる。4Mマグネシウム塩を使用してフェチイン・カラムからPTを溶出させる。代替法として、アイロン(Iron)らの方法(文献56)も使用可能である。培養上清をCNBr活性化セファロース4Bカラム上に吸収させる(この時、ヘプタグロブリンが最初に共有結合する)。PTはpH6.5で吸収剤に結合し、pHを少しづつ10になるまで変えることにより、0.1Mトリス/0.5M塩化ナトリム緩衝液から溶出する。
PTを、ワクチンの副作用の原因となるかもしれない好ましくない活性を除去するために無毒化する。ホルムアルデヒド、過酸化水素、テトラニトロメタンまたはグルタルアルデヒドのような多様な従来の化学的無毒化法のいずれも使用してもよい。
FHAを、コウエル(Cowell)らが報告したような、培養上清から精製する方法でもよい(文献58)。メチル化ベータシクロデキストリンのような成長促進剤を、培養物上清内のFHAの収量を増加させるために使用可能である。この培養物の上清をヒドロキシアパタイト・カラムに移して、その中のFHAをカラム上に吸収させる。これにはPTは存在しない。外毒素を除去するために、トリトン(Triton)X−100で、カラムを全体的に洗浄する。その後、0.5M塩化ナトリウムの0.1Mリン酸ナトリウム溶液を使用してFHAを溶出させ、必要な場合には、残留しているPTを除去するために、フェチイン・セファロースカラムを通過させる。追加的な精製プロセスとして、セファロースCL−6Bカラムを通過させてもよい。
この69kDa外膜タンパク質(69Kまたはペルタクチンと呼ぶ)を細菌細胞から回収する。EP特許484621(本出願では文献として記載)で開示されている方法で、最初にチメルゾル(thimerosal)のような細菌発育阻止剤を使用し細菌細胞を不活化させる。不活化した細胞を、PBS(pH7~8)のような液体培地に懸濁させ、加温して(45〜60℃)、反復抽出させ、その後、さらに室温または4℃まで冷却させる。この抽出法により細胞から69Kタンパク質が放出される。69Kタンパク質を含む物質を沈澱させて集めて、それをアフィゲルブルー(Afffi-gel Blue)のカラム内を通過させる。この69Kタンパク質を0.5M塩酸マグネシウムのような濃度の高い塩類を使用して溶出させる。透析した後、クロマトフォーカシングの支持体を通過させて精製する。
本発明のワクチンは、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、不活化ポリオウイルス(IVP)および、オプションで、ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドのインフルエンザb型の莢膜多糖(capsular polysaccharide)との複合体のようなボルデテラ菌でない菌由来の免疫原性物質も含む。多種類成分のワクチンに含まれるその他の成分としては、ヘモフィルス属菌の外膜タンパク質、B型肝炎表面抗原や流行性耳下腺炎(あたふくかぜ)菌、麻疹菌、風疹菌などの抗原が含まれる。インフルエンザ菌b型由来の硫酸ポリリボース・リビトール(PRP)を分離し、これを誘導してアジピン酸ジヒロラジドが得られるようにし、これを破傷風トキソイドまたはジフテリアトキソイドに共有結合させて、それぞれの複合体であるPRP−TまたはPRP−D複合体を作製することにより、破傷風トキソイドまたはジフテリアトキソイドおよびHib(インフルエンザ菌b型)の莢膜多糖の複合体を含ませてもよい。
選択的実施例の1つでは、本発明は、下記の特性(ここで使用されているμgタンパク質という表示は、精製した濃縮物で実施したキジェダール(Kjedahl)試験結果を基礎にしたもので、タンパク質窒素のμg数として表現されている)を有するワクチンを提供する。これらのワクチンはすべて筋肉内投与が可能である。
調剤の1つは、百日咳ワクチン(CP)とジフテリアトキソイド(DI)と破傷風トキソイド(T)、不活化ポリオウイルス(mIPV)を組み合わせ成分のもので、「CP20/20/5/3DT-mIPV(ハイブリッド)」と呼ぶ。MRC―5細胞内で増殖させたポリオウイルスを「mIPV」と呼び、ベロ細胞内で増殖させたポリオウイルスを「IPVまたはvIPV」と呼んでいる。どちらも不活化したポリオウイルスであり、製剤ではどちらのウイルスも代替的に使用できる。
20μg線状赤血球凝集素(FHA)
5μg線毛凝集原2および3(FIM)
3μgペルタクチン外膜タンパク質(69kDa)
15Lfジフテリアトキソイド
5Lf破傷風トキソイド
40D 抗原ユニット ポリオウイルス1型
8D 抗原ユニット ポリオウイルス2型
32D 抗原ユニット ポリオウイルス3型
1.5mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール(保存剤として)。
別の調剤として、百日咳ワクチン(CP)、ジフテリアトキソイド(D)、破傷風トキソイド(T)、不活化ポリオウイルス(mIPV)の組み合わせたワクチンがあり、これを「CP20/20/5/3DT−mIPV(ハイブリッド)」と呼び、さらに、凍結乾燥させたPRP−Tを液体状に戻す調剤が使用される。その結果、調剤される成分には、0.5ml用量当たり、以下の成分量を含む。
20μg線状赤血球凝集素(FHA)
5μg線毛凝集原2,3(FIM)
3μg外膜タンパク質(69kDa)
15Lfジフテリアトキソイド
5Lf破傷風トキソイド
20μgの破傷風トキソイドと共有結合させた、インフルエンザ菌b型の精製 硫酸ポリリボース・リビトール莢膜多糖(PRP)の10μg
ポリオウイルス1型 40D抗原ユニット
ポリオウイルス2型 8D抗原ユニット
ポリオウイルス3型 32D抗原ユニット
1.5mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール。
さらに別の調剤として、百日咳ワクチン(CP)、ジフテリアトキソイド(D)、破傷風トキソイド(T)不活化ポリオウイルス(mIPV)、PRP−Tを組み合わせたもので、これを「CP20/20/5/3DT-PRP-T-IPV(ハイブリッド)」と呼ぶ。この成分の、ヒトにおける0.5ml用量当たりの成分量は以下の通りである。
20μg線状赤血球凝集素(FHA)
5μg線毛凝集原2,3(FIM)
3μg外膜タンパク質(69kDa)
15Lfジフテリアトキソイド
5Lf破傷風トキソイド
20μgの破傷風トキソイドと共有結合させた、インフルエンザ菌b型の精製硫酸ポリリボース・リビトール莢膜多糖(PRP)の10μg
ポリオウイルス1型 40D抗原ユニット
ポリオウイルス2型 8D抗原ユニット
ポリオウイルス3型 32D抗原ユニット
1.5mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール。
(a)DTPコンポーネント百日咳ワクチン
下記の方法で調製した、百日咳の感染防御のための線毛凝集原の安全性、非反応性、有用性を確認するために、かなりの数のヒト対象における臨床試験が実施された。この試験では、ワクチンに含まれる各抗原に対する免疫応答が得られた(例えば、第3表に示された例)。特別な多価百日咳ワクチンの1つであるCP10/5/5/3DTについて、その百日咳に対するワクチン効果を評価するために、リスクをもっているヒトを対象に、大規模なプラセボ・コントロール、多施設、二重・無作為の臨床試験を実施した。
23日以上の痙攣性の咳があること、または、百日咳菌(B.pertussis)の存在が培養で確認されること、あるいは、ペアとして得た血清において、ELISA検査により、FHAまたはPTに対する100%IgGまたはIgA抗体産生の増加が認められ、ボルデテル菌感染を示す血清学的証拠があること、あるいは、血清学的データが不足している場合には、試験対象の小児が、その試験対象小児の咳の発症前後の28日以内に、咳の発症のあった家庭内において培養により百日咳菌の存在が確認されている患者に接触していること。
(I)吸着ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイド、インフルエンザ菌b型破傷風トキソイド複合ワクチン及び不活性化ポリオウイルスワクチン(ベロ細胞上で増殖)と、百日咳コンポーネントワクチンとの組合せ(CP20/20/5/3DT-PRP-T-IPV)の安全性と免疫原性について、
全細胞百日咳ワクチンの(a)吸着ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイド、及び不活化ポリオワクチンと組み合わせ、または(b)吸着ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイド、及び不活性化ポリオワクチンとの組合せ(吸着DPT−ポリオ;MRC―5細胞上で増殖)を、凍結乾燥したインフルエンザ菌b型破傷風トキソイド複合体ワクチン(PENTA:登録商標)を液体状に戻して復元するために使用して得たワクチンとの組合せ、あるいは、
(c)ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイド吸着インフルエンザ菌b型破傷風トキソイド複合ワクチン、並びにMRC−5細胞上で増殖させたポリオウイルスを不活化させて得たポリオワクチンの百日咳コンポーネントワクチンとの組合せ(CP20/20/5/3DT-mIPV)を、凍結乾燥したインフルエンザb型破傷風トキソイド複合体ワクチン(PRP−T)と個別に与えるか、またはその液状化に使用した場合について、生後2,4,6,18カ月の小児への投与により比較した。
(III)吸着ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドと不活化ポリオワクチン(MRC−5細胞上で増殖)とコンポーネント百日咳ワクチンの組合せ(CP20/20/5/3DT-mIPV)の安全性及び免疫原性を、吸着ジフテリアトキソイドと破傷風トキソイド、不活化ポリオワクチン(MRC−5細胞上で増殖)と全細胞百日咳ワクチンとの組合せにおけるものと、4才〜6才の小児において比較した。
吸着ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドと不活化ポリオワクチン(MCR−5細胞上で増殖)と全細胞百日咳ワクチンとの組合せ(DPT―ポリオ吸着)を、凍結乾燥したインフルエンザb型破傷風トキソイド複合体ワクチン(PENTA:登録商標)を液体状に戻すために使用して得たものと、あるいは
吸着ジフテリアトキソイド及び破傷風トキソイドと不活性化ポリオワクチン(MCR−5細胞上で増殖)とコンポーネント百日咳ワクチンとの組合せ(CP20/20/5/3DT-mIPV)を、凍結乾燥したインフルエンザb型破傷風トキソイド複合体ワクチン(PRP−T)を液体状に戻すために使用して得たものにおける安全性と免疫原性とを、生後18〜19カ月の小児への投与において比較した。
(a)PRP−Tを液体状に戻すためにコンポーネント百日咳ワクチンの1つを使用すること、
(b)コンポーネント百日咳ワクチンとPRP−Tの両方を同時に投与するが、一方は、PRP−Tを投与する部位とは別の部位に投与すること、および
(c)PRP−Tをコンポーネント百日咳ワクチンを接種した後1カ月に投与すること
である。全部の小児に最初の来院時にOPVを投与し、生後2,4,6カ月の時に、同じコンポーネント百日咳ワクチンを投与した。すべての小児は、以前において、これらの2種類のワクチンに関する大規模な安全試験に参加していた。
このように、ワクチンとして使用できる免疫原性成分を、以下に記載するような免疫原から調製してもよい。ワクチンは免疫応答を誘発し、投与した対象は抗体を産生する。ワクチンを含む免疫成分を、液体成分またはエマルジョンのような注射可能な状態に調製してもよい。免疫原を、免疫原と混和可能で、薬学的に受け入れ可能な医薬品添加物と混合してもよい。そのような医薬品添加物としては、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、およびそのこれらの組み合わせ物質がある。免疫成分およびワクチンには、さらに湿潤剤、乳化剤、pH緩衝剤のような補助物質、または効果を増強するためのアジュバントを含めてもよい。免疫原性成分およびワクチンを、非経口で、あるいは、皮下による注射、筋肉内投与してもよい。免疫原性調剤およびワクチンをそのワクチンの形態に合わせて投与し、しかも、治療上効果があり、免疫原性があり、免疫防御できる量を使用する。
(1)毒性がないこと。
(2)長期間持続する免疫応答を誘導する作用があること。
(3)製造が簡単であること、長期の貯蔵でも安定していること。
(4)種々の経路で投与された抗原に対してCMIとHIRを誘起すること。
(5)他のアジュバントとの相乗効果があること。
(6)抗原提示細胞(APC)の多数と選択的に相互作用すること。
(7)適当なTH1またはTH2細胞特異的免疫応答を特に誘導する作用があること。
(8)抗原に対する適当な抗体イソタイプレベル(例えば、IgA)を選択的に増加する作用があること。
例1
この例は、百日咳菌(Bordetella pertussis)の培養について記載している。
(マスター・シード)
百日咳菌のマスターシード培養菌は、凍結乾燥ロットとして2℃~8℃の温度で保管した。
(ワーキング・シード(使用原料菌))
凍結乾燥した培養菌を、ホーニブルーク(Hornibrook)培地で復元し、ボーデットジンゴー(Bordet-Gengou)寒天(BGA)プレートに植菌した。ホーニブルーク(Hornibrook)培地の成分は以下の通りである。
(成分:1リットル当たり)
カゼイン加水分解物(チャーコール処理済み):10.0g
ニコチン酸:0.001g
塩化カルシウム:0.002g
塩化ナトリウム:5.0g
塩化マグネシウム・ヘキサヒドレート:0.025g
塩化カリウム:0.200g
二塩基リン酸カリウム:0.250g
デンプン:1.0g
蒸留水:1リットル以内
1%炭酸ナトリウム溶液を使用して、pHを6.9±0.1に調製する。培地をチューブの中で懸濁させ、20分間、加圧蒸気滅菌して、その後、20分間、121℃〜124℃でオートクレーブにかけた。菌を2回継代培養した。最初は、BGAプレート上で行い、次にコンポーネント百日咳寒天(CPA)で実施した。ここで使用したコンポーネント百日咳寒天(CPA)の成分は以下の通りである。
NaCl:2.5 g/L
KH2PO4:0.5 g/L
KCl:0.2 g/L
MgCl2(H2O)6:0.1 g/L
Tris塩基:1.5g/L
Casamino酸:10.5g/L
NaHglutamate:10.0 g/L
濃塩酸:pH7.2まで
寒天:15.0g/L
成長因子(CPGF):10.0ml/L。
L−システイン HCl:4.0 g/L
ナイアシン:0.4 g/L
アスコルビン酸:40.0 g/L
グルタチオン(還元):15.0 g/L
Fe2SO4(H2O)7:1.0 g/L
ジメチルーβ―シクロデキストリン:100 g/L
CaCl2(H2O)2:2.0 g/L
最終培養物を、百日咳菌懸濁緩衝液(CPSB)に懸濁させ、2〜4mlに分液し、−60℃〜−85℃で凍結保存した。百日咳菌懸濁緩衝液(PSSB)の成分は以下の通りである。
Casamino酸:10.0 g/L
Tris塩基:1.5 g/L
無水グリセロール:100 mL/L
濃塩酸:pH7.2まで
これらのグリセロール懸濁液は、ワーキング・シード(使用菌)の調製のための出発材料を提供する。
コンポーネント百日咳寒天ラックスボトル(Roux bottle)の中で、使用菌の増殖を4〜7日間、34℃〜38℃で実施した。この培養の後、コンポーネント百日咳培養液(CPB)を使用して、細胞を寒天から洗い流した。試料をグラム染色して、その培養した菌の純度と不透明度について観察を行った。細胞を、CPBが入った4リットル三角フラスコに移し、振とうしながら、34℃〜38℃で20〜26時間インキュベートした。試料をグラム染色して、培養した菌の純度について点検した。フラスコをプールして、懸濁液を使用して、CPBを含む2個の発酵槽に植菌した(OD6000.1〜0.4での出発容量は10リットル)。最終のOD600が5.0〜10.0になるように増殖させた。試料をグラム染色して培養の純度について試験し、抗原特異的ELISAにより滅菌結果を点検した。
この例では、百日咳菌細胞培養物からの抗原の精製について記載している。
(培養液の作製と細胞濃度)
細菌懸濁液を2個の発酵槽に入れて、34℃〜37℃で35〜50時間培養して菌を増殖させた。発酵槽から試料を取って、培地の無菌性試験を行った。懸濁液を連続流入ディスクスタック遠心機で遠心して(12,000×g)細胞を培養液から分離した。細胞を集めて線毛成分の抽出を行った。上清溶液を、≦0.22μmの膜フィルタを通過させた。濾過された溶液を、10〜30kDa分子量限界(NMWL:NOMINAL MOLECULAR WEIGHT LIMIT)膜を使用した限外濾過により濃縮した。濃縮物を貯蔵した後、百日咳毒素(PT)、線状赤血球凝集素(FHA)、69kDa(ペルタクチン)成分の分離精製を行った。
(培養液成分の分離)
培養液成分(69kDa、PT、FHA)を、パーライトクロマトグラフィと選択的溶出ステップにより分離して精製した。この方法は、実質的には、EP特許番号336,736および上記で述べたPCT番号WO91/15505に記載されている。この特別な精製法は以下の通りである。
(百日咳毒素(PT))
パーライトカラムを、50mMトリス(Tris)、50mMトリス/0.5%トリトン(Triton)X−100および50mMトリス緩衝液で洗浄した。PT分画を、50mMトリス/0.12NaCl緩衝液を使用して、パーライトカラムから溶出させた。パーライトクロマトグラフィから取ったPT分画を、ヒドロキシルアパタイト・カラムに移して、30mMリン酸カリウム緩衝液を使用して洗浄した。PTを、75mMリン酸カリウム/225mMNaCl緩衝液を使用して溶出させた。カラムを200mMリン酸カリウム/0.6MNaClを使用して洗浄し、FHA分画を取り出し、それを廃棄した。グリセロールを50%の濃度になるまで精製PTに添加し、その混合物が、無毒化されるまで、2℃〜8℃で1週間以内の期間で貯蔵した。
(線状赤血球凝集素(FHA))
FHA分画を、50mMトリス/0.6M・NaClを使用して、パーライトカラムから溶出させた。線状赤血球凝集素をヒドロキシアパタイトを使用したクラマトグラフィにより精製した。パーライトカラムから得たFHA分画をヒドロキシアパタイトカラムに移し、0.5%トリトンX−100を含んだ30mMリン酸カリウムおよびその後30mM・リン酸カリウム緩衝液で洗浄した。PT分画を85mMリン酸カリウム緩衝液を使用して溶出させ、廃棄した。FHA分画を200mM・リン酸カリウム/0.6NaClを使用して溶出させ、無毒化されるまで、2℃〜8℃で1週間以内の期間で貯蔵した。
(69kDa(ペルタクチン))
培養液濃縮液を、注射(WFI)ができる状態にするために、水で希釈して、伝達率が3〜4mS/cmとなるようにし、さらに、パーライトカラムに、1mlのパーライト当たり0.5〜3.5mgのタンパク質が負荷されるように搭載させた。素通し流出分(69kDa成分分画)を、10〜30kDa・NMWL膜を使用した限外濾過により濃縮した。その流出分濃縮液に、その濃度が35%±3%になるように硫酸アルミニウムを添加し、その結果できた混合物を、2℃〜8℃で4±2日間で貯蔵するか、またはすぐに遠心分離にかけた(7,000xg)。余分な上清を注いで、さらに遠心分離(7,000xg)により沈殿物を集めた。69kDaペレットを、-20℃〜-30℃で凍結保存するか、またはトリスまたはリン酸緩衝液で溶解させるか、あるいは、すぐに使用した。
凝集原を、培養液の分離後に得られた細胞ペーストより精製した。細胞ペーストを10mMリン酸カリウム、150mMNaCl、4M尿素を含む緩衝液内で0.05容量の細胞分画に希釈し、30分間混合した。細胞融解液を遠心分離(12,000xg)により清澄化し、その後、濃縮を行い、100〜300kDa・NMWLの膜を使用して10mMリン酸カリウム/150mM・NaCl/0.1%トリトンX−100で濾過した。
この例は、精製した百日咳抗原PTとFHAのトキソイド化について記載している。
この例は精製した百日咳抗原の吸着について記載したものである。
この例は、ジフテリアトキソイドと破傷風トキソイドとを組み合わせたコンポーネント百日咳ワクチンの製剤を記載することである。上記の例で記載したような百日咳抗原を、以下に述べるような数種類のコンポーネント百日咳(CP)ワクチンを提供するために、ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドを一緒に調製した。
(ジフテリアトキソイドの調製)
(I)使用菌
ジフテリア菌を凍結乾燥した状態で保管した。復元菌のロットをロッフェラー・スロープ(Loeffler slope)により、温度35℃±2℃で18〜24時間増殖させ、ジフテリア培地の入ったフラスコに移した。培養した菌について、純粋であるかどうか、Lf価について検査した。残りの菌を発酵槽に移して増殖させた。
(II)ジフテリア菌の増殖
培養菌を35℃±2℃でインキュベートし、発酵槽で撹拌した。硫酸第一鉄、塩化カルシウム、リン酸溶液の予め決めておいた量を培養菌に添加した。各溶液(リン酸、硫酸第一鉄、塩化カルシム)の実際の量を実験的に各培地ごとに測定した。選択されたレベルは、最高のLf価とになるものであった。増殖周期(30〜50時間)の最後において、その培養菌をサンプリングして、その純度、Lf価を検査した。
(III)ジフテリア毒素の収集
一個の発酵槽または2・3の発酵槽から取り出した、トルエンで処理した培養菌を一個の大きなタンクにプールした。およそ0.12%の重炭酸ナトリウム、0.25%チャーコール、23%硫酸アンモニウムを添加して、pHを検査した。
透析の後すぐに無毒にされる。無毒化のために、毒素を、最終溶液に以下のものを含むように希釈する。
a)濃度が1000±10%Lf/mlのジフテリア毒素
b)0.5%重炭酸ナトリウム
c)0.5%ホルマリン
d)0.9%w/vL−リシン・モノ塩酸塩
この溶液を生理食塩水を加えて容量を増やし、pHを7.6±0.1%に調整した。
(V)精製したトキソイドの濃縮
トキソイドをプールし、その後、限外濾過により濃縮させ、それを集めて適当な容器に入れた。サンプリングをして、Lf価と純度を試験した。保存剤(2−フェノキシエタノール)を、最終濃度が0.375%になるように添加し、pHを6.6〜7.6になるように調整した。
培地増殖させた破傷風菌(Clostridium tetani)から破傷風トキソイド(T)を調製した。破傷風トキソイドの作製プロセスを5ステップに分けることができる。使用菌の保管維持、ジフテリア菌の増殖、ジフテリア毒素の収集、ジフテリア毒素の無毒化、ジフテリアトキソイドの精製の5ステップである。
(I)使用菌
破傷風毒素のトキソイドへの変換に使用する破傷風菌を菌ロットの中で凍結乾燥した状態で保存した。この菌をチオグリレート培地に植菌して、35±2℃で約24時間増殖させた。サンプリングをして、培養物の純度を試験した。
(II)破傷風菌の増殖
破傷風培地を発酵槽に移し、熱処理をした後、冷却した。発酵槽に菌を入れ、その培養物を4〜9日、34±2℃で増殖させた。サンプルを採取して培養の純度およびLf価を検査した。
(III)破傷風菌の収集
毒素をセルロース珪藻土パッドを使用した濾過により分離した後、清澄化した毒素を膜フィルタを使用して滅菌した。サンプルを採取して、Lf価の測定と滅菌性試験を行った。毒素を30,000ダルトンのポアサイズフィルタを使用した限外濾過により濃縮した。
(IV)破傷風毒素の無毒化
毒素のサンプルを採取して、無毒化の前に、そのLf価を測定検査した。濃縮した毒素(475〜525Lf/ml)を、0.5%w/v重炭酸ナトリウム、0.3%w/vホルマリン、0.9%w/v L−リシンモノ塩酸塩を添加し、生理食塩水により容量を増加させて無毒化した。pHを7.5±0.1に調整し、その混合物を20〜30日間、37℃でインキュベートした。サンプリングをして、滅菌と毒性について試験をした。
(V)トキソイドの精製
濃縮したトキソイドを前置フイルタおよびその後0.2μm膜フィルタにより滅菌した。サンプリングをして、滅菌性とLf価について検査した。硫酸アンモニウムの最適濃度は、トキソイドの試料から決定された「S」カーブの分画化を基礎にしている。最初の濃縮液をトキソイド(1900〜2100 Lf/mlに希釈)に添加した。その混合物を少なくとも一時間20℃〜25℃で放置し、収集した上清と高分子量の分画を含む沈澱物を廃棄した。硫酸アンモニウムの第2の濃縮液を第2分画が低分子量の不純物を除去するように上清に添加した。混合物を少なくとも2時間20℃〜25℃で放置し、さらに、最大3日間2℃〜8℃で放置した。精製トキソイドである沈殿物を遠心分離と濾過で収集した。
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドと組み合わせたコンポーネント百日咳ワクチンを含んだ一方の調剤をCP10/5/5/3DT(時には、クラシック:CLASSICと呼ぶ)。CP10/5/5/3DTのヒトに対する0.5mlの一回投与量には、以下の成分が含まれるように調剤する。
5μg 線状赤血球凝集素(FHA)
5μg 線毛凝集原2,3(FIMB)
3μg 69kDa外膜タンパク質
15 Lf ジフテリアトキソイド
5 Lf 破傷風トキソイド
1.5 mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール(保存剤)
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドと組み合わせたコンポーネント百日咳ワクチンを含んだもうひとつの調剤をCP10/5/5DT(時には、ハイブリッドHYBRIDと呼ぶ)。このCP10/5/5DTのヒトに対する0.5mlの一回投与量には、以下の成分が含まれるように調剤する。
5μg 線状赤血球凝集素(FHA)
5μg 線毛凝集原2,3(FIMB)
15 Lf ジフテリアトキソイド
5 Lf 破傷風トキソイド
1.5 mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール(保存剤)
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドと組み合わせたコンポーネント百日咳ワクチンを含んださらに別のもうひとつの調剤をCP20/20/5/3DTと呼ぶ。このCP20/20/5/3DTのヒトに対する0.5mlの一回投与量には、以下の成分が含まれるように調剤する。
20μg 線状赤血球凝集素(FHA)
5μg 線毛凝集原2,3(FIMB)
3μg 69kDa外膜タンパク質
15 Lf ジフテリアトキソイド
5 Lf 破傷風トキソイド
1.5 mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール(保存剤)
ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドと組み合わせたコンポーネント百日咳ワクチンを含んださらに別のもうひとつの調剤をCP20/20/10/6DTと呼ぶ。このCP20/20/10/6DTのヒトに対する0.5mlの一回投与量には、以下の成分が含まれるように調剤する。
10μg 線状赤血球凝集素(FHA)
10μg 線毛凝集原2,3(FIMB)
6μg 69kDa外膜タンパク質
15 Lf ジフテリアトキソイド
5 Lf 破傷風トキソイド
1.5 mg リン酸アルミニウム
0.6% 2−フェノキシエタノール(保存剤)
例6
この例は、コンポーネント無細胞百日咳ワクチンの臨床評価を記載したものである。
(a)成人における試験
成人および生後16〜20カ月の小児における試験では、線毛凝集原を含む5多成分ワクチンが安全で免疫原性であることを示している(表2)。
フェーズII
CP10/5/5/3DTを使用した試験が、カナダのカルガリー、アルバータ、ブリティッシュコロンビアにおいて実施された。この試験において、生後2,4,6カ月の432例の幼児にコンポーネント百日咳ワクチンまたは全細胞性対照ワクチンDPTが投与された。対象幼児はこのCP10/5/5/3DTによく耐えた。投与後において、全細胞性ワクチンを投与した場合よりも、コンポーネントワクチンを投与した例のほうが局所性反応が少なかった。コンポーネント百日咳ワクチンを接種した場合には、全抗原に対して有意な抗体応答が認められた。全細胞性ワクチンのレシピエントは、線毛凝集原、DおよびTに対して顕著な抗体応答を示した。投与後7カ月に、コンポーネントワクチンのレシピエントの82%〜89%、全細胞ワクチンのレシピエントの92%において、線毛凝集原に対する抗体価が4倍またはそれ以上の上昇となった。これとは対照的に、コンポーネントワクチンを投与した対象では、その75〜78%においてFHA抗体応答を示したが、全細胞ワクチンの投与対象では、その31%において抗体応答を示しただけであった。コンポーネントワクチンのレシピエントの90〜93%において、抗―69kDa抗体が4倍の増加となったが、全細胞ワクチンのレシピエントにおいては75%にすぎなかった。エンザイムイムノアッセイの検査の結果、コンポーネントワクチンのレシピエントの40〜49%において、PTに対する抗体が4倍に上昇したが、全細胞ワクチンのレシピエントにおいては32%であった。CHO中和試験の結果、コンポーネントワクチンのレシピエントの55〜69%において、PT抗体の4倍の上昇があったが、全細胞ワクチンのレシピエントでは6%であった(表2)。
フェーズIIB
無作為盲検を実施して、CP20/20/5/3DTおよびCP10/10/5/3DTの評価を行った。対象は、生後2,4,6カ月の100例の幼児であり、対照は、D15PDとし、ジフテリア含有量が15Lfの場合と25Lfの場合について比較した。この含有量の2種類のワクチン間には副作用の発生率に差異はなかった。両方とも、対照である全細胞性ワクチンに較べて有意に反応性は低いものであった。エンザイムイムノアッセイ検査およびCHO中和試験の結果、抗原の含有量を増加したCP20/20/5/3DTのレシピエントにおいて、PTおよびFHAに対する高い抗体価が達成された。接種後7カ月目において、抗−FHA幾何平均抗体価は、CP20/20/5/3DPのレシピエントにおいて95.0、CP10/10/5/3DTのレシピエントにおいて45.2、D15PDのレシピエントにおいてわずかに8.9のみであった。抗―PT抗体価に関しては、それぞれイムノアッセイ検査による結果では133.3、58.4及び10.4で、中和試験では82.4、32.7及び4.0であった。
(米国国立アレルギー感染症研究所、フェーズII、比較試験)
米国において、米国国立アレルギー感染症研究所(NIAID)の後援により、無細胞性百日咳ワクチンの大規模な有効性治検の予備段階としての、フェーズII試験が実施された。本発明にかかる、吸着させたジフテリアトキソイドと破傷風トキソイドを組み合わせたコンポーネント百日咳ワクチン(CP10/5/5/3DT)が、別の12種類の無細胞性ワクチンと2種類の全細胞性ワクチンと一緒に使用された。
米国でのNIAIDフェーズII比較試験に続いて実施された多施設コントロール、二重無作為プラセボコントロール有効性治験では、2成分無細胞ワクチンと5成分無細胞ワクチンが使用された。百日咳の発症率の高いスエーデンにおいて、臨床治験が実施された。使用された2成分ワクチンには、グリセルアルデヒドとホルマリンにより不活化させたPT(25μg)、ホルマリン処理したFHA(25μg)、ジフテリアトキソイド17Lf、破傷風トキソイド10Lfが含まれていた。この5成分百日咳ワクチンはCP10/5/5/3DTワクチンであった。
この例は、インフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)の莢膜多糖を含む組み合わせ多価ワクチンの調剤と免疫原性について記載している。
(a)PRP−T成分の調剤
インフルエンザ菌由来の莢膜多糖(PRP)を精製し、下記の方法により、破傷風トキソイドと結合させた。インフルエンザ菌の使用菌ロットの凍結乾燥したアンプルから、連続3回の前培養を行った。最初の前培養は個体培地で行った。アンプルをチャーコール寒天と煮沸処理した血液(80℃で15分間加熱した10%の馬血液)中のシャーレに接種して、CO2存在下で、36℃~37℃で20±4時間インキュベートした。第2の前培養は、液体培地において37℃で8時間実施した。液体培地における1リットル当たりの成分は以下の通りであった。
1.Casamino酸 Difco:10g
リン酸モノナトリウム 2H2O:2.03g
リン酸ジナトリウム 12H2O:31.14g
乳酸ナトリム(60%溶液):1.5ml
L−システイン:0.07g
L−トリプトファン:0.02g
CaCl2・2H2O:0.02g
(NH4)2SO4:1 g
MgSO4・7H2O:0.4 g
ダウコーニング社・消泡剤:M.S.A
パラフィンオイル中に25%:0.15ml
2.ヘミン+デキストロースの限外濾過物(デキストロース20g:ヘミン1mg)。
3.酵母抽出物・Difco:5g
(フィルタ滅菌)
第3回目の前培養を液体培地で、37℃で4時間実施した。第3回目の前培養を実施して発酵槽に接種し、培養を37℃で14時間撹拌しながら維持した。培養物を冷却タンク内で収集した。10ml/リットルの濃度にホルマリンを添加した。培養物をゆっくり撹拌しながら、+4℃で2〜24時間撹拌して、その後、遠心分離を行った。ホルマリンの添加の目的は、細菌を完全には不活化するためのものではなく、増殖を抑止し、代謝を阻止するためのものであった。この添加により、細胞内成分による汚染を伴う細胞溶解を減少させた。この固定のための継続期間は2〜24時間であり、遠心分離にかける前に、この培養物を1夜放置する。多糖類を含む上清を収集して、細胞ペレットを廃棄した。精製は、フェノール精製の場合を除いて、一般的には、冷室か、または、製品と薬剤の温度が+10℃またはそれ以下で実施した。培養物の濃縮の後、その上清は濃縮した。濃縮物からの莢膜多糖を、セントリイミド(Centrimide)を添加することにより、その最終濃度が5%(w/v)になるように沈澱させた。セントリイミドは、濃縮液(SNF)からのPSを沈澱させた。タンパク質、核酸、リポ多糖(LPS)も共沈澱させた。沈澱物を、SNFに他の汚染物とタンパク質を残す遠心分離により収集した。この遠心分離により収集したペレットを、≦−20℃で保存した。そのペレットを0.3MNaCl溶液内で再縣濁して、その縣濁液を再度遠心分離した。NaClは、選択的に多糖セントリイミド複合体を溶解した。その汚染物(核酸、LPS、タンパク質)をプロセス中で解離させた。事前に冷却した無水エタノールを、最終濃度が60%になるように、上清に添加した。この結果発生した沈澱物を遠心分離により収集し、冷却した無水エタノールで洗浄した。沈澱物を真空下で温度0〜4℃で乾燥して、中間産物を得た。酢酸ナトリム中でフェノールを使用し、室温で、この中間産物を溶解した。連続遠心分離により、液相を収集した。フェノール抽出と遠心分離を数回繰り返して、液体相を透析し濾過した。濾過溶液からの莢膜多糖を、0.3M・NaClの存在下で、事前に冷却したエタノールを最終濃度が60%になるように添加することにより、沈殿させた。沈澱物を遠心分離で収集して、事前に冷却した無水エタノール、アセトン、エタノールで洗浄し、真空下4℃で乾燥させた。乾燥した沈澱物を低湿気下で微粉末に粉砕した。この沈澱物が精製したインフルエンザ菌b型の多糖を構成する。
式(蒸留水1リットル当たりのグラム数)
ペプトン:10
肉抽出物:3
グルコース:2
塩化ナトリウム:5
「アンドレード」指示器
(5%フクシン酸):10ml
白大理石:1個
脳:1片
使用直前に用意された培地をチューブに充填し、120℃で20分間滅菌した。
ポリ多糖:濃度約200μg/ml
トリス−HCl緩衝10mM(pH7.0±0.5)
この溶液をその後無菌的に、0.2μフィルタを使用して濾過し、-40℃で貯蔵した。
(b)調剤
多価ワクチン(APDT)である2つの調剤を試験した。第1のワクチン(APDT―低)は、0.5ml用量当たり、10μgの百日咳トキソイド(PT)、5μgの線状赤血球凝集素(FHA)、5μgの線毛2、3μgの69Kタンパク質(69k)を含む。第2の調剤(APDT―高)には、上記のワクチンの2倍の量のPT(20μg)と、同量のFIMと69K(ハイブリッド)が含まれるようにした。両方の調剤には、15Lfのジフテリアトキソイド、5Lfの破傷風トキソイド、1.5mgのリン酸アルミニウム(アジュバント)、0.6%2−フェノキシエタノール(保存剤)が含まれる。上記と同じ方法で、Hib破傷風トキソイドワクチン(PRPT)がコノートラボラトリーズ社(Connaught Laboratories Inc.スイフトウオータ、米国)により生産されている。
(治験対象)
以前の臨床試験において、APDT(低)またはPRP―Tのいずれかの3回用量を、別々の注射により、生後2,4,6カ月の時に、投与された健常な、生後17〜21カ月の小児が治験に組み入れられた。書面によるインフォームドコンセントへの同意の後、これらの小児を、コンピュータベースの無作為バランスリストを基に、APDTワクチンが投与された後1カ月目、PRT−Tを、同じ日に、APDTとは別々に注射される群と、この両方を一緒に一回の注射(APDTにより凍結乾燥したPRP−Tを液体状に戻した注射液)により投与される群に割り当てた。各小児へのAPDT調剤(高または低)は、最初の3回投与されたものと同じものであった(割り当て率6:1、APDT(高):APDT(低))。ワクチンを、25mm針を使用して、腕の三角筋または、大腿が注射に不適切である時には、大腿の外側広筋の筋肉内投与した。PRP―Tに第2の注射が必要である時には、反対側の足に注射を行った。
臨床および検査モニター
試験対象者について、免疫のすぐ後に、局所的および系統的(全身的)の副作用がないかどうかを、両親が免疫後72時間モニターした。24時間目および72時間目に電話インタビューの形でデータを収集した。体温を少なくとも1日に1回または両親が小児に熱があると判断した場合に測定した。痛みと系統的(全身的)反応(被刺激性、活動減退、食欲不振)については、事前に設定された基準に従って、軽度、中等症、重度にランク付けを行い、両親は、この基準により症状の程度を、すでにある例を基に判定して選択した。測定された局所反応については、その大きさや小児が泣く時間の長さなどによりランク付けを行った。
統計分析
副作用を臨床的な有意性によりグループ分けをして分析した。副作用の発生率を、ワクチン調剤を層別化変数として使用して、その相対リスクに関するマンテル・ハンツゼル(Mantel-Haenszel)予測値を基に比較検討した。RRの点予測値および95%CI(信頼区間)を各症例で推定した。1を含まないCIは統計的に有意である。抗体価を計算するために、幾何平均抗体価および95%CIを各ワクチン抗原を接種する前および接種した後に計算した。平均ログ(log)抗体価を3因子分散分析により比較した。各群における事前に特定したレベルを達成した対象の割合をロジスティック回帰分析により比較した。多重比較での調整は行わなかった。
副作用
APDT(高)とAPDT(低)との間における副作用の発生率に差異はなかった。一回の来院時に接種が別々になされたか、組み合わされて単回で注射されたかどうかに関係なく、この発生率は類似していた。
抗体反応
APDT(高)またはAPDT(低)を、最初の3回の用量で投与した小児に免疫をする前における、FHA以外のすべての抗原に対する抗体レベルは類似していた。その4倍量のFHAの量のAPDT(高)ワクチンを投与した小児では、APDT(低)で免疫した小児に較べて、有意に高い(P=0.0001)FHA抗体が認められた。免疫後において、APDT(高)は、APDT(低)よりも高い抗体価を誘導した(P=0.0001)。対照的なこととして、CHO中和またはEIAにより測定された免疫前抗−PT抗体は、2群においては類似していた。逆説的なことであるが、抗原量が2倍であったにもかかわらず、抗―PT抗体価は、APDT(低)の免疫後に較べて、APDT(高)の免疫後のほうが低かった(P=0.038)。同様に、ワクチン製剤中の線毛抗原の量が同量であったにもかかわらず、抗―FIM抗体と凝集素後免疫は、APDT(低)を投与した群において高かった(それぞれP=0.01およびP=0.04)。免疫前においては、APDTと組み合わせたPRP―Tを、無作為に、同じ日に、あるいは、別々の日に、一回の投与により、あるいは、別々の注射による投与により接種した群間には抗―百日咳抗体における差異は少なかった(表10)。APDT(高)またはAPDT(低)のレシピエントに関してのデータが個別に提示されたが、APDT(低)を投与した小児が少数であるので、これらの結果についてはこれ以上は記載しない。CHO中和分析の結果では、無作為に、同じ日にワクチンを別々に注射した群の抗―PT抗体は、2つのワクチンを別々の日に投与した群のそれに較べて、高かった(6.14:4.80ユニット、p<0.05)。この群(176ユニット)における免疫後の抗体レベルは、組み合わせたワクチンを一回に投与された群(171ユニット、p<0.01)で同様な高いレベルが認められたけれども、別々の日に、別々の注射により投与された群(122ユニット、p<0.01)に較べれば高かった。抗体応答は、組み合わせたワクチンを一回で投与された小児よりも、同じ日に2つの注射で投与された小児において高く、さらに、同じ日に2つの注射により免疫された小児のほうが、別の日に免疫された小児(243:190ユニット;p<0.001)、および別の日に2つの注射で免疫された小児に較べて、高かったけれども、抗―69K免疫後の抗体応答については、この群において認められた。
この例は、不活性ポリオワクチンを含む多価組み合わせワクチンの製剤と免疫原性を記載したものである。
(a)不活化ポリオウイルスの調製
(i)MRC―5細胞内での増殖
不活化ポリオウイルス(MRC―5細胞内で増殖)を下記のように調製した。細胞をミドリザル(Ceropithacus aethiops)の肝臓細胞から採取した。
重炭酸ナトリウム:0.15%
成牛血清:5.00%〜7.00%
硫酸ネオマイシン(活性μg):10IU/ml
ポリミキシンB:200IU/ml
CMRL培地の成分は以下の通りであった。
乾燥粉末
(成分アミノ酸:単位mg/l)
L−アラニン:25.0
L−アルギニン(遊離塩基):58.0
L−アスパラギン酸:30.0
L−システイン・HCl:0.1
L−シスチン・ジナトリウム:24.0
L−グルタミン酸・H2O:67.0
L−グルタミン:200.0
L−グリシン:50.0
L−ヒスチジン(遊離塩基):16.2
L−ヒドロキシプロリン:10.0
L−イソロイシン:20.0
L−ロイシン:60.0
L−リシン・HCl:70.0
L−メチオニン:15.0
L−フェニルアラニン:25.0
L−プロリン:40.0
L−セリン:25.0
L−トレオニン:30.0
L−トリプトファン:10.0
L−チロシン:40.0
L−バリン:25.0
ビタミン類
P−アミノ安息香酸:0.05
アスコルビン酸:0.05
d−ビオチン:1.00
パントテン酸カルシウム:1.00
コリン二水素クエン酸:2.12
葉酸:1.00
グルタチオン:0.05
i―イノシトール:2.00
ニコチンアミド:1.00
ピリドキサール・HCl:0.10
リボフラビン−5−リン酸:0.10
チアミン・HCl:1.00
有効成分:mg/l
塩化ナトリム:8000.0
塩化カリウム:400.0
塩化カルシウム(無水):140.0
硫酸マグネシウム・7H2O:200.0
リン酸ナトリウム、無水二塩基:180.0
リン酸ナトリウム(無塩基):70.0
D−グルコース(無水):1000.0
フェノールレッド:20.0
10.852gm歩留まり・1リットル培地CMRL1969。
ポリミキシンB:200ユニット/ml
TES緩衝溶液:5000.0ml
重炭酸ナトリウム:750.0g
ウシ血清:30.0L
新鮮な蒸留水を加えて、500Lまで容量を増やし、均一に混合するまで撹拌した。細胞増殖をモニターし、増殖が対数期になると、使用した増殖培地を廃棄し、ウイルス増殖培地で取り換える。ウイルス増殖培地の成分は以下の通りであった。
重炭酸ナトリウム:0.26%
トゥエーン80(Tween 80):20ppm
硫酸ネオマイシン(活性μg):10IU/ml
ポリミキシンB:200IU/ml
L−グルタミン:100mg/l
L−アルギニン:29mg/l
L−ロイシン:30mg/l
L−イソロイシン:10mg/l
L−メチオニン:7.5mg/l
L−セリン:12.5mg/l
L−トレオニン:15mg/l
L−システイン:10mg/l
コリン二水素クエン酸:107mg/l
CMRL199培地の成分は以下の通りである。
乾燥粉末
(成分:単位mg/l)
L−アラニン:25.0
L−アルギニン(遊離塩基):58.0
L−アスパラギン酸::30.0
L−システイン・HCl・H2O:0.1
L−シスチン・ジナトリウム:24.0
L−グルタミン酸H2O:67.0
L−グルタミン:100.0
グリシン:50.0
L−ヒスチジン(遊離塩基):16.2
L−ヒドロキシプロリン:10.0
L−イソロイシン:20.0
L−ロイシン:60.0
L−リシン:70.0
L−メチオニン:15.0
L−フェニルアラニン:25.0
L−プロリン:40.0
L−セリン:25.0
L−トレオニン:30.0
L−トリプトファン:10.0
L−チロシン:40.0
L−バリン:25.0
p−アミノ安息香酸:0.050
アスコルビン酸:0.050
d−ビオチン:0.010
パントテン酸カルシウム:0.010
コリン二水素クエン酸:1.060
葉酸:0.010
グルタチオン:0.050
i―イノシトール:0.050
メナジオン:0.010
ニコチンアミド(ナイアシンアミド):0.025
ニコチン酸(ナイアシン):0.025
ピリドキサール・HCl:0.025
ピリドキシン・HCl:0.025
リボフラビンー5−リン酸:0.010
チアミンHCL:0.010
酢酸ビタミンA:0.100
ビタミンD(カルシフェロール):0.100
ビタミンE(トコフェロール・リン酸):0.010
硫酸アデニン:10.000
アデノシン三リン酸:1.000
アデノシンー5−リン酸:0.200
デオキシー2−リボース:0.500
d−リボース:0.500
コレストロール:0.200
グアニン:0.300
ヒポキサンチン:0.300
培養物を適当なシード・ウイルスで感染させた(感染多重度)。感染は36±1℃で起こるようにした。ウイルスのC・P・Eが完全になった時に培養物を2~15℃に冷やした。
収集したウイルス分画を濃縮し、リン酸含有を減らすために、ハンクス特別培地を使用して透析した。ハンクス特別培地の成分は以下の通りであった。
(アミノ酸:単位mg/l)
D、L―アラニン:25.00
L−アルギニン・HCl:58.00
D、L−アスパラギン酸:30.00
L−システイン・HCl・H2O:0.10
L−シスチン・2HCl:26.00
D、L−グルタミン酸:67.00
L−グルタミン:100.00
グリシン:50.00
L−ヒスチジン・HCl・H2O:16.20
L−ヒドロプロリン:10.00
D、L−イソロイシン:20.00
D、L―ロイシン:60.00
L−リシン・HCL:70.00
D,L―メチニオン:15.00
D、L−フェニルアラニン:25.00
L−プロリン:40.00
D、L−セリン:25.00
D、L−トレオニン:30.00
D、L−トリプトファン:10.00
L−チロシン(ジナトリウム塩):40.00
D、L−バリン:25.00
ビタミン
アスコルビン酸:0.050
d−ビオチン:0.010
ビタミンD(カルシフェロル):0.100
D−パントテン酸カルシウム:0.010
塩酸コリン:1.060
葉酸:0.010
i―イノシトール:0.050
(ミネラル塩:単位mg/l)
塩化カルシウム(無水):40.00
硝酸鉄・9H2O:0.10
塩化カリウム:400.00
塩化ナトリウム:8000.00
硫酸マグネシウム・7H2O:200.00
(その他の成分:単位mg/l)
硫酸アデニン:10.000
アデノシン三リン酸(ジナトリム塩):1.000
アデニル酸:0.200
dαリン酸トコフェロール(ナトリウム塩):0.010
コレステロール:0.200
デオキシリボース:0.500
グルコース:1000.000
グルタチオン:0.050
グアニン・HCl:0.300
ヒポキサンチン(ナトリウム塩):0.300
リボース:0.500
酢酸ナトリウム・3H2O:81.500
チミン:0.300
トゥエーン80:20.000
ウラシル:0.300
キサンチン(ナトリム塩):0.300
メナジオン:0.010
ニコチン酸:0.025
ニコチンアミド:0.025
p−アミノ安息香酸:0.050
ピリドサール・HCl:0.025
ピリドキシン・HCl:0.025
リボフラビン−5−リン酸:0.010
チアミンHCl:0.010
ビタミンA(酢酸):0.140。
型I:1750±250DU/ml
型II:1500±250DU/ml
型III:1250±250DU/ml(ハンクス特別培地)
一価プールを37±1℃まで加温し、その後、0.2μの多孔フィルターを使用して濾過をした。
リン酸水素ジナトリウム(Na2HPO4)、0.346g/CCml
リン酸二水素カリウム(KH2PO4)、0.187g/CCml
をTweenとともに使用して、これに対しての透析を最終製剤が均一になるように行った。
型II:8 DU/0.5ml用量
型III:32 DU/0.5ml用量
三価の濃縮液を使用する時まで2〜8℃で保管した。ホルムアルデヒドと2−フェノキシエタノールを加えて混合した。計算により濃度が0.5%になるようにアルブミン(ヒト)を加えた。
(ii)ベロ細胞内での増殖
ベロ(Vero)細胞をアンプルに入れて、選択した細胞継代数になるまで、継代培養した。この細胞をアンプルに入れた状態で、液体窒素で保管した。細胞を、表面にDEAEの基を有するデキストランポリマー(ジエチルアミノエチル)で構成されている直径が約100ミクロンの球形ビーズであるマクロサポートビーズ(これが陽電荷を与える)を使用して増殖させた。
ネオマイシン:ml当たり14ユニット
硫酸ポリミキシンB:ml当たり35ユニット
ベロ細胞を、バイオジェネレータのサイズを順次に大きくしながら、順番に継代培養をした。その後、培地と、培地のリットル当たりの十分な量のマイクロサポートビーズを産業用のバイオジェネレータに入れた。温度を37℃で安定化させた。トリプシン化により収集した細胞を撹拌しながら加えた。連続培養を、撹拌の速度を順番に増加させながら37℃で4〜7日間実施した。通常、培養の最後において、細胞増殖が6〜20倍増加する。ウイルスの増殖に使用された培地は、Earle生理食塩水中の199培地(パーカ)を使用し、0.1%デキストロースで強化した。この培地には、細胞増殖のために培地と同じ濃度で、同じ抗生物質を含むが、子ウシ血清は含んでいない。細胞増殖の第4日目、第7日目に、撹拌している工業的な段階にあるバイオジェネレータを停止させ、タンクの底にビーズを固定させて、古い培地を除去した。血清の入っていない199培地を各バイオジェネレータに入れて撹拌した。その後、この培地を引き出してビーズと細胞を洗浄した。血清の入っていない199培地を、必要な量の使用菌と一緒にバイオジェネレータに移した。ゆっくりと撹拌して、ウイルスを細胞に吸着させた。ウイルスの培養の最後において、撹拌を停止した。ウイルスの縣濁液を取り出して、収集しビーズを濾過した。ウイルスの縣濁液をホモジェナイザー処理した。ポアサイズが0.20mmである有機膜により濾過したウイルスを+4℃で保存した。このウイルスを限外濾過により濃縮した。DEAEデキストラン・スフェロシル・サポートを使用し、0.04Mリン酸緩衝液(pH=7.00)で均衡させた、イオン交換クロマトグラフィにより、ウイルスをさらに精製した。そのウイルスを、さらに、アガロースゲルおよび0.04Mのリン酸(pH=7.00)で緩衝させたセファロシスCL−6Bを含んだゲル濾過クロマトグラフィにより精製した。0.04Mのリン酸緩衝液(pH=7.00)で緩衝させたDEAEデキストラン・スフェロシルを使用したクロマトグラフィにより精製した。最後の精製が実施されるとすぐに、ウイルス縣濁液の量を、リン酸の入っていないM−199培地(pH=7.0)を使用して、必要なレベルに調整し、5mgのEDTA、0.5%グリセリン、トゥエーン80で10回濃縮して、最終濃度を50mg/lとした(不活化培地)。「濃縮ウイルス混合液」は、この混合液から成っており、これを、0.2μmの膜フィルターを使用して濾過した。濃縮したウイルス縣濁液を+4℃で保存した。
・型1では、1500および2000Dユニット
・型2では、800および1000Dユニット
・型3では、1000および1500Dユニット
そして、そのタンパク質の割合が以下の通りである。
・型1では、≦40μg/ml
・型2では、≦70μg/ml
・型3では、≦30μg/ml
調整した精製濃縮ウイルス縣濁液を、不活化を始める前に、0.22μm膜を使用して最長72時間濾過した。このウイルス縣濁液を再度+37℃まで加温した。不活化のために、濃度を1/4000にするために、ホルムアルデヒド溶液を追加した。24,48,72、96時間後に、不活化の状態を確認するために、最初の4日間サンプルを採取した。10mlのサンプリングを実施し、すぐに亜硫酸水素塩ナトリウムを使用してホルムアルデヒドの中和を行った。これを-20℃で保存して滴定を行った。
・型1(Mahoney) 400抗原Dユニット
・型2(MEF-1) 80抗原Dユニット
・型3(Saukett) 320抗原Dユニット
199培地(pH7.2)1ml
混合液を撹拌して、0.22μm多孔膜フィルタで均一濾過を行った。
・型1では、40ユニットのD抗原
・型2では、8ユニットのD抗原
・型3では、32ユニットのD抗原。
(b)調剤
多価ワクチン調剤(APDT)には、0.5ml当たり、5種類百日咳抗原(10μgのPT、5μgのFHM2,5μgのFIM2及び3、3μgの69K)、15Lfのジフテリアトキソイド、5Lfの破傷風トキソイド、1.5mgのリン酸アルミニウム(アジュバント)、0.6%の2−フェノキシエタノール(保存剤)が含まれるようにした(クラシック:CLASSIC)。
(治験対象)
生後8カ月目の時に、DTPの3用量とOPVの2用量またはDTP−IPVの3用量で免疫した健常な17〜19カ月の小児を対象とした。両親または保護者の書面による同意を得た後、コンピュータベースの無作為均衡ブロックリストに従って、対象小児を割り振って、5ワクチンのうちのどれか1つを投与した(表10)。A3DTを含む組み合わせワクチンを25mm針を使用して腕の三角筋または、三角筋の部位が不十分な場合には、大腿の外側広筋に穿刺を行い筋肉内投与した。IPV(0.5ml;mIPVまたはvIPV)を単独で投与する場合には、長さが1/2〜 5/8インチ(12.5〜16mm)の針を使用して、皮下投与をし、ワクチンを含むAPDTは左足肢に投与し、不活化ポリオワクチンを別に投与する場合及び2回目の来院で全部に対してインフルエンザ菌b型複合ワクチンを投与するときには、右足肢を使用した。
臨床試験および検査モニター
免疫をする前、および、免疫をした後28日目に、静脈穿刺または指穿刺により、血液サンプルを採取した。PTに対するIgG抗体をエンザイムイムノアッセイにより、PT―中和抗体をCHO中和法により測定した。IgG抗−FHA、抗―FIM、および抗―69K抗体をエンザイムイムノアッセイにより測定し、抗体価をUS・FDA基準抗血清(#3)を使用して計算した。百日咳凝集原も測定した。ジフテリア抗毒素をマイクロ中和法により、破傷風抗毒素をイムノアッセイにより測定した。抗体ポリオウイルス型1,2,3をウイルス中和法により測定した。抗体価を幾何平均抗体価として表した。試験検出限界値以下の抗体価の血清サンプルには、統計計算のために、低いほうの検出限界値の2分の1を割り当てた。免疫をする前後に、各ワクチン抗原に対する抗体価を算出するために、幾何平均抗体価および95%信頼区間を計算した。平均対数抗体価における増加をプロファイル分析と分散分析により比較した。各群における事前特定のレベルに到達した対象の割合をロジステック回帰分析により比較した。別々に投与されたか、または、組み合わせて投与されたかのいずれかの各ポリオウイルス・ワクチン間、および、mIPVおよびvIPV間、および、組み合わせたIPVワクチンとOPV間の比較を行った。多重比較での調整は実施しなかった。
Claims (12)
- (a)精製した状態の、百日咳トキソイド、線状赤血球凝集素、ペルタクチン及び凝集原、
(b)破傷風トキソイド、
(c)ジフテリアトキソイド、及び
(d)担体分子とインフルエンザ菌(Haemophilus influenzae)b型の莢膜多糖との複合体を含み、
宿主にin vivo投与するワクチンとして調剤された、百日咳菌(Bordetella pertussis)、破傷風菌(Clostridium tetani)、ジフテリア菌(Corynebacterium diphtheriae)及びインフルエンザウイルス(Haemophilus influenzae)の少なくとも1種の感染が原因となる疾病に対する宿主内防御を与える多価免疫原性組成物であって、
該組成物中の各成分が、その免疫原性が該組成物中の他の成分により障害を受けないように調剤化されていることを特徴とする多価免疫原性組成物。 - 前記担体分子が、破傷風トキソイド及びジフテリアトキソイドから選択される請求項1に記載の多価免疫原性組成物。
- 更にアジュバントを含む請求項1または2に記載の多価免疫原性組成物。
- アジュバントが水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムである請求項3に記載の多価免疫原性組成物。
- ヒトへの1回の投与用量に、前記百日咳菌トキソイドが5〜30μg窒素の量で、前記線状赤血球凝集素が5〜30μg窒素の量で、前記ペルタクチンが3〜15μg窒素の量で、前記凝集原が1〜10μg窒素の量でそれぞれ存在する請求項1〜4のいずれかに記載の多価免疫原組成物。
- ヒトへの1回の投与用量に、20μg窒素の前記百日咳菌トキソイド、20μg窒素の前記線状赤血球凝集素、5μg窒素の前記ペルタクチン及び3μg窒素の前記凝集原を含む請求項5に記載の多価免疫原組成物。
- 前記ジフテリアトキソイド(b)が10〜20Lfsの量で、前記破傷風トキソイド(c)が1〜10Lfsの量で存在していいる請求項1〜6のいずれかに記載の多価免疫原性組成物。
- 前記ジフテリアトキソイド(b)が15Lfsの量で、前記破傷風トキソイド(c)が5Lfsの量で存在している請求項7に記載の多価免疫原性組成物。
- 前記複合体(d)が、凍結乾燥状態で供給され、該多価免疫原性組成物の成分によって該多価免疫原性組成物中で復元されたものである請求項1〜8のいずれかに記載の多価免疫原性組成物。
- ヒトへの1回の投与用量に、前記多価免疫原性組成物が、5〜15μgPRPの量で前記複合体を含み、該複合体は15〜35μgの破傷風トキソイドと複合している請求項1〜9のいずれかに記載の多価免疫原性組成物。
- ヒトへの1回の投与用量に、前記多価免疫原性組成物が、10μgPRPの量で前記複合体を含み、該複合体は20μgの破傷風トキソイドと複合している請求項1〜9のいずれかに記載の多価免疫原性組成物。
- 医薬用である請求項1〜11のいずれかの多価免疫原性組成物。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US672,530 | 1991-03-19 | ||
US08/672,530 US6696065B1 (en) | 1995-05-04 | 1996-07-02 | Acellular pertussis vaccines and methods of preparation thereof |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006165354A Division JP2006241171A (ja) | 1996-07-02 | 2006-06-14 | 多価dtpポリオワクチン |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011121981A true JP2011121981A (ja) | 2011-06-23 |
Family
ID=24698948
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50369098A Expired - Lifetime JP3280675B2 (ja) | 1996-07-02 | 1997-07-02 | 多価dtpポリオワクチン |
JP2001246781A Withdrawn JP2002069002A (ja) | 1996-07-02 | 2001-08-15 | 多価dtpポリオワクチン |
JP2006165354A Withdrawn JP2006241171A (ja) | 1996-07-02 | 2006-06-14 | 多価dtpポリオワクチン |
JP2011024221A Pending JP2011121981A (ja) | 1996-07-02 | 2011-02-07 | 多価dtpポリオワクチン |
Family Applications Before (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50369098A Expired - Lifetime JP3280675B2 (ja) | 1996-07-02 | 1997-07-02 | 多価dtpポリオワクチン |
JP2001246781A Withdrawn JP2002069002A (ja) | 1996-07-02 | 2001-08-15 | 多価dtpポリオワクチン |
JP2006165354A Withdrawn JP2006241171A (ja) | 1996-07-02 | 2006-06-14 | 多価dtpポリオワクチン |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP1762246A1 (ja) |
JP (4) | JP3280675B2 (ja) |
CN (2) | CN100408095C (ja) |
AT (1) | ATE339965T1 (ja) |
AU (1) | AU714493B2 (ja) |
BR (2) | BR9710460A (ja) |
CA (1) | CA2259415A1 (ja) |
DE (1) | DE69736709T2 (ja) |
DK (1) | DK0914153T3 (ja) |
ES (1) | ES2271969T3 (ja) |
IL (1) | IL127847A (ja) |
NZ (1) | NZ333989A (ja) |
PL (1) | PL187935B1 (ja) |
PT (1) | PT914153E (ja) |
RO (1) | RO120819B1 (ja) |
RU (1) | RU2194531C2 (ja) |
SI (1) | SI9720050B (ja) |
SK (1) | SK283565B6 (ja) |
TR (1) | TR199802783T2 (ja) |
WO (1) | WO1998000167A1 (ja) |
Families Citing this family (36)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PT1028750E (pt) * | 1997-09-15 | 2006-05-31 | Sanofi Pasteur Msd | Metodo de preparacao de vacinas polivalentes |
EP1004314A1 (fr) * | 1998-11-26 | 2000-05-31 | Pasteur Merieux MSD | Vaccin T.d. Polio rappel pour une population vaccinée ou sensibilisée |
GB0108364D0 (en) * | 2001-04-03 | 2001-05-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine composition |
KR100401423B1 (ko) * | 2001-01-10 | 2003-10-17 | 주식회사 엘지생명과학 | 혼합 백신의 제조 방법 |
KR101130948B1 (ko) | 2002-11-01 | 2012-03-30 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 건조 공정 |
GB0313916D0 (en) | 2003-06-16 | 2003-07-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine composition |
US7901921B2 (en) * | 2004-10-22 | 2011-03-08 | Oncolytics Biotech Inc. | Viral purification methods |
GB0616306D0 (en) * | 2006-08-16 | 2006-09-27 | Novartis Ag | Vaccines |
GB0617602D0 (en) * | 2006-09-07 | 2006-10-18 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
PT2066344E (pt) * | 2006-09-07 | 2011-07-05 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina de combinação de poliovírus inactivado |
ZA200902155B (en) * | 2006-09-29 | 2010-06-30 | Japan Poliomyelitis Res Inst | IPV-DPT vaccine |
WO2009016651A1 (en) * | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Panacea Biotec Limited | Simplified means for obtaining prn from bordetella pertussis |
JP5511660B2 (ja) | 2008-06-04 | 2014-06-04 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | 不活化日本脳炎ウイルス粒子をアジュバントとして使用する方法 |
PE20100365A1 (es) | 2008-10-24 | 2010-05-21 | Panacea Biotec Ltd | Novedosas vacunas de combinacion con tos ferina de celulas enteras y metodo para su elaboracion |
PE20100366A1 (es) * | 2008-10-24 | 2010-05-21 | Panacea Biotec Ltd | Novedosas composiciones de vacuna con tos ferina acelular asi como el metodo para su elaboracion |
US20100330158A1 (en) * | 2009-03-31 | 2010-12-30 | Innopharma, Llc | Protein-assisted drug delivery system for the targeted administration of active agents |
CN103442730B (zh) | 2011-01-05 | 2016-08-17 | 巴拉特生物技术国际有限公司 | 组合七价疫苗 |
LT2670432T (lt) * | 2011-02-04 | 2021-05-25 | Zoetis Services Llc | Imunogeninės bordetalla bronchiseptica kompozicijos |
GB201106225D0 (en) | 2011-04-13 | 2011-05-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Fermentation process |
CN102861330B (zh) * | 2012-06-29 | 2014-10-29 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种Hib多糖与精制破伤风类毒素偶联工艺 |
EP3620172A1 (en) * | 2012-10-12 | 2020-03-11 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines |
CN103007264A (zh) * | 2012-12-14 | 2013-04-03 | 北京民海生物科技有限公司 | b型流感嗜血杆菌结合疫苗及其应用 |
ES2750525T3 (es) | 2012-12-27 | 2020-03-26 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Procedimientos y composiciones relacionados con CRM197 |
ES2597832T3 (es) * | 2013-03-08 | 2017-01-23 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Vacuna acelular contra la tosferina |
US9849066B2 (en) | 2013-04-24 | 2017-12-26 | Corning Incorporated | Delamination resistant pharmaceutical glass containers containing active pharmaceutical ingredients |
AR101256A1 (es) | 2014-07-21 | 2016-12-07 | Sanofi Pasteur | Composición vacunal que comprende ipv y ciclodextrinas |
CU24510B1 (es) * | 2014-10-07 | 2021-05-12 | Serum Institute Of India Pvt Ltd | Método para la composición de una vacuna contra la poliomielitis, con poliovirus inactivados y adsorción en coadyuvantes |
RU2596919C2 (ru) * | 2015-01-16 | 2016-09-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Комбинированная вакцина для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка |
RU2626532C2 (ru) * | 2015-01-16 | 2017-07-28 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Комбинированная вакцина для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита в и инфекции, вызываемой haemophilus influenzae тип в |
CN104707134A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-06-17 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 一种无细胞百日破联合疫苗及其制备方法 |
CN108570098B (zh) * | 2017-12-29 | 2021-09-07 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 一种百日咳多种抗原成分的分离纯化方法 |
WO2020165920A1 (en) * | 2019-02-12 | 2020-08-20 | Biological E Limited | Multivalent vaccine composition |
GB2619625B (en) | 2019-05-20 | 2024-04-03 | Soligenix Inc | Compositions and Methods of Manufacturing Trivalent Filovirus Vaccines |
CN111000994A (zh) * | 2019-12-26 | 2020-04-14 | 北京科兴中维生物技术有限公司 | 一种液体疫苗组合物及其制备方法与应用 |
CN111053898B (zh) * | 2019-12-26 | 2023-05-16 | 北京科兴中维生物技术有限公司 | 一种疫苗组合物及其应用 |
WO2021176409A1 (en) | 2020-03-05 | 2021-09-10 | Sanofi Healthcare India Private Limited | Preservative combination for vaccine composition |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07300427A (ja) * | 1992-10-27 | 1995-11-14 | American Cyanamid Co | 各ワクチン成分の免疫原性を増強した併用小児ワクチン |
WO1997000697A1 (en) * | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | A vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3097140A (en) * | 1958-10-31 | 1963-07-09 | Merck & Co Inc | Preparing a mixed polio, pertussis, tetanus, and diphtheria vaccine with benzethonium chloride |
US4258029A (en) | 1979-04-23 | 1981-03-24 | Connaught Laboratories Limited | Synthetic adjuvants for stimulation of antigenic responses |
DE3521994A1 (de) | 1985-06-20 | 1987-01-02 | Bayer Ag | N-(2-aminoacylamido-2-desoxy-hexosyl)-amide-, -carbamate und -harnstoffe, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung in arzneimitteln |
US4705686A (en) | 1986-05-09 | 1987-11-10 | American Cyanamid | Process for the preparation of acellular Bordetalla pertussis vaccine |
GB8727489D0 (en) | 1987-11-24 | 1987-12-23 | Connaught Lab | Detoxification of pertussis toxin |
GB8807860D0 (en) | 1988-04-05 | 1988-05-05 | Connaught Lab | Pertussis vaccine |
US5101014A (en) | 1989-02-10 | 1992-03-31 | United States Of America | Process for the purification of a 69,000 da outer membrane protein of Bordetella pertussis |
US5276142A (en) | 1989-12-11 | 1994-01-04 | American Cyanamid Company | Process for purification of a 69000 dalton antigenic protein from Bordetella pertussis |
GB9007657D0 (en) | 1990-04-04 | 1990-05-30 | Connaught Lab | Purification of a pertussis outer membrane protein(omp69) |
EP0484621A3 (en) * | 1990-07-11 | 1992-08-26 | American Cyanamid Company | Efficacious vaccines against bordetella pertussis comprising a combination of individually purified pertussis antigens |
IL101692A0 (en) * | 1991-05-03 | 1992-12-30 | Amgen Inc | Recombinant b oligomer of pertussis toxin |
HU220236B (hu) * | 1992-05-23 | 2001-11-28 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Hepatitis B felszíni antigént és egyéb antigéneket tartalmazó, kombinált oltóanyagok |
PT826001E (pt) * | 1995-05-04 | 2002-12-31 | Aventis Pasteur | Vacinas acelulares contra a tosse convulsa e metodos para a sua preparacao |
DE69637597D1 (de) * | 1995-06-07 | 2008-08-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vakzine mit einem Polysaccharide Antigen-Trägerprotein Konjugat und freiem Trägerprotein |
-
1997
- 1997-07-02 SK SK1818-98A patent/SK283565B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-07-02 JP JP50369098A patent/JP3280675B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-02 DE DE69736709T patent/DE69736709T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-02 IL IL12784797A patent/IL127847A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-07-02 CA CA002259415A patent/CA2259415A1/en not_active Abandoned
- 1997-07-02 TR TR1998/02783T patent/TR199802783T2/xx unknown
- 1997-07-02 EP EP06019398A patent/EP1762246A1/en not_active Withdrawn
- 1997-07-02 RO RO98-01772A patent/RO120819B1/ro unknown
- 1997-07-02 CN CNB971976090A patent/CN100408095C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-02 AT AT97928089T patent/ATE339965T1/de active
- 1997-07-02 RU RU99101850/14A patent/RU2194531C2/ru active
- 1997-07-02 BR BR9710460A patent/BR9710460A/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-07-02 DK DK97928089T patent/DK0914153T3/da active
- 1997-07-02 PT PT97928089T patent/PT914153E/pt unknown
- 1997-07-02 BR BRPI9710460A patent/BRPI9710460B8/pt unknown
- 1997-07-02 AU AU32516/97A patent/AU714493B2/en not_active Expired
- 1997-07-02 CN CN200810125160.3A patent/CN101310769B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-02 EP EP97928089A patent/EP0914153B8/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-02 NZ NZ333989A patent/NZ333989A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-07-02 SI SI9720050A patent/SI9720050B/sl not_active IP Right Cessation
- 1997-07-02 WO PCT/CA1997/000472 patent/WO1998000167A1/en active IP Right Grant
- 1997-07-02 ES ES97928089T patent/ES2271969T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-02 PL PL33100797A patent/PL187935B1/pl unknown
-
2001
- 2001-08-15 JP JP2001246781A patent/JP2002069002A/ja not_active Withdrawn
-
2006
- 2006-06-14 JP JP2006165354A patent/JP2006241171A/ja not_active Withdrawn
-
2011
- 2011-02-07 JP JP2011024221A patent/JP2011121981A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07300427A (ja) * | 1992-10-27 | 1995-11-14 | American Cyanamid Co | 各ワクチン成分の免疫原性を増強した併用小児ワクチン |
WO1997000697A1 (en) * | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | A vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN4006000344; New England Journal of Medicine Vol.334 No.6, 1996, p349-355 * |
JPN4006000345; American Journal of Diseases of Children Vol.147 No.8, 1993, p832-836 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3280675B2 (ja) | 多価dtpポリオワクチン | |
Pittman | The concept of pertussis as a toxin-mediated disease | |
JP4589852B2 (ja) | 非細胞性百日咳ワクチンおよびその製造方法 | |
US6696065B1 (en) | Acellular pertussis vaccines and methods of preparation thereof | |
EP1028750B1 (en) | Method for preparing multivalent vaccines | |
MXPA97008481A (es) | Vacunas acelulares de pertussis y metodos de preparacion de las mismas | |
JPH0545570B2 (ja) | ||
IE70672B1 (en) | Novel vaccine and method therefor | |
TW201008577A (en) | Vaccine composition | |
MXPA99000184A (es) | Vacunas multivalentes de dtp-polio | |
COWELL | CHARLES R. MANCLARK |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110309 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110309 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121204 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130304 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130307 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130827 |