JP5381100B2 - 核酸増幅装置 - Google Patents
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Description
2、30 本体
3 ケース(筐体)
4 シャッター(開閉手段)
5 遠心機(遠心手段)
5a バケット支持板
5b バケット
5c シャフト
5d 遠心駆動部
6 熱源(加温手段)
7 ヒートブロック(変性手段)
8 加熱抽出装置(核酸抽出手段)
9 分注アーム(分注手段)
10 蛍光検出部(光検出手段)
20 キャピラリチューブ(核酸増幅容器)
L1 直線(回転軸)
L2、L3 直線(軸)
本発明の一実施形態について図1ないし図8に基づいて説明すると以下の通りである。
まず、図1を用いて本実施の形態に係るPCR装置1(核酸増幅装置)の概略構成について説明する。図1は本実施の形態に係るPCR装置1の概略構成を示す斜視図である。なお、図1には、PCR装置1に搭載されたキャピラリチューブ20(核酸増幅容器)、ピペットチップ22、抽出用チューブ23をも示している。また、図1では、ケース3内の説明をするため、ケース3の輪郭を二点鎖線にて示し、その内部を示している。
次に、本体2の構成について図2を用いてより詳細に説明する。図2は、本体2の構成を模式的に示す斜視図であり、搭載するキャピラリチューブ20をも示している。また、図2では、ケース3内の説明をするため、ケース3の輪郭を二点鎖線にて示し、その内部を示している。
図1及び3〜7を用いて、本体2の動作について説明する。なお、本実施の形態1では、伸長反応及びアニーリング反応を同一の温度で行なう、シャトルPCRを行なう場合について説明するが、これに限定されるものではない。また、PCRの結果の確認を、融解曲線解析によって行なう場合について説明するが、これに限定されるものではない。
本発明の実施の他の形態について図9に基づいて説明すれば、以下の通りである。なお、説明の便宜上、実施の形態1にかかる構成要素と同様の機能を有する構成要素には同一の番号を付し、その説明を省略する。本実施の形態では、主に、上記実施の形態1との相違点について説明するものとする。図9は、本実施の形態に係るPCR装置の本体30の構造を模式的に示す斜視図であり、図9の(a)は本体30の外観を示し、図9の(b)は、説明の簡単のために、ケース3の底面以外の面及びシャッター4を取り除いた状態における、本体30を示す。
(CYP2C19遺伝子を検出するプライマーの合成)
まず、正鎖プライマー及び逆鎖プライマーを合成した。正鎖プライマーの塩基配列を配列番号1に、逆鎖プライマーの塩基配列を配列番号2に示す。
PCRに供するサンプルとして、ヒト白血球からフェノール・クロロフォルム法によって得たDNA溶液(以下、「サンプル」と表記する)を用いた。
PCR反応後、それぞれのPCR装置からPCR反応液5μlを回収した。次に、回収したPCR反応液を、3%アガロースゲルによる電気泳動に供した。電気泳動では、100Vの電圧を印加して、60分間行なった。その結果を図10に示す。図10は本実施例における電気泳動の結果を示す図であり、レーン1〜4はPCR装置1を用いたPCRの結果を示し、レーン5〜8はチューブ型PCR装置によるPCRの結果を示す。また、レーン1及び5は、調製したPCR反応液25μl当たりのDNAの溶解量が100ngとしたPCR反応液を用いた結果を示し、レーン2及び6は、調製したPCR反応液25μl当たりのDNAの溶解量が10ngとしたPCR反応液を用いた結果を示し、レーン3及び7は、調製したPCR反応液25μl当たりのDNAの溶解量が1ngとしたPCR反応液を用いた結果を示す。また、レーン4及び8は比較のためサンプルの代わりに水を混合したPCR反応液を用いた結果を示す。
Claims (15)
- 核酸増幅容器を加温するための加温手段と、
開口部が設けられた筐体と、
上記開口部を開閉するための開閉手段と、
核酸増幅容器を搭載して遠心する遠心手段とを備え、
上記加温手段は上記筐体内に配置されており、
上記遠心手段は、上記開口部の開口面を通る直線を回転軸として、上記核酸増幅容器を回転させるものであり、
上記開閉手段は、上記開口部を閉じたとき、上記遠心手段の位置を固定するものであり、
上記遠心手段は基板を備え、上記核酸増幅容器を搭載する部位が上記基板上に設けられており、
上記開閉手段は、上記開口部を閉じたとき、上記基板に重畳する領域で上記基板に接するように形成されており、
上記基板は上記開口部の開口面より上に位置しており、
上記開閉手段が閉じることで筐体を密閉することを特徴とする核酸増幅装置。 - 上記遠心手段における核酸増幅容器を搭載する部位は、
上記遠心手段の回転により描かれる円の接線方向に平行な直線を軸に、回動するものであることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。 - 上記遠心手段は、複数の核酸増幅容器を、直線状に並べて搭載可能に形成されていることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。
- 上記遠心手段には、上記核酸増幅容器を搭載するための貫通孔が形成されていることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。
- 上記開閉手段は、上記開口部上をスライドして開閉するものであることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。
- 上記加温手段は、上記筐体内の気体を加温するものであることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。
- 生体試料から核酸増幅反応に供する核酸を抽出する核酸抽出手段と、
上記核酸抽出手段によって抽出された核酸を、上記遠心手段に搭載された核酸増幅容器に注入するための分注手段とをさらに備えることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。 - 核酸増幅容器に対して二本鎖核酸を解離させる刺激を与えるための変性手段をさらに備え、
上記加温手段は、上記核酸増幅容器を連続して加温するものであり、
上記変性手段は、上記加温手段による加温が行なわれている状態で、さらに、間欠的に上記刺激を与えるものであることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。 - 上記変性手段は、熱、電磁波及び超音波からなる群から少なくとも一つの刺激を発するものであることを特徴とする請求項8に記載の核酸増幅装置。
- 上記変性手段は、マイクロ波を発するものであることを特徴とする請求項9に記載の核酸増幅装置。
- 上記変性手段は、上記核酸増幅容器を加温するヒートブロックであることを特徴とする請求項8に記載の核酸増幅装置。
- 上記ヒートブロックには穴が設けられており、上記変性手段は、上記核酸増幅容器に上記刺激を与えるとき、当該穴に当該核酸増幅容器の底を包含するように移動するものであることを特徴とする請求項11に記載の核酸増幅装置。
- さらに、上記核酸増幅容器内から発せられる光を検出するための光検出手段を備えることを特徴とする請求項1に記載の核酸増幅装置。
- さらに、上記核酸増幅容器内から発せられる光を検出するための光検出手段を備え、
上記変性手段は、上記光検出手段によって検出する光で融解曲線解析をするために、上記刺激の強度の調整を行なうものであることを特徴とする請求項9に記載の核酸増幅装置。 - 上記加温手段は、上記光検出手段によって検出する光で、融解曲線解析をするための温度調整を行なうものであることを特徴とする請求項13に記載の核酸増幅装置。
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