JP2008031101A - γ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉の製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】桑の葉に対して嫌気処理のみを施す製造方法に比べてγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉を得ることができる桑の葉の製造方法を提供する。
【解決手段】γ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉を製造する方法は、桑の葉に嫌気処理を施してγ−アミノ酪酸含量を増加させた後、好気処理を施してグルタミン酸含量を増加させる一連の操作を行った後、最後に嫌気処理を施して、桑の葉に前記嫌気処理のみを施したときよりも、γ−アミノ酪酸含量を増加させるものである。一連の操作の嫌気処理は１３〜３５時間行われ、好気処理は５〜１１時間行われると共に、最後の嫌気処理は１３〜３５時間行われることが好ましい。また、一連の操作は１回前の嫌気処理と好気処理の一連のサイクルの後の最後の嫌気処理によるγ−アミノ酪酸含量よりも増える間繰り返すことが好ましい。さらに、桑の葉は萎凋処理されたものが好ましい。
【選択図】なし

Description

本発明は、桑の葉の嫌気処理と好気処理を交互に繰り返した後、最後に嫌気処理を施すことにより、血圧降下作用、神経鎮静作用、中性脂肪抑制作用など様々な生理活性作用を有するγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉を製造する方法に関するものである。

近年食生活が乱れる中、成人病患者は増加するばかりで、とりわけ高血圧性疾患患者の増加が著しい。また、仕事に追われ、時間にゆとりのない食生活を送ることにより、ストレスをかかえている人も増加している。そんな中、健康食品に関する関心は高まり、血圧降下作用或いは神経鎮静作用を有する幾つかの健康食品が開発されている。

例えば、γ−アミノ酪酸（以下、ＧＡＢＡと略記することがある。）は血圧降下作用、神経鎮静作用、中性脂肪抑制作用などを有することが知られており、ＧＡＢＡを蓄積させ、高含量にしたものが開発されている。ＧＡＢＡは、Ｌ−グルタミン酸脱炭酸酵素によってグルタミン酸（以下、Ｇｌｕと略記する。）から脱炭酸されて生じる遊離アミノ酸である。これまで、茶葉に対して嫌気処理と好気処理を交互に繰り返した後、最後に嫌気処理をすることにより、茶葉中の含有成分のＧＡＢＡ含量を高める製造方法は開示されている（例えば、特許文献１を参照）。

また、桑の葉に対して嫌気処理のみをし、ＧＡＢＡ含量を高める製造方法も開示されている（例えば、非特許文献１を参照）。
特開平１１−１２７７８１号公報（第１頁、第２頁、図１及び図６） 江藤他：大分県産業科学技術センター 研究報告、１６、８５〜８７（２００４）

前記非特許文献１によれば、好気処理の条件として、温度が５℃という低温であり、処理時間が１時間という短時間に設定されていることから、好気処理による効果が十分に発揮されていないものと考えられる。すなわち、好気処理において、γ−アミノ酪酸含量が若干減少し、グルタミン酸含量が若干増加する程度に過ぎないものと推測される。その結果、再び嫌気処理を行った後にγ−アミノ酪酸含量の増加は認められなかったものと考えられる。従って、桑の葉について、従来の嫌気処理のみを施す製造方法に比べて、γ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉を得る製造方法が求められている。

本発明は、以上のような従来技術の問題点に着目してなされたもので、その目的とするところは、桑の葉に対して嫌気処理のみを施す製造方法に比べて、γ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉を得ることができる桑の葉の製造方法を提供することにある。

上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明のγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉の製造方法は、桑の葉に嫌気処理を施してγ−アミノ酪酸含量を増加させた後、好気処理を施してグルタミン酸含量を増加させる一連の操作を行った後、最後に嫌気処理を施して、桑の葉に前記嫌気処理のみを施したときよりも、γ−アミノ酪酸含量を増加させることを特徴とするものである。

請求項２に記載の発明の製造方法は、請求項１において前記一連の操作における嫌気処理は１３〜３５時間行われ、好気処理は５〜１１時間行われると共に、最後の嫌気処理は１３〜３５時間行われることを特徴とするものである。

請求項３に記載の発明の製造方法は、請求項１又は請求項２においてγ−アミノ酪酸含量が１回前の嫌気処理と好気処理の一連のサイクルの後の最後の嫌気処理によるγ−アミノ酪酸含量よりも増える間、前記嫌気処理と好気処理の一連の操作を繰り返すことを特徴とするものである。

請求項４に記載の発明の製造方法は、請求項１から請求項３のいずれか一項において前記桑の葉は萎凋処理されたものであることを特徴とするものである。

本発明によれば、次のような効果を発揮することができる。
請求項１に記載の発明の桑の葉の製造方法によれば、一連の操作の嫌気処理によりＧＡＢＡが増え、好気処理によりＧｌｕが増える。好気処理により増えるＧｌｕ量は、減少するＧＡＢＡ量を上回るものと考えられる。そのため、最後に嫌気処理をすることで前記好気処理により増加したＧｌｕがＧＡＢＡに変換される。従って、嫌気処理のみを施す従来の製造方法に比べて、ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

請求項２に記載の発明の桑の葉の製造方法によれば、嫌気処理と好気処理の一連の操作の各処理時間及び最後の嫌気処理の処理時間が適切である。従って、請求項１に記載の発明の効果に加えて、一層ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

請求項３に記載の発明の桑の葉の製造方法によれば、嫌気処理と好気処理の一連の操作を繰り返す回数が適切である。従って、請求項１又は請求項２に記載の発明の効果に加えて、時間を無駄にすることなく、より一層ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

請求項４に記載の発明の桑の葉の製造方法によれば、桑の葉は萎凋処理されたものである。萎凋処理は一種の発酵処理であり、この処理により原料である桑の葉中のＧｌｕをはじめとする各種アミノ酸含量が高められる。従って、請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の発明の効果に加えて、さらにＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。また、発酵した状態の桑の葉を原料として使用するので、桑特有の風味が醸し出された桑の葉を得ることができる。

以下、本発明の最良と思われる実施形態について詳細に説明する。
本実施形態のＧＡＢＡ含量の高い桑の葉の製造方法は、桑の葉に嫌気処理を施してγ−アミノ酪酸含量を増加させた後、好気処理を施してグルタミン酸含量を増加させる一連の操作を行った後、最後に嫌気処理を施して、桑の葉に前記嫌気処理のみを施したときよりも、γ−アミノ酪酸含量を増加させるものである。

桑は、熱帯から亜熱帯の山野に自生しているクワ科クワ属の植物の総称で、酸素の放出量が多く環境にやさしい樹木で、街路樹としても植えられている。その桑の葉には、桑に特有な成分１−デオキシノジリマイシン（以下、ＤＮＪと略記する。）、ＧＡＢＡ等の有効な成分が含まれている。ＤＮＪには食後の血糖値上昇抑制作用が、ＧＡＢＡには血圧降下作用、神経鎮静作用等が知られている。従って、桑の葉は、糖尿病、高血圧等に効果があるとされている。桑の葉は、例えば日本では主にヤマグワ、カラヤマグワ、ログワの３種の系統が栽培されており、品種は１００種類以上に及んでいる。

本実施形態で使用する桑の葉の品種は特に制限されず、例えばきぬゆたか、一ノ瀬などが挙げられる。桑の葉の摘採時期及び摘採部位も特に制限されない。例えば、春に採取したものであっても、秋に採取したものであってもよい。また、部位は桑樹の枝の基部であっても、中部であっても、先端部であっても、又は葉柄であっても、葉であってもよい。しかし、桑の葉特有の成分の一つで、食後の血糖値上昇抑制作用のあるＤＮＪが多く含まれることから、春の新芽の桑の葉の先端部を使用することが特に好ましい。また、部位としては、葉の方が葉柄よりもアミノ酸量が豊富なので、葉柄を除いた葉を選別して使用することが好ましい。

前記嫌気処理とは、原料である桑の葉を嫌気的条件の下に置くことを意味する。この嫌気処理によって、桑の葉中のＧｌｕがＬ−グルタミン酸脱炭酸酵素によって脱炭酸されて、ＧＡＢＡが生成する。嫌気処理の方法は特に限定されず、例えば桑の葉を適当な大きさの容器等に入れ、ポンプ等で吸引して真空に近い状態としたり、又は真空にする代わりに窒素、炭酸ガス等の不活性ガスを送り込んで嫌気状態としても良い。中でも、確実に嫌気状態にすることができＧＡＢＡが効率的に得られることから、桑の葉を容器に充填し、容器内を不活性ガスで置換した後、密閉して行われることが特に好ましい。

嫌気処理をする時間、即ち嫌気処理時間は、好ましくは１３〜３５時間、より好ましくは１６〜３２時間、さらに好ましくは２０〜２８時間である。嫌気処理時間が１３時間未満の場合には、ＧＡＢＡに変化する含有成分であるＧｌｕがまだ豊富に残っており、またＧＡＢＡの生成量が十分でないので好ましくない。逆に、嫌気処理時間が３５時間を越える場合には、桑の葉の細胞が死滅し、また時間に見合うだけの十分なＧＡＢＡが生成しないので好ましくない。なお、嫌気処理をする温度、即ち嫌気処理温度は、通常１０〜３０℃程度であることが好ましい。処理温度が低い場合には嫌気処理時間を長くする必要がある。

一方、好気処理は、桑の葉を好気的条件の下に置くことを意味する。この好気処理によって、ＧＡＢＡの一部がＧｌｕに戻り、また桑の葉に含まれるＧＡＢＡ以外の他のアミノ酸などの含有成分がＧｌｕに変換されるためＧｌｕの蓄積量が増える。このＧｌｕの増加が、最後の嫌気処理でＧＡＢＡの増量をもたらす。

好気処理の方法としては特に限定されず、空気を送り込んで好気的条件にしたり、又は開放し外気に触れさせる方法がある。好気処理をする時間、すなわち好気処理時間は、好ましくは５〜１１時間、より好ましくは６〜１０時間、さらに好ましくは７〜９時間である。好気処理時間が５時間未満の場合には、Ｇｌｕの蓄積量が十分でなく、その後の嫌気処理によるＧＡＢＡの十分な生成量を期待できないので好ましくない。逆に、好気処理時間が１１時間を越える場合には、嫌気処理で生成したＧＡＢＡが多量に減少するので好ましくない。なお、好気処理をする温度、即ち好気処理温度は、通常１０〜３０℃程度であることが好ましい。

本実施形態では、上記の嫌気処理と好気処理の一連の操作は１回行っても、複数回行ってもどちらでもよい。複数回とは特に限定されないが、通常２〜１２回程度繰り返すのが適切である。あまり多く繰り返しても、それに見合うだけの十分なＧＡＢＡ量の増加が期待できないからである。

そして、前記嫌気処理と好気処理の一連の操作が終了した後、最後の嫌気処理を行う。ここでいう嫌気処理は、先に述べた条件と同様な条件で行えばよく、前記条件の範囲内であれば、処理時間や処理温度等は前回までの条件と同じである必要はない。

桑の葉の形態としては特に制限されず、採取したままの葉の原形を留めるものであっても、予め細かく切断したものであってもよい。しかし、予め細かく切断することで、葉の表面積が増え、酵素反応が進行しやすい良い嫌気状態又は好気状態にすることができる。その結果、切断しないときに比べ、多量のＧｌｕが生成し、結果としてＧＡＢＡ含量が高まるので、予め細かく切断しておくと良い。また、細かく切断することで作業性も改善される。なお、細かくとは具体的には２〜３ｃｍ程度にすることが好ましい。

また、前記桑の葉の形態としては、萎凋処理されたものであっても、萎凋処理されていないものであってもどちらでも良い。ここでいう萎凋処理とは、桑の葉を採取後、一定時間静置し、葉を萎えさせることであり、一種の発酵処理に相当する。萎凋処理をすることで桑の葉が発酵し、その結果、原料である桑の葉中のＧｌｕをはじめとする各種アミノ酸含量が高められる。萎凋処理により、桑の葉中のＧｌｕ含量が高まると、上述したようにその後嫌気処理を行うことによりＧＡＢＡ含量を高めることができる。従って、萎凋処理を行った桑の葉を原料として用いることが好ましい。

なお、前記萎凋処理において一定時間静置しとは、通常１２〜２４時間以上静置することを意味する。ただし、萎凋処理は一種の発酵処理に相当し、作業環境温度の影響を受けやすい。従って、作業環境温度が１０℃前後と低いときには萎凋処理時間を延ばしたほうがよい。

本実施形態の原料である桑の葉は、生理活性作用のある有効成分として上述したＧＡＢＡ、ＤＮＪの他にＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅなどの分岐アミノ酸を含有している。分岐アミノ酸は、筋肉蛋白質の１５〜２０％を占めており、筋肉を保つために必要なアミノ酸で、疲労回復、体脂肪低下、筋力アップ等に効果がある。本実施形態の製造方法では、ＧＡＢＡ含量を高めるだけではなく、上記ＤＮＪ及び分岐アミノ酸の含量を高めることもできる。

本実施形態の製造方法によって得られる桑の葉は、ＧＡＢＡ、ＤＮＪ、分岐アミノ酸を有効成分として含有している。従って、ＧＡＢＡ、ＤＮＪ及び分岐アミノ酸が有する生理活性作用を利用して、食品、健康食品及び医薬品等の種々の形態で用いられる。なお、例えば、ＧＡＢＡの作用としては、血圧上昇抑制、神経鎮静、中性脂肪抑制などが、ＤＮＪの作用としては、食後の血糖値上昇抑制などが、分岐アミノ酸の作用としては体脂肪低下、疲労回復、筋力アップなどが挙げられる。前記健康食品の剤形としては特に限定されず、例えば錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、粉末、顆粒、エキス、ドリンク等の形態が挙げられる。

また、本実施形態の製造方法によって得られる桑の葉は、必要に応じて最後の嫌気処理のあと、蒸気で蒸し、酵素を失活させるとよい。この操作により、青臭さがなく、保存性が良い桑の葉とすることができる。さらに、必要に応じて桑の葉を蒸気で蒸した後、葉を揉むという揉捻処理をするとよい。この操作により、葉中に含まれる成分が浸出しやすい状態にすることができる。このことから、例えば、本実施形態の製造方法により得られる桑の葉を桑茶として利用する場合には、揉捻処理をすることが好ましい。

さて、本実施形態における作用について説明すると、桑の葉に対して一連の操作の嫌気処理を施すことによりＧＡＢＡが増加し、好気処理を施すことによりＧＡＢＡが減少する傾向を示し、Ｇｌｕが増加する。このとき、Ｇｌｕの増加は、ＧＡＢＡ以外のアミノ酸がＧｌｕに変化することによるものと考えられ、その分がＧＡＢＡの増量に繋がる。そして、最後の嫌気処理を施すことにより前記好気処理で増加したＧｌｕがＧＡＢＡに変換され、従来の嫌気処理のみを施す製造方法に比べて、ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉が得られる。

例えば、温度２５℃の条件下で嫌気処理２４時間と好気処理８時間の一連の操作を３回繰り返し行った後、最後に嫌気処理を２４時間行ったときのＧｌｕの減少量とＧＡＢＡの生成量を比較すると、ＧＡＢＡの生成量の方が約６倍多い結果となる。この結果より、本実施形態の製造方法では好気処理工程においてＧｌｕ以外の他の物質がＧｌｕに変化しているものと考えられる。

前記実施形態によって発揮される効果について、以下にまとめて記載する。
・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、一連の操作の嫌気処理後に好気処理を行い、その好気処理でＧｌｕの増量を図り、その増量したＧｌｕが最後の嫌気処理でＧＡＢＡに変換される。従って、嫌気処理のみを施す従来の製造方法に比べて、ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、一連の操作の嫌気処理は１３〜３５時間行われ、好気処理は５〜１１時間行われると共に、最後の嫌気処理は１３〜３５時間行われる。従って、処理時間が適切であるので、一層ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、一連の操作の嫌気処理と好気処理の繰り返し回数が１〜１２回と適切である。従って、時間を無駄にすることなく、より一層ＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、桑の葉は萎凋処理されたものである。萎凋処理は一種の発酵処理であり、この処理により原料である桑の葉中のＧｌｕをはじめとする各種アミノ酸含量が高められる。従って、萎凋処理されていない桑の葉のときよりも、さらにＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。また、発酵した状態の桑の葉を原料として使用するので、桑特有の風味が醸し出された桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、桑の葉は２〜３ｃｍに細かく切断されたものである。従って、葉の表面積が大きく、酵素反応が進行しやすい良い嫌気状態又は好気状態であるので、細かく切断されていない桑の葉のときよりもさらにＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、嫌気処理は桑の葉を容器に充填し、容器内を不活性ガスで置換した後、容器を密閉して行われている。従って、確実に嫌気状態にすることができるので、短時間でＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、桑の葉は葉柄を除いて選別されたものである。従って、Ｇｌｕ、ＧＡＢＡが豊富であるので、葉柄が選別されていない桑の葉のときよりもさらにＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 本実施形態の桑の葉の製造方法によれば、桑の葉は春に採取されたものである。従って、ＤＮＪが豊富に含有されているので、秋に採取された桑の葉のときよりもさらに血糖値上昇抑制作用の強いＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

以下に実施例、比較例及び測定例を挙げ、前記実施形態をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
（比較例１、嫌気処理のみ６０時間実施）
１ｋｇ茶袋（アルミニウム製）を５つ用意し、葉柄を除いて選別し、且つ約２〜３ｃｍに細かく切断した中国四川省西昌の桑の葉を１袋あたり２５ｇ入れ、袋内を窒素ガスで置換し封入して嫌気処理を行った。嫌気処理は２５℃で６０時間実施し、途中１２時間、２４時間、３６時間、４８時間と最終６０時間で分析用サンプルを採取した。なお、嫌気処理を行わないもの（０時間）を対照サンプルとして用意した。各処理後の試料は、電子レンジを用いて酵素失活、乾燥させ、これをアミノ酸分析に供試した。

アミノ酸の測定法の概略を述べると、日立製の高速液体クロマトグラフＬ−２０００シリーズを用い、陽イオン交換カラムにより各遊離アミノ酸を分離した後、オルトフタルアルデヒド（ＯＰＡ）によりポストカラム誘導体化し、蛍光検出器により定量した。各種遊離アミノ酸量の測定値を表１に示す。なお、表中のＧｌｕはグルタミン酸、Ｖａｌはバリン、Ｉｌｅはイソロイシン、ＬｅｕはロイシンをＧＡＢＡはγ−アミノ酪酸をそれぞれ表す。また、アミノ酸量は桑の葉１ｇあたりの含量で示す。

表１の結果を見ると、嫌気処理をすることによりＧＡＢＡ含量及び分岐アミノ酸であるＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅの含量は最終的に増加し、一方でＧｌｕ含量は最終的に減少しているという結果である。

（比較例２、嫌気処理２４時間と好気処理１２時間を１回実施後、嫌気処理２４時間（計処理時間６０時間）実施）
嫌気処理を２４時間行った後、好気処理を１２時間行う操作を１回実施した後、嫌気処理を２４時間行った。桑の葉としては、比較例１と同じく葉柄を除いて選別し、且つ約２〜３ｃｍに細かく切断した中国四川省西昌の桑の葉を用いた。操作としては、嫌気処理は、処理時間以外は比較例１と同様な条件及び方法で行った。また、好気処理は、嫌気処理後、袋を開けて桑の葉を外気に曝すことによって行った。途中嫌気処理及び好気処理の間で分析用サンプルを採取した。そして、比較例１と同様な方法によりアミノ酸分析を行った。その結果を表２に示す。

表２の結果を見ると、嫌気処理及び好気処理の繰り返しにより、ＧＡＢＡ含量及び分岐アミノ酸であるＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅの含量は最終的に増加し、一方でＧｌｕ含量は最終的に減少しているという結果である。

また、比較例２及び比較例１の桑の葉中のＧＡＢＡ含量の変化を図１にそれぞれ○と△で、一方Ｇｌｕ含量の変化を図２にそれぞれ○と△で示す。
図１のＧＡＢＡ含量及び図２のＧｌｕ含量の変化を見ると、ＧＡＢＡは嫌気処理時に増加し、好気処理時に減少する傾向を示している。一方Ｇｌｕは逆に嫌気処理時に減少し、好気処理時に増加する傾向を示している。さらに詳細に図１のＧＡＢＡ含量の変化を見ると、嫌気処理と好気処理を繰り返したほうが、嫌気処理のみのときよりも増加量が少ないという結果である。この結果を次のように解釈することができる。図１からもわかるようにＧＡＢＡは嫌気処理をすることで増加し、逆に好気処理をすることで減少する傾向を示す。従って、嫌気処理及び好気処理の条件の組み合わせが悪いと、嫌気処理のみのときよりもＧＡＢＡ含量を高めることができないであろう。例えば、前記悪い処理条件としては、嫌気処理時間が短かくて、十分にＧＡＢＡ含量が高められない場合や、逆に好気処理時間が長くて、せっかく高められたＧＡＢＡ含量が減少してしまう場合が考えられる。

比較例２及び比較例１の結果より、嫌気処理のみのときよりも確実に桑の葉中のＧＡＢＡ含量を高めるには、嫌気処理及び好気処理の処理時間が非常に重要であることがわかる。

そこで、嫌気処理時間は２４時間のままで、好気処理時間を８時間と短くして一連の操作を行う実施例１を行った。その比較として、比較例３で嫌気処理のみを１２０時間実施した。

（比較例３、嫌気処理のみ１２０時間実施）
桑の葉としては鹿児島県日置市日吉圃場の桑の葉を、上記と同様な除柄及び切断処理をして使用した。操作としては、嫌気処理時間を１２０時間としたこと以外は比較例１と同様な条件及び方法で嫌気処理を行い、アミノ酸分析を行った。なお、分析用サンプルは途中２４時間、４８時間、７２時間、９６時間と最終１２０時間で採取した。また、嫌気処理を行わないもの（０時間）を対照サンプルとして用意した。その結果を表３に示す。

表３の結果を見ると比較例１と同様に、嫌気処理をすることによりＧＡＢＡ含量及び分岐アミノ酸であるＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅの含量は最終的に増加し、一方でＧｌｕ含量は最終的に減少するという結果であった。

（実施例１、嫌気処理２４時間と好気処理８時間を３回実施後、嫌気処理２４時間（計処理時間１２０時間）実施）
嫌気処理時間を２４時間行った後、好気処理を８時間行う操作を１組として３回実施した後、最後に嫌気処理を２４時間行った。桑の葉は、比較例２と同じ鹿児島県日置市日吉圃場の桑の葉を同様に処理し使用した。操作としては、好気処理時間を８時間にしたこと及び繰り返し回数を３回としたこと以外は比較例２と同様な条件及び方法で嫌気及び好気の繰り返し処理を行い、アミノ酸分析を行った。その結果を表４に示す。

表４の結果を見ると比較例２と同様に、嫌気処理及び好気処理の繰り返しによりＧＡＢＡ含量及び分岐アミノ酸であるＶａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅの含量は最終的に増加し、一方でＧｌｕ含量は最終的に減少するという結果であった。

また、実施例１及び比較例３の桑の葉中のＧＡＢＡ含量の変化を図３にそれぞれ○と△で、一方Ｇｌｕ含量の変化を図４にそれぞれ○と△で示す。図３及び図４をみると、比較例２及び比較例１のときと同様に、ＧＡＢＡは嫌気処理時に増加し、好気処理時に減少する傾向を示し、一方Ｇｌｕは逆に嫌気処理時に減少し、好気処理時に増加する傾向を示していた。

しかし、ＧＡＢＡの増加量を比較してみると、比較例２及び比較例１の場合とは異なり、嫌気処理のみの比較例３の場合よりも、嫌気処理と好気処理を繰り返す実施例１の場合のほうがＧＡＢＡの増加量が多いという結果であった。実施例１では嫌気処理と好気処理の条件の組み合わせが適切であったので、比較例１及び比較例２の場合とは異なり、嫌気処理と好気処理を繰り返すことでＧＡＢＡ含量が嫌気処理のみの場合よりも増加した。また、実施例１では嫌気処理と好気処理を繰り返す回数は比較例２と同じ１回の場合でも、或いは２回の場合でも、比較例３の嫌気処理のみの場合と比べてＧＡＢＡの増加量は多いものであった。

（実施例２、萎凋処理前後での桑の葉中のアミノ酸量の違い）
葉柄を除き選別して、約２〜３ｃｍに細かく切断した中国四川省西昌の桑の葉を、シートの上に薄く満遍なく広げ、１２℃の室内で２４時間静置し、萎凋処理を行った。そして、萎凋処理をする前後での桑の葉中のアミノ酸量の分析を行った。分析は上記と同様な方法にて行った。その結果を表５に示す。また変化の様子を図５に示す。なお、Ａｓｐはアスパラギン酸を、Ｔｈｒはスレオニンを、Ｓｅｒはセリンを、Ａｓｎはアスパラギンを、Ｇｌｎはグルタミンを、Ａｌａはアラニンを、Ｐｈｅはフェニルアラニンを、Ａｒｇはアルギニンをそれぞれ表す。また、図５で斜線は萎凋処理をする前、白抜きは萎凋処理をした後の結果を示す。

表５の結果及び図５の変化の様子を見ると、増加の程度に差はあるものの、萎凋処理をすることにより原料である桑の葉中の各種アミノ酸含量は軒並み増加することがわかる。

（実施例３、萎凋処理の有無によるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中のアミノ酸量の違い）
実施例２と同様に萎凋処理をした桑の葉を原料として用いる場合と、萎凋処理をしていない桑の葉を原料として用いる場合で、最終得られるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中のアミノ酸量の違いを検討した。

桑の葉としては、実施例２と同様の葉柄を除き選別して、約２〜３ｃｍに細かく切断した中国四川省西昌の桑の葉を使用した。そして、１２℃の室内で２４時間静置し、萎凋処理をした桑の葉と、萎凋処理をしていない桑の葉の２種を用いて、それぞれ嫌気処理のみの操作と、嫌気処理と好気処理の繰り返しの操作を行った。嫌気処理のみの操作は比較例１と同様に、嫌気処理と好気処理の繰り返しの操作は比較例２と同様に行った。

前記操作により得られたＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を、１００℃で１分蒸青した後、水分５％程度まで乾燥し、選別、粗粉砕、最後にスタンビング粉砕機で微粉砕して最終的に得られたＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中のアミノ酸量を分析した。なお、分析は上記と同様な方法にて行った。その結果を表６に示す。またアミノ酸量の違いを図６に示す。表６、図６の（ａ）に嫌気処理のみのときの結果を、（ｂ）に嫌気処理と好気処理を繰り返したときの結果を示す。なお、表６及び図６において、Ｌｙｓはリジンを表す。また、図６（ａ）及び（ｂ）で斜線は萎凋処理をする前、白抜きは萎凋処理をした後の結果を示す。

表６及び図６のアミノ酸量の違いの結果をみると、各種アミノ酸量の増加の程度に差はある。しかし、（ａ）、（ｂ）どちらのときでも、萎凋処理をした桑の葉を原料として使用した場合に得られるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中の各種アミノ酸量は、萎凋処理をしていない桑の葉を原料として使用した場合に得られるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中の各種アミノ酸量よりも軒並み増加する傾向を示している。また、得られる桑の葉中のＧＡＢＡ含量は、萎凋処理をした桑の葉を原料として使用するときのほうが、（ａ）、（ｂ）どちらのときも高い結果である。

（実施例４、桑の葉の部位によるＧｌｕ及びＧＡＢＡ量の違い）
採取した鹿児島県日置市日吉圃場の桑の葉を、葉柄と葉柄を除去した葉の部分に分けて、上記と同様なアミノ酸分析法によりＧｌｕ及びＧＡＢＡの含量を測定した。その結果を表７に示す。

表７の結果をみると、葉柄よりも葉柄を除去した葉の部分の方がＧｌｕ含量、ＧＡＢＡ含量共に高い結果である。

（測定例１、桑の葉中のＤＮＪ含量の測定）
桑の葉としては、比較例１及び比較例２と同様の、葉柄を除いて選別し、且つ約２〜３ｃｍに細かく切断した中国四川省西昌の桑の葉を用いた。そして、一方は萎凋処理及び嫌気処理と好気処理の繰り返しをしずに、切断した桑の葉そのものを１００℃で１分蒸し、水分５％程度まで乾燥し、選別、粗粉砕、最後にスタンビング粉砕機で微粉砕処理した。（前記方法を方法（１）とする。）もう一方は、切断した桑の葉を１２℃の室内で２４時間静置し、萎凋処理をし、比較例２と同様に嫌気処理と好気処理の繰り返しの操作を行った後、１００℃で１分蒸し、水分５％程度まで乾燥し、選別、粗粉砕、最後にスタンビング粉砕機で微粉砕処理した。（前記方法を方法（２）とする。）そして、異なる方法で得られた２種の桑の葉中のＤＮＪ含量を測定した。測定は、液体クロマトグラフ−質量分析法にて行った。分析法について簡単に説明すると、桑の葉の検体にメタノール、水及び酢酸の混合溶液を加え、振とう後綿栓濾過を行った。そして、適当な濃度に調整し、液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析計にて下記条件で分析を行った。

液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析条件
カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０, 直径４．６ｍｍ, 長さ２５ｃｍ
移動相：アセトニトリル、水及び酢酸の混合溶液
流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
イオン化法：エレクトロスプレー（正イオン検出モード）
設定イオン数：ｍ／ｚ １６３．７→１１０．０
その結果は、方法（１）で得られた桑の葉１００ｇ中のＤＮＪ含量は２３０ｍｇで、方法（２）で得られた桑の葉１００ｇ中のＤＮＪ含量は２９０ｍｇであった。前記結果より、萎凋処理及び嫌気処理と好気処理の繰り返しを行うことで、桑の葉中のＤＮＪ含量が増えることがわかる。

なお、本実施形態は、次のように変更して実施することも可能である。
・ 原料の桑の葉として、様々な産地の桑の葉をブレンドした桑の葉を使用してもよい。このように構成した場合、様々な産地の桑の葉の含有成分量の特徴を活かして、栄養価が高く、広い生理活性作用を有するＧＡＢＡ含量の高い桑の葉とすることができる。

・ 本製造方法によって得られるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉の使用用途に応じて、必要であれば、製造工程において、乾燥、焙煎、粉砕処理を施してもよい。このように構成した場合、前記処理を施さない場合よりさらに使用用途に適した形態にすることができ、利用しやすくなる。

さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。
・ 前記桑の葉は葉柄を除去したものであることを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載のＧＡＢＡ含量の高い桑の葉の製造方法。このように構成した場合、Ｇｌｕ、ＧＡＢＡをはじめとした各種アミノ酸量が豊富であるので、葉柄を選別していない桑の葉を使用するときよりもさらにＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 前記桑の葉は２〜３ｃｍに細かく切断したものであることを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載のＧＡＢＡ含量の高い桑の葉の製造方法。このように構成した場合、葉の表面積が大きく、酵素反応が進行しやすい良い嫌気状態又は好気状態であるので、採取した桑の葉を切断しないときよりもさらにＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 前記嫌気処理は桑の葉を容器に充填し、容器内を不活性ガスで置換した後、容器を密閉して行われることを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載のＧＡＢＡ含量の高い桑の葉の製造方法。このように構成した場合、確実に嫌気状態にすることができるので、短時間でＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

・ 前記桑の葉は春に採取した桑の葉であることを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載のＧＡＢＡ含量の高い桑の葉の製造方法。このように構成した場合、ＤＮＪが豊富に含有されているので、秋に採取した桑の葉を使用するときよりもさらに血糖値上昇抑制作用の強いＧＡＢＡ含量の高い桑の葉を得ることができる。

比較例１及び比較例２における桑の葉中のＧＡＢＡ含量の経時的変化を示す折れ線グラフ。 比較例１及び比較例２における桑の葉中のＧｌｕ含量の経時的変化を示す折れ線グラフ。 実施例１及び比較例３における桑の葉中のＧＡＢＡ含量の経時的変化を示す折れ線グラフ。 実施例１及び比較例３における桑の葉中のＧｌｕ含量の経時的変化を示す折れ線グラフ。 実施例２における萎凋処理前後での桑の葉中の各種アミノ酸量の変化を示す棒グラフ。 （ａ）は嫌気処理のみのときの実施例３における萎凋処理の有無によるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中の各種アミノ酸量の変化を示す棒グラフ、（ｂ）は嫌気処理と好気処理の繰り返しのときの実施例３における萎凋処理の有無によるＧＡＢＡ含量の高い桑の葉中の各種アミノ酸量の変化を示す棒グラフ。

Claims (4)

1. 桑の葉に嫌気処理を施してγ−アミノ酪酸含量を増加させた後、好気処理を施してグルタミン酸含量を増加させる一連の操作を行った後、最後に嫌気処理を施して、桑の葉に前記嫌気処理のみを施したときよりも、γ−アミノ酪酸含量を増加させることを特徴とするγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉の製造方法。
2. 前記一連の操作における嫌気処理は１３〜３５時間行われ、好気処理は５〜１１時間行われると共に、最後の嫌気処理は１３〜３５時間行われることを特徴とする請求項１に記載のγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉の製造方法。
3. γ−アミノ酪酸含量が１回前の嫌気処理と好気処理の一連のサイクルの後の最後の嫌気処理によるγ−アミノ酪酸含量よりも増える間、前記嫌気処理と好気処理の一連の操作を繰り返すことを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉の製造方法。
4. 前記桑の葉は萎凋処理されたものであることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載のγ−アミノ酪酸含量の高い桑の葉の製造方法。

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