JP2008528060A5

JP2008528060A5 -

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Publication number: JP2008528060A5
Application number: JP2008500705A
Authority: JP
Filing date: 2006-01-26
Publication date: 2009-03-12

Description

代表的に、リンカーは、ＰＣＲクローニングによって導入される。例えば、５アミノ酸のリンカー（Ｇ_４Ｓ、配列番号１３６）をコードする合成オリゴヌクレオチドが、ＢｏＮＴ／Ａ−中和抗体Ｖ_Ｈ遺伝子およびＢｏＮＴ／Ａ−中和抗体Ｖ_Ｌ遺伝子をＰＣＲ増幅するために使用され得、次いでこれらの遺伝子は、ＢｏＮＴ／Ａ−中和ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）遺伝子を作製するために一緒にスプライシングされる。次いでこれらの遺伝子は、適切なベクター中にクローニングされ、発現され、そして当業者に周知の標準的な方法によって精製される。

（Ｂ．ベクターの構築）
ベクターｐＳＹＮ３を構築するために、１．５ｋｂのスタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントを、プライマーＬＭＢ３（Ｍａｒｋｓら、（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：９８５−９９１）、およびＥ−タグバック（ｔａｇｂａｃｋ）（５’−ＡＣＣＡＣＣＧＡＡＴＴＣＴＴＡＴＴＡＡＴＧＧＴＧＡＴＧＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＡＣＣＡＧＣＣＧＧＴＴＣＣＡＧＣＧＧ−３’、（配列番号１３７））を用いたＰＣＲを使用して、ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ．）から増幅した。上記ＤＮＡフラグメントを、ＳｆｉＩおよびＮｏｔｆを用いて設計し、ゲル濾過し、そしてＳｆｉＩおよびＮｏｔＩに
よって消化したｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅにライゲーションした。ライゲーションしたＤＮＡを、ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＴＧｌ（Ｇｉｂｓｏｎ、（１９９１）ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅ．ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕ．Ｋ．）を形質転換するために使用し、そして正しい挿入物を含むクローンを、ＤＮＡ配列決定することによって同定した。得られたベクターは、ファージに提示されたｓｃＦｖを、Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズムにＣ末端Ｅエピトープタグ（その後にヘキサヒスチジンタグを伴う）を有するネイティブなｓｃＦｖとして分泌させるためのＳｆｉＩ−ＮｏｔＩフラグメントまたはＭｃｏｌ−ＮｏｔＩフラグメントとしてサブクローニングすることを可能にする。

【図面の簡単な説明】
【０３２９】
【図１】図１は、ファージライブラリーを使用したインビトロ抗体産生のためのストラテジーを示す。ｍＲＮＡは、脾臓細胞から調製され、第１のｃＤＮＡ鎖が、調製され、そして抗体Ｖ_Ｈ遺伝子および抗体Ｖ_Ｌ遺伝子は、ＰＣＲによって増幅される。Ｖ_Ｈ遺伝子およびＶ_Ｌ遺伝子は、ｓｃＦｖ遺伝子のレパートリーを作製するためにＰＣＲを使用して１つにランダムにスプライシングされる。上記ｓｃＦｖ遺伝子レパートリーは、ファージミドベクター中にファージミドマイナーコートタンパク質（ｐＩＩＩ）をコードする遺伝子（ｇＩＩＩ）と一緒にインフレームでクローニングされる。得られたファージ抗体ライブラリー中の各ファージは、その表面上にｓｃＦｖ−ｐＩＩＩ融合タンパク質を発現し、そしてｓｃＦｖをコードする遺伝子を内部に含む。特異的抗原を結合するファージ抗体は、固定化された抗原に対するアフィニティークロマトグラフィーによって結合しないファージ抗体から分離され得る。単一のラウンドの選択は、その抗体の親和性に依存して、２０〜１０，０００の範囲の因数によって抗原結合ファージ抗体の数を増加させる。溶出したファージ抗体は、Ｅ．ｃｏｌｉに感染させる為に使用され、そのＥ．ｃｏｌｉは、次いで、次のラウンドの選択のためのさらなるファージ抗体を産生する。ラウンドを繰り返した選択は、本来１０億分の１未満の頻度で存在した抗原結合ファージ抗体の単離を可能にする。
【図２】図２のパネルＡおよびパネルＢは、ＢｏＮＴ／ＡＨ_Ｃに結合するｓｃＦｖをエピトープマッピングするために使用される技術を例示するセンサーグラムを示す。エピトープマッピングは、対において研究されるｓｃＦｖを用いて、ＢＩＡｃｏｒｅにおける表面プラズモン共鳴を使用することによって行なわれた。各ｓｃＦｖは、上記ＢＩＡｃｏｒｅに注入され、そして飽和が達成されるまで、センサーチップ表面にカップリングされたＢｏＮＴ／ＡＨ_Ｃに結合し得る。各ｓｃＦｖ単独についての結合された量（ＲＵ）は、上記２種のｓｃＦｖが、混合され、そして一緒に注入された場合に結合された量と比較された。点ａは、その後に注入の始まりが続くベースラインを示す。点ｂ_１および点ｂ_２は、最初の会合相を示す。点ｃ_１および点ｃ_２は、解離の始まりを示す。点ａと点ｃとの間のＲＵの差は、ＢｏＮＴ／ＡＨ_Ｃに結合されたｓｃＦｖの量に等しい。パネルＡは、異なるエピトープを認識する２種のｓｃＦｖ（Ｃ２５およびＣ９）を示す。一緒に注入された２種のｓｃＦｖの結合された量（Ｃ９／Ｃ２５、点ｃ_２）は、単独で注入されたその２種のｓｃＦｖ（ｃ_１）の合計である。パネルＢは、エピトープを認識する２種のｓｃＦｖ（Ｃ３９およびＣ２５）を示す。一緒に注入された２種のｓｃＦｖの結合された量（Ｃ２５／Ｃ３９；点ｃ）は、単独で注入されたその２種のｓｃＦｖ（ｃ）と同じである。点ｂ_１と点ｃ_１との間、点ｂ_２と点ｃ_２との間、および点ｂ_１と点ｃとの間のＲＵの大きな差は、ｓｃＦｖと泳動緩衝液との間の屈折率の差に起因する。
【図３】図３は、マウス片側横隔膜モデルにおけるＢｏＮＴ／ＡのｓｃＦｖ中和の評価を示す。マウス片側横隔膜の電気刺激後に発生した単収縮張力は、２０のｐＭＢｏＮＴ／Ａ（コントロール）、２０ｐＭのＢｏＮＴ／Ａ＋２０ｎＭのｓｃＦｖＳ２５、ｓｃＦｖＣ２５、ｓｃＦｖ１Ｃ６、もしくはｓｃＦｖ１Ｆ３（それぞれ、エピトープ１〜４を代表する）、または各２０ｎＭの最終濃度におけるＳ２５とＣ２５との組み合わせの添加前（−３０分〜０分）、および添加後に測定された。結果は、定常状態における単収縮張力（０分における）対時間の分数として表される。ｓｃＦｖ１Ｃ６およびｓｃＦｖ１Ｆ３が、５０％の単収縮減少までの時間を変化させないのに対して、ｓｃＦｖＣ２５およびｓｃＦｖＳ２５は、それを顕著に延長する。Ｓ２５とＣ２５との組み合わせは、Ｃ２５単独またはＳ２５単独と比較して、神経麻痺までの時間を顕著に延長した。
【図４】図４は、ｍＡｂによるインビトロ毒素中和、ｍＡｂの対によるインビトロ毒素中和、およびオリゴクローナルＡｂによるインビトロ毒素中和を示す。５０％の単収縮減少までの時間は、単離されたマウス片側横隔膜において測定され、そして毒素のみのコントロール、単一のｍＡｂ（Ｃ２５、Ｓ２５、または３Ｄ１２）、ｍＡｂの対（Ｃ２５＋Ｓ２５、Ｃ２５＋３Ｄ１２、または３Ｄ１２＋Ｓ２５）、およびオリゴクローナルＡｂ（Ｃ２５＋３Ｄ１２＋Ｓ２５）について繰り返された。単一のｍＡｂは、毒素のみと比較して、神経麻痺までの時間を顕著に延長した。ｍＡｂの対は、単一のｍＡｂと比較して、神経麻痺までの時間を顕著に延長した。
【図５】図５Ａおよび図５Ｂは、ｍＡｂによるインビボ毒素中和（図５Ａ）およびｍＡｂの対によるインビボ毒素中和（図５Ｂ）を示す。５０マイクログラムの全Ａｂは、２０マウスＬＤ_５０の毒素または１００マウスＬＤ_５０の毒素と混合され、そしてｉ．ｐ．に注入された。死亡までの時間および生存するマウスの数が、決定された。単一のｍＡｂは、２０ＬＤ_５０からの顕著な保護を示さなかった。１００ＬＤ_５０によってチャレンジされた全てのマウスは、ｍＡｂの任意の対を与えた場合、生存した。
【図６】図６は、ｍＡｂによるインビボ毒素中和、ｍＡｂの対によるインビボ毒素中和、およびオリゴクローナルＡｂによるインビボ毒素中和を示す。インビボ毒素中和は、漸増性の毒素チャレンジ用量におけるｍＡｂ、ｍＡｂの対、およびオリゴクローナルＡｂについて決定された。単一のｍＡｂは、顕著な保護を示さなかった。対照的に、全てのｍＡｂ対は、少なくとも１００ＬＤ_５０を中和し、最も強力な対（Ｃ２５＋３Ｄ１２）に対して１，５００ＬＤ_５０の毒素によってチャレンジされたマウスの約５０％が、生存した。オリゴクローナルＡｂは、よりさらに強力であり、２０，０００ＬＤ_５０の毒素によってチャレンジされたマウスの約５０％が、生存した。
【図７】図７は、抗体の溶液における平衡解離定数（Ｋ_ｄ）を示す。単一のｍＡｂＣ２５およびｍＡｂ３Ｄ１２の溶液におけるＫ_ｄは、漸増性のＢｏＮＴＨ_Ｃ毒素の関数として存在する遊離のＡｂの量を測定することによって、フロー蛍光光度計において決定した。等モル量でＣ２５ｍＡｂと３Ｄ１２ｍＡｂとを組み合わせるで、Ｃ２５Ｋ_ｄが、１００倍より大きく減少した。第３のＡｂ（Ｓ２５）を加えることで、そのＫｄが、１８ｐＭまでさらに４倍減少した。
【図８】図８Ａおよび図８Ｂは、可溶性ｓｃＦｖ抗体のＥＬＩＳＡによる特徴付けを示す。アッセイは、ポリスチレンプレート上にコーティングされたそれぞれの示されたＢｏＮＴ血清型、ＢｏＮＴ／ＡＨＣおよびＢｏＮＴ／ＡＨＮを固定化することによって行なわれた。図８Ａ：細菌によって発現された、コーティングした抗原と反応性である免疫性ライブラリーに由来するｓｃＦｖ抗体は、ペルオキシダーゼ結合体化ｍＡｂ抗Ｅ抗体（１：２５００）を用いて検出された。図８Ｂ：細菌によって発現された、コーティングした抗原と反応性である非免疫性ライブラリーに由来するｓｃＦｖ抗体は、９Ｅ１０抗体（１：５００）を用い、次いでペルオキシダーゼ結合体化抗マウス−Ｆｃ抗体を用いて検出された。そのアッセイの結果は、タンパク質濃度に対して正規化されていない４０５ｎｍにおける吸光度として示される。
【図９】図９Ａおよび図９Ｂは、ＢｏＮＴ／ＡＨ_Ｃに結合するｓｃＦｖのエピトープマッピングのセンサーグラムを示す。点「ａ」：注入の始まり、点「ｂ」：注入の終わり、および点「ｃ」：結合されたｓｃＦｖの量。点ｂと点ｃとの間のＲＵの差は、ｓｃＦｖと泳動緩衝液との間の屈折率の差に起因する。図９Ａ：ｓｃＦｖ３Ａ６およびｓｃＦｖ３Ｄ１２は、その２種のｓｃＦｖが混合された場合に結合されたＲＵが増加しないことによって示されるように、同じエピトープを認識する。図９Ｂ：ｓｃＦｖ２Ａ９およびｓｃＦｖ２Ａ１は、その２種のｓｃＦｖが混合された場合に結合されたＲＵのほぼ相加的な増加によって示されるように、異なるエピトープを認識する。
【図１０】図１０Ａおよび図１０Ｂは、ＢｏＮＴ／ＡＨＣドメインを標的とするｓｃＦｖ抗体の個々の効果および組み合わせた効果を示す。図１０Ａ：マウス片側横隔膜の電気刺激後に発生した単収縮張力は、２０ｐＭのＢｏＮＴ／Ａ（コントロール）、２０ｐＭのＢｏＮＴ／Ａ＋２０ｎＭのクラスターＩのメンバー（３Ｄ１２）、クラスターＩＩのメンバー（３Ｆ１０）、Ｃ２５またはＳ２５の添加前（−３０分〜０分）、および添加後に測定された。ｓｃＦｖ３Ｆ１０が、５０％の単収縮減少までの時間を変化させなかったのに対して、ｓｃＦｖＣ２５、ｓｃＦｖＳ２５またはｓｃＦｖ３Ｄ１２は、５０％の単収縮減少までの時間を顕著に延長する。図１０Ｂ：Ｃ２５と、Ｓ２５または３Ｄ１２（クラスターＩ）との組み合わせは、５０％の単収縮減少までの時間を顕著に延長する。
【図１１】図１１は、公開されたボツリヌス神経毒素遺伝子の系統樹を示す。その系統樹は、ＶｅｃｔｏｒＮＴＩソフトウェアを使用して、公開されたクロストリジウム属の神経毒素遺伝子のＤＮＡ配列から構築された。
【図１２】図１２Ａおよび図１２Ｂは、ＢｏＮＴ／Ａ遺伝子配列の分析を示す。図１２Ａ：ＢｏＮＴ／Ａ遺伝子の系統樹は、２つのクラスター（Ａ１およびＡ２）を示す。図１２Ｂ：ＢｏＮＴ／Ａ１とＢｏＮＴ／Ａ２との間のアミノ酸側鎖の相違のモデル。ＢｏＮＴ／Ａ重鎖結合ドメインは、この図の上部における白色であり、青色の推定上のガングリオシド結合残基および赤色のガングリオシドを有する。重鎖トランスロケーションドメインは、橙色であり、そして軽鎖は、この図の下部における白色である。ＢｏＮＴＡ１毒素とＢｏＮＴＡ２毒素との間の側鎖の相違は、緑色で示される。
【図１３】図１３は、ＢｏＮＴ／Ｂ遺伝子配列の分析を示す。ＢｏＮＴ／Ｂ遺伝子の系統樹は、４つのクラスターを示す：ＢｏＮＴ／Ｂ１、ＢｏＮＴ／Ｂ２、非タンパク質分解性ＢｏＮＴ／Ｂ、および二価ＢｏＮＴ／Ｂ。クラスターの間の相違の％は、３．６％〜７．７％の範囲である。ＢｏＮＴ／Ａと同様に、最も大きい相違は、重鎖において見られる。
【図１４】図１４は、捕捉ＥＬＩＳＡによって決定された場合の、ＢｏＮＴ／Ａ１毒素およびＢｏＮＴ／Ａ２毒素に対するＢｏＮＴ／ＡＨ_Ｃモノクローナル抗体（Ｃ２５、Ｂ４、Ｓ２５、および３Ｄ１２）の結合を示す。ウェルは、示されたｍＡｂによってコーティングされ、次いで純粋かまたは複合体のＢｏＮＴ／Ａ１またはＢｏＮＴ／Ａ２の濃度の変動が行なわれた。毒素結合は、ポリクローナルウマＢｏＮＴ／Ａ抗血清を使用して検出された。Ａ１毒素は、塗りつぶした四角によって示される；Ａ２毒素は、中抜きの円によって示される。純粋な毒素は、実線であり；毒素複合体は、破線である。
【図１５】図１５は、捕捉ＥＬＩＳＡによって決定された場合の、ＢｏＮＴ／Ａ１毒素およびＢｏＮＴ／Ａ２毒素に対する、ＢｏＮＴ／Ａトランスロケーションドメインおよび軽鎖モノクローナル抗体の結合を示す。方法は、図１４について記載される通りであった。
【図１６】図１６は、ｍＡｂ対のＢｏＮＴ／Ａ１毒素によってチャレンジされたマウスを保護する能力を示す。マウスＬＤ_５０の範囲のＢｏＮＴ／Ａ１毒素複合体は、５０ｕｇの等モル比の示されたｍＡｂと混合され、そしてその混合物は、腹腔内に注射された。生存するマウスの数対チャレンジ用量が、示される。
【図１７Ａ】図１７Ａおよび図１７Ｂは、ｍＡｂトリプレットのＢｏＮＴ／Ａ１毒素またはＢｏＮＴ／Ａ２毒素によってチャレンジされたマウスを保護する能力を示す。マウスＬＤ_５０の範囲のＢｏＮＴ／Ａ１毒素複合体（図１７Ａ）またはＢｏＮＴ／Ａ２毒素複合体（図１７Ｂ）は、５０ｕｇの等モル比の示されたｍＡｂと混合され、そしてその混合物は、腹腔内に注射された。生存するマウスの数対チャレンジ用量が、示される。
【図１７Ｂ】図１７Ａおよび図１７Ｂは、ｍＡｂトリプレットのＢｏＮＴ／Ａ１毒素またはＢｏＮＴ／Ａ２毒素によってチャレンジされたマウスを保護する能力を示す。マウスＬＤ_５０の範囲のＢｏＮＴ／Ａ１毒素複合体（図１７Ａ）またはＢｏＮＴ／Ａ２毒素複合体（図１７Ｂ）は、５０ｕｇの等モル比の示されたｍＡｂと混合され、そしてその混合物は、腹腔内に注射された。生存するマウスの数対チャレンジ用量が、示される。
【図１８】図１８。変異され、そして選択された抗体についての配列（ＨＵ−Ｃ２５（配列番号４）、ＡＲ１（配列番号５）、ＡＲ２（配列番号６）、ＡＲ３（配列番号７）、ＡＲ４（配列番号８）、ＣＲ１（配列番号９））。ダッシュは、保存された残基を示す。文字は、変異された残基を示す。
【図１９Ａ】図１９Ａおよび図１９Ｂ。変異され、そして選択された抗体についての配列。図１９Ａ：３Ｄ１２（配列番号１０）、およびＲＡＺ１（配列番号１１））．図１９Ｂ：ＩＮＧ１（配列番号１２）、１Ｄ１１（配列番号１３）、２Ｇ１１（配列番号１４）、５Ｇ４（配列番号１５）、ＩＮＧ２（配列番号１６）。ダッシュは、保存された残基を示す。文字は、変異された残基を示す。
【図１９Ｂ】図１９Ａおよび図１９Ｂ。変異され、そして選択された抗体についての配列。図１９Ａ：３Ｄ１２（配列番号１０）、およびＲＡＺ１（配列番号１１））．図１９Ｂ：ＩＮＧ１（配列番号１２）、１Ｄ１１（配列番号１３）、２Ｇ１１（配列番号１４）、５Ｇ４（配列番号１５）、ＩＮＧ２（配列番号１６）。ダッシュは、保存された残基を示す。文字は、変異された残基を示す。
【図２０】図２０Ａおよび図２０Ｂは、ＨｕＣ２５（図２０Ａ）および３Ｄ１２（図２０Ｂ）ｓｃＦｖの酵母ディスプレイを使用した親和性の成熟のために使用されたスキームを示す。
【図２１−１】図２１Ａ〜図２１Ｄは、野生型の親和性および酵母が提示した親和性が成熟したｓｃＦｖの親和性を示す。図２１Ａ：ＨｕＣ２５およびＡＲ１；図２１Ｂ：ＡＲ１およびＡＲ２；図２１Ｃ：ＡＲ２およびＡＲ４；図２１Ｄ：３Ｄ１２およびＲＡＺ１。
【図２１−２】図２１Ａ〜図２１Ｄは、野生型の親和性および酵母が提示した親和性が成熟したｓｃＦｖの親和性を示す。図２１Ａ：ＨｕＣ２５およびＡＲ１；図２１Ｂ：ＡＲ１およびＡＲ２；図２１Ｃ：ＡＲ２およびＡＲ４；図２１Ｄ：３Ｄ１２およびＲＡＺ１。
【図２２】図２２は、野生型抗体および親和性が成熟した抗体を使用したフローサイトメトリーによるＢｏＮＴ／Ａの検出を示す。
【図２３】図２３Ａおよび図２３Ｂは、野生型および親和性が成熟した抗体によるＢｏＮＴ／Ａの中和の効力を示す。図２３Ａ：１００マウスＬＤ５０チャレンジ。図２３Ｂ：２００マウスＬＤ５０チャレンジ。
【図２４】図２４Ａ、図２４Ｂは、野生型抗体と親和性が成熟した抗体との対によるＢｏＮＴ／Ａの中和の効力を示す。図２４Ａ：５００マウスＬＤ_５０チャレンジ。図２４Ｂ：５０００マウスＬＤ_５０チャレンジ。
【図２５】図２５は、抗体の組み合わせによるＢｏＮＴ／Ａ２の中和を示す。
【図２６】図２６は、Ｈｕ−Ｃ２５系統の抗体（ＨＵ−Ｃ２５（配列番号１７）、ＡＲ１（配列番号１８）、ＡＲ２（配列番号１９）、ＡＲ３（配列番号２０）、ＡＲ４（配列番号２１）、ＣＲ１（配列番号２２）、およびＣＲ２（配列番号２３））のアライメントを示す。

Claims

ＢｏＮＴ／Ａを中和する抗体であって、該抗体は、少なくとも２種の異なるＢｏＮＴ／Ａサブタイプを、各サブタイプに対して約１０ｎＭより大きい親和性で結合する、抗体。
前記抗体は、前記ＢｏＮＴＡ１サブタイプおよび前記ＢｏＮＴＡ２サブタイプの両方を、それぞれ、約１０ｎＭより大きい親和性で結合する、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、１Ｄ１１ＶＬＣＤＲ１、１Ｄ１１ＶＬＣＤＲ２、１Ｄ１１ＶＬＣＤＲ３、１Ｄ１１ＶＨＣＤＲ１、１Ｄ１１ＶＨＣＤＲ２、１Ｄ１１ＶＨＣＤＲ３、２Ｇ１１ＶＬＣＤＲ１、２Ｇ１１ＶＬＣＤＲ２、２Ｇ１１ＶＬＣＤＲ３、２Ｇ１１ＶＨＣＤＲ１、２Ｇ１１ＶＨＣＤＲ２、２Ｇ１１ＶＨＣＤＲ３、５Ｇ４ＶＬＣＤＲ１、５Ｇ４ＶＬＣＤＲ２、５Ｇ４ＶＬＣＤＲ３、５Ｇ４ＶＨＣＤＲ１、５Ｇ４ＶＨＣＤＲ２、５Ｇ４ＶＨＣＤＲ３、ＣＲ１ＶＬＣＤＲ１、ＣＲ１ＶＬＣＤＲ２、ＣＲ１ＶＬＣＤＲ３、ＣＲ１ＶＨＣＤＲ１、ＣＲ１ＶＨＣＤＲ２、ＣＲ１ＶＨＣＤＲ３、ＣＲ２ＶＬＣＤＲ１、ＣＲ２ＶＬＣＤＲ２、ＣＲ２ＶＬＣＤＲ３、ＣＲ２ＶＨＣＤＲ１、ＣＲ２ＶＨＣＤＲ２、ＣＲ２ＶＨＣＤＲ３、ＩＮＧ２ＶＬＣＤＲ１、ＩＮＧ２ＶＬＣＤＲ２、ＩＮＧ２ＶＬＣＤＲ３、ＩＮＧ２ＶＨＣＤＲ１、ＩＮＧ２ＶＨＣＤＲ２、およびＩＮＧ２ＶＨＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも１種のＣＤＲを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、１Ｄ１１ＶＬＣＤＲ１、１Ｄ１１ＶＬＣＤＲ２、１Ｄ１１ＶＬＣＤＲ３、１Ｄ１１ＶＨＣＤＲ１、１Ｄ１１ＶＨＣＤＲ２、１Ｄ１１ＶＨＣＤＲ３、２Ｇ１１ＶＬＣＤＲ１、２Ｇ１１ＶＬＣＤＲ２、２Ｇ１１ＶＬＣＤＲ３、２Ｇ１１ＶＨＣＤＲ１、２Ｇ１１ＶＨＣＤＲ２、２Ｇ１１ＶＨＣＤＲ３、５Ｇ４ＶＬＣＤＲ１、５Ｇ４ＶＬＣＤＲ２、５Ｇ４ＶＬＣＤＲ３、５Ｇ４ＶＨＣＤＲ１、５Ｇ４ＶＨＣＤＲ２、５Ｇ４ＶＨＣＤＲ３、ＣＲ１ＶＬＣＤＲ１、ＣＲ１ＶＬＣＤＲ２、ＣＲ１ＶＬＣＤＲ３、ＣＲ１ＶＨＣＤＲ１、ＣＲ１ＶＨＣＤＲ２、ＣＲ１ＶＨＣＤＲ３、ＣＲ２ＶＬＣＤＲ１、ＣＲ２ＶＬＣＤＲ２、ＣＲ２ＶＬＣＤＲ３、ＣＲ２ＶＨＣＤＲ１、ＣＲ２ＶＨＣＤＲ２、ＣＲ２ＶＨＣＤＲ３、ＩＮＧ２ＶＬＣＤＲ１、ＩＮＧ２ＶＬＣＤＲ２、ＩＮＧ２ＶＬＣＤＲ３、ＩＮＧ２ＶＨＣＤＲ１、ＩＮＧ２ＶＨＣＤＲ２、およびＩＮＧ２ＶＨＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも３種のＣＤＲを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含み、該ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は全て、ＣＲ１ＶＨドメイン、ＣＲ２ＶＨドメイン、ＩＮＧ２ＶＨドメイン、１Ｄ１１ＶＨドメイン、２Ｇ１１ＶＨドメイン、および５Ｇ４ＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメインより選択される、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、該ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は全て、ＣＲ１ＶＬドメイン、ＩＮＧ２ＶＬドメイン、１Ｄ１１ＶＬドメイン、２Ｇ１１ＶＬドメイン、および５Ｇ４ＶＬドメインからなる群より選択されるＶＬドメインより選択される、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、
ＣＲ１ＶＨドメイン、ＣＲ２ＶＨドメイン、ＩＮＧ２ＶＨドメイン、１Ｄ１１ＶＨドメイン、２Ｇ１１ＶＨドメイン、および５Ｇ４ＶＨドメイン；ならびに
ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、
該ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は全て、ＣＲ１ＶＬドメイン、ＣＲ２ＶＬドメイン、ＩＮＧ２ＶＬドメイン、１Ｄ１１ＶＬドメイン、２Ｇ１１ＶＬドメイン、および５Ｇ４ＶＬドメインからなる群より選択されるＶＬドメインより選択される、
請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＣＲ１、ＣＲ２、ＩＮＧ２、１Ｄ１１、２Ｇ１１、および５Ｇ４からなる群より選択される抗体より選択されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＣＲ１ＶＨおよびＣＲ１ＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＣＲ２ＶＨおよびＣＲ２ＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＩＮＧ２ＶＨおよびＩＮＧ２ＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、１Ｄ１１ＶＨおよび１Ｄ１１ＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、２Ｇ１１ＶＨおよび２Ｇ１１ＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、５Ｇ４ＶＨおよび５Ｇ４ＶＬを含む、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＩｇＧである、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、Ｆａｂである、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、（Ｆａｂ’）_２である、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、（ｓｃＦｖ’）_２である、請求項１に記載の抗体。
前記抗体は、ＣＲ１、ＣＲ２、ＩＮＧ２、１Ｄ１１、２Ｇ１１、および５Ｇ４からなる群より選択される、請求項１に記載の抗体。
ＢｏＮＴ／Ａを結合する抗体であって、該抗体は、ＡＲ３ＶＨＣＤＲ１、ＡＲ３ＶＨＣＤＲ２、ＡＲ３ＶＨＣＤＲ３、ＡＲ４ＶＨＣＤＲ１、ＡＲ４ＶＨＣＤＲ２、およびＡＲ４ＶＨＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも１種のＣＤＲを含む、抗体。
前記抗体は、ＡＲ３ＶＨＣＤＲ１、ＡＲ３ＶＨＣＤＲ２、ＡＲ３ＶＨＣＤＲ３、ＡＲ４ＶＨＣＤＲ１、ＡＲ４ＶＨＣＤＲ２、およびＡＲ４ＶＨＣＤＲ３からなる群より選択される少なくとも３種のＣＤＲを含む、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含み、該ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は全て、ＡＲ３ＶＨドメイン、およびＡＲ４ＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメインより選択される、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３、ならびに
ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含み、
該ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は全て、ＡＲ３ＶＨドメイン、およびＡＲ４ＶＨドメインからなる群より選択されるＶＨドメインより選択され、
該ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３は全て、ＡＲ３ＶＬドメイン、およびＡＲ４ＶＬドメインからなる群より選択されるＶＬドメインより選択される、
請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、ＡＲ３およびＡＲ４からなる群より選択される抗体より選択されるＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、ＩｇＧである、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、Ｆａｂである、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、（Ｆａｂ’）_２である、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、（ｓｃＦｖ’）_２である、請求項２１に記載の抗体。
前記抗体は、ＡＲ３およびＡＲ４からなる群より選択される、請求項２１に記載の抗体。
ボツリヌス神経毒素（ＢｏＮＴ）を中和するための組成物であって、該組成物は、
ＢｏＮＴ／Ａ血清型に対する少なくとも２種の異なる中和抗体
を含み、該２種の抗体のうちの少なくとも１種は、請求項１〜３１のうちのいずれか１項に記載の抗体である、
組成物。
前記抗体のうちの少なくとも１種は、ＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、およびＢｏＮＴ／Ａ３からなる群より選択される少なくとも２種の異なるサブタイプを、それぞれ、約１０ｎＭより大きい親和性で結合する、請求項３２に記載の組成物。
前記抗体のうちの少なくとも１種は、ＢｏＮＴ／Ａ１およびＢｏＮＴ／Ａ２を、それぞれ、約１０ｎＭより大きい親和性で結合する、請求項３２に記載の組成物。
前記抗体のうちの少なくとも１種は、ＣＲ１、ＣＲ２、ＩＮＧ２、１Ｄ１１、２Ｇ１１、および５Ｇ４からなる群より選択される、請求項３２に記載の組成物。
前記抗体のうちの少なくとも２種は、ＣＲ１、ＣＲ２、ＩＮＧ２、１Ｄ１１、２Ｇ１１、および５Ｇ４からなる群より選択される、請求項３２に記載の組成物。
薬学的に受容可能な賦形剤を含む、請求項３２に記載の組成物。
前記組成物は、単位投薬処方物である、請求項３７に記載の組成物。
請求項１〜３１のいずれかに記載の抗体をコードする核酸。
請求項１〜３１のいずれかに記載の抗体をコードする核酸を含む細胞。
ＢｏＮＴを中和するためのキットであって、該キットは、
請求項１〜３１のいずれかに記載の抗体；および
ＢｏＮＴを中和するための該組成物の使用を教示する指示資料；
を備える、キット。
前記抗体は、使い捨て可能な注射器中に保存される、請求項４１に記載のキット。
ＣＲ１、ＣＲ２、ＩＮＧ２、１Ｄ１１、２Ｇ１１、５Ｇ４、ＡＲ３、およびＡＲ４からなる群より選択される抗体によって特異的に結合されるエピトープに対して特異的に結合する、単離された抗体。
請求項４３に記載の単離された抗体であって、該抗体は、抗体ＣＲ２によって特異的に結合されるエピトープに対して特異的に結合する、単離された抗体。
請求項４３に記載の単離された抗体であって、該抗体は、抗体２Ｇ１１によって特異的に結合されるエピトープに対して特異的に結合する、単離された抗体。