JPS59199631A - ヒト尿チオ−ルプロテア−ゼインヒビタ−の採取法 - Google Patents
ヒト尿チオ−ルプロテア−ゼインヒビタ−の採取法Info
- Publication number
- JPS59199631A JPS59199631A JP58073556A JP7355683A JPS59199631A JP S59199631 A JPS59199631 A JP S59199631A JP 58073556 A JP58073556 A JP 58073556A JP 7355683 A JP7355683 A JP 7355683A JP S59199631 A JPS59199631 A JP S59199631A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human
- adsorbent
- thiol protease
- inhibitor
- protease inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はヒト尿からヒト尿チオールプロテアーゼインヒ
ビターを選択的に分離するための採取法に関する。人尿
チオールプロテアーゼインヒビクーはパパイン、フィシ
ンなどのチオールプロテアーゼを特異的に阻害するタン
白質インヒビターである。（ンヤーナル拳オブ・バイオ
ケミストリー第８９巻第１７９項１９８１年） したがってチオールプロテアーゼが関与すると考えられ
る炎症、筋ジストロフィー、腎性高血圧症などの治療薬
として有望視されているが、ヒト尿から大量生産が可能
な吸着分離法はまだ報告されていない。
ビターを選択的に分離するための採取法に関する。人尿
チオールプロテアーゼインヒビクーはパパイン、フィシ
ンなどのチオールプロテアーゼを特異的に阻害するタン
白質インヒビターである。（ンヤーナル拳オブ・バイオ
ケミストリー第８９巻第１７９項１９８１年） したがってチオールプロテアーゼが関与すると考えられ
る炎症、筋ジストロフィー、腎性高血圧症などの治療薬
として有望視されているが、ヒト尿から大量生産が可能
な吸着分離法はまだ報告されていない。
尿中チオールプロテアーゼインヒビターはタンパク質で
あるため医薬用途においては抗原性のない人由来原料か
ら製造されることが望ましく、かつ安全性も高いと考え
られる。
あるため医薬用途においては抗原性のない人由来原料か
ら製造されることが望ましく、かつ安全性も高いと考え
られる。
一万、ヒト尿チオールインヒビターを尿から抽出するに
は大量の尿を処理する必要がある、その大量処理には直
接ヒト尿（こ吸着剤を接触させ、ヒト尿チオールプロテ
アーゼインヒビターを分離採取する方法が実用的と考え
られる。
は大量の尿を処理する必要がある、その大量処理には直
接ヒト尿（こ吸着剤を接触させ、ヒト尿チオールプロテ
アーゼインヒビターを分離採取する方法が実用的と考え
られる。
そこで本発明者は直接ヒト尿よりヒト尿チオールプロテ
アーゼインヒビターを選択的に吸着分離しうる実用的な
吸着剤を探索し１本発明を完成するに至った。
アーゼインヒビターを選択的に吸着分離しうる実用的な
吸着剤を探索し１本発明を完成するに至った。
本発明は、ヒト尿にケイ酸アルミニウム系吸着剤または
多孔性ポリスチレン系吸着函脂を、ｐＨ４〜６において
、接触させてヒト尿チオールインヒビターを選択的に吸
着させ、吸着物を分離することを特徴とするヒト尿チオ
ールプロテアーゼインヒビターの採取法である。尿のｐ
Ｈ調整は適当な酸、例えは塩酸、硫酸または適当なアル
カリ、例えばアンモニア水、水酸化ナトリウム、を用い
て行うことができる。
多孔性ポリスチレン系吸着函脂を、ｐＨ４〜６において
、接触させてヒト尿チオールインヒビターを選択的に吸
着させ、吸着物を分離することを特徴とするヒト尿チオ
ールプロテアーゼインヒビターの採取法である。尿のｐ
Ｈ調整は適当な酸、例えは塩酸、硫酸または適当なアル
カリ、例えばアンモニア水、水酸化ナトリウム、を用い
て行うことができる。
ヒト尿のｐＨが６を超えるとヒト尿チオールプロテアー
ゼインヒビターの吸着率は低下する。またｐＨ４未満で
は不純物の吸着が多くなり純度が低下し、かつ尿中のウ
ロペプシノーゲンが活性化され、ヒト尿チオールプロテ
アーゼインヒビターの低分子化等が起こる可能性が高い
。
ゼインヒビターの吸着率は低下する。またｐＨ４未満で
は不純物の吸着が多くなり純度が低下し、かつ尿中のウ
ロペプシノーゲンが活性化され、ヒト尿チオールプロテ
アーゼインヒビターの低分子化等が起こる可能性が高い
。
したがってヒト尿のｐＨは４〜６、好ましくは、５．０
〜５５で本発明の方法を行なうのがよい。
〜５５で本発明の方法を行なうのがよい。
上記のｐＨに調整したヒト尿を吸着剤のカラムに加える
か、尿に吸着剤を加え攪拌することにより接触させると
ヒト尿チオールプロテアーゼインヒビターは吸着剤に吸
着される。
か、尿に吸着剤を加え攪拌することにより接触させると
ヒト尿チオールプロテアーゼインヒビターは吸着剤に吸
着される。
吸着剤としては、ケイ酸アルミニウム系吸着剤および多
孔性ポリスチレン系吸着剤が用いられる。
孔性ポリスチレン系吸着剤が用いられる。
ケイ酸アルミニウム系吸着剤の好ましい例はカオリン、
ベントナイト、Ａｓｐ吸着剤（エンゲル）１−ド・ミネ
ラルズ・アンド・ケミカルズ社製）などである。多孔性
ポリスチレン系樹脂の好ましい例はアンバーライトＸＡ
Ｄ−７（ローム・アンド・ハース社製）である。
ベントナイト、Ａｓｐ吸着剤（エンゲル）１−ド・ミネ
ラルズ・アンド・ケミカルズ社製）などである。多孔性
ポリスチレン系樹脂の好ましい例はアンバーライトＸＡ
Ｄ−７（ローム・アンド・ハース社製）である。
ヒト尿チオールプロテアーゼインヒビターを吸着した吸
着剤はたとえば傾斜法ｉこより尿と分離採取することが
できる。
着剤はたとえば傾斜法ｉこより尿と分離採取することが
できる。
吸着剤【こ吸着したヒト尿チオールプロテアーゼインヒ
ビターの溶離は水酸化ナトリウム、アンモニア水、炭酸
ナトリウム等のアルカリの水溶液を用いて行なうのがよ
い。その水溶液の好ましいｐＨは約１０〜１１である。
ビターの溶離は水酸化ナトリウム、アンモニア水、炭酸
ナトリウム等のアルカリの水溶液を用いて行なうのがよ
い。その水溶液の好ましいｐＨは約１０〜１１である。
ヒト尿チオールプロテアーゼインヒビターはアルカリで
も十分安定で失活のおそれはない。
も十分安定で失活のおそれはない。
ここでいうヒト尿としては、原尿そのままでも使用でき
るが、予め水酸化す） ＩＪウム等のアルカリ性溶液で
ｐＨ８，５に調整し、夾雑ムコ多糖類等の不純物を沈殿
除去した尿、または原尿中の微量有効成分（例えばウロ
キナーゼ等）を採取した後のヒト尿チオールプロテアー
ゼインヒビター含有尿の方が望ましい。
るが、予め水酸化す） ＩＪウム等のアルカリ性溶液で
ｐＨ８，５に調整し、夾雑ムコ多糖類等の不純物を沈殿
除去した尿、または原尿中の微量有効成分（例えばウロ
キナーゼ等）を採取した後のヒト尿チオールプロテアー
ゼインヒビター含有尿の方が望ましい。
本発明の方法による収率は良く、また本発明に用いる吸
着剤は安価であり、その添加量も通常１％（ｗ／ｖ）以
下の少量で充分である。
着剤は安価であり、その添加量も通常１％（ｗ／ｖ）以
下の少量で充分である。
本発明におけるチオールプロテアーゼインヒヒ゛ター活
性の測定にはチオールプロテアーゼとしてフィシン（Ｓ
ｉｇｍａ社製）を用い、基質としてはカゼイン（和光紬
薬社製）または合成基質（Ｂｚ−Ａｒｇ−ＭＣＡベンゾ
イル−Ｌ−アＪレギニンー４−メチルクマリル−７−ア
ミド、（（財）タン白質研究奨励金製）を使用した。
性の測定にはチオールプロテアーゼとしてフィシン（Ｓ
ｉｇｍａ社製）を用い、基質としてはカゼイン（和光紬
薬社製）または合成基質（Ｂｚ−Ａｒｇ−ＭＣＡベンゾ
イル−Ｌ−アＪレギニンー４−メチルクマリル−７−ア
ミド、（（財）タン白質研究奨励金製）を使用した。
便宜上、本インヒビターの単位はフィシン１μりを完全
【こ阻害する量とした。この単位で表示すればヒト尿ｌ
ｌ中に本インヒビターは１０００単位〜２０００単位で
平均１５００単位の本インヒビターが存在する。
【こ阻害する量とした。この単位で表示すればヒト尿ｌ
ｌ中に本インヒビターは１０００単位〜２０００単位で
平均１５００単位の本インヒビターが存在する。
次番こ実施例により本発明を説明する。
実施例１
ヒト尿チオールプロテアーゼインヒビタ−７０００単位
を含む健康人男子ブーｌし尿５／／＋こ２．５ＮＮ ａ
ＯＨ水溶液を滴下しｐＨ８，５とし生じた沈澱を口過
により除去した後２．５ Ｎ ）１． Ｃｌ水ｉ８Ｍ−
を滴下しｐＨ５，０とし、カオリン（和光紬薬社製）２
５２を添加後、室温下１時間かきまぜた後り澄をデカン
テーションにて除去しカオリンを回収した。
を含む健康人男子ブーｌし尿５／／＋こ２．５ＮＮ ａ
ＯＨ水溶液を滴下しｐＨ８，５とし生じた沈澱を口過
により除去した後２．５ Ｎ ）１． Ｃｌ水ｉ８Ｍ−
を滴下しｐＨ５，０とし、カオリン（和光紬薬社製）２
５２を添加後、室温下１時間かきまぜた後り澄をデカン
テーションにて除去しカオリンを回収した。
この吸着後のカオリンに０．２ Ｍ炭酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ１１，０） ２００ｍｅｆ添加し、室温で１時
間かきまぜた後ろ過し溶離液を得た。回収ヒト尿チオー
ルプロテアーゼインヒビターは６２００単位で、回収率
８８％であった。
液（ｐＨ１１，０） ２００ｍｅｆ添加し、室温で１時
間かきまぜた後ろ過し溶離液を得た。回収ヒト尿チオー
ルプロテアーゼインヒビターは６２００単位で、回収率
８８％であった。
実施例２゜
実施例２と同様に処理した尿５．０１ （ヒト尿チオー
ルプロテアーゼインヒビタ−７５００単位含有）番こベ
ントナイト２５２を添加後室滴下１時間かきまぜた後上
澄をデカンテーションにて除去しベントナイトを回収し
た。この吸着後のベントナイトに２Ｎアンモニア水（ｐ
Ｈ１１，０） ２００ｍｅを添加し室温で１時間かき
まぜた後ろ過し溶離液をえた。回収ヒト尿チオールプロ
ラアーゼインヒビターは７０００単位で回収率は９３％
であった。
ルプロテアーゼインヒビタ−７５００単位含有）番こベ
ントナイト２５２を添加後室滴下１時間かきまぜた後上
澄をデカンテーションにて除去しベントナイトを回収し
た。この吸着後のベントナイトに２Ｎアンモニア水（ｐ
Ｈ１１，０） ２００ｍｅを添加し室温で１時間かき
まぜた後ろ過し溶離液をえた。回収ヒト尿チオールプロ
ラアーゼインヒビターは７０００単位で回収率は９３％
であった。
実施例３
ヒト尿チオールプロテアーゼインヒビタ−７５００単位
を含む健康人男子プール尿５１に２．５ＮＮａＯＨ水溶
液を滴下ＬｐＨ８，５とし生じた沈澱をろ過により除去
した後２．５ＮＨＣｆ水溶液を滴下ＬｐＨ５，５とし、
Ａｓｐ吸着剤（Ａｓｐ−２００ＰまたはＡｓｐ−４００
ｐ、エンゲルハード書ミネラルズ・アンド・ケミカルズ
社製） ２５ ｙを添加後室部下１時間かきまぜた後上
澄をデカンテーション番こて除去し、Ａｓｐ−’２００
ｐまたはＡＳｌ）−４００ｐを回収した。吸着後のＡｓ
ｐ吸着剤に２Ｎアンモニア水２００ ｍｅを添加し室温
にて１時間かきませた後ろ過し溶離液を得た。回収ヒト
康チオールプロテアーゼインヒビターはＡｓｐ−２００
ｐの場合６５ｏＯ単位で回収率８６％であり、Ａｓｐ−
４００ｐ（７）場合６０００単位で回収率８０％であっ
た。
を含む健康人男子プール尿５１に２．５ＮＮａＯＨ水溶
液を滴下ＬｐＨ８，５とし生じた沈澱をろ過により除去
した後２．５ＮＨＣｆ水溶液を滴下ＬｐＨ５，５とし、
Ａｓｐ吸着剤（Ａｓｐ−２００ＰまたはＡｓｐ−４００
ｐ、エンゲルハード書ミネラルズ・アンド・ケミカルズ
社製） ２５ ｙを添加後室部下１時間かきまぜた後上
澄をデカンテーション番こて除去し、Ａｓｐ−’２００
ｐまたはＡＳｌ）−４００ｐを回収した。吸着後のＡｓ
ｐ吸着剤に２Ｎアンモニア水２００ ｍｅを添加し室温
にて１時間かきませた後ろ過し溶離液を得た。回収ヒト
康チオールプロテアーゼインヒビターはＡｓｐ−２００
ｐの場合６５ｏＯ単位で回収率８６％であり、Ａｓｐ−
４００ｐ（７）場合６０００単位で回収率８０％であっ
た。
実施例４
実施例、３と同様に処理した尿（ヒト尿チオールプロテ
アーゼインヒビタ−７２００単位含［） ｉこ多孔惟ポ
リスチレン系吸着樹脂アンバーライ１−ＸＡＤ−７（ロ
ーム・アンド・ハース社製）ｓｏりを添加後室部下１時
間かきまぜた後上澄をテカンテーションにて除去し１上
記吸着樹脂を回収した。
アーゼインヒビタ−７２００単位含［） ｉこ多孔惟ポ
リスチレン系吸着樹脂アンバーライ１−ＸＡＤ−７（ロ
ーム・アンド・ハース社製）ｓｏりを添加後室部下１時
間かきまぜた後上澄をテカンテーションにて除去し１上
記吸着樹脂を回収した。
これに０．２ Ｒ４炭酸ナトリウム緩衝／１（ｐＨ１Ｏ
１５）２００ ｍｅを添加し、室温で１時間かきませた
後ろ過し、溶離液をえた。回収ヒト尿チオールプロテア
ーゼインヒビターは（’ｒ ５ Ｕ Ｏ単位で回収率９
０％であったっ 特許出願人 日本ケミカルリサーチ株式会社代 理
人 弁理上 竹 円 卓２２
１５）２００ ｍｅを添加し、室温で１時間かきませた
後ろ過し、溶離液をえた。回収ヒト尿チオールプロテア
ーゼインヒビターは（’ｒ ５ Ｕ Ｏ単位で回収率９
０％であったっ 特許出願人 日本ケミカルリサーチ株式会社代 理
人 弁理上 竹 円 卓２２
Claims (1)
- ヒト尿にケイ酸アルミニウム系吸着剤または多孔性ポリ
スチレン系吸着樹脂を、ｐＨ４〜６において、接触させ
てヒト尿チオールプロテアーゼインヒビターを選択的に
吸着させ、吸着物を分離することを特徴とするヒト尿チ
オールプロテアーゼインヒビターの採取法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58073556A JPS59199631A (ja) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | ヒト尿チオ−ルプロテア−ゼインヒビタ−の採取法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58073556A JPS59199631A (ja) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | ヒト尿チオ−ルプロテア−ゼインヒビタ−の採取法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59199631A true JPS59199631A (ja) | 1984-11-12 |
| JPH0342280B2 JPH0342280B2 (ja) | 1991-06-26 |
Family
ID=13521634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58073556A Granted JPS59199631A (ja) | 1983-04-25 | 1983-04-25 | ヒト尿チオ−ルプロテア−ゼインヒビタ−の採取法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59199631A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6251620A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-06 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Ｎａ利尿、昇圧および強心作用を有する生理活性物質の精製方法 |
| WO2003042236A1 (fr) * | 2001-11-13 | 2003-05-22 | The Nisshin Oillio, Ltd. | Procede de fabrication de proteines concentrees/epurees a l'aide d'une composition minerale d'argile |
| US8557564B2 (en) | 2006-08-21 | 2013-10-15 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method of separating microorganism using nonplanar solid substrate and device for separating microorganism using the same |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3830790A (en) * | 1971-04-03 | 1974-08-20 | Bayer Ag | Separation and purification of kallikrein-trypsin inhibitor |
| JPS5176112A (ja) * | 1974-12-27 | 1976-07-01 | Furukawa Aluminium | Taisuikaseiaruminiumugokin |
| JPS51139610A (en) * | 1975-05-26 | 1976-12-02 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | A process for preparing enzyme inhibitors |
-
1983
- 1983-04-25 JP JP58073556A patent/JPS59199631A/ja active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3830790A (en) * | 1971-04-03 | 1974-08-20 | Bayer Ag | Separation and purification of kallikrein-trypsin inhibitor |
| JPS5176112A (ja) * | 1974-12-27 | 1976-07-01 | Furukawa Aluminium | Taisuikaseiaruminiumugokin |
| JPS51139610A (en) * | 1975-05-26 | 1976-12-02 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | A process for preparing enzyme inhibitors |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6251620A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-06 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Ｎａ利尿、昇圧および強心作用を有する生理活性物質の精製方法 |
| WO2003042236A1 (fr) * | 2001-11-13 | 2003-05-22 | The Nisshin Oillio, Ltd. | Procede de fabrication de proteines concentrees/epurees a l'aide d'une composition minerale d'argile |
| US8557564B2 (en) | 2006-08-21 | 2013-10-15 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method of separating microorganism using nonplanar solid substrate and device for separating microorganism using the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0342280B2 (ja) | 1991-06-26 |
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