JP2011084548A - ヌルデ抽出物を含むインフルエンザウイルス感染の予防用組成物、該組成物を含むエアフィルター、及び該フィルターを含む空気清浄器 - Google Patents

Abstract

【課題】インフルエンザウイルス感染防止方法の提供。
【解決手段】ヌルデ抽出物またはイチョウ抽出物を含むインフルエンザウイルス感染の予防用組成物、該組成物を含むエアフィルター、及び該フィルターを含む空気清浄器。
【効果】ヌルデ抽出物またはイチョウ抽出物を含む組成物は、優れた抗インフルエンザ活性を有することにより、インフルエンザウイルス感染の予防に用いられ、前記組成物がコートされたフィルターは、空気中のインフルエンザウイルスを効果的に除去することができ、インフルエンザウイルス感染の予防に有用に用いられる。
【選択図】なし

Description

本発明は、ヌルデ抽出物を含むインフルエンザウイルス感染の予防用組成物、該組成物を含むエアフィルター、及び該フィルターを備えた空気清浄器に関する。

インフルエンザ(Influenza)は、通常、流感と呼ばれる感染性疾患や、その病原体であるオルソミクソウイルス科のインフルエンザウイルスを意味する。一般の症状は、悪寒、発熱、咽喉炎、筋肉痛、頭痛、咳、無力感と不快感であり、発熱と咳のような軽症が最も多く、度々致命的な合併症を引き起こすこともある。

インフルエンザは、季節毎に数千〜数万名が死亡する流感を全世界的に広がり続け、大流行を引き起こし、数年間の全世界的な流行の際は、通常、百万名程度が死亡した。２０世紀には、新たな菌株のインフルエンザによる流感の世界的な流行が３回あり、数千万名に至る人々が死亡した。このような変種は、他の動物からヒトに感染が生じるとき、ヒトを主宿主とする種が他の動物を主宿主とする種から遺伝子を受けたときによく発生する。１９９０年アジアで出現したＨ５Ｎ１の登場は、世界的な流感の流行に大きな関心を引き起こしたが、この際の種は、ヒト対ヒト感染に特化するように変異されてはいなかった。２００９年４月には、メキシコにおいてＨ１Ｎ１の変種が出現、諸国に広がるようになった。

インフルエンザは、厳密には、ＲＮАウイルスであるオルソミクソウイルス科（Orthomyxoriridae）に含まれる５つの属のうち、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、インフルエンザＣの３つに区別される。

インフルエンザＡは、一つの種であるインフルエンザＡ型ウイルスのみを含む。野生水生鳥類が数種のインフルエンザＡの自然宿主の役割をする。Ａ型は、種間の伝染を通じて極めて大流行を引き起こし、インフルエンザのうち最も毒性が強い。Ａ型は、抗体の反応有無によって、さらに数個の血清型（亜型）に分けられる。ヒトに流感を生じると知られた亜型を、流行当時の死亡者数によって降順に配列すると、次のとおりである。先ず、Ｈ１Ｎ１は、１９１８年のスペイン流感、２００９年の全世界的な流感の流行を引き起こした。Ｈ２Ｎ２は、１９５７年にアジア流感を引き起こし、Ｈ３Ｎ２は、１９６８年に香港流感を引き起こした亜型である。それ以外にも、インフルエンザＡ型の亜型として、Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ１Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ１０Ｎ７がある。

そのうち、Ｈ１Ｎ１についてより具体的に説明すると、インフルエンザウイルスＡ型Ｈ１Ｎ１亜型（英文：Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｓｕｂｔｙｐｅ Ｈ１Ｎ１）またはＨ１Ｎ１は、インフルエンザＡの亜型として、ヒトに発病するインフルエンザにおいて最も有り触れた類型である。ヒト意外にも、豚や鳥にも感染・発病することもある。

Ｈ１Ｎ１は、スペイン流感とも呼ばれる流感を引き起こし、１９１８年から１９１９年に５０００万名から１億名の死亡者を記録した。２００５年、Ｈ１Ｎ１のゲノムがサイエンスに発表され、このゲノムのウイルスが、１９１８年スペイン流感を引き起こし、現在のものと比較して、約４４００個のアミノ酸のうち２５個〜３０個程度のみが変異されたと明らかにした。低病原性のＨ１Ｎ１は、現在、世界に広く分布されており、２００６年にはヒトへの感染が略半分を占めているものと報告された。

しかしながら、２００９年３月から全世界的にＨ１Ｎ１ウイルスによる死亡者数が増加しており、このウイルスは、発生初期は、豚流感と呼ばれたが、以降、豚から感染するものでないと結論付け、名称が撤廃され、韓国の言論及び政府では、新型流感または新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスという名称を用いており、同年６月１１日、世界保健機関はＨ１Ｎ１インフルエンザの伝染病警報水準を大流行に上げた。

現在、韓国では２００９年９月１６日の発表を基準で、約１万名以上が感染され、８名は重症で入院治療を受けており、１４名が持病合併症または急性合併症で死亡したと報告されている。

一方、インフルエンザＢは、インフルエンザＢ型ウイルスである一つの種を含む。Ｂ型は、ほぼヒトにのみ感受性があり、Ａ型よりも稀に出現する。Ｂ型が感受性を有すると疑われる他の動物は、おっとせいとフェレット（ferret）である。この種は、Ａ型よりも２〜３倍低い変異率を示し、遺伝学的多様性にも劣り、唯一つの亜型のみが存在する。このように低い抗原性の多様性のため、Ｂ型は、宿主の範囲も小さく、流行を殆ど引き起こさない。

また、インフルエンザＣは、インフルエンザＣ型ウイルスである一つの種を含む。Ｃ型は、ヒト、犬、豚に感受性があるが、通常、子供たちに軽症のみを示す。Ａ型とＢ型よりも少ない頻度で出現する。

従来、インフルエンザの治療に用いられる薬物としては、オセルタミビル（商品名：タミフル）、ザナミビル（商品命：リレンザ）、ペラミビル（Peramivir）、アマンタジン（Amantadine）等がある。タミフルと呼ばれるオセルタミビルが、現在Ｈ１Ｎ１インフルエンザＡ型の治療に主に用いられている。タミフルは、世界で唯一に独占生産する鳥インフルエンザ（ＡＩ）治療剤である。ウイルスを増殖させる酵素機能を防ぎ、治療効果を出す抗ウイルス剤であって、発症後４８時間内の服用であれば治療効果が大きい。主な治療効果は、流感症状の悪化減少、気管支炎や肺炎等の２次合併症発生の減少、流感潜伏期間の減少等である。インフルエンザＡとＢの治療剤としても用いられる。ザナミビルは、ザナミビア（Zanamivir）とも呼ばれ、商品名はリレンザ（Relenza）である。これは、ニューラミニダーゼ阻害剤で作用し、インフルエンザＡ及びＢ型の治療に用いられている。

しかしながら、オセルタミビルは、深刻な嘔吐感が示される副作用があり、ザナミビルは、抗ウイルス効果は高いが、生体利用率が低く、腎臓での排出が速いという短所がある。

現在まで開発された抗インフルエンザ治療剤は、副作用を示す場合が殆どである。したがって、インフルエンザの予防及び治療に効果的な抗インフルエンザ組成物の開発が急である。

一方、インフルエンザは、普通、咳やくしゃみによって空気中に出る、ウイルスが含有された煙霧を吸入することにより、インフルエンザに感染される。その他にも、他の個体の排泄物、唾液、鼻水、大便と血液からも伝染されるが、殆どの伝染は、煙霧の吸入による飛沫感染であると言える。このようなインフルエンザは、日光、消毒剤、石けん等の界面活性剤で不活性化され感染を防止することができるが、空気中に含有されたウイルスの除去には役立たないという短所があった。

したがって、このような空気中のウイルスを除去することができれば、インフルエンザの感染を効果的に防止することができる。

エアフィルターは、フィルターを通過する気体のうち、汚染粒子をろ過し、フィルターを通過した気体が浄化されるようにする通気性部材である。このようなエフフィルターは、家電製品、車両、建物等、様々な場所に用いられ、例えば、空気清浄器、エアコン、乾燥機、掃除機、加湿器、除湿器、車両空調機、建物内の中央空気調和システム等で用いられる。

一方、空気清浄器は、汚染された空気を浄化して新鮮な空気に変わる装置であって、一つの空気清浄器に多数のフィルターが用いられる。一般に、粒子の大きい埃等を除去する前処理フィルターと、匂い、揮発性有機化合物、ホルムアルデヒド等の有害物質を除去する脱臭フィルターと、微細埃を除去する高性能フィルターであるＨＥＰＡフィルターと、ＨＥＰＡフィルターの前面に設置され、埃からＨＥＰＡフィルターを保護する中間フィルターとが一つの空気清浄器において、それぞれ１つ乃至２つ以上用いられてもよい。

このようなフィルターを多く用いるほど、空気清浄性能は向上するが、全体の空気循環に抵抗を高めるため、全体的に３〜５段階のフィルターが用いられることが一般的である。

最近、空気清浄器を用いて人体に有害な物質を選択的にさらに精巧に除去し、または有害な物質を人体に有利な物質に代替することができる機能性フィルターが研究されている。研究されている例示として、乳児のためにさらに微細な物質をろ過可能な高性能微細物質フィルター、または新居症侯群による有害物質をろ過することができる新居症侯群専用フィルター等がある。

ヌルデは、アジアで自生するウルシ科（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ）に属する落葉喬木であり、一名五倍子木ともいう。高さ７ｍに達し、葉は７〜１３枚の小葉からなる複葉でずらし、葉の縁に切れ込みがあり、小葉と小葉との間には翼がある。８〜９月に淡黄色または白い小花が雌雄異株で咲き、または一緒に円錐状につけて咲く。春に幼葉を半ゆでにして食べるが、ヒトに有毒の成分があるので注意しなければならない。ヌルデに寄生するヌルデノミミフシアブラムシ（Ｍｅｌａｐｈｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）は、袋のような虫こぶを作るが、これを五倍子という。

ここに、本発明者は、上記点に鑑み、抗インフルエンザ組成物を探しているうち、ヌルデ抽出物が優れた抗インフルエンザ活性を有し、これを有効成分として含む組成物がインフルエンザウイルス感染の予防に用いられ、前記組成物をフィルターにコートすることにより、空気中のインフルエンザウイルスを効果的に除去することができるのを見付け、本発明を完成した。

本発明の目的は、ヌルデ抽出物を含むインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を提供することである。

本発明の他の目的は、前記組成物を含むエアフィルターを提供することである。

本発明のまた他の目的は、前記フィルターを含む空気清浄器を提供することである。

上記した目的を達成するために、本発明は一態様として、ヌルデ抽出物を有効成分として含むインフルエンザウイルス感染の予防用組成物が提供される。

本発明の好適な態様によると、前記組成物は、イチョウ抽出物をさらに含んでもよい。

本発明の好適な態様によると、前記組成物は、医薬外品に用いられてもよい。

本発明のまた他の態様によると、前記組成物を含むエアフィルターが提供される。

本発明のまた他の態様によると、前記エアフィルターを含む空気清浄器が提供される。

本発明によるヌルデ抽出物を含む組成物は、優れた抗インフルエンザ活性を有することにより、インフルエンザウイルス感染の予防に用いられ、前記組成物がコートされたフィルターは、空気中のインフルエンザウイルスを効果的に除去することができ、インフルエンザウイルス感染の予防に有用に用いられる。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明は、ヌルデ抽出物を有効成分として含むインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を提供する。

本発明の他の具現例によると、前記組成物は、ヌルデ抽出物以外にイチョウ抽出物をさらに含んでもよい。

本発明において、用語の「予防」とは、組成物の使用によって、インフルエンザウイルス感染を抑制させ、または発病を遅延させる、全ての行為を意味する。

本発明において、前記インフルエンザウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルスであってもよく、好ましくはＨ１Ｎ１インフルエンザウイルス、より好ましくはＡ型インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１亜種変種である、一名新型ｆｌｕと呼ばれる新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスであってもよい。

Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスは、正式名称がインフルエンザウイルスＡ型Ｈ１Ｎ１亜型（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｓｕｂｔｙｐｅ Ｈ１Ｎ１）であって、ヒトに発病するインフルエンザにおいて最も有り触れた類型である。ヒト意外にも、豚や鳥にも感染・発病することがあり、具体的な種類としては、Ａ／ＰＲ／８（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／Ｂｅｒｖｉｇ‐Ｍｉｓｓｉｏｎ／１／１８（ｒｖＨ１Ｎ１）、Ａ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／６／８６（Ｈ１Ｎ１）等がある。

新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスは、２００９年インフルエンザ大流行（２００９ ｆｌｕ ｐａｎｄｅｍｉｃ）を引き起こしたウイルスであり、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｏ４／０９、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／７／２００９等がある。

本発明において、前記インフルエンザウイルスは、流感、風邪、咽喉炎、気管支炎、肺炎を引き起こし、特に、鳥類流感、豚流感、または山羊流感等を引き起こすこともある。

本発明において、ヌルデの種類としては、Ｒｈｕｓ ｊａｖａｎｉｃａ、Ｒｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ等があり、これに制限されるものではない。

本発明において、ヌルデ及びイチョウは、商業的に販売されるものを購入して用い、または自然から採取または栽培されたものを用いてもよい。

本発明において、ヌルデの部位としては、葉、果実、樹皮、根等の部位はもとより、ヌルデに寄生するヌルデノミミフシアブラムシ（Ｍｅｌａｐｈｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）が作った虫こぶである五倍子も用いることができ、好ましくは、葉、樹皮、または五倍子を用いるが、これに制限されるものではない。

本発明において、イチョウは、葉、果実、樹皮、根等の部位を用いてもよく、好ましくは葉を用いてもよいが、これに制限されるものではない。

本発明において、前記ヌルデまたはイチョウ抽出物は、その抽出方法において、単純な抽出方法から脂溶性成分まで抽出することができる全ての方法が適用されてもよく、抽出を容易にするために粉砕し、抽出溶媒によって抽出し、これをろ過及び濃縮して得られる。

抽出溶媒としては、水、エタノール、メタノール、ブタノール、ｎ‐ヘキサン、ｎ‐ヘプタン、またはＤＭＳＯ等があり、これらの２つ以上の溶媒を混合して抽出溶媒として用いてもよいが、これに制限されるものではなく、抽出しようとする原料の量、抽出方法等によって、当業者が公知の方法から適宜選択することができる。抽出時間及び温度も、抽出効率、抽出溶媒等を考えて、当業者が公知の方法から適宜選択することができる。好ましい抽出時間は、１０分〜１時間であり、好ましい抽出温度は４０〜１００℃である。

また、前記抽出方法によって抽出された抽出物を減圧濾過等の公知のろ過方法でろ過した後、蒸留等によって濃縮することができる。このような抽出、ろ過、及び濃縮方法は、当業界に広く知られており、よって当業者は、これを適宜選択してヌルデまたはイチョウ抽出物を製造することができる。

本発明の他の具現例によると、本発明のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物は、医薬外品に用いることができる。

すなわち、本発明の組成物は、インフルエンザウイルス感染の予防を目的として、医薬外品に添加されてもよい。本発明の組成物を医薬外品添加物として用いる場合、前記組成物をそのまま添加し、または他の医薬外品または医薬外品成分と一緒に用いてもよく、常法によって適宜使用されてもよい。 有効成分の混合量は、使用目的に応じて適宜決定されてもよい。

好ましくは、前記医薬外品組成物は、フィルターコート剤、手洗い、口すすぎ、消毒清潔剤、シャワーフォーム、ウェットティッシュ、石けん、加湿器充填剤、マスク、または芳香剤の製造に用いられてもよい。

また、本発明は、前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物を含むエアフィルターを提供する。

本発明において、用語の「エアフィルター」とは、空気中の微生物、埃等を除去し、外部からの微生物、埃等の危険物質または汚染物質の流入を防止し、フィルターによる２次汚染を防ぐためのフィルターを意味する。したがって、本発明によるエアフィルターは、自動車用エアフィルター、家電製品用エアフィルター、空調機用エアフィルター、ガスマスク用エアフィルター、空気清浄器用エアフィルター、クリーンローム用エアフィルターとして用いられてもよく、好ましくは空気清浄器用エアフィルターに用いられる。

さらには、本発明は、前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物を含むエアフィルターの製造方法を提供し、以下、上述したインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を含むエアフィルターの製造方法について説明する。

本発明のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を含むエアフィルターの製造方法は、
（ａ）インフルエンザウイルス感染の予防用組成物を製造する段階と、
（ｂ）前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物をフィルター基材にコートする段階と、
（ｃ）前記コートされたフィルターを乾燥する段階と、を含み、
前記（ｂ）段階は、
前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物にローラを浸漬した後、前記浸漬されたローラを用いて、前記組成物を前記フィルター基材に塗布する段階と、
前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物に、前記フィルター基材を含むローラを浸漬する段階と、
前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物を、前記フィルター基材にスプレーする段階とからなる群より選ばれたいずれか一つ以上の段階によって行われることを特徴とする。

フィルター基材としては、金属、プラスチック、不織布、フィルム等が用いられてもよい。空気清浄器用エアフィルターとしては、高多孔性不織布が用いられることが好ましいが、これに制限されるものではない。

プラスチック材料には、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリウレタン、アクリル、ＰＶＣ、またはポリスチレン等があるが、これに制限されるものではなく、好ましくはポリプロピレンである。

不織布は、繊維等を適当に配列して接着剤または自体融着力等による繊維絡みを用いたシート状の布を意味し、そのベースとなる物質に応じて、ペーパーベース不織布、繊維ベース不織布等がある。また、不織布の材料には、レイヨン、テンセル、またはポリプロピレン等があるが、これに制限されるものではなく、通常の不織布材料として、当業界に公知された材料はいずれも使用可能である。好ましくはポリプロピレンである。

本発明のフィルター基材は、プラスチック樹脂を融点付近の温度で加熱し、溶融紡糸して製造されるフィラメント糸を製織する製織形態、または繊維を製織せず、繊維のウェブ（格子状に絡み合われてもの）を作り、これを結合させる不織布形態の繊維用フィルターに製造し、または発泡剤を加えて多孔性の発泡体フィルターに製造することができる。

エアフィルターの製造のために、先ず、インフルエンザウイルス感染の予防用組成物を製造する。前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物は、好ましくは一定の溶媒で溶解または希釈させ、溶液の形態で、エアフィルターの製造に用いられてもよい。ここで、溶媒としては、水、エタノール、メタノール、ブタノール、またはｎ‐ヘキサン、ｎ‐ヘプタン、ＤＭＳＯ、またはこれらの混合溶媒が用いられてもよい。

前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物でフィルター基材をコートする。コート法としては、スポンジのような吸水性部材が外側に設けられたローラを、前記組成物に浸漬した後、前記ローラをフィルター基材にローリングし、これを乾燥してコートする方法、フィルター基材を直接前記組成物に浸漬させ、乾燥させてコートする方法、前記組成物を前記フィルター基材にスプレーさせ、乾燥させてコートする方法等がある。

本発明のフィルターの製造のためのコーティング工程は、既に製造されたフィルター基材に適用することができ、フィルターを製織する前の繊維形態の段階でも適用可能である。繊維形態の場合、フィルター製織用繊維を、先ず本発明の組成物で浸漬または噴射するコーティング工程を行い、前記コーティング工程後、フィルター基材を製織するようになる。

前記本発明の組成物が浸漬または噴射によってコート処理されたフィルターを乾燥する場合、常温または熱風乾燥してもよく、乾燥方法は、当業界に公知された方法を制限なく用いることができる。乾燥によって、本発明の組成物がフィルターによく吸着され、長期間の間フィルターが抗菌効能を有することができる。

本発明のフィルターは、前記本発明の組成物以外にも、既存の抗菌物質、脱臭剤（例えば、フラボノイド、フィトンチッド、木酢液、植物エキス、シクロデキストリン、金属イオン、二酸化チタン）または集塵ろ過剤をさらに含んでもよく、これらの成分は、一緒にまたは成分別にそれぞれ別途塗布してもよく、塗布の順序は特に制限されない。

また、本発明は、前記エアフィルターを含む空気清浄器を提供する。

本発明のエアフィルターが用いられる一実施例として空気清浄器について言及すると、上述のように、空気清浄器には多数のフィルターが用いられるが、本発明によるインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を含むエアフィルターは、機能性フィルターとして用いられてもよく、その他の空気清浄器内に含まれるいずれのフィルターとしても使用可能である。

本発明の前記エアフィルターが適用される空気清浄器には、その制限がなく、家庭または事務室内の空気清浄器、または自動車用・室内浄化用フィルター等がその例として挙げられ、このような通常の空気清浄器が有する通常の構成要素を含んでもよい。好ましくは、本発明の空気清浄器は、本発明のエアフィルターを空気の吸入口と噴出口との間に配置してなる。

また、本発明は、前記空気清浄器を使用する空気清浄方法を提供する。

以下、本発明を実施例及び実験例によりさらに詳述する。但し、下記実施例は、本発明の例示であるだけで、本発明の内容が下記実施例に限定されるものではない。

〔製造例１：ヌルデ抽出物の製造〕
本製造例において用いたヌルデは、葉部位を採取した後、本発明の抽出物を効率的に得るために乾燥させた後、粉末状に粉砕して用いた。ヌルデ１ｋｇに水５ｌを加え、８０℃の水浴中で１２時間湯煎して抽出し、ろ過紙でろ過した後、濃縮してヌルデ抽出物を得た。

〔製造例２：イチョウ抽出物の製造〕
本製造例において用いたイチョウは、葉部位を採取した後、本発明の抽出物を効率的に得るために乾燥させた後、粉末状に粉砕して用いた。イチョウ１ｋｇに水５ｌを加え、８０℃の水浴中で１２時間湯煎して抽出し、ろ過紙でろ過した後、濃縮してイチョウ抽出物を得た。

〔製造例３：ヌルデ抽出物がコートされた本発明によるエアフィルターの製造〕
ポリプロピレンフィルター基材に、前記製造例１で製造されたヌルデ抽出物を水に希釈して得た溶液を噴霧コートし、１４０℃で４分間乾燥してフィルターを製造した。

〔製造例４：ヌルデ抽出物とイチョウ抽出物がコートされた本発明によるエアフィルターの製造〕
ポリプロピレンフィルター基材に、前記製造例１で製造されたヌルデ抽出物と前記製造例２で製造されたイチョウ抽出物を同量混合した混合物を水に希釈して得た溶液を噴霧コートし、１４０℃で４分間乾燥してフィルターを製造した。

〔実験例１：ヌルデ抽出物及びイチョウ抽出物によるインフルエンザウイルスの死滅活性の測定〕
本発明の製造例１及び２で得られたヌルデ抽出物及びイチョウ抽出物のインフルエンザウイルスの死滅活性を、下記のとおり測定した。

インフルエンザウイルスとしては、２００９年大流行が宣言（世界保健機関、２００９年６月１１日宣言）された新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスとして、ＷＨＯ標準菌株であるインフルエンザウイルスＨ１Ｎ１（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｏ４／０９）と、既存にＨ１Ｎ１タイプと知られた他のＨ１Ｎ１タイプのウイルスとして、Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）及びＡ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）を用いた。

試料としては、前記製造例１で得たヌルデ抽出物単独、前記製造例２で得たイチョウ抽出物単独、及び前記製造例１及び２で得たヌルデ抽出物とイチョウ抽出物を同量で混合した混合物を用いた。より具体的な実験方法は、以下のとおりである。

先ず、ＭＤＣＫ（Ｍａｒｄｉｎｅ Ｄａｒｂｉｎｅ Ｃａｎｉｎｅ Ｋｉｄｎｅｙ）細胞株は、１．５×１０^６細胞／ｍｌの濃度で接種した後、６ウェルプレートにおいて、３７℃、５％ＣＯ_２濃度の培養器で２４時間の間培養した。また、各単独抽出物及び混合物を１００ｍｇ／ｍｌ（１Ｘ）で用水に希釈し、これを１０倍ずつ希釈して試料を用意した。前記用意した試料を９６ウェルプレートにそれぞれ９０μｌずつ入れ、インフルエンザウイルス１０μｌを処理した。１０分間反応させた後、１０倍ずつＰＢＳで希釈した。その後、培養皿の低一杯になったＭＤＣＫ細胞株を、前記希釈溶液１ｍｌで１時間の間感染させた。一方、「感染＋非投与」の対照群（インフルエンザウイルスで感染させた後、いずれも抽出物も投与しなかった細胞群）を同一の条件で反応後、ＭＤＣＫ細胞株に接種して培養した。

以降、培地を除去し、２×アガロースと１０μｇ／ｍｌトリプシンが含まれた２×ＭＥＭ培地を重量比１：１で混合した後、２ｍｌずつＭＤＣＫ細胞株が含まれたプレートに注いだ。前記ＭＤＣＫ細胞株を２日間３７℃のインキュベータで培養した後、４％パラホルムアルデヒド１ｍｌを入れて固定させ、水で洗浄してアガロースを除去した。その後、クリスタルバイオレットで染色してプラークの数を測定し、その数は、プラーク形成単位（ｐｆｕ／ｍｌ）で計算した。その結果を表１〜３に示す。

数式１
ウイルス阻害率（％）＝（１−抽出物処理群／対照群）×１００
表１
各試料処理後、新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｏ４／０９）の力価

表２
各試料処理後、インフルエンザＡ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）の力価

表３
各試料処理後、インフルエンザＡ／ＰＲ／８（Ｈ１Ｎ１）の力価

前記表１〜３の結果を通じて、対照群と比較して、ヌルデ抽出物、及びヌルデ抽出物とイチョウ抽出物を同量で混合した混合物を処理した場合、ウイルスが完全に死滅されるので、本発明によるヌルデ抽出物、及びヌルデ抽出物とイチョウ抽出物の混合物が、優れた抗インフルエンザウイルス死滅活性を有することが分かる。

〔実験例２：本発明によるエアフィルターのインフルエンザウイルスの死滅活性の測定〕
本発明の製造例３及び４で得たヌルデ抽出物を処理したエアフィルター、及びヌルデ抽出物とイチョウ抽出物を処理したエアフィルターのインフルエンザウイルスの死滅活性を、下記のとおり測定した。

インフルエンザウイルスとしては、２００９年大流行が宣言（世界保健機関、２００９年６月１１日宣言）された新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスとして、ＷＨＯ標準菌株であるインフルエンザウイルスＨ１Ｎ１（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｏ４／０９）と、既存にＨ１Ｎ１タイプと知られた他のＨ１Ｎ１タイプのウイルスとして、Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）及びＡ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）を用いた。

試料としては、前記製造例３及び４で得たエアフィルターを用いた。対照群としては、いずれの抽出物も処理しなかったエアフィルターを用いた。より具体的な実験方法は、以下のとおりである。

２×２ｃｍにフィルターろ過材を採取した後、フィルターに一定量のウイルス液を塗布し、１０分間ろ過材に吸収して反応させた後、吸収されたフィルター上に培地（１ｍｌ）を入れ、１０分間振とうしてウイルスを洗い上げる。これを希釈して試料を用意した。前記用意した試料を９６ウェルプレートにそれぞれ９０μｌずつ入れ、インフルエンザウイルス１０μｌを処理した。１０分間反応させた後、１０倍ずつＰＢＳで希釈した。その後、培養皿の低一杯になったＭＤＣＫ細胞株を、前記希釈溶液１ｍｌで１時間の間感染させた。一方、「感染＋非投与」の対照群（インフルエンザウイルスで感染させた後、いずれの抽出物も投与しなかった細胞群）を同一の条件で反応後、ＭＤＣＫ細胞株に接種して培養した。

以降、培地を除去し、２×アガロースと１０μｇ／ｍｌトリプシンが含まれた２×ＭＥＭ培地を重量比１：１で混合した後、２ｍｌずつＭＤＣＫ細胞株が含まれたプレートに注いだ。前記ＭＤＣＫ細胞株を２日間３７℃のインキュベータで培養した後、４％パラホルムアルデヒド１ｍｌを入れて固定させ、水で洗浄してアガロースを除去した。その後、クリスタルバイオレットで染色してプラークの数を測定し、その数は、プラーク形成単位（ｐｆｕ／ｍｌ）で計算した。その結果を表４〜６に示す。

表４
各試料処理後、新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｏ４／０９）の力価

表５
各試料処理後、インフルエンザＡ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）の力価

表６
各試料処理後、インフルエンザＡ／ＰＲ／８（Ｈ１Ｎ１）の力価

前記表４〜６の結果を通じて、本発明によるヌルデ抽出物処理エアフィルターと、ヌルデ抽出物及びイチョウ抽出物の混合物処理エアフィルターが、優れたインフルエンザウイルス死滅活性を有することが分かる。

Claims (18)

1. ヌルデ抽出物を有効成分として含む、インフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
2. 前記組成物は、イチョウ抽出物をさらに含む、請求項１に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
3. 前記抽出物は、水、エタノール、メタノール、ブタノール、ｎ‐ヘキサン、ｎ‐ヘプタン、ＤＭＳＯ、またはこれらの混合溶媒を用いて抽出したものであることを特徴とする、請求項１または２に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
4. 前記ヌルデは、葉、果実、樹皮、根、または五倍子の部位であることを特徴とする、請求項１に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
5. 前記イチョウは、葉、果実、樹皮、または根の部位であることを特徴とする、請求項２に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
6. 前記インフルエンザウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、またはＣ型インフルエンザウイルスであることを特徴とする、請求項１に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
7. 前記インフルエンザウイルスは、Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスであることを特徴とする、請求項６に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
8. 前記Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスは、Ａ／ＰＲ／８（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／Ｂｅｒｖｉｇ‐Ｍｉｓｓｉｏｎ／１／１８（ｒｖＨ１Ｎ１）、またはＡ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／６／８６（Ｈ１Ｎ１）であることを特徴とする、請求項７に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
9. 前記Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスは、新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスであることを特徴とする、請求項７に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
10. 前記新型インフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスは、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／０９またはＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／７／２００９であることを特徴とする、請求項９に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
11. 前記インフルエンザウイルス感染による疾患は、流感、風邪、咽喉炎、気管支炎、肺炎、鳥類流感、豚流感、または山羊流感であることを特徴とする、請求項１に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
12. 前記組成物は、医薬外品製造に用いられることを特徴とする、請求項１に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
13. 前記医薬外品は、フィルターコート剤、手洗い、口すすぎ、消毒清潔剤、シャワーフォーム、ウェットティッシュ、石けん、加湿器充填剤、マスク、または芳香剤であることを特徴とする、請求項１２に記載のインフルエンザウイルス感染の予防用組成物。
14. 請求項１または２によるインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を含むエアフィルター。
15. （ａ）請求項１または２によるインフルエンザウイルス感染の予防用組成物を製造する段階と、
    （ｂ）前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物をフィルター基材にコートする段階と、
    （ｃ）前記コートされたフィルターを乾燥する段階と、を含み、
    前記（ｂ）段階は、
    前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物にローラを浸漬した後、前記浸漬されたローラを用いて、前記組成物を前記フィルター基材に塗布する段階と、
    前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物に、前記フィルター基材を含むローラを浸漬する段階と、
    前記インフルエンザウイルス感染の予防用組成物を、前記フィルター基材にスプレーする段階とからなる群より選ばれたいずれか一つ以上の段階によって行われることを特徴とする、エアフィルターの製造方法。
16. 前記フィルター基材は、プラスチックまたは不織布であることを特徴とする、請求項１５に記載のエアフィルターの製造方法。
17. 前記不織布は、ペーパーベース不織布または繊維ベース不織布であることを特徴とする、請求項１６に記載のエアフィルターの製造方法。
18. 請求項１４によるエアフィルターを含む空気清浄器。