JP5128875B2 - 電気透析及び微生物捕獲手段を利用して試料から微生物を分離する方法及びそのための微生物分離装置 - Google Patents
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Description
また、本発明の他の目的は、電気透析及び微生物捕獲手段を利用して試料から微生物を分離するための装置を提供することである。
前記陰イオン交換膜及び第1電極によって限定さ端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第1電極チャンバと、
前記陽イオン交換膜及び第2電極によって限定さ端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第2電極チャンバと、を備える塩濃度調節装置
の前記反応チャンバに微生物を含む試料を導入するステップと、
前記第1電極と第2電極との間に電圧を印加し、前記反応チャンバ中の微生物を含む試料を電気透析して前記微生物を含む試料の塩濃度を低下させるステップと、
前記塩濃度の低下した試料をと微生物捕獲手段とを接触させるステップと、を含む試料から微生物を分離する方法であって、
前記試料は、生物学的試料であることを特徴とする試料から微生物を分離する方法を提供する。
塩濃度調節装置を図面を参照して説明すれば、次の通りである。図1は、本発明の方法に使われる塩濃度調節装置の一例を示す平面図である。
本発明の方法は、前記第1電極と第2電極との間に電圧を印加し、前記反応チャンバ中の微生物を含む試料を電気透析して前記試料の塩濃度を低下させるステップを含む。前記第1電極及び第2電極は、それぞれ正極及び負極電源に連結されることが望ましい。前記第1電極及び第2電極は、電圧の方向を変化させうる可変電源に連結されているものでありうる。前記第1電極及び第2電極に連結される電圧の方向は、本発明の装置において、前記陽イオン交換膜及び陰イオン交換膜の配置によって変わり、当業者ならば、前記反応チャンバ内のイオン物質が減少する方向に適切に方向を設定しうる。
第1電極と第2電極との間に印加する電圧は、試料に含まれる微生物、pH、塩濃度などによって適宜選択されるものであるが、1〜3V/mmが好ましく、前記電圧は、当業者ならば、所望の電気透析が起きる時間、膜の種類及び生体試料、例えば、尿の伝導度によって適宜選択しうる。
本発明の方法は、前記塩濃度が低下した試料を微生物捕獲手段と接触させるステップを含む。前記塩濃度が低下した試料は、電気透析によってイオン濃度が低下している試料である。
ratio)は、100−300mmが望ましい。
前記陰イオン交換膜及び第1電極によって端部が仕切らされ、かつイオン交換媒質を含む第1電極チャンバと、前記陽イオン交換膜及び第2電極により端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第2電極チャンバと、前記反応チャンバの前記流出口を通じて前記反応チャンバと連結されている微生物捕獲手段が備えられている容器と、を備える微生物を含む試料から微生物を分離するための装置である。
前記連結は、望ましくは、前記反応チャンバと前記容器とが連通されて連結されることである。
本発明に係る塩濃度調節装置において、前記第1電極チャンバは、前記陰イオン交換膜及び第1電極によって仕切られ、かつイオン交換媒質を含む。すなわち、前記第1電極チャンバは、前記陰イオン交換膜を前記反応チャンバと共有している(換言すると、前記陰イオン交換膜を介して反応チャンバと第1電極チャンバとは接続している。)。
本実施例では、試料入口と出口とが備えられており、サイズが10mmx23mmであるシリコンチップ上に柱構造のアレイが形成されている表面を有するチャンバを有する流動装置にバクテリア細胞を含む試料を流しつつ、細胞を前記固体支持体上に付着させ、流れ出る試料中のバクテリア細胞の数をコロニー係数を通じて決定し、これから前記固体支持体によるバクテリア細胞の捕獲効率を計算した。前記柱アレイにおいて、柱の間の距離は12μmであり、柱の高さが100μmであり、各柱の断面は、一辺の長さが25μmである正四角形である。
バッファ:100mMの酢酸ナトリウムバッファ(pH4.0)。
本実施例では、試料入口と出口とが備えられており、サイズが10mmx23mmであるシリコンチップ上に柱のアレイが形成されている表面を有するチャンバを有する流動装置に、バクテリア細胞を含む試料を流しつつバクテリア細胞を前記固体支持体上に付着させ、流れ出る試料中の細胞の数をコロニー係数を通じて決定し、これから前記固体支持体によるバクテリア細胞の捕獲効率を計算した。前記柱アレイにおいて、柱の間の距離は12μmであり、柱の高さが100μmであり、各柱の断面は、一辺の長さが25μmである正四角形である。
本実施例では、図3に示したような塩濃度の調節装置の反応チャンバに尿試料を導入し、第1電極306を正極電圧に連結し、第2電極307を負極電圧に連結して、前記尿試料に対して電気透析を実施した。
本実施例では、尿試料を脱塩させ、脱塩された尿試料を固体支持体に接触させて、固体支持体に微生物が捕獲される効率を測定した。
実施例5:電気透析が微生物の破砕及び生存力に及ぼす影響
図3に示したような塩濃度の調節装置の反応チャンバに尿試料を導入し、第1電極306を正極電圧に連結し、第2電極307を負極電圧に連結し、前記尿試料に対して電気透析を実施した。
本実施例では、実施例5と同じ方法で尿試料に対して電気透析を実施し、電気透析された試料の伝導度を電気透析によって225μS/cmに合せた後、200mMの酢酸バッファ(pH4)で希釈して得られる溶液のpH及び塩濃度を測定した。
202 第1電極チャンバ、
203 第2電極チャンバ、
204 陰イオン交換膜、
205 陽イオン交換膜、
206 第1電極、
207 第2電極、
208,208’ イオン交換媒質、
209 流入口、
210 流出口。
Claims (26)
- 陽イオン交換膜及び陰イオン交換膜によって端部が仕切られる反応チャンバと、
前記陰イオン交換膜及び第1電極によって端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第1電極チャンバと、
前記陽イオン交換膜及び第2電極によって端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第2電極チャンバと、を備える塩濃度調節装置の前記反応チャンバに微生物を含む試料を導入するステップと、
前記第1電極と第2電極との間に電圧を印加し、前記反応チャンバ中の微生物を含む試料を電気透析して前記微生物を含む試料の塩濃度を低下させて、水接触角が70°〜95°の疎水性を有する固体支持体、またはその表面にアミン系の官能基を一つ以上有する固体支持体の固体表面に付着する比率を上昇させるステップと、
pH3.0ないし6.0の範囲で前記塩濃度の低下した試料と前記固体支持体とを接触させるステップと、を含む試料から微生物を分離する方法であって、
前記試料は、生物的試料であることを特徴とする試料から微生物を分離する方法。 - 前記固体支持体は、表面に複数の突起が形成されている柱構造を有する固体支持体、ビーズ形状を有する固体支持体及び表面に複数の孔隙が形成されているふるい構造を有する固体支持体で構成された群から選択されることを特徴とする請求項1のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記突起は、アスペクト比として、柱の高さ:柱の断面の長さが1:1ないし20:1であることを特徴とする請求項2に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記柱構造は、柱の高さ:柱の間の距離の比率が1:1ないし25:1であることを特徴とする請求項3に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記柱構造は、柱の間の距離が5μmないし100μmの範囲を有することを特徴とする請求項4に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記アミン系の官能基を一つ以上有する表面は、ポリエチレンイミントリメトキシシラン(PEIM)でコーティングされていることを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記疎水性は、前記固体支持体の表面をオクタデシルジメチル(3−トリメトキシシリルプロピル)アンモニウム(OTC)またはトリデカフルオロテトラヒドロオクチルトリメトキシシラン(DFS)の化合物でコーティングして付与される性質であることを特徴とする請求項1に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記塩濃度調節装置は、前記反応チャンバを2個以上有しており、
2個以上のそれぞれの反応チャンバが、陽イオン交換膜及び陰イオン交換膜によって端部に仕切られ、かつイオン交換媒質を含むイオンチャンバを介して連結されていることを特徴とする請求項1〜7のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。 - 前記第1電極チャンバは、前記陰イオン交換膜と陽イオン交換膜とを有し、前記陰イオン交換膜に対向し、かつ前記第1電極チャンバ内に位置する陽イオン交換膜と、によって端部を仕切られ、さらにイオン交換媒質を含む第1イオンチャンバ、及び前記陰イオン交換膜に対向して前記第1電極チャンバ内に位置する陽イオン交換膜と前記第1電極とによって端部を仕切られる第2イオンチャンバで構成され、
前記第2電極チャンバは、前記陰イオン交換膜と前記陽イオン交換膜とを有し、前記陽イオン交換膜に対向して前記第2電極チャンバ内に位置する陰イオン交換膜とによって端部を仕切られ、さらにイオン交換媒質を含む第1イオンチャンバ及び、前記陽イオン交換膜に対向して前記第2電極チャンバ内に位置する陰イオン交換膜と前記第2電極とによって端部を仕切られる第2イオンチャンバで構成されることを特徴とする請求項1〜8のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。 - 前記電圧は、第1電極及び第2電極をそれぞれ正極及び負極電源に連結させて印加することを特徴とする請求項1〜9のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記イオン交換媒質は、電解質水溶液であることを特徴とする請求項1〜10のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記微生物は、バクテリア、カビまたはウイルスであることを特徴とする請求項1〜11のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記生物的試料は、尿であることを特徴とする請求項1〜12のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 前記接触ステップ前に、前記電気透析された試料をリン酸バッファまたは酢酸バッファで希釈するステップをさらに含むことを特徴とする請求項1〜13のいずれか1項に記載の試料から微生物を分離する方法。
- 請求項1ないし14のうち何れか1項に記載の方法によって分離された微生物から核酸の分離、核酸の増幅反応及び核酸の混成化反応で形成された群から選択された一つ以上の過程を、前記反応チャンバと同じ空間または異なる空間で行うことを特徴とする微生物を処理する方法。
- 陽イオン交換膜及び陰イオン交換膜によって端部が仕切られ、かつ試料注入口及び流出口が備えられた反応チャンバと、
前記陰イオン交換膜及び第1電極によって端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第1電極チャンバと、
前記陽イオン交換膜及び第2電極により端部が仕切られ、かつイオン交換媒質を含む第2電極チャンバと、
前記反応チャンバの前記流出口を通じて前記反応チャンバと連結されており、水接触角が70°ないし95°の疎水性を有する固体支持体、またはその表面にアミン系の官能基を一つ以上有する固体支持体が備えられている容器と、を備え、
かつ、前記反応チャンバは、当該反応チャンバ中に注入された微生物を含む試料を第1電極および第2電極間に電圧を印加することによって電気透析して前記微生物を含む試料の塩濃度を低下させ、かつ前記微生物が前記固体支持体と付着する比率を上昇させることを特徴とする、微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。 - 前記第1電極及び第2電極は、それぞれ正極及び負極電源に連結されていることを特徴とする請求項16に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記容器は、バッファ溶液保存部をさらに備えることを特徴とする請求項16または17に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記固体支持体は、表面に複数の突起が形成されている柱構造を有する固体支持体、ビーズ形状を有する固体支持体及び表面に複数の孔隙が形成されているふるい構造を有する固体支持体で構成された群から選択されることを特徴とする請求項16〜18のいずれか1項に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記突起は、アクペクト比として、柱の高さ: 柱の断面の長さが1:1ないし20:1であることを特徴とする請求項19に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記柱構造は、柱の高さ:柱の間の距離の比率が1:1ないし25:1であることを特徴とする請求項19または20に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記柱構造は、柱の間の距離が5μmないし100μmの範囲を有することを特徴とする請求項19〜21のいずれか1項に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記アミン系の官能基を一つ以上有する表面は、ポリエチレンイミントリメトキシシラン(PEIM)でコーティングされていることを特徴とする請求項16に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記疎水性は、前記固体支持体の表面をオクタデシルジメチル(3−トリメトキシシリルプロピル)アンモニウム(OTC)またはトリデカフルオロテトラヒドロオクチルトリメトキシシラン(DFS)の化合物でコーティングして付与される性質であることを特徴とする請求項16に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記反応チャンバが2個以上有しており、2個以上のそれぞれの反応チャンバが、陽イオン交換膜及び陰イオン交換膜によって端部に仕切られ、かつイオン交換媒質を含むイオンチャンバを介して連結されていることを特徴とする請求項16〜24のいずれか1項に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
- 前記第1電極チャンバは、前記陰イオン交換膜と前記陰イオン交換膜に対向して前記第1電極チャンバ内に位置する陽イオン交換膜とによって端部に仕切られる第1イオンチャンバ及び、前記陰イオン交換膜に対向して前記第1電極チャンバ内に位置する陽イオン交換膜と前記第1電極とによって端部に仕切られる第2イオンチャンバで構成され、
前記第2電極チャンバは、前記陽イオン交換膜と前記陽イオン交換膜に対向して前記第2電極チャンバ内に位置する陰イオン交換膜とによって端部に仕切られる第1イオンチャンバ及び、前記陽イオン交換膜に対向して前記第2電極チャンバ内に位置する陰イオン交換膜と前記第2電極とによって端部に仕切られる第2イオンチャンバで構成されることを特徴とする請求項16〜25のいずれか1項に記載の微生物を含む試料から微生物を分離するための装置。
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