JP2008200006A - 核酸増幅装置、核酸増幅容器及び核酸増幅方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明の核酸増幅装置は、核酸増幅容器10を搭載するための搭載手段と、上記搭載手段上にそれぞれ異なる温度に調整された複数の加温領域を形成するための、第一の加温手段2とを備える。また、本発明の核酸増幅容器は、基板14に開口部11、流路12及び槽部13が設けられ、上記開口部11及び上記槽部13は上記流路によって連結されており、上記開口部11は、上記基板14から突起した筒状構造である。
【選択図】 図1
Description
本発明に係る核酸増幅装置の一実施形態について図1〜3に基づいて説明すると以下の通りである。
まず、図1を用いて本実施の形態に係るPCR装置1(核酸増幅装置)の概略構成について説明する。図1は、本実施の形態に係るPCR装置1の概略構成を示す図であり、PCR装置1に搭載されたPCR用ディスク10(核酸増幅容器)をも示している。
次に、ヒートブロック2、3の構成について、図1及び2を用いてより詳細に説明する。図2は、ヒートブロック2、3の構成を模式的に示す図であり、搭載するPCR用ディスク10をも示している。
次に、図3を用いて本発明に係る核酸増幅容器の一実施態様について説明する。図3は、本実施の形態に係るPCR用ディスク10の構造を模式的に示す図であり、(a)は平面図であり(b)は斜視図である。
次に、PCR装置1及びPCR用ディスク10を用いて核酸増幅反応を行なう方法を、図1〜4を用いて説明する。
本発明に係る核酸増幅容器の他の実施の形態について、図5を用いて説明する。なお、説明の便宜上、実施の形態1に係る構成要素と同様の機能を有する構成要素については、その説明を省略する。本実施の形態では、主に、上記実施の形態1との相違点について説明するものとする。
(CYP2C19遺伝子を検出するプライマーの合成)
まず、正鎖プライマー及び逆鎖プライマーを合成した。正鎖プライマーの塩基配列を配列番号1に、逆鎖プライマーの塩基配列を配列番号2に示す。
PCRに供するサンプルとして、ヒト白血球からフェノール・クロロフォルム法によって得たDNA溶液を用いた。ヒト白血球として、2種類の個体から得たものを用い、DNA溶液を2種類調製した(以下、「サンプルA」、「サンプルB」と表記する)。
PCR反応後、反応液貯留部13からPCR反応液5μlを回収した。回収したPCR反応液を、3%アガロースゲルによる電気泳動に供した。電気泳動では、100Vの電圧を印加して、60分間行なった。その結果を図6に示す。図6は本実施例における電気泳動の結果を示す図であり、レーン1及びレーン2は、それぞれサンプルA及びBを用いたPCRの結果を示し、レーン3には比較のためサンプルA及びBの代わりに水を混合して、本実施例に記載の方法でPCRを行なった結果を示している。また、レーンMには分子量マーカーを供して電気泳動を行なった結果を示している。
2 ヒートブロック(搭載手段、第一の加温手段)
2a、2b、3a、3b 加温部
3 ヒートブロック(第二の加温手段)
4 ディスク駆動部(移動手段)
5 回転部
6 蛍光検出部(光検出手段)
9a、9b 蛍光透過部(窓部)
10 PCR用ディスク(核酸増幅容器)
11、21 反応液注入部(開口部)
12、22 流路
13、23 反応液貯留部(槽部)
14、24 基板
20 PCR用チップ(核酸増幅容器)
A、D 直線(回転軸)
Claims (19)
- 核酸増幅容器を搭載するための搭載手段と、
上記搭載手段上にそれぞれ異なる温度に調整された複数の加温領域を形成するための、第一の加温手段とを備えることを特徴とする核酸増幅装置。 - 核酸増幅容器を移動させるための移動手段を備え、
上記移動手段は、核酸増幅容器全体を、上記複数の加温領域のうち、それぞれ異なる温度に調整された少なくとも二つの加温領域によって同時に加温される状態で移動させるものであることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。 - 上記移動手段は、核酸増幅容器を回転させるものであることを特徴とする請求項2に記載の核酸増幅装置。
- 上記回転の回転軸は、上記核酸増幅容器に交わることを特徴とする請求項3に記載の核酸増幅装置。
- 上記回転軸は、上記核酸増幅容器の中心に交わることを特徴とする請求項4に記載の核酸増幅装置。
- 上記移動手段は、核酸増幅容器を、一定方向に、一定速度で移動させるものであることを特徴とする請求項2に記載の核酸増幅装置。
- 上記第一の加温手段は、核酸増幅容器が移動するとき、当該核酸増幅容器の任意の点がそれぞれの上記加温領域を通過する時間と、予め設定された、当該加温領域により加温する時間とが一致するように、それぞれの上記加温領域を形成するものであることを特徴とする請求項6に記載の核酸増幅装置。
- 上記移動手段が核酸増幅容器を回転移動させるものであり、
上記第一の加温手段は、上記回転の回転軸と上記搭載手段とが交わる点から放射状に広がる形状になるように、上記加温領域を形成するものであることを特徴とする請求項7に記載の核酸増幅装置。 - 上記搭載手段上に核酸増幅容器を搭載した際に、二つの加温手段により当該核酸増幅容器を挟むように、上記搭載手段の上方に第二の加温手段を備えることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。
- 上記第一の加温手段及び第二の加温手段は、それぞれ、互いに重畳する領域が同じ温度に調整された加温領域を形成するものであることを特徴とする請求項9に記載の核酸増幅装置。
- 上記核酸増幅容器が、基板に開口部、流路及び槽部が設けられ、上記開口部及び上記槽部は上記流路によって連結されており、上記開口部は、上記基板から突起した筒状構造であるとき、
上記開口部から注入された核酸増幅反応液を、上記流路を介して上記槽部内に移動させる外力を付加する外力付加手段を備えることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。 - 上記外力付加手段は、上記槽部より上記開口部に近い点で、上記基板と交差する直線を回転軸として上記核酸増幅容器を回転させるものであることを特徴とする請求項11に記載の核酸増幅装置。
- 核酸増幅容器を移動させるための移動手段を備え、上記移動手段は、当該核酸増幅容器全体を、上記複数の加温領域のうち、互いに異なる温度に調整された少なくとも二つの加温領域によって同時に加温される状態で、当該核酸増幅容器を回転させるものであり、
上記移動手段と上記外力付加手段とが同一部材で構成されていることを特徴とする請求項12に記載の核酸増幅装置。 - 上記搭載領域に窓部が設けられており、
上記窓部から発せられる光を検出する光検出手段をさらに備えることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。 - 基板に開口部、流路及び槽部が設けられ、
上記開口部及び上記槽部は上記流路によって連結されており、
上記開口部は、上記基板から突起した筒状構造であることを特徴とする核酸増幅容器。 - 上記基板は円盤状であり、上記開口部は上記槽部より上記基板の中心に近い位置に設けられていることを特徴とする請求項15に記載の核酸増幅容器。
- 上記基板は、上記槽部内から発せられる光を透過する光透過部を備えていることを特徴とする請求項15に記載の核酸増幅容器。
- 核酸増幅容器に核酸増幅反応液を充填する充填工程及び、
充填された上記核酸増幅反応液の温度を調整する温度調整工程を含み、
上記温度調整工程は、当該核酸増幅容器全体を、それぞれ異なる温度に調整された複数の加温領域によって同時に加温される状態で、上記核酸増幅容器を移動させる工程を含むことを特徴とする核酸増幅方法。 - 上記核酸増幅容器として、基板に開口部、流路及び槽部が設けられ、上記開口部及び上記槽部は上記流路によって連結されており、上記開口部は、上記基板から突起した筒状構造である核酸増幅容器を用い、
上記充填工程は、上記開口部から注入された核酸増幅反応液に対して外力を付加して、上記槽部内に移動させる工程を含むことを特徴とする請求項18に記載の核酸増幅方法。
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