JP2011092143A - 重炭酸イオン濃度測定方法及び該方法に用いる溶液 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】重炭酸イオン濃度の測定方法であって、(A)試料中の重炭酸イオン、及びホスホエノールピルビン酸を、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ存在下で反応させ、オキザロ酢酸を生成させる工程、(B)A工程で生成したオキザロ酢酸、及びNADHもしくはその類似体を、マレイン酸デヒドロゲナーゼ存在下で反応させる工程、(C)NADH若しくはその類似体の減少を測定する工程を含み、前記工程のうち少なくともA工程はpH7以上8未満の溶液中で行われ、当該溶液の外気と接触する表面積と当該溶液の体積の比が0.2未満であり、前記ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼである、重炭酸イオン濃度測定方法。
【選択図】なし
Description
項1.
試料中の重炭酸イオン濃度を測定する方法であって、
(A):試料中の重炭酸イオン、及びホスホエノールピルビン酸を、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ存在下で反応させ、オキザロ酢酸を生成させる工程
(B):(A)工程で生成したオキザロ酢酸、及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体を、マレイン酸デヒドロゲナーゼ存在下で反応させる工程
(C):還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド若しくはその類似体の減少を測定する工程
を含み、
前記(A)〜(C)工程のうち少なくとも(A)工程はpH7以上8未満の溶液中で行われ、当該溶液の外気と接触する表面積と当該溶液の体積の比が0.2未満であり、
前記ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼである、
重炭酸イオン濃度測定方法。
項2.
前記還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくは還元型3−アセチルピリジンアデニンジヌクレオチドである、項1に記載の重炭酸イオン濃度測定方法。
項3.
前記酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが、アセトバクター・パスツリアヌス由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アセトバクター・アセチ由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アセトバクター・ザイリナム由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アセトバクター・ハンゼニイ由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、及びグルコノバクター・オキシダンス由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼからなる群より選択される少なくとも1種のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼである、項1又は2に記載の重炭酸イオン濃度測定方法。
項4.
ホスホエノールピルビン酸、酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体、及びマレイン酸デヒドロゲナーゼを含み、pH7以上8未満である、重炭酸イオン濃度測定用溶液。
項5.
外気と接触する表面積と体積の比が0.2未満となるよう容器に格納された、項4に記載の重炭酸イオン濃度測定用溶液。
項6.
重炭酸イオン濃度測定用溶液の製造用粉体組成物であって、
ホスホエノールピルビン酸、酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体、及びマレイン酸デヒドロゲナーゼを含む、項5に記載の重炭酸イオン濃度測定用溶液の製造用粉体組成物。
本発明の、試料中の重炭酸イオン濃度を測定する方法は、以下の(A)〜(C)工程を含む。
(B):(A)工程で生成したオキザロ酢酸、及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体を、マレイン酸デヒドロゲナーゼ存在下で反応させる工程
(C):還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド若しくはその類似体の吸光度の減少を測定する工程
(A)工程は、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、ホスホエノールピルビン酸、及び重炭酸イオンを含有する試料を混合し、反応させることで行われる。当該反応により、オキザロ酢酸が生成される。より詳細には、当該反応により、ホスホエノールピルビン酸及び重炭酸イオンから、オキザロ酢酸及びリン酸が生成される。
(B)工程は、(A)工程で生成したオキザロ酢酸、マレイン酸デヒドロゲナーゼ、及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体を混合し、反応させることで行われる。当該反応により、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体は、酸化型へと変わる。例えば、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)を用いた場合、酸化されて、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD+)へと変わる。これにより、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体は、減少することになる。
(C)工程は、(B)工程における還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体の減少を測定する工程である。これにより得られる測定値から、試料中の重炭酸イオン量を算出することができる。(B)工程における変化を測定することから、(C)工程は(B)工程と並行して行われることが好ましい。
また、本発明は、上述した重炭酸イオン濃度を測定する方法に用いるための試薬をも提供する。特に、(A)〜(C)工程を同一溶液内で行えるように調製した溶液は、長時間開封状態で保存しても、大気中の二酸化炭素(炭酸ガス)の影響を受けることなく安定であり、重炭酸イオン濃度測定に好ましく用いることができる。
ホスホエノールピルビン酸塩 2〜5mM
マグネシウムイオン 3〜100mM
NADH 0.1〜0.5mM
マレイン酸デヒドロゲナーゼ 5〜50U/mL
酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ 0.05〜10U/mL
ホスホエノールピルビン酸カリウム塩 2〜5mM
硫酸マグネシウム 3〜100mM
NADH 0.1〜0.5mM
マレイン酸デヒドロゲナーゼ 5〜50U/mL
酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ 0.5〜5U/mL
下記の試薬組成に従い、重炭酸イオン濃度測定用溶液(以下「実施例1試薬溶液」という)を調製した。
トリス(pH7.8)
トリトンX−100 0.1%
PEPナトリウム塩 5mM
aNADH 0.3mM
PEPC 0.4U/mL
MDH 5U/mL
〔試料〕
精製水、
キャリブレーター(既知濃度(31.4mM)重炭酸ナトリウム水溶液)、
プール血清(2種類:血清α及び血清β(いずれも管理血清))
下記の試薬組成に従い、重炭酸イオン濃度測定用溶液(以下「比較例1試薬溶液」という)を調製した。
トリス(pH8.0)
トリトンX−100 0.1%
PEPナトリウム塩 5mM
aNADH 0.3mM
PEPC 0.4U/mL
MDH 5U/mL
〔試料〕
精製水、
キャリブレーター(既知濃度(31.4mM)重炭酸ナトリウム水溶液)、
プール血清(2種類:血清α及び血清β(いずれも管理血清))
Claims (5)
- 試料中の重炭酸イオン濃度を測定する方法であって、
(A):試料中の重炭酸イオン、及びホスホエノールピルビン酸を、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ存在下で反応させ、オキザロ酢酸を生成させる工程
(B):(A)工程で生成したオキザロ酢酸、及び還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体を、マレイン酸デヒドロゲナーゼ存在下で反応させる工程
(C):還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド若しくはその類似体の減少を測定する工程
を含み、
前記(A)〜(C)工程のうち少なくとも(A)工程はpH7以上8未満の溶液中で行われ、当該溶液の外気と接触する表面積と当該溶液の体積の比が0.2未満であり、
前記ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼである、
重炭酸イオン濃度測定方法。 - 前記還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくは還元型3−アセチルピリジンアデニンジヌクレオチドである、請求項1に記載の重炭酸イオン濃度測定方法。
- 前記酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが、アセトバクター・パスツリアヌス由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アセトバクター・アセチ由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アセトバクター・ザイリナム由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、アセトバクター・ハンゼニイ由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、及びグルコノバクター・オキシダンス由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼからなる群より選択される少なくとも1種のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼである、請求項1又は2に記載の重炭酸イオン濃度測定方法。
- ホスホエノールピルビン酸、酢酸菌由来のホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドもしくはその類似体、及びマレイン酸デヒドロゲナーゼを含み、pH7以上8未満である、重炭酸イオン濃度測定用溶液。
- 外気と接触する表面積と体積の比が0.2未満となるよう容器に格納された、請求項4に記載の重炭酸イオン濃度測定用溶液。
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