JP2010515062A - 非変性細胞溶解試薬 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、試験サンプルを細胞溶解試薬に接触させて細胞溶解混合物を形成させることを含んでなる、アッセイにおいて使用する試験サンプルを調製する方法を提供する。細胞溶解試薬は、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの類似体よりなる群から選ばれるグリコールを含み、5個以下の炭素を有する少なくとも1種のアルコールが細胞溶解試薬中に含まれるか、または細胞溶解混合物に加えられる。アルコールは、例えば、メタノール、エタノールおよび/またはプロパノールでありうる。特定の実施形態においては、試験サンプルは、ヒト血液サンプルを含む。
本発明は、均一な細胞溶解混合物を得るために試験サンプルと混合されうる非変性細胞溶解試薬に関する。このアプローチは、界面活性剤または変性剤に基づく従来の抽出方法より優れている。
特許請求の範囲および明細書において用いる用語は、特に示さない限り、以下に記載するとおりに定義される。
本発明の方法は、一般に、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに由来する試験サンプルに関して行われる。
A.総論
本発明のイムノアッセイは、試験サンプル中のアナライトの定性的特定および/または定量のために用いられうる。これらの方法は、例えば、免疫抑制薬、例えばラパマイシン(シロリムス)、タクロリムス、エベロリムス、テムソロリムス、ゾタロリムス、シクロスポリンおよびこれらの化合物のいずれかの類似体のイムノアッセイに適用可能である。そのようなイムノアッセイは、前記のとおり、細胞溶解試薬を試験サンプルと混合して細胞溶解混合物を形成させることにより行われうる。細胞溶解混合物を、アナライトに特異的な少なくとも1つの抗体と、存在する場合のアナライトへの抗体の結合に適した条件下で接触させて、アッセイ混合物を形成させ、ついでアナライトへの抗体の結合を検出する。
試験サンプル中のアナライトの定性的または定量的検出のためのイムノアッセイにおいては、アナライトに結合する少なくとも1つの抗体を、アナライトを含有する疑いのある細胞溶解混合物に接触させて、抗体−アナライト免疫複合体を形成させる。免疫抑制薬を検出するために、その特定の薬物に結合する任意の適当な抗体を本発明のイムノアッセイにおいて使用することが可能である。ラパマイシン(シロリムス)、タクロリムス、ゾタロリムス、シクロスポリンおよびエベロリムスのそれぞれに対する抗体は当技術分野で公知であり、および/または商業的に入手可能であり、これらのいずれもが使用可能である。シロリムスを測定するためのAbbott Laboratoriesの商業的に入手可能なIMx(登録商標)Sirolimusアッセイ(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)またはAbbott Laboratoriesにより販売されている任意の他のSirolimusアッセイキット(例えば、異なる市販の自動化形態上で使用するためのもの)の成分であるモノクローナル抗体を使用することが好ましい。
ついで任意の適当な技術を用いて、抗体−アナライト免疫複合体を検出することが可能である。例えば、抗体−アナライト複合体の存在を検出するために、検出可能な標識で抗体を標識することが可能である。個々の標識の選択は決定的に重要なものではないが、選択される標識は、単独で又は1以上の追加的物質と共に、検出可能なシグナルを生成しうるものでなければならない。
本発明のイムノアッセイは、当技術分野で公知の任意の形態、例えばサンドイッチ形態、競合阻害形態(フォワード(前方向)またはリバース(逆方向)競合阻害アッセイを含む)または蛍光偏光形態(これらに限定されるものではない)を用いて行われうる。後記の典型的な形態は免疫抑制薬のアッセイに関して記載されている。しかし、当業者に理解されるとおり、記載されている形態は任意のアナライトに適用可能である。
本発明はまた、アナライトに関して試験サンプルをアッセイするための試験キットを提供する。本発明の試験キットは、本発明の1以上のイムノアッセイを実施するのに有用な1以上の試薬を含む。試験キットは、一般に、試薬を1以上の別々の組成物として又は場合によっては試薬の混和性が許容する場合には混合物として収容する1以上の容器を伴うパッケージを含む。試験キットはまた、使用者の立場から望ましい可能性がある他の物質、例えばバッファー、希釈剤、標準および/またはサンプルの加工、洗浄もしくは任意の他のアッセイ工程の実施において有用な任意の他の物質を含みうる。
血液サンプルの細胞溶解およびシロリムスに関するイムノアッセイ
この実施例は、血液サンプルを細胞溶解しシロリムスに関する自動化イムノアッセイを行うための、非変性細胞溶解試薬の使用を例示する。
Claims (54)
- アッセイにおいて使用する試験サンプルを調製する方法であって、試験サンプルを細胞溶解試薬に接触させて細胞溶解混合物を形成させることを含んでなり、細胞溶解試薬が、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの類似体よりなる群から選ばれるグリコールを含み、
5個以下の炭素を有する少なくとも1種のアルコールが細胞溶解試薬中に含まれるか、または細胞溶解混合物に加えられる、
方法。 - アルコールが細胞溶解試薬中に含まれる、請求項1の方法。
- 試験サンプルがヒト血液サンプルを含む、請求項1の方法。
- アルコールが、メタノール、エタノールおよびプロパノールよりなる群から選ばれる、請求項1の方法。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:4の範囲である、請求項2の方法。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:2の範囲である、請求項2の方法。
- 試験サンプルを細胞溶解試薬に約2:1から約1:2の範囲の比で加える、請求項2の方法。
- 方法が、細胞溶解混合物を遠心分離することを含まない、請求項1から7のいずれかの方法。
- 方法が、試験サンプルまたは細胞溶解混合物を界面活性剤と接触させることを含まない、請求項1から7のいずれかの方法。
- 方法が、試験サンプルまたは細胞溶解混合物を界面活性剤と接触させることを含む、請求項1から7のいずれかの方法。
- アッセイが、試験サンプル中の1以上の結合タンパク質に結合しているアナライトを検出し、方法が更に、試験サンプルまたは細胞溶解混合物を、前記の1以上の結合タンパク質からアナライトを遊離させる物質に接触させることを含む、請求項1から7のいずれかの方法。
- 物質が前記の1以上の結合タンパク質への結合に関してアナライトと競合する、請求項11の方法。
- アナライトが免疫抑制薬を含み、ならびに物質が、異なるが構造的に類似している免疫抑制薬を含む、請求項12の方法。
- アナライトが非タンパク質分子を含み、ならびに物質が、前記の1以上の結合タンパク質を分解するプロテアーゼを含む、請求項11の方法。
- エチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの類似体よりなる群から選ばれるグリコール、および
5個以下の炭素を有する少なくとも1種のアルコール
を含んでなる細胞溶解試薬混合物。 - 混合物が更に、試験サンプルを含む、請求項15の細胞溶解試薬混合物。
- 試験サンプルがヒト血液サンプルを含む、請求項16の細胞溶解試薬混合物。
- アルコールが、メタノール、エタノールおよびプロパノールよりなる群から選ばれる、請求項15の細胞溶解試薬混合物。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:4の範囲である、請求項15から18のいずれかの細胞溶解試薬混合物。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:2の範囲である、請求項15から18のいずれかの細胞溶解試薬混合物。
- 試験サンプル対細胞溶解試薬の比が約2:1から約1:2の範囲である、請求項16または17の細胞溶解試薬混合物。
- (a)試験サンプルを細胞溶解試薬に接触させて細胞溶解混合物を形成させ(細胞溶解試薬は、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの類似体よりなる群から選ばれるグリコールを含み、5個以下の炭素を有する少なくとも1種のアルコールが細胞溶解試薬中に含まれるか、または細胞溶解混合物に加えられる。)、
(b)アナライトに関して細胞溶解混合物をアッセイすること
を含んでなる、試験サンプル中のアナライトの存在または濃度を評価するための方法。 - アルコールが細胞溶解試薬中に含まれる、請求項22の方法。
- 細胞溶解混合物が均一混合物である、請求項22の方法。
- アッセイがイムノアッセイを含む、請求項22の方法。
- アナライトが免疫抑制薬を含む、請求項22の方法。
- 免疫抑制薬が、シロリムス、タクロリムス、エベロリムス、テムソロリムス、ゾタロリムス、シクロスポリンおよびこれらの化合物のいずれかの類似体よりなる群から選ばれる、請求項26の方法。
- 試験サンプルがヒト血液サンプルを含む、請求項22の方法。
- アルコールが、メタノール、エタノールおよびプロパノールよりなる群から選ばれる、請求項22の方法。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:4の範囲である、請求項23の方法。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:2の範囲である、請求項30の方法。
- 試験サンプルを細胞溶解試薬に約2:1から約1:2の範囲の比で加える、請求項23の方法。
- 方法が、細胞溶解混合物を遠心分離することを含まない、請求項22から32のいずれかの方法。
- 方法が、試験サンプルまたは細胞溶解混合物を界面活性剤と接触させることを含まない、請求項22から32のいずれかの方法。
- 方法が、試験サンプルまたは細胞溶解混合物を界面活性剤と接触させることを含む、請求項22から32のいずれかの方法。
- アッセイが、試験サンプル中の1以上の結合タンパク質に結合しているアナライトを検出し、方法が更に、試験サンプルまたは細胞溶解混合物を、前記の1以上の結合タンパク質からアナライトを遊離させる物質に接触させることを含む、請求項22から32のいずれかの方法。
- 物質が前記の1以上の結合タンパク質への結合に関してアナライトと競合する、請求項36の方法。
- アナライトが免疫抑制薬を含み、ならびに物質が、異なるが構造的に類似している免疫抑制薬を含む、請求項37の方法。
- アナライトが非タンパク質分子を含み、ならびに物質が、前記の1以上の結合タンパク質を分解するプロテアーゼを含む、請求項36の方法。
- (a)少なくとも1つのアナライトに特異的に結合しうる少なくとも1つの抗体またはタンパク質、
(b)エチレングリコール、プロピレングリコールおよびそれらの類似体よりなる群から選ばれるグリコールを含む細胞溶解試薬、ならびに
(c)5個以下の炭素を有する少なくとも1種のアルコール
を含んでなる試験キット。 - 細胞溶解試薬およびアルコールが組合され、単一の容器内に包装されている、請求項40の試験キット。
- アナライトが免疫抑制薬を含む、請求項40の試験キット。
- 免疫抑制薬が、シロリムス、タクロリムス、エベロリムス、テムソロリムス、ゾタロリムス、シクロスポリンおよびこれらの化合物のいずれかの類似体よりなる群から選ばれる、請求項42の試験キット。
- (a)の少なくとも1つのアナライトを含む対照組成物を更に含む、請求項40の試験キット。
- アルコールが、メタノール、エタノールおよびプロパノールよりなる群から選ばれる、請求項40の試験キット。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:4の範囲である、請求項41の試験キット。
- グリコール対アルコールの比が約4:1から約1:2の範囲である、請求項40の試験キット。
- 界面活性剤を更に含む、請求項40の試験キット。
- 試験キットが更に、試験サンプル中の1以上の結合タンパク質からアナライトを遊離させる物質を含む、請求項40の試験キット。
- 物質が前記の1以上の結合タンパク質への結合に関してアナライトと競合する、請求項49の試験キット。
- 物質アナライトが免疫抑制薬であり、ならびに物質が、異なるが構造的に類似している免疫抑制薬を含む、請求項40から50のいずれかの試験キット。
- 物質が、前記の1以上の結合タンパク質を分解するプロテアーゼを含む、請求項49の試験キット。
- (a)シロリムス、タクロリムス、エベロリムス、テムソロリムス、ゾタロリムスおよびシクロスポリンよりなる群から選ばれる少なくとも1つの免疫抑制薬に特異的に結合しうる少なくとも1つの抗体またはタンパク質、
(b)プロピレングリコールおよびエタノールを約4:1から約1:2の範囲の比で含む細胞溶解試薬、ならびに
(c)(a)の少なくとも1つの免疫抑制薬を含む対照組成物
を含んでなる試験キット。 - 少なくとも1つの免疫抑制薬がシロリムスを含む、請求項53の試験キット。
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