JP2009091286A

JP2009091286A - マコモタケの発酵処理物

Info

Publication number: JP2009091286A
Application number: JP2007262200A
Authority: JP
Inventors: Kosuke Fukada; 紘介深田; Koki Mori; 好希毛利; Kazuhisa Osumi; 和寿大隅
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2007-10-05
Filing date: 2007-10-05
Publication date: 2009-04-30
Anticipated expiration: 2027-10-05
Also published as: JP5138330B2

Abstract

【目的】マコモタケの発酵処理物を含有する抗酸化剤及び高血圧抑制剤を提供する。
【構成】本発明はマコモタケの発酵処理物を含有することを特徴とする、抗酸化剤及び高血圧抑制剤である。本発明のマコモタケの発酵処理物はマコモタケの抽出物と比較して、優れた抗酸化作用及びアンジオテンシン変換酵素阻害効果をもち、高血圧抑制効果を示した。また、本発明のマコモタケの発酵処理物はラットに対しても優れた血圧降下作用を示した。さらに、これらを含有する食品又は医薬品は、安全で優れた高血圧抑制作用を示した。
【選択図】なし

Description

本発明は、マコモタケの発酵処理物、又はその抽出物を含有する化粧品、食品、医薬品などに関する。

近年、生体成分を酸化させる要因として、フリーラジカルや活性酸素がとりあげられ、その悪影響が問題となっている。フリーラジカルや活性酸素は体内で生じ、コラーゲンなどの生体組織を分解あるいは架橋し、また、油脂類を酸化して、細胞に障害を与える過酸化脂質をつくると言われている。このような障害は、肌のしわや張りの低下等の老化の原因になると考えられており、老化を防ぐ方法の一つにフリーラジカルや活性酸素を除去する方法が知られている。従来、抗酸化剤にはアスコルビン酸、トコフェロールやＢＨＴ（３，５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエン）等が用いられ、活性酸素消去剤としてスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等が用いられてきた。

しかしながら、アスコルビン酸やＳＯＤは不安定であり、製剤化が難しく、トコフェロールも効果が充分であるとは言えない。また、合成化合物であるＢＨＴ等は安全性に問題があり、配合量に制限があることから、化学合成品ではなく、安定でかつ副作用の少ない天然原料が望まれている。

また、高血圧の重要な要因の一つとして、血圧の上昇系を担うレニン−アンジオテンシン系があげられる。このレニン−アンジオテンシン系において、中心的な役割を果しているのがアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）である。ＡＣＥは、不活性型のアンジオテンシンＩを血圧上昇作用が高い、活性型のアンジオテンシンＩＩに変換する酵素である。そこで、ＡＣＥの活性を阻害することにより、血圧の上昇を抑制することが可能になる。最近では、ＡＣＥの活性を阻害することによって、レニン−アンジオテンシン系を調節して高血圧を抑制する試みが行われている。

そのようなＡＣＥ活性阻害を有する物質としては、合成化合物ではカプトプリル等のＬ−プロリン誘導体、天然物由来では蛇毒由来のブラディキニン増強因子等が知られている。このうちカプトプリルは経口降圧剤として既に実用化されているが、アレルギー症状、頭痛、めまい、ふらつき等の副作用を起こす場合がある。

マコモタケの抽出物を利用したものとしては、化粧品が知られており（特許文献１）、また、飲食品としては破骨細胞分化増殖阻害組成物に応用されている（特許文献２）。
特開平４−１２０００９特開２００６−１９３４５２

しかし、これらの検討では抗酸化作用及びＡＣＥ阻害作用については報告されておらず、マコモタケを発酵処理することによってより優れた効果が得られることについても知られていない。

以上のことから、本発明は安全性、安定性が高く、より優れた抗酸化作用及びＡＣＥ阻害作用を有するマコモタケの発酵処理物を提供することを目的としている。

このような事情により、本発明者らは鋭意検討した結果、マコモタケに発酵処理を施すことにより、発酵処理を行わないものよりも優れた抗酸化作用（フリーラジカル捕捉除去作用）及び高血圧抑制作用（ＡＣＥ阻害作用）をもつことを見出し、本発明を完成するに至った。

よって、本発明はマコモタケの発酵処理物、及びその抽出物を含有する抗酸化剤及び高血圧抑制剤を提供する。

本発明に用いるマコモタケとは、マコモ（学名：ＺＩＺＡＮＩＡＬＡＴＩＦＯＬＩＡ）の茎の部分に黒穂菌の一種の糸状菌（学名：ＵＳＴＩＬＡＧＯＥＳＣＵＬＥＮＴＡ）が寄生し、茎基部に形成する菌えいである。この菌えいは、黒穂胞子層の形成程度によってマコモズミ型とマコモタケ型がある。中国や台湾に自生又は植栽されているマコモの菌えいは、肥大が著しく「たけのこ」のようになるマコモタケ型である。この菌えいは、野菜として食用や薬用として用いられている。日本においてもマコモタケの栽培が行われており、容易に入手することができる。

本発明に用いるマコモタケの発酵処理物とは、生のマコモタケを凍結後、融解し、菌えいであるマコモタケ自身で発酵処理を行うことを特徴とする。凍結条件としては、０℃以下で凍結できればよく、好ましくは−２０℃〜０℃で凍結するのがよい。融解条件としては、氷が溶ける温度であればよく、常温であっても加温してもよい。発酵条件としては、１０℃〜８０℃、好ましくは２０℃〜６０℃の温度条件下で発酵させることが好ましい。このときの加熱時間は、１０時間以上、好ましくは１５時間〜４８時間が良い。４８時間を超えて加熱した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。上記の発酵処理法としては、マコモタケの植物体をそのまま用いても良いし、あるいはスライスにして行っても良いし、みじん切りやミキサーにかけて細断して行っても良く、発酵効率を考慮して適宜行うことができる。さらに、本発明のマコモタケの発酵処理物は上記の発酵処理に加え、加熱乾燥を行うことが好ましい。加熱温度としては、５０℃〜１５０℃が好ましく、６０℃〜１２０℃が最も好ましい。また、加熱時間としては、１時間〜４８時間が好ましく、６時間〜２４時間が最も好ましい。

本発明に用いるマコモタケの発酵処理物の抽出物とは、マコモタケの発酵処理物から溶媒で抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。

抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。

本発明の抗酸化剤及び高血圧抑制剤は、マコモタケの発酵処理物の抽出物をそのまま使用してもよく、効果を損なわない範囲内で、希釈剤を用いることができ、希釈剤としては固体、半固体、液体のいずれでもよく、例えば次のものがあげられる。すなわち、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、香料、保存料、溶解補助剤、溶剤等があげられる。具体的には、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロース又はその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、界面活性剤、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等があげられる。

本発明の高血圧抑制剤は、食品又は医薬品のいずれにも用いることができる。食品の剤型としては、錠菓、カプセル剤、チョコレート、ガム、飴、飲料等の通常の食品形態を採用することができる。医薬品の剤型としては、例えば、経口用として散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤等である。非経口用としては注射液にすることができる。また、座薬とすることも出来る。一日の投与量は、体重１ｋｇ当たり、抽出物として１ｍｇ〜１０００ｍｇ好ましくは１０ｍｇ〜５００ｍｇ投与することができ、２〜３回に分けて投与するのが望ましい。

本発明の抗酸化剤は化粧品、食品、医薬品などの全量に対し、０．００１〜１０％好ましくは０．０１〜１％配合することができる。

本発明の皮膚外用剤には、マコモタケの発酵処理物の抽出物をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、外用剤に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することができる。

本発明の皮膚外用剤は、化粧品、又は医薬品に用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤等の皮膚に適用されるものが挙げられる。

本発明に用いる上記抽出物の配合量は、本発明の皮膚外用剤全量に対し、固形物に換算して０．００１〜１０％好ましくは０．０１〜１％の配合が良い。０．００１％未満では十分な効果は望みにくい。１０％を越えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

また、本発明のマコモタケの発酵処理物は医薬部外品（内用、外用とも）としても利用可能である。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。

製造例１マコモタケ発酵処理物の調製１
生のマコモタケ１１０ｇを−２０℃で凍結した後、室温で融解して５ｍｍ程度にスライスした。その後、温度６０℃の温度条件下で２４時間発酵させ、次いで１００℃で１２時間加熱乾燥することでマコモタケの発酵処理物を４．６ｇ得た。これを製造例４〜７に用いた。

製造例２マコモタケ発酵処理物の調製２
生のマコモタケ１１０ｇを−１０℃で凍結した後、室温で融解して２ｍｍ程度にスライスした。その後、温度５０℃の温度条件下で２４時間発酵させ、次いで８０℃で１２時間加熱乾燥することでマコモタケの発酵処理物を４．８ｇ得た。

製造例３マコモタケ発酵処理物の粉末の調製
生のマコモタケ１１０ｇを−２０℃で凍結した後、室温で融解して５ｍｍ程度にスライスした。その後、温度６０℃の温度条件下で２４時間発酵させ、凍結乾燥し、粉砕することでマコモタケ発酵処理物の粉末を４．５ｇ得た。これを製造例８に用いた。

製造例４マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物の調製１
マコモタケ発酵処理物（製造例１）の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してマコモタケ発酵処理物の熱水抽出物を７．８ｇ得た。

製造例５マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物の調製
マコモタケ発酵処理物（製造例１）の乾燥物２０ｇに精製水２００ｍＬ及びエタノール２００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物を６．３ｇ得た。

製造例６マコモタケ発酵処理物のエタノール抽出物の調製
マコモタケ発酵処理物（製造例１）の乾燥物２０ｇにエタノール４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物を１．１ｇ得た。

製造例７マコモタケ発酵処理物の５０％１，３−ブチレングリコール抽出物の調製
マコモタケ発酵処理物（製造例１）の乾燥物２０ｇに精製水２００ｍＬ及び１，３−ブチレングリコール２００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マコモタケ発酵処理物の５０％１，３−ブチレングリコール抽出物を３．９ｇ得た。

製造例８マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物の調製２
マコモタケ発酵処理物の粉末（製造例３）を用いて製造例４と同様に抽出し、マコモタケの発酵処理物の熱水抽出物を８．１ｇ得た。

比較製造例１マコモタケの熱水抽出物の調製
生のマコモタケ６０ｇを−２０℃で凍結した後、室温で融解して５ｍｍ程度にスライスした。その後、精製水５００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してマコモタケの熱水抽出物を３．７ｇ得た。

比較製造例２マコモタケの５０％エタノール抽出物の調製
生のマコモタケ６０ｇを−２０℃で凍結した後、室温で融解して５ｍｍ程度にスライスした。その後、精製水２５０ｍＬ及びエタノール２５０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マコモタケの５０％エタノール抽出物を３．４ｇ得た。

比較製造例３マコモタケのエタノール抽出物の調製
生のマコモタケ６０ｇを−２０℃で凍結した後、室温で融解して５ｍｍ程度にスライスした。その後、エタノール５００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マコモタケのエタノール抽出物を０．４ｇ得た。

処方例１化粧水
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）０．１部
２．１，３−ブチレングリコール８．０
３．グリセリン２．０
４．キサンタンガム０．０２
５．クエン酸０．０１
６．クエン酸ナトリウム０．１
７．エタノール５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

比較例１従来の化粧品
処方例１において、マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物をマコモタケの熱水抽出物（比較製造例１）に置き換えたものを従来の化粧水とした。

処方例２クリーム
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物（製造例５）０．０５部
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル０．０５
１３．１，３−ブチレングリコール８．５
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

比較例２従来のクリーム
処方例２において、マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物をマコモタケの５０％エタノール抽出物（比較製造例２）に置き換えたものを従来のクリームとした。

処方例３乳液
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）０．００１部
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例４ゲル剤
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例８）１．０部
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）０．１
５．香料適量
６．１，３−ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５と、成分１及び６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例５パック
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）０．１部
２．マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物（製造例５）０．１
３．ポリビニルアルコール１２．０
４．エタノール５．０
５．１，３−ブチレングリコール８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
８．クエン酸０．１
９．クエン酸ナトリウム０．３
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。

処方例６ファンデーション
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の５０％エタノール抽出物（製造例５）１．０部
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１０．ベントナイト０．５
１１．プロピレングリコール４．０
１２．トリエタノールアミン１．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．二酸化チタン８．０
１５．タルク４．０
１６．ベンガラ１．０
１７．黄酸化鉄２．０
１８．香料適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例７浴用剤
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）５．０部
２．炭酸水素ナトリウム５０．０
３．黄色２０２号（１）適量
４．香料適量
５．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。

処方例８軟膏
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）０．０１部
２．マコモタケ発酵処理物の５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
（製造例７）０．５
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
４．モノステアリン酸グリセリン１０．０
５．流動パラフィン５．０
６．セタノール６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル０．１
８．プロピレングリコール１０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例９散剤
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）２０．０部
２．乾燥コーンスターチ３０．０
３．微結晶セルロース５０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。

処方例１０錠剤
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物のエタノール抽出物（製造例６）１．０部
２．乾燥コーンスターチ２９．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム２０．０
４．微結晶セルロース４０．０
５．ポリビニルピロリドン７．０
６．タルク３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。

処方例１１錠菓
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）１．０部
２．乾燥コーンスターチ５０．０
３．エリスリトール４０．０
４．クエン酸５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル３．０
６．香料適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。

処方例１２飲料１
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の熱水抽出物（製造例４）２０．０部
２．果糖ブドウ糖液糖１２．５
３．クエン酸０．1
４．香料０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜８を混合し、飲料１とする。

処方例１３粉末飲料
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の粉末（製造例３）４５．０部
２．粉糖３０．０
３．粉末ピーチ果汁１５．０
４．Ｌ−アスコルビン酸８．０
５．結晶クエン酸１．２
６．クエン酸ナトリウム０．７５
７．アスパルテーム０．０２
８．粉末ピーチ香料０．０３
［製造方法］成分１〜８を混合し、粉末飲料とする。

処方例１４飲料２
処方配合量
１．マコモタケ発酵処理物の粉末（製造例３）２０．０部
２．果糖ブドウ糖液糖１２．５
３．クエン酸０．１
４．香料０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜８を混合し、飲料２とする。

次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。

実験例１フリーラジカル捕捉除去作用
フリーラジカル捕捉除去作用の評価を行った。陽性対照としてはアスコルビン酸を用いた。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルであるα，α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカルの量を波長５１７ｎｍの吸光度の減少量から測定した。

試料は、製造例４，５，６，８及び比較製造例１，２，３を用いた。

フリーラジカル捕捉除去作用の測定方法
各試料を、最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌとなるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）２ｍｌに無水エタノール２ｍｌ及び０．５ｍＭＤＰＰＨ無水エタノール溶液１ｍｌを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール２ｍｌに試料を加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度（Ｂ）を測定した。フリーラジカル捕捉除去率は、以下に示す式より算出した。
フリーラジカル捕捉除去率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００

これらの試験結果を表１に示した。マコモタケ発酵処理物の抽出物は、優れたフリーラジカル捕捉除去作用を有していることが認められた。

実験例２ヒト皮膚繊維芽細胞ＮＢ1ＲＧＢを用いた過酸化脂質生成抑制作用
紫外線による繊維芽細胞の過酸化脂質生成抑制効果をＴＢＡ法にて測定した。

試料は製造例４及び製造例５を用いた。

対数増殖期にある繊維芽細胞をφ６０ｍｍｄｉｓｈに３×１０^４細胞播種し、Ｅａｇｌｅｓ’ＭＥＭ（１０％ＦＢＳを含む）を加え、３７℃、５％ＣＯ_２条件下にて培養した。培養６日後に最終濃度１．０ｍｇ／ｍＬになるように試料を加えたＰＢＳを添加し、３７℃、５％ＣＯ_２条件下にて３０分培養後、ＵＶＡ（６．５Ｊ／ｃｍ^２）を照射した。照射後、細胞をｄｉｓｈから剥離し、細胞を超音波破砕した後、細胞破砕液０．２ｍＬに、８．１％ＳＤＳ０．２ｍＬ、２０％酢酸（ｐＨ３．５）１．５ｍＬ、０．８％チオバルビツール酸ナトリウム１．５ｍＬ、蒸留水０．６ｍＬを加え、よく攪拌した。さらに４００ｍＭＢＨＴ０．０１ｍＬを加え、１００℃で１時間反応させた。冷却後、反応液２ｍＬに６．２５％ピリジン含有ｎ−ブチルアルコール溶液２ｍＬを加え、よく攪拌した後、遠心分離し、ｎ−ブチルアルコール層の蛍光強度（励起波長５１５ｎｍ、蛍光波長５５３ｎｍ）を測定し、過酸化脂質量とした。さらに、紫外線を照射しないものを作成し、紫外線照射したものとの差を過酸化脂質生成量とした。過酸化脂質生成抑制率は、試料の代わりに溶媒のみを添加した場合の過酸化脂質生成量を１００とし、試料添加時の過酸化脂質生成量との割合から算出した。

これらの結果を表２に示した。マコモタケの発酵処理物は優れた過酸化脂質生成抑制作用を有していることが認められた。

実験例３ＡＣＥ阻害活性作用
高血圧抑制効果は、ＡＣＥ阻害活性を指標に測定した。ＡＣＥ阻害活性が強いもの程、血圧降下作用が強いとされている。ＡＣＥ阻害活性の測定方法は、ツツミらの改良Ｃｕｓｈｍａｎ法（Ｊ．ＷｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，４４，４６３，１９９８）に準じた。

試料は製造例４，５，６，８及び比較製造例１，２，３を用いた。

各試料を５００μｇ／ｍＬとなるように水に溶解し、試料溶液とする。試料溶液０．５ｍＬに３．０ｍＵ／ｍＬのＡＣＥ溶液０．２５ｍＬを加え、３７℃、３分間保持した後、５ｍＭのヒプリルヒスチジルロイシンを含む１００ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）溶液０．２５ｍＬを加えた。このとき、試料濃度は２５０μｇ／ｍＬである。これを３７℃、３０分間反応を行った後、０．１ＭＮａＯＨ２．０ｍＬを加えて反応を停止した。次に０．２％オルトフタルアルデヒドメタノール溶液０．１ｍＬを加え、０℃で１５分間遮光放置した。これに、１．５Ｍリン酸溶液０．４ｍＬを加えて被験液とし、蛍光強度（励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４８０ｎｍ）を測定した。ＡＣＥ阻害活性（％）は、被験液の蛍光強度を（Ｃ）、試料の代わりに水を加えたときの値を（Ａ）、（Ｃ）の酵素ブランク（酵素の代わりに水を加えたもの）の値を（Ｄ）、（Ａ）の酵素ブランクの値を（Ｂ）として、次式から算出した。
ＡＣＥ阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００

これらの実験結果を表３に示した。その結果、マコモタケ発酵処理物の抽出物は、マコモタケの抽出物と比較して優れたＡＣＥ阻害活性作用を示した。

実験例４高血圧抑制作用
試料は、製造例４，６及び比較製造例１，３を用いた。
雄性高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ）を生後１０週齢から１２週齢まで市販の固形飼料と水道水で飼育し、上記試料を１群８匹、体重１ｋｇ当たり、１ｇの試料を水に分散させて経口投与し、投与前と投与２時間後の血圧を測定した。血圧は、非観血式尾動脈血圧測定装置により、尾動脈で測定し、その最高血圧の平均値を血圧の値とした。対照群には水を投与した。

これらの実験結果を、表４に示した。その結果、マコモタケ発酵処理物の抽出物は、マコモタケの抽出物と比較して優れた高血圧抑制作用を示した。

実験例５使用試験
処方例１の化粧水、処方例２のクリーム、比較例１の従来の化粧品及び比較例２の従来のクリームを用いて、女性３０人（２１〜４６才）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、肌のシワ、タルミの改善効果をアンケートにより判定した。

これらの試験結果を表５に示した。その結果、マコモタケ発酵処理物の抽出物を含有する皮膚外用剤は優れたシワ、タルミの改善作用を示した。なお、試験期間中、皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。また、処方成分の劣化についても問題なかった。

処方例３〜８についても同様に使用試験を行ったところ、優れたシワ、タルミ等の改善作用を示した。

以上のことから、本発明のマコモタケの発酵処理物は、マコモタケの抽出物と比較してフリーラジカル捕捉除去作用及びＡＣＥ阻害活性作用に優れており、化粧品、食品、医薬品などに利用できる。

Claims

生のマコモタケを凍結後、融解し、さらに発酵処理を行うことを特徴とするマコモタケの発酵処理物、又はその抽出物。
生のマコモタケを凍結後、融解し、発酵処理を行った後、加熱乾燥することを特徴とするマコモタケの発酵処理物、又はその抽出物。
請求項１又は２に記載の発酵処理物、又はその抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
請求項１又は２に記載の発酵処理物、又はその抽出物を含有することを特徴とする高血圧抑制剤。
請求項１又は２に記載の発酵処理物、又はその抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
請求項１又は２に記載の発酵処理物、又はその抽出物を含有することを特徴とする食品又は医薬品。