JP2007532692A

JP2007532692A - ピペラジン部分により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミド結合体及びそれを調製するための方法

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Publication number: JP2007532692A
Application number: JP2007509062A
Authority: JP
Inventors: カマル，アーメッド; ロンドラ，ラム; バスカーラメシュカンナ，ゴラパリ
Original assignee: カウンシルオブサイエンティフィクアンドインダストリアルリサーチ
Priority date: 2004-06-30
Filing date: 2004-06-30
Publication date: 2007-11-15
Anticipated expiration: 2024-06-30
Also published as: EP1761537A1; WO2006003670A1; ATE518866T1; JP4638485B2; EP1761537B1

Abstract

本発明は、潜在的な抗腫瘍剤としての、新規のピペラジン部分により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミドハイブリッドに関する。本発明は、潜在的な抗腫瘍剤として有用である、新規のピペラジン部分により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミドハイブリッドを調製するための方法にも関する。

Description

本発明は、潜在的な抗腫瘍剤としての、新規のピペラジン部分により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミドハイブリッド（ｈｙｂｒｉｄ）に関する。本発明は、潜在的な抗腫瘍剤として有用である、新規のピペラジン部分により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミドハイブリッドを調製するための方法にも関する。

本発明は特に、可能性のある抗癌剤としての、ピペラジン部分により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミドハイブリッドの合成に関する。新規のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−ナフタルイミドハイブリッド（ＶＩＩＩ）の構造式は以下の通りであり、ここでｎ₁＝２、３、４、ｎ₂＝２、３、４。

ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンは、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）種由来の、ＤＮＡと相互作用する抗腫瘍抗生物質のファミリーである。天然のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンの例としては、アントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、トマイマイシン（ｔｏｍａｙｍｙｃｉｎ）、シビロマイシン（ｓｉｂｉｒｏｍｙｃｉｎ）及びＤＣ−８１が挙げられる。これらの化合物は、それらのＮ１０−Ｃ１１イミン／カルビノールアミン部分による、ＤＮＡの副溝内のグアニン残基のＣ２−アミンの位置への共有結合により生物活性を示し、Ｐｕ−Ｇ−Ｐｕ配列への優先をもたらす（Ｋｕｎｉｍｏｔｏ，Ｓ．；Ｍａｓｕｄａ，Ｔ．；Ｋａｎｂａｙａｓｈｉ，Ｎ．；Ｈａｍａｄａ，Ｍ．；Ｎａｇａｎａｗａ，Ｈ．；Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｍ．；Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ＴａｎｄＵｎｅｚａｗａ，Ｈ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ，１９８０，３３，６６５．；Ｋｏｈｎ，Ｋ．Ｗ．ａｎｄＳｐｅｏｕｓ，Ｃ．Ｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，１９７０，９１，５５１．；Ｈｕｒｌｅｙ，Ｌ．Ｈ．；Ｇａｉｒｐｌａ，Ｃ．ａｎｄＺｍｉｊｅｗｓｋｉ，Ｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ．Ａｃｔａ．，１９７７，４７５，５２１．；Ｋａｐｌａｎ，Ｄ．Ｊ．ａｎｄＨｕｒｌｅｙ，Ｌ．Ｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８１，２０，７５７２．）。この分子は、Ｃ−環からＡ−環を見た場合に、右回りのねじれを有している。これは、ＰＢＤがＢ形ＤＮＡの湾曲を反映し、副溝の壁（ｗａｌｌ）及び床（ｆｌｏｏｒ）と等らせん（ｉｓｏｈｅｌｉｃａｌ）接触を保持することを可能にする。ここ数年は、新規のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドの開発において、注目が高まってきている。多くのＰＢＤ結合体が合成され、それらの抗癌活性が調べられた（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．；Ｍｏｒｒｉｓ，Ｓ．Ｊ．；Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９６，５６３．；Ｄａｍａｙａｎｔｈｉ，Ｙ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｐ．；Ｌｏｗｎ，Ｊ．Ｗ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９９，６４，２９０．；Ｋａｍａｌ，Ａ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｎ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｇ．Ｓ．Ｋ．；Ｒａｍｅｓｈ，ＧＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１９３３，Ｋａｍａｌ，Ａ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｎ．；ＲｅｄｄｙＩｎｄｉａｎｐａｔｅｎｔａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．２０９／ＤＥＬ／２０００）。最近、Ｃ２／Ｃ２エキソ不飽和（ｅｘｏｕｎｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）を有するＣ−８結合ＰＢＤ二量体が、設計そして合成された（Ｇｒｅｇｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．；Ｈｏｗａｒｄ，Ｐ．Ｗ．；Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｊ．Ａ．；Ｂｒｏｏｋｓ，Ｎ．Ａ．；Ａｄａｍ，Ｌ．Ｊ．；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｔ．Ｃ；Ｋｅｌｌａｎｄ，Ｌ．Ｒ．ａｎｄＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，７３７）。また、顕著なＤＮＡ結合能及び潜在的抗腫瘍活性を有する、非架橋混合イミン−アミドＰＢＤ二量体が合成された（Ｋａｍａｌ，Ａ．；Ｒａｍｅｓｈ，Ｇ．；Ｌａｘｍａｎ，Ｎ．；Ｒａｍｕｌｕ，Ｐ．；Ｓｒｉｎｉｖａｓ，Ｏ．；Ｎｅｅｌｉｍａ，Ｋ．；Ｋｏｎｄａｐｉ，Ａ．Ｋ．；Ｓｒｉｎｕ，Ｖ．Ｂ．；Ｎａｇａｒａｊａｒａｍ，Ｈ．Ｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，４５，４６７９）。この研究室の以前の実験では、ＰＢＤはアルカン鎖でナフタルイミドに結合され、期待できる抗癌活性を示した（Ｋａｍａｌ，Ａ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｎ．；Ｒｅｄｄｙ，Ｇ．Ｓ．Ｋ．；Ｒａｍｅｓｈ，ＧＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１９３３，Ｋａｍａｌ，Ａ；Ｒｅｄｄｙ，Ｂ．Ｓ．Ｎ．；ＲｅｄｄｙＩｎｄｉａｎｐａｔｅｎｔａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＮｏ．２０９／ＤＥＬ／２０００）。しかし、本発明では、ＰＢＤ及びナフタルイミド部分を、単なるアルカン鎖スペーサーの代わりに、アルキル側鎖を有するピペラジン部分で結合した。表１及び２に示すように、スペーサー中にピペラジン部分を組み込むことにより、これらの新規ハイブリッドは、ｉｎｖｉｔｒｏでの抗癌活性の強化だけでなく、多くのこのタイプのハイブリッドに対して顕著なＤＮＡ結合親和性を示す。

発明の目的
本発明の主な目的は、抗癌剤として有用な、新規なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを提供することである。本発明の別の対象は、抗腫瘍剤として有用な、新規のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを調製するための方法を提供することである。

発明の概要
従って、本発明は、式ＶＩＩＩの新規なピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ここで、ｎ₁＝２、３、４、ｎ₂＝２、３、４）を提供する。

本発明は、上記に示した式ＶＩＩＩのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ここで、ｎ₁＝２、３、４、ｎ₂＝２、３、４）を調製するための方法も提供する。当該方法は、式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールをジブロモアルカンと非プロトン性水混和性有機溶媒中で弱無機塩基の存在下において還流温度で４８時間反応させること、式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（ｎ−ブロモアルコキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離すること、式Ｖの化合物をピペラジン結合ナフタルイミドと弱無機塩基の存在下で反応させて式ＶＩの化合物を単離すること、それをＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏを用いて有機溶媒の存在下で還流温度において還元すること、上記の式ＶＩＩのアミノ化合物を既知の脱保護剤と従来の方法で反応させて、新規の式ＶＩＩＩのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ここで、ｎは上記の通り）を得ること、を含んで成る。

発明の詳細な説明
前駆体である、式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．；Ｍｕｒｔｈｙ，Ｖ．Ｓ．；Ｌａｎｇｌｅｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｊｏｎｅｓ，Ｇ．；Ｂ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９０，８１）は、文献の方法により調製した。

本発明のいくつかの代表的な式ＶＩＩＩの化合物は下記のとおりである：
１．７−メトキシ−８−｛２−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］エチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
２．７−メトキシ−８−｛３−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
３．７−メトキシ−８−｛４−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
４．７−メトキシ−８−｛３−［４−［３−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン
５．７−メトキシ−８−｛４−［４−［４−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）ブチル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン

これらのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドの新規のアナログは、結腸（ＨＴ−２９、ＨＣＴ−１５）、肺（Ａ−５４９、ＨＯＰ−６２）、頸部（ＳｉＨａ）起源の選択したヒト癌細胞株において、期待できる抗癌活性を示した。合成したこの分子は、潜在的な配列選択的ＤＮＡ結合特性を有する、非常に生物学的に重要なものである。スキームＩに示すように、これは、
１．ＤＣ−８１中間体のＣ−８の位置における、ナフタルイミド部分とのエーテル結合。
２．反応混合物を２４〜４８時間還流すること。
３．Ｃ−８結合ＰＢＤハイブリッドの合成。
４．酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタン及びメタノールなどの異なる溶媒を用いた、カラムクロマトグラフィーによる精製。
を含んで成る、新規のコンジナー（ｃｏｎｇｅｎｅｒ）の設計及び合成法をもたらした。

以下の実施例は例示として与えられ、従って本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

実施例１：式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）及び１，２ジブロモエタン（９４０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を４８時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物Ｖを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）１.３０−１.４５（ｍ，６Ｈ），１.７０−２.３５（ｍ，４Ｈ），２.７０−２.８５（ｍ，４Ｈ），３.１２−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６.３Ｈｚ），３.９５（ｓ，３Ｈ），４.４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ），４.６０−４.７５（ｍ，１Ｈ），４.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３Ｈｚ），６.８０（ｓ，１Ｈ），７.６５（ｓ，１Ｈ）。

式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（２−ブロモエトキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（５０７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ピペラジン結合ナフタルイミド（３４０ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（４１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物ＶＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ３、２ＯＯＭＨｚ）１.２２−１.４０（ｍ，６Ｈ），１.７０−２.３５（ｍ，４Ｈ），２.５５−２.９５（ｍ，１６Ｈ），３.１５−３.３２（ｍ，２Ｈ），３.９２（ｓ，３Ｈ），４.１５−４.３５（ｍ，４Ｈ），４.５７−４.７２（ｍ，１Ｈ），４.８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３Ｈｚ），６.７７（ｓ，１Ｈ），７.６０−７.８０（ｍ，３Ｈ），８.３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８.５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.６Ｈｚ）。

式ＶＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［２−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］エチル］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（７３６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／メタノールの溶液にＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（１.１２ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、そのＴＬＣが反応の完了を示すまでこの混合物を還流した。メタノールを蒸発させ、１０％のＮａＨＣＯ₃溶液を添加した。水層を酢酸エチルで抽出し、混合した有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、アミノチオアセタール（ＶＩＩ）を得、そして次の段階で直接用いた。

ＶＩＩ（７０６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ₂（６２４ｍｇ、２.３ｍｍｏｌ）及びＣａＣＯ₃（２５０ｍｇ、２.５ｍｍｏｌ）／ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏの溶液（４：１）を、そのＴＬＣが出発物質の完全な消費を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトベッド（ｂｅｄ）に通して濾過した。有機層を濃縮し、乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＶＩＩＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.９０−２.４０（ｍ，４Ｈ），２.４５−２.９２（ｍ，１２Ｈ），３.５５−３.８２（ｍ，３Ｈ），３.９２（ｓ，３Ｈ），４.０５−４.４０（ｍ，４Ｈ），６.７７（ｓ，１Ｈ），７.４５（ｓ，１Ｈ），７.６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３９Ｈｚ），７.７６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７.６９Ｈｚ），８.２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.２Ｈｚ），８.６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.３２Ｈｚ）。

実施例２：式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（８２８ｍｇ、６ｍｍｏｌ）及び１，３ジブロモプロパン（１ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を４８時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物Ｖを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.２５−１.４０（ｍ，６Ｈ），１.７２−２.４２（ｍ，６Ｈ），２.７０−２.８（ｍ，４Ｈ），３.１５−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６.２０Ｈｚ），３.９５（ｓ，３Ｈ），４.２０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４.９６Ｈｚ），４.６０−４.７５（ｍ，１Ｈ），４.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３３Ｈｚ），６.７８（ｓ，１Ｈ），７.６８（ｓ，１Ｈ）。

式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（３−ブロモプロポキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（５２１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ピペラジン結合ナフタルイミド（３４０ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（４１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物ＶＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.３０−１.４２（ｍ，６Ｈ），１.７０−２.３０（ｍ，６Ｈ），２.４０−２.８２（ｍ，１６Ｈ），３.１５−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.９２（ｓ，３Ｈ），４.１５（ｍ，２Ｈ），４.３０（ｍ，２Ｈ），４.６０−４.７０（ｍ，１Ｈ），４.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.２５Ｈｚ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.６５（ｓ，１Ｈ），７.７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７.４Ｈｚ），８.２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８.６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.６Ｈｚ）。

式ＶＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［３−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］プロピル］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（７５０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／メタノールの溶液にＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（１.１２ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、そのＴＬＣが反応の完了を示すまでこの混合物を還流した。メタノールを蒸発させ、１０％のＮａＨＣＯ₃溶液を添加した。水層を酢酸エチルで抽出し、混合した有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、アミノチオアセタール（ＶＩＩ）を得、そして次の段階で直接用いた。

ＶＩＩ（７２０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ₂（６２４ｍｇ、２.３ｍｍｏｌ）及びＣａＣＯ₃（２５０ｍｇ、２.５ｍｍｏｌ）／ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏの溶液（４：１）を、そのＴＬＣが出発物質の完全な消費を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトベッドに通して濾過した。有機層を濃縮し、乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＶＩＩＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.６０−２.１６（ｍ，６Ｈ），２.２５−２.８０（ｍ，１２Ｈ），３.５０−３.８２（ｍ，３Ｈ），３.９５（ｓ，３Ｈ），４.０５−４.４０（ｍ，４Ｈ），６.８０（ｓ，１Ｈ），７.４５（ｓ，１Ｈ），７.６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３.３３Ｈｚ），７.７９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７.３２Ｈｚ），８.２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.０５Ｈｚ），８.６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.３２Ｈｚ）。

実施例３：式の（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）及び１，４ジブロモブタン（１.０７ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を４８時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物Ｖを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ３，３００ＭＨｚ）１.３０−１.４０（ｍ，６Ｈ），１.７５−２.４０（ｍ，８Ｈ），２.７０−２.８５（ｍ，４Ｈ），３.１５−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.５０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６.２５Ｈｚ），３.９５（ｓ，３Ｈ），４.１０（ｍ，２Ｈ），４.６０−４.７０（ｍ，１Ｈ），４.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３Ｈｚ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.６２（ｓ，１Ｈ）。

式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（４−ブロモブトキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（５３５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ピペラジン結合ナフタルイミド（３４０ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（４１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物ＶＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.２５−１.４０（ｍ，６Ｈ），１.６０−２.１５（ｍ，８Ｈ），２.３５−２.８５（ｍ，１６Ｈ），３.１５−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.９２（ｓ，３Ｈ），４.１２（ｍ，１Ｈ），４.３０（ｍ，２Ｈ），４.６０−４.７２（ｍ，１Ｈ），４.８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.２３Ｈｚ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.６０（ｓ，１Ｈ），７.７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７.４５Ｈｚ），８.２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.２５Ｈｚ），８.５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.６２Ｈｚ）。

式ＶＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］ブチル］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（７６４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／メタノールの溶液にＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（１.１２ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、そのＴＬＣが反応の完了を示すまでこの混合物を還流した。メタノールを蒸発させ、１０％のＮａＨＣＯ₃溶液を添加した。水層を酢酸エチルで抽出し、混合した有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、アミノチオアセタール（ＶＩＩ）を得、そして次の段階で直接用いた。

ＶＩＩ（７３４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ₂（６２４ｍｇ、２.３ｍｍｏｌ）及びＣａＣＯ₃（２５０ｍｇ、２.５ｍｍｏｌ）／ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏの溶液（４：１）を、そのＴＬＣが出発物質の完全な消費を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトベッドに通して濾過した。有機層を濃縮し、乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＶＩＩＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.５６−２.１５（ｍ，８Ｈ），２.２５−２.８０（ｍ，１６Ｈ），３.４５−３.８２（ｍ，３Ｈ），３.９２（ｓ，３Ｈ），４.０−４.１５（ｍ，２Ｈ），４.２２−４.３７（ｔ，２Ｈ），６.７０（ｓ，１Ｈ），７.４２（ｓ，１Ｈ），７.６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.２５Ｈｚ），７.７２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７.４Ｈｚ），８.１６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ），８.５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.４２Ｈｚ）。

実施例４：式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）及び１，３ジブロモプロパン（１ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を４８時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物Ｖを得た。

式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（３−ブロモプロポキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（５２１ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ピペラジン結合ナフタルイミド（３２４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（４１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物ＶＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.２５−１.４２（ｍ，６Ｈ），１.７０−２.４０（ｍ，８Ｈ），２.６０−３.３０（ｍ，１８Ｈ），３.９２（ｓ，３Ｈ），４.０５（ｍ，４Ｈ），４.７０−４.８０（ｍ，１Ｈ），４.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.２５Ｈｚ），６.７７（ｓ，１Ｈ），７.６０（ｓ，１Ｈ），７.７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７.３５Ｈｚ），８.１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８.５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.５５Ｈｚ）。

式ＶＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［３−［３−［４−［３−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］プロピル］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（７６４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／メタノールの溶液にＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（１.１２ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、そのＴＬＣが反応の完了を示すまでこの混合物を還流した。メタノールを蒸発させ、１０％のＮａＨＣＯ₃溶液を添加した。水層を酢酸エチルで抽出し、混合した有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、アミノチオアセタール（ＶＩＩ）を得、そして次の段階で直接用いた。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.７５−２.１８（ｍ，８Ｈ），２.２２−２.８０（ｍ，１６Ｈ），３.４５−４.３０（ｍ，１０Ｈ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.４５（ｓ，１Ｈ），７.６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.２Ｈｚ），７.７２（ｔ，２Ｈ，３Ｊ＝７.４Ｈｚ），８.２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８.１Ｈｚ），８.５８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７.３５Ｈｚ）。

実施例５：式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８００ｍｇ、２ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）及び１，４ジブロモブタン（１ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を４８時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物Ｖを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，３００ＭＨｚ）１.３０−１.４０（ｍ，６Ｈ），１.７５−２.４０（ｍ，８Ｈ），２.７０−２.８５（ｍ，４Ｈ），３.１５−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.５０（ｔ，２Ｈ，５Ｊ＝６.２５Ｈｚ），３.９５（ｓ，３Ｈ），４.１０（ｍ，２Ｈ），４.６０−４.７０（ｍ，１Ｈ），４.８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３Ｈｚ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.６２（ｓ，１Ｈ）。

式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（４−ブロモブトキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（５３８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ピペラジン結合ナフタルイミド（３３７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／アセトンの溶液に、無水Ｋ₂ＣＯ₃（４１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応が完了した後に、濾過によりＫ₂ＣＯ₃を除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる精製により化合物ＶＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，２００ＭＨｚ）１.６０−２.３３（ｍ，１２Ｈ），２.５２−３.０（ｍ，１６Ｈ），３.１２−３.３０（ｍ，２Ｈ），３.９５（ｓ，１Ｈ），４.０２−４.２５（ｍ，４Ｈ），４.６０-４.７２（ｍ，１Ｈ），４.８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.３Ｈｚ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.６０（ｓ，１Ｈ），７.７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ=７.４５Ｈｚ），８.１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ=８.２Ｈｚ），８.５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ=７.６Ｈｚ）。

式ＶＩの２Ｓ−Ｎ−｛４−［４−［４−［４−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）ブチル］ピペラジン−１−イル］ブチル］−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル｝ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（７９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）／メタノールの溶液にＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ（１.１２ｇｒ、５ｍｍｏｌ）を添加し、そのＴＬＣが反応の完了を示すまでこの混合物を還流した。メタノールを蒸発させ、１０％のＮａＨＣＯ₃溶液を添加した。水層を酢酸エチルで抽出し、混合した有機相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、アミノチオアセタール（ＶＩＩ）を得、そして次の段階で直接用いた。

ＶＩＩ（７６２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ₂（６２４ｍｇ、２.３ｍｍｏｌ）及びＣａＣＯ₃（２５０ｍｇ、２.５ｍｍｏｌ）／ＣＨ₃ＣＮ−Ｈ₂Ｏの溶液（４：１）を、そのＴＬＣが出発物質の完全な消費を示すまで室温で撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトベッドに通して濾過した。有機層を濃縮し、乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物ＶＩＩＩを得た。

¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，３００ＭＨｚ）１.５０−２.１０（ｍ，１２Ｈ），２.２５−２.８０（ｍ，１６Ｈ），３.４５−４.３０（ｍ，１０Ｈ），６.７５（ｓ，１Ｈ），７.４５（ｓ，１Ｈ），７.６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ=４.２Ｈｚ），７.７５（ｔ，２Ｈ，Ｊ=７.３Ｈｚ），８.２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ=８.１Ｈｚ），８.５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ=７.４０Ｈｚ）。

生物活性：
ヒト癌細胞株に対するｉｎｖｉｔｒｏでの細胞毒性：ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ｕ．Ｓ．Ａ）又はＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＣｅｌｌＳｃｉｅｎｃｅ（Ｐｕｎｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手したヒト癌細胞株を、本試験で用いた。組織培養フラスコ中で、完全増殖培地（２ｍＭのグルタミン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地（ｐＨ７.４）、濾過により滅菌し、使用前に１０％ウシ胎仔血清及び１００ユニット／ｍｌのペニシリンを追加）において、３７℃で、５％ＣＯ₂及び９０％相対湿度の雰囲気下で、二酸化炭素インキュベーター中において、細胞を増殖させた。細胞毒性を決定するために、サブコンフルーエント（ｓｕｂｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）の段階の細胞を、トリプシン（０.５％／０．０２％のＥＤＴＡを含むＰＢＳ）で処理することによって、このフラスコから回収した。トリパンブルー排除法により決定した場合に生存率が９８％以上である細胞を試験に用いた。細胞毒性を決定するために、必要な細胞密度の細胞懸濁液を、ゲンタマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を含む完全増殖培地中で調製した。

試験物質のストック溶液（２×１０^-2Ｍ）をＤＭＳＯ中で調製した。５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを含む完全増殖培地を用いて、このストック溶液を連続的に希釈し、必要な濃度の作業試験溶液を得た。

９６−ウエル組織培養プレートを用いて、ヒト癌細胞株に対するｉｎｖｉｔｒｏでの細胞毒性を決定した（Ｍｏｎｋｓ，Ａ．，Ｓｃｕｄｉｅｒｏ，Ｄ．，Ｓｋｅｈａｎ，Ｐ，ＳｈｏｅｍａｋｅｒＲ．，Ｐａｕｌｌ，Ｋ．，Ｖｉｓｔｉｃａ，Ｄ．，Ｈｏｓｅ，Ｃ，Ｌａｎｇｌｅｙ，Ｊ．，Ｃｒｏｎｉｓｅ，Ｐ．，Ｖａｉｇｒｏ−Ｗｏｌｆｆ，Ａ．，Ｇｒａｙ−Ｇｏｏｄｒｉｃｈ，Ｍ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｈ．，Ｍａｙｏ，ＪａｎｄＢｏｙｄＭ．Ｊ．Ｎａｔｌ．ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ．，１９９１，８３，７５７−７６６）。１００μｌの細胞懸濁液を、９６−ウエル組織培養プレートの各ウエルに添加した。細胞を２４時間インキュベートした。２４時間のインキュベーションの後に、完全増殖培地（１００μｌ）中の試験物質を、細胞懸濁液を含むウエルに添加した。試験物質の添加後に、このプレートを更に４８時間インキュベートし（３７℃で、５％ＣＯ₂及び９０％相対湿度の雰囲気下で、二酸化炭素インキュベーター中において）、次に全てのウエル中の培地の上部にトリクロロ酢酸（ＴＣＡ、５０μｌ、５０％）を穏やかに重ねることによって細胞増殖を止めた。プレートを４℃で１時間インキュベートし、細胞をウエルの底に固定した。全てのウエルの液体をピペットで静かに取り、捨てた。プレートを蒸留水で５回洗い、ＴＣＡ、増殖培地、低分子量代謝物、血清タンパク質などを除去し、そして風乾した。スルホローダミンＢ色素で染色することにより、細胞増殖を測定した（Ｓｋｅｈａｎｅｔａｌ．，１９９０）。吸着色素をトリス緩衝液（１００ｍｌ、０．０１Ｍ、ｐＨ１０.４）中に溶解し、プレートを機械的攪拌機上で５分間穏やかに攪拌した。光学密度を５４０ｎｍにてＥＬＩＳＡリーダーで記録した。

細胞増殖を、実験セットの平均ＯＤ値から各ブランクの平均ＯＤ値を引くことによって算出した。試験物質の存在下での増殖パーセントを、任意の試験物質の非存在下における細胞増殖を１００％として考えて算出し、次いで、試験物質の存在下における増殖阻害％を算出した。

細胞毒性：
化合物の一次抗癌活性を評価した。いくつかの代表的な化合物の細胞毒性データを表１に示した。

ｐＨ７.００±０.０１におけるＣＴ−ＤＮＡ単独の場合、Ｔ_m＝６９.８℃±０.０１（１０の分離測定からの平均値）、全てのΔＴ_m値は±０.１−０.２℃である。１：５のモル比の［ＰＢＤ］／［ＤＮＡ］の場合、ＣＴ−ＤＮＡ濃度＝１００μＭ及びリガンド濃度＝２０μＭ／水性リン酸ナトリウム緩衝液［１０ｍＭのリン酸ナトリウム＋１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７.００±０.０１］。

Claims

ｎ₁＝２，３，４、ｎ₂＝２，３，４である、新規の式ＶＩＩＩのピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン。
アルキル＝エチル、プロピル、ブチルである、式ＶＩＩＩの７−メトキシ−８−｛２−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）アルキル］ピペラジン−１−イル］アルキル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛２−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］エチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛３−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛４−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛３−［４−［３−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛４−［４−［４−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）ブチル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛４−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛３−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）ブチル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
以下に示す構造式の７−メトキシ−８−｛３−［４−［３−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］エチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン。
式ＩＶの（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールをジブロモアルカンと非プロトン性水混和性有機溶媒中で弱無機塩基の存在下において還流温度で４８時間反応させること、式Ｖの２Ｓ−Ｎ−［４−（ｎ−ブロモアルコキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールを単離すること、式Ｖの化合物をピペラジン結合ナフタルイミドと弱無機塩基の存在下で反応させて式ＶＩの化合物を単離すること、それをＳｎＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏを用いて有機溶媒の存在下で還流温度において還元すること、上記の式ＶＩＩのアミノ化合物を脱保護剤と反応させて、ｎが上記の通りである式ＶＩＩＩのピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを得ることを含んで成る、式ＶＩＩＩのピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを調製するための方法

｛式中、ｎ₁＝２，３，４、ｎ₂＝２，３，４｝。
医薬として許容される量の式ＶＩＩＩの化合物を癌に罹患した対象に投与することを含んで成る、癌に罹患した対象において癌を治療するための、式ＶＩＩＩの化合物又はその医薬として許容される誘導体若しくは塩の使用。
式ＶＩＩＩの化合物又はその医薬として許容される誘導体若しくは塩を、医薬として許容される添加物とともに、癌に罹患した対象に投与することを含んで成る、癌に罹患した対象において癌を治療するための方法。
医薬として有効な量の、ｎ₁＝２，３，４、ｎ₂＝２，３，４である式ＶＩＩＩのピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、アルキル＝エチル、プロピル、ブチルである式ＶＩＩＩの７−メトキシ−８−｛２−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）アルキル］ピペラジン−１−イル］アルキル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛２−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］エチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛３−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛４−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）エチル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛３−［４−［３−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛４−［４−［４−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）ブチル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛４−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］ブチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛３−［４−［２−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）ブチル］ピペラジン−１−イル］プロピル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。
医薬として有効な量の、７−メトキシ−８−｛３−［４−［３−（１，３−ジオキソ−ベンズ［ｄｅ］イソキノリン−２−イル）プロピル］ピペラジン−１−イル］エチル｝−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン及び医薬として許容される賦形剤を含んで成る医薬組成物。