JP2008292482A - 静電層を有する固体支持体及びその用途 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】基板上に、核酸分子を静電的に引き寄せるための静電層、及び核酸分子と共有結合しうる官能基を有する固体支持体。基板の表面にダイヤモンド、軟ダイヤモンド、炭素系物質、及び炭化物から選ばれる少なくとも一種の表面処理層が形成されており、その上に前記静電層が形成されている。
【選択図】なし
Description
この出願の発明に関する先行技術文献情報として次のものがある。
(1)基板上に、核酸分子を静電的に引き寄せるための静電層、及び核酸分子と共有結合しうる官能基を有する固体支持体。
(2)基板の表面がダイヤモンド、軟ダイヤモンド、炭素系物質及び炭化物から選ばれる少なくとも1種で表面処理されている前記(1)に記載の固体支持体。
(3)静電層が、基板と共有結合していないアミノ基含有化合物を含む前記(1)又は(2)に記載の固体支持体。
(5)基板上に、非置換又は一置換されたアミノ基を有する化合物及び炭素化合物を蒸着させた後、核酸分子と共有結合しうる官能基を導入して得られる前記(1)〜(3)のいずれかに記載の固体支持体。
(6)基板を、非置換又は一置換されたアミノ基を有する化合物を含有する溶液中に浸漬した後、核酸分子と共有結合しうる官能基を導入して得られる前記(1)〜(4)のいずれかに記載の固体支持体。
(8)核酸分子がDNAである前記(1)〜(7)のいずれかに記載の固体支持体。
(9)前記(1)〜(8)のいずれかに記載の固体支持体に核酸分子が固定化されてなる固定化核酸分子。
(10)基板上に、非置換又は一置換されたアミノ基を有する化合物及び炭素化合物を蒸着させた後、核酸分子と共有結合しうる官能基を導入することを特徴とする固体支持体の製造方法。
(11)基板を、非置換又は一置換されたアミノ基を有する化合物を含有する溶液中に浸漬した後、核酸分子と共有結合しうる官能基を導入することを特徴とする固体支持体の製造方法。
(13)(1)〜(8)のいずれかに記載の固体支持体上にプライマーを固定化し、該プライマーに核酸分子をハイブリダイズさせ、標識した核酸の存在下で該核酸分子に相補的な核酸分子を伸長させ、該相補的な核酸分子に取り込まれた標識核酸に由来するシグナルを読みとることを含む、核酸分子の検出方法。
(15)(1)〜(8)のいずれかに記載の固体支持体上にプライマーを固定化し、該プライマーにDNAをハイブリダイズさせて、鎖置換型DNAポリメラーゼと反応させることにより、該DNAを増幅する方法。
(16)プライマーに核酸分子をハイブリダイズさせた後に、該核酸分子を増幅する工程をさらに含む、(13)に記載の方法。
表面処理層の厚みは、1nm〜100μmであることが好ましい。
静電層としては、核酸分子を静電的に引き寄せ、核酸分子の固定化量を向上させるものであれば、特に制限はないが、例えば、アミノ基含有化合物など正荷電を有する化合物を用いて形成することができる。
静電層の厚みは、1nm〜500μmであることが好ましい。
官能基としてアミノ基を導入するために用いられる化合物としては、例えばアミノ酸が挙げられる。
前記の化合物のうち、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、トリメリット酸、ブタンテトラカルボン酸などの多価カルボン酸は親水性を向上させるために使用することもできる。
25mm(幅)×75mm(長さ)×1mm(厚み)のスライドガラスに、イオン化蒸着法によって、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を10nmの厚みに形成した。その後に、メタンガスをキャリアーガスとして5cm3/分の割合で15℃に保温したエチレンジアミン中を通してチャンバーに導入した。作動圧を2Paとして加速電圧0.5kvでメタンとエチレンジアミンを原料としてC、N及びHからなる層を10nmの厚みに形成した。
25mm(幅)×75mm(長さ)×1mm(厚み)のスライドガラスに、イオン化蒸着法によって、メタンガスをキャリアーガスとして5cm3/分の割合で15℃に保温したエチレンジアミン中を通してチャンバーに導入した。作動圧を2Paとして加速電圧0.5kvでメタンとエチレンジアミンを原料としてC、N及びHからなる層を20nmの厚みに形成した。
25mm(幅)×75mm(長さ)×1mm(厚み)のスライドガラスに、イオン化蒸着法によって、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を10nmの厚みに形成した。
イオン化蒸着法によって、3mm角に切断したSi基板上に、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を100nmの厚みに形成した。その後、メタンガスと水素ガスの代わりに、アンモニアガス雰囲気とし、プラズマ法により10分間アミノ化した。
イオン化蒸着法によって、3mm角に切断したSi基板上に、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を100nmの厚みに形成した。その後、メタンガスと水素ガスの代わりに、アンモニアガス雰囲気とし、プラズマ法により10分間アミノ化した。
イオン化蒸着法によって、25mm(幅)×75mm(長さ)×1mm(厚み)のスライドガラスに、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を10nmの厚みに形成した。その後、メタンガスと水素ガスの代わりに、アンモニアガス雰囲気とし、プラズマ法により10分間アミノ化した。
イオン化蒸着法によって、3mm角に切断したSi基板上に、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を100nmの厚みに形成した。その後、メタンガスと水素ガスの代わりに、アンモニアガス雰囲気とし、プラズマ法により10分間アミノ化した。
イオン化蒸着法によって、3mm角に切断したSi基板上に、メタンガス95積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を100nmの厚みに形成した。その後、メタンガスと水素ガスの代わりに、アンモニアガス雰囲気とし、プラズマ法により10分間アミノ化した。
また、伸長反応を行った固体支持体をPCR反応溶液に入れ、λDNAの500bpを増幅するPCR反応を行ったところ、電気泳動によって500bp部位の増幅が確認された。
イオン化蒸着法によって、3mm角に切断したSi基板上に、メタンガス95体積%と水素5体積%を混合したガスを原料として、加速電圧0.5kVでDLC層を100nmの厚みに形成した。その後、メタンガスと水素ガスの代わりに、アンモニアガス雰囲気とし、プラズマ法により10分間アミノ化した。
3mm角に切断したガラス基板を、0.1%に調整したポリアリルアミン水溶液に浸漬した後、基板表面に導入したアミノ基に多価カルボン酸(ポリアクリル酸)を縮合した後に、0.1Mリン酸バッファー(pH6)に0.1Mの1−[3−(ジメチルアミノ)プロピル]−3−エチルカルボジイミドと20mMのN-ヒドロキシスクシンイミドを溶解した活性化液中に30分間浸漬することによって活性化した。
3mm角に切断したガラス基板を、95%エタノールで4%の濃度に調整した3-アミノプロピルトリエトキシシラン溶液に10分間浸漬した後、100℃のオーブンで20分間ベーキングする事によって、表面をアミノ化した。
た。
Claims (11)
- 基板と、
前記基板上に形成された、核酸分子を静電的に引き寄せる静電層と、
前記静電層上に形成された、核酸分子と共有結合しうる官能基と、を有する固体支持体。 - 前記基板の表面にダイヤモンド、軟ダイヤモンド、炭素系物質、及び炭化物から選ばれる少なくとも一種の表面処理層が形成されており、その上に前記静電層が形成されている請求項1に記載の固体支持体。
- 前記静電層が、前記基板と共有結合していない正電荷を有するアミノ基含有化合物を含む請求項1又は2に記載の固体支持体。
- 前記静電層が、前記基板と共有結合している正電荷を有するアミノ基含有化合物を含み、該アミノ基含有化合物が、前記基板と結合していない側の末端にアミノ基を有する請求項1又は2に記載の固体支持体。
- 基板をアミノ基含有化合物を含む溶液中に浸漬して当該基板上に静電層を形成させ、
前記静電層上に核酸分子と共有結合しうる官能基を化学修飾して製造される固体支持体。 - 前記アミノ基含有化合物を含む溶液がポリアリルアミンを含む請求項5に記載の固体支持体。
- 基板上にアミノ基含有化合物を含む静電層を形成する工程と、
前記静電層を核酸分子と共有結合しうる官能基で化学修飾する工程と、を有する固体支持体の製造方法。 - 前記静電層を形成する工程が、前記基板をアミノ基含有化合物を含む溶液中に浸漬することを含む、請求項7に記載の固体支持体の製造方法。
- 前記アミノ基含有化合物を含む溶液がポリアリルアミンを含む請求項8に記載の固体支持体の製造方法。
- 上記請求項1〜6のいずれか1項に記載の固体支持体上にプライマーを固定し、
該プライマーにDNAをハイブリタイズさせて、該DNAの伸長反応を行うDNAの伸長方法。 - プライマー溶液を前記固体支持体上にスポットして加熱した後、固定化されないプライマーを除去することで、該固体支持体上に複数種のプライマーを固定化する、請求項10に記載のDNAの伸長方法。
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