JP2010183916A5 - - Google Patents

Claims (8)

1. 環化核酸を作成する方法であって、
   標的核酸フラグメントを得るために標的核酸をフラグメント化し；
   必要に応じて、該標的核酸フラグメントを変性し、一本鎖標的核酸フラグメントとし；
   該標的核酸フラグメントに、
   （ａ）該標的核酸フラグメントの両末端に各々相補的で、同じ鎖側に存在する２つの一本鎖配列部分；及び、
   （ｂ）上記２つの一本鎖末端配列の間に、二本鎖となった標的に相補的でない部分（ここで、該二本鎖となった部分は制限オリゴヌクレオチド配列を含む）；
   を有する環化アダプターをハイブリダイズし；
   ＤＮＡライゲースを用いて、該標的核酸フラグメントを環化する；
   ことを含む方法。
2. 制限オリゴヌクレオチド配列が、１つの共通の制限オリゴヌクレオチド配列である、請求項１に記載の方法。
3. 更に、環化標的核酸フラグメントを増幅することを含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 更に、異なる環化アダプターを用いて多くの異なる標的核酸フラグメントを環化し、次いで、標的核酸フラグメントを、同じ共通の制限ヌクレオチドと酵素を用いて、複数の異なる標的核酸フラグメントが平行して増幅されるように、増幅することを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
5. 増幅が、ローリングサークル増幅である、請求項３または４に記載の方法。
6. 標的核酸を、一つもしくはそれ以上の制限酵素またはＦＬＡＰエンドヌクレアーゼでフラグメント化する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
7. 環化核酸がｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含む、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
8. 標的核酸フラグメントを増幅する方法であって、
   （i）標的核酸フラグメントを得るために標的核酸をフラグメント化し；
   （ii）必要に応じて、該標的核酸フラグメントを変性し、一本鎖標的核酸フラグメントとし；
   （iii）該一本鎖標的核酸フラグメントを、
   （ａ）該標的核酸フラグメントの両末端に各々相補的で、同じ鎖側に存在する２つの一本鎖配列部分；及び
   （ｂ）上記２つの一本鎖末端配列の間に、二本鎖となった標的に相補的でない部分（ここで、該二本鎖となった部分は制限オリゴヌクレオチド配列を含む）；
   を有する環化アダプターにハイブリダイズし；
   （iv）ＤＮＡライゲースを用いて、該標的核酸フラグメントを環化し；
   （v）環化した標的核酸フラグメントを増幅する；
   ことを含む上記方法。