JPH04233460A - タンパク質沈澱試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、液体試料からタンパク
質を沈澱させるのに有用な試薬に関する。さらに詳しく
は、分析対象物、特に疎水性分析対象物を抽出し生物学
的試料から妨害タンパク質を沈澱させることにより該試
料中に存在する該分析対象物の測定を可能にする試薬に
関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】生物
学的流体（たとえば、血清、血漿、全血、尿など）中の
治療薬レベルや他の分析対象物をモニターすることは、
適当な患者管理を助けるための情報を医師に提供する上
で非常に有用になってきている。たとえば、患者投与量
を調節し、最適治療効果を達成し、無用な治療効果以下
の投与レベルまたは有害な毒性投与レベルを回避するこ
とができる。薬物レベルのモニターまたは他の分析対象
物の検出に使用する従来法が知られている。そのような
従来法には、ラジオイムノアッセイおよび蛍光偏光イム
ノアッセイなどの非放射性同位元素アッセイが含まれる
。 しかしながら、そのような方法では、たとえば個々の患
者試料のタンパク質濃度が異なっていること、および分
析対象物が該タンパク質に結合する傾向があるため正確
な決定ができないため、一致した結果が得られない。

【０００３】試料から上記妨害タンパク質を除去または
抽出するための種々の沈澱試薬が記載されているが、そ
のような試薬は、特に疎水性分析対象物の決定の場合に
は多くの欠点を有する。たとえば、米国特許出願第４，
７３４，３７８号には、生物学的試料からジゴキシンを
抽出しタンパク質を沈澱させるための５−スルホサリチ
ル酸の使用が記載されており、また沈澱試薬としての亜
鉛塩の使用も記載されている。しかしながら、そのよう
な沈澱試薬は疎水性分析対象物を溶液中に保持せず、さ
らに５−スルホサリチル酸はたとえば全血試料からヘモ
グロビンを除去できない。さらに、これまでに記載され
ている沈澱試薬は一般に変性させるため、その結果、た
とえばイムノアッセイ系に使用した抗体の結合活性が有
意に失われる。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、生物学的試料
中の疎水性分析対象物の決定のための分析系、とりわけ
該分析対象物に特異的に結合するタンパク質を用いた分
析系において本発明の沈澱試薬を用いた際に、本発明の
沈澱試薬が該分析対象物を抽出し妨害タンパク質を沈澱
させることにより該分析系が実質的に改良されるという
発見に基づいている。特に、本発明の沈澱試薬は、予期
せずまた驚くべきことに、生物学的試料からヘモグロビ
ンなどの妨害タンパク質および他の妨害物質を沈澱させ
、一方それと同時に、疎水性分析対象物を溶液中に保持
しイムノアッセイ系中に存在する特異的結合タンパク質
（たとえば、抗体など）の変性を最小限に抑える。本発
明の沈澱試薬は、ステロイド類、シクロスポリンなどの
薬物、およびその類似体などの疎水性分析対象物の決定
のための蛍光偏光イムノアッセイにおいて特に有用であ
る。

【０００５】本発明の沈澱試薬は、約５．０ｍＭ〜約１
００．０ｍＭの亜鉛塩、約３０％（ｗ／ｖ）〜約１００
％（ｗ／ｖ）の炭素数が１〜４の直鎖または分枝鎖アル
コール、および約５％（ｗ／ｖ）〜約５０％（ｗ／ｖ）
のグリコールを含有する。本発明の沈澱試薬はまた、約
０％（ｗ／ｖ）〜約２０％（ｗ／ｖ）の酸を含有してい
てもよい。

【０００６】本発明の沈澱試薬は、全血、血清、血漿、
尿、脊髄液などの生物学的試料からの疎水性分析対象物
の抽出を可能にする。特に、ヘモグロビンなどの妨害タ
ンパク質および他の妨害物質が試料から沈澱することに
より、所望の分析系によって目的分析対象物を容易に測
定に供することができる。本発明の沈澱試薬は、特異的
結合タンパク質を用いた疎水性分析対象物の決定のため
の分析系、特にイムノアッセイ系において有用であるが
、ラジオアッセイなどの他のアッセイ系にも用いること
ができる。

【０００７】本発明によれば、本発明の沈澱試薬の亜鉛
塩成分は、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、酢酸亜鉛などよりなる
群から選ばれる。この亜鉛塩成分は、試料中に存在する
妨害タンパク質、たとえば血清アルブミン、リポタンパ
ク質、免疫グロブリン、結合タンパク質（たとえば、ビ
リルビンなど）、並びに全血試料などの試料中に存在す
るヘモグロビンを沈澱させる。本発明の沈澱試薬のアル
コール成分は、メタノール、エタノール、プロパノール
、ブタノール、およびそれらの混合物よりなる群から選
ばれる。このアルコール成分は、疎水性分析対象物を溶
液中に保持させ、またタンパク質および結合タンパク質
を沈澱させもする。

【０００８】本発明の沈澱試薬のグリコール成分は、エ
チレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレ
ングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン
などよりなる群から選ばれる。このグリコール成分は、
該沈澱試薬中に含まれる他の成分、特にアルコール成分
の毒性を減少させ、また結合の完全性（ｉｎｔｅｇｒｉ
ｔｙ）を保存させることにより細胞レセプターおよびア
ッセイ系に用いられる特異的結合タンパク質（特に抗体
）を安定化させる。

【０００９】酸成分は、５−スルホサリチル酸、トリク
ロロ酢酸、塩酸、酢酸などよりなる群から選ばれ、妨害
タンパク質を沈澱させ変性させる。

【００１０】血清試料を処理するための本発明の好まし
い沈澱試薬は、硫酸亜鉛（１０ｍＭ）、７０％（ｗ／ｖ
）メタノール、２５％（ｗ／ｖ）エチレングリコールお
よび５−スルホサリチル酸（０．５ｇ）の溶液からなる
。試料が全血試料である場合は、本発明の沈澱試薬は、
硫酸亜鉛（６０ｍＭ）、５０％（ｗ／ｖ）メタノールお
よび３３％（ｗ／ｖ）エチレングリコールの溶液からな
るのが好ましい。

【００１１】本発明において考えられる疎水性分析対象
物としては、ステロイド類、コレステロール、シクロス
ポリンなどの薬物、およびそれらの類似体などが挙げら
れるが、これらに限られるものではない。そのような疎
水性分析対象物は、タンパク質、とりわけリポタンパク
質に対して特に高い結合親和性を有する。それゆえ、該
タンパク質から該疎水性分析対象物を抽出するため（さ
もないと、上記のように該分析対象物の決定が該タンパ
ク質により妨害される）、本発明の沈澱試薬を用いて上
記抽出を達成させ、その際、試料中に存在するタンパク
質は沈澱するが、それと同時に抽出分析対象物の約９０
％〜１１０％が回収される。加えて、本発明の沈澱試薬
は、ヘモグロビン、血清アルブミン、血清免疫グロブリ
ン、リポタンパク質、結合タンパク質なども沈澱させる
。

【００１２】本発明の沈澱試薬をイムノアッセイを行う
ために使用する場合は、試料をまず該沈澱試薬で処理し
、疎水性分析対象物を抽出し妨害タンパク質を試料から
沈澱させる。この妨害タンパク質は重力で沈降するが、
処理試料を遠心分離にかけることにより分析対象物の抽
出を行うのが好ましく、その際、得られる上澄み液が、
実質的に妨害タンパク質を含まない形で所望の分析対象
物を含有している。ついで、この上澄み液を、当業者に
知られた検出可能なトレーサー化合物、および当該技術
分野で知られた方法により調製した分析対象物に対する
適当な抗体または結合試薬と混合する。そのような一般
的なイムノアッセイ法によれば、試料中に存在する分析
対象物とトレーサー化合物とは限られた数の結合部位に
対して競合し、その結果、分析対象物複合体およびトレ
ーサー化合物複合体が生成する。トレーサー化合物と抗
体の濃度を一定に保持することにより、トレーサー複合
体に対する分析対象物複合体の生成の比は試料中に存在
する分析対象物の量に正比例する。

【００１３】本発明の沈澱試薬は蛍光偏光イムノアッセ
イ系において特に有用であり、該系において試料中の分
析対象物の量は、アッセイ混合物を偏光で励起させ、つ
いで遊離の未結合トレーサー化合物およびトレーサー抗
体複合体のいずれかから放射される蛍光の偏光を測定す
ることにより決定される。抗体と複合体を形成していな
いトレーサー化合物は、蛍光の吸収および再放射に要す
る時間よりも短い時間で自由に回転することができる。 その結果、再放射される光は比較的ランダムな方向を向
いており、そのため抗体と複合体を形成していないトレ
ーサー化合物の蛍光偏光は低く、０に近付く。特異的抗
体と複合体を形成すると、かくして形成したトレーサー
−抗体複合体は抗体分子の回転を担うが、これは相対的
に小さなトレーサー化合物分子の回転よりも遅いため観
察される偏光は増大する。

【００１４】上記のような決定を行う場合、分析対象物
は抗体部位に対してトレーサー化合物と競合し、観察さ
れるトレーサー−抗体複合体の蛍光偏光は、遊離のトレ
ーサー化合物の値とトレーサー−抗体複合体の値との間
のものとなる。従って、試料中に高濃度の分析対象物が
含まれていると、観察される蛍光偏光値は遊離のトレー
サー化合物の値に近くなる、すなわち低くなる。逆に試
料中に含まれる分析対象物の濃度が低い場合は、偏光値
はトレーサー−抗体複合体の値に近くなる、すなわち高
くなる。イムノアッセイの反応混合物を垂直偏光ついで
水平偏光で順番に励起させ、放出される光の垂直成分の
みを分析することにより、反応混合物中の蛍光の偏光を
正確に決定することができる。偏光と分析対象物濃度と
の正確な関係は濃度が既知のカリブレーターの偏光値を
測定することによって確立することができ、それから作
成した標準曲線より分析対象物の濃度を内挿することが
できる。

【００１５】蛍光偏光法を用いる場合は、「ミリ偏光単
位」、「スパン」（ミリ偏光単位にて）および「相対強
度」により結果を定量することができる。ミリ偏光単位
の測定は、試料中にフェニルクロロベンゼン（ＰＣＢ）
が不在のときに最大量のトレーサー化合物が抗体に結合
した場合の最大偏光を示す。正味のミリ偏光単位が高く
なればなるほど、抗体に対するトレーサー化合物の結合
は良好となる。本発明の目的のためには、正味のミリ偏
光値が少なくとも約１３０であるのが好ましい。

【００１６】「スパン」とは、正味のミリ偏光値と抗体
に最小量のトレーサー化合物が結合した場合の偏光値と
の差異を示す。スパンが大きいほどデータの数値分析は
良くなる。本発明の目的のためには、少なくとも約１５
ミリ偏光単位のスパンが好ましい。

【００１７】「相対強度」は、バックグラウンド蛍光を
越える蛍光シグナルの強度の測定手段である。それゆえ
、強度が高いほど一層正確な測定が得られる。強度は、
垂直偏光の強度に水平偏光強度を２倍したものを加えた
合計として決定される。強度は、トレーサー化合物の濃
度や他のアッセイ変数に依存して、バックグラウンドノ
イズの約３倍から約３０倍の範囲である。本発明の目的
のためには、バックグラウンドノイズの約３倍から約２
０倍の強度が好ましい。

【００１８】本発明の沈澱試薬は、米国特許出願第５６
７，８４２号（発明の名称：「シクロスポリンの定量の
ためのイムノアッセイ試薬および方法」、１９９０年８
月１５日出願）に記載されているようなシクロスポリン
の第一位にあるＭｅＢｍｔ（Ｎ−メチル−（４Ｒ）−４
−ブト−２Ｅ−エン−１−イル−４−メチル−（Ｌ）−
トレオニン）の水酸基に４−アミノメチルフルオレセイ
ンがカップリングした蛍光トレーサー化合物、および国
際特許出願公開ＷＯ　８６／０２０８０に記載されてい
るようなシクロスポリンに対するモノクローナル抗体を
使用した、シクロスポリンおよびその代謝産物の蛍光偏
光イムノアッセイを行うのに特に有用である。

【００１９】そのような方法では、米国特許出願第５６
７，８４０号（発明の名称：「生物学的試料のための可
溶化試薬」、１９９０年８月１５日出願）に記載されて
いるようなサポニンおよびタージトールミンフォーム（
ｍｉｎ　ｆｏａｍ）ＩＸＴＭ［アルキルオキシ（ポリエ
チレンオキシプロピレンオキシ）イソプロパノール］な
どの界面活性剤からなる可溶化試薬、希釈緩衝液、およ
びカリブレーターおよびコントロールもまた用いられる
。そのような可溶化試薬は、たとえば全血試料や種々の
細胞成分を含有する他の生物学的試料とともに用いるが
、それは疎水性分析対象物を該細胞成分から解離させる
ことによって該分析対象物がたとえば特異的結合タンパ
ク質（抗体など）に結合させることができるようにする
のが望ましいからである。

【００２０】たとえば全血試料の場合に、妨害タンパク
質が沈澱しシクロスポリンおよびその代謝産物が上記の
ようにして抽出されたら、試料をまず上記可溶化試薬で
処理し、ついで、シクロスポリンまたはシクロスポリン
とその代謝産物を含有する上澄み液を抗体と混合する。 トレーサー化合物および希釈緩衝液を加える前に、バッ
クグラウンド蛍光の読み取りを行い、約１０分から約３
０分のインキュベーション期間の後、蛍光偏光の読み取
りを上記のようにして行う。

【００２１】

【実施例】つぎに、本発明を実施例に基づいてさらに詳
しく説明するが、本発明はこれらに限られるものではな
い。 シクロスポリンの蛍光偏光イムノアッセイ試薬 　　本発明の沈澱試薬を用いた蛍光偏光イムノアッセイ
を行うための試薬を下記のようにして調製した。 （ａ）シクロスポリントレーサー試薬：（ｉ）［Ｏ−（
クロロホルミル）ＭｅＢｍｔ］１シクロスポリン（シク
ロスポリンクロロホルメート）の調製：

【００２２】栓
および撹拌棒を備えた１０ｍｌ容丸底フラスコ中でシク
ロスポリン（２４．２ｍｇ、０．０２０ミリモル）をベ
ンゼン（２．０ｍｌ）中のホスゲンの２５％ｗ／ｗ溶液
中に溶解した。この反応液を５分間撹拌してシクロスポ
リンを溶解し、ついで室温で２４時間静置した。この反
応液を真空濃縮し、この生成物は固体として０°Ｃで６
カ月まで貯蔵することができた。その後の反応には、Ｄ
ＭＦ中の０．０２Ｍ溶液を用いた。

【００２３】（ｉｉ）［Ｏ−（フルオレセイン−４’−
イルメチルアミノホルミル）ＭｅＢｍｔ］１シクロスポ
リンの調製： 上記工程（ｉ）に記載したＤＭＦ中の０．０２Ｍ溶液と
してのシクロスポリンクロロホルメート（０．２ｍｌ、
４ミリモル）を、撹拌棒を備えた栓付きバイアル中で塩
酸４’−アミノメチルフルオレセイン（２．０ｍｇ、５
ミリモル）と混合した。みかけのｐＨが（湿ったｐＨ紙
により）約７になるまでピリジンを加えた。この反応液
を室温で２４時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残渣を
メタノール中に取り、１ｍｍシリカゲルプレート上に負
荷した。このプレートを１５％メタノール／メチレンク
ロライドで展開した。生成物のバンド（Ｒｆ＝０．５５
）をシリカゲルからメタノールで溶出した。

【００２４】（ｉｉｉ）トレーサー試薬の調製：０．０
１％（ｗ／ｖ）ウシガンマグロブリン、０．１％（ｗ／
ｖ）アジ化ナトリウム、５．０％（ｗ／ｖ）エチレング
リコールおよび０．０５％（ｗ／ｖ）ツイーンＴＭ２０
を含有する０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
５）中の上記（ｉｉ）で調製したシクロスポリントレー
サー化合物からなる６０ナノモルシクロスポリントレー
サー試薬を調製した。 （ｂ）モノクローナル抗体調合物： シクロスポリンに対するマウス（腹水）モノクローナル
抗体（サンドス・アクチエン・ゲゼルシャフト、バーゼ
ル、スイス）を、アジ化ナトリウムを含有するクエン酸
緩衝液中に希釈してモノクローナル抗体試薬を調製した
。

【００２５】（ｃ）前処理試薬： ０．１ＭトリスＴＭ緩衝液（ｐＨ７．５）、０．１％ア
ジ化ナトリウム、０．５％（ｗ／ｖ）硫酸銅および１０
．０％（ｗ／ｖ）５−スルホサリチル酸からなる前処理
試薬を調製した。 （ｄ）希釈緩衝液： ０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）および０．１
％（ｗ／ｖ）ウシガンマグロブリンからなる希釈緩衝液
を調製した。 （ｅ）血清沈澱試薬： 水性希釈液中の１０ｍＭ硫酸亜鉛、および７０％（ｗ／
ｖ）エチレングリコール、２５％（ｗ／ｖ）メタノール
、および５−スルホサリチル酸（０．５ｇ）からなる血
清沈澱試薬を調製した。 （ｆ）全血沈澱試薬： ６０ｍＭ硫酸亜鉛、５０％（ｗ／ｖ）メタノールおよび
３３％（ｗ／ｖ）エチレングリコールからなる全血沈澱
試薬を調製した。

【００２６】（ｇ）可溶化試薬： ２．０％（ｗ／ｖ）タージトールミンフォーム　１ＸＴ
Ｍ、２．０％（ｗ／ｖ）サポニンおよび０．１％（ｗ／
ｖ）アジ化ナトリウムからなる可溶化試薬を調製した。 （ｈ）カリブレーター： シクロスポリンおよび人工のヒト全血マトリックスから
なるシクロスポリンモノクローナル全血カリブレーター
を調製した。カリブレーターは、保存剤としてアジ化ナ
トリウムを用い、０．０、１００、２５０、５００、１
０００および１５００ｎｇ／ｍｌの濃度にて調製した。 （ｉ）コントロール： シクロスポリンおよび人工全血マトリックスからなるシ
クロスポリンモノクローナル全血コントロールを調製し
た。コントロールは、保存剤としてアジ化ナトリウムを
用い、１５０、４００および５００ｎｇ／ｍｌの濃度に
て調製した。

【００２７】シクロスポリン血清ＦＰＩＡアッセイプロ
トコール 　　アボットＴＤｘＲセラピューティックドラッグアナ
ライザーを用い、血清試料中のシクロスポリンを決定す
るための蛍光偏光イムノアッセイを以下のようにして行
った。各５０μｌのシクロスポリン含有患者全血試料、
コントロールおよびカリブレーターを、ラベルを付した
遠心管にピペットで入れた。ピペットに空気泡を除いた
血清沈澱試薬を満たし、各遠心管の管壁にピペットの先
端を接触させて各遠心管中に１５０μｌを分配した。つ
いで、遠心管に蓋をし、回転ミキサーで１０秒間混合し
、遠心管が均等に分布し遠心管のヘッドが平衡を保つよ
うに遠心管を遠心管ヘッド中に置いた。透明な上澄み液
および変性タンパク質の固くて密なペレットが得られる
まで９，５００×ｇで約３分間遠心分離にかけた。遠心
分離の完了後、各管の蓋を取り、ＴＤｘサンプルカート
リッジの対応試料ウエル中に上澄み液をデカントした。

【００２８】各カリブレーター、コントロールおよび試
料の蛍光偏光値を決定し、アボットＴＤｘアナライザー
の出力テープにプリントした。非線形回帰分析を用いて
各カリブレーターの偏光（Ｐ）と各カリブレーターの濃
度をプロットすることにより標準曲線を装置中で作成し
た。その際、各コントロールおよび試料の濃度は用意し
てある検量曲線（図１）から読み取り、出力テープにプ
リントした。

【００２９】本発明の好ましい蛍光偏光アッセイの感度
は、１５．０ｎｇ／ｍｌのシクロスポリンである。６０
の臨床試料を用いた現在利用できるラジオイムノアッセ
イと比較したとき、線形最小二乗回帰分析から０．９４
７の傾き、７．１５の切片および０．９６９の相関係数
が得られた。

【００３０】本発明による試験キットをＴＤｘアナライ
ザーと組み合わせて用いる場合は、本発明による蛍光偏
光イムノアッセイを行うための試薬はＴＤｘ試薬パック
の別のバイアル中に入れてよく、その際、試薬パック中
の各バイアルの蓋は除き試薬パック内部の所定の壁に置
く。従って、いったん試薬パックをＴＤｘアナライザー
の内部に入れたら、あとのアッセイ手順は完全に自動化
される。

【００３１】手動アッセイを行う場合は、試料をまず上
記沈澱試薬で処理し、ついで希釈緩衝液と混合する。つ
いで、試料を入れた試験管に抗体試薬および前処理溶液
を入れ、バックグラウンド蛍光を読み取る。ついで、ト
レーサー化合物および希釈緩衝液を試料に加え、インキ
ュベート後、蛍光偏光を読み取る。

【００３２】シクロスポリン全血ＦＰＩＡアッセイプロ
トコール 　　アボットＴＤｘＲセラピューティックドラッグアナ
ライザーを用い、全血試料中のシクロスポリンを決定す
るための蛍光偏光イムノアッセイを以下のようにして行
った。各１５０μｌのシクロスポリン含有患者全血試料
、コントロールおよびカリブレーターを、ラベルを付し
た遠心管にピペットで入れ、各管に可溶化試薬（５０μ
ｌ）を加えた。ピペットに空気泡を除いた全血沈澱試薬
を満たし、各遠心管の管壁にピペットの先端を接触させ
て各遠心管中に３００μｌを分配した。ついで、遠心管
に蓋をし、回転ミキサーで１０秒間混合し、遠心管が均
等に分布し遠心管のヘッドが平衡を保つように遠心管を
遠心管ヘッド中に置いた。透明な上澄み液および変性タ
ンパク質の固くて密なペレットが得られるまで９，５０
０×ｇで約５分間遠心分離にかけた。遠心分離の完了後
、各管の蓋を取り、ＴＤｘサンプルカートリッジの対応
試料ウエル中に上澄み液をデカントした。

【００３３】各カリブレーター、コントロールおよび試
料の蛍光偏光値を決定し、アボットＴＤｘアナライザー
の出力テープにプリントした。非線形回帰分析を用いて
各カリブレーターの偏光（Ｐ）と各カリブレーターの濃
度をプロットすることにより標準曲線を装置中で作成し
た。その際、各コントロールおよび試料の濃度は用意し
てある検量曲線（図２）から読み取り、出力テープにプ
リントした。

【図面の簡単な説明】

【図１】　　本発明の沈澱試薬を用いた蛍光偏光イムノ
アッセイにおいて、血清試料中のシクロスポリンの量を
決定する際に用いる検量曲線である。

【図２】　　本発明の沈澱試薬を用いた蛍光偏光イムノ
アッセイにおいて、全血試料中のシクロスポリンの量を
決定する際に用いる検量曲線である。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　亜鉛塩、グリコールおよび炭素数が約
   １〜４の直鎖または分枝鎖アルコールを含有することを
   特徴とする、タンパク質を沈澱させ生物学的試料から疎
   水性分析対象物を抽出するための試薬。
2. 【請求項２】　　該亜鉛塩が硫酸亜鉛、塩化亜鉛および
   酢酸亜鉛よりなる群から選ばれたものであり、該グリコ
   ールがエチレングリコール、プロピレングリコール、ポ
   リエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよ
   びグリセリンよりなる群から選ばれたものであり、該ア
   ルコールがメタノール、エタノール、プロパノール、ブ
   タノールおよびそれらの混合物よりなる群から選ばれた
   ものである、請求項１に記載の試薬。
3. 【請求項３】　　該亜鉛塩が硫酸亜鉛であり、該グリコ
   ールがエチレングリコールであり、該アルコールがメタ
   ノールである、請求項１に記載の試薬。
4. 【請求項４】　　５−スルホサリチル酸、トリクロロ酢
   酸、塩酸および酢酸よりなる群から選ばれた酸を含有す
   る、請求項１、２または３に記載の試薬。
5. 【請求項５】　　該酸が５−スルホサリチル酸である、
   請求項１、２、３または４に記載の試薬。
6. 【請求項６】　　生物学的試料から妨害タンパク質を除
   去するための沈澱試薬を使用する、該生物学的試料中の
   疎水性分析対象物の決定のためのイムノアッセイ法にお
   いて、該沈澱試薬として亜鉛塩、グリコールおよび炭素
   数が約１〜４の直鎖または分枝鎖アルコールを含有する
   ものを使用することを特徴とする方法。
7. 【請求項７】　　該亜鉛塩が硫酸亜鉛、塩化亜鉛および
   酢酸亜鉛よりなる群から選ばれたものであり、該グリコ
   ールがエチレングリコール、プロピレングリコール、ポ
   リエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよ
   びグリセリンよりなる群から選ばれたものであり、該ア
   ルコールがメタノール、エタノール、プロパノール、ブ
   タノールおよびそれらの混合物よりなる群から選ばれた
   ものである、請求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】　　該亜鉛塩が硫酸亜鉛であり、該グリコ
   ールがエチレングリコールであり、該アルコールがメタ
   ノールである、請求項６に記載の方法。
9. 【請求項９】　　該試薬が、５−スルホサリチル酸、ト
   リクロロ酢酸、塩酸および酢酸よりなる群から選ばれた
   酸を含有する、請求項６、７または８に記載の方法。
10. 【請求項１０】　　該酸が５−スルホサリチル酸である
    、請求項９に記載の方法。