JP2008048737A - イオン交換反応及び微生物閉じ込め手段を利用して試料から微生物を分離する方法、微生物試料の前処理用容器、及び微生物分離装置 - Google Patents
イオン交換反応及び微生物閉じ込め手段を利用して試料から微生物を分離する方法、微生物試料の前処理用容器、及び微生物分離装置 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】微生物を含む試料を無機イオン交換物質と接触させて、前記試料と無機イオン交換物質とを反応させる段階と、前記反応された試料を微生物閉じ込め手段と接触させる段階とを含む試料から微生物を分離する方法である。
【選択図】 図1
Description
本実施例では、入口と出口とが備えられており、サイズ10mMx23mmであるシリコンチップ上にピラーアレイが形成された表面を有するチャンバを備える流動装置に、細菌細胞を含む試料を流しながら、細胞を前記固体支持体上に付着させ、流れ出る試料中の細菌細胞の数をコロニー計数を通じて決定し、これから前記固体支持体による細菌細胞閉じ込め効率を計算した。前記ピラーアレイにおいて、ピラー間の距離は12μmであり、ピラーの高さが100μmであり、各ピラーの断面は、一辺の長さが25μmである正方形である。
緩衝液:100mMの酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.0)。
本実施例では、入口と出口とが備えられており、サイズ10mMx23mmであるシリコンチップ上にピラーアレイが形成された表面を有するチャンバを有する流動装置に、細菌細胞を含む試料を流しながら、細菌細胞を前記固体支持体上に付着させ、流れ出る試料中の細胞の数をコロニー計数を通じて決定し、これから前記固体支持体による細菌細胞閉じ込め効率を計算した。前記ピラーアレイにおいて、ピラー間の距離は12μmであり、ピラーの高さが100μmであり、各ピラーの断面は、一辺の長さが25μmである正方形である。
まず、ゼオライトY(Aldrich社製)(NH4−Y形態)を550℃で2時間焼成してHY(H型ゼオライト)を製造した。
まず、ナトリウム型のゼオライトであるNa−Yとアンモニウム型のゼオライトNH4−Yとを購入した(Aldrich社製)。
まず、ゼオライトY(Aldrich社製)(NH4−Y形態)を550℃で2時間焼成してHY(H型ゼオライト)を製造した。
Claims (38)
- 微生物を含む試料を無機イオン交換物質と接触させて、前記試料と前記無機イオン交換物質とを反応させる段階と、
前記反応された試料を微生物閉じ込め手段と接触させる段階と、を含む試料から微生物を分離する方法。 - 前記反応された試料を微生物閉じ込め手段と接触させる段階は、前記反応された試料を固体支持体にpH3.0〜6.0の範囲の液体中で接触させる段階を含む請求項1に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記試料は、尿である請求項1または請求項2に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記微生物は、細菌、真菌、およびウイルスからなる群から選択される少なくとも一つである請求項1〜3のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記無機イオン交換物質は、ゼオライトである請求項1〜4のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記ゼオライトは、H型ゼオライトである請求項5に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記固体支持体は、表面に複数個のピラーが形成されているピラー構造を有する固体支持体、ビーズ形状を有する固体支持体、及び表面に複数個の孔隙が形成されている篩構造を有する固体支持体からなる群から選択される少なくとも一つであることを特徴とする請求項2〜6のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記ピラーは、アスペクト比として、ピラーの高さ:ピラーの断面の長さが1:1〜20:1である請求項7に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記ピラーは、ピラーの高さと最隣接するピラー間の距離との比率が1:1〜25:1である請求項7または8に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記ピラーは、最隣接するピラー間の距離が5μm〜100μmの範囲を有する請求項7〜9のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記固体支持体は、水接触角が70゜〜95゜である疎水性を有することを特徴とする請求項2〜10のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記疎水性は、前記固体支持体の表面をオクタデシルジメチル(3−トリメトキシシリルプロピル)アンモニウム(OTC)、またはトリデカフルオロテトラヒドロオクチルトリメトキシシラン(DFS)の化合物でコーティングして付与される性質であることを特徴とする請求項11に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記固体支持体は、表面にアミン系の官能基を一つ以上有することを特徴とする請求項2〜12のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記アミン系の官能基を一つ以上有する表面は、ポリエチレンイミントリメトキシシラン(PEIM)でコーティングされている請求項13に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記反応された試料を微生物閉じ込め手段と接触させる段階前に、前記反応された試料をリン酸緩衝液または酢酸緩衝液で希釈する段階をさらに含む請求項2〜14のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記希釈は、99:1〜1:4の割合でなる請求項15に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 無機イオン交換物質が含まれている、微生物を含む試料の前処理用の容器。
- 前記無機イオン交換物質は、ゼオライトである、請求項17に記載の微生物を含む試料前処理用の容器。
- 前記ゼオライトは、H型ゼオライトである、請求項18に記載の微生物を含む試料前処理用の容器。
- 前記微生物を含む試料は、尿である、請求項17〜19のいずれか1項に記載の微生物を含む試料前処理用の容器。
- 請求項17〜20のいずれかに記載の容器は、チューブ、マイクロチャンネル、及びマイクロチャンバである、微生物を含む試料前処理用の容器。
- 前記無機イオン交換物質は、前記容器に固定化されている、請求項17〜21に記載の微生物を含む試料前処理用の容器。
- 無機イオン交換物質が含まれている微生物を含む試料前処理用の第1容器と、
前記第1容器と流体移動可能に連結されている微生物閉じ込め手段を備える第2容器と、を有する微生物を含む試料から微生物を分離する装置。 - 前記微生物閉じ込め手段は、固体支持体である、請求項23に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記無機イオン交換物質は、ゼオライトである、請求項23または請求項24に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記ゼオライトは、H型ゼオライトである、請求項25に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記微生物を含む試料は、尿である、請求項23または請求項24に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記第1及び第2容器は、チューブ、マイクロチャンネル、及びマイクロチャンバからなる群から選択される少なくとも一つである、請求項23または請求項24に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記無機イオン交換物質は、前記第1容器に固定化されている、請求項23または請求項24に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記第2容器は、緩衝液溶液保存部をさらに備える、請求項23または請求項24に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記固体支持体は、表面に複数個のピラーが形成されているピラー構造を有する固体支持体、ビーズ形状を有する固体支持体、及び表面に複数個の孔隙が形成されている篩構造を有する固体支持体からなる群から選択される少なくとも一つである、請求項24または請求項25に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記ピラーは、アスペクト比として、ピラーの高さ:ピラーの断面の長さが1:1〜20:1である、請求項31に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記ピラーは、ピラーの高さと最隣接ピラー間の距離との比率が1:1〜25:1である、請求項31または32に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記ピラーは、ピラー間の距離が5μm〜100μmの範囲を有する、請求項31〜33のいずれか1項に記載の微生物を含む試料から微生物を分離する装置。
- 前記固体支持体は、水接触角が70゜〜95゜の疎水性を有することを特徴とする、請求項24または請求項31〜34のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する装置。
- 前記疎水性は、前記固体支持体の表面をOTCまたはDFSの化合物でコーティングして付与される性質であることを特徴とする、請求項35に記載の試料から微生物を分離する装置。
- 前記固体支持体は、表面にアミン系の官能基を一つ以上有することを特徴とする、請求項24または請求項31〜36のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する装置。
- 前記アミン系の官能基を一つ以上有する表面は、PEIMでコーティングされている、請求項37に記載の試料から微生物を分離する装置。
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